Tincion de Gram Reporte de Practica

UNIDAD ESPECIALIZADA EN ENERGÍAS RENOVABLES
Ingeniería en Energías Renovables
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Nombre del estudiante: Abraham Hernández

Fecha:9 abril 2018
Práctica No. 5
TINCIÓN DE GRAM
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio

de microbiología y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su
utilidad práctica es indiscutible ya que las referencias a la morfología celular bacteriana
(cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) al observar los microorganismos en el
microscopio, se basan justamente en la tinción de Gram. Esta tinción se denominada
así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Con base en
su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram
positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada
que ver con carga eléctrica, sino simplemente designan dos grupos morfológicos
distintos de bacterias). Las bacterias Gram positivas y Gram negativas tiñen de forma
distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.
La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así
como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que
confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula Gram positiva es gruesa y
consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido
teicoico. Generalmente, entre 80 y 90 % de la pared de la célula Gram positiva es
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peptidoglicano. La pared de la célula Gram negativa, por otro lado, contiene una capa
mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana
exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo entre el 10 y
el 20 % de la pared de la célula Gram negativa es peptidoglicano.
Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias

fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con
algún detalle la tinción de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre
el porqué de su funcionamiento. Las células Gram positivas, a causa de sus paredes
celulares más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables
al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo
así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo
quede atrapado dentro de la pared celular. Para poner de manifiesto las células Gram
negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color
rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las
células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram:

1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por
sí solo tiene poca afinidad con las células.
2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción las
células Gram positivas. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un
cálculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.
3) Cultivos más viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo
cristal violeta – yodo.
El carácter de Gram positivo no es siempre un fenómeno del todo o nada. Algunos
organismos son más Gram positivos que otros y algunos son Gram-variables, es decir,
unas veces Gram positivos y otras Gram negativos.
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OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Mostrar la importancia de una tinción para la diferenciación de bacterias basándose en

las propiedades estructurales de la pared celular, aplicando el mecanismo de la
coloración de Gram.
MATERIAL Y EQUIPO:
 Portaobjetos
 Mechero Bunsen
 Asa bacteriológica
 Vaso con agua destilada
 Gotero
 Microscopio
 Solución de cristal violeta
 Solución de agua-acetona
 Solución de lugol
 Solución de Safranina
 Aceite de inmersión
DESARROLLO Y OBSERVACIONES DE LA PRÁCTICA:
(Describe las actividades que desarrollaste en la práctica, te recomiendo agregar

imágenes de las evidencias)
Primero en el portaobjetos se aplica una gota de agua destilada después de la placa
Petri previamente sembrada con bacterias se toma una muestra con el asa
bacteriológica expuesta al mechero para garantizar una muestra 100% estéril , ya una
vez la muestra sobre el porta objetos se fijó la muestra exponiendo el porta objetos al
fuego hasta conseguir un aspecto de sedimentación.
Se aplica cristal violeta, al portaobjetos y se deja reposar un minuto. Luego se enjuaga
la muestra y se aplica lugol, de forma que cubra toda la muestra y se espera durante
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un minuto. Posteriormente el portaobjetos debe lavarse con una mezcla de alcohol y

acetona durante 30 segundos, esta mezcla de alcohol y acetona lo que hace es disolver
los excesos de lugol y violeta de genciana. Por último paso se somete a las bacterias
a una última tinción para teñir aquellas que son gram negativas de color rosa o rojo, se
aplica durante un minuto safranina y luego lavamos con agua.
Una vez terminada la tinción se deja secar el exceso de agua y podremos observar al
microscopio la tinción de las bacterias aplicando aceite de inmersión para usar el
objetivo x100.
Cultivo bacteriológico
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Toma de muestra con asa bacteriológica
Muestra observada x100 (GRAM --)
Página | 5
CONCLUSIÓN DE LA PRÁCTICA:
(¿Qué conclusiones personales puedes obtener de lo realizado en la práctica?, ¿Cuál

es el principal conocimiento que te aporta?)
El principal conocimiento que adquirir durante la práctica fue entender el proceso de
tinción de gram el a que se debe cada paso y por qué es importante hacerlo de forma
adecuada siguiendo los pasos al pie de la letra para tener una tinción correcta gram- o
una gram+
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CUESTIONARIO:
(Investiga y resuelve las siguientes preguntas, recuerda agregar la referencia de donde

obtuviste la información)
1. Menciona tres bacterias Gram positivas y tres bacterias Gram negativas.
Gram positivas
Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones localizadas y

posibles gastroenteritis.
Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el trayecto
respiratorio, así como de fiebre reumática.
Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal, endometritis y
neumonía.
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Gram negativas
Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, está involucrada en las llamadas
“diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal, sepsis e infecciones urinarias.
Neisseria gonorrhoeae. Conocidísima por ser la causante de la gonorrea, común
enfermedad de transmisión sexual.
Neisseria meningitidis. Peligrosa bacteria causante de meningitis y
meningocococemias, coloniza las vías respiratorias humanas y asciende a las
meninges por vía sanguínea.
Fuente:
http://www.ejemplos.co/20-ejemplos-de-bacterias-gram-positivas-y-gram-
negativas/#ixzz5CR2tLmNm
http://biologiamedica.blogspot.mx/2010/09/bacterias-gram-positivas-y-gram.html
2. Con apoyo de un dibujo indica las diferencias entre la pared celular de una bacteria
Gram positiva y una Gram negativa
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3. Si se usara la tinción de gram para teñir una levadura ¿Sería Gram positiva o Gram
negativa?
Las levaduras suelen comportarse como gram positivas. El color depende de la
composición de la pared celular de la levadura
Fuente : https://laboratoriodemicrobiologia.weebly.com/cuestionario3.html
4. ¿Por qué los microorganismos causantes de la tuberculosis no pueden teñirse por la

técnica de Gram?
Son bacilos aerobios estrictos, inmóviles, sin cápsula, que no forman esporas y se tiñen
con dificultad con la tinción de Gram (irregularmente grampositivos).
Página | 9
Para observar micobacterias, la tinción gram no va dar un resultado correcto , pues se

basa en la tinción diferencial, con cristal violeta y safranina, y las micobacterias poseen
una pared bastante impermeable debido a los lípidos que contiene y son ácido alcohol
resistentes.
5. Además de la safranina ¿Qué otro colorante de contraste se podría usar?
Fucsina en la tinción de gram
Fuente : https://cienciatoday.com/tincion-de-gram/
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Nombre del estudiante: Abraham Hernández

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio

Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias

Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram:

Mostrar la importancia de una tinción para la diferenciación de bacterias basándose en

DESARROLLO Y OBSERVACIONES DE LA PRÁCTICA:

(Describe las actividades que desarrollaste en la práctica, te recomiendo agregar

un minuto. Posteriormente el portaobjetos debe lavarse con una mezcla de alcohol y

Toma de muestra con asa bacteriológica

Muestra observada x100 (GRAM --)

(¿Qué conclusiones personales puedes obtener de lo realizado en la práctica?, ¿Cuál

(Investiga y resuelve las siguientes preguntas, recuerda agregar la referencia de donde

Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones localizadas y

4. ¿Por qué los microorganismos causantes de la tuberculosis no pueden teñirse por la

Para observar micobacterias, la tinción gram no va dar un resultado correcto , pues se

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