Silvia Tesis Titulo 2016

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA
PERUANA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TESIS PARA OPTAR EL TITULO DE:

QUIMICO FARMACEUTICO
―EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI-Staphylococcus aureus DEL

EXTRACTO ALCOHÓLICO DE HOJAS DE Anacardium occidentale Linn.
“Casho” MEDIANTE EL MÉTODO DE DIFUSIÓN EN DISCO (KIRBY-
BAUER)”
AUTORES:
GÓMEZ SEOPA, SILVIA MARGARITA
PEREIRA SANDOVAL, JOHN EDWARD
ASESORA:
Ing. Reyna Gladys Cárdenas de Reátegui
IQUITOS – PERÚ
2016
1
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA
Facultad de Farmacia y Bioquímica

BAUER)”
PAGINA DE APROBACIÓN
_________________
M.C. Charles Ocampo Falcón.
PRESIDENTE
_________________________
Q.F. Henry Vladimir Delgado Wong.
MIEMBRO
_______________________
Ing. Cleto Jara Herrera.
MIEMBRO
__________________________
Ing. Reyna Gladys Cárdenas de
Reátegui
ASESORA
2
INDICE TEMÁTICO
Pág.
Abreviaturas 12
Resumen 14
Dedicatoria 16
Agradecimiento 18
CAPITULO I 19
I.- INTRODUCCIÓN 20
II.- PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 24
2.1 Formulación del Problema 24
III.- OBJETIVOS 25
3.1 General 25
3.2 Específicos 25
CAPITULO II 26
I.- MARCO TEÓRICO 27

1.1 Anacardium occidentale L. ―CASHO‖ 28
1.1.1 Historia 28
1.1.2 Antecedentes 29
1.1.3 Clasificación Taxonómica 32
1.1.4 Descripción Botánica 32
1.1.5 Composición Nutricional 36
1.1.5.1 Pseudo fruto 36
1.1.5.2 Nuez 37
1.1.5.3 Semilla 37
1.1.5.4 Valor Nutricional Porcentual De La Nuez Y de Los 37
Ácidos Grasos Del Aceite De Marañón.
1.1.6 Composición Fitoquímica 38
3
1.1.7 Estudios Farmacológicos y Toxicológicos 42
1.1.8 Uso Tradicional 45
1.1.9 Distribución Geográfica 46
1.2 Método de Susceptibilidad por Disco de Difusión Kirby – Bauer 46
1.2.1 Introducción 46
1.2.2 Principio del Método 48
1.2.3 Macrodilución en Caldo 49
1.2.4 Concentración Mínima Inhibitoria 50
1.2.5 Lectura e Interpretación de la Concentración Mínima Inhibitoria 51
1.3 Patrón de Turbidez 52
1.4 Estaphylococcus 54
1.4.1 Introducción 54
1.4.2 Especies de Estaphylococcus 54
1.4.2.1 Estaphylococcus aureus 55
1.4.2.2 Definición Taxonómica. 55
1.4.2.3 Características Microbiológicas 56
1.4.2.4 Metabolismo 56
1.4.2.5 Característica Genéticas 57
1.4.2.6 Fisiopatología 58
1.4.2.7 Identificación 62
1.4.2.8 Enfermedades Causadas Por Staphylococcus aureus 62
1.4.2.9 Tratamiento 67
1.4.2.10 Mecanismo De Resistencia Al Tratamiento 70
1.5 Antibióticos 71
1.5.1 Historia 71
1.5.2 Definición 71
1.5.3 Clasificación De Los Antibióticos 72
1.5.3.1 Según la acción del antibiótico sobre la bacteria 72
a. Bacteriostáticos 72
b. Bactericidas 72
1.5.3.2 Según el mecanismo de acción sobre la bacteria. 72
a. Antibióticos que inhiben la síntesis de la Pared celular. 72
4
b. Antibióticos que ejercen su acción a través De la 73
membrana celular y afectan su permeabilidad.
c. Antibióticos que inhiben la síntesis de Proteínas a nivel 73
ribosomal.
d. Antibióticos que inhiben la síntesis de los ácidos 73
Nucleicos.
e. Antibióticos anti metabolitos. 73
1.5.3.3 Clasificación según su estructura química 74

a) Betalactámicos 74
b) Carbapenems 74
c) Aminoglucósidos 74
d) Macrólidos 74
e) Tetraciclinas 74
f) Lincosaminas 74
g) Quinolonas 74
h) Sulfonamidas 74
i) Rifamicinas 74
j) Cloranfenicoles 74
k) Antibióticos péptidos 74
l) Otros 74
Aminoglucósidos 74
1.5.4 Mecanismos de Acción de Los Antibióticos 76

1.5.4.1 Agente que inhiben la síntesis de la pared celular. 76
1.5.4.2 Agentes que modifican la permeabilidad de la Membrana 77
celular.
1.5.4.3 Agentes que inhiben la síntesis proteica. 77
1.5.4.4 Agentes que inhiben la síntesis o función de Los ácidos 77
nucleicos.
5
II.- DEFINICIONES OPERACIONALES 78
2.1 Variables 78
2.1.1 Variable Independiente 78
2.1.2 Variables Dependientes 78
2.2 Indicadores 78
2.2.1 Indicador Independiente 78
2.2.2 Indicador Dependiente 78
2.3 Operacionalización de las Variables 79
III.- HIPOTESIS 81
CAPITULO III 82
I.- METODOLOGÍA 83
1.1 Método de Investigación 83
1.1.1 Tipo de Estudio 83
1.2 Diseño de la Investigación 83
1.3 Población Y Muestra 84
1.3.1 Población Vegetal 84
1.3.2 Muestra Vegetal 84
1.3.2.1 Criterio de Inclusión de la Muestra Vegetal 84
1.3.2.2 Criterio de Exclusión de la Muestra Vegetal 84
1.3.3 Cepa Bacteriana 85
1.4 Procedimiento Experimental 85

1.4.1 Recolección del Material Vegetal 85
1.4.1.1 Recolección de las Muestras Vegetales 85
1.4.2 Lavado de la Materia Prima 86
1.4.3 Secado de la Materia Prima 86
1.4.4 Triturado y Pesada de la Materia Prima 86
6
1.4.5 Método de Obtención del Extracto Alcohólico 86
1.4.5.1 Obtención del Extracto Alcohólico de las Hojas de 86

Anacardium Occidentale L. (Casho)
1.4.6 Determinación de La Actividad Anti- Staphylococcus aureus 87
1.4.6.1 Obtención de la cepa de Staphylococcus aureus 87
1.4.7 Prueba de susceptibilidad por difusión de disco 87
1.4.7.1 Esterilización de los materiales a utilizar 87

1.4.7.2 Preparación de los Medios de cultivo 89
1.4.7.3 Preparación de los Discos 89
1.4.7.4 Preparación de la Solución Stock y de la Macrodilución 89
del extracto
1.4.7.5 Preparación de los Discos impregnados con el extracto 90
1.4.7.6 Purificación de la Cepa 90
1.4.7.7 Preparación del Inóculo 90
1.4.7.8 Inoculación de las placas 91
1.4.7.9 Aplicación de los discos 91
1.4.7.10 Incubación de las Placas 92
1.4.7.11 Lectura de las placas e interpretación de los Resultados 92
1.5 Materiales 93
1.5.1 Material Vegetal 93
1.5.2 Material Biológico 93
1.5.3 Materiales de Laboratorio 93
1.5.4 Drogas e Insumos Químicos 95
1.5.5 Equipos e Instrumentos: 95
1.5.6 Medios De Cultivo 96
1.6 Técnicas Usadas en la Recolección de Datos 97
7
1.7 Análisis de Datos 97
1.7.1 Técnicas de Análisis e Interpretación de la Información 97
1.8 Limitaciones 97
1.9 Protección De Los Derechos Humanos Y Bioseguridad 98
CAPITULO IV 100
I.- RESULTADOS 101

1.1.- Determinación de Rendimiento de Hojas 101
1.2.- Actividad Antibacteriana De Anacardium occidentale L. (Casho) 102
1.2.1 Método de difusión de disco (Kirby - Bauer) 102
II.- DISCUCIÓN 106
III.- CONCLUSIONES 110
IV.- RECOMENDACIONES 111
V.- BIBLIOGRAFIA 112
5.1.- Referencias Bibliográficas 112

5.2.- URL`s 132
ANEXOS 133
INDICE DE ANEXOS
CONTENIDO Pág
ANEXO Nº01: Datos de pasaporte de colección de especies de la planta medicinal en 134
estudio.
ANEXO Nº02: Sistema de clasificación de Adolf Engler, modificado por H. Melchior 135
(1964), DE Anacardium occidentale L.
ANEXO Nº03:Certificado de identificación taxonómica de Anacardium occidentale L. 136
ANEXO Nº4 Ubicación geografíca del centro poblado cruz del sur. 137
ANEXO Nº5: Diagrama de flujo de la obtención del extracto alcohólico de las hojas de 138
Anacardium occidentale L. (casho).
8
ANEXO Nº6: Diagrama de flujo de la actividad antibacteriana (difusión en disco kirby – 139
Bauer).
ANEXO Nº7: Recoleccion de las hojas, de Anacardium occidentale L. (casho). 140
ANEXO Nº8: Secado de las hojas de Anacardium occidentale L. (casho). 141

ANEXO Nº09: Triturado de las hojas secas del Anacardium occidentale L. (casho). 142
ANEXO Nº10: Pesada de las hojas (trituradas) de Anacardium occidentale L. (casho). 143
ANEXO Nº11: Macerado de las hojas de Anacardium occidentale L. (casho). 144
ANEXO Nº12: Filtrado de la maceracion de las hojas de Anacardium occidentale L. 145
(casho).
ANEXO Nº13: Eliminación de un disolvente a presión reducida (rotavapor). 146
ANEXO Nº14:Concentración del extracto alcohólico de las hojas de Anacardium 147
occidentale L. (casho) en rotavapor
ANEXO Nº15: Secado del extracto alcoholico de las hojas de Anacardium occidentale L. 148
(casho).
ANEXO Nº16: Esterilizacion de los materiales. 148
ANEXO Nº17: Esterilizacion de los discos de sensibilidad. 150
ANEXO Nº18: Preparación de la solución stock del extracto alcohólico de las hojas de 150
Anacardium occidentale L. (casho).
ANEXO Nº19:Obtencion de la macrodilucion del extractro alcohólico de las hojas de 153
Anacardium occidentale L. (casho)
ANEXO Nº20: Preparacion del agar Mueller Hinton, agar Tripticasa de Soya y Caldo 154
Tripticasa de Soya.
ANEXO Nº21:Transporte de la muestra y medios de cultivo 160
ANEXO Nº22: Cepa Staphylococcus aureus 161
ANEXO Nº23: Activacion de Staphylococcus aureus 161
ANEXO Nº24: Cepas activadas de Staphylococcus aureus 163
ANEXO Nº25: Preparacion del inoculo de Staphylococcus aureus 164
ANEXO Nº26: Preparación del estandar 0.5 de Mac Farland 166
ANEXO Nº27: Preparacion de los discos inpregnados con el extracto alcoholico de las 168
hojas de Anacardium occidentale L. (casho).
ANEXO Nº28: Ajustando la turbidez del inoculo con el estándar 0.5 de Mac Farland. 169
9
ANEXO Nº29: Inoculacion en las placas. 170
ANEXO Nº30: Aplicación de los discos. 171
ANEXO Nº31: Incubacion de las placas. 172
ANEXO Nº32: Lectura de las placas. 173
INDICE DE FIGURAS
CONTENIDO Pág.
FIGURA N°01: Árbol de Anacardium occidentale L. (casho) 33

FIGURA N°02: Tronco de Anacardium occidentale L. (casho) 33
FIGURA N°03: Hojas de Anacardium occidentale L. (casho) 34
FIGURA N°04: Flores de Anacardium occidentale L. (casho) 34
FIGURA N° 05: Pseudo Fruto del Anacardium occidentale L. (Casho) 35
FIGURA N° 06: Fruto del Anacardium occidentale L. (Casho) 35
FIGURA N° 07: Estructuras químicas del Ácido Anacárdico, cardanol, cardol y 2-metil- 40
cardol
FIGURA N° 08: Estructuras químicas de los fitosteroles y fitostanoles identificados en 41
el aceite de la nuez del Anacardium occidentale L. (casho)
FIGURA N° 09: Estructuras químicas de la Zaeralona y Lasiodiplodina. 43
FIGURA N° 10: Patrón clásico de la melanogénesis según Raper-Mason 44
FIGURA N° 11: Bloqueo de la conversión aeróbica de tirosina 44
FIGURA N° 12: Relación entre los puntos de quiebre (break point) y el halo de inhibición 50
en la técnica de antibiograma
FIGURA N° 13: Determinación de la Concentración inhibitoria mínima (CIM) y de la 50
Concentración Bactericida Mínima (CBM).
FIGURA N° 14:Determinación e interpretación de la Concentración Mínima Inhibitoria 51
(CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CBM)
FIGURA N° 15: Características microbiológicas de Staphylococcus aureus 56
FIGURA N° 16:Mecanismo de defensa del Huesped frente a Staphylococcus aureus 58
10
INDICE DE TABLAS
CONTENIDO Pág.
TABLA N° 01: Composición Nutricional del pseudo fruto 36

TABLA N° 02: Composición de la Semilla del pseudo fruto 37
TABLA N° 03: Valor Nutricional porcentual de la Nuez y de los ácidos grasos del aceite 37
del marañon.
TABLA N° 04. Tamizaje Fitoquímico del extracto fluido y de la tintura al 20 % de hojas 39
de Anacardium occidentale L.
TABLA N° 05. Tamizaje Fitoquímico del extracto n-hexánico, clorofórmico y acetato de 39
etilo obtenidos de la tintura al 20% de hojas de Anacardium occidentale L.
TABLA N° 06. Composición Química de la nuez de Anacardium occidentale L., (casho) 40

TABLA N°07: Escala de McFarland de 0.5 53
TABLA N°08 Antimicrobianos recomendados para el tratamiento de la Infección 67
Estafilocócica según localización del foco y sensibilidad de la cepa a meticilina.
TABLA N°09: Clasificación de la actividad antimicrobiana según el porcentaje de 93
inhibición.
TABLA N° 10: Rendimiento del extracto alcohólico de las hojas de Anacardium 101
occidentale L (Casho), por maceración en frio y posterior concentración en rotavapor
TABLA N° 11: Actividad antibacteriana obtenida del extracto alcohólico de Anacardium 102
occidentale L, (Casho) frente a Staphylococcus aureus, según diámetro de la zona de
inhibición.
INDICE DE GRÁFICOS
CONTENIDO Pág.
GRAFICO N° 1: Categorización del extracto alcohólico de Anacardium occidentale L, 104

(Casho) frente a Staphylococcus aureus según diámetro de la zona de inhibición.
GRAFICO N° 2: Actividad antibacteriana de Anacardium occidentale L. (Casho) frente a 105
Staphyloccoccus aureus según porcentaje de inhibición.
11
ABREVIATURAS
MRSA : Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina.

HA-MRSA : Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina adquirido en el
Hospital.
CA-MRSA : Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina adquirido en la
Comunidad.
EUA : Estados Unidos de América.
MDR : Multi-Droga-Resitente
CMI : Concentración mínima inhibitoria
mm. : Milímetro.
CNSL : líquido de la cascara de la nuez del casho
sp. : Especie
S.aureus. : Staphylococcus aureus
Cm. : Centímetro.
M : Metro
A. occidentale : Anacardium occidentale
ppm. : Partes por millón
NCCLS : Comité Nacional para Clínica y Laboratorio Estándar
CLSI : Instituto clínico y Laboratorio Estandar.
OMS : Organización Mundial de la Salud
mL. : Mililitro
CBM : Concentración Bactericida Mínima
μg. : Micrógramo
UFC : Unidades formadoras de colonias
μm. : Micrómetro
kb : Kilo voltios
G : Guanina
C : Citocina
Tn : transposón
SaPIs : varias islas de patogenicidad
MHC : Complejo Mayor de Histocompatibilidad
PVL : leucocidina de Panton-Valentine
PMN : polimorfonucleares
12
PCR Reacción en cadena de la polimerasa
IM : Intramuscular.
PIR : Porcentaje del Efecto Inhibitorio Relativo (PIR)
IMET : Instituto de Medicina Tradicional
DZI : Diámetro de la zona de inhibición
Conc : Concentración
13
BAUER)”
Silvia Margarita Gómez Seopa*&John Edward Pereira Sandoval*
Resumen:
El propósito del presente trabajo fue determinar la actividad antibacteriana in vitro del
extracto alcohólico de las hojas de Anacardium occidentale Linn. (casho), a través del
método de disco difusión o ensayo de Kirby Bauer; que determina la formación de halos
de inhibición alrededor de los discos de pruebas. La muestra vegetal fue recolectada del
Centro Poblado Cruz del Sur (km 8 de la carretera Iquitos-Nauta) y la cepa bacteriana
de experimentación fue proporcionada por la Dirección de Salud Ambiental (DESA) de
la Dirección Regional de Salud Loreto. La cepa bacteriana de experimentación fue
Staphylococcus aureus. Para el método de disco difusión o ensayo de Kirby- Bauer se
utilizó como control Positivo Gentamicina 10 ug, el cual obtuvo un promedio de 17.5
mm. en el Diámetro de la zona de inhibición (DZI), encontrándose como resultado
SENSIBLE según parámetros del método de Kirby – Bauer (>15 mm = Sensible). El
extracto alcohólico de hojas de Anacardium occidentale Linn (Casho), se evaluaron a
concentraciones de 75, 150 y 300 mg/ml. encontrándose diámetros en la zona de
inhibición de 6.0mm., 6.7mm., 8.0 mm. respectivamente, los cuales obtuvieron como
resultados RESISTENTE, por encontrarse por debajo del parámetro de comparación
según control positivo (<12 mm = Resistente).
La actividad antibacteriana fue medida principalmente por el porcentaje de inhibición

que demostró el extracto alcohólico a las diversas concentraciones evaluadas,
encontrándose 34.29% y 38.29% en las concentraciones de 75mg/ml y 150 mg/ml
respectivamente; lo cual demostró ser inactivo frente a Staphylococcus aureus. En la
concentración de 300 mg/ml, se obtuvo un porcentaje de inhibición de 45.71%,
considerándolo como Poco Activo.
Palabras claves: Anacardium occidentale Linn; Método de disco difusión en agar;

Actividad antibacteriana; Staphylococcus aureus.
*Bachiller en Farmacia y Bioquímica
14
―EVALUATION ACTIVITY ANTI-Staphylococcus aureus ALCOHOLIC
EXTRACT OF LEAVES Cashew Linn. “Casho” BY THE METHOD OF DISC
DIFFUSION (KIRBY -BAUER)”
Silvia Margarita Gómez Seopa*&John Edward Pereira Sandoval*
Abstract:
The purpose of this study was to determine the antibacterial activity in vitro of the
alcoholic extract of leaves Cashew Linn. ( Casho ), through the disk diffusion method or
assay Kirby Bauer; determining the formation of zones of inhibition around the discs
test. The plant sample was collected from Southern Cross Town Centre ( 8 km Iquitos -
Nauta road) and experimental bacterial strain was provided by the Directorate of
Environmental Health ( DESA ) of the Loreto Regional Health Directorate. The
experimental bacterial strain was Staphylococcus aureus. For disc diffusion method or
Kirby Bauer assay it was used as a positive control Gentamycin 10 ug, which he earned
an average of 17.5 mm. the diameter of the inhibition zone ( DZI ), SENSITIVE found
as result as method parameters Kirby - Bauer (> 15 mm = Sensible ). The alcoholic
extract of leaves Cashew L. ( Casho ), They were evaluated at concentrations of 75, 150
and 300 mg / ml . finding diameters in the zone of inhibition of 6.0mm . , 6.7mm . , 8.0
mm. respectively, which they obtained as results RESISTANT, to be below the
comparison parameter as a positive control (<12 mm = resistant ) .
The antibacterial activity was measured mainly by the percent inhibition demonstrating
the alcoholic extract at various concentrations evaluated, finding 34.29 % and 38.29 %
at concentrations of 75mg / ml and 150 mg / ml respectively; which proved to be
inactive against Staphylococcus aureus. In the concentration of 300 mg / ml, a
percentage of inhibition of 45.71 % , considering it as indolent was obtained.
Keywords; Cashew Linn , disk diffusion method in agar ; Antibacterial activity ;

Staphylococcus aureus .
*Bachelors in Pharmacy and Biochemistry
15
DEDICATORIA:
Silvia Margarita
Gómez Seopa:
A:
Dios.
Por Protegerme y Darme la Fortaleza de seguir adelante a pesar de las

dificultades vividas, por brindarme la felicidad y permitirme estar junto a mi
familia y a las personas que son muy importantes en mi vida.
A mi Madrecita de mi vida Etelvina Seopa Babilonia

Por Cuidarme, amarme y ser desde el inicio de mi carrera el motivo que me
inspiro a seguir adelante, me enseñaste los valores del amor, la
responsabilidad y a seguir esforzándome día a día para lograr mis objetivos,
y sé que siempre estuviste orgullosa de mis logros porque reflejaba los tuyos.
Y aunque ahora no estés a mi lado siempre seguirás siendo el Ángel que
alumbrará por siempre mi vida.
A mi Papacito Jaime Moises Gómez Guzmán por Protegerme y

brindarme su apoyo incondicional para poder desarrollarme como
profesional.
A mis hermanos Jaime, Orlando, Tania y Sara por el apoyo, la confianza

brindada y la comprensión por el tiempo que no estuve con Ustedes.
A mis Abuelitos Pedrito Antonio Ceopa Linarez y Dolores Gongora

Cordova
Por ser los angeles que me cuidan y protegen
A mis sobrinos por la ternura y Alegria brindada.
A mi Fiel y Amado compañero Johncito

Por que eres muy importante en vida y siempre estuviste a mi lado
incondicionalmente, en las buenas y en las malas, por motivarme, brindarme
tu apoyo, darme la confianza, por darme la mano siempre que la necesitaba y
por estar ahora como siempre juntito a mí, y sé que seguiremos así hasta la
eternidad. Gracias infinitamente por todo Amorcito.
John Edward Pereira

Sandoval:
1
A:
Dios.
Por darme la oportunidad de vivir, y por estar conmigo en cada paso que doy,
por fortalecer mi corazón e iluminar mi mente y por haber puesto en mi
camino a aquellas personas que han sido mi soporte y compañía durante todo
el periodo de estudio.
A mi querida y Amada madre Carmen Rosario Sandoval Moreno.
Por darme la vida, quererme, orientarme y creer en mí en todo momento. Por

todo esto seguí adelante en los momentos más difíciles.
Mamá gracias por ser mi soporte y ejemplo a seguir en todo momento de mi
vida y mi carrera profesional.
A mi padre Carlos Alberto Pereira Pinedo.
Por los ejemplos de perseverancia y constancia que lo caracterizan y que me

ha inculcado siempre, por el valor mostrado para salir adelante y por su
amor, por todo esto tiene un lugar muy grande en mi corazón.
A mis queridos hermanos.

Carmen, Ivonne, Carlos.
Por el apoyo incondicional como hermanos mayores.
A mis sobrinos.
Porque soy para ellos un ejemplo a seguir, demostrándoles que con esfuerzo y
estudio se puede llegar muy lejos en la vida.
En memoria a la señora Etelvina.

Por ser una gran amiga y brindarme su cariño.
Este logro es de todos.
17
Silvia Margarita Gómez Seopa & John Edward Pereira Sandoval
Facultad de Farmacia y Bioquímica- UNAP
AGRADECIMIENTO
Queremos expresar nuestro más sincero agradecimiento a Todas aquellas

personas que de una u otro manera hicieron posible la realización de la
presente investigación.
A todos los docentes de nuestra Prestigiosa Facultad, los cuales nos brindaron
todos sus conocimientos cuando estuvimos en las aulas, para poder
realizarnos como profesional.
A la Facultad de Farmacia y Bioquímica por brindarnos sus instalaciones

para realizar el presente trabajo.
A la Ingeniera Reyna Gladys Cárdenas de Reátegui por el valioso apoyo en la

realización del presente trabajo de investigación.
Al Instituto de Medicina Tradicional (IMET-ESSALUD), por brindarnos sus

instalaciones para realizar el proceso de desecación de la muestra vegetal
estudiada. De manera especial al Ing. Jorge Isaac Villacres Vallejo y al Q.F.
William Valdelomar Vigo Alfaro por la confianza brindada.
Al LIPNA, por brindarnos sus instalaciones para realizar la concentración del

extracto a evaluar. De manera especial a la Dra Lastenia y a todo su equipo de
trabajo.
A la Dirección de Salud Ambiental por brindarnos el material biológico a

ensayar.
A todos los jurados Calificadores por las críticas constructivas y por su

importante aporte para la realización del presente trabajo.
18
CAPITULO I_____________
19
I.- INTRODUCCION
Las plantas medicinales son aquellas que contienen, en alguno de sus órganos,
principios activos. En la actualidad se calcula unas 260,000 especies de plantas,
de las que el 10 % se puede considerar medicinal. Según la clasificación de
tratados médicos de fitoterapia, en épocas modernas y pasadas, las regiones
tropicales son favorecidas por la proporción de especies medicinales, teniendo
en cuenta que todavía no se conoce la totalidad de la flora vegetal 1.
Las plantas son laboratorios naturales donde se biosintetiza una gran cantidad de
sustancias químicas, de hecho se les considera como la fuente de compuestos
químicos más importante que existe. Un gran porcentaje de los principios
activos está comprendido dentro de los llamados productos naturales o
metabolitos secundarios, que son compuestos químicos de estructuras
relativamente complejas y de distribución restringida. Entre estos metabolitos
son comunes aquellos con funciones defensivas contra insectos, bacterias,
hongos, como son los alcaloides, aminoácidos no proteicos, esteroides, fenoles,
flavonoides, cumarinas, quinonas, taninos y terpenoides. Se ha demostrado que
existe gran variación en cuanto a la concentración de estos en la planta, no hay
un patrón de máxima producción ni órganos especiales de almacenaje de
metabolitos secundarios, sin embargo, lo común es que las mayores
concentraciones de estos tipos de compuestos se encuentren en hojas, flores y
semillas 2.
Las hojas de Anacardium occidentale Linn (casho) presentan contenidos

óptimos de minerales, principalmente electrolitos, material saponificable, ácidos
grasos monoinsaturados, fitoesteroles y proteínas solubles, por lo que se le
atribuyen propiedades medicinales como hipoglicemiante, antihipertensiva,
3-5
astringentes, antihelmíntica y antiinflamatoria . La literatura refiere
información sobre la caracterización fitoquímica y antimicrobiana de la fruta de
Anacardium occidentale Linn. así como también su semilla (nuez) sin embargo,
estas determinaciones en las hojas son insuficientes.
20
Desde su descubrimiento por el médico Alexander Ogston en 1880,

Staphylococcus aureus es considerado un patógeno con gran potencial para
causar múltiples infecciones en el humano y en los animales. Staphylococcus
aureus es la especie tipo del grupo, considerada la más virulenta, responsable de
un amplio espectro de enfermedades, que van desde infecciones de la piel y
6-8
tejidos blandos hasta infecciones graves que amenazan con la vida . La mayor
parte de estas infecciones ocurren en personas en las que no se reconocen
factores de riesgo, principalmente niños y adolescentes. Generalmente ocurre en
poblaciones cerradas o semicerradas (militares, reclutas, prisioneros, atletas y
guarderías), hombres que tienen sexo con hombres y grupos con bajo estatus
económico. Estas cepas han sido encontradas en todo el mundo -incluyendo
Norteamérica y Europa- con áreas que reportan una incidencia de alrededor del
20 %9-13. El impacto de las cepas de Staphylococcus aureus sobre la salud es la
resistencia que puede presentar a múltiples antibióticos, sobre todo a la
meticilina. 6-8.
A través de los años se ha incrementado la tasa de morbilidad y mortalidad a

pesar del gran número de antibióticos disponibles que existen. Staphylococcus
aureus forma parte de la flora normal del humano, entre 25 y 50% de la
población sana está colonizada por esta bacteria, constituyendo un riesgo por su
diseminación. Éste puede ser adquirido a través del contacto con otras personas
o por exposición al ambiente. En los últimos años han aumentado de forma
notable las infecciones por este microorganismo, en especial por cepas de
Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina. 6-8.
Las infecciones por MRSA fueron, en su inicio, de origen nosocomial (HA-

MRSA), y ocurrían frecuentemente en personas hospitalizadas, enfermas o en
trabajadores de la salud, por eso se les denominó MRSA adquirido en el hospital
(HA-MRSA); sin embargo, a finales de los años 90, ha existido una emergencia
de MRSA porque provoca infecciones en la comunidad, con una susceptibilidad
antimicrobiana diferente que las cepas hospitalarias. Estas cepas representan un
problema potencialmente muy serio, y los primeros reportes que llamaron la
21
atención sobre ellas fueron las muertes por neumonía necrotizante de 4 niños
sanos en Estados Unidos entre 1997 y 1999 14.
El primer reporte de una infección por CA-MRSA en Sudamérica fue hecho en
Brasil en el año 200515.
El Centro de Enfermedades Infecciosas estima que en EUA en el año 2005 se

desarrollaron 94,360 infecciones invasivas por Staphylococcus aureus
resistentes a la meticilina. Sin embargo, en los últimos años se ha observado un
incremento progresivo de infecciones producidas por cepas de Staphylococcus
aureus resistentes a la meticilina, con una sensibilidad a los antibióticos
diferente que afecta a la población sana sin haber tenido contacto previo con los
hospitales o clínicas de salud. Estas infecciones provocadas por Staphylococcus
aureus resistentes a la meticilina adquiridas en la comunidad pueden desarrollar
diferentes enfermedades, siendo las más comunes en la piel y tejidos blandos 6-8.
La infección por Staphylococcus aureus meticilino resistente (MSRA) es una de

los principales patologías que se presenta a nivel mundial, presentando
infecciones osteoarticulares, en piel, sistema gastrointestinal y respiratorio
principalmente. Tradicionalmente el Staphylococcus aureus meticilino resistente
(MRSA) ha sido considerado un patógeno nosocomial, los aislamientos de
MRSA nosocomiales se caracterizan por presentar resistencia a múltiples grupos
de antibióticos además de los betalactámicos. En la última década se han
publicado numerosos reportes de colonización e infección por SAMR en
individuos provenientes de la comunidad, incluso en personas sin contacto
hospitalario previo. De acuerdo con los resultados publicados. La incidencia
anual es de 28,4 Casos por cada 100.000 ingresos hospitalarios lo que supone
una tasa de Mortalidad anual de 4,9 casos por cada 100.000 personas 6-8.
La tasa de mortalidad de la infección invasiva por Staphylococcus aureus es alta,

variando entre el 19 y el 34%; en el último estudio EPINE, correspondiente al
año 2007, Staphylococcus aureus meticilino resistente SAMR con una
prevalencia del 10,6% ocupa el segundo lugar en orden de frecuencia entre los
22
microorganismos causales de infección nosocomial en los hospitales españoles,

por detrás de Escherichia coli (15,4%) y por delante de Pseudomonas
aeruginosa (10,3%).6-8.
Una serie de estudios transversales, 1996, 2002 y 2006 puso de manifiesto el

progresivo incremento de la prevalencia de aislados de SAMR que, en las
sucesivas revisiones pasó de un 10,5%, a un 11,2 Y 31,2 % Respectivamente,
Asimismo, un estudio de 8.312 cepas procedentes de infecciones observadas
entre 1993 y 2003 en 296 hospitales mostró un incremento de la resistencia
desde el 22 % en 1993 al 41% en 2006. La incidencia de bacteriemia nosocomial
por SAMRA fue de 1,45 episodios por 1.000 pacientes que ingresaron a
unidades de cuidados intensivos 6-8.
La mayoría de los estudios de seguimiento y descripción en nuestro medio

correspondientes a infecciones por SAMR se centran en infecciones del área de
cuidados intensivos y complicaciones respiratorias por Staphylococcus aureus,
así como su impacto en la salud pública de dichas infecciones. Sin embargo el
Staphylococcus aureus puede recurrir con frecuencia en localizaciones
osteoarticulares asociadas o no a material de osteosíntesis6-8.
En nuestro País, ya en 1996 en un estudio multicéntrico en Lima, se encontró 63

% de MRSA 16 .Estudios posteriores muestran niveles que varían de 50 a 90%17,
18
.
A finales de la década de 1950, aproximadamente el 85% de todas las cepas de

la bacteria Gram positiva Staphylococcus aureus eran resistentes a la penicilina
en USA y Francia. La síntesis y comercialización de las nuevas penicilinas,
Meticilina y Oxacilina, resistentes a la penicilinasa, fue el aldabonazo que, así se
creía, terminaría con el problema de las resistencias de las cepas de
Staphylococcus aureus 6-8.
Sabiendo que las incidencias de enfermedades infecciosas producidas por

Staphylococcus aureus en la Región Amazónica son frecuentes, nos propusimos
23
realizar el presente estudio de investigación esperando demostrar la actividad

antibacteriana del extracto alcohólico de hojas del casho , por tal motivo los
resultados que obtendremos nos permitirán contar con la información científica
validada, pudiendo utilizarse como una alternativa terapéutica, económica y
eficaz para el tratamiento de las enfermedades producidas por esta bacteria .
Esperamos que Nuestro trabajo sea el inicio o continuación a proyectos de

investigación para el descubrimiento de nuevos principios activos que hagan
frente al problema de enfermedades infecciosas causadas por estos
microorganismos.
II.- PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN
2.1.- FORMULACION DEL PROBLEMA
¿El extracto alcohólico de hojas del Anacardium occidentale Linn. (casho),

presentará actividad anti- Staphylococcus aureus, mediante el método de
difusión en disco (Kirby – Bauer)?
24
III.- OBJETIVOS
3.1 GENERAL:
Determinar la actividad anti- Staphylococcus aureus del extracto Alcohólico

de hojas de Anacardium occidentale Linn. (casho), mediante el método de
difusión en disco (Kirby - Bauer)
3.2 ESPECÍFICO:
 Obtener el extracto alcohólico de las hojas de Anacardium occidentale

Linn. (Casho) empleando el método de maceración en frio.
 Determinar el porcentaje de rendimiento del extracto alcohólico de las

hojas de Anacardium occidentale Linn. (Casho).
 Medir los diámetros de los halos de inhibición de la cepa Staphylococcus

aureus frente a diferentes concentraciones del extracto alcohólico de
hojas de Anacardium occidentale Linn. (Casho)
 Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del extracto

alcohólicos de las hojas de Anacardium occidentale Linn. (Casho) por el
método de macro dilución.
25
CAPITULO II_____________
26
I. MARCO TEÓRICO
En la actualidad existe una gran variedad de antibióticos de primera, segunda y

hasta tercera generación que ofrecen una amplia variedad de opciones para el
19
tratamiento de padecimientos causados por bacterias . Estos antibióticos están
perdiendo eficacia por el aumento progresivo de la resistencia microbiana, lo
20,21
que constituye un problema de primera línea para la salud pública global .
Esto se debe, principalmente al tratamiento farmacológico incompleto de los
pacientes, debido a la automedicación, y abandono de los tratamientos
respectivos.
A esto se suma, el uso irracional de antibióticos que contribuyen a la aparición

22
de cepas microbianas Multi-Droga-Resitentes (MDR) . Este problema, se
agudiza cada vez por el elevado costo de los fármacos, lo cual resulta inaccesible
para la población de bajo recursos económicos 23.
El conocimiento de los perfiles de susceptibilidad antimicrobiana se debe

orientar a la elaboración de esquemas de tratamiento más eficaces, políticas,
estrategias, programas y metodologías que proporcionen una adecuada vigilancia
en la elaboración y uso racional de antibióticos 24-28.
El Perú, posee una gran biodiversidad en cuanto a flora, siendo alrededor de 300
mil especies vegetales consideradas de uso medicinal y muchas de ellas han sido
empleadas por nuestros ancestros en el tratamiento de enfermedades producidas
29-32
por microorganismos pero, en cuanto a estudios farmacológicos y
principios activos de las plantas medicinales en la Amazonía peruana aún son
escasos, por lo que existe poca información científica que determine la
sensibilidad o resistencia a muchos microorganismos.
27
1.1 Anacardium occidentale L. “CASHO”
1.1.1 HISTORIA URL-1.
Su nombre original es ―caju‖ palabra que proviene de ―acajum‖, que

pertenece a un dialecto indígena de Brasil, se dice que en el año 1558 un
monje y naturalista francés llamado André Thevet, ya hace referencia en sus
relatos e ilustraciones a las plantas y su fruto. Cuando llegaron los
colonizadores portugueses les llamó mucho la atención las propiedades
nutricionales de sus nueces, se dice que los portugueses llevaron las
semillas a La India para 1568 y a partir de aquí fue introducido en el
sudoeste asiático, llegando a África en la segunda mitad del siglo XVI.
Las primeras importaciones de semillas desde la India fueron hechas por los
Estados Unidos en el año 1905. Entre este año y 1914 ocurren las
exportaciones de semillas a Francia e Inglaterra. Para 1923 la India
exportaba 45 toneladas de semillas hacia los Estados Unidos, en aquella
época, el viaje entre la India y Norteamérica tenía una duración aproximada
de 45 a 50 días.
Ya para 1941 la India crea un monopolio mundial gracias a la exportación

de este producto. A causa de la segunda guerra mundial las exportaciones
sufrieron una paralización en 1943, pero fue reanudada cuando el gobierno
norteamericano permitió el comercio de las nueces desde la India para
conseguir su aceite corrosivo ya que era considerado de interés bélico para
el país.
En 1956 se creó en Brasil un campo experimental del Instituto de

Investigación y Experimentación Agropecuaria del Nordeste con el fin de
experimentar con siembras de Merey a gran escala para su posterior estudio.
Para 1965 se realizó un trabajo de selección en el campo experimental lleno
de plantas para estudiar sus aspectos morfológicos, en 1976 se inició un
28
programa de desarrollo agronómico de la siembra de semillas de merey

injertando genes de una planta de Merey adulta en una planta joven para
obtener los frutos en un menor tiempo.
En los años 90 y comienzos del siglo XXI hubo un aumento en las

exportaciones de Merey, convirtiéndose en uno de los alimentos con mayor
demanda en el mundo.
1.1.2 ANTECEDENTES
Lima, Pastore y Lima (2000) estudiaron la actividad antimicrobiana de

los ácidos anacárdicos del aceite de la cáscara de la nuez del Anacardium
occidentale sobre los organismos de la cavidad bucal como el
Streptococcus mutans ATCC 25175, Staphylococcus aureus ATCC
12598, Candida albicans ATCC 10231 y Candida utilis. Los ácidos
anacárdicos obtenidos de los extractos etílicos, presentaron actividad
antibacteriana contra los microorganismos citados, pero una mayor
actividad inhibitoria ocurrió sobre la bacteria gran positiva Streptococcus
mutans, considerada predominante en la caries dental. En cuanto a la
susceptibilidad de la Candida albicans y Candida utilis hacia los ácidos
anacárdicos, fue determinada por el método de dilución en tubos de
ensayo. Después de la incubación respectiva, las fotografías demostraron
que el medio de cultivo continuó turbio, por tanto, se observó una débil
inhibición en el crecimiento de las levaduras 33.
Ferreira y Vieria (2005) evaluaron la actividad antifúngica, in vitro, del

extracto de la cáscara del Anacardium occidentale sobre las levaduras
Candida albicans, C. stellatoidea, C. krusei y C. tropicalis en estudio
comparativo con gluconato de clorhexidina al 0,12 %. Los ensayos
fueron realizados por la técnica de difusión en agar para la determinación
de concentración inhibitoria mínima (CIM). El extracto de la cáscara
presentó actividad potencial antifúngica sobre C. tropicalis y C.
stellatoidea, mientras que el gluconato de clorhexidina presentó actividad
29
antifúngica para todas las levaduras. Los valores de las CMIs para el
extracto de anacardo fueron 1:8 con halos de inhibición que varían de 12
a 18 mm y para la clorhexidina de 1:16 con halos de inhibición que
varían de 11 a 22 mm 34.
Fenner, Hemann, Auler y Kuze (2006) realizaron un levantamiento

bibliográfico etnobotánica sobre plantas utilizadas por la población
brasilera en tratamiento de signos y síntomas relacionados a infecciones
fúngicas. Fueron citadas 409 especies, distribuidas en 98 familias, con
mayor concentración en Fabaceae y Asteraceae. Para las diez especies
más citadas, se realizó una búsqueda relativa a estudios de actividad
antifúngica en base a datos MEDLINE-PubMed.
Solamente fueron encontrados estudios para Phytolacca americana L.,
Rosmarinus officinalis L., Mirabilis jalapa L., Schinus molle L. Entre las
diez especies más utilizadas, seis corresponden a especies nativas:
Anacardium occidentale L., Cecropia peltata L., Schinus molle L.,
Schinus terebinthinfolius Raddi, Stryphnodendron adstringens (Mart.)
Coville e Tabebuia heptaphylla 35.
Brasil, Abib, Kozlowski y Schwartz (2007) demostraron la eficacia de los

extractos de bardana, tanchagem y anacardo en proporción de 20, 30 y
100 % frente a microorganismos que originan endocarditis bacteriana.
Las muestras estudiadas incluían suspensiones de cocos Gram positivos
(Staphylococcus aureus; Enterococcus faecalis, Streptococcus sp y
Micrococcus luteus), bacilos Gram positivos (Bacillus cereus, Bacillus
subtilis; bacilos Gram negativos (Escherichia coli y Klebsiella
pneumoniae) y muestras de hongo Candida albicans, C. tropicalis y C.
guilliermondii en concentración de 10 células. Placas de agar Muller
Hinton fueron sembradas con las suspensiones de microorganismos y
discos de papel de filtro fueron embebidos con las sustancias a ser
estudiadas. Las placas fueron incubadas a 37ºC/48h y luego se determinó
el diámetro de los halos de inhibición de crecimiento microbiano. El
producto que presentó mejor acción antimicrobiana fue el propóleo en las
30
diferentes concentraciones, con acción frente a los cocos Gram positivos,

bacilos Gram positivos y negativos. Dentro de las especies de Candida,
C. tropicalis fue más sensible a bardana y C. albicans fue la más
resistente. La eficacia de productos naturales en la profilaxis
direccionada contra los microorganismos causantes de endocarditis
bacteriana in vitro fue baja, entretanto, se verificó que entre ellos el
propóleo fue el más efectivo 36.
Rajesh y col. (2009) intentó identificar los fitoquímicos presentes en el

CNSL (del inglés Cashew Nut Shell Liquid) con ayuda de un solvente
para el extracto. La actividad antifúngica de acetona, etanol y acetato de
etilo de los extractos de Aspergillus flavus, Aspergillus fumigatus,
Aspergillus niger, Curvalaria sp. y Fusarium sp. fueron estudiados. En
distinto rango del espectro antimicótico observados se comparó con los
fitoquímicos presentes. Se concluyó que los extractos de etanol poseían
un amplio espectro y mayor porcentaje de actividad antifúngica 37
Pino y Stashenko (2009) evaluaron in vitro los extractos totales de 27

plantas usadas contra infecciones, mediante la técnica de dilución en
agar, para convalidar la actividad de diferentes dosis frente a
Staphylococcus aureus, como control positivo se usó sulfato de
estreptomicina 10 μg/mL y como control negativo, agar Mueller Hinton;
las lecturas se realizaron luego de 24 horas. Las pruebas se realizaron en
tres tratamientos para cada extracto probado, por triplicado cada uno. Los
resultados mostraron 52 % (14) de las muestras con inhibición total
frente a S.aureus.38
31
1.1.3 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
Según el sistema de clasificación de Adolf Engler, modificado por Hans

Melchior (1964) 39, su clasificación taxonómica es la siguiente:
REINO : PLANTAE
DIVISIÓN : ANGIOSPERMAE
SUB DIVISION : MAGNOLIOPHYTA
CLASE : MAGNOLIOPSIDA
ORDEN : SAPINDALES
FAMILIA : ANACARDIACEAE
GÉNERO : Anacardium
ESPECIE : occidentale
NOMBRE CIENTIFICO : Anacardium occidentale 40, 41
NOMBRES COMUNES : Casho (Perú), marañón, cashew
(Colombia), acajuiba, acajaiba, marañón (Brasil), merey (llanos de
Colombia y Venezuela), cashew nut (islas de las Antillas), cashew apple
(Hawai), Cajueiro, anacardo, cashu, caju, Acajou, acaju, alcayoiba,
anacarde, anacardier, cacajuil, Cajou, gajus, jocote, Acajou d'Noix,
pomme Cajou (Haití)42, 43 .
1.1.4 DESCRIPCIÓN BOTÁNICA43.
Anacardo es un árbol multipropósito de la Amazonía que crece hasta 15

m. de alto. Tiene un tronco espeso y tortuoso con ramas tan serpenteantes
que con frecuencia llegan al suelo. Actualmente todos sus componentes
han sido utilizados en diferentes áreas, desde la elaboración de dulces y
cosméticos, hasta la creación de medicamentos para tratar diferentes
enfermedades.
Estos árboles, a menudo se encuentran cada vez más salvaje en los suelos
arenosos en las llanuras centrales de Brasil y se cultivan en muchas
partes de la selva amazónica. La vida de un árbol de casho es de
32
aproximadamente unos 30 años y produce frutos desde el tercer año de

vida.
Figura N°01: Árbol de Anacardium occidentale L. (casho),

Referencia: autores
Tronco: Posee un tronco corto, tortuoso y con ramificación dispersa, así

como una copa amplia en edad productiva. Su corteza, de color gris a
pardo claro, contiene una savia lechosa.
Figura N°02: Tronco de Anacardium occidentale L. (casho),

Referencia: autores
Hojas: alternas, de pecíolo corto, de forma ovada u ovada-oblonga con

base en cuña u obtusa y redondeada o ensanchada; algunas veces el ápice
es muy obtuso, entero, coriáceo, pinatinervado con venas transparentes,
de color verde oscuro o verde amarillento y brillante en el haz, verde
brillante y opaco en el envés, liso en ambas superficies, de 7-20 cm. de
33
largo y 4-12 cm. de ancho. Los pecíolos son aplanados con la base un
tanto dilatada y generalmente de color café y de 1-1,5 cm. de largo.
Figura N°03: Hojas de Anacardium occidentale L. (casho), Referencia: autores
Flores: se presentan en corimbos en un lado en las ramas de una

terminal; son erectas, corimbiformes, anchas, fragantes, con flores
bisexuales y masculinas presentándose intermezcladas; el panículo es de
15-85 cm. de largo. Los 5 sépalos son lanceolados en forma angosta,
agudos, de color verde intenso y densamente pubescentes externamente,
de color verde-amarillento por dentro y de 0,3-0,4 cm. de largo.
Figura N°04: Flores de Anacardium occidentale L. (casho), Referencia:

Autores
34
Pedúnculo o Pseudo-Fruto: Es la parte de la planta que se consume

como fruta fresca. Se trata de un pedúnculo engrosado, con forma de
pera, que mide de 4 a 8 cm. de largo, y posee una pulpa carnosa y jugosa.
En su extremo se ubica el fruto verdadero con forma de nuez.
URL-2
Figura N° 05: Pseudo-Fruto del Anacardium occidentale L. (Casho) .
Fruto: Son nueces profundamente reniformes, de color verde-grisáceo,

de brillo tenue, de 2,5-3 cm. de largo y 2-2,5 cm. de ancho URL-2.

Figura N° 06: Se muestra el fruto del Anacardium occidentale L. (Casho)
35
1.1.5 COMPOSICIÓN NUTRICIONAL:
1.1.5.1 Pseudo fruto:

Tiene un alto contenido de proteína y puede llegar a tener hasta cinco
veces más el contenido de vitamina C que puede tener un cítrico. Además
es muy perecedero, se deteriora en menos de 24 horas después de
recolectado, lo atacan principalmente hongos y levaduras. Se ha
determinado que se puede almacenar hasta por cinco semanas a 0-1,6 ºC,
y a una humedad relativa de 85 % a 90 %. El jugo es astringente y ácido
pues tiene un alto contenido, 35 % de taninos y un 3% de una sustancia
44
grasosa .
Composición Nutricional de 100 gramos de parte comestible (pulpa de

pseudo fruto) contienen:
Tabla N° 01: Composición Nutricional del pseudo fruto
COMPUESTO CANTIDAD
Calorías 45 g
Agua 84.4 – 88.7 g
Carbohidratos 9.08 – 9.75 g
Grasas 0.05 – 0.50 g
Proteínas 0.101 – 0.162 g
Fibra 0.4 – 1.0 g
Cenizas 0.19 – 0.34 g
Calcio 0.9 – 5.4 mg
Fósforo 6.1 – 21.4 mg
Hierro 0.19 – 0.71 mg
Tiamina 0.023 – 0.03 mg
Riboflavina 0.13 – 0.4 mg
Niacina 0.13 – 0539 mg
Ácido ascórbico 146.6 – 372 mg
45
Fuente: Fruits of warm climates
36
1.1.5.2 Nuez:
La nuez del anacardo constituye más o menos un tercio del peso del fruto
y su análisis indica un contenido de 55-60 % de aceite, 15-20 % de
proteínas y el 5 % de carbohidratos (almidón y azúcar). El tejido interno
de la concha que rodea la semilla contiene una savia muy aceitosa,
sumamente cáustica, de color café oscuro y sabor picante que contiene un
principio tóxico denominado "Cardol"44.
1.1.5.3 Semilla de Marañón.
Tabla N° 02: Composición de la Semilla del pseudo fruto
COMPUESTO CANTIDAD
Almendra 20-25
Cutícula 2-2.5
Cáscara o concha 18-23
Líquido de la cáscara 45-50
46
Fuente: Ficha técnica: industrialización del marañón .
1.1.5.4 Valor Nutricional Porcentual De La Nuez Y De Los Ácidos

Grasos Del Aceite De Marañón.
Tabla N° 03: Valor Nutricional porcentual de la Nuez y de los ácidos grasos

del aceite del marañon.
COMPUESTO CANTIDAD
SEMILLA
Agua 5.0 g
Aceite 50.0 – 60.0 g
Proteínas 18.0 – 20 g
ACEITE
Palmítico 11.7 g
Oleico 74.6 g
Linoléico 6.9 g
46
Fuente: Ficha técnica: industrialización del marañón .
37
1.1.6 COMPOSICION FITOQUÍMICA
La familia Anacardiaceae es conocida por sus fenoles y sus ácidos

fenólicos que causan serias irritaciones en la piel: anacardol, ácido
anacárdico y sus derivados; también es común en la familia la presencia
de terpenos, politerpenos y taninos. En la especie A. occidentale los
principios responsables de las propiedades irritativas del aceite de la
corteza del anacardo son primariamente el cardol y el ácido anacárdico
46
.
En general se considera que los principios activos de esta especie son,

por una parte, un flavonoide, la catechina, que es un depresor del sistema
nevioso central, y por otra, los taninos que actúan como antiinflamatorios
y analgésicos. Las hojas contienen ácidos fenólicos; hasta un 3 % de
aceite esencial; un 10 % de minerales; heterósidos derivados de la
luteolina y apigenina; tanino y principio amargo. El aceite esencial, que
es incoloro y de sabor picante, tiene mentol, mentona, acetato de mentilo,
alfapineno, felandreno, cardineno, timol, carvacrol, alcohol amílico,
terpineno, alcohol isoamílico, cineol, mentofurano, ácido isovalérico,
isovalerianato de metilo y otros 46.
Las hojas de Anacardium occidentale L. (casho) presentan el tamizaje

fitoquímico del extracto fluido y de la tintura al 20 % presenta una gran
variedad de metabolitos secundarios, en especial, cumarinas; los demás
metabolitos se identificaron en menores proporciones, como saponinas,
flavonoides, azúcares reductores, aminoácidos libres,
triterpenos/esteroides, fenoles/taninos 2, 3, 47.
38
Tabla N° 04. Tamizaje Fitoquímico del extracto fluido y de la tintura al 20 % de hojas

de Anacardium occidentale L.
Tabla N° 05. Tamizaje Fitoquímico del extracto n-hexánico, clorofórmico y acetato de

etilo obtenidos de la tintura al 20% de hojas de Anacardium occidentale L.
En el tamizaje fitoquímico (ver tabla N°05) se observaron cumarinas y

azúcares reductores (+++) en los extractos clorofórmico y acetato de
etilo, se debe destacar que las cumarinas no se encontraron en el extracto
n-hexánico 2, 47.
39
Tabla N° 06. Composición Química de la nuez de Anacardium occidentale L., (casho)
Composición Química
Ácido anacárdico 82 – 83.06 %
Anacardol o
1.6 – 1.77 %
Cardanol
2 Metil-Cardol 2.6 – 2.76 %
Cardol 13.8 – 14.59 %
Figura N° 07. Estructuras químicas del Ácido Anacárdico, cardanol, cardol y 2-metil-
cardol
40
Además el ácido anacárdico es el mayor componente fenólico que está

presente en el los líquidos de la cascara de la nuez del casho
(Anacardium Occidentale L.), representa aproximadamente el 80 al 85 %
48, 49
, además tiene derivados como cardanol, cardol y metilcardol (ver
figura N°07)50.
El aceite de la nuez del casho contiene α-tocoferol, γ-tocoferol y δ-

tocoferol, además de fitosteroles como stosterol, campesterol,
stigmasterol y fitostanoles como sitostanol, campestanol y Δ5-avenasterol
(ver Figura N° 08)
El fruto del casho es conocido por sus componentes aromáticos volátiles,

Deborah et al (2003) identificó 76 componentes volátiles del jugo del
51
fruto del casho, predominando esteres (42%), además de aldehídos .
52
Resultados similares encontrados por Maciel et al (1986) y Bicalho et
53
al (2000) . Los mayores componentes fueron etil 3-metil butanoato
(16.70%), trans-2-hexenal (14.27%), metil 3-metil butanoato (9.72%), 2-
metil-2-pentenal (9.27%), etil butanoato (8.47%), hexanal (7.68%), 2-
butoxi-etanol (3.35%), 3-metil-1-butanol (3.23%) y 2-metil ácido
butanóico (3.01%) 51.
Figura N° 08. Estructuras químicas de los fitosteroles y fitostanoles identificados en el

aceite de la nuez del Anacardium occidentale L. (casho).
41
Las hojas han dado respuestas positivas a las pruebas que determinan la
54, 55
presencia de alcaloides . Además las hojas contienen como caroteno
β-cryptoxantina 56.
1.1.7 ESTUDIOS FARMACOLÓGICOS Y TOXICOLÓGICOS
Además es bien conocido que la especies de Anacardium son conocidos

por sus efectos antiinflamatorios y astringentes, actividad contra células
cancerígenas y efectos beneficial para ulceras gastrointestinales 57-59.
Se ha reportado que el ácido anacárdico puede tener actividad

antihelmíntica; igualmente se ha descrito la presencia de varias toxinas.
Se han realizado varias investigaciones experimentales con esta droga
vegetal para probar algunos efectos; así se han reportado resultados sobre
las propiedades hipoglicemiantes y antihipertensivas en ratas. El extracto
exanoico de la cáscara de la nuez de A. occidentale fue efectivo en
pruebas realizadas como moluscicida contra babosas (Biomphalaria
glabrata). También se ha probado la actividad antiinflamatoria de la
epicatechina aislada de A. occidentale en comparación con la
fenilbutazona, con resultados positivos. Algunos componentes del ácido
anacárdico demostraron una moderada toxicidad. De A. occidentale se ha
extraído un aceite del cual se ha separado la sal de sodio del ácido
anacárdico; este aceite mata rápidamente las formas vegetativas de
bacilos anaeróbicos, por ejemplo Proteus. El anacardato de sodio
destruye in vitro los venenos de serpientes (Crotalus y Bothrops atrox),
así como también las toxinas tetánica y diftérica. Los resultados de las
pruebas in vitro e in vivo en animales experimentales, validan algunos
usos populares de esta planta. Se carece de información sobre estudios
clínicos en humanos46.
El ácido anacárdico, aislado por Waaerman y Dawson (1948) 60, se está

utilizando como materia prima para la industria farmacéutica como
coadyuvante para los efectos colaterales presentado por el ácido acetil
42
61
salicílico ; La estructura peculiar de la lactona macrocíclica de 12
miembros (Lasiodiplodina) (ver figura N°09) estimuló al estudio de la
síntesis a partir de su precursor del ácido anacárdico, por sus propiedades
62, 63
hormonal anabolizante en animales . Además la Zaeralona tiene
64
como precursor al ácido anacárdico , cuyo potencial biológico es su
actividad Anti leucémica 65(ver figura N°09).
Zaeralenona Lasiodiplodina
Figura N° 09. Estructuras químicas de la Zaeralona y Lasiodiplodina.
Kubo (1986, 1991, 1993) han observado que algunos de los componentes
extraídos de la fruta del casho poseían una actividad citotóxico, con
potencial anticancerígena. Sin embargo, la mayor atención se dirige hacia
el aceite de nuez 58, 66-69, este aceite representa el 25 % del peso total de la
nuez (de 5 a 6 gr en promedio) 70.
El Cardol (Alquil-5, 2,3-difenoles), ha demostrado ser uno de los

componentes más activos, posee actividad antibacteriana principalmente
contra las bacterias Gram +, en particular, la cadenas largas permiten el
logro de un valor óptimo de la relación entre el carácter hidrófilo e
hidrófobo, que es necesaria para una alteración eficaz de la
permeabilidad de la célula bacteriana.
El Cardol también posee actividad inhibitoria de la actividad de la

tirosinasa. Esta capacidad puede ser explotada para controlar la
proliferación de insectos y luego como conservante de alimentos 71.
43
Figura N° 10. Patrón clásico de la melanogénesis según Raper-Mason
El Cardol, de manera similar a algunos derivados de la cumarina, han

demostrado ser uno de los componentes más activos como inhibidores de
la tirosinasa, la enzima clave en el proceso de melanogénesis, sin
embargo, debido a su notable poder irritante no se puede utilizar como
69 (
tal, teniendo en cuenta sí misma una gran actividad ver figura N°10).
En particular, su actividad inhibidora se expresa en el bloqueo de la
conversión oxidativa de dopa a dopaquinona (ver figura N°11)
Figura N° 11. Bloqueo de la conversión aeróbica de tirosina
44
Laurens et al (1997) demostró las propiedades larvicida del aceite de la

nuez del casho y calculo la CL50 en larvas de Aedes aegypti con 12.6 ppm
72
.
Farias et al (2009) realizo la toxicidad del aceite de la nuez del casho en

los estadios inmaduros de Aedes Aegypti, encontrando alta efectividad
contra huevos, larvas y pupula 73. No hay publicaciones que evidencie el
efecto larvicida del aceite de la nuez del casho sobre estadios inmaduros
74
del mosquito anopheline . El látex del casho contiene
heteropolisacáridos complejos identificados como: -D-galactosa (72%),
-D-glucosa (14%), arabinosa (4.6%), ramnosa (3.2%) y ácido
glucurónico (4.7%) 75.
Se ha reportado que el ácido anacárdico puede tener actividad

antihelmíntica; igualmente se ha descrito la presencia de varias toxinas.
En la especie A. occidentale los principios responsables de las
propiedades irritativas del aceite de la corteza del anacardo son
primariamente el cardol y el ácido anacárdico 76.
1.1.8 USO TRADICIONAL
Se cultiva como árbol ornamental y frutal. Su fruto se consume tostado y

el pedicelo maduro se consume fresco. En Costa Rica también se obtiene
vinagre, vino y conservas del casho 77. Entre sus propiedades medicinales
destaca el uso del jugo como antidiarreico, el aceite de la semilla para
eliminar las verrugas, la decocción de la corteza como antidiabético 78, la
79
goma exudada de la corteza para retener lectinas y los retoños de las
hojas para tratar enfermedades renales 80.
El ácido anacárdico, el cardanol y el cardol son componentes estudiados
del líquido de la cáscara de la semilla del casho, con los cuales se han
obtenido películas por polimerización 81.
45
Las globulinas de la nuez del casho disminuye el colesterol sanguíneo 82.

Al igual que en el maní, las nueces y el ajonjolí, también se ha detectado
83 84
la presencia de aflatoxinas y de alergenos proteicos , en la nuez del
casho.
Por otro lado, Los extractos de polen se han vinculado con alergias
85
asmáticas durante la floración del casho en Brasil y se conocen casos
86
de dermatitis por contacto . La aplicación de derivados apícolas del
casho en apiterapia, luce prometedora porque tiene numerosas
propiedades terapéuticas por la riqueza en compuestos fenólicos; sin
embargo podría ser controversial por las evidencias de alergenos recién
mencionadas.
1.1.9 DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
Es originaria de la zona tropical de Brasil. El género tiene un centro

primario de diversidad en la Amazonia y uno secundario en Plan Alto,
Brasil. Se extiende por todos los trópicos del Nuevo y del Viejo Mundo.
Desde el sur de México hasta Perú y Brasil, de Cuba a Trinidad. Se le
cultiva en la India y Malasia. Su límite geográfico (zonas cultivadas) va
de los 27º N a los 28º Sur 21,23-27, 78, 87.
1.2 MÉTODO DE SUSCEPTIBILIDAD - DISCO DE DIFUSIÓN (Kirby-

Bauer)
1.2.1.- INTRODUCCIÓN
Se han desarrollado muchos métodos específicamente para determinar la

88-91
actividad antibacteriana de extracto vegetales . El beneficio de basar
los nuevos métodos en los ya existentes como los ensayos
convencionales del ―National Committe for Clinical and Laboratory
Standards‖ (NCCLS), es que los nuevos ensayos tenderán a ser más
89, 90
fácilmente aceptados por cuerpos regulatorios . El NCCLS es un
46
subcomité desarrollado por el ―Clinical and Laboratory Standards

Institute‖ (CLSI), un centro de colaboración de la Organización Mundial
de la Salud (OMS ó WHO por sus siglas en inglés) cuya función es
estandarizar y acreditar las pruebas clínicas y que fue creado en 1967.
El NCCLS se encarga de determinar y en su caso mejorar, la calidad de

los resultados de laboratorio identificando la necesidad, prioridad y
manejo del desarrollo de los protocolos y guías en los laboratorios
clínicos y manufactureros para que estos puedan caracterizar y mejorar
los sistemas analíticos. Así mismo, cubre otras funciones: mejorar y
estandarizar los procedimientos de control de calidad y la interpretación
de los resultados de prueba en los laboratorios clínicos microbiológicos;
establecer un criterio de proceso para los medios de cultivo,
procedimientos automatizados o métodos de prueba en la microbiología
clínica; y mejorar el manejo de los servicios clínicos y de laboratorio en
bien del paciente. Además, los métodos del NCCLS se han diseñado
específicamente para asegurar la actividad de los componentes
antimicrobianos, y los factores que afecten la reproducibilidad se han
92
investigado exhaustivamente . Aun cuando los métodos del NCCLS se
han desarrollado para agentes antimicrobianos convencionales, se pueden
hacer modificaciones menores para que estos métodos puedan ser usados
89
para probar la efectividad de aceites esenciales y extractos vegetales .
La técnica actualmente utilizada para la determinación de la sensibilidad
a los antimicrobianos es el producto de importantes esfuerzos
internacionales desde hace más de dos décadas enfocados a normatizar el
método.
El comité de expertos de la OMS y grupos colaborativos internacionales

dirigidos por Ericsson y Sherris sugirieron recomendaciones que fueron
seguidas por la mayor parte de los países europeos. Sin embargo, la falta
de un acuerdo general sobre los puntos de corte para la interpretación de
estas pruebas continúa siendo un tema de importantes esfuerzos
internacionales. Europa está dividida en varias regiones de influencia con
47
diferentes sistemas de sensibilidad antimicrobiana: Grupo Sueco de

Referencia en Antimicrobianos, el Sistema DIN, el de los países bajos, la
Sociedad Británica de Antimicrobianos, la Sociedad Francesa de
Microbiología y el Comité Americano de Estandarización de
Laboratorios Clínicos (NCCLS). En nuestro país y en la mayoría de los
países latinoamericanos se siguen las pautas del NCCLS con algunas
modificaciones.
1.2.2.- PRINCIPIO DEL MÉTODO
El principio del método involucra el uso de una cantidad constante de

antimicrobianos en un reservorio (discos de papel) aplicado sobre la
superficie del agar en el cual se ha cultivado el microorganismo en
cuestión. Se formará así por difusión, un gradiente de concentración del
antimicrobiano y la sensibilidad del microorganismo estará indicada por
el tamaño de la zona de inhibición del crecimiento alrededor del
reservorio.
El diámetro obtenido dependerá no solo de la sensibilidad del

microorganismo y la carga del disco, sino también del espesor de la capa
del agar, su pH y composición, de la capacidad de difusión de la droga en
ese medio, la temperatura, la velocidad de duplicación bacteriana, el
tamaño y fase de crecimiento del inóculo. Para que los resultados sean
confiables los procedimientos deberán ser controlados y estandarizados
cuidadosamente. El método recomendado por la NCCLS (Sub-comittee
on Antimicrobial Susceptibility Testing) se basa en los estudios de Bauer
93
y colaboradores . Este es el método descrito de manera más completa
para el cual se han desarrollado tablas de interpretación que están
respaldadas por datos clínicos y de laboratorio. El único método
alternativo que ha sido estudiado adecuadamente y que demostró datos
comparables de los diámetros de las zonas de inhibición, con precisión
48
similar y correlación satisfactoria con la CMI, es la modificación de

doble capa de Barry, García y Thrupp 93, 94.
Este método es una alternativa aceptable para la normalización del
inóculo en las pruebas de sensibilidad de aislamientos de gérmenes
patógenos de rápido crecimiento, como S. aureus, Enterobacterias y P.
aeruginosa. El método de doble capa en agar no es aplicable a las
pruebas con otros microorganismos tales como Streptococcus spp.,
Haemophilus spp., etc.
Las pruebas por cualquiera de los dos métodos pueden interpretarse con
las mismas tablas de medida de los halos de inhibición si los resultados
de las pruebas con las cepas controles se encuentran dentro de los rangos
esperados.
1.2.3.- MACRODILUCIÓN EN CALDO
Las pruebas de dilución han sido utilizadas durante años. Los

procedimientos iniciales eran realizados en tubos de ensayo grandes (13
por 100 mm) con volúmenes de caldo de por lo menos 1 ml. Este método
fue estandarizado en la década de los años 70 por el Estudio Cooperativo
89, 93, 94
Internacional y luego la NCCLS publicó un estándar del método .
Este método es llamado macrodilución en caldo. A partir de los años 60
se comenzaron a utilizar dispositivos serológicos para dispensar y diluir.
Esta miniaturización simple de la técnica se conoció como microdilución
en caldo; su fundamento consiste en exponer a las cepas a estudiar a
diferentes concentraciones de antimicrobianos, en diluciones a la mitad y
observar el crecimiento de los microorganismos para luego definir la
CMI
49
1.2.4.- CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA (CMI)
La concentración mínima inhibitoria de un agente antimicrobiano es

aquella que inhibe la multiplicación y producción de un crecimiento
visible en una cepa bacteriana dada en el sistema de prueba. Se determina
incubando una cantidad conocida de bacterias en presencia de diluciones
definidas del agente antimicrobiano, posteriormente se hacen los conteos
correspondientes para determinarla.
Ésta es probablemente la prueba de determinación de CMI más popular.
Utilizando los criterios del NCCLS, los resultados son interpretados
como microorganismo sensible (tratable), intermedio o resistente
(intratable) 94.
Figura N° 12. Relación entre los puntos de quiebre (break point) y el halo de inhibición
en la técnica de antibiograma
Figura N° 13. Determinación de la Concentración inhibitoria mínima (CIM) y de la

Concentración Bactericida Mínima (CBM).
50
1.2.5.- LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LA CMI
La CMI corresponde a la mínima concentración de antibiótico en donde

no se observa desarrollo (turbidez). La CMI se expresa en μg/ml. Luego
se debe recurrir, teniendo en cuenta el valor de CMI obtenido para esa
cepa, a las tablas para definir según los valores de CMI que en ellas
aparecen si las cepas en estudio son sensibles o resistentes a un
determinado antibiótico 95.
Figura N° 14. Determinación e interpretación de la Concentración Mínima Inhibitoria

(CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CBM)
51
1.3 PATRON DE TURBIDEZ
Uno de los primeros usos de la turbidez para el cálculo de poblaciones

bacterianas fue en la preparación de vacunas96. En 1907 McFarland desarrollo
una serie de soluciones de sulfato de bario para calcular aproximadamente el
número de bacterias en soluciones de turbidez equivalente, según lo determinado
por los recuentos en placas 97,98.
Los estándares de turbidez de McFarland se usan como referencia en

suspensiones bacteriológicas para saber el número de bacterias por mililitro, o
más bien en UFC según una escala que va de 0.5 a 10(Ver tabla N°07). Estos
estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido
99
sulfúrico al 1% en volúmenes específicos , para asegurar la densidad correcta
se puede controlar usando espectrofotómetros100.
Los estándares pueden ser visualmente comparados con suspensiones de
bacterias en salina estéril o en caldos. Si la suspensión es demasiado turbia,
puede añadirse diluyente, y si no es lo suficiente turbia, se puede agregar más
bacterias. La ventaja es que no es necesario incubar ni usar equipo especial para
101
estimar el número de bacterias . La desventaja de este método es que no
discrimina a las bacterias vivas de las muertas en la solución, por lo que se
puede sobreestimar la población de bacterias.
Casos específicos en los que se usa es en el de antibiogramas o pruebas de
sensibilidad, donde es necesario para estandarizar el método y se eviten falsos
positivos o negativos.
52
Tabla N°07: Escala de McFarland de 0.5 a 10
53
1.4 Staphylococcus
1.4.1.- INTRODUCCION
Staphylococcus es un colonizador de la piel y mucosas de prácticamente

todos los animales. En los seres humanos tiene especial predilección por las
fosas nasales, especialmente en adultos, pudiendo demostrarse hasta en el
40%, tanto en población comunitaria como hospitalaria. Otra característica
es su facilidad para producir infección intracelular lo que explicaría su
tendencia a producir infecciones tardías, por lo que siempre deben
considerarse en los casos de infección tardía de material de osteosíntesis o
en las osteomielitis crónicas, obligando, por su difícil erradicación, a
tratamientos más prolongados que generalmente precisan de la adición de
rifampicina 102.
Las especies del genero Staphylococcus son cocos gram positivos que
miden Entre 0,5 y 1,5 µm de diámetro y que pueden aparecer formando
racimos Irregulares o aparecer de manera única, en parejas, tetradas o
cadenas cortas. El nombre actual data de 1883 cuando Ogston utilizo por
primera vez el nombre de Staphylococcus, que deriva del griego staphylé
que significa racimo de uvas. Son microorganismos no móviles, no
formadores de esporas y generalmente sin capsula con reacción catalasa
103, 104,105
positiva. Muchas especies son anaerobios facultativos. .
1.4.2.- ESPECIES DE STAPHYLOCOCCUS
Existen 33 especies de Staphylococcus diferentes. De las 33 especies sólo

tres de ellas se reconocen como productoras de enfermedades en los seres
humanos URL-3:
 Staphylococcus aureus
 Staphylococcus epidermidis
 Staphylococcus saprophyticus
54
1.4.2.1 Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus es uno de los patógenos más importantes que causa

desde infecciones superficiales de la piel hasta severas infecciones asociadas
106
con una alta mortalidad . El nicho ecológico principal del S. aureus en
humanos lo constituyen las fosas nasales anteriores, seguido de la orofaringe
y la región perineal, inguinal, axilar y rectal; reconocida como una fuente
potencial de infección y factor de riesgo elevado para subsecuentes
infecciones invasivas 107-110.
Pocos años después de la introducción de la penicilina en 1942, aparecieron

106
cepas de Staphylococcus aureus resistentes a la misma . En 1960 se
introduce la meticilina, antibiótico semisintético resistente a penicilinasas, y
luego de solo dos años fue descrito el primer aislamiento de Staphylococcus
aureus Meticilino Resistentes (SARM) 111.
En la década del noventa las infecciones por SARM se extienden a todos los
hospitales del mundo112.
1.4.2.2 DEFINICIÓN TAXONÓMICA.
Taxonomía
Reino: Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Staphylococcaceae
Género: Staphylococcus
Especie: aureus113
55
1.4.2.3 CARACTERISTICAS MICROBIOLÓGICAS
Es Gram positivo, aunque las cepas viejas o los microorganismos

fagocitados se tiñen como Gram negativo. Tiene forma de coco y
puede aparecer en parejas, en cadenas o en racimos. Su tamaño
oscila entre 0,8 a 1,5 micras de diámetro, es inmóvil y algunas
cepas producen una cápsula externa mucoide que aumenta su
capacidad para producir infección.
Figura N° 15. Características microbiológicas de Staphylococcus

aureus, Fuente; CDC Public Health Library (PHIL) 114.
1.4.2.4 METABOLISMO
En relación con su metabolismo, es anaerobio facultativo,

coagulasa positivo, catalasa positivo y oxidasa negativo114.
Staphylococcus aureus, especie coagulasa positiva, es un

reconocido patógeno humano, siendo agente etiológico de un
amplio espectro de infecciones de origen comunitario y
nosocomial. Abarca componentes de pared celular y una gran
variedad de exoproteínas que contribuyen en su habilidad para
colonizar y causar enfermedad en mamíferos. Casi todas las cepas
producen un grupo de enzimas y citotoxinas que incluyen 4
hemolisinas (alfa, beta, gamma y delta) nucleasas, proteasas,
lipasas, hialuronidasas y colagenasa. La principal función de estas
56
proteínas sería convertir tejidos del huésped en nutrientes

requeridos para el desarrollo bacteriano115, 116.
1.4.2.5 CARACTERISTICA GENETICAS
El genoma de S. aureus es circular, compuesto de

aproximadamente 2.8 kb, con un contenido bajo de G-C (33%),
además su genoma contiene 2,600 marcos de lectura abierta
representando un 84.5% de su genoma117.
La comparación del genoma indica que 50% de las proteínas
codificadas en el cromosoma de S. aureus presentan gran
homología con B. subtilis, lo que sugiere que ambos organismos
tuvieron un ancestro común y divergieron más tarde. La mayoría
de los genes homólogos son un grupo de genes conocidos como
housekeeping que son necesarios para el crecimiento y división de
la bacteria. Una característica sobresaliente del genoma de S.
aureus es la presencia de gran número de elementos móviles
(plásmidos, secuencias de inserción y transposones), que
contienen factores de virulencia y resistencia a diversos
antimicrobianos. El estudio de estos elementos ha permitido
explicar los mecanismos de conjugación, transformación y
transducción del material genético a través de plásmidos
móviles118.
Los transposones pueden transportar uno o más marcadores de

resistencia antibiótica. Se conocen varios tipos de transposones
como el de la resistencia a eritromicina Tn551 codificado por el
gen ermB. El transposón Tn 4001 codifica para la resistencia a
kanamicina, tobromicina y gentamicina. El transposón Tn 4003
codifica para la resistencia a trimetoprim. El transposón Tn 552
contiene el operon bla que le confiere resistencia a la penicilina, a
través de la producción de penicilinasa. El transposón Tn 554 se
encuentra en el cromosoma de S. aureus resistente a meticilina
57
(MRSA), el cual se ha utilizado para el seguimiento de clonas

epidémicas de MRSA119-122.
El análisis del genoma de S. aureus confirmó que contiene varias

islas de patogenicidad (SaPIs), las cuales varían en tamaño;
además, reveló características adicionales como es el contenido de
genes de virulencia y de resistencia123,124.
1.4.2.6 FISIOPATOLOGÍA
Bajo condiciones normales, Staphylococcus aureus no produce

infecciones, esto sólo ocurre en pacientes, inmunocomprometidos,
es decir, la persistencia de la bacteria en el huésped con lleva a
riesgos de enfermedad125.
El mecanismo de defensa fundamental del huésped es el
leucocito. La Expresión de moléculas de adhesión en las células
endoteliales facilita la llegada de leucocitos al lugar de la
infección, con liberación de diferentes citoquinas en el torrente
sanguíneo que posteriormente migran a los tejidos inflamados.
Figura N° 16.Mecanismo de defensa del huésped frente a Staphylococcus aureus.
58
Las células endoteliales infectadas producen, además, moléculas de

adhesión tipo 1 (CD54), moléculas de adhesión vascular tipo 1 (CD106) y
moléculas de clase I del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC)
126
.
La sintomatología durante la infección por Staphylococcus aureus es

ocasionada por las toxinas pirógenas consideradas como super antígenos,
que se unen a regiones invariables del complejo mayor de
histocompatibilidad (MHC) clase II, moléculas presentadoras del antígeno y
a los receptores de las células de linfocitos T. Esto conduce a la liberación
de citocinas por ambas células causando daño en los tejidos y liberación de
la toxina del síndrome de choque tóxico, dando como resultado hipotensión
y liberación de gran cantidad de citocinas125.
Aunque in vitro los anticuerpos han demostrado facilitar la fagocitosis su

papel in vivo es más dudoso. De hecho los títulos de anticuerpos frente a
Staphylococcus aureus no se correlacionan con protección frente a la
infección excepto en el caso del síndrome del shock tóxico estafilocócico103,
104
.
Entre las enzimas encargadas de proteger a S. aureus destaca la catalasa que
se encarga de desdoblar el peróxido de hidrogeno, toxico para el
microorganismo, en agua y oxigeno, la coagulasa convierte el fibrinógeno
en fibrina, lo que produciría una capa de fibrina en el absceso estafilocócico
protegiendo de la fagocitosis. La hialuronidasa hidroliza el ácido
hialuronico de la matriz del tejido conectivo y la penicilinasa hidroliza el
anillo β-lactamico, inactivando la penicilina. La toxina mejor caracterizada
es la leucocidina de Panton-Valentine (PVL) descrita en 1932 por Panton y
Valentine se englobaría dentro de los homólogos de las Γ- hemolisinas.
Sintetizada por un 2-3% de las cepas, induce la degranulacion de los
leucocitos polimorfonucleares y la liberación de mediadores de la
inflamación104.
59
Sthapylococcus aureus tiene en su superficie proteínas conocidas por inhibir

la fagocitosis y la opsonización por el sistema del complemento del
humano. El reconocimiento del complemento y las inmunoglobulinas por
los receptores son bloqueados por la proteína A de la pared celular que se
une a la porción Fc de la inmunoglobulina IgG. Staphylococcus aureus
produce moléculas que pueden inhibir el reclutamiento de neutrófilos, la
fagocitosis y el reconocimiento de la bacteria, a pesar de que un número
significativo de factores de evasión son empleados por Staphylococcus
aureus125.
Durante el desarrollo de las infecciones por Staphylococcus aureus, los

neutrófilos participan reclutando leucocitos en el sitio de la infección, así
como el complemento que tiene un papel central en nuestro sistema inmune
innato, involucrado en la quimiotaxis, opsonización y destrucción de la
membrana celular de los patógenos 127,128.
El sistema de complemento puede activarse por tres vías: la clásica, la

alterna y la de la lectina. Staphylococcus aureus puede activar estas tres
vías, sin embargo, se ha observado que el sistema del complemento no es
tan eficiente contra la bacteria, por lo que necesitan de otro tipo de células
como los neutrófilos, los cuales reconocen a los patógenos a través de los
receptores tipo Toll. Los neutrófilos expresan receptores tipo Toll-2, los
cuales reconocen los ácidos tipo teicoicos y el peptidoglicano de las
bacterias Gram positivas. Se ha observado que el Staphylococcus aureus
causa un cambio en los neutrófilos durante la adhesión, alterando la
expresión de las proteínas e induciendo un estallamiento oxidativo, así como
la degradación de especies y compuestos antimicrobianos, con lo que
facilita su supervivencia intracelular. Aunque, se ha reconocido por largo
tiempo que Staphylococcus aureus puede sobrevivir a un ataque por los
neutrófilos123.
60
Además Staphylococcus aureus produce un gran número de factores que

promueven su supervivencia en el huésped al mismo tiempo favorece a su
patogénesis. Varios de estos factores están involucrados en la inhibición del
sistema fagocítico del huésped, habilitando a Staphylococcus aureus a
resistir a su destrucción por las células del sistema inmune innato del
individuo. Quizás una de las características más sobresalientes de
Staphylococcus aureus es su habilidad para producir una diversidad de
toxinas cuyo blanco son las células de la sangre humana. Estas toxinas
incluyen la hemolisina-β (Hla), hemolisina-β y hemolisina-y, la leucocidina
de Panton Valentine, y recientemente se descubrió la β-modulina soluble al
fenol (PSM-α) tipo péptido129,130.
Otro de los mecanismos que presentan algunas cepas de Staphylococcus

aureus es la producción de una cápsula polisacárida, especialmente los tipos
5 y 8 con características antifagocíticas. Otras cepas tienen diferentes
mecanismos que le permiten evadir los sistemas de defensa del huésped,
desarrollando abscesos. Otro factor es una proteína de superficie A
(MSCRAMM) que tiene la capacidad de unirse a la fracción Fc de la
inmunoglobulina IgG, inactivando la actividad opsonizante de la
inmunoglobulina, también puede producir una proteína inhibidora de la
quimiotaxis (Chip), o la proteína de adherencia extracelular (Eap) que
impiden la quimiotaxis y la extravasación de los leucocitos
polimorfonucleares (PMN). Dentro de éstas, se encuentran las hemolisinas,
especialmente la hemolisina-alfa, toxinas y la leucocidina Panton-Valentine,
las cuales tienen relevancia en las infecciones adquiridas en la
comunidad125,131.
Las cepas CA-MRSA han intensificado sustancialmente su habilidad para

evadir la respuesta inmune matando los neutrófilos humanos y lisándolos, lo
cual ocurre más rápido seguido de una fagocitosis por cepas CA-MRSA
comparadas con las cepas HA-MRSA125.
61
1.4.2.7 IDENTIFICACIÓN DE Staphylococcus aureus
La identificación de Staphylococcus aureus se realiza con el

empleo de la tinción de Gram, pruebas bioquímicas como: prueba
de la catalasa, fermentación de glucosa, que permite diferenciar al
género Staphylococcus del género Micrococcus, que también se
considera una catalasa positiva pero no fermenta la glucosa. Sin
duda, la prueba de la coagulasa sigue siendo la más utilizada. Se
basa en la capacidad de Sthaphylococcus aureus para producir la
enzima extracelular que coagula el plasma. La detección de la
coagulasa permite diferenciar Staphylococcus aureus coagulasa
positivo de las demás especies de estafilococos coagulasa
negativos. Con la prueba de la ADNsa termoestable se identifica
fácilmente en el medio que contiene ADN y verde de malaquita.
Otras pruebas son específicas de especie como la fermentación
del manitol y la producción de la fosfatasa alcalina132.
Staphylococcus aureus también puede identificarse a través de

técnicas moleculares como la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) y PCR en tiempo real, utilizando genes específicos de
especie. Sin embargo, estas técnicas son caras y laboriosas. En
ocasiones, se requiere identificar cepas o grupos de cepas con
fines epidemiológicos para lo cual se pueden emplear técnicas
fenotípicas y genotípicas132.
1.4.2.8 ENFERMEDADES CAUSADAS POR Staphylococcus aureus
Las infecciones causadas por S. aureus se producen por lesiones

cutáneas, traumáticas o quirúrgicas que favorecen la penetración
de la bacteria desde la piel a los tejidos profundos. Las
infecciones por S. aureus son supurativas y tienden a producir
abscesos118, 133, 134. Debido a su amplia versatilidad, esta bacteria
es capaz de causar enfermedades de amplio espectro como
62
infecciones menores de la piel e infecciones invasoras serias

como: bacteriemia, infecciones del sistema nervioso central,
osteomielitis, infecciones del tracto respiratorio, infecciones del
tracto urinario y el síndrome de choque tóxico, así como
infecciones gastrointestinales.
Infecciones de la piel y tejidos blandos:

Se caracterizan por la formación de vesículas pustulosas, las
cuales comienzan en los folículos pilosos propagándose a tejidos
vecinos. La foliculitis es una infección piógena superficial. Su
extensión al tejido perifolicular da lugar al forúnculo. El ántrax es
la infección de varios forúnculos con extensión a la capa más
profunda del tejido subcutáneo, que puede producir bacteriemia
en un tercio de los casos. Otras infecciones cutáneas ocasionadas
por S. aureus son el impétigo (infección superficial que afecta
sobre todo a niños en áreas tropicales), mastitis, hidrosadenitis
supurada, celulitis fascitis y paroniquia.
S. aureus es uno de los patógenos que se observa con mayor

frecuencia en infecciones de heridas quirúrgicas, tanto
superficiales como profundas, así como también está implicado en
las infecciones de úlceras crónicas como el pie diabético. S.
aureus es causa común de bacteriemia, el foco inicial se
desconoce.
Bacteriemias:
Las bacteriemias por S. aureus que se presentan en los hospitales
se relacionan con el uso de catéteres y otros procedimientos
invasivos, mientras que las bacteriemias de la comunidad, el foco
que las origina suele ser extravascular (infecciones de piel,
ocasionalmente el aparato respiratorio y neumonías). Las
infecciones metastásicas y la endocarditis son complicaciones
63
importantes de la bacteriemia. La frecuencia de endocarditis en

pacientes con bacteriemia por S. aureus oscila en 5 a 20%, según
sean los pacientes con bacteriemia hospitalaria o adquirida en la
comunidad. S. aureus es la causa más frecuente de endocarditis
infecciosa aguda, afecta sobre todo a la válvula mitral y aórtica,
ya sea nativas o protésicas, entre las complicaciones por
endocarditis por este patógeno están la insuficiencia cardiaca por
diseminación valvular, embolismo séptico, abscesos hematógenos
cerebrales o viscerales, abscesos miocárdicos y pericarditis
purulenta. S. aureus también se encuentra en pericarditis;
generalmente es de origen hematógeno, aunque también puede
ocurrir tras cirugía en cuyo caso es de pronóstico grave, también
puede deberse a un traumatismo penetrante.
Infecciones músculo-esqueléticas:
S. aureus es una de las bacterias que con mayor frecuencia origina
infecciones óseas por diseminación hematógena y por
contigüidad. En niños la osteomielitis hematógena suele afectar la
metáfisis de los huesos largos, mientras que en los adultos, S.
aureus afecta el tejido esponjoso vertebral dando lugar a
osteomielitis vertebral. La osteomielitis crónica por contigüidad
es más frecuente y se produce como complicación de cirugía
ortopédica y traumatismos.
También puede ocasionar infecciones de prótesis articulares. S.
aureus es el principal agente etiológico causante de artritis séptica
y de bursitis. Las articulaciones afectadas con mayor frecuencia
son las rodillas, tobillos, caderas, hombros y las interfalángicas.
La piomiositis es una infección poco común de los músculos de

fibra estriada que afecta a personas con enfermedad de base. La
forma más frecuente es el absceso del psoas de origen
hematógeno o como consecuencia de una infección vertebral.
64
Infecciones del tracto Respiratorio

Las neumonías por S. aureus son poco frecuentes pero graves, se
puede producir por aspiración de secreciones orales o por
diseminación hematógena. La neumonía por aspiración de
adquisición comunitaria se produce por complicación de cuadros
virales, mientras que la nosocomial es más frecuente en pacientes
con ventilación mecánica. La complicación más frecuente de la
neumonía es el empiema.
Infecciones del sistema Nervioso Central:

S. aureus puede ser la causa de infecciones del sistema nervioso
central. La meningitis piógena estafilocócica puede ser de origen
hematógeno o como una complicación de un absceso. Los
abscesos cerebrales pueden ser de origen hematógeno a partir de
una endocarditis o por contigüidad a partir de una sinusitis,
traumatismos o cirugías. S. aureus también se considera como
causa frecuente de empiema subdural y absceso epidural medular
o intracraneal.
Infecciones del Tracto Urinario:

La presencia de S. aureus en infecciones de vías urinarias es rara.
Su presencia en la orina sugiere origen hematógeno. Las
infecciones ascendentes son debidas a la manipulación
instrumental. Asimismo, en infecciones por toxinas
estafilocócicas, principalmente en el síndrome de la piel
escaldada; es una dermatitis exfoliativa ampollar que no afecta
mucosas y es más frecuente en neonatos y niños en zonas
tropicales, suele aparecer como una complicación de piodermal
localizado, debido a que S. aureus produce una toxina exfoliativa
o epidermolítica. La producción de estas toxinas tiene lugar
especialmente durante la fase de latencia de crecimiento de la
bacteria, lo que favorece su diseminación.
65
Choque Tóxico
S. aureus puede producir choque séptico mediante la activación
del sistema inmunológico y del sistema de coagulación mediado
por el peptidoglicano, los ácidos teicoicos y la toxina-alfa. El
síndrome de choque tóxico (SST-1) es un cuadro grave debido a
la producción de la toxina TSS-1, inicialmente se describió en
niños y posteriormente en mujeres jóvenes que usaban tampones.
En la actualidad, la mayor parte de los casos son secundarios a
infecciones estafilocócicas diversas. También puede producir
superantígenos, tales como las enterotoxinas que causan
toxiinfecciones alimentarias o gastroenteritis estafilocócica y la
toxina TSST-1, causante del síndrome del choque tóxico. Estos
superantígenos pueden generar cuadros similares al choque
séptico por la producción incontrolada de citocinas. La
toxiinfección alimentaria se debe a la ingestión de alimentos
contaminados con toxinas del microorganismo; es un cuadro
autolimitado que cursa con vómitos, dolores abdominales, cólicos
y diarrea133-136.
66
1.4.2.9 TRATAMIENTO
TABLA N°08 Antimicrobianos Recomendados Para El Tratamiento De La Infección Estafilocócica Según Localización Del Foco Y Sensibilidad De La Cepa A
37
Meticilina1 .
TRATAMIENTO
LOCALIZACIÓN COMENTARIOS2
SASM1 SARM
Infección de piel y partes Amoxicilina/clavulánico Cotrimoxazol - El drenaje de un forúnculo o absceso cutáneo puede ser suficiente si es completo y no hay celulitis,
blandas Cefalexina Clindamicina flebitis, afección sistémica (fiebre), comorbilidad significativa, inmunodepresión o presencia de un
Infección leve3 Clindamicina Linezolid dispositivo o material protésico endovascular.
Minociclina o doxiciclina Minociclina o doxiciclina - Por tratarse de una infección leve no se destaca ningún antibiótico como primera elección.
Infección de gravedadmoderada Cloxacilina ± clindamicina o linezolid Linezolid -El tratamiento de la infección por cepas productoras de LPV o de superantígenos, debe incluir
o alta4 Linezolid Daptomicina linezolid o clindamicina.
Daptomicina Vancomicina - Considerar el empleo de tigeciclina, a dosis altas, en casos de infección polimicrobiana de gravedad
Teicoplanina moderada, con participación de SARM.
Osteomielitis aguda Cloxacilina Linezolid - En caso de infección por SASM el tratamiento de la fase aguda con cloxacilina iv puede seguirse, por
Artritis Clindamicina Daptomicina vía oral, con la asociación de levofloxacino y rifampicina o con monoterapia con clindamicina,
linezolid o cotrimoxazol.
Clindamicina
Vancomicina - En caso de infección por SARM, tras el tratamiento de la fase aguda por vía iv puede seguirse, por vía
oral, con linezolid, cotrimoxazol o clindamicina (según la sensibilidad de la cepa).
Teicoplanina
Infección del material protésico Cloxacilina iv (5-7 días) seguida de: Daptomicina + - El tratamiento antibiótico inicial de la infección de gravedad moderada o alta debe administrarse por
osteoarticular Levofloxacino +/o rifampicina rifampicina (5-7 días) vía iv durante los primeros 5-7 días.
Linezolid ± rifampicina seguido de:
Cotrimoxazol o clindamicina + rifam- Linezolid ± rifampicina
picina Cotrimoxazol o
clindamicina + rifampicina
Bacteriemia primaria o asociada Cloxacilina Daptomicina - Si los hemocultivos se negativizan en las primeras 24-48 horas de tratamiento, después de la fase
a infección del catéter vascular Vancomicina inicial de terapia por vía iv, el paciente afebril, estable y sin evidencia clínica de metástasis puede com-
Linezolid pletar el tratamiento por vía oral. En caso de infección producida por SASM puede emplearse
amoxicilina-clavulánico, clindamicina, o minociclina en monoterapia o una fluoroquinolona
Teicoplanina (levofloxacino o moxifloxacino) asociada a rifampicina. En caso de infeccióm por SARM puede
emplearse linezolid, cotrimoxazol o minociclina.
- En la bacteriemia persistente (>5-7 días) o recidivante, sin foco endovascular aparente5, asociar un
segundo antibiótico anti-estafilocócico con o sin rifampicina. Si el paciente estaba recibiendo
tratamiento con cloxacilina añadir daptomicina ± rifampicina. Si recibía daptomicina añadir linezolid,
fosfomicina o cloxacilina ± rifampicina. Si recibía vancomicina sustituirla por daptomicina +
cloxacilina ± rifampicina.
67
TRATAMIENTO
LOCALIZACIÓN COMENTARIOS 2
SASM1 SARM
Endocarditis6 - En caso de infección por SASM, si el filtrado glomerular es menor de 40 mL/min

Válvula nativa Cloxacilina ± gentamicina7 Daptomicina + fosfomicina y/o o el paciente recibe otra medicación potencialmente nefrotóxica evitar el empleo
(3-5 días) gentamicina (3-5 días) de gentamicina o sustituirla por daptomicina7.
Vancomicina - En la infección por SASM con CMI de vancomicina >1 mg/L, criterios de sepsis
grave o bacteriemia >5-7 días, considerar la adición de daptomicina.
- En caso de infección por SARM la adición a daptomicina de fosfomicina y/o
gentamicina depende de la sensibilidad de la cepa y del riesgo de toxicidad renal.
Si la cepa es resistente a fosfomicina (CMI>32 mg/L) considerar la sustitución por
cloxacilina o cotrimoxazol.
- La pauta con vancomicina solo debe considerarse si la CMI es <1 mg/L. En caso
de que la CMI sea ≥1 mg/L, antes de utilizar vancomicina es necesario descartar la
existencia de heteroresistencia, tolerancia o efecto inóculo.
Válvula protésica Cloxacilina + gentamicina7 Daptomicina + rifampicina + El tratamiento de la infección por cepas productoras de LPV o de superantíg
(15d) + rifampicina fosfomicina y/o gentamicina - En caso de infección por SASM, si el filtrado glomerular es menor de 40 mL/min
Vancomicina + gentamicina o el paciente recibe otra medicación potencialmente nefrotóxica considerar la
(15d) + rifampicina sustitución de gentamicina por daptomicina7 o por una quinolona (si la cepa es
sensible). Iniciar el tratamiento con rifampicina a partir del 3º-5º día.
- En la infección por SASM con CIM de vancomicina > 1 mg/L, criterios de sepsis
grave o bacteriemia > 5-7 días, considerar la adición de daptomicina.
- En la infección por SARM asociar fosfomicina y/o gentamicina según la
sensibilidad de la cepa y el riesgo de toxicidad renal. Si la cepa es resistente a
fosfomicina (CMI>32 mg/L) considerar la sustitución por cloxacilina o
cotrimoxazol.
- La pauta que contiene vancomicina solo debe considerarse si la CMI de ésta es
<1 mg/L. En caso de que la CMI sea ≥1 mg/L antes de utilizar vancomicina es
necesario descartar la existencia de heteroresistencia, tolerancia o efecto inóculo.
Neumonía Cloxacilina Linezolid - En caso de infección por una cepa productora de PVL, el tratamiento debe incluir
Vancomicina ± rifampicina linezolid o clindamicina.
- Si la infección por SARM cursa con bacteriemia considerar la asociación de
linezolid con daptomicina.
68
TRATAMIENTO
LOCALIZACIÓN COMENTARIOS 2
SASM1 SARM
Infección del sistema nervioso Cloxacilina Linezolid - En caso de infección por SASM con CMI de vancomicina >1 mg/L o criterios de
central Vancomicina ± rifampicina, sepsis grave, considerar la adición a cloxacilina de linezolid o fosfomicina (si CMI
Meningitis fosfomicina o cotrimoxazol ≤ 2).
Absceso cerebral o epidural - En caso de infección por SARM que curse con bacteriemia considerar la adición
Empiema subdural de daptomicina a linezolid.
Trombosis séptica de los senos - Vancomicina puede administrarse por via intratecal en dosis de 10 mg.
venosos
Endoftalmitis Cloxacilina sistémica ± Linezolid - En fase avanzada es necesario practicar una vitrectomía.
intravítrea Vancomicina sistémica + intravítrea
Linezolid
En negrita se resaltan los antibióticos considerados de elección. El resto de antibióticos se mencionan por orden de preferencia.
SASM: Staphylococcus aureus sensible a meticilina. SARM: Staphylococcus aureus resistente a meticilina. LPV: leucocidina de Panton Valentine
1
En pacientes alérgicos a la penicilina puede emplearse cualquiera de las pautas recomendadas para tratamiento de la infección por SARM
2
En cada una de las posibles localizaciones de la infección debe considerarse siempre, en primer lugar, el drenaje (absceso, artritis, empiema), desbridamiento (celulitis, fascitis) o retirada del
material extraño (catéter, derivación ventricular, neuroestimulador, material de osteosíntesis) con objeto de reducir la carga bacteriana, disminuir el riesgo de desarrollo de resistencia y poder
acortar la duración del tratamiento antibiótico
3
En la infección de piel y partes blandas leve se incluye la mayoría de infecciones supuradas (quiste sebáceo o pilonidal infectados, hidrosadenitis, forúnculos, abscesos cutáneos, bursitis) y la
celulitis no complicada
4
En la infección de piel y partes blandas de gravedad moderada o alta se incluyen la celulitis complicada, la fascitis necrosante y la piomiositis
5
El catéter venoso se ha retirado y se ha descartado razonablemente la existencia de una infección endovascular con la práctica de un ecocardiograma trans esofágico, un eco-doppler y, en casos
seleccionados, se ha descartado la existencia de focos metastásicos mediante la práctica de una PET u otra prueba de imagen
6
Endocarditis mitral o aórtica
7
Varios autores del consenso consideraron a la asociación de cloxacilina con daptomicina (en lugar de gentamicina) como la primera alternativa terapéutica de la endocarditis por SASM, tanto
sobre álvula nativa como protésica.
69
1.4.2.10 MECANISMO DE RESISTENCIA AL TRATAMIENTO
La penicilina es hidrolizada por la 3-lactamasa, una proteasa que

hidroliza este anillo lactamico. Actualmente, menos del 5% de las cepas
de Staphylococcus aureus se mantienen sensibles a la penicilina. La
resistencia a la meticilina confiere resistencia a todas las cefalosporinas y
a todas las penicilinas penicilinasas (oxacilina), este alto nivel de
resistencia requiere la presencia del gen meca, que codifica para una
proteína fijadora anómala de baja afinidad, la PBP-2a. Los genes meca se
originaron, probablemente, de diferentes especies de estafilococos
aunque la mayoría de las cepas meticilino-resistentes derivan de un
limitado número de clones, algunas han podido tener un origen
policlonal, que sugeriría una transferencia horizontal de ADN del gen
meca. El gen meca, responsable de la resistencia a la meticilina, se
encuentra localizado en una estructura genética móvil llamada, en ingles,
staphylococcal cassette chromosome (sccmec). Se considera que una
cepa de Staphylococcus aureus es resistente a la meticilina cuando su
concentración mínima inhibitoria (CMI) es igual o superior a 16 mg/L o
cuando la CMI para oxacilina es igual o superior a 4 mg/L.
El primer paciente con Staphylococcus aureus con sensibilidad

intermedia para vancomicina (VISA en ingles) o a glucopeptidos (GISA)
fue descrito en Japón en 1997 desde entonces han aparecido varios casos
más, generalmente en pacientes sometidos a hemodiálisis con infecciones
profundas o asociadas a material protésico con cursos prolongados de
tratamiento con vancomicina. El mecanismo de resistencia es debido al
incremento de la síntesis de la pared celular y a alteraciones estructurales
de la pared que limitan la llegada de vancomicina a los lugares
responsables de la síntesis de la pared celular. En estas cepas no se han
detectado los genes de resistencia vana, vanb o vanc, responsables de la
resistencia a los glucopeptidos de alto nivel observadas con los
enterococos 102, 138.
70
1.5 ANTIBIOTICOS:
1.5.1 HISTORIA URL-4.
Sir Alexander Fleming (1881-1955), bacteriólogo y premio Nobel

británico, se hizo famoso por el descubrimiento de la penicilina. Nacido
en Escocia, se formó en la Facultad de Medicina del St. Mary's Hospital
de la Universidad de Londres, donde trabajó como catedrático de
bacteriología desde 1928 hasta 1948, año en que fue nombrado profesor
emérito.
Fleming desarrolló importantes investigaciones en los campos de la

bacteriología, la quimioterapia y la inmunología. En 1922 descubrió la
lisozima, un antiséptico natural presente en las lágrimas, las secreciones
corporales, la albúmina y ciertas plantas. El descubrimiento de la
penicilina tuvo lugar accidentalmente en 1928 en el curso de sus
investigaciones. Al observar que un moho que contaminaba una de sus
placas de cultivo había destruido la bacteria cultivada en ella, sentó las
bases para el desarrollo de la terapia con penicilina.
Fleming fue nombrado sir en 1944. En 1945 compartió el Premio Nobel

de Fisiología y Medicina con los científicos británicos Howard Walter
Florey y Ernst Boris Chain por sus contribuciones al desarrollo de la
penicilina.
1.5.2 DEFINICIÓN:
Derivado del griego, anti,‖ contra‖; bio ‖vida‖. Los antibióticos son un
amplio grupo de sustancias químicas producidas por varias especies de
microorganismos (bacterias, hongos y actinomicetos), que suprimen el
crecimiento de otros microorganismos, y originan su destrucción. En los
últimos tiempos, el uso del término se ha ampliado para incluir
compuestos sintéticos como las sulfonamidas y las quinolonas, que
presentan también actividad antimicrobiana 139, 140,141.
71
1.5.3 CLASIFICACIÓN DE LOS ANTIBIÓTICOS139, 142.
Actualmente disponemos de una amplia gama de agentes

antimicrobianos sistémicos.
Se clasifican en los siguientes grupos:

1.5.3.1 Según la acción del antibiótico sobre la bacteria
a) Bacteriostáticos:
Inhiben la multiplicación bacteriana
 Anfenicoles
 Lincosaminas
 Macrólidos
 Sulfamidas
 Tetraciclinas
b) Bactericidas:
Poseen la propiedad de destruir la bacteria.
 Betalactámicos
 Aminoglucósidos
 Glicopéptidos
 Quinolonas
 Rifampicinas.
1.5.3.2 Según el mecanismo de acción sobre la bacteria.
a) Antibióticos que inhiben la síntesis de la pared celular.

Afectan la formación del polímero peptidoglicano que
conforma la estructura de la pared bacteriana
 Penicilinas
 Monobactámicos: aztreonam, carumonam,
 tigemonam
 Carbapenem: Imipenem, meropemen
72
 Cefalosporinas
 Vancomicina
 Fosfomicina
 Bacitracina
 Teicoplamina
b) Antibióticos que ejercen su acción a través de la

membrana celular y afectan su permeabilidad:
 Polimixinas
 Colistinas
 Anfotericina B
c) Antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas a nivel

ribosomal:
 Los que actúan sobre la subunidad 30s
 Aminoglucósidos
 Aminociclitoides
 Tetraciclinas
 Los que actúan sobre la subunidad 50s
 Macrólidos
 Lincosamidas
 Anfenicoles
d) Antibióticos que inhiben la síntesis de los ácidos nucleicos

 Quinolonas
 Rifampicinas
e) Antibióticos antimetabolitos:
Antagonizan los pasos metabólicos en la síntesis del ácido
fólico.
73
 Trimetroprima
 Sulfonamidas
1.5.3.3 Clasificación según su estructura química

a) Betalactámicos
 Penicilinas
 Cefalosporinas
 Monobactámicos
b) Carbapenems
c) Aminoglucósidos
d) Macrólidos
e) Tetraciclinas
f) Lincosaminas
g) Quinolonas
h) Sulfonamidas
i) Rifamicinas
j) Cloranfenicoles
k) Antibióticos péptidos
l) Otros: Metronidazol, Acido Fusídico, Nitrofuranos
AMINOGLUCÓSIDOS
Los aminoglucósidos son un grupo importante de antibióticos que se

caracterizan por tener aminoazúcares con uniones glucosídicas, obtenidas
generalmente del Streptomyces. Fueron dados a conocer en clínica en
1944 con la introducción de la estreptomicina. Estos antibióticos tienen
un espectro de acción limitado, pero complementario al de las
penicilinas. Están principalmente dirigidas sobre gérmenes gram
negativos con poca acción sobre los anaerobios y limitada sobre los gram
positivos. No han evolucionado en forma sustancial en los últimos años
143-145
.
74
 Mecanismos de acción
Son bactericidas, deben alcanzar el citoplasma bacteriano para
poder ejercer su acción a nivel ribosomal. A través de difusión,
atraviesan la membrana externa por poros formados por proteínas
porinas, luego realizan el pasaje de la membrana celular por un
mecanismo activo oxígeno dependiente, ingresando al citoplasma
bacteriano provocando alteraciones de su funcionamiento, se unen
a polisomas e inhiben la síntesis bacteriana. El sitio de acción es
la subunidad ribosómica 30s, éstas constituyen el sitio de unión
del ARNt al ribosoma donde el aminoglucósido provoca una
alteración en la unión codón-anticodón y lectura errónea del
código genético, con producción de una proteína anómala, la cual
unida a las alteraciones de la membrana producen la muerte
bacteriana143-144.
 Mecanismos de resistencia
Su nivel de resistencia es bajo. Existen tres mecanismos de
resistencia:
1. Inactivación enzimática, la más frecuente
2. alteración del ingreso: falla de penetración de la membrana
citoplasmática
3. Alteración del sitio de unión al ribosoma: mutación de la
proteína S12145.
 Farmacocinética
La biodisponibilidad oral es muy baja y errática. Se administra
por vía IM donde se absorbe completa y rápidamente. La unión a
proteínas es muy baja. No pasa la barrera hematoencefálica, sí la
placenta y la endolinfa. Se excreta por filtración glomerular146.
 Espectro antibacteriano
Todos los aminoglucósidos son antibióticos de espectro reducido.
Actúan sobre bacterias aerobias gram negativas. Sobre las gram
75
positivas sólo ejercen un efecto potenciador de los betalactámicos.

146
.
 Clasificación de los aminoglucósidos146.

● Estreptomicina
● Neomicina
● Kanamicina
● Gentamicina
● Tobramicina
● Amikacina
● Netilmicina
● Espectinomicina
● Paromicina
 Reacciones adversas
Se observa nefrotoxicidad, ototoxicidad dependiente de la
concentración de aminoglucósidos en la endolinfa, bloqueo
muscular por inhibición de la liberación de acetilcolina por el
terminal colinérgico que se pone de manifiesto en miastenia
gravis, insuficiencia renal sin corrección de dosis, inyección en
bolo IV e interacción con drogas curarizantes. Se describe
síndrome de malabsorción con neomicina. Otros efectos adversos
son náuseas, vómitos, anorexia leve (neomicina, y
paramomicina), neuropatías periféricas y neuritis óptica. No
deben ser usadas en embarazadas (Sordera congénita) 143.
1.5.4 MECANISMOS DE ACCION DE LOS ANTIBIOTICOS141:

Los antibióticos realizan por regla general los siguientes mecanismos de
acción:
1.5.4.1 Agente que inhiben la síntesis de la pared celular.
La pared celular es una estructura exclusiva de la bacteria; por lo
tanto el uso de sustancias que actúan a este nivel aseguran una
76
acción antibacteriana selectiva en este grupo se incluye a los

betalactamicos.
1.5.4.2 Agentes que modifican la permeabilidad de la membrana

celular.
El empleo de agentes que actúan a este nivel se basa en que las
membranas celulares de algunas baterías se alteran con más
facilidad que las membranas de células animales, lo cual permite
una actividad relativamente selectiva como por ejemplos:
Detergentes tipo polimixina B
Antifúngicos polienicos tipo Nistatina y Anfotericina B
1.5.4.3 Agentes que inhiben la síntesis proteica.

La unidad funcional de la síntesis proteica en las bacterias son los
ribosomas 70-S, constituidos por dos subunidades, 50-S y 30-S
los cuales al ser inhibidas por sustancias que actúan a este nivel
interrumpen la síntesis proteica necesaria para las funciones
vitales de las baterías; los agentes son:
Sobre la subunidad 30-S: aminoglucósidos, tetraciclinas.
Las subunidades 50-S: macrolidos (eritromicina), cloranfenicol,
lincosamidas (lincosamina, clindamicinas)
1.5.4.4 Agentes que inhiben la síntesis o función de los ácidos

nucleicos.
Los agentes o sustancias que actúan a este nivel, inhiben
funciones vitales en el sistema nuclear bacteriano por lo tanto se
produce la extinción de la batería; las siguientes acciones son:
Inhibiendo la replicación del ADN: quinolonas
Impidiendo la transcripción rifampicina y actinomicina.
Inhibiendo la síntesis de metabolitos esenciales (bloqueo de la
formación de bases purinas y pirimidinas: sulfonamidas,
diaminopirimidinas (trimrtoprin, peremetamida , metotrexato )
77
II. DEFINICIONES OPERACIONALES
2.1 VARIABLES
2.1.1 Variable Independiente
 Extracto alcohólico de hojas del Anacardium occidentale Linn ―Casho‖
2.1.2 Variables Dependientes
 Actividad anti- Staphylococcus aureus
2.2 INDICADORES
2.2.1 Indicador Independiente
Extracto alcohólico de las hojas de Anacardium occidentale Linn.
 Concentración 1 (C1) : 75 mg/ml

2.2.2 Indicador Dependiente
Diámetros de los halos de inhibición del extracto alcohólico de hojas de

Anacardium occidentale L. frente a Staphylococcus aureus, el cual se
cuantifico realizando el cálculo del Porcentaje del Efecto Inhibitorio
Relativo (PIR) respecto al control positivo , se aplicó la siguiente
expresión (Martínez, 1996)147,148.
% Efecto Inhibitorio = (Media diámetro halo de inhibición) x 100

Diámetro halo de inhibición control positivo
78
2.3 OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
Variable Definición Indicador Índices Definición Tipo de

Independiente conceptual operacional variable
Extracto Material vegetal, que Las concentraciones del  Especie La especie vegetal Escala nominal
Alcohólico de las mediante un proceso extracto Alcohólico de las recolectada limpia y pesada puesto Tipo de variable
hojas de de maceración a hojas de Anacardium en maceración cualitativa y/o
Anacardium temperatura occidentale L. (casho):  Cantidad usada alcohólica a cuantitativa
occidentale L. ambiente y mediante temperatura ambiente
 Hora de la colecta
recolectadas en el rota-vapor se obtuvo  75 mg/ml para la extracción del
Centro Poblado el extracto  150 mg/ml extracto
 Parte utilizada
Cruz del Sur alcohólico.  300 mg/ml
 Solvente utilizado
79
Variable Definición Indicador Índices Definición Escala y tipo

Dependiente conceptual operacional de variable
Actividad Actividad que inhibe Según halos de la zona de Según escala de Respuesta del Escala
Antibacteriana el crecimiento de inhibición del extracto medición Duraffourd 22: Staphylococcus nominal.
del Extracto microorganismos alcohólico obtenido, comparado aureus frente a las
Alcohólico de causado por los con el control positivo según  Resistente : R diferentes Tipo de
las hojas de metabolitos CLSI para los métodos kirby -  Intermedio : I concentraciones variable
Anacardium secundarios presentes Bauer  Sensible :S del extracto cualitativa y/o
occidentale L. en el extracto alcohólico de las cuantitativa
(casho) frente a Alcohólico de las hojas de
Staphylococcus hojas de Anacardium Anacardium
aureus occidentale L. occidentale L.
(casho) (casho).
80
III. HIPOTESIS
El extracto alcohólico de las hojas del Anacardium occidentale Linn. (Casho), en distintas
concentraciones presenta actividad antibacteriana in vitro frente a Staphylococcus aureus
81
CAPITULO III__________
82
I. METODOLOGÍA
1.1 METODO DE INVESTIGACIÓN
1.1.1 Tipo de Estudio:

Se empleó un diseño experimental, descriptivo, prospectivo y longitudinal.
 Experimental: porque se evaluó un fenómeno dado introduciendo elementos
que modifica el comportamiento de las variables en estudio (extracto
alcohólico de las hojas y microorganismo), las mismas que fueron medidos en
determinados momentos.
 Descriptivo: porque el estudio describió e interpretó en forma clara y
detallada los hechos obtenidos en la investigación.
 Prospectivo: porque se desarrolló hacia delante del tiempo.
 Longitudinal: porque permitió realizar la recolección sistemática de las
variables involucradas en función del tiempo.
1.2 DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
En la presente investigación se empleó el estudio experimental, descriptivo, prospectivo y

longitudinal, cuyo objetivo principal estuvo basado en encontrar la actividad anti
Staphylococcus aureus, utilizando el método de difusión en disco (Kirby-Bauer),
representada en halos de inhibición que tuviera el extracto alcohólico obtenido de las
hojas de Anacardium occidentale L. (casho) a las concentraciones de 75 mg/ml, 150
mg/ml, 300 mg/ml
83
1.3 POBLACION Y MUESTRA
1.3.1 POBLACION VEGETAL
Estuvo constituida por el conjunto de hojas secas de Anacardium occidentale

Linn.
1.3.2 MUESTRA VEGETAL
Estuvo constituido por 100 gr de hojas secas de Anacardium occidentale L.
1.3.2.1 Criterios de Inclusión de la Muestra Vegetal:
 Árbol de Anacardium occidentale Linn. (Casho) sin fruto.

 Árbol de Anacardium occidentale Linn. (Casho) con menos de tres
metros de altura.
 Hojas verdes de Anacardium occidentale Linn. (Casho).
 Hojas sanas de Anacardium occidentale Linn. (Casho).
recolectados durante las primeras horas de la mañana (8 a 10 a.m.).
 Hojas de Anacardium occidentale Linn. (Casho) sin presencia de
hongos.
 Hojas de Anacardium occidentale Linn. (Casho) sin inflorescencias
 Especie vegetal identificada por el botánico.
1.3.2.2 Criterios de Exclusión de la Muestra Vegetal:
 Arbol de Anacardium occidentale Linn. (Casho) con fruto.

 Árbol de Anacardium occidentale Linn. (Casho) con más de tres
metros de altura.
 Hojas amarillas de Anacardium occidentale Linn. (Casho).
 Hojas sanas de Anacardium occidentale Linn. (Casho).
recolectados en las horas de la tarde.
 Hojas de Anacardium occidentale Linn. (Casho) con presencia de
hongos.
84
 Hojas de Anacardium occidentale Linn. (Casho) con

inflorescencias.
 Especie vegetal no identificada por el botánico.
1.3.3 CEPA BACTERIANA

Se utilizó la cepa Staphylococcus aureus
1.4 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.4.1 RECOLECCION DEL MATERIAL VEGETAL
1.4.1.1 RECOLECCION DE LAS MUESTRAS VEGETALES
La muestra vegetal se recolectó del Centro Poblado Cruz del Sur (km.
8 Carretera Iquitos - Nauta), ubicada en el Departamento de Loreto
(selva baja), Provincia de Maynas, Distrito de San Juan Bautista entre
el río Nanay y la carretera Iquitos - Nauta, y tiene una latitud de -
3.84333 y longitud -73.3342 (ver Anexo N°04,07)
Para la recolección del material vegetal se siguieron los siguientes

pasos:
 Selección de las especies de Anacardium occidentale L. :
Para la selección de las muestras vegetales se tuvo en

Consideración los siguientes factores:
- Edad de la planta.
- Estado vegetativo.
 Selección de materia prima:
Se seleccionó las hojas verdes, frescas, en buen estado de

Anacardium occidentale Linn. cuyo certificado fue otorgado
por el Herbarium Amazonense de la Universidad Nacional de la
Amazonia Peruana. (ANEXO Nº 03). En donde, el botánico
determino la categoría taxonómica, empleando descriptores
85
morfológicos, claves de identificación, bibliografía

especializada y estereoscopio (ver Anexo N°02).
1.4.2 LAVADO DE LA MATERIA PRIMA:

Las hojas se sometieron a la acción de hipoclorito de sodio al 3% por espacio
de 3 minutos. Luego se enjuagó con agua a chorro continuo para despojarlos
de contaminantes.
1.4.3 SECADO DE LA MATERIA PRIMA:

Las hojas fueron sometidas a calentamiento; ubicadas en el área de desecador
de muestras vegetales del IMET-Es Salud (ubicada en Pasaje San Lorenzo
N°205, Distrito de San Juan Bautista, Loreto-Perú.) , a 37° C por 8 días. (ver
Anexo N°08).
1.4.4 TRITURADO Y PESADA DE LA MATERIA PRIMA:

Seguidamente se procedió a triturar las hojas secas, con la ayuda de una
licuadora. Se llevó a una balanza analítica para saber el peso final. (ver Anexo
N°09,10).
1.4.5 MÉTODO DE OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO
1.4.5.1 Obtención del Extracto Alcohólico de Las Hojas de Anacardium

occidentale L. (casho) :
El extracto se obtuvo empleando el método de maceración, con etanol

al 70% a temperatura ambiente, con renovación del solvente cada 7
días, hasta agotamiento. El solvente se eliminó mediante presión
reducida (690 mmHg) a 55°C. La concentración del extracto se realizó
en las instalaciones del laboratorio de Fitoquimica del LIPNA, ubicada
en Psje Los Paujiles S/N AA.HH. Nuevo San Lorenzo, distrito de San
Juan Bautista, provincia de Maynas. El extracto obtenido se pesó y
86
149
conservo en frasco de vidrio hasta el momento de utilizarlos a 4°C .
(ver Anexo N°05,11-15).
Porcentaje de rendimiento 150.
El porcentaje de rendimiento de cada extracto seco fue calculado

usando la siguiente fórmula:
% de Rendimiento = Peso del extracto seco x 100

Peso de la droga seca
1.4.6 DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD Anti Staphylococcus aureus

1.4.6.1 Obtención de la cepa de Staphylococcus aureus
La cepa fue proporcionada por el Área de microbiología de la
Dirección Ejecutiva de Salud Ambiental, ubicada en la Calle Alzamora
N°410 (ver Anexo N°22).
1.4.7 PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD POR DIFUSIÓN DE DISCO. (ESTA

PRUEBA SE REALIZÓ POR TRIPLICADO).
Se utilizó la técnica de difusión de disco en Agar de Kirby-Bauer (ver Anexo

N°06), prueba que permitió medir la susceptibilidad in Vitro de
microorganismos patógenos y Fitopatógenos frente a una sustancia o la
mezcla de varias sustancias desconocidas de origen vegetal con potencial
antimicrobiano 151.
1.4.7.1 Esterilización de los materiales a utilizar 152.

La esterilización de los materiales se realizó mediante la acción de
calor seco (en la estufa de esterilización), se aplicó temperatura de 150-
170 °C durante 2 horas.
87
Preparación de material para su esterilización:

Se siguió las siguientes recomendaciones (ver Anexo N°16):
Preparación De Tubos Y Matraces

 Los tubos, matraces y frascos antes de esterilizar llevan sus tapones
de algodón, en los cuales los tapones deben cerrar suavemente no
muy flojos ni apretados, ni largos ni cortos.
 Tubos: formar un determinado número de tubos después de haber
sido taponado, se le empaqueta con papel Kraft y se le amarra, en
su defecto se le envuelve con papel solo las zonas de las bocas,
rotular.
 Frascos y Matraces: ambos se taponan con algodón y se cubre con
papel Kraft y se amarra con hilo pabilo, rotular.
Preparación Proteger Las Pipetas

 En el extremo de succión de cada pipeta introducir una porción de
algodón con auxilio de una aguja o puntero delgado, evitando que
quede muy ajustado.
 Cortar tiras de papel de unos 3 cm de ancho, en una de las puntas
del papel envolver la punta de la pipeta en forma oblicua y
envolver toda la longitud de la pipeta girándose en espiral en forma
ajustada y en la parte terminal de la boquilla se remata con una
torsión para protegerla y se rompe el resto del papel sobrante,
rotular.
Preparación De Placas Petri

 Cortar el papel al tamaño adecuado de la placa.
 Con la parte brillante del papel hacia fuera se envuelve la placa
poniéndose ésta en el centro, se envuelve la placa tomándose dos
extremos opuestos al papel, dándose una vuelta alrededor de ella,
los otros dos extremos del papel se doblan en triángulos,
rematándose con fuertes doblez hacia el dorso de la placa, dándose
una apariencia de paquete de regalo.
88
Procedimiento Para La Esterilización En Horno

 Lavar los materiales con detergente y enjuagar con abundante agua.
 Secar los materiales con una toalla.
 Coloque el material a esterilizar.
 Ponga el termostato en 150°C.
 Encienda el horno, y gradúe el reloj a 1 hora
 Si hay ventilador verifique que esté funcionando.
 Vigile el termómetro, cuando la temperatura llegue a 150°C siga
calentando durante 1 hora más.
 Si el horno no es automático apáguelo. Espere que la temperatura
descienda a 60°C. Abra la puerta del horno, y recién retire los
materiales. Si lo desea espere a que se enfrié.
 El papel empleado abra tomada un color marrón oscuro. Si el papel
es amarillo pálido indicara que el horno no ha calentado lo
suficiente. Si el papel se ha ennegrecido indicara que el horno se ha
calentado demasiado.
1.4.7.2 Preparación de los Medios de cultivo

Los Medios de cultivo; Agar Müeller-Hinton, Agar tripticasoya de
soya y Caldo tripticasoya de soya, se prepararon teniendo en
consideración las indicaciones del fabricante y fueron preparados 2
días antes de realizar la prueba (ver anexo N°20),
1.4.7.3 Preparación de los Discos

Se utilizó papel de filtro Whatman N° 02 (diámetro 6 mm) y un
perforador convencional. Los discos fueron esterilizados en horno a
180°C por 1h y 30 m. (ver Anexo N°17).
1.4.7.4 Preparación de la Solución Stock152 y de la Macrodilución

del extracto.
Se preparó la solución stock del extracto alcohólico de las hojas de
Anacardium occidentale L. (casho) a la concentración de 500mg/ml, el
volumen de 10 ml; a partir de la cual se realizó diluciones sucesivas
89
para obtener las concentraciones de 75mg/ml, 150mg/ml, 300mg/ml

las cuales fueron usadas en la prueba. (Ver Anexo N°18,19).
1.4.7.5 Preparación de los Discos Impregnados con el extracto 152.

Para preparar los discos de los extractos se trabajaron con tres
concentraciones de 75, 150 y 300 mg/ml del extracto obtenido de las
hojas de Anacardium occidentale L. (casho). Los extractos fueron
disueltos en agua destilada estéril. Posteriormente se le agregó a cada
uno de ellos 15 µl de las diferentes concentraciones de los extractos y
se le dejó secar a temperatura ambiente por un periodo 30 minutos,
para su uso. (Ver Anexo N°27).
1.4.7.6 Purificación de la Cepa 153.
Para la activación de la bacteria, la cepa se replicó en agar tripticasa de

soya por el método de inoculación por estrías, luego se incubo en
estufa a 37°C por 24 Horas. (Ver Anexo N°23,24).
1.4.7.7 Preparación del Inóculo153.

De las placas de cultivo de agar específico se seleccionó 5 colonias
aisladas de apariencia similar.
Se tocó la superficie de la colonia con asa de siembra y transfirió a un
tubo de 5 ml de caldo de tripticasa de soya.
Se incubó a una temperatura de 35 °C de 2 a 6 horas (ver Anexo

N°25), hasta alcanzar la densidad bacteriana equivalente al tubo N° 1
(1,5x108 UFC/ml) del patrón de turbidez equivalente a 0.5 de Mac
Farland120 (ver Anexo N°26) por comparación visual con el estándar
(ver anexo N°28), para realizar este paso correctamente se usó una luz
apropiada y se observó los tubos contra un fondo blanco con líneas
negras contrastantes.
90
1.4.7.8 Inoculación en las placas 153 (ver Anexo N°29).
 Después de los 15 minutos de ajustada la turbidez del inóculo, se

sumergió un hisopo estéril en la suspensión, se roto el hisopo
varias veces presionando firmemente sobre la pared interior del
tubo por encima del nivel del líquido para remover el exceso del
inóculo.
 Antes de realizar la siembra, se atemperó las placas de agar Mueller
Hinton, preparado mínimamente 2 días antes de la prueba.
 Se inoculo la superficie seca de la placa de Muller- Hinton (pH 7.2
a 7.4) estriando con el hisopo en tres direcciones con ángulo de 65º
para garantizar la distribución homogénea del cultivo.
 Antes de colocar los discos se dejó secar la placa a temperatura
ambiente durante 3 – 5 minutos para que se absorba el exceso de
humedad.
 La prueba se realizó por triplicado.
1.4.7.9 Aplicación de los discos153. (ver Anexo N°30).
 Después de 5 minutos de realizada la siembra, se aplicó los discos

con el extracto de Anacardium occidentale L (Casho) a las
concentraciones de 75, 150 y 300 mg/ml, antibiótico (Gentamicina
10 µg) y control negativo (empapado con 10 μl de agua destilada
estéril) sobre la superficie del agar de forma manual con la ayuda
de una pinza estéril. Se presionó ligeramente para asegurar el
contacto uniforme, sin introducir el disco en el agar.
 Los discos fueron colocados a 2,5 cm de distancia entre ellos y a
1.5. cm del borde de la placa Petri (máximo seis por caja).
 No se recolocó los discos una vez que tomaron contacto con el
agar; porque la difusión comienza instantáneamente y se alteraría
los resultados.
91
1.4.7.10 Incubación de las Placas 153.
Las placas se incubaron después de 15 minutos de aplicados los discos

por 18 horas a 37ºC. Y se realizaron las pruebas por triplicado. (Ver
Anexo N°31).
Después del tiempo recomendado de incubación se examinó cada placa
y se midió los diámetros de los halos de inhibición alrededor de cada
disco.
153
1.4.7.11 Lectura de las placas e interpretación de los resultados .
(ver Anexo N°32).
 Para la lectura de las placas se tuvo en cuenta que el crecimiento de

la bacteria sea confluente en toda la placa, se trabajó en una
superficie adecuada para poder observar adecuadamente los halos.
Se midió los diámetros de las zonas de inhibición completa
(incluyendo el diámetro del disco) usando una regla.
 Se mantuvo iluminada la parte posterior a la placa Petri con una luz
reflejada localizada a unos cuantos centímetros sobre fondo negro.
 Se tuvo la precaución de observar la placa siguiendo una vertical
directa para evitar una lectura errónea de las marcas de la regla por
efecto del paralelismo.
 El punto final se tomó como el área que no muestra un crecimiento
obvio visible, que podrá ser detectado mediante observación visual,
no incluyendo velo de crecimiento o colonias muy pequeñas que
podrán ser detectadas solo con mucha dificultad en el borde de la
zona.
 Luego se procedió a la toma de datos.
92
 De acuerdo con los tamaños de la zona de inhibición que presentó

la muestra frente a los microorganismos se consideró como
indicador lo siguiente:
Tabla N°09: Clasificación de la actividad antimicrobiana según el porcentaje de

inhibición.
PORCENTAJE
ACTIVIDAD
DE
ANTIMICROBIANA
INHIBICIÓN
Inactivo < 40%
Poco activo 40 – 50%
Moderado activo 51 – 75%
Buena actividad >76%
Fuente: Protocolo de estudio de la actividad antimicrobiana IMET –

154
ESSALUD 2007 .
1.5 MATERIALES
1.5.1 MATERIAL VEGETAL

 Extracto Alcohólico de las hojas de Anacardium occidentale L.
(casho).
1.5.2 MATERIAL BIOLÓGICO

 Cepa Staphylococcus aureus
1.5.3 MATERIALES DE LABORATORIO:
 Soporte Universal.
 Embudos.
 Maceradores
 Balones de destilación
 Frascos de vidrio con tapa rosca color ambar.
93
 Mecheros de alcohol.
 Placas Petri.
 Asas bacteriológicas en argolla de nicromo
 Espátulas
 Micro pipetas
 Puntas amarillas 10 a 100 uL estériles
 Puntas azules de 100 a 1000 uL estériles
 Erlenmeyers de 250 y 500 ml,100,25
 Matraz 1000 ml.
 Pipetas de 1, 2, 5 y 10 ml.
 Probetas de 10, 5, 100, 250 y 1000 ml.
 Gradilla para tubos de ensayo
 Tubos de ensayo de 5 y 7 ml.
 Vasos precipitados de 5, 10, 20, 50 y 100 ml.
 Tubos de ensayo con tapón rosca
 Mortero y pilon.
 Bagueta.
 Goteros.
 Pinzas estériles.
 Picetas
 Regla graduada en mm.
 Hisopos estériles.
 Papel parafilm
 Papel filtro.
 Encendedor.
 Maskintape
 Escobillas.
 Perforador convencional
 Papel aluminio
 Papel Kraft
 Papel toalla.
 papel filtro Wattman Nº2.
94
 Algodón
 Bolsas Ziploc.
 Marcadores indelebles
 Tijeras.
 Hilo pabilo.
 Gorros
 Mascarilla
 Guantes
 Mandil de laboratorio
 Toallitas.
 Termos.
 Gel refrigerante.
1.5.4 DROGAS E INSUMOS QUÍMICOS:
 Agua desmineralizada no estéril y estéril.

 Etanol 70%
 Etanol 96%
 Estándar de McFarland 0.5
 BaCl2 a 0.048 M
 H2SO4 a 0.18 M
 Disco de sensibilidad de Gentamicina 10 µg
1.5.5 EQUIPOS E INSTRUMENTOS:
 Balanza analítica.
 Refrigeradora.
 Cocina Eléctrica.
 Licuadora
Marca IMACCO
Modelo BL999
220V-60Mz 350 v
95
 Rota vapor:
Serie 040303205-030300681
Marca HEIDOLPH
Modelo LABORATA 4001
 Bomba de Vacío:
Serie 34813-004/348178
Marca VACUUBRAND
Modelo PC 3001
 Baño Termostático:
Serie LCE 0226-11-0391
Marca LAUDA
Modelo ALPHARA 24
Rango de T°-25 A 85°C,230 V 50/60 Hz
 Baño María
Serie 129308301
Marca HEIDOLPH
Modelo OB 2001
T° 240°C
 Autoclave
Marca Sturdy SA-232.
 Esterilizador JSB
 Incubadora JSB
Modelo ST 220 V.
1.5.6 MEDIOS DE CULTIVO PARA Staphylococcus aureus
 Agar Müeller-Hinton.
 Agar tripticasoya de soya.
 Caldo tripticasoya de soya.
96
1.6 TÉCNICAS USADAS EN LA RECOLECCIÓN DE DATOS

La colección de las muestras vegetales se realizó en el campo manualmente, se colectaron
en sacos aproximadamente 3Kg. de la especie de Anacardium occidentale L., las cuales
fueron codificadas, y llevadas al laboratorio para ser lavadas, el procesamiento de las
mismas se realizó en el Laboratorio de Fitoquímica de la Facultad de Farmacia y
Bioquímica de la UNAP, el IMET- Es Salud y LIPNA.
1.7 ANÁLISIS DE DATOS

El procesamiento de datos con respecto a las variables de estudio se realizó mediante el
software estadístico SPSS 21.0 para Windows y Minitab versión en español, los cuales
nos permitió elaborar cuadros de distribución de frecuencia, gráficos y calcular los datos
estadísticos necesarios para el estudio.
1.7.1 Técnicas de Análisis e Interpretación de la Información.

El análisis e interpretación de la información se realizó empleando las
técnicas:
 Estadística descriptiva para el análisis univariado calculando las
medidas de resumen para luego describir lo que expresa la
información.
 La estadística inferencial para el análisis multivariado calculando los
estadísticos a través del análisis de regresión múltiple, Análisis de
varianza de un factor, para hallar el tipo de asociación entre las
variables en estudio.
1.8 LIMITACIONES
 Hojas infectadas por hongos o parásitos.
 Hojas recolectadas en las horas de la tarde.
 Extracto alcohólico de otras especies.
 Cepa bacteria que no sea Staphylococcus aureus.
97
1.9 PROTECCIÓN DE LOS DERECHOS HUMANOS Y BIOSEGURIDAD
El área de microbiología, donde se realizó los ensayos experimentales, constituye un

medio ambiente de trabajo especial que pueden presentar riesgos de enfermedades
infecciosas para las personas que trabajan en el laboratorio o cerca de él. Por ellos se
contó con las estrictas medidas de bioseguridad 155.
NORMAS GENERALES DE TRABAJO EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA152, 156.
Un laboratorio de Microbiología es un lugar convenientemente habilitado donde se

pueden manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a
cabo con una buena técnica aséptica, y por tanto se requiere un ambiente limpio y
ordenado y trabajar siempre en condiciones de esterilidad (en campanas de esterilidad
biológica o en la proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas). Aunque los
microorganismos que se manipulen no sean considerados patógenos, todos los cultivos
de todos los microorganismos deben ser manejados con precaución por su potencial
patogenicidad.
Es necesario cumplir dos REQUISITOS BÁSICOS:

1. Restringir la presencia de los microorganismos en estudio a sus recipientes y medios de
cultivo para evitar el riesgo de contaminarse uno mismo o a un compañero.
2. Evitar que los microorganismos ambientales (presentes en piel, pelo, aire, ropa, etc.)
contaminen nuestras muestras.
Para mantener estas condiciones, es necesario respetar una serie de NORMAS DE

SEGURIDAD:
1. Trabajar con calma y concentración.
2. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.
3. Lavarse las manos con agua y jabón al iniciar y finalizar el trabajo.
4. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar es
conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los desinfectantes más habituales
para esto son la lejía y el alcohol (etanol 96°).
98
5. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben evitar

los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que pueden crear corrientes
que originen contaminaciones o producir accidentes.
6. Está prohibido comer, beber y fumar. Cuando se manipulan microorganismos hay que
evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc.
7. Para deshacerse del material contaminado se utilizarán los recipientes adecuados, que
serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por la
fregadera o a la basura común.
8. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del laboratorio.
9. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.
10. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de microorganismos, etc.)
se debe avisar inmediatamente al responsable del laboratorio.
El presente trabajo se realizó bajo los principios de las 3 R (Reducción, Refinamiento,

157
Reemplazo) creado por Russell y Bursh en la cual pudimos Reducir a cero el
número de animales, reemplazándolo por microorganismos; Refinamos las pruebas
experimentales por un método alternativo de mayor sensibilidad y Reemplazamos por
un método alternativo in vitro 158.
99
CAPITULO IV___________
100
I. RESULTADOS:
1.1 DETERMINACIÓN DEL RENDIMIENTO DE HOJAS.
TABLA N° 10: Rendimiento del Extracto Alcohólico de las hojas de Anacardium occidentale L
(Casho), por maceración en frio y posterior concentración en rotavapor.
Rendimiento
Nombre Científico Tipo de Maceración
(%)
Hojas de Anacardium occidentale Maceración en frio a
10.64%
Linn. (casho) temperatura ambiente
101
1.2 ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE Anacardium occidentale L. "CASHO"

1.2.1 Método de difusión de disco (Kirby - Bauer)
TABLA N° 11: Actividad antibacteriana obtenida del Extracto alcohólico de Anacardium occidentale (Casho) frente a Staphylococcus aureus
Según Diámetro de la zona de inhibición.
EXTRACTO ETANOLICO DIAMETRO DE LA ZONA DE

INHIBICIÓN ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA (&)
CONCENTRACIÓN
PARTE DE LA (DZI) *
PLANTA (mm) RESULTADO %
(mg/mL) RESULTADO
X ± SD (Kirby – Bauer) INHIBICIÓN
75 6.0 ± 0.0 RESISTENTE 34.29 INACTIVO
HOJAS
150 6.7 ± 0.6 RESISTENTE 38.29 INACTIVO

300 8.0 ± 0.0 RESISTENTE 45.71 POCO ACTIVO
CONTROL POSITIVO GENTAMICINA 17.5 ± 0.4 SENSIBLE
* Esquema DZI frente a Control positivo & Actividad antimicrobiana / Porcentaje de inhibición
Resistente : <12 mm Inactivo : < 40%
Intermedio : 13 - 14 mm Poco activo : 40 – 50%
Sensible : > 15 mm Moderadamente activo: 51 – 75%
153
Fuente: MPPSAMDD . Buena actividad :> 76 %
154
Fuente: IMET-ESSALUD 2007 .
102
En la tabla N°11, se muestra el promedio y desviación estándar de los diámetros de la
zona de inhibición que se obtuvieron en las lecturas del ensayo de disco difusión, a
diferentes niveles de concentraciones del extracto alcohólico de hojas de Anacardium
occidentale L. (Casho) frente a Staphylococcus aureus.
El control Positivo (Gentamicina 10 ug), obtuvo un promedio de 17.5 mm. en el

Diámetro de la zona de inhibición (DZI), encontrándose como resultado SENSIBLE
según parámetros del método de Kirby – Bauer (>15 mm = Sensible).
El extracto alcohólico de hojas de Anacardium occidentale L. (Casho), se evaluaron a

concentraciones de 75, 150 y 300 mg/ml. encontrándose diámetros en la zona de
inhibición de 6.0mm., 6.7mm., 8.0 mm. respectivamente, los cuales obtuvieron como
resultados RESISTENTE, por encontrarse por debajo del parámetro de comparación
según control positivo (<12 mm = Resistente).
La actividad antibacteriana se mide principalmente por el porcentaje de inhibición que

demuestra el extracto alcohólico a las diversas concentraciones evaluadas.
Encontrándose 34.29% y 38.29% en las concentraciones de 75mg/ml y 150 mg/ml
respectivamente; lo cual demuestra ser Inactivo frente a Staphylococcus aureus.
En la concentración de 300 mg/ml, se obtuvo un porcentaje de inhibición de 45.71%,
considerándolo como Poco Activo.
103
Grafico N°01: Categorización del Extracto alcohólico de Anacardium occidentale L, (Casho) frente a
Staphylococcus aureus según Diámetro de la zona de inhibición.
17.5
Gentamicina
8
300mg/ml
Resistente <12mm
Intermedio 13-14mm
6.7 Sensible >15mm
150mg/ml
6
75mg/ml
0 5 10 15 20
En el grafico N°01 , se muestra la categorización de las diferentes concentraciones del

extracto alcohólico de Anacardium occidentale L. y del control positivo (Gentamicina
10ug), respecto al Diámetro de la Zona de Inhibición (DZI) frente a Staphylococcus
aureus.
El grupo control positivo obtuvo un diámetro de inhibición de 17.5mm, lo cual lo

categoriza como Sensible según el manual de procedimiento para la prueba de
sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión.
Los grupos con las diferentes concentraciones del extracto alcohólico de Anacardium
occidentale L., obtuvieron valores de DZI menores a 12mm, por lo cual se categoriza
como Resistente.
104
GRAFICO N°02: Actividad antibacteriana de Anacardium occidentale L."Casho" frente a Staphyloccoccus

aureus según Porcentaje de inhibición.
% INHIBICION
45.71%
50.00%
45.00% 34.29% 38.29%
40.00%
35.00%
30.00%
% INHIBICION
25.00%
20.00%
15.00%
10.00%
5.00%
0.00%
75 mg/ml 150 mg/ml 300 mg/ml
En el gráfico N°02, se muestra los porcentajes de inhibición del extracto alcohólico de

Anacardium occidentale L. en las diferentes concentraciones frente a Staphylococcus
aureus.
Los resultados encontrados con las diferentes concentraciones del extracto alcohólico
de Anacardium occidentale L. fueron 34.29% (conc. 75mg/ml), 38.29% (conc.
150mg/ml) y 45.71% (conc. 300mg/ml); dentro de los cuales solo el grupo de mayor
concentración encontró una clasificación de POCO ACTIVO.
105
II. DISCUSIÓN
La utilización de sustancias naturales extraídas de plantas en el tratamiento de

diferentes enfermedades incluyendo las de etiología infecciosa, constituye en la
actualidad un desafío en la medicina y se ofrece como una alternativa,
especialmente en aquellas dolencias para las que no existe un remedio adecuado
159
. , o cuando la medicina tradicional es una alternativa complementaria a la
profesional para amplios sectores de la sociedad sobre todo para los sectores
menos favorecidos y los indígenas que no llegan a tener acceso a la medicina
clínica 160.
La especie vegetal Anacardium occidentale L., conocido vulgarmente como

Casho, Marañón; crece y se desarrolla en la diversidad de la Amazonia. Se
extiende por todos los trópicos del Nuevo y del Viejo Mundo. Desde el sur de
México hasta Perú y Brasil, de Cuba a Trinidad. Se le cultiva en la India y
Malasia. Su límite geográfico (zonas cultivadas) va de los 27º N a los 28º Sur
21,23-27, 78, 87
.
En el Perú, A. occidentale L. (Casho) es empleado como medicina popular

antidiarreico, antiverrugoso, antidiabético y tratamiento de enfermedades renales
entre otras78, 81.
En el presente estudio se evaluó, la actividad antibacteriana del extracto
alcohólico de hojas de Anacardium occidentale L. frente a cepas de
Staphylococcus aureus, mediante el método de Difusión en disco (Kirby –
Bauer).
Se utilizaron las hojas con superficie amplia y de color verde, en las cuales se
concentra la mayor parte de los metabolitos secundarios solubles en alcohol
(sustancias polares), las cuales fueron lavadas y depositadas en el cuarto de
desecación de plantas medicinales del IMET-ESSalud.
Las hojas secas de Anacardium occidental L. (casho) presentaron poca humedad

e higroscopicidad, dando la certeza y confiabilidad a que la droga vegetal en
estudio no presentó crecimiento de bacterias, de hongos ni la hidrólisis de sus
106
constituyentes (metabolitos secundarios). En algunas farmacopeas, las literaturas

mencionan un limitado contenido de agua, especialmente en las drogas que
tienen la facilidad de absorberla, o en las drogas en las cuales el exceso de agua
causa su deterioro. Para el caso de Anacardium occidental L. (casho) el tiempo
requerido para el secado de las hojas fueron de 8 días.
El método escogido para la extracción del extracto alcohólico de las hojas de

Anacardium occidental L. (casho) fue mediante la técnica de maceración en frio,
21, 25-27, 161
a temperatura ambiente (37°C) . Después de la maceración en frio, se
filtró (utilizando papel filtro) para posteriormente concentrarlo en rotavapor a
una temperatura de 55° C y a una presión de 690 mm Hg, obteniendo el extracto
alcohólico de las hojas de Anacardium occidental L. (casho).
Los resultados obtenidos en el presente estudio referente al Rendimiento del

extracto fue de 10.64%
Los métodos más usados en la actualidad para evaluar actividad antimicrobiana

de sustancias extraídas de plantas medicinales son: el método de Kirby –Bauer o
disco difusión y el método de pocillos o excavación que también sirven para
hallar no sólo la potencia de los antibacterianos, sino también, la resistencia de
algunos microorganismos a ciertos antibióticos o sustancias usadas como
posibles antibióticos 162.
En nuestro estudio utilizamos el método de difusión en disco ―Kirby-Bauer‖, y
se utilizó como Control positivo (Gentamicina 10 ug), además del extracto
alcohólico de A. occidentale en 3 niveles de concentraciones.
Los diámetros de los halos de inhibición del control positivo (Gentamicina 10

ug) fue de 17.5 ± 0.4 mm, frente a S. aureus. Lo cual, según el Manual de
Procedimientos para la Prueba de Sensibilidad Antimicrobiana por el Método de
Disco Difusión del Instituto Nacional de Salud, lo califica como SENSIBLE
(Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Implica
que una infección debida a la cepa bacteriana estudiada puede ser tratada
107
apropiadamente con la dosis de antibiótico recomendada para el tipo de

infección y la especie infectante, a menos que existan contraindicaciones).
163
En estudios similares realizados por Rodríguez M, Zevallos F .Desarrollados
en el Instituto de Medicina Tradicional – Es salud; utilizaron como control
positivo al antibiótico Gentamicina 10 ug y obtuvieron un diámetro de inhibición
de 20.4 mm y 19.9 mm.; asimismo Ríos N, Dávila R. 164. Rojas, Ochoa, Ocampo
165
y Muñoz . En una evaluación de actividad antimicrobiana y concentración
mínima inhibitoria de distintos extractos de plantas medicinales; donde
utilizaron como controles positivos Sulfato de Gentamicina 1.0 ug/ml,
clindamicina 0.3 ug/ml y nistatina 1.0 ug/ml.
Según los resultados obtenidos, respecto a la evaluación de la actividad

antibacteriana del extracto alcohólico de hojas de Anacardium occidentale L.
frente a Staphylococus aureus , se obtuvo desde 6.0 mm hasta 8.0 mm de
diámetro de zona de inhibición (DZI), el cual nos indicó como resultado
RESISTENTE en comparación con los criterios de categorización del Manual
de procedimientos para la prueba de sensibilidad antimicrobiana por el método
de disco difusión, frente a su control positivo; donde indica que cuando se utiliza
como antibiótico de control positivo sulfato de Gentamicina 10 ug; se categoriza
como Resistente cuando el halo de inhibición se encuentra <12mm; Intermedio
cuando el halo de inhibición es de 13 – 14 mm y Sensible si es >15mm.
Con estos resultados encontrados se calculó el porcentaje de inhibición para
determinar la actividad antibacteriana, obteniéndose en las concentraciones de
75mg/ml, 150mg/ml y 300mg/ml. unos porcentajes de inhibición del crecimiento
bacteriano de 34.29%, 38.29% y 45.71% respectivamente. Según la clasificación
de la actividad antibacteriana por porcentaje de inhibición, se considera Inactivo
si el porcentaje de inhibición es <40%, Poco activo (40 – 50%), Moderadamente
activo (51 – 75%) y con Buena actividad >76%; lo cual solo al grupo tratado con
concentración de 300mg/ml obtuvo POCA ACTIVIDAD antibacteriana (<76%).
108
166
Al respecto, Bhandari y otros . indicaron resultados positivos en la actividad
167
anti estafilocócica del extracto seco de Berberis asiática. Martínez y otros .
encontraron actividad bactericida frente a Echerichia coli con una concentración
de 0,40 mg/mL de la fracción "Y" del producto liofilizado de A. occidentale, lo
cual demuestra que los extractos acuosos y alcohólicos de A. occidentale poseen
actividad antibacteriana.
Tello J. 168 realizo una tesis de pregrado donde utilizó el aceite de la cascara de la
nuez de A. occidentale frente a S. aureus y encontró actividad antimicrobiana
mayor que su control positivo (clorhexidina) y manifiesta que presenta en su
composición un alto contenido de ácido anacardico tales como cardol y cardinol
que son sustancias que presentan actividad antibacterianas, y que las hojas
carecen de dichos compuestos en su estructura.
169
Resultados similares fueron los encontrados por Omojasola P, Awe S.
quienes evaluaron la actividad antibacteriana de extractos acuosos y etanólicos
de hojas de A. occidentale, revelando la presencia de saponinas, taninos y
compuestos fenólicos, además de la presencia de alcaloides y glicosidos; y
respecto a la actividad antibacteriana fue considerada con poco actividad.
Quizás la compleja estructura de la pared celular de las bacterias gram positivas,

constituida por 5 a 10 % de muranilpéptidos que actúa como barrera, influyó en
una menor sensibilidad del producto para estas concentraciones. Asimismo, la
obtención y purificación de los principios pudiera incrementar su potencial
antibacteriano.
109
III. CONCLUSIONES
Según los resultados obtenidos en el presente trabajo se puede concluir que:
 Se obtuvo el extracto alcohólico de las hojas de Anacardium occidentale

Linn. (Casho) empleando el método de maceración en frio a temperatura
ambiente.
 El rendimiento del extracto alcohólico de las hojas de Anacardium

occidentale L. (casho) fue de 10.64 %.
 Los diámetros de la zona de inhibición del extracto alcohólico de hojas de

Anacardium occidentale L. (Casho), fue de 6.0mm., 6.7mm., 8.0 mm a las
concentraciones de 75, 150 y 300 mg/ml., respectivamente, los cuales
obtuvieron como resultados RESISTENTE, por encontrarse por debajo del
parámetro de comparación según control positivo (<12 mm = Resistente).
 No se evidencio concentración mínima inhibitoria a las dosis probadas.
110
IV. RECOMENDACIONES
 Realizar fraccionamiento, aislamiento y purificación de los componentes más

abundantes que se encuentre en la especie botánica de las hojas de
Anacardium occidentale L. (casho) como alcaloides, flavonoides y
triterpenos-esteroides para probar cuál de las fracciones tiene un mejor efecto
antibacteriano ò determinar un sinergismo entre sus componentes ya
mencionados.
 Realizar diseños de ensayos antibacterianos con diferentes controles positivos

como oxacilina, penicilina y eritromicina , con el objetivo de profundizar su
estudio.
 Determinar qué factores como concentración, temperatura y tiempo de

incubación durante el desarrollo de la evaluación puedan interferir en el
ensayo realizado.
 Desarrollar otros ensayos para corroborar la sensibilidad antimicrobiana de

esta especie (casho) y así validar los resultados obtenidos en este estudio.
111
V.- BIBLIOGRAFIA
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4.- La penicilina el hallazgo que cambio la historia de la medicina

Disponible en: http://www.educastur.princast.es/.../
132
ANEXOS ___________
133
ANEXO Nº 01
DATOS DE PASAPORTE DE COLECCIÓN DE ESPECIES DE LAS

PLANTAS MEDICINALES EN ESTUDIO
Nº de Ficha: ……………….
FICHA DE CAMPO
DATOS GENERALES:
Lugar de colección:……………..…..Distrito:……………..…….Provincia:…………...….…
Fecha:………………………………..Tipo de Bosque:………………………………………..
Coordenadas UTM: (X)…………………..………… (Y)…………………………………..…..
Tipo de Suelo:……………………………..Otras características:…………………………....
Nombre del Colector:……………………………………………..Nº Colección:……………..
TAXONOMÍA:
Familia Vegetal:………………..……………Nombre Científico:………………….………….

Nombre Vulgar:…………………………………………………………………………………..
CARACTERISTICAS VEGETALES:
Habitad:…………………………..Estadio Productivo………………………………….……..
Posición de Hojas:……………….Presencia de Órganos Accesorios en Hojas:………….
Forma del Tallo:………………….Órganos Accesorios en Tallo:……………………………
Características de la Corteza:………….…Látex:………….Color de Látex:………….…....
Tipo de Inflorescencia:………….Posición de Inflorescencia:…………..............................
Tipo de Flor por Sexo:.................Nº de Pétalos:................Unión de Sépalos:…….……..
N de Estambres:..........................Posición de Estambres:…….........................................
Posición de Ovarios:…………....................Nº de Carpelos:…………………….…..………
Tipo de Fruto:…………………….Consistencia:…………..…..Dehiscencia:…….……..….
DATOS ETNOFARMACOLÓGICOS:
Uso Medicinal 1:………………………….…Parte Usada:……………………..................

Cantidad Usada 1:…………………………… Forma de Preparación:………….................
Uso Medicinal 2:………………………….…Parte Usada:……………………..................
Uso Medicinal 3:…………………………… Parte Usada:……………………...................
COLECTA DE MATERIAL BIOLÓGICO:
Peso:……………………………………………………………………………………...
Parte Colectada:………………………………………………………………………...
Observaciones:…………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………………………………
134
ANEXO Nº 02
SISTEMA DE CLASIFICACIÓN DE Adolf Engler, MODIFICADO POR H.

Melchior (1964), DE Anacardium occidentale L.
135
ANEXO Nº 03
CERTIFICADO DE IDENTIFICACIÓN TAXONÓMICA DE Anacardium

occidentale L.
136
ANEXO Nº 04
UBICACIÓN GEOGRAFÍA DEL CENTRO POBLADO CRUZ DEL SUR
137
ANEXO Nº 05
DIAGRAMA DE FLUJO DE LA OBTENCIÓN DEL EXTRACTO

ALCOHÓLICO DE LAS HOJAS DE Anacardium occidentale Linn. (CASHO)
Recolección de la planta
Selección de partes útiles
Secado a 37ºC-8 días
Triturado ± 1cm
Maceración dinámica a T°.

Extracción con alcohol Ambiente con renovación de
solvente cada 7 días hasta
agotamiento
Filtración
En Rotavapor por
Concentración
eliminación del Solvente
Mediante presión reducida
(690mm Hg) a 55°C
Extracto alcohólico
(Almacenar en refrigeración a 4ºC)
138
ANEXO Nº 06
DIAGRAMA DE FLUJO DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA

(Difusión en disco Kirby – Bauer)
139
ANEXO Nº07
RECOLECCION DE LAS HOJAS, DE Anacardium occidentale L. (casho)
140
ANEXO Nº 08
SECADO DE LAS HOJAS DE Anacardium occidentale L. (casho)
141
ANEXO Nº 09
TRITURADO DE LAS HOJAS SECAS DEL Anacardium occidentale L.

(casho)
142
ANEXO Nº 10
PESADA DE LAS HOJAS (TRITURADAS) DE Anacardium occidentale L.

(casho)
143
ANEXO Nº 11
MACERADO DE LAS HOJAS DE Anacardium occidentale L. (casho)
144
ANEXO Nº 12
FILTRADO DE LA MACERACION DE LAS HOJAS DE Anacardium

occidentale L. (casho)
145
ANEXO Nº 13
ELIMINACIÓN DE UN DISOLVENTE A PRESIÓN REDUCIDA

(ROTAVAPOR)
Fuente: http://rodas.us.es/file/116d23b8-c458-2012-481b-
2357fffa2b34/2/modulo_general_SCORM.zip/pagina_19.htm
146
ANEXO Nº 14
CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO DE LAS HOJAS DE

Anacardium occidentale L. (casho) EN ROTAVAPOR
147
ANEXO Nº 15
SECADO DEL EXTRACTO ALCOHOLICO DE LAS HOJAS DE Anacardium

occidentale L. (casho)
ANEXO Nº 16
ESTERILIZACION DE LOS MATERIALES
148
149
ANEXO Nº 17
ESTERILIZACION DE LOS DISCOS DE SENSIBILIDAD
ANEXO Nº 18
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN STOCK DEL EXTRACTO ALCOHOLICO

DE LAS HOJAS DE Anacardium occidentale L. (casho)
150
151
152
ANEXO Nº19
OBTENCION DE LA MACRODILUCION DEL EXTRACTRO ALCOHÓLICO

DE LAS HOJAS DE Anacardium occidentale L. (casho)
153
ANEXO Nº 20
PREPARACION DEL AGAR MUELLER HINTON, AGAR TRIPTICASA DE

SOYA Y CALDO TRIPTICASA DE SOYA
a. PREPARACION DEL AGAR MUELLER HINTON
Composición g/L
Infusión de carne 2.0
Hidrolizado de caseína 17.5
Almidón 1.5
Agar-Agar 17.0
Preparación:
Disolver 38g del polvo en un litro de agua purificada. Mezcle bien. Caliente agitando
frecuentemente y hiérvala durante 1 minuto para disolver completamente el polvo.
Autoclave a 121°C durante 15 minutos. Evite calentar demasiado la solución.
Este lote de agar Mueller Hinton ha sido probado y cumple los límites de aceptación del
protocolo M6 actual publicado por el National Commitee for clinical Laboratory
Standars de Estados Unidos. Analice muestras del producto final para verificar su
rendimiento usando cultivos de control típicos y estables.
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. Para uso en
laboratorio
*pH final: 7.3±0.1 Higroscópico
* Mantener el envase bien cerrado.
154
b. PREPARACION DEL AGAR TRIPTICASA DE SOYA
Composición g/L
Peptona de caseína 15.0
Peptona de harina de soya 5.0
Cloruro sódico 5.0
Agar-Agar 15.0
Preparación:
Disolver 40 g del polvo en un litro de agua purificada. Mezcle bien. Caliente

ligeramente para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121°C durante 15
minutos. Evite calentar demasiado la solución.
*pH final: 7.3±0.2 Higroscópico a 25 °C
155
c. PREPARACION DEL CALDO TRIPTICASA DE SOYA

MEDIO DIGERIDO DE SOYA- CASEINA
Base para medio universal. Cumple con las especificaciones USP/EP/JP, si

procede.
Composición g/L
Digerido pancreático de caseína 17.0
Digerido papaínico de soya 3.0
Dextrosa 2.5
Cloruro sódico 5.0
Fosfato Dipotásico 2.5
Preparación:
Suspenda 30g del polvo en un litro de agua purificada. Mezcle bien. Caliente ligeramente
para disolver completamente el polvo. Autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Analice muestras del producto final para verificar su rendimiento usando cultivos de
control típicos y estables.
Formula aproximada * por litro
*Ajustada y/o suplementada en la medida necesaria para cumplir los criterio de
rendimiento.
Para uso en laboratorio
*pH final: 7.3±0.2 Higroscópico
Higroscópico * Manténgase el envase bien cerrado.
156
157
158
159
ANEXO Nº 21
TRANSPORTE DE LA MUESTRA Y MEDIOS DE CULTIVO
160
ANEXO Nº 22
Cepa Staphylococcus aureus
ANEXO Nº 23
ACTIVACION DE Staphylococcus aureus
161
162
ANEXO Nº 24
CEPAS ACTIVADAS DE Staphylococcus aureus
163
ANEXO Nº 25
PREPARACION DEL INOCULO DE Staphylococcus aureus
164
165
ANEXO Nº 26
PREPARACIÓN DEL ESTÁNDAR 0.5 ESCALA DE MAC FARLAND
Para estandarizar la densidad del inóculo se usa una suspensión de sulfato de bario
como Estándar de turbidez (0.5 de la escala de Mc Farland).
Para prepararlo proceda de la siguiente manera:
 Prepare dicho estándar agregando 0,5 ml de BaCl2 0,048M (1,175% P/V

BaCl2.2H2O) a 99,5 ml de H2SO4 0,18 M (0,36 N) (1% V/V).
 Verifique la densidad correcta del estándar usando un espectrofotómetro. La

absorbancia a 625 nm debería ser 0,08 - 0,10 para el estándar 0,5 de Mc Farland.
 Distribuya 4 - 6 ml dentro de tubos similares a los que va a usar para preparar

inóculos.
 Mantenga los estándares guardados a temperatura ambiente al abrigo de la luz.
 Agite vigorosamente el estándar antes de su uso para lograr una turbidez

homogénea.
 Reemplace o verifique la confiabilidad de los estándares mensualmente.
166
167
ANEXO Nº 27
PREPARACION DE LOS DISCOS INPREGNADOS CON EL EXTRACTO

ALCOHOLICO DE LAS HOJAS DE Anacardium occidentale L. (casho)
168
ANEXO Nº 28
AJUSTANDO LA TURBIDEZ DEL INOCULO CON EL ESTANDAR 0.5 DE MAC

FARLAND
169
ANEXO Nº 29
INOCULACION DE LAS PLACAS
170
ANEXO Nº 30
APLICACIÓN DE LOS DISCOS
171
ANEXO Nº 31
INCUBACION DE LAS PLACAS
172
ANEXO Nº 32
LECTURA DE LAS PLACAS
173

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA

TESIS PARA OPTAR EL TITULO DE:

―EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI-Staphylococcus aureus DEL

Ing. Reyna Gladys Cárdenas de Reátegui

Facultad de Farmacia y Bioquímica

―EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI-Staphylococcus aureus DEL

I.- MARCO TEÓRICO 27

1.1.6 Composición Fitoquímica 38

1.5.3.3 Clasificación según su estructura química 74

1.5.4 Mecanismos de Acción de Los Antibióticos 76

1.4 Procedimiento Experimental 85

1.4.5.1 Obtención del Extracto Alcohólico de las Hojas de 86

1.4.6 Determinación de La Actividad Anti- Staphylococcus aureus 87

1.4.6.1 Obtención de la cepa de Staphylococcus aureus 87

1.4.7 Prueba de susceptibilidad por difusión de disco 87

1.4.7.1 Esterilización de los materiales a utilizar 87

1.6 Técnicas Usadas en la Recolección de Datos 97

I.- RESULTADOS 101

5.1.- Referencias Bibliográficas 112

ANEXO Nº01: Datos de pasaporte de colección de especies de la planta medicinal en 134

ANEXO Nº8: Secado de las hojas de Anacardium occidentale L. (casho). 141

FIGURA N°01: Árbol de Anacardium occidentale L. (casho) 33

TABLA N° 01: Composición Nutricional del pseudo fruto 36

TABLA N° 06. Composición Química de la nuez de Anacardium occidentale L., (casho) 40

GRAFICO N° 1: Categorización del extracto alcohólico de Anacardium occidentale L, 104

MRSA : Staphylococcus aureus resistentes a la meticilina.

La actividad antibacteriana fue medida principalmente por el porcentaje de inhibición

Palabras claves: Anacardium occidentale Linn; Método de disco difusión en agar;

Silvia Margarita Gómez Seopa*&John Edward Pereira Sandoval*

Keywords; Cashew Linn , disk diffusion method in agar ; Antibacterial activity ;

*Bachelors in Pharmacy and Biochemistry

Por Protegerme y Darme la Fortaleza de seguir adelante a pesar de las

A mi Madrecita de mi vida Etelvina Seopa Babilonia

A mi Papacito Jaime Moises Gómez Guzmán por Protegerme y

A mis hermanos Jaime, Orlando, Tania y Sara por el apoyo, la confianza

A mis Abuelitos Pedrito Antonio Ceopa Linarez y Dolores Gongora

A mis sobrinos por la ternura y Alegria brindada.

A mi Fiel y Amado compañero Johncito

John Edward Pereira

A mi querida y Amada madre Carmen Rosario Sandoval Moreno.

Por darme la vida, quererme, orientarme y creer en mí en todo momento. Por

A mi padre Carlos Alberto Pereira Pinedo.

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