Laboratorio 1 Normas y Tinción Gram

UNIVERSIDAD DE ACONCAGUA 2020
CARRERA ENFERMERÍA
GUIA DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA
LABORATORIO N°1:
Tinción de Gram
LABORATORIO
Nº 1
“TINCIÓN DE GRAM”
Integrantes: Dennis Morales

Thamara Olguin
Tristan Espinoza
CARRERA ENFERMERÍA
LABORATORIO N°1:
Tinción de Gram
Introducción
Dentro de la microbiología nos encontraremos con una variedad de herramientas y

procedimientos para poder diagnosticar enfermedades infecciosas, dentro de esto
encontraremos una gran variedad de tinciones las cuales nos ayudara a la identificación
de agentes infecciosos como bacterias, paracitos entre otros.
La tinción de Gram es considerada una de las técnicas básicas en la valoración inicial

para muestras de análisis en bacteriología, donde a la ves debemos destacar que el
microscopio es de utilidad importante para esta técnica a demás de rutinaria, esto por que
va a entregar importante información a través de su gran resolución de visión que ayudara
a diagnosticar de una manera rápida los microorganismos. Aunque los microorganismos
vivos frescos se pueden observar directamente con un microscopio óptico, en la mayoría
de los casos es necesario teñirlos para que sea más fácil identificarlos mediante el uso de
tintes, asi poder identificar mas claramente algunas estructuras y sus reacciones lo que
nos permiten clasificar las bacterias.
Las bacterias son microorganismos unicelulares que conviven con los hábitos humanos.
En muchos casos, forman parte de nuestra flora y medio ambiente habituales sin causar
riesgos para la salud. En otros casos, las bacterias pueden ser patógenas, es decir, pueden
causar múltiples tipos de infecciones: cutáneas, abdominales y de otro tipo, para poder
identificarlas y tratarlas es necesario clasificarlas. Las diferentes clasificaciones cumplen
con diferentes criterios y características de las bacterias como morfología, metabolismo,
presencia de paredes celulares, etc. Una forma de distinguir las bacterias se basa en la
presencia de paredes celulares y para esto la técnica de tinción de Gram.
CARRERA ENFERMERÍA
LABORATORIO N°1:
Tinción de Gram
Introducción de tinción
Esta técnica se define como tinción diferencial porque utiliza dos tintes y divide las
bacterias en dos categorías principales: bacterias Gram negativas y bacterias Gram
positivas. La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de la
pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias que no se
tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una pared
más fina formada por menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en
lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras. Las Gram
positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran número de
capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un color violeta
intenso al microscopio y se clasifican como Gram positivas.
La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo de
antibiótico así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de atravesar la
pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o negativa se seleccionará
el antibiótico más eficaz.
Cómo hacer una tinción de Gram

El proceso es muy sencillo, y los pasos a seguir serían:
Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de algodón).

Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El lugol
y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la
pared de las células bacterianas.
Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos
segundos.
Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir las Gram
negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con un tono rosado
o rojo. Lavar con agua.
Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color violeta las
Gram positivas y de color rosa-rojizo las Gram negativas.
En el caso de las bacterias Gram positivas los complejos insolubles se quedan atrapados
entre las capas de peptidoglicano de la pared bacteriana, sin disolver y dando la coloración
morada característica al observarlas al microscopio. En cambio, en las bacterias Gram
negativas estos compuestos sí que se disuelven y pierden su color. Al microscopio se
verán incoloras o de color rosa-rojo, en función de si se ha añadido la fucsina al final de
la técnica de tinción de Gram. Entre las bacterias Gram positivas más frecuentes se
encuentran el Staphylococcus, el Streptococcus y el enterococo. Ejemplos de bacterias
gram negativas son la Escherichia coli y la Pseudomona aeuruginosa.
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LABORATORIO N°1:
Tinción de Gram
Las limitaciones de la técnica vienen dadas por las características de la muestra, el

protocolo de tinción y además el hecho de que algunas bacterias no presentan pared
celular. El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de
ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula
y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de
colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son
suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamados de tinción simple. Sin
embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células, es
el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción
Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterias pueden dividirse en dos
grupos: Gram positivas y Gram negativas. Esta tinción tiene gran importancia en
taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las
distintas bacterias.
Mientras que las bacterias Gram negativas son constantes en su reacción, los
microorganismos Gram positivos pueden presentar respuestas variables en ciertas
condiciones. Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias Gram positivas pierden
la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tiñen por la safranina
apareciendo como Gram negativas. Análogo efecto se produce en ocasiones por cambio
en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecución de la técnica. Por
este motivo, es preciso atenerse, en la práctica, al procedimiento establecido.
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Tinción de Gram
Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento de la Tinción Diferencial de Gram?

• Permite establecer dos grandes grupos bacterianos: Gram positivos y
Gram negativos. La diferencia entre ambos, reside en la estructura y
composición química de la pared celular, lo que permite la identificación
de causas o daños para el organismo humano.
2. ¿Cuál es la función que desempeña el Lugol en esta coloración?

• sirve como recubrimiento, impide la salida del cristal violeta por la
formación de un complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared bacteriana.
3. Escribir el nombre científico (Género y especie), de 5 bacterias Gram

positivas y 5 Gram negativas.
GRAM POSITIVA GENERO ESPECIE

Streptomyces toxytricini Streptomyces S. toxytricini
Listeria monocytogenes Listeria L. monocytogenes
Streptomyces achromogenes streptomyces S. achromogenes
Streptomyces fradiae Streptomyces S. fradiae

Bacillus anthracis Bacillus B. anthracis
GRAM NEGATIVA GENERO ESPECIE

Pseudomonas pseudomonas P. aeruginosa
aeruginosa
Neisseria gonorrhoeae neisseria N. gonorrhoeae
Escherichia coli escherichia E. coli
Salmonella bongori salmonella Salmonella bongori
Helicobacter pylori helicobacter H. pylori
4. Consultar la técnica de otra tinción diferencial.

• La tinción de Wright es una técnica que se emplea generalmente para la
diferenciación de elementos celulares de la sangre y es clasificada como
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LABORATORIO N°1:
Tinción de Gram
una tinción policromática, dado que puede teñir compuestos ácidos o

básicos presentes en una célula.
5. Explicar: ¿Por qué algunos microorganismos Gram positivos en un cultivo

joven pueden volverse Gram negativos cuando éste envejece?
• Porque la pared celular puede dañarse, motivo por el cual se altera el gram
de las baterías positivas, algunas bacterias tienen tiempos muy
prolongados de crecimiento lo cual en su atapa joven pueden presentar
características muy diferentes a cuando alcanza una proliferación
prolongada lo cual puede cambiar sus características y toda su estructura
en una gram negativa y hacerla patógena.

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La tinción de Gram es considerada una de las técnicas básicas en la valoración inicial

Cómo hacer una tinción de Gram

Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de algodón).

Las limitaciones de la técnica vienen dadas por las características de la muestra, el

1. ¿Cuál es el fundamento de la Tinción Diferencial de Gram?

2. ¿Cuál es la función que desempeña el Lugol en esta coloración?

3. Escribir el nombre científico (Género y especie), de 5 bacterias Gram

GRAM POSITIVA GENERO ESPECIE

Streptomyces fradiae Streptomyces S. fradiae

GRAM NEGATIVA GENERO ESPECIE

4. Consultar la técnica de otra tinción diferencial.

una tinción policromática, dado que puede teñir compuestos ácidos o

5. Explicar: ¿Por qué algunos microorganismos Gram positivos en un cultivo

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