Determinación de La Demanda Bioquímica de Oxigeno

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DETERMINACIÓN DE LA DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXIGENO

I. INTRODUCCIÓN
Demanda bioquímica de oxígeno (DBO5): Es una estimación de la cantidad de oxígeno
que requiere una población microbiana heterogénea para oxidar la materia orgánica de
una muestra de agua en un periodo de 5 días. El método se basa en medir el oxígeno
consumido por una población microbiana en condiciones en las que se ha inhibido los
procesos fotosintéticos de producción de oxígeno en condiciones que favorecen el
desarrollo de los microorganismos.

II.OBJETIVO
 Determinar la concentración de DBO, a través de los requerimientos de oxígeno en las
muestras de agua.
 Conocer los procedimientos del método de la prueba de los cinco días de incubación.

III. MATERIALES, EQUIPO Y REACTIVOS

Equipo de aireación con difusor


Incubador: Controlado por termostato a 20 ºC ± 1ºC
Balanza analítica con precisión de 0,1 mg
Medidor de oxígeno disuelto
Botellas Winkler de vidrio con capacidad de 300 mL

REACTIVOS
Fosfato monobásico de potasio (KH2PO4)
Fosfato dibásico de potasio (K2HPO4)
Fosfato dibásico de sodio heptahidratado (Na2HPO4•7H2O)
Cloruro de amonio (NH4Cl)
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4•7H2O)
Cloruro de calcio anhidro (CaCl2)
Cloruro férrico hexahidratado (FeCl3•6H2O)

IV. METODOLOGÍA

4.1. Preparación de soluciones

 Solución amortiguadora de fosfato: Pesar 8,5 g de fosfato monobásico de potasio,


21,75 g de fosfato dibásico de potasio, 33,4 g de fosfato dibásico de sodio
heptahidratado y 1,7 g de cloruro de amonio, disolver en 500 mL de agua y aforar a
1 L. El pH de la disolución debe ser de 7,2. Desechar el reactivo (o cualquiera de los
siguientes reactivos) si hay algún signo de crecimiento biológico en el frasco de
almacenamiento.

 Solución de sulfato de magnesio: Pesar 22,5 g de sulfato de magnesio


heptahidratado, disolver en agua y diluir a 1 L.

 Solución de cloruro de calcio: Pesar 27,5 g de cloruro de calcio anhídro, disolver


en agua y diluir a 1 L.

 Solución de cloruro férrico: Pesar 0,25 g de cloruro férrico hexahidratado, disolver


en agua y diluir a 1 L.

4.2. Preparación de agua para dilución

Colocar el volumen requerido de agua en un frasco y añadir por cada litro de agua 1 mL
de cada una de las siguientes soluciones: solución de sulfato de magnesio, solución de
cloruro de calcio, solución de cloruro férrico y solución amortiguadora de fosfatos,
Homogenizar con la aplicación de cada solución y luego saturar con oxígeno aireando
con aire filtrado, libre de materia orgánica durante 1 h por lo menos. Preparar el agua de
dilución diariamente.

4.3. Técnica de dilución


Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg/L y una captación de OD
de al menos 2 mg/L después de 5 días de incubación, producen los resultados más
confiables. Hacer varias diluciones (al menos 3) por duplicado de la muestra preparada
para obtener una captación de OD en dicho intervalo. La experimentación con una
muestra concreta permite el uso de un número menor de diluciones. En ausencia de datos
previos, utilizar las siguientes diluciones: de 0 a 1 % para los residuos industriales
fuertes, de 1 a 5 % para las aguas residuales sedimentadas y crudas, del 5 al 25 % para
el efluente tratado y del 25 al 100 % para las aguas superficiales contaminadas.

Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando una pipeta


volumétrica, añadir el volumen de muestra deseado a frascos Winkler individuales de
300 mL. Añadir cantidades adecuadas del material de siembra a los frascos tipo Winkler
o al agua de dilución. Llenar los frascos con suficiente agua de dilución, sembrada si es
necesario, de forma que la inserción del tapón desplace todo el aire, sin dejar burbujas.
No realizar diluciones mayores de 1:300 (1 mL de la muestra en un frasco).
Determinar el OD inicial en uno de los frascos de cada una de las diferentes diluciones.
En los frascos de los duplicados de cada una de las diluciones, Ajustar herméticamente
el tapón, e incubar durante 5 días a 20ºC.

4.4. Determinación del Oxígeno Disuelto


La determinación del OD inicial se realiza por medio del método electrométrico con
electrodo de membrana, Después de 5 días de incubación determinar el OD en las
diluciones de la muestra.
La medición del OD debe ser realizada inmediatamente después de destapar la botella
de Winkler, para evitar la absorción de oxígeno del aire por la muestra.

4.5 Cálculos

(𝑶𝒊 − 𝑶𝒇)𝒙 (𝟏 − (𝟎, 𝟎𝟏𝒙𝑷)


𝑫𝑩𝑶𝟓
(𝟎, 𝟎𝟏𝒙𝑷)

Donde:
Oi: Oxígeno disuelto inicial (mg/L)
Of: Oxígeno disuelto final (mg/L)
P: Dilución en porcentaje

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