"AÑO DEL DIÁLOGO Y R ECONCILIACIÓN NACION AL"

DIRIGIDO A: ESCUELA ACADEMICA DE TECNOLOGÍA MÉDICA

DE: KAREN GUERRERO VASQUEZ, INTERNO EN TECNOLOGÍA MÉDICA CON LA

ESPECIALIDAD DE LABORATORÍO CLÍNICO Y ANATOMIA PATÓGICA

Informe: TOMA DE MUESTRA

CODIGO: 2008157245

SEDE: HOSPITAL 1 TARMA

ASUNTO: INFORME DE ACTIVIDADES DE INTERNADO DEL MES DE ABRIL

TUTOR ACADEMICO: ANTONIO MARTIN PEREZ ALDAVE

Por medio de la presente es grato dirigirme a Ud. para saludarlo y a la vez hacerle
constar, sobre las actividades realizadas en el internado.

2018-"AÑO DEL DIÁLOGO Y R ECONCILIACIÓN NACION AL"

[Escriba aquí]
TABLA DE CONTENIDO

Escuela Académico Profesional de Tecnología Médica ................................. ¡Error! Marcador no definido.

Especialidad de Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica .......................... ¡Error! Marcador no definido.

BIOQUÍMICA CLÍNICA ................................................................................................................................... 5

1) espectrofotometria ......................................................................................................................... 5

Utilidad ................................................................................................................................................. 5

ESPECTRO DE LUZ ................................................................................................................................. 5

espectro de luz c / I0 – It ............................................................................................................................ 6

2) fundamento de la espectrofotometría ............................................................................................ 7

Un espectrofotómetro está compuesto por: ........................................................................................... 7

LEY DE LAMBERT Y BEER:.......................................................................................................................... 8

EN LA ACTUALIDAD: ................................................................................................................................. 8

ESPECTRO DE ABSORCION – eXPERIMENTO N° 1..................................................................................... 9

MÉTODOS MAS COMUNES USADOS EN EL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA PARA DETERMINAR LAS

CONCENTRACIONES DE DIVERSOS ANALITOS. ............................................................................................. 9

1 CURVA DE CALIBRACIÓN ..................................................................................................................... 10

2 formula del factor de calibración .................................................................................................. 11

2 ¿Cuándo HACER DILUCIONES? ...................................................................................................... 11

Curvas de Reacción:................................................................................................................................ 12

curvas de reaccion enzimatica............................................................................................................ 13

INTRODUCCIÓN:

En el siguiente informe de internado del

mes de abril en bioquímica, adjunto lo
realizado con respecto a Curvas de
reacción enzimática y Curva de
calibración.
OBJETIVOS:

• Consolidar y fundamentar, la
espectrofotometría, curva de
calibración y curvas de reacción
enzimática.

• Realizar una curva de calibración .

 BIOQUÍMICA CLÍNICA

1) ESPECTROFOTOMETRIA

UTILIDAD

Son métodos fotométricos utilizados en bioquímica para determinar

concentraciones desconocidas de diferentes solutos.

ESPECTRO DE LUZ

Comprende distintas longitudes de onda y se expresa en lambda.

La longitud de onda de luz visible es de 400 – 700 nm y comprende los 7 colores

del arcoíris:

✓ Índigo
✓ Violeta
✓ Rojo
✓ Verde
✓ Amarillo
✓ Azul
✓ Anaranjado

ASPECTOS IMPORTANTES :

Luz blanca o Pura: Dispone de todos los colores de la luz visible.

Negro: Considerado el no color, absorbe todos los colores.

 ¿POR QUÉ VEMOS UN DETERMINADO TIPO DE COLOR?

Un pigmento absorbe la luz que

puede ser la del sol o la de una
lampara de luz blanca, este pigmento
dispone de una concentración
determinada de partículas absorbe la
luz y deja pasar cierta proporción de
luz la cual conocemos como un haz de
luz (espectro de luz), y este espectro
de luz es reflejado como luz incidente
en nuestra retina ocular, luego esta
luz es interpretada por nuestro lóbulo
occipital del cerebro, donde luego
tenemos la sensación de ver un color.

ESPECTRO DE LUZ C / I 0 – I T

Si el soluto que se encuentra en el fototubo o cubeta, es H2O destilada, al momento de

interactuar con la luz incidente, este no presentará ninguna absorción, por no presentar
concentración alguna, por lo tanto, la luz transmitida (luz que sale) será el 100 %.

a) La luz I0 siempre será ≥ It (nunca menor)

b) A mayor concentración del soluto menor transmitancia
c) A menor concentración del soluto mayor transmitancia
2) FUNDAMENTO DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA

UN ESPECTROFOTÓMETRO ESTÁ COMPUESTO POR:

1. LAMPARA QUE EMITE: LUZ BLANCA O PURA

2. PRISMA ESPECIAL (FOTO COLIMADOR): QUE SEPARA LA LUZ BLANCA

EN LOS 7 COLORES DEL ARCOÍRIS.

3. FOTOCELDA O RENDIJA: DONDE SE ELIGE LA LONGITUD DE ONDA Y

SOLO PUEDE PASAR UN HAZ DE LUZ DE LOS OTROS 6.

4. FOTO TUBO O CUBETA: RECIPIENTE TRANSPARENTE ESPECIAL PARA

TRABAJAR CON LUZ, DE CIERTO DIÁMETRO YA PREESTABLECIDO, Y
QUE ALMACENARÁ DIVERSOS SOLUTOS.

5. UNA COMPUTADORA: QUE TRANSFORMARA LA LUZ TRANSMITIDA EN

UNA SEÑAL ELÉCTRICA Y LA EXPRESARA EN ABSORBANCIA.
 LEY DE LAMBERT Y BEER:

Postula que la absorbancia

Ley de Lamber: se relaciona con el espesor
Abs(DO): Log 10* Ii/It = ab del medio (el diámetro de la
cubeta)

Ley de Beer: Postula que la absorbancia

se relaciona con la
Abs(DO): Log 10* Ii/It = ac
concentración del soluto.

Las uniones de estas 2 teorías convergen en:

Abs(DO):abc

Que la absorbancia se relaciona tanto con el espesor del medio

y con la concentración del soluto.
EN LA ACTUALIDAD:

Aún se sigue utilizando la espectrofotometría, en los equipos modernos

automatizados de bioquímica y estos cumplen con la teoría de Lambert y Beer.

Poseen un espectrofotómetro.

Trabajan con cubetas (espesor del medio) que contienen reactivos y muestras
(concentración del soluto).
 ESPECTRO DE ABSORCION – EXPERIMENTO N° 1

En este experimento correremos varios solutos que provienen de una misma solución
madre o stock, leyéndolo a diferentes longitudes de onda, por ej. la glucosa, lo que se
busca determinar con el espectro de absorción es saber a qué longitud de onda presenta
mayor absorción (un pico máximo de absorción), para así posteriormente leerlo solo a
una determinada longitud de onda.

EN ESTE EJEMPLO, EL PUNTO MÁXIMO DE ABSORCIÓN ES DE 500 NM, POR LO TANTO

DE ACÁ PARA ADELANTE SOLO SE LEERÁ A 500 NM.

MÉTODOS MAS COMUNES USADOS EN EL LABORATORIO DE BIOQUÍMICA PARA

DETERMINAR LAS CONCENTRACIONES DE DIVERSOS ANALITOS.

La concentración de diversos solutos se puede determinar por dos métodos:

1) CURVA DE CALIBRACIÓN
2) Método analítico (factor de calibración)
 1 CURVA DE CALIBRACIÓN

*(ESTA IMAGEN ES DE MI PROPIA AUTORIA, LA SAQUE DE LA EXPOSICIÓN QUE REALICE SOBRE EL TEMA DE
CURVA DE CALIBRACIÓN)

Para poder armar una curva de calibración debemos disponer de concentraciones y

absorbancias conocidas, previamente diluidas a partir de una solución madre o stock, en
la cual se aplicará la formula siguiente para determinar las concentraciones iniciales.

Ci x Vi = Cf x Vf
Para armar una curva de calibración se necesita como mínimo 4 tubos con soluciones
diluidas.

Una vez que se determina las concentraciones y absorbancias de estas diluciones se

procede a graficar, en una hoja de papel milimetrado o en una tabla de Excel, dos ejes de
abscisas donde: en X se pondrán los datos de las concentraciones, y en Y los datos de las
diversas absorbancias, luego se unirán las intersecciones de las Abs y las [ ], la linealidad
recta o casi recta de las intersecciones, nos indica que nuestros valores están bien, una
vez terminado, recién se pueden correr absorbancias de solutos desconocidos, para que
de esta manera se determinen concentraciones respectivas.

En laboratorio también se considera que las curvas de calibración tienen como propósito
brindar un control de calidad a las pruebas que se correrán posteriormente por que
gracias a esto se determina si las pipetas están bien calibradas o si el reactivo no es el
adecuado, y la información que brinda es precisa y más detallista.
 2 FORMULA DEL FACTOR DE CALIBRACIÓN

En el método analítico se busca determinar la concentración de un soluto desconocido

a través de una formula.

2 ¿CUÁNDO HACER DILUCIONES?

Las diluciones se realizan cuando la concentración y absorbancia de una muestra

problema sobrepasan los valores de los estándares.
CURVAS DE REACCIÓN:
CURVAS DE REACCION ENZIMATICA

Las curvas de reacción de los equipos bioquímicos tienen como fundamento la

cinética enzimática, donde el pico constante de la curva, se deberá a que las
enzimas están en un punto máximo de trabajo y todas están con su respectivo
sustrato, esto hace que el desplazamiento de la curva en un determinado punto
sea recto y horizontal, de acuerdo al tipo de reacción enzimática y del método
empleado, la gráfica de la curva varia en algunas pruebas, como por ejem: en las
transaminasas y las pruebas en donde las lecturas son de dos o más puntos.