Problemario Cinética Enzimática

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología
Ingeniería Enzimática
Problemario de Cinética Enzimática
1. Empleando los datos que se presentan en la tabla, determinar las constantes cinéticas de la
enzima por el método gráfico.
[S] V
0.5 0.33
1 0.6
1.5 0.82
2 1
3 1.29
5 1.67
7 1.91
10 2.14
12 2.25
15 2.37
2. Determinar las constantes cinéticas por el método gráfico y por medio de las 3 linearizaciones
para los siguientes datos. Discutir a qué se deben las diferencias entre los valores obtenidos.
[S] M x 102 Vo (M/L min)x103

2.5 1.94
2.27 1.91
1.84 1.85
1.35 1.8
1.25 1.78
0.73 1.46
0.46 1.17
0.204 0.779
3. La 6- fosfato isomerasa puede catalizar glucosa, fructosa y galactosa. En base a los datos de la
tabla determinar las constantes cinéticas para cada sustrato y ordenarlos de mayor a menor
afinidad a la enzima.
V mM/min
[S] mM
Gluc Fruc Gala
100 272.73 342.86 206.90
200 444.44 533.33 352.94
500 714.29 800.00 612.24
750 825.69 900.00 731.71
1000 895.52 960.00 810.81
1500 978.26 1028.57 909.09
2000 1025.64 1066.67 967.74
3000 1077.84 1107.69 1034.48
4000 1105.99 1129.41 1071.43
7000 1144.41 1158.62 1122.99
10000 1160.54 1170.73 1145.04
4. Se determina la velocidad inicial de la invertasa para diferentes concentraciones de sustrato
obteniéndose los datos que se presentan en la tabla. Determinar vmax y km por medio de la
linearización de Lineweaver-Burk. Si [E]T=1nM/L ¿Cuántas moléculas de sustrato puede procesar
una molécula de enzima por minuto? Calcular kcat/km ¿Es una enzima eficiente?
[S] M/L Vo M/Lmin
5 22
10 39
20 65
50 102
100 120
200 135
5. Durante el daño hepático severo, una enzima es liberada al torrente sanguíneo. Durante el
ejercicio intenso, una enzima que cataliza la misma reacción también es liberada al torrente
sanguíneo. Ambas son fácilmente distinguibles por la diferencia en sus valores de km (la muscular
presenta km=2x10-5 M). La muestra de sangre de un paciente inconsciente generó los resultados
de la tabla. ¿Qué presenta el paciente?
[S] M V (M/mL min)
-5
5x10 43
7x10-5 57
-4
1x10 75
1.5x10-4 100
2x10-4 120
3x10-4 150
-4
6x10 200
6. Una preparación de proteasa posee 0.208 mgprot/L. Si 150 l de la dilución 1:10 de la

preparación liberan 30 mM de tirosina en 10 min, ¿cuál es la actividad específica de la
preparación? (U=M/h).
7. Se produce una aminoacilasa, cuya dilución 1/50 (30 L) es capaz de isomerizar 30 nM/min.
Determinar la actividad específica considerando que la unidad se define como la cantidad de
enzima necesaria para transformar 1M/h y que la preparación original posee 20 ngprot/L.
8. Una lipasa comercial posee una actividad de 30,000 U/mL. Si la leche posee una concentración
de lípidos de 300mM, cuánta enzima será necesario agregar a 300 L de leche para remover el 90%
de lípidos en 2.5h. (U=M/h). Suponer que la velocidad no cambia al agotarse el sustrato.
9. Una polimerasa logró, en dilución 1:50, integrar 350nM de dNTP´s en 45 min. La mezcla de
reacción contenía 700L de sustratos, sales y buffer y 300 L de la dilución de enzima. Si la
dilución 1:15 de la polimerasa contiene 0.1 mgprot/L ¿Cuál es la actividad específica de la enzima?
(U=integrar a material precipitable 1 nM/3min).
10. A partir de una fermentación con Bacillu subtillis se produce -amilasa. Se emplea como
fuente de carbono 15 g/L de almidón, y se adicionan 0.3 g/L de biomasa como inóculo. Para la
determinación de la actividad, se adicionan 0.05mL de solución de enzima a 950 L de sustrato y
se deja reaccionar por 3 min. Al terminar la fermentación, se tienen 5 g/L de biomasa, restan 0.5
g/L de almidón y se presentan 678 gprot/mL. El medio de cultivo recién inoculado libera 0.58 M
de residuos reductores, mientras que la dilución 1:32 del caldo agotado libera 378 mM de residuos
reductores. Calcular la actividad específica del caldo agotado, y los rendimientos Yx/S, YP/S, YP/x.
(Unidades internacionales).
11. 15 L de una enzima diluida 35 veces catalizan 50 mM de sustrato en 12 min. Si la enzima
diluida 15 veces presenta una concentración de proteína de 30 ng/L, ¿Cuál es la actividad
específica de la enzima? (Unidades internacionales).
12. Para determinar la actividad de una preparación de fosfatasa alcalina, se colocan 0.2 mL de
dilución 1:200 de la enzima, 200 L de Buffer de reacción y 1.2 mL de sustrato. A los 20 min, se
han liberado 476 mM de fosfato. Determinar la actividad de la preparación si la unidad se define
como la cantidad de enzima necesaria para liberar 10 nM de fosfato en 3 min.
13. Se desea producir jarabe de alta fructosa, para lo que se posee una preparación de glucosa
isomerasa con 3x104 UI/mL. Si se desea transformar el 75% de la glucosa presente en 3.8 L de
glucosa 2.5M, ¿cuánto tiempo tomará el proceso empleando 0.5 mL de la enzima, suponiendo que
la velocidad no cambia con la reducción de la concentración de sustrato?
14. Para remover la región constante de los anticuerpos, se emplea una preparación de papaína,
con una capacidad de remover 3x1019 regiones constantes cada 7 min usando 35 L de
preparación por mL de mezcla de reacción. Se sabe que la concentración de proteína en la mezcla
es de 154 g/L, y que el 96% de la proteína presente corresponde al anticuerpo. ¿Cuál es la
actividad específica en la preparación de enzima?
15. Se cultiva Escherichia coli recombinante para extraer una acilasa de penicilina. El sustrato
limitante se encuentra en el medio a una concentración de 7 g/L, y al término restan 1.2 g/L. Se
obtienen 1.2 g/L de biomasa, habiendo inoculado con 2 g de biomasa los 10 L de medio. Una
dilución 1:50 del caldo agotado presenta una actividad de 3.4x102 U/mL, mientras que en el medio
recién inoculado no se detecta actividad. Calcular las unidades totales producidas, y los
rendimientos Yx/S, YP/S, YP/x.
16. Se aplica un inhibidor a la ADNasa, generando los datos de la siguiente tabla. Indique el tipo de
inhibición de que se trata.
V M/min
[S] M
Sin I I 10 M
5 13 9.5
10 18.9 14.9
15 22.3 18.4
20 24.6 20.9
30 27.3 24.1
17. Se desea hidrolizar parcialmente el almidón del maíz para emplearlo en una fermentación.
Desafortunadamente, el maíz contiene componentes que inhiben tanto la amilasa de hongo como
la de levadura, aunque no la humana (demasiado costosa para usarla). Si se puede emplear una
enzima que sea inhibida de manera competitiva ¿Cuál se usa?
Enzima Humana Levadura Hongo
[S] M Vo nM/s
0.1 416.7 183.3 263.2
0.25 833.3 366.7 568.2
0.5 1250 550 925.9
0.75 1500 660 1171.9
1 1666.7 733.3 1351.4
18. La enzima X se estudia para analizar el efecto de un inhibidor. Para esto se emplean dos
concentraciones diferentes de inhibidor. En base a los datos de la tabla, determinar el tipo de
inhibición, las constantes cinéticas para cada concentración de inhibidor y la constante de
inhibición.
V (mM/L min)
[S] (mM/L)
Sin I I (3mM/L) I (5mM/L)
1.25 1.72 1.25 1.01
1.67 2.04 1.54 1.26
2.5 2.63 2.00 1.72
5 3.33 2.86 2.56
10 4.17 3.7 3.49
19. La ARNasa R se prueba con dos concentraciones diferentes de inhibidor. Determinar el tipo de
inhibidor, las constantes cinéticas para cada concentración y la constante de inhibición. Diga si
utilizaría o no este inhibidor para proteger el ARN durante una extracción.
V mM/L min
[S] M/L
Sin I I (1 nM) I (5 nM)
1000 3.87 1.32 0.36
5000 17.14 6.32 1.79
10000 30 12 3.53
30000 60 30 10
50000 75 42.86 15.79
20. Se analizó una enzima frente a diferentes inhibidores. Determinar la naturaleza da cada
inhibidor (tipo de inhibición) y la constante de inhibición de cada uno.
V nM/min
[S] mM
Sin I I (6M) X (30 M) Y (4 mM) z (0.2 mM)
0.2 16.67 6.25 5.56 10 8.89
0.25 20 7.69 6.67 11.11 10.81
0.333 24.98 10 8.33 12.5 13.78
0.5 33.33 14.29 11.11 14.29 19.05
1 50 25 16.67 16.67 30.77
2 66.67 40 22.22 18.18 44.44
2.5 71.4 45.45 23.81 18.52 48.78
3.33 76.92 52.63 25.64 18.87 54.06
4 80 57.14 26.67 19 57.14
5 83.33 62.5 27.77 19.23 60.60

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