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    Los Biosensores

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    Erwin Hernández García
    El documento describe los biosensores, que son dispositivos compuestos por un receptor biológico y un transductor. El receptor biológico, como proteínas o células, detecta específicamente una sustancia. El transductor traduce la reacción de reconocimiento en una señal cuantificable. Los biosensores ofrecen análisis rápidos, sensibles y selectivos sin necesidad de marcadores. Se clasifican según el receptor biológico, como enzimas o anticuerpos, y el tipo de transductor, como óptico o

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    Los Biosensores

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    El documento describe los biosensores, que son dispositivos compuestos por un receptor biológico y un transductor. El receptor biológico, como proteínas o células, detecta específicamente una sustancia. El transductor traduce la reacción de reconocimiento en una señal cuantificable. Los biosensores ofrecen análisis rápidos, sensibles y selectivos sin necesidad de marcadores. Se clasifican según el receptor biológico, como enzimas o anticuerpos, y el tipo de transductor, como óptico o

    Descripción original:

    Biología Molecular

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    Los Biosensores

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    Erwin Hernández García
    El documento describe los biosensores, que son dispositivos compuestos por un receptor biológico y un transductor. El receptor biológico, como proteínas o células, detecta específicamente una sustancia. El transductor traduce la reacción de reconocimiento en una señal cuantificable. Los biosensores ofrecen análisis rápidos, sensibles y selectivos sin necesidad de marcadores. Se clasifican según el receptor biológico, como enzimas o anticuerpos, y el tipo de transductor, como óptico o

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    BIOSENSORES

    Un biosensor se puede definir como un dispositivo compuesto por dos elementos


    fundamentales: un receptor biológico (por ejemplo proteínas, ADN, células, preparado
    para detectar específicamente una sustancia aprovechando la exquisita especificidad
    de las interacciones biomoleculares y un transductor o sensor, capaz de interpretar la
    reacción de reconocimiento biológico que produce el receptor y "traducirla" en una señal
    cuantificable. Los dos constituyentes del biosensor están integrados conjuntamente y
    es precisamente esta íntima unión de dos mundos opuestos (el "vivo" y el "inerte") la
    que les confiere a los dispositivos biosensores sus especiales características de
    sensibilidad y selectividad. Es frecuente confundir el término "biosensor" con un
    dispositivo que mide moléculas biológicas, cuando en realidad el nombre "biosensor"
    hace referencia a la parte receptora biológica que lleva incorporada en su interior. Por
    ejemplo, es poco conocido que el famoso medidor de glucosa, es un biosensor, ya que
    en su interior combina un electrodo (transductor) con una capa de enzimas
    glucosaoxidasas (receptor), encargadas de catalizar la reacción de descomposición de
    la glucosa. Cuando la reacción enzimática tiene lugar, el electrodo detecta un cambio
    redox, que es directamente proporcional a la concentración de glucosa en la sangre del
    paciente.
    Se compone de tres partes:

     El sensor biológico:
    Puede ser un tejido, un cultivo de microorganismos, enzimas, anticuerpos, cadenas
    de ácidos nucleicos, etc.

     El transductor: Acopla los otros dos elementos y traduce la señal emitida por el
    sensor.

     El detector: Puede ser óptico, piezoeléctrico, térmico, magnético, etc.

    CARACTERISTICAS DE LOS BIOSENSORES:

    Son la sensibilidad y selectividad, una de las características fundamentales que hace


    tan atractivos a la mayoría de los biosensores es la posibilidad de realizar el análisis de
    la sustancia a determinar en tiempo real y de forma directa (sin necesidad de marcador)
    a diferencia de cualquier análisis biológico o clínico que requiere siempre un marcador
    (ya sea colorimétrico, fluorescente o radioactivo). Estas dos características le confieren
    a los biosensores la posibilidad de realizar no sólo un análisis cualitativo (si/no) y
    cuantitativo, sino también la posibilidad de evaluar lacinética de la interacción (constante
    de afinidad, asociación, disociación,y, por tanto, elucidar los mecanismos
    fundamentales de dicha interacción. Pocas técnicas biotecnológicas permiten la
    evaluación en tiempo real de las cinéticas de interacción, por lo que la tecnología
    biosensora se está imponiendo en todas aquellas áreas donde es fundamental conocer
    los detalles cinéticos de la interacción biomolecular, como por ejemplo, en laevaluación
    de fármacos potenciales.
    BIOSENSORES SIRVEN
    Las técnicas de análisis de laboratorio más habituales, ya sea de sustancias químicas
    o biológicas, suelen ser laboriosas, consumen mucho tiempo y en la mayoría de las
    ocasiones requieren personal especializado para su manejo. Frente a ellas los
    biosensores ofrecen la posibilidad de obtener medidas directas, continuas, de forma
    rápida y con alta sensibilidad. Muchos biosensores ofrecen también las ventajas del
    pequeño tamaño y la portabilidad, por lo que se podrían utilizar en cualquier lugar, como
    el hogar o la consulta del médico. Esto además significa que la cantidad de muestra
    para hacer el análisis es relativamente baja (de micro a nanolitros), lo que es muy
    importante si se trata de análisis de sangre o de ADN o si la muestra es cara o difícil de
    conseguir.

    Principio de funcionamiento de los biosensores.

    Esquema del funcionamiento de un biosensor. La muestra a analizar se pone en


    contacto con el dispositivo, siendo posible detectar sólo al analito (+) para el que está
    diseñado el receptor biológico. Cuando tiene lugar la reacción de reconocimiento
    biológico se producen una serie de cambios físico-químicos detectados por el
    transductor, que produce una señal cuantificable, directamente proporcional a la
    concentración del analito.

    Receptores y transductores
    Son muchos los dispositivos biosensores que se han desarrollados y muy variados los
    mecanismos físico-químicos de transducción que se han empleado para traducir la
    interacción biológica en una señal cuantificable y útil para el usuario. La clasificación de
    los biosensores viene impuesta tanto por la naturaleza de la biocapa receptora elegida
    como por el tipo del transductor empleado. Como elementos biológicos receptores se
    pueden emplear enzimas, anticuerpos, receptores proteícos, secuencias de
    oligonucleótidos, fragmentos subcelulares como mitocondrias, secciones de tejidos
    animales y vegetales, células completas, etc. y como transductor dispositivos ópticos,
    electroquímicos, y mecano-acústicos, principalmente. La combinación de la diversas
    capas receptoras con los diferentes transductores puede dar lugar a una gran variedad
    de dispositivos biosensores.
    RECEPTORES Y TRANDUCTORES

    Son muchos los dispositivos biosensores que se han desarrollado y muy variados los
    mecanismos físico-químicos de transducción que se han empleado para traducir la
    interacción biológica en una señal cuantificable y útil para el usuario. La clasificación de
    los biosensores viene impuesta tanto por la naturaleza de la bicapa receptora elegida
    como por el tipo del transductor empleado. Como elementos biológicos receptores se
    pueden emplear enzimas, anticuerpos, receptores proteicos, secuencias de
    oligonucleótidos, fragmentos subcelulares como mitocondrias, secciones de tejidos
    animales y vegetales, células completas, etc. y como transductor dispositivos ópticos,
    electroquímicos, y mecano-acústicos, principalmente. La combinación de las diversas
    capas receptoras con los diferentes transductores puede dar lugar a una gran variedad
    de dispositivos biosensores.

    CLASIFICACIÓN DE LOS BIOSENSORES:

    Los biosensores, generalmente, se suelen clasificar dependiendo de la


    naturaleza del material biológico y en función del sistema de transducción utilizado.

     Naturaleza del material biológico


    Biosensores catalíticos, cuyos receptores pueden ser enzimas, tejidos o células. Son
    los biosensores mejor conocidos y los más aplicados.
    Biosensores de afinidad, donde los receptores son anticuerpos, ácidos nucleicos,
    receptores, etc.

     Sistema de transducción

    Electroquímicos

    Ópticos

    Piezoeléctricos

    Termométricos

    Nanomecánicos
    HISTORIA
    Los biosensores, al igual que cualquier otro tipo de instrumento, han evolucionado a lo
    largo de la historia. Anecdóticamente, podríamos decir que los primeros biosensores
    fueron los canarios; ya que estas aves se utilizaban antiguamente en las minas de
    carbón para detectar gases tóxicos. Los canarios se mueren antes que las personas en
    presencia de monóxido de carbono o metano y como suelen estar cantando la mayoría
    del tiempo el hecho de que no lo hicieran se convertía en una alarma sonora.
    Pero, al margen de este hecho anecdótico, se puede decir que el padre de estos
    dispositivos es Leland C. Clark Jr., que en 1956 finalizó sus trabajos con el electrodo de
    O2, pero no se conformó y con la idea de ampliar su uso al de medir más analitos en el
    cuerpo humano, en 1962 propuso hacer sensores “más inteligentes”. Lo que él quería
    decir con esto era que sería una buena idea combinar las enzimas y otros materiales
    biológicos con los sensores electroquímicos que había hasta esa época. Con esta idea,
    y con la ayuda de Lyon, construyó el primer biosensor!!! Este consistía en un electro de
    O2 con la enzima glucosa oxidasa inmovilizada. Este biosensor permitía relacionar
    directamente la concentración de glucosa con la disminución de la concentración de
    oxígeno. Posteriormente, Guilbault y Montalvo detallaron el primer electrodo enzimático
    potenciométrico basado en la inmovilización de la enzima ureasa sobre un electrodo
    selectivo de amonio.
    En 1975 esto se convirtió en una realidad comercial, poniéndose a la venta el primer
    analizador de glucosa basado en la detección amperométrica de peróxido de hidrógeno
    (agua oxigenada) en Ohio. Este fue el primer biosensor a la venta de los muchos que
    se comercializarían más adelante. También en este mismo año Divis se preguntó: ¿por
    qué no usamos las bacterias como elemento biológico en los biosensores para medir la
    cantidad de alcohol en una muestra? Esta pregunta causó un gran revuelo en muchas
    grandes empresas de medio ambiente de Japón y otros lugares que se pusieron en
    marcha en su investigación y no tardaron mucho tiempo en desarrollar los electrodos
    microbianos. Un año antes se comenzó a usar transductores térmicos (termal enzyme
    probes) y los termistores enzimáticos (enzyme thermistors). Posteriormente se comenzó
    a usar los biosensores basados en fibra óptica, que originaron la aparición de los
    denominados “optados”. Éstos se usaron en un primer momento para la determinación
    de CO2 y O2.
    Más o menos 15 años después de la construcción del primer biosensor, Clemens
    incorporó un biosensor de glucosa en un páncreas artificial que se comercializó como el
    Biostator. Actualmente este biosensor ya no está en venta. En este mismo año una
    empresa Suiza construyó un biosensor que utilizaba la lactato deshidrogenasa; éste fue
    muy útil para mejorar los análisis en clínica y en deportes. En 1982, basándose en la
    utilización de mediadores electroquímicos para favorecer la transferencia de electrones
    desde el centro redox de una enzima a la superficie del electrodo se construyeron la
    nueva generación de biosensores electroquímicos. Basándose en esto se describió la
    implantación de un biosensor subcutáneo para la determinación de glucosa.
    Volviendo a la década de los 70; en ella también se intentaron construir inmunosensores
    inmovilizando anticuerpos y utilizando transductores piezoeléctricos o potenciométricos,
    aunque fue en la década de los 80 cuando Liedberg los comercializó con éxito. En 1987
    mediante la utilización de mediadores electroquímicos inmovilizados en electrodos
    enzimáticos serigrafiados se consiguió construir el “bolígrafo” para el seguimiento
    personal de glucosa en la sangre!!! comercializado por MediSense. Actualmente las
    compañías Abbott Boehringer Mannheim y Bayer dominan las ventas de éste bolígrafo
    lo que da lugar a unas ventas del orden de varios cientos de millones de dólares; y está
    desbancando casi totalmente a los métodos convencionales de medir la glucosa.
    Actualmente existen multitud de biosensores en los cuales se combinan la amplia
    diversidad de componentes biológicos (enzimas, ácidos nucléicos, receptores celulares,
    anticuerpos y células intactas) con los diferentes tipos de transductores
    (electroquímicos, ópticos, piezoeléctricos, termométrica). Éstos se pueden utilizar en
    numerosos problemas de la actualidad como el análisis clínico, de alimentos, bebidas,
    vigilancia del medio ambiente, defensa, seguridad y muchas más áreas.

    APLICACIONES

    Inmunosensor impedométrico

    Biosensor de glucosa, colesterol, CO2…

    Control de drogas y alcohol

    Industriales

    Alimentarios

    Biosensores miniaturizados basados en PCR


    En los últimos diez años, se han llevado a cabo esfuerzos importantes para llevar a cabo
    la PCR fuera del laboratorio y en el campo. Esto se debe en parte a una mayor demanda
    de métodos rápidos y precisos para detectar bacterias patógenas, virus y otros agentes
    causantes de enfermedades. Debido a su relativa precisión y sensibilidad, la reacción
    en cadena de la polimerasa (PCR) se adapta bien a estas necesidades. Los biosensores
    miniaturizados basados en PCR se han desarrollado utilizando una variedad de
    tecnologías de fabricación. Al menos cuatro entidades comerciales han desarrollado
    sistemas de detección miniaturizados basados en PCR con los correspondientes
    ensayos de detección dirigidos al ADN de muestras de tejido, sangre, ambientales o de
    alimentos (Herold y Rasooly, 2009. Tecnología Lab-on-a-Chip.) ISBN: 978-1 -904455-
    47-9). Estos sistemas basados en PCR son sensibles y robustos, pero una variedad de
    contaminantes puede inhibir la amplificación exitosa y disminuir su sensibilidad.
    Con el fin de eludir este problema, el ADN se extrae y se purifica típicamente a partir de
    una muestra a través de una variedad de protocolos de lisis y técnicas de purificación.
    Uno de los métodos más comunes es la lisis química seguida de la purificación del ADN
    utilizando resinas basadas en sílice. El ADN en tampones que contienen sal caotrópica,
    como los que contienen guanidinio o sales de yoduro de sodio, se une preferentemente
    a las superficies de sílice, mientras que otras macromoléculas, como proteínas y lípidos,
    permanecen libres en solución. Estos componentes no deseados se pueden eliminar
    por varios métodos, incluida la centrifugación y los posteriores pasos de lavado basados
    en alcohol. El ADN relativamente puro se eluye a continuación en tampón de baja
    concentración iónica o agua. Los kits simples están disponibles comercialmente en base
    a matrices de partículas con tasas de flujo problemáticas y sin integración directa en
    dispositivos basados en chips. Al menos un grupo ha informado sobre la incorporación
    de resinas basadas en sílice en un dispositivo de micro flujo mientras que otros han
    utilizado estructuras de columnas de sílice microfabricadas para el mismo propósito.
    La integración de la purificación del ADN y las reacciones posteriores en el mismo chip
    reduce el tamaño de la muestra, conserva el volumen de la muestra y elimina los pasos
    complicados para el técnico. Una vez que se ha extraído y purificado el ADN de una
    muestra dada, se puede emplear la PCR para amplificar las secuencias de ADN diana.
    Para la detección de patógenos, pueden diseñarse cebadores de PCR específicos para
    amplificar genes de patogénesis conocidos u otras secuencias de identificación dentro
    del cromosoma o ADN asociado. Se han utilizado varias estrategias para calentar y
    enfriar cíclicamente el chip a las temperaturas requeridas utilizando luz infrarroja,
    enfriadores termoeléctricos y electrodos resistivos (Herold and Rasooly, 2009.
    Tecnología Lab-on-a-Chip. ISBN: 978-1-904455- 47-9). Además de cambiar la
    temperatura de toda la cámara de reacción, otros métodos han utilizado la denominada
    PCR de "flujo continuo" en la que la muestra pasa a través de diferentes regiones
    térmicas en el chip. Otro enfoque emplea un enfriador termoeléctrico (TEC) que puede
    alternativamente calentar y enfriar, dependiendo de la dirección de la corriente eléctrica.
    Estas bombas de calor en miniatura se controlan fácilmente con controladores de
    retroalimentación electrónicos y tienen requisitos de potencia relativamente bajos (5 a
    10 vatios)
    Se ha descrito un método para realizar una PCR basada en microchip con una fuente
    de calor externa, como un TEC o un calentador resistivo. Aunque se han descrito la PCR
    de flujo continuo y otros métodos novedosos de termociclado a base de microchip, el
    calentamiento externo del microchip sigue siendo uno de los métodos más simples y
    confiables para realizar la PCR en sistemas lab-on-a-chip. Además, el calentamiento
    externo del microchip permite una integración perfecta del componente de amplificación
    de PCR con los diseños de microchips existentes. Los pasos de fabricación y los
    métodos de amplificación se han utilizado con éxito para la amplificación por PCR
    basada en chips (Herold y Rasooly, 2009. Lab-on-a-Chip Technology. ISBN: 978-1-
    904455-47-9).

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