Manual de Procedimientos para Analisis D PDF
Manual de Procedimientos para Analisis D PDF
Manual de Procedimientos para Analisis D PDF
Contenido
Manual de Procedimientos para Análisis de Calidad de la leche.............................. 1
1. Introducción ............................................................................................................................. 2
2. Objetivos .................................................................................................................................. 3
2.1. Objetivo General ................................................................................................................ 3
2.2. Objetivos específicos ......................................................................................................... 3
3. MARCO TEÓRICO ................................................................................................................. 4
3.1. La Leche. ........................................................................................................................... 4
3.2. Leche para queso. .............................................................................................................. 4
3.3. Composición Química de la leche de diferentes razas de vacas (%). ................................ 5
3.4. Factores que afectan la composición de la leche. .............................................................. 5
3.5. Contaminación de la Leche. .............................................................................................. 6
3.5.1. Formas en que se Contamina la Leche. ...................................................................... 6
3.5.2. Glándula Mamaria. ..................................................................................................... 6
3.5.3. Piel de los Animales Lecheros. .................................................................................. 7
3.5.4. Recipientes. ................................................................................................................ 7
3.5.5. Manos de los Ordeñadores. ........................................................................................ 7
3.5.6. Otros Orígenes de Microorganismos en la Leche. ..................................................... 8
3.6. ¿Qué es leche de calidad? .................................................................................................. 8
3.7. Calidad Composicional...................................................................................................... 8
3.8. Calidad Higiénica. ............................................................................................................. 9
3.9. Defectos de la leche provocados por microorganismos. ................................................... 9
4. ANÁLISIS FÍSICO-QUÍMICOS DE LA LECHE. ............................................................... 11
4.1. Análisis Organoléptico ...................................................¡Error! Marcador no definido.
4.2. Prueba de Alcohol en la leche ......................................................................................... 13
4.3. Determinación de la Densidad de la leche....................................................................... 19
4.4. Determinación de la acidez.............................................................................................. 22
4.5. Medidas del pH ................................................................................................................ 27
4.6. Pruebas de Plataforma (Grasa, solidos no grasos, proteínas, lactosa, temperatura, agua
agregada, pH, punto de congelación, solidos, densidad) ........................................................... 31
5. ANÁLISIS HIGIÉNICO - MICROBIOLOGICO DE LA LECHE. ...................................... 34
5.1. Prueba de la Reductasa: (Reducción del azul de metileno) ............................................. 35
6. DETALLE TECNICO POR ANALISIS REALIZADO ........................................................ 41
7. Cristalería General de Trabajo. .............................................................................................. 44
8. Términos técnicos y definiciones. .......................................................................................... 46
1. Introducción
La leche es un alimento con alto valor nutritivo, con un alto contenido de agua y un
grado de acidez neutral (pH 6,7) por lo que viene a ser un excelente medio para el
desarrollo de microorganismos y muchas fuentes de contaminación, por lo que se
deben realizar pruebas para medir la calidad de la leche y de esa forma proteger al
consumidor y obtener de forma constante, productos seguros para la salud y de calidad.
2. Objetivos
3. MARCO TEÓRICO
3.1. La Leche.
Es el producto íntegro del ordeño completo e interrumpido de una hembra lechera sana,
bien alimentada y no fatigada, ha de ser recogida higiénicamente y no debe contener
calostro.
Para obtener un producto de buena calidad es indispensable que la materia prima, sea
de buena calidad, por lo que la producción de buenos quesos requiere de leche de
buena clase. La leche para queso debe contener la cantidad de proteína coagulable, lo
cual normalmente ocurre al décimo o décimo primer día después del parto, tener una
proporción equilibrada de sales minerales, especialmente buena cantidad de calcio
disponible, contar con poca cantidad de microorganismos, poseer la capacidad de ser
coagulada en forma rápida por la quimosina o pastilla de cuajo, estar libre antibióticos,
detergentes y desinfectantes.
Desde el ordeño hasta que llega al consumidor o se elaboran sus productos, en la leche
caen muchos y diferentes microorganismos que, con una conservación duradera
aumentan la microflora y pueden provocar cambios, como son: aumento de acidez,
coagulación, etc., ya que la leche es un medio apropiado para el desarrollo de muchos
microorganismos.
3.5.4. Recipientes.
Se entiende por leche de calidad a la que proviene de vacas sanas, bien alimentadas y
que reúne las siguientes características:
La leche está constituida por un 12% de sólidos totales (grasa butirosa, proteína,
lactosa, y minerales.) y por un 88% de agua.
caseína flocula; se dice entonces que la leche ¨se corta¨. A los 60-70 ºD, el fenómeno
se produce a temperatura ambiente.
Los defectos más corrientes son acidificación, coagulación con acidez baja, proteólisis,
o putrefacción, lipólisis o enranciamiento, modificaciones del color, aumento de la
viscosidad y sabores diversos.
Las apreciaciones analíticas más inmediatas son las sensoriales. Por ejemplo la
degustación de leche fresca procedente de animales sanos proporciona un sabor dulce,
ligeramente azucarado y frecuentemente aromático; por el contrario la leche procedente
de animales enfermos tiene un sabor salado y áspero.
La prueba del olor y sabor depende mucho del factor individual, pero en general el olor
anormal aparece cerca de 3 horas antes de que la leche coagule a la prueba de la
ebullición.
Grado 4: sabor fuerte a hierba y olor ligero a rancio-oxidado............. 4 Mala (Se aconseja
rechazar)
Procedimiento:
1° En un tubo de ensayo se mezclan 2 ml de leche + 2 ml de alcohol etílico al 78 %
de pureza, invirtiéndose suavemente ambos líquidos.
Resultados:
La leche fresca de buena calidad no experimenta ninguna alteración al ser
mezclada a partes iguales con el alcohol de la concentración señalada y se
desliza a lo largo de las paredes del tubo, sin dejar rastro alguno de grumos
(caseína), se indica como alcohol negativo.
Si hay precipitado, ósea grumos (caseína) la prueba es positiva lo cual indica que
la leche no es apta para procesarla a altas temperaturas 138 a 140ºC.
El alcohol actúa deshidratando los coloides de proteínas, los factores que afectan esta
prueba son las siguientes:
Leches con elevada carga bacteriana por malas prácticas de ordeño limpio y
recipientes mal lavados y desinfectados.
Mucho tiempo desde la transportación de la leche desde las finca, hasta el centro
de acopio de leche. (Por la exposición de las pichingas al sol, el desarrollo
bacteriano es favorable)
Por tal razón los resultados de esta prueba pueden tener mayor posibilidades de
ser positivos en rodeos estaciónales (elevado % de animales a principio o final
de su lactancia), esto se acentúa en los rodeos constituidos por razas con mayor
contenido de proteínas en la leche.
NOTA:
Estos resultados se deben corroborar y respaldar
con la prueba de acides “Dornic” en el laboratorio
por titulación con Fenolftaleína.
Instrumentos e insumo:
Procedimiento:
Resultados.
Sí la densidad se encuentra 1037-1040 g/L o más esto indica que la leche fue
adulterada, agregándole sustancias como maicena, leche en polvo, o
descremada, etc.
Poco después del ordeño, la leche muy fresca tiene una reacción próxima a la
neutralidad.
Esta prueba mide realmente mediante una valoración volumétrica la cantidad de ácido
láctico que se ha producido a partir de la lactosa por intervención de los
microorganismos.
Instrumentos:
Un acidímetro Dornic.
Una bureta con división directa en grados Dornic relativa a 10 ml de leche.
Un frasco de polietileno receptor del hidróxido de Sodio a 0.1N.
Un cuenta-gotas para la fenolftaleína.
Una pipeta de 9 ml para la leche.
Reactivos:
- Solución alcohólica de fenolftaleína al 2 %.
Procedimiento:
Resultados:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
“+” “ ” “ ” “+”
(Ácida) (Neutro) (Alcalina)
Cuanto más bajo sea el pH (más próximo a 0), más fuerte será la acidez actual (activa);
cuanto más alto sea, por encima del 7, más considerable será la alcalinidad actual.
Procedimiento.
Método por:
1° Se enciende el aparato.
3° Se retira y se apaga, luego se enjuaga con agua destilada para evitar la acumulación
de residuos de leche en el electrodo del equipo.
Resultado:
Son muchos los microorganismos que metabolizan la lactosa como sustrato y la utilizan
dando lugar a compuestos de menor masa molecular. Las fermentaciones que
producen ácido láctico son las más importantes, pero hay otras fermentaciones que
tienen también importancia considerable.
La leche de vaca presenta un pH: de 6,6 el rango más frecuente está entre 6,5 y 6,7
(normalmente, la leche con pH de 6,8 ó más debe ser considerada proveniente de una
ubre con mastitis o que le han agregado compuestos alcalinos; por otro lado, si la leche
tiene pH de 6,4 al menor es posible que contenga calostro o que este acida por acción
microbiana.) siendo la acidez total debida a una suma de tres reacciones fundamentales
y a una cuarta de carácter eventual. Estas son:
Las tres primeras representan la “acidez natural” de la leche. La cuarta puede existir
debido a condiciones higiénico-sanitarias no adecuadas.
No haga caso de los resultados recibidos inmediatamente. Haga una segunda medición
con una nueva porción de la misma muestra. Cuando la medición es terminada, la
muestra retorna al soporte de muestra y la pantalla mostrara los resultados.
Dónde:
Consta de tres pasos en ese orden. 1-Enjuague de residuos de leche. Llene el vaso con
agua, póngalo en el hueco del analizador y empiece la limpieza con el botón B.
Después de terminarla vierta el agua contaminada fuera del analizador (repetir hasta
que el agua salga clara antes de utilizar la solución alcalina).
2-Limpieza con una solución alcalina o acido. Llene el vaso una solución alcalina tibia
(50-60 grados Celsius). Póngalo en el hueco del analizador e inicie la limpieza con el
botón B. Después de terminado, bote el líquido contaminado.
3-Enjuague con agua. Llene el vaso con agua póngalo en el hueco del analizador e
inicie el comando de limpieza con el botón B. Después de terminado bote el agua
contaminada. Ahora el equipo está listo para trabajar.
El detergente alcalino (recipiente azul) se utilizara diario después de cada jornada de
análisis y el ácido (recipiente rojo) se utilizara semanal. Ambos se harán en una
concentración de 3% en un litro agua.
Se basa en la observación del cambio de color que sufre el azul de metileno, las
bacterias decolorarán el azul de metileno al cabo de cierto tiempo, y devolverán a la
leche su color blanco primitivo. El tiempo que requiere este cambio depende del número
de bacterias, del consumo de oxigeno y de la multiplicación de dichas bacterias. Este
método de reducción del azul de metileno mide indirectamente la actividad de los
microorganismos. Los diferentes intervalos o tiempo de reducción del azul de metileno
permiten la clasificación rápida de las muestras en clases. (A, B, C)
Nota. Dada la finalidad del análisis, el material de vidrio y los tapones deberán
ser esterilizados antes de su uso.
En el caso de utilizar pipetas de vidrio, para medir tanto la leche como la solución de
azul de metileno, se incluirá algodón hidrófilo dentro del extremo superior de la misma
(extremo de aspiración). La temperatura de incubación. Se ha elegido la temperatura
de 37ºC porque a mayor o menor temperatura se ha observado que la reducción es
más rápida, a mayores temperaturas, en general, se aceleran las reacciones químicas y
se provoca eliminación de oxigeno.
Reactivo.
- Azul de metileno.
Las tabletas distribuidas por la firma GERBER sirven para preparar 200 mililitros
de solución. Se solubilizan rápidamente y no producen variaciones de color.
Otras formas de presentación frecuentes del reactivo son estas dos: en polvo o
en solución alcohólica saturada de azul de metileno. En cualquier caso, la
solución resultante se conservará en un frasco estéril cerrado, oscuro y en
refrigeración. No se debe emplear dicha solución en los siguientes casos: si ha
sido expuesta a la luz solar; si han transcurrido dos o más meses desde la fecha
de su preparación o si se sospecha que ha podido contaminarse
Instrumentos:
Procedimiento:
Resultados:
Grasa; Ha sido tradicionalmente y sigue siendo en nuestros días, el ensayo más difundido
y aplicado en la práctica en la industria lechera. Su realización cumple varios objetivos:
Servir como dato informativo de apoyo (al contrastar sus resultados con los
obtenidos en otras determinaciones, tales como densidad, extracto, etc.) en la
sospecha de fraudes y falsificaciones como adición de agua, leche desnatada, etc.
Permitir un cálculo aproximado del extracto seco de la leche mediante fórmulas que
combinan el valor numérico obtenido al hallar la materia grasa y el del peso
específico.
Densidad o peso específico; El peso específico no es otra cosa que el peso de un litro del
líquido expresado en Kilogramos. Pues, al afirmar que el peso específico de la leche entera
se expresa por cifras 1,030-1,033, queremos decir que un litro de esta leche pesa de 1,00 a
1,033 Kilogramos. El agua, que es la parte más abundante de la leche, pesa 1 Kg. A 4°C,
en consecuencia, el exceso de peso de 0,030 a 0,033 Kg. Está relacionado con la influencia
que ejerce la materia seca de la leche.
La grasa de la leche es, como se sabe, más ligera que el agua y flota encima. El peso
específico de la grasa de la leche es por término medio de 0,930, mientras que la densidad
de la materia seca, sin la grasa, es de 1,600. La combinación de estos dos valores (la
cantidad de grasa, por un lado, y de sólidos no grasos, por otro) determina el peso
específico de la leche.
Dado que son dos componentes variables y que su forma de actuación en esta propiedad
física es antagónica (la densidad varia de manera inversas al contenido graso y de manera
Los valores muy alejados de los valores medios determinados en una región
geográfica concreta, en una raza de ganado determinada, o en una época anual
hacen sospechar posibles anomalías y falsificaciones que deberían ser investigadas
y confirmadas mediante procedimientos analíticos más precisos y clarificadores.
Si atendiéramos solamente al factor grasa, pudiera parecer por todo lo dicho, que
una leche naturalmente baja en grasa, tendría que tener una densidad mayor que una
leche de elevado contenido graso; en realidad, como sabemos, esto no ocurre,
Cuando una leche normal es rica en grasa, suele serlo también en sólidos no grasos,
y las densidades de los distintos componentes están compensadas de tal forma que
el resultado refleja una densidad elevada.
Proteínas; Se realiza sobre todo con el fin de conocer el contenido nutritivo y tecnológico
contenido en la leche, sin olvidar que el contenido en proteínas coagulable condiciona en
rendimiento quesero.
Punto de Congelación; La leche, como corresponde a un disolvente (el agua) que lleva
sustancias en disolución (lactosa y sales), presenta un punto de congelación ligeramente
inferior a 0°C. El punto de congelación de la leche es una de las características más
constantes de la misma.
La determinación de este valor se utiliza para revelar posibles fraudes por adición de agua,
Cuanto más se aproxime el punto de congelación de la leche al del agua destilada, mayor
habrá sido la adición de agua. Para la leche normal de vaca se toma como punto medio el
valor - 0,555° aunque se leen con frecuencia, en muestras sin adulterar, unos valores
comprendidos entre -0,530° y -0,570°.
El punto de congelación de la leche de otras especies animales puede ser muy diferente del
que se acaba de considerar. Para las leche de cabra t de oveja se toma como medida -
0,580°.
Acidez; Poco después del ordeño, la leche muy fresca tiene una reacción próxima a la
neutralidad. El calor y la limpieza deficientes favorecen la proliferación de
microorganismos indeseables que degradan la lactosa dando lugar a ácido láctico y otros
ácidos. La acidificación progresiva puede conducir el último término a la coagulación de la
leche por precipitación de las proteínas. Por consiguiente, la determinación del grado de
acidez representa un criterio más para evaluar el cuidado puesto durante el ordeño,
transporte y conservación de la leche.
De leche demasiado acida nunca se sacara un queso regular, bueno y bien terminado, sino,
frecuentemente, una pasta grosera, ajada e hinchada.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
¨ ´¨¨¨¨¨¨¨¨¨¨¨¨¨¨
“+” “+”
(Acida) (Neutro) (Alcalina)
Cuando más bajo sea el pH (más próximo a 0), más fuerte será la acidez actual (activa);
cuanto más alto sea, por encima del 7, más considerable será la alcalinidad actual.
Frasco de Vidrio
Beaker
Un vaso de precipitados o vaso
de precipitado es un recipiente Generalmente de Vidrio,
cilíndrico de vidrio fino que se pero hay plástico y de
utiliza muy comúnmente en metal
el laboratorio, sobre todo, para
preparar o calentar sustancias
y traspasar líquidos.
Gradillas
10) Agua blanda: agua con menos de 60 ppm de calcio, magnesio y otros iones metálicos,
que reaccionan con el jabón y otros compuestos.
11) Agua dura: agua con iones metálicos alcalinos (principalmente calcio y magnesio) a
niveles superiores a 60 ppm.
15) Bacteriostasis: inhibición del crecimiento, sin muerte bacteriana, por agentes químicos,
como algunos colorantes y sulfamidas.
17) Caroteno: principal pigmento de la leche, de color amarillo y soluble en las grasas, es el
precursor de la vitamina A. la cantidad de caroteno que se encuentra en la leche
depende, en forma considerable, de la alimentación que el animal recibe; por ejemplo en
la época de abundancia de forraje verde, la leche aumenta su contenido de caroteno con
relación a la época seca. Además, algunas razas de vacas lecheras son más aptas a
producir leche con niveles mayores de caroteno que otras razas.
21) Coliforme significa con forma de coli, refiriéndose a la bacteria principal del grupo, la
Escherichia coli ("bacteria del intestino")
23) Calostro: Es la leche de la vaca que no se considera apta para consumo humano,
producto obtenido de los quince días anteriores y ocho días posteriores del parto.
25) Detergente: agente de limpieza, como puede ser el jabón: cualquiera de los numerosos
preparados orgánicos líquidos o sintéticos hidrosolubles, químicamente diferente de los
jabones, pero capaces de emulsionar aceites, mantener partículas en suspensión y
actuar como humectantes.
26) Enzima: proteínas especializadas que actúan como catalizadores orgánicos; suelen
estar compuestas de una parte proteínica apoenzima, y otra no proteínica, coenzima o
cofactor de bajo peso molecular.
27) Enterococos: son bacterias esféricas que forman sus colonias en grupos o cadenas. Se
encuentran de manera natural en muchos organismos, incluidos los humanos, como
parte de su flora intestinal. Son microorganismos muy resistentes, capaces de tolerar
concentraciones relativamente altas de sales y ácidos.
29) Estreptococo: célula esférica (coco) que se presenta en cadenas largas o cortas.
31) Enfermedades Transmitidas por los Alimentos: (ETA), son aquellas que se originan
por la ingestión de alimentos infectados, con agentes contaminantes en cantidades
suficientes para afectar la salud del consumidor.
35) Higiene: ciencia para conseguir y mantener la “salud”: condiciones o prácticas (aseo o
limpieza) que conducen a ese estado de salud.
37) Higienización: tratamientos de superficies que resulta eficaz para destruir las células
vegetativas de bacterias patógenas y para reducir sustancialmente la carga de otros
microorganismos. Este tratamiento no ha de dar lugar a efectos adversos en el producto
y debe ser inocuo para el consumidor.
38) Hongo: los mohos y levaduras se encuentran principalmente en las plantas, animales y
seres humanos, de donde pueden pasar a la leche y a los productos lácteos.
41) Leche cruda entera: Es el producto no alterado, no adulterado, del ordeño higiénico,
regular, completo e interrumpido de vacas sanas, que no contenga calostro y que esté
exento de color, olor, sabor y consistencias anormales.
44) Leche falsificada: Es aquella con la apariencia y características generales del producto
legítimo, protegida o no por marca registrada, que se denomina como ésta, sin serlo o
que no procede de sus verdaderos fabricantes.
49) Los microbios tienen múltiples formas y tamaños. Si un virus tuviera el tamaño de una
pelota de tenis, una bacteria sería del tamaño de media cancha de tenis y una célula
eucariota sería como un estadio entero de fútbol.
50) Microorganismos patógenos: Las bacterias patógenas son aquellas que causan
enfermedades infecciosas:
bacteria
virus
protozoos parásitos
51) Aunque la gran mayoría de las bacterias son inofensivas o benéficas, pocas bacterias
son patógenas. La enfermedad bacteriana más común es la tuberculosis, causada por la
bacteria Mycobacterium tuberculosis. Las bacterias patógenas contribuyen a otras
enfermedades globales importantes, tales como la neumonía, la cual puede ser causada
por bacterias como Streptococcus y Pseudomonas, y enfermedades asociadas con
alimentos, que pueden ser causadas por bacterias como Shigella, Campylobacter y
Salmonella. Las bacterias patógenas también causan infecciones tales como el tétanos,
fiebre tifoidea, difteria, sífilis y lepra. Las bacterias y virus se pueden encontrar tanto en
las aguas subterráneas como en las aguas superficiales, mientras los protozoos son
comunes de las aguas superficiales.
superficies que entren en contacto con los alimentos y que se espera, por tanto, cumpla
con los requerimientos de higiene de los alimentos.
53) Manual de Buenas Prácticas de Manufactura: (MBPM), son los principios básicos y
prácticas generales de higiene en la manipulación, preparación, elaboración, envasado,
almacenamiento, transporte y distribución de alimentos para consumo humano, con el
objeto de garantizar que los productos se fabriquen en condiciones sanitarias adecuadas
y se disminuyan los riesgos inherentes a la producción.
54) Plagas: insectos, pájaros, roedores y cualquier otro animal capaz de contaminar directa
e indirectamente los alimentos.
55) pH: medida de la acidez o la alcalinidad de una solución; se define como el logaritmo
negativo de la actividad de los iones H (pH de 7,0 es neutro; menos de 7,0 ácido, y más
de 7,0 alcalino).
56) Riesgo: Un agente biológico, químico o físico presente en el alimento, o bien la
condición en que éste se halla, que puede causar un efecto adverso para la salud.
57) Residuo: restos de los productos de limpieza, desinfectantes o derivados que quedan
en el equipo y utillaje después de su tratamiento.
59) Toxina: cualquiera de las muchas sustancias venenosa elaboradas por ciertos
microorganismos, plantas y animales; típicamente, son proteínas y antígenos.