Hepatitis B

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CIUDAD JUÁREZ
Instituto de Ciencias Biomédicas

Laboratorio de Microbiología II
Hepatitis B
Alejandra Soriano Cruz 161262
Resumen
El virus causante de la hepatitis B pertenece a la familia hepadnaviridae y es el único que

contiene un genoma de ADN. Este virus contiene 3 antígenos importantes: HbsAg, HbcAg y
HbeAg siendo el HbsAg o de superficie el utilizado para el diagnóstico. La técnica ELISA se utiliza
para detectar anticuerpos de forma macroscópica. Es muy sensible y sencilla de realizar. En esta
práctica, se desarrollan la técnica de ELISA para el diagnóstico del virus de la hepatitis B en
suero humano y para la comprensión de su fundamento.
Objetivos: El alumno desarrolle dos técnicas serológicas diferentes, para el diagnóstico del
Virus de la Hepatitis B en suero humano y comprenda el fundamento.
Introducción: frecuentemente utilizado para el diagnóstico

de VHB, aunque también contiene los
La hepatitis B es un virus, el único de
antígenos HbeAg (de envoltura) y el HbcAg
genoma ADN, que pertenece a la familia
(central) que a su vez son importantes para
hepadnaviridae (Alarcón, 2016).
el virus (Alarcón, 2016).
Hepatitis B es causado por hepadnavirus
La técnica de laboratorio ELISA es un
(VHB) que se puede transmitir de forma
método de amplificación sensible que utiliza
parenteral con agujas o sangre, causa
una enzima como molécula marcadora que
ictericia progresiva por 3 meses, afecta
se une a un anticuerpo secundario. El
mayormente el hígado, pero también puede
fundamento detrás de la prueba es crear una
afectar riñón y páncreas. Las células
reacción antígeno-anticuerpo para generar
infectadas por VHB secretan grandes
un precipitado coloreado.
cantidades de HbsAg (Murray, 2009). El
HbsAg es el antígeno de superficie y el más
Esta técnica se utiliza comercialmente en La replicación viral se inicia con la
pruebas de embarazo y para detectar adherencia del virus al hepatocito por medio
infecciones (Alberts, 2004). de la proteína Pre-S1; tras penetrar en la
célula, el DNA se convierte en DNA cerrado
En la práctica se utilizó esta técnica y los
circular e inicia la replicación,
resultados fueron observables
completándose la cadena incompleta que se
macroscópicamente (Olivas, 2015).
transcribe a RNA pregenómico y
Descubierto en 1965 por Blumberg, es un sintetizándose a través de la transcriptasa
virus de forma esférica de 42 nm de diámetro inversa una nueva cadena negativa de DNA
con dos zonas, una interna de 27 nm viral para, posteriormente generarse la
denominada núcleo o core, donde se positiva. En el proceso de transcripción se
encuentra el genoma, y una más externa de han identificado cinco clases de estructuras
composición lipoproteica. El VHB es un virus genómicas. (IMSS, 2004)
DNA y se clasifica dentro del orden de los
Clínicamente la infección por VHB puede
pararetrovirus, género Hepadnavirus. La
manifestarse como uno de los siguientes
estructura genómica del VHB está formada
cuadros.
por dos cadenas de DNA de 3200
nucleótidos, una negativa completa y otra  Hepatitis aguda
incompleta, positiva. Dentro del genoma se  Portador asintomático
distinguen cuatro fragmentos de lectura  Hepatitis crónica
abierta (ORF) denominados S/pre-S, - Hepatitis crónica B HBeAg
Core/pre-C, P y X. El primero de ellos positiva
codifica tres proteínas del antígeno de - Hepatitis crónica B HBeAg
superficie la SHBs, MHBs y LHBs. El negativo
segundo, denominado Core/pre-C, sintetiza
una proteína de 183 a 185 aminoácidos
donde se identifican dos zonas la pre-C y C. Materiales y Métodos:
Una transcripción parcial de este gen da
Se utilizaron 6 pozos para ELISA; suero de
lugar a la formación del llamado antígeno e
4 diferentes sujetos; 1 control negativo y 1
(HBeAg). El ORF P sintetiza la DNA
control positivo; solución para lavar; solución
polimerasa y el ORF X sintetiza la proteína
revelado y solución de parada.
HBx, que es exclusiva de los Hepadnavirus
que infectan a mamíferos, con función Se colocó 100 µL de suero y control positivo
transcripcional. (ACS, 2017) en cada pozo respectivamente; se agregó 50
µL conjugado; se incubó por una hora a 37 ejemplo la quimilumiscencia, la cual se basa
grados centígrados; se lavó 5 veces; se en el mismo fundamento de ELISA, en la
agregó 100 µL de solución de revelado; se diferencia de que utiliza un compuesto que
incubo por 30 minutos en la oscuridad; se genera un destello al encontrarse en
agregó 100 µL de solución de parada. Los contacto el Antígeno de superficie con el
resultados se leyeron valorando la anticuerpo, el cual es medido por equipo
intensidad del color en comparación con los especial.
controles (Olivas, 2015).
Conclusión
Resultados:
Para esta práctica se reforzó el conocimiento
acerca de este virus de gran importancia
médica y se pudo llevar a cabo una
metodología correcta para el diagnóstico de
este agente patógeno, la cual es
imprescindible en la práctica médica y de
laboratorio clínico. También se cumplieron
Imagen 1: Resultados de ELISA para el con los resultados esperados, pues el
diagnóstico de hepatitis B. 3 muestras y una compañero no mostraba ningún síntoma
muestra control de color amarillo claro característico de la enfermedad, ni tampoco
negativas contaba con antecedentes médicos
Discusión Cuestionario
Los resultados negativos fueron debido a 1.Haga un esquema del VHA y uno del VHB.
que al no existir el antígeno de superficie o
VHA VHB
Australia del virus de la hepatitis B, no hubo
Familia Picornavirid Hepadnavirida
una unión del conjugado al pozito, por lo cual
ae e
al llevarse a cabo los lavados se removió
Género Hepatovirus Orthohepadna
toda la enzima y al agregarse el sustrato no
virus
produjo color alguno, pues no hubo una
Genom ssRNA dsDNA
metabolización del peróxido de hidrógeno,
a
reactivo que se utilizó como cromógeno.
Enf. Nunca Frecuente
Es importante hacer mención que pueden Crónica
usarse otros métodos para el diagnóstico
serológico de la hepatitis B, como por
Transm Consumo Exposicion a notificaron 854 casos con una
isión de agua o sangre, incidencia nacional de 0.8 por cada
alimentos semen y otros 100 000 habitantes donde los
contaminad líquidos estados con mayor incidencia fueron;
os, corporles Quintana Roo con 5.5, Yucatán con
relaciones infecciosos, 4.1, Sinaloa 4.0, D.F 1.7, Colima 1.
sexuales de madre a De acuerdo a la distribución por
hijo, sexo, los hombres reportaron el
transfusiones 67.7% de los casos y las mujeres
y consumo de 32.3%.
drogas  Se estima que en México hay de
Fecal-Oral Parenteral 400,000 a 1´400,000 personas
infectadas (anti-VHC positivos) y de
2. Investigue la incidencia del virus de la éstos 200,000 a 700,000 presentan
Hepatitis A, B y C, en México. viremia activa y requieren
 Cifras de la Dirección General de tratamiento antiviral (11), los
Epidemiología de la Secretaría de genotipos de VHC que predominan
Salud, indican que en los últimos 10 son el 1a y el 1b y en una menor
años, en México la hepatitis A tiene proporción el 2a y el 3b,
una incidencia de 16.8 por cada 100 desafortunadamente los pacientes
mil habitantes. El grupo de edad más que presentan genotipo 1b son más
afectado es de 5-9 años con una resistentes al tratamiento con
incidencia de 69.0 por cada 100 000 interferón y ribavirina.
habitantes seguido del de 1-4 años y
3. Investigue el riesgo de contraer cáncer
de 10-14 con una incidencia de 52.0
hepático en portadores de Virus de la
y 29, respectivamente. La mortalidad
Hepatitis A, B y C
varia de 0.1 a 0.3 % y en adultos
 A escala mundial, el factor de riesgo
mayores de 50 años al 1.8%
más común del cáncer de hígado es
 La tendencia de la VHB se mantuvo
la infección crónica (a largo plazo)
contaste en los últimos 10 años: el
con el virus de la hepatitis B y el virus
2005 fue el año con menor número
de la hepatitis C (HBV y HCV, por sus
de casos, se reportaron 626, en
siglas en inglés). Estas infecciones
contraparte el 2008 el que más casos
causan cirrosis del hígado y son las
reporto con 1,107. Para el 2009 se
responsables de que el cáncer de David Navarro Ortega, A. G. (2009).
hígado sea el tipo de cáncer más Diagnóstico de la Infección por el
común en muchas partes del mundo. Virus de la Hepatitis B: Reactividad
Las personas infectadas con ambos Aislada del Antígeno de Superficie.
virus tienen un alto riesgo de padecer Hospital Clínico Universitario de
hepatitis crónica, cirrosis y cáncer de Valencia, 1-5.
hígado. El riesgo es aún mayor si
George Papatheodoridis, M. B. (2012). Guía
consumen bebidas alcohólicas en
de práctica clínica de la EASL:
exceso.
Tratamiento de la infección crónica
4. Mencione otras técnicas comerciales por el virus de la hepatitis B. Journal
utilizadas para el diagnóstico del virus de la of Hepatology, 167-185 Vol. 57.
Hepatitis-B. Compare su sensibilidad, su
Weiner Laboratorios S.A.J.C . (2011).
especificidad y otros aspectos.
HbsAg ELISA - Ensayo
 IgM anti-HBc-positivo o HBsAg- inmunoenzimático (ELISA) para la
positivo, e IgM anti-VHA negativo, detección del antigeno de superficie
mediante la determinación de la del virus de la hepatitis B (HbsAg). .
presencia del antígeno con una Wiener Lab, 1-12.
prueba de neutralización con
anticuerpos o detección de genoma
viral mediante amplificación de Alberts y col., 2002, Molecular Biology of
ácidos nucleícos. the Cell (4ª ed.), Garland Publishing, New
York
Murray, Patrick R.; Rosenthal, Ken S.;

Bibliografía:
Pfaller, Michael A. 2009. Microbiología
Medica. (6ta ed.). Elsevier, España.
Alarcón, D. L. (2016, 09 05). Clase de

Microbiología II - Laboratorio. Cd. Olivas Enríquez, E. 2015. Manual de
Juárez, Chihuahua, Mexico. Practicas, Laboratorio de Microbiología II.

Academia de Microbiología y Parasitología.
Universidad Autónoma de Ciudad Juárez.

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El virus causante de la hepatitis B pertenece a la familia hepadnaviridae y es el único que

Virus de la Hepatitis B en suero humano y comprenda el fundamento.

Introducción: frecuentemente utilizado para el diagnóstico

Murray, Patrick R.; Rosenthal, Ken S.;

Alarcón, D. L. (2016, 09 05). Clase de

Juárez, Chihuahua, Mexico. Practicas, Laboratorio de Microbiología II.

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