CUADRO COMPARATIVO DE DIFERENTES TIPOS DE MICROSCOPIO

MICROSCOPIO FOTONICO MICROSCOPIO DE TRANSMISION MICROSCOPIO DE BARRIDO MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

Antecesores en el periodo entre 1590 -1610, por A partir del modelo construido por Knoll y Ruska en 1931, En el año 1938 M. von Ardenne introduce un Descubierto en 1908 por Köhler y Siedentopf, y se basa en
Origen Hans (padre) y Zacarías (hijo) Janssen; (mediante varias casas comerciales (RCA, Siemens, GE, entre otras) han sistema de barrido en un MET, lo que dio lugar a un que una sustancia natural en las células o un colorante
lentes biconvexas construyeron los primeros producido diversos modelos de microscopios electrónicos nuevo tipo de equipo, el Microscopio Electrónico fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de
microscopios compuestos). modernos, pero todos ellos basados en el modelo original. de Barrido-Transmisión (MEBT). Un año después luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayas
Boersch logra haces electrónicos del orden de los luminosos.
2,5nm, factor determinante cuando se quiere
alcanzar resoluciones elevadas.

Bosquejo del microscopio de Janssen

Microscopio de Fluorescencia d Köhler y Siedentopf

Primer microscopio de Barrido de M. von

Ardenne
 Funciona en base a lentes de vidrio convergentes, Equipo que permite la observación, caracterización y estudio El microscopio electrónico de barrido permite Este microscopio hace uso de la fluorescencia y se
CARACTERISTICAS que como su nombre lo indica, provocan que los de la estructura y morfología de muestras sólidas poliméricas observar la superficie de un espécimen sólido (epi- convierte en una herramienta de inestimable valor para la
rayos de luz converjan en un punto, al cual se le mediante la difracción de un haz de electrones, para iluminación). investigación científica, ya que permite alcanzar altos
llama foco. Al lograr que un número de rayos de luz determinar su efecto sobre las propiedades físicas y térmicas. Se escanea la superficie del espécimen con un haz niveles de sensibilidad y resolución microscópica,
que normalmente veríamos separados, enfoquen Se observa a través del espécimen (trans- iluminación). El de electrones (primarios) y los electrones que permitiendo una apreciación diferente de la información
en nuestra retina, podemos interpretar esa imagen espécimen se corta en láminas ultrafinas (en el orden de rebotan (secundarios) son recogidos por un que se puede obtener de los especímenes y que
(que es una imagen virtual) como una ampliación nanómetros) que se colocan en una rejilla de cobre, la cual es detector. La señal se observa en un monitor de generalmente pasa desapercibida.
de la imagen real. Se le llamará microscopio óptico bombardeada con un haz de electrones enfocado. Una televisión. La microscopía de fluorescencia es muy útil porque la
simple (lupa) o microscopio óptico compuesto. silueta del espécimen se proyecta en una pantalla Tiene una gran profundidad de campo; que molécula fluorescente, aun cuando sea muy pequeña,
Microscopio óptico compuesto: Es un instrumento fluorescente o placa fotográfica situada por debajo del permite que se enfoque a la vez una gran parte de puede ser observada debido a la luz que emite. Los
que tiene más de una lente (de vidrio o cristal) de mismo. la muestra, permite ver lo invisible adherido a fluorocromos actúan como fuentes de luz de un color
objetivo. Puede ser mono, bino o trinocular (para Conformación del microscopio electrónico de transmisión: diferentes sustancias. determinado que pueden ser localizadas en áreas
microfotografía). - Una cámara al vacío, el cual es generado por una bomba. Imagen topográfica. específicas de la muestra que se estudia. El marcaje
- Está formado por dos partes muy - Una columna donde se genera y viaja el haz de Componentes básicos del microscopio electrónico selectivo de moléculas y otros compuestos celulares se
importantes: electrones. de barrido: realiza mediante la técnica de inmunofluorescencia.
 La parte mecánica que comprende el pie, - Un sistema óptico que forma una imagen en una - Sistema de alto vacío. Requerimientos para el microscopio de fluorescencia:
columna, tubo, platina y el tornillo pantalla fluorescente o en una placa fotográfica. - El filamento emisor de electrones (cátodo). • Fuente de luz: Se necesita una intensa fuente de luz para
macro-micrométrico. - Circuito electrónico estabilizador de voltaje. - Lentes (electromagnéticas, electrostáticas o excitar la fluorescencia en el espectro específico de cada
 La parte óptica es la encargada de Elementos que conforman el microscopio electrónico de superconductoras). fluorocromo.
reproducir y aumentar las imágenes transmisión: Emisor de electrones, condensador, sistema - Generador del escaneo: El haz de electrones • Filtros: Son los que permiten el paso de luz de una
mediante el conjunto de lentes que lo óptico, Platina, Pantalla o visor y la cámara fotográfica, es desplazado por la superficie del espécimen determinada longitud de onda, la del rango y color
componen. Sistema de vacío. de una manera predeterminada. necesario para excitar al fluorocromo y bloquean las
- Permite aumentos desde 25 a 1500 veces Imagen por transmisión (M .O .) - Detector de electrones secundarios. longitudes no deseadas.
KV = 40-100 - Pantalla de televisión. • Objetivos: Deben tener gran capacidad para transmitir
Aumento 2000-1.000.000x Aumento 10-100.000x la luz y proveer una imagen de alta calidad. De igual
L.R. 0,5 µm. KV = 1- 40 manera deben poseer una gran apertura numérica.
L.R . 7 µm o menos.
 - El poder de resolución es de 0,2 µm.

FUENTE Haz de luz: fotones. Generalmente situada por Haz de electrones estable que atraviesa la muestra, se El haz de electrones o electrones primarios, al Los objetos son iluminados por una determinada longitud
debajo del espécimen (aunque hay excepciones). obtiene calentando el filamento del cátodo; los electrones se incidir en la superficie de la muestra genera de onda, la imagen es el resultado de una radiación
Aparte de la luz solar, empleada en microscopios aceleran aplicando un voltaje entre el cátodo y el ánodo. El electrones secundarios, los cuales se originan del electromagnética.
sencillos con espejo, existen numerosas fuentes de cátodo posee un potencial altamente negativo. El alto voltaje espécimen y son colectados por un detector de La luz de una fuente de longitud de onda múltiple se
iluminación artificial: bombillas de tungsteno y negativo aplicado al cátodo es producido por un circuito electrones. Además de electrones secundarios, mueve a través de un filtro excitador que solo permite que
halógenas, lámparas de arco eléctrico, láser y LED. eléctrico de alto voltaje y las corrientes aplicadas a las lentes también se producen rayos X, infra-rojos, y pase la radiación excitada de la longitud de onda deseada.
son producidas por circuitos de bajo voltaje. Las bombas de ultravioleta. El espécimen es colocado en una Esta radiación es reflejada por el filtro dicromático y
difusión e incluso las lentes (en ciertos modelos de platina portaobjeto y puede ser desplazado o enfocada por la lente del objetivo sobre la muestra, las
microscopios) son enfriadas mediante un mecanismo de rotado en varias direcciones, permitiendo un moléculas fluorescentes de la muestra se excitan y emiten
circulación de agua. amplio rango de posibilidades de observación. luz (por fluorescencia) de una longitud de onda específica
Otros accesorios pueden añadirse al microscopio y mayor. Esta luz es enfocada por el objetivo y la mayor
(computadoras, impresoras, videocámaras, parte pasa a través del filtro dicromático y no se refleja.
circuito cerrado de televisión, entre otros). Un filtro de barrera final bloquea toda la luz residual con
la frecuencia de la radiación de excitación.
FUNCIONES Utilizado principalmente para la observación de Sirve para estudiar todo tipo de materiales siempre y cuando Es utilizado en biología celular y también en la Son numerosas las aplicaciones de la microscopía de
cultivos celulares (células vivas) sin una cuenten con la preparación adecuada y tengan dimensiones actividad pericial para dar eficacia y certeza al fluorescencia, notablemente en biología y medicina.
preparación previa y para monitorear actividades dentro del rango nanométrico o incluso sub-micrométrico. análisis de indicios de naturaleza orgánica y Marcaje de moléculas en células y tejidos para su
(crecimiento, comportamiento). Por sus características, es una herramienta importante para acoplado a una analizador por difracción de caracterización e identificación.
Se usa para ver objetos transparentes o cortados la caracterización estructural de materiales energía de rayos X determina la composición Estudio de células normales y patológicas.
en láminas muy finas que la luz puede pasar a nanoestructurados de los cuales se puede obtener no solo química demuestras inorgánicas como delos Estudios inmunológicos.
través de ellos. información morfológica, sino también cristalográfica y de explosivos, vidrio, pintura, disparos de arma de Mineralogía.
fuego, etc.
 Hace posible la visión tridimensional de los composición química con la ayuda de la espectroscopía de Se utiliza para detectar sustancias con autoflourecencia
objetos, y para lograrlo utiliza dos oculares (los que dispersión de energía de rayos-X (EDS). como la vitamina A, o sustancias marcadas con
están cerca del ojo) y dos objetivos (los que se Son múltiples las facetas en las que interviene este tipo de fluorescencia.
encuentran cerca de la muestra). microscopio, como en control de calidad, señalamientos
Es muy útil en botánica, mineralogía, medicina, morfológicos, conformación de agregados, técnicas forenses,
investigación y en aplicaciones en donde se determinación de estratos en restauración y diferenciación
requiera modificar el objeto observado, como por histológica.
ejemplo disecciones.
VENTAJAS Es el microscopio de uso más común. Aun cuando este proceso de investigación sea costoso, Puede crear perspectiva finamente detallada de - Se pueden obtener resultados rápidos.
Es barato y relativamente fácil de usar. proporciona resultados muy precisos de amplia resolución y objetos muy pequeños. -No es necesario realizar cultivos.
Se fabrica en diferentes tamaños. magnificación. Permite la visualización de las muestras en 3D. -Se puede identificar microorganismos específicos en un
Alto vacío no es necesario. grupo mixto.
Se pueden observar células vivas. -Determina la identidad de un organismo muerto.
Se pueden ver células enteras. Es sensible.
DESVENTAJAS Los análisis no pueden ser muy detallados y Costos elevados de los equipos, los reactivos y la debida Los electrones no rebotan en todos los materiales, Costos en reactivo y equipo
profundos debido a la longitud de onda de la luz adecuación de una infraestructura. de modo que el objetivo debe ser cuidadosamente -Debe ser realizado por personal muy especializado.
visible que impone limitaciones. La técnica de preparación de las muestras compleja. preparado mediante el recubrimiento con una -Los resultados no son 100% específicos
Las imágenes obtenidas son monocromáticas y planas siendo capa de oro, haciendo imposibles las micrografías
necesario, en algunos casos, un tratamiento posterior de los seres vivos.
mediante análisis de imágenes con un software Además, el proceso sólo puede producir imágenes
especializado. fijas en blanco y negro.

Los primeros grandes avances en la ciencia –y en particular en las ciencias biológicas– se deben en parte a la invención del microscopio óptico, cuando a finales del siglo XVII Anton van Leeuwenhoek, tallando lentes, pudo apreciar el mundo
que por su tamaño tan pequeño no era posible ver a simple vista: el mundo microscópico. El estudio detallado de los componentes de células y tejidos animales o vegetales, por el tamaño que poseen, requiere el uso de instrumentos que
permitan ampliar muchas veces más la imagen de las estructuras que los constituyen. El instrumento que fue empleado por los primeros biólogos para estudiar la célula y los tejidos, es el microscopio. El nombre deriva etimológicamente
de dos raíces griegas: mikrós, que significa pequeño y skopéoo, que significa observar. Es decir el microscopio es un instrumento que sirve para observar objetos o estructuras pequeñas.