HIERRO SERICO - SL

No. De Catálogo: 153-01 Presentación: R1: 1 x 1000 mL

157-02 R2: 1 x 250 mL
157-10 R1: 1 x 100 mL + R2: 1 x 25 mL
157-30 R1: 3 x 100 mL + R2: 1 x 75 mL

USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de hierro en suero.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
S24/25: Evite el contacto con los ojos y con la piel.

REACTIVOS
Reactivo de disociación de ácido (R1): una solución amortiguadora (pH de 4.5 a 25°C) que contiene un agente
tensoactivo, estabilizadores y conservadores.
Reactivo de Color de Hierro (R2): una solución que contiene 6 mmol/L de Fereno y estabilizadores.
Estándar de Hierro: 1 x 10 mL de solución que contiene 35 µmol/L (195 µg/dL) de hierro (incluido sólo en los
equipos 157-10 y 157-30).

RESUMEN DE LA PRUEBA
Las determinaciones de hierro no saturado en suero (UIBC), combinada con el hierro sérico, es una herramienta
diagnóstica útil para la determinación de varios trastornos relacionados con el hierro. El valor combinado de
UIBC con el hierro en suero da un valor para la capacidad de fijación del hierro total (TIBC). Esto representa la
concentración máxima de hierro que las proteínas del suero pueden fijar.
Los niveles séricos de UIBC varían en los trastornos del metabolismo del hierro, donde las capacidades de
fijación de hierro con frecuencia aumentan en una deficiencia del mismo, y disminuyen en trastornos de
inflamación crónica o tumores malignos (1).

Iron measurements are used in the diagnosis and treatment of diseases and conditions such as iron deficiency
anemia,
hemochromatosis (characterized by a progressive increase in iron stores leading to organ impairment), chronic
inflammatory
disorders, hepatitis, and lead poisoning (1).
Various photometric methods have been used to measure serum iron. In 1970 Stookey (2) reported the
synthesis of 3-(2-
pyridyl)-5,6-bis(4-phenylsulfonic acid)-1,2,4-triazine, monosodium salt (Ferrozine®) which complexed with
ferrous iron to form
a tris ferrozine/iron, Fe(Fz)3 complex. An additional ferroin type compound called 5,5'(3-(2-pyridyl)-1,2,4-triazine-
5,6 diyl)-bis-
2-furansulfonic acid, disodium salt (Ferene®) has become available (3,4,5) and is used in this reagent. Ferene®
is a superior iron
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chelating agent forming a tris complex with ferrous iron with a maximum absorption at 593 nm and a molar
absorptivity of
35,500. The compound has a 27% higher molar absorption than ferrozine, absorbs at a longer wavelength and
has the other
advantages of ferrozine; namely, its solubility and stability over the pH range 4-9.
En 1970, Stookey (2) reportó la síntesis del 3-(2-piridil)-5,6-bis(ácido 4-fenilsulfónico)-1,2,4-triacina, sal
monosódica (Ferrozine®) la cual se mezclar con el hierro ferroso para formar un complejo d tris ferrozina/hierro,
complejo Fe(Fz)3. Las mayores ventajas de la ferrozina son la alta absortividad molar del complejo de ferrozina
ferroso (28,000), su solubilidad en el agua y su estabilidad a un pH en el rango de 4 a 9. Este ensayo utiliza un
compuesto de tipo ferroina llamado ácido 5,5'(3-(2-piridil)-1,2,4- triacina-5,6 diil)-bis-2-furansulfónico, sal
disódica (Fereno®) (3,4,5). Este reactivo es un agente quelante superior de hierro, el cual forma un complejo
Fereno® con el hierro ferroso, con una absorbancia máxima a 593 nm y una absortividad molar de 35,500. El
compuesto tiene una absorción molar 27% mayor que la ferrozina, se absorbe a una longitud de onda más larga
y cuenta con las otras ventajas de la ferrozina, como su solubilidad y estabilidad.

PRINCIPIO
Fe++ (conocido) + Transferrina → Transferrina (Fe++) + Fe++ (exceso)
Fe++ (exceso) + 3 Fereno → Fereno ferroso (complejo azul)

Una concentración conocida de iones ferrosos, incubada con el suero, se fija específicamente con la
transferrina en los sitios de fijación de hierro no saturado.
Los iones ferrosos restantes no fijados se miden con la reacción del fereno. La diferencia entre la cantidad de
hierro no fijado y la cantidad total agregada al suero, equivale a la cantidad fijada a la transferrina. Ésta es la
capacidad de fijación del hierro no saturado (UIBC) de la muestra.

PREPARACIÓN, ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO

Los reactivos se proporcionan listos para usarse.
Los reactivos incluidos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas mientras se
mantengan almacenados de 2 a 8°C y protegidos contra la luz. La coloración de la mezcla de la reacción final
es estable por 10 minutos.
Las declaraciones de estabilidad se basan en estudios de tiempo real.

DETERIORO DEL REACTIVO

Las soluciones de reactivo deben ser claras. Una turbidez indicaría deterioro.

EQUIPO Y MATERIALES
Material Proporcionado
Reactivos para efectuar el análisis de capacidad de fijación de hierro no saturado (UIBC).

Materiales Requeridos
1. Un analizador capaz de medir con exactitud la absorbencia a 600 y 700 nm.
2. Un calibrador para el ensayo de la capacidad de fijación de hierro no saturado (UIBC).

LA MUESTRA
La muestra deberá ser un suero fresco, claro y no hemolizado. Si la muestra se almacenará por más de 8
horas, se recomienda refrigerarla a una temperatura de 2-8°C. La muestra deberá tomarse por la mañana y
después de un ayuno de 12 horas. La cristalería utilizada para la recolección de la muestra deberá estar libre de
contaminación por hierro.

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LIMITACIONES E INTERFERENCIA
Se evaluó la interferencia causada por ictericia, lipemia y hemoglobina en un analizador Hitachi utilizando un
criterio de significancia de variación >10% del control.
No se encontró ninguna interferencia ictérica significativa con este método. Se estudiaron los niveles de
bilirrubina de 0 a 684 µmol/L (0 a 40 mg/dL), utilizando una muestra con un valor UIBC de 42.2 µmol/L (236
µg/dL).
No se encontró ninguna interferencia lipémica significativa con este método. Se estudiaron los niveles de
Intralipid de 0 a 1000 mg/dL (0 a 3,000 mg/dL de triglicéridos), utilizando una muestra con un valor UIBC de
55.5 µmol/L (310 µg/dL).
Se evaluó la interferencia por hemoglobina, utilizando muestras con niveles de hemoglobina de 0 a 155 µmol/L
(0 a 1000 mg/dL), habiéndose obtenido resultados aceptables a niveles de hasta 62.0 µmol/L (400 mg/dL). A
niveles de hemoglobina de 62.0 µmol/L (400 mg/dL), se reportó una interferencia negativa del 9.1%, con una
muestra de UIBC de 57.6 µmoL/L (323 µg/dL).
El cobre es el único catión de los vestigios de metales usualmente presente en el suero, que forma un complejo
colorido con el fereno. La interferencia del cobre con el fereno es similar a la que se encontró con la ferrozina y
la cual fue estudiada por Duffy y Gaudin (6). El 95% de la interferencia del cobre se elimina a través de la
quelación del cobre libre.
Se puede encontrar un resumen de la influencia de las drogas en pruebas de laboratorios clínicos consultando
el Young, D.S. (7).
Una muestra con un nivel de UIBC que exceda el límite de linealidad, deberá diluirse con una solución salina al
0.9% y volver a analizarse, incorporando el factor de dilución en el cálculo del resultado.

PROCEDIMIENTO
Condiciones
Siga los lineamientos de adaptación proporcionados para los analizadores automatizados, o contacte a Servicio
Técnico de DCL para obtener los parámetros específicos del analizador.

Genéricas Analizador automatizado

Longitud de onda ................................................... 600 nm 600 nm/700 nm
Temperatura .......................................................... 37°C 37°C
Paso de luz ............................................................ 1 cm
Tipo de reacción ..................................................... Punto final Punto final
Tiempo de reacción ................................................ 15 minutos 640 segundos
Volumen de la muestra .......................................... 50 µL 20 µL
Volumen de reactivo .............................................. 1.00 mL 300 µL
Volumen del reactivo colorante ............................. 150 µL 70 µL
Volumen total.......................................................... 1.20 mL 390 µL
Proporción del volumen muestra/reactivo ............. 1:20:3 1:15:3.5

CALIBRACIÓN
No se incluye en los equipos el calibrador para UIBC. Sin embargo, deberá usarse uno para calibrar el
procedimiento.
La frecuencia de calibración en los sistemas automatizados dependerá del sistema en sí y de los parámetros
utilizados.

CONTROL DE CALIDAD

Se debe analizar un suero control con un nivel normal y anormal según se requiera. Los resultados deberán
caer dentro de desviaciones estándar de más o menos 2 del valor establecido.

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CÁLCULOS

El analizador calcula la capacidad de fijación del hierro no saturado en cada muestra.

INTERVALOS DE REFERENCIA

Los intervalos de referencia de la UIBC se determinaron a partir de un grupo de 203 personas aparentemente
saludables, siguiendo los lineamientos establecidos en el Documento C28-P de la NCCLS. Las muestras de
suero se analizaron con instrumental automático a una temperatura de 37EC. De 22.6 a 68.4 µmol/L (126 a 382
µg/dL). Se sugieren estos valores como referencia. Se recomienda que cada laboratorio establezca el rango
normal para el área en que está localizado.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Estas características de rendimiento se obtuvieron en los laboratorios de DCL usando procedimientos
automáticos, a menos que se indique lo contrario.

Resultados
La concentración de la capacidad de fijación de hierro no saturado se expresa en µmol/L (µg/dL).

Estudio de Recuperación
Se agregó material sérico que contenía transferrina a un grupo de sueros humanos para aumentar la
concentración de UIBC en 1.4 µmol/L (8 µg/dL) y en 7.5 µmol/L (42 µg/dL). La recuperación del UIBC agregado
fue de 100.6% en promedio.

Rango Reportable (NCCLS EP6-P)

La linearidad del procedimiento descrito es de 107 µmol/L (600 µg/dL). El límite de detección más bajo del
procedimiento descrito es de 3 µmol/L (17 µg/dL). Estos datos dan por resultado un rango reportable de 3 a 107
µmol/L (17 a 600 µg/dL).

Estudios de Precisión (NCCLS EP5-T2)

Se recopilaron datos de dos sueros control, utilizando un solo lote de reactivo en 40 corridas, durante 20 días.

Nivel DE Total DE dentro de la serie

C.V. Total % CV dentro de la serie %
µmol/L µg/dL µmol/L µg/dL µmol/L µg/dL
21.5 121 0.55 3.1 2.6 0.37 2.1 1.7
38.8 218 0.64 3.6 1.7 0.46 2.6 1.2

DE = Desviación estándar
CV = Coeficiente de variación

Exactitud (NCCLS EP9-P)

El rendimiento de este método (y) se comparó con el de un método similar para UIBC (x) utilizando un
analizador Hitachi. Las muestras séricas de 40 pacientes oscilaron de 16.8 µmol/L (94 µg/dL) a 78.1 µmol/L
(437 µg/dL) arrojando un coeficiente de correlación de 0.9937. El análisis de regresión lineal dio la siguiente
ecuación:
Este método = 1.065 (método de referencia) + 0.36 µmol/L (2.0 µg/dL).

DESECHO
Diluya en una gran cantidad de agua, desecharse en el sistema de drenaje, siguiendo fielmente todas las
regulaciones federales, provinciales, estatales y locales.
Ferene® es una marca registrada de Diagnostic Chemicals Limited.
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Ferrozine® es una marca registrada de Hach Chemical Co.

REFERENCIAS
1. Tietz, N.W. (Ed.), Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., p. 1578 (1986).
2. Stookey, L.L., Ferrozine-A New Spectrophotometric Reagent for Iron, Anal. Chem. 42, 779 (1970).
3. Artiss, J.D., Vinogradov, S., Zak, B., Spectrophotometric Study of Several Sensitive Reagents for Serum
Iron, Clin. Biochem. 14, 31-315 (1981).
4. Higgins, T., Novel Chromogen for Iron Determinations, Clin. Chem. 27, 1619 (1981).
5. Artiss, J.D., Strandbergh, D.R., Zak, B., Study of Continuous Flow Automation for Serum Iron on
Comparing Several Sensitive Reagents, Microchemical Journal, 28, 275-284 (1983).
6. Duffy, J.R., Gaudin, J., Copper Interference in the Determination of Iron in Serum using Ferrozine, Clin.
Biochem. 10, 122-123 (1977).
7. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press, Third Edition, Washington,
1990.

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