2014

EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DEL ANTIBIÓTICO BETALACTÁMICO
AMOXICILINA COMO MATERIA PRIMA EN COLOMBIA, MEDIANTE

LA REALIZACIÓN DE UN ESTUDIO DE VIGILANCIA TECNOLÓGICA
E INTELIGENCIA COMPETITIVA
MIGUEL ANGEL GONZÁLEZ NAVARRETE
Universidad Nacional de Colombia

Facultad de Ciencias, Departamento de Farmacia
Bogotá D.C, Colombia.
2014
EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DEL ANTIBIÓTICO BETALACTÁMICO
AMOXICILINA COMO MATERIA PRIMA EN COLOMBIA, MEDIANTE
LA REALIZACIÓN DE UN ESTUDIO DE VIGILANCIA TECNOLÓGICA
E INTELIGENCIA COMPETITIVA
MIGUEL ANGEL GONZÁLEZ NAVARRETE
Tesis presentada como requisito parcial para optar al título de:
Magister en Ciencias Farmaceuticas
Director:
Ph. D en Biotecnología Sonia Amparo Ospina Sanchez
Universidad Nacional de Colombia

Facultad de Ciencias, Departamento de Farmacia
Bogotá D.C, Colombia.
2014
Dedico este trabajo a Dios por darme la
vida y la maravillosa oportunidad de
estudiar y aprender.
A mi madre, hermana y esposa, que
gracias a su incansable ánimo y apoyo
constante, me indicaron que nada es
imposible y que tan sólo la meta se
puede llegar a cumplir…. con esfuerzo,
disciplina y sacrificio.
Miguel Angel González Navarrete

Agradecimientos
Quiero agradecer a la Dra Yenny M. Sánchez, Ph.D en Economía y Gestión de la

Innovación y Política, Asesora de la Vicerrectoria de Investigación, quien gracias a sus
aportes se marcaron las directrices frente a la metodología del trabajo y a las
directivas del laboratorio Coaspharma que patrocinaron esta investigación.
Abreviaturas
PA…………..Penicilin acilasa
6-APA……….Ácido 6-amino penicilánico.
PHFGME……Éster metílico de la hidroxifenil glicina.
FCV………….Factor crítico de vigilancia.
PCV………….Pregunta clave de vigilancia.
SEAB………..Sintesis enzimática de antibióticos betalactámicos.
SEA………….Sintesis enzimática de amoxicilina.
SEAM………..Sintesis enzimática de ampicilina.
SEC………….Sintesis enzimática de cefalexina.

V
Resumen
El creciente aumento en las importaciones de bienes e insumos en Colombia,
especialmente en el caso de la materia prima amoxicilina, donde se evidencia un
incremento en un 26.82% en el periodo de 2002 al 2012 y teniendo en cuenta las
directrices del Plan Nacional de Desarrollo 2010 – 2014, que promueve la innovación y
el mejoramiento de la productividad, se plantea una sustitución gradual de las
importaciones de este insumo, por materia prima producida a nivel nacional. Para
llevar a cabo tal planteamiento surge la necesidad de realizar un estudio de Vigilancia
Tecnológica e Inteligencia Competitiva, teniendo como factores críticos de vigilancia la
producción del antibiótico, análisis del mercado en el contexto nacional e internacional
y características de la materia prima, con el fin de obtener resultados que permitan
analizar las ventajas y desventajas de crear una planta de producción en Colombia y
evaluar su factibilidad económica, siempre y cuando se integre la academia tanto
nacional como extranjera con la industria farmacéutica.
Las estrategias recomendadas para el desarrollo de esta investigación a partir de los
resultados obtenidos, demostraron que para obtener la amoxicilina por vía enzimática
no se requiere partir del intermediario 6-APA, sino de la sal potásica de penicilina G
(PGK) directamente, usando la enzima penicilin acilasa (PA) de Kluyvera citrophila,
inmovilizada en hidrogel de sílice amino modificado, precipitada con iones de zinc y en
el medio de reacción tert-pentanol anhidro, con el fin de obtener un mayor rendimento
de la síntesis.
Palabras Clave: Amoxicillina, Antibiótico betalactámico, Ácido 6 aminopenicilánico,

penicilin acilasa, vigilancia tecnológica, síntesis enzimática, sal potásica de penicilina
G.
VI
Abstract
The increasing growth of Colombia’s imports on goods and supplies, specially in the
case of raw material amoxiciline, when an increasing of 26.82% is noticed, from years
2002 to 2012 and taking into account the development national plan (plan nacional de
desarrollo) 2010-2014 guidelines which promotes innovation and producity
improvement; it pases a gradual imported raw material substitution of these supplies by
raw material supply produced all over the country.
To carry out such approach, there’s a need to perform a technological surveillance and
a competitive intelligence research, having a critical factors at surveillance the antibiotic
production market analysis in national and international context and raw material
characteristics. So that results can be obtained and analyse adventages and
disadventages of bulding and amoxiciline production plant in Colombia and asses its
economical feasibility whenever it involves both national and international academy
and pharmaceutical industry.
Recomended strategies for this research development from results obtained showed
that to produce amoxiciline by means of enzymatic away, it is not required to start from
G- APA intermediate but directly from penicilin salt G potassium (PGK).
Usign enzyme penicilin acilase (PA) Kluyvera citrophyla inmobilized in hidrogel of sílice
amino modified precipitated with zinc ions and a tert-pentanol-anhidro source reaction
in order to get a better synthesis performance.
Keywords: Amoxicillin, B-lactam antibiotic, 6 aminopenicillanic Acid, penicillin acylase

technological monitoring, enzymatic synthesis, Penicillin G potassium salt
Contenido VII
CONTENIDO
Resumen ........................................................................................................................... V
Abstract ............................................................................................................................ VI
Lista de figuras .................................................................................................................. X
Lista de gráficas ............................................................................................................... XI
Lista de tablas .................................................................................................................XIII
Introducción...................................................................................................................... 14
2. Resumen ejecutivo ............................................................................................... 16
3. Objetivos............................................................................................................... 20
3.1. Objetivo general.................................................................................................... 20
3.2. Objetivos específicos ............................................................................................ 20
4. Marco teórico ........................................................................................................ 21
4.1. Definiciones .......................................................................................................... 21
4.2. Generalidades ...................................................................................................... 21
4.3. Clases de vigilancia ................................................................................................... 22
4.3. Beneficios ............................................................................................................. 22
4.4. Ciclo de vigilancia ................................................................................................. 22
4.4.1. Etapa de planeacion e identificación de necesidades ................................... 23
4.4.2. Etapa de búsqueda y captación ...................................................................... 23
4.4.3. Etapa de análisis y organización .................................................................... 23
4.4.4. Etapa de inteligencia........................................................................................ 23
4.4.5. Etapa de comunicación ................................................................................... 23
5. Metodología .......................................................................................................... 25
5.1. Etapa de planeacion e identificacion de necesidades ........................................... 25
5.1.1. Selección de FCV y PCV .................................................................................. 25
5.1.2. Construcción de la ficha de necesidades....................................................... 26
5.1.3. Etapa de búsqueda y captación ...................................................................... 26
5.1.4. Formulación de la ecuación de búsqueda...................................................... 27
5.1.5. Elaboración del corpus de información: ........................................................ 28
5.2. Etapa de análisis y organización: .......................................................................... 28

5.2.1. Distribución de la información no estructurada ............................................ 28
5.2.3. Distribución de la información estructurada en patentes ............................. 30
6. Análisis cienciométrico.......................................................................................... 31
Contenido VIII
6.1. Publicaciones científicas ....................................................................................... 31

6.2. Patentes ............................................................................................................... 37
7.1. FCV - Producción del antibiótico ........................................................................... 41
7.3.1. Producción industrial............................................................................................ 43
7.3.1.1. Continuar con la investigación de las vías hidrolíticas ............................. 43
7.3.1.2. Modificaciones en el medio de reacción ..................................................... 45
7.3.1.3. Mejoramiento del sistema enzimático ......................................................... 47
7.3.2. Tendencias en investigación relacionadas con la síntesis enzimática de

amoxicilina (SEA) analizada a través de las publicaciones científicas .................. 49
7.3.3. El ácido 6-amino penicilánico (6-APA) .................................................................. 53
7.3.4. Penicilin acilasa (PA) ............................................................................................ 53
7.3.4.1. Características .............................................................................................. 54
7.3.4.2. Inmovilización de la enzima ......................................................................... 56
7.3.4.3. Tendencias en investigación relacionadas con la enzima (PA)

analizada a través de las publicaciones científicas ..................................................... 57
7.4. FCV – Análisis de mercado: Contexto nacional e internacional ............................ 58

7.4.1. Análisis del mercado: Caso China ........................................................................ 60
7.2.2. Análisis del mercado: Caso India .......................................................................... 64
7.2.3. Análisis del mercado: Caso México ...................................................................... 66
7.2.5. Análisis del mercado: Contexto Nacional .............................................................. 67
7.2.5.1. Materia Prima ................................................................................................ 68
7.2.5.2. Producto Terminado ..................................................................................... 70
7.2.5.3. Nuevos Desarrollos ...................................................................................... 73
7.3. FCV - Características de la materia prima ............................................................ 76

7.3.1. Presentacion Comercial.......................................................................................... 77
8. Conclusiones ........................................................................................................ 78
A. Anexo: Herramientas de software para VT e IC .................................................... 80
B. Anexo: Ficha de necesidades ............................................................................... 81
C. Anexo: Ficha técnica de las herramientas de búsqueda y procesamiento de la
información ........................................................................................................... 83
D. Anexo: Bitácora de búsqueda "Información Estructurada" .................................... 85
E. Anexo: Bitácora de búsqueda “Información NO Estructurada” .............................. 87
F. Anexo: Bitácora de búsqueda “Patentes” .............................................................. 89
G. Anexo: Definición y estructura de la amoxicilina ................................................... 90
Contenido IX
H. Anexo: Articulos más representativos sobre “sintesis enzimática de Cefalexina” .. 91

I. Anexo: Análisis Cienciométrico de la síntesis enzimática de Cefalexina (SEC) .... 94
J. Anexo: Articulos más representativos sobre “sintesis enzimática de Ampicilina” .. 96
K. Anexo: Análisis Cienciométrico de la síntesis enzimática de Ampicilina (SEAM) .. 98
L. Anexo: Articulos más representativos sobre el tema “penicilin acilasa” ............... 100
M. Anexo: Compañías Colombianas que comercializan el principio activo
amoxicilina en sus diferentes formas farmacéuticas ........................................... 104
N. Anexo: productos farmacéuticos desarrollados y radicados ante el INVIMA con
base en la amoxicilina ......................................................................................... 105
BIBLIOGRAFÍA .............................................................................................................. 107
Contenido X
Lista de figuras
Figura 4 - 1: Ciclo de vigilancia tecnológica ........................................................................ 24

Figura 7 - 2: Reacción enzimática para la obtención de la amoxicilina .............................. 44
Figura 7 - 3: Reacciones de la enzima Penicilin Acilasa (PA) ............................................ 55
Figura 9 - 4: Estrutura de la Amoxicilina ............................................................................. 90
Contenido XI
Lista de gráficas
GRÁFICA 5 - 1: Distribución de la información "NO ESTRUCTURADA" en los
metabuscadores ......................................................................................................... 29
GRÁFICA 5 - 2 : Distribución de la información "NO ESTRUCTURADA" en los
buscadores................................................................................................................. 29
GRÁFICA 5 - 3 : Distribución de la información “Estructurada” en las bases de datos 29
GRÁFICA 5 - 4 : Distribución de la información estructurada en patentes por buscador.
................................................................................................................................... 30
GRÁFICA 5 - 5 : Distribución de la información estructurada pertinente en patentes. 30
GRÁFICA 6 - 6 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEAB. ................ 32
GRÁFICA 6 - 7 : Autores que más publican sobre el tema SEAB .............................. 33
GRÁFICA 6 - 8 : Porcentaje del país de origen de los autores que más investigan
sobre SEAB, respecto al número de publicaciones .................................................... 33
GRÁFICA 6 - 9 : Red asimétrica que relaciona el país vs número de autores que más
investiga sobre el tema SEAB. ................................................................................... 34
GRÁFICA 6 - 10 : Red asimétrica que relaciona la institución vs número de autores
que más investiga sobre el tema SEAB. ..................................................................... 36
GRÁFICA 6 - 11 : Red asimétrica que relaciona el Journal vs número de publicaciones
por autor sobre el tema SEAB .................................................................................... 36
GRÁFICA 6 - 12 : Porcentaje de las palabras claves más citadas por los autores que
investigan sobre el tema SEAB. ................................................................................. 37
GRÁFICA 6 - 13 : Tendencia de publicación de patentes pertinentes registradas ..... 37
GRÁFICA 6 - 14 : Distribución de las principales entidades solicitantes de patentes . 38
GRÁFICA 6 - 15 : Distribución del país de origen del autor de la patente .................. 38
GRÁFICA 6 - 16 : Distribución del campo de aplicación de la patente ....................... 39
GRÁFICA 6 - 17 : Distribución de las investigaciones en la formulación de nuevos
productos. .................................................................................................................. 39
GRÁFICA 6 - 18 : Distribución del campo de aplicación. ........................................... 40
GRÁFICA 7 - 19 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEA. ................ 50
GRÁFICA 7 - 20 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEA ................. 50
GRÁFICA 7 - 21 : Red asimétrica que relaciona el país de origen del autor Vs número
de publicaciones del autor .......................................................................................... 51
GRÁFICA 7 - 22 : Red asimétrica que relaciona el centro de investigación Vs número
de investigadores por publicación .............................................................................. 52
GRÁFICA 7 - 23 : Red asimétrica que relaciona el Journal vs autor sobre la SEA. .... 52
GRÁFICA 7 - 24 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema PA .................... 57
GRÁFICA 7 - 25 : Porcentaje del país de origen de los autores que más investiga
sobre el tema PA, con respecto al número de publicaciones. ..................................... 58
GRÁFICA 7 - 26 : Precios nacionales y de las importaciones investigadas aportados
por Fersinsa y SIC. ..................................................................................................... 66
GRÁFICA 7 - 27 : Importaciones colombianas de amoxicilina como materia prima. .. 68
GRÁFICA 7 - 28 : Empresas importadoras nacionales de amoxicilina como materia
prima. ......................................................................................................................... 69
GRÁFICA 7 - 29 : Origen de las importaciones de amoxicilina como materia prima .. 70
GRÁFICA 7 - 30 : Valores totales de las ventas nacionales de medicamentos con el
principio activo amoxicilina. ........................................................................................ 70
GRÁFICA 7 - 31 : Tendencia en las ventas de medicamentos con amoxicilina de los
laboratorios más representativos. ............................................................................... 71
GRÁFICA 7 - 32 : Tendencia en las ventas de medicamentos con el principio activo
amoxicilina en valores ................................................................................................ 72
GRÁFICA 7 - 33 : Laboratorios farmacéuticos que más comercializan medicamentos
con amoxicilina en unidades....................................................................................... 72
Contenido XII
GRÁFICA 7 - 34 : Red asimétrica que relaciona país vs número de autores sobre

amoxicilina combinado con ácido clavulánico. ............................................................ 75
GRÁFICA 7 - 35 : Distribución de las nuevas invenciones patentadas, frente a las
nuevas asociaciones con amoxicilina. ........................................................................ 75
GRÁFICA 9 - 36 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEC ................. 94
investiga sobre el tema SEC ...................................................................................... 95
GRÁFICA 9 - 38 : Red asimétrica que relaciona el año de publicación del Journal vs
autor sobre el tema SEAM ......................................................................................... 98
Contenido XIII
Lista de tablas
TABLA 2 - 1: Ventajas y desventajas de las estrategias para la sintesis enzimática de

amoxicilina. ........................................................................................................................... 18
TABLA 2 - 2: Principales empresas/instituciones relacionadas con la investigación
científica y tecnológica en la sintesis de amoxicilina. .......................................................... 19
TABLA 5 - 3: Términos de búsqueda según la Clasificación Internacional de Patentes
(IPC)...................................................................................................................................... 27
TABLA 7 - 4: Evolución en la tecnología de fabricación de la penicilina ............................ 42
TABLA 7 - 5: Estrategias realizadas para el mejoramiento de la síntesis de amoxicilina .. 45
TABLA 7 - 6: Estrategias de mejoramiento del sistema enzimático ................................... 48
TABLA 7 - 7 : Clasificación de empresas manufactureras de antibióticos β-lactámicos ... 59
TABLA 7 - 8 : Empresas manufactureras de antibióticos penicilínicos. ............................. 60
14 Introducción
Introducción
Cuando se establece un proyecto de investigación se busca resolver una necesidad
específica, donde la gran mayoría de los investigadores se basan en metodologías
existentes, informaciones técnicas, tendencias y demás sin embargo, hay bases
metodológicas donde los nuevos investigadores deben conocer si su trabajo de
investigación va a tener incidencia en el desarrollo del país a corto, mediano o largo plazo,
además se pretende que los trabajos de investigación académica no queden en las
instituciones educativas sin ninguna aplicación, por tal razón se debe generar una sinergia
entre la industria farmacéutica y la academia, lo cual está implícitamente incluido en los
objetivos de un plan de estudios de maestría.
Por tal razón el presente trabajo se fundamenta esencialmente en el desarrollo de un
estudio de vigilancia tecnológica e inteligencia competitiva (VT e IC) teniendo como tema
central la obtención del antibiótico -lactámico amoxicilina en nuestro país, con el fin de
identificar y evaluar las nuevas tendencias en tecnologías tanto en la producción de
materia prima, como en la producción de nuevos medicamentos, donde el gran volumen
de información existente, dificulta la generación de conocimiento. Además existen mitos a
nivel de la industria farmacéutica nacional que en países como China e India siendo los
más grandes productores de materia prima, es imposible competirles con calidad y
volumen, puesto que la gran mayoría de materia prima es procedente de allí.
Por otra parte los proveedores que manejan dicha materia prima corresponde a
intermediarios “broker´s” los cuales manejan estándares de calidad variable, debido a que
compran a diversos fabricantes, donde la industria nacional debe ajustar sus procesos
según la materia prima que llegue con el fin de generar producto de calidad para el
consumo humano, sin tener en cuenta los sobre-costos en producción que esto pueda
llevar.
El hecho de basar únicamente el proyecto en el antibiótico amoxicilina está fundamentado,

en análisis de los históricos de las materias primas de tipo antibiótico -lactámico más
comercializadas, en el volumen de las ventas y las tendencias del mercado tanto nacional
como internacional, los cuales son muy atractivos para la industria farmacéutica, en
particular para la empresa COASPHARMA que patrocina esta investigación, puesto que
dicha materia prima influye directamente en su balance económico general, pero la
incertidumbre de éxito del proyecto lleva a que primero se demuestre qué tan conveniente
es?, cuá les son las ventajas y desventajas?, con el fin de eliminar la importación del activo
y fabricarlo en Colombia, pero para esto es necesario conocer si la empresa farmacéutica
colombiana está en condiciones de fabricar la materia prima para suplir sus necesidades?
ahora bien, con el fin de dar respuesta de dichos interrogantes, es necesario que este
Contenido 15
macroproyecto inicie con una vigilancia tecnológica y termine con una inteligencia
competitiva, siendo un paso decisivo en el fortalecimiento de la transferencia de
tecnologías hacia el sector empresarial, puesto que lo que busca la VT es observar el
entorno, con el fin de responder a determinados cambios cuando éstos se produzcan y IC
busca adelantarse a las amenazas y aprovechar las oportunidades, para una adecuada
toma de decisiones.
Ahora bien, el resultado de esta investigación pretende dar un estado del arte
“fotografía” en un momento determinado de una línea de investigación que se ha
desarrollado en el tiempo y que los análisis, resultados y tendencias a nivel internacional
mostrados corresponden a un estadio parcial y en constante evolución frente al tema, lo
que nos lleva a proponer estrategias que conduzcan al desarrollo sostenible de este
macroproyecto, ya sean de tipo asociativo entre las empresas del sector y la universidad,
manejo de franquicias o alianzas con otros países, con el fin de permitir el desarrollo de
todo o partes del proceso para la obtención del antibiótico.
De acuerdo a lo anterior, el presente trabajo, además de pretender establecer una

metodología validada para la industria frente a sus nuevos proyectos de investigación,
también puede ser la base fundamental de los nuevos trabajos investigativos en el
departamento de Farmacia de la Universidad Nacional de Colombia, con la única intención
que las futuras investigaciones sean aún más reconocidas tanto por su impacto a través
del tiempo, como por su innovación y desarrollo que genere al país, por tal razón este
documento es presentado como un informe de vigilancia tecnológica.
16 Resumen ejecutivo
2. Resumen ejecutivo
El creciente aumento en las importaciones de bienes e insumos en Colombia,
especialmente en el caso de la materia prima amoxicilina, donde se evidencia un
incremento en un 26.82% en el periodo de 2002 al 2012 y teniendo en cuenta las
directrices del Plan Nacional de Desarrollo 2010 – 2014, que establece un crecimiento
sostenible del país basado en un alto nivel de competitividad, apoyado en la innovación y
el mejoramiento de la productividad, son razones suficientes para proponer una sustitución
gradual de las importaciones de este insumo por materia prima producida a nivel nacional.
Para llevar a cabo tal planteamiento surge la necesidad de realizar un estudio de Vigilancia
Tecnológica e Inteligencia Competitiva, con el fin de obtener resultados que permitan
analizar las ventajas y desventajas de crear una planta de producción en Colombia y
evaluar su factibilidad económica, teniendo como precedente que este tipo de industria
posee un desarrollo incipiente en el país.
Esta investigación se focalizó en el antibiótico betalactámico tipo, penicilínico, amoxicilina,
debido a:
1. Pertenece a la familia de los penicilínicos que representan ventas hasta US $5.000
millones y una producción de materia prima de 33.000 toneladas/año a nivel mundial; y
en Estados Unidos representan ventas por US $1.2 millones/año.
2. Es el antibiótico de primera opción por su escasa toxicidad y amplio margen
terapéutico para el tratamiento de infecciones sistémicas o localizadas por
microorganismos gram-positivos y gram-negativos sensibles, por lo que se extrapola su
vigencia por un mayor tiempo.
3. En Colombia las importaciones de materia prima han pasado de manejar 10,125
kg/año a 37,750 kg/año.
4. Frente al producto terminado sus ventas representan $ 93.000 millones de
pesos/año y presenta una tendencia de crecimiento en el periodo analizado de 2009 al
2013.
Las tecnologías disponibles para la producción de los antibióticos betalactámicos
corresponden a procesos biotecnológicos dominados principalmente por su aspecto
competitivo entre los grandes laboratorios productores que manejan reactores hasta de
380,000 litros, los cuales realizan permanentes esfuerzos en el mejoramiento en cada
etapa del proceso, ya sea a la cepa, al proceso de fermentación o al proceso de
separación, con el fin de incrementar los rendimientos en cada etapa.
Ahora bien, los procesos industriales para la obtención de la amoxicilina están migrando
de la síntesis química a la síntesis enzimática, a lo que se le ha denominado “química
verde”, debido a que no necesita de condiciones especiales de reacción (bajas
temperaturas), no requiere de solventes organoclorados, el producto final no necesita de
complicados procesos de purificación y los volúmenes de desechos son menores,

haciendo que la vía enzimática sea una opción para hacer el producto más rentable y
menos lesivo al medio ambiente.
De acuerdo a este panorama, el trabajo de vigilancia se centró en una revisión de la
literatura científica, técnica y la almacenada en los motores de búsqueda de internet
disponibles, para establecer las tendencias de desarrollo de las tecnologías de obtención
de la amoxicilina por vía enzimática, donde se enfocó en (3) factores críticos de vigilancia
como:
1. Producción del antibiótico: se presentan estrategias como el establecimiento de un
adecuado control del pH durante la reacción, la precipitación del producto de síntesis,
la adición de co-solventes al medio de reacción, la reducción de pasos en la síntesis,
los diferentes soportes de inmovilización de la enzima y la búsqueda de las
concentraciones ideales de reacción, llevando a inferir que cualquier incremento
enfocado en aumentar la conversión en amoxicilina radica la rentabilidad del proceso.
2. Análisis del mercado en un contexto nacional e internacional: se evidencia lo
atractivo del proyecto en cuanto a su valor económico por los volúmenes de ventas y
de producción, analizados con los principales actores de esta industria como China,
India, México y Brasil. Al analizar el entorno nacional, los volúmenes de consumo de
materia prima se evidencia que empresas como Manufacturera Mundial Farmacéutica
y Genfar manejan el 84.7% de las importaciones, siendo los principales actores en
unidades vendidas de producto terminado en el país, superados en valores por la
multinacional Glaxo Smithkline, debido al posicionamiento de su marca AMOXAL®;
además la importancia que tienen los nuevos desarrollos de productos teniendo como
base la amoxicilina, hacen que se identifiquen nuevas oportunidades de diseño
diferentes formas farmacéuticas, aumento en las concentraciones y nuevas
formulaciones al conjugarlos con otros principios activos.
3. Características de la materia prima: este factor de vigilancia se centra
principalmente en las diferencias de calidad por el origen de obtención y condiciones
de almacenamiento, que aunque cumplen con las especificaciones farmacopéicas, en
la práctica generan inconvenientes en el proceso de transformación en la industria
nacional.
Conclusiones relevantes
Producción del antibiótico
Actualmente el antibiótico amoxicilina es producido en mayor proporción por síntesis
química y se está migrando a la enzimática, donde exísten diferentes estrategias
encaminadas a mejorar los rendimientos de producción, las cuales son planteadas en la
Tabla 2 - 1, siendo estas las estrategias recomendadas para un futuro estudio que las
integre sin embargo, la tendencia en el desarrollo de tecnologías está dirigida en gran
medida a la disminución en el número de operaciones unitarias necesarias para la

obtención de la amoxicilina, es por esta razón que se propone obtener la amoxicilina a
partir de la sal potásica de penicilina G(PGK), con la enzima penicilin acilasa (PA) de
Kluyvera citrophila inmovilizada en hidrogel de sílice amino modificado, precipitada con
iones de znc y en el medio de reacción tert-pentanol anhidro.
TABLA 2 - 1: Ventajas y desventajas de las estrategias para la sintesis enzimática de

amoxicilina.
(Fuente: Bases de datos UN, con base en la síntesis de los documentos citados en la
bibliografía)
ESTRATEGIA CARACTERISTICAS VENTAJAS DESVENTAJAS
El modelo puede ser utilizado como una
Permite un adecuado
CONTROL herramienta para la optimización de una
monitoreo de pH y por Estrategia vigente desde el
ADECUADO reacción enzimática tipo suspensión-
ende mejor control de año 2000
DEL pH suspensión, siendo el mejor rango de pH (6.2 -
la reacción.
5.5)
Aumento en los
PRECIPITACIÓN DEL Precipitación de la amoxicilina con la adición de
rendimientos de la Estrategia vigente desde el
PRODUCTO iones Zn2+ y de esta forma disminuye su
amoxicilina hasta 30 año 2002
DE SÍNTESIS hidrólisis.
veces más.
EFECTO CO- Adición de tert-pentanol anhidro al medio de
Presenta rendimientos
SOLVENTE EN LA reacción que hace efecto co-solvente Aumento en el tiempo de
del 88% de
MEZCLA DE disminuyendo la hidrólisis de PHFGME y la reacción
amoxicilina.
REACCIÓN amoxicilina
El modelamiento de los reactores continuo y Se requiere de un software
RACIONALIZACIÓN
semi-continuo por medio de la red hibrida especial que pueda
DE LA Simulación del proceso
neuronal (NN) representó la cinética de la modelar todas las
EXPERIMENTACIÓN enzimatico sin requerir
síntesis enzimática de amoxicilina. interacciones con los
POR MEDIO DE parte experimental
También se puede simular el cambio en los diferentes nodos en el
MODELOS
soportes donde se inmoviliza la enzima. modelo NN
Se obtiene amoxicilina a partir de la PGK en un Se obtienen bajos
REDUCCIÓN DE No se requiere 6-APA.
sólo reactor, catalizada por la PA inmovilizada rendimientos del 55.2% y
PASOS EN LA Mayor rapidez de
de Kluyvera citrophila, y adición de iones Zn2+. 76.2%, donde se plantea
SÍNTESIS, EFECTO proceso.
También se puede adicionar etilenglicol para evaluar su beneficio
CO-SOLVENTE Y Mejor monitoreo del
lograr un efecto co-solvente y disminuir la puesto que no se requiere
ADICIÓN DE IONES proceso.
hidrólisis de la amoxicilina. partir del 6-APA.
CONCENTRACIONES
Se evitan gastos
IDEALES Se establecen las concentraciones ideales de
innecesario de Se obtienen rendimientos
INICIALES DE 6-APA, PHPGME Y PGA, a diferentes rangos
reactivos, haciendo el del 50%
PHPGME, 6-APA y de pH y temperatura.
proceso mas rentable
PGA
Se evalúa la mutagénesis a la PGA de Bacillus Hay muy pocas
Se puede aplicar a la
MUTAGENESIS megaterium (BmPGA), con el fin de aumentar el investigaciones sobre
reacción enzimática de
DE LA ENZIMA rendimiento en la síntesis controlada nuevas mutagenesis en la
la amoxicilina
cinéticamente de cefalexina. PGA
Se obtienen rendimientos
Mejora en el
bajos de amoxicilina 38%,
rendimento para la
SOPORTE DE La inmovilizacion de la PGA en un hidrogel de donde está pendiente
obtención de
INMOVILIZACION DE sílice amino modificado es ideal para procesos extrapolar dicha
amoxicilina.
LA ENZIMA industriales inmovilizacion con
Aplicación a nivel
presencia de solventes
industrial
orgánicos
Análisis de la información encontrada

Frente a la información científica encontrada se encontraron 104 reportes pertinentes
completos, donde en la Tabla 2 – 2, se evidencia un mayor número de trabajos de
investigación relacionados con el tema de la enzima penicilin acilasa (PA), debido
principalmente a que esta enzima posee un amplio margen de aplicación industrial en
diversos procesos, mientras cuando el tema es específico como “reacción enzimática de la
amoxicilina” el número de trabajos de investigación es menor, encontrando que los países
que más investigan son en mayor porporción Brasil, seguido por China, India y Holanda.
Además se encuentran investigaciones conjuntas entre los centros de Brasil y España.
Por otra parte, frente a la publicación de patentes se encontraron 125 invenciones
pertinentes, donde hay un comportamiento parecido que con la información científica,
puesto que hay un mayor número de invenciones frente al tema del desarrollo de la
enzima que de la reacción enzimática de la amoxicilina, encontrando que el líder
corresponde a DSM IP assets B.V (Holanda), correspondiendo a la empresa
manufacturera líder en antibióticos, lo anterior se debe a su contínua inversión en la
investigación.
TABLA 2 - 2: Principales empresas/instituciones relacionadas con la investigación

científica y tecnológica en la sintesis de amoxicilina.
(Fuente: Bases de datos UN y buscadores de patentes, de acuerdo con la síntesis de los
documentos citados en la bibliografía)
PUBLICACIONES PUBLICACION DE
ESTRATEGIA
CIENTÍFICAS PATENTES
Delft University of Technology - HOLANDA
CAMBIO DE pH NR
DSM-Gist - HOLANDA
PRECIPITACIÓN DEL PRODUCTO DE Department of Pure and Applied Chemistry Zhongrun Pharmaceutical Co,
SÍNTESIS Scotland - UK Ltd.of CSPC - CHINA
Universidade Federal do Ceará - BRASIL
Instituto de Catálisis y Petroleoquíımica -
ESPAÑA
* EFECTO CO-SOLVENTE EN LA MEZCLA DE
Universidade Federal de São Carlos - BRASIL
REACCIÓN Fundacao de amparo a pesquisa -
University of Technology - IRAN
* CONCENTRACIONES IDEALES INICIALES BRASIL
Institute of Chemical and Engineering
DE PHFGME, 6-APA y PGA Stichting voor de technische
Sciences - SINGAPUR
* RACIONALIZAR LA EXPERIMENTACIÓN wetenschappen - HOLANDA
Zhejiang University - CHINA
POR MEDIO DE MODELOS Fidia farmaceutici S.P.A - ITALIA
Zhejiang Provincial Science and Technology
* DIFERENTES SOPORTES PARA LA Codexis, Inc – USA
Council - CHINA
INMOVILIZACIÓN DEL LA PGA
University of California - USA
Institute of Chemical and Engineering
Sciences - SINGAPUR
* REDUCCIÓN DE PASOS EN LA SÍNTESIS
School of Pharmacy - CHINA
* EFECTO CO-SOLVENTE NR
Zhejiang University- CHINA
* ADICIÓN DE IONES
University of Groningen - HOLANDA
Jawaharlal Nehru Technological University -
INDIA Fermenta Biotech Ltd - INDIA
Osmania University - INDIA Bioferma Murcia, S.A - ESPAÑA
* CAMBIOS EN LOS SOPORTES DE The Johns Hopkins School of Medicine - USA Bristol Myers CO - USA
INMOVILIZACIÓN School of Tourism and Maritime Technology - DSM IP Assets B.V - HOLANDA
* MUTAGÉNESIS DE LA ENZIMA PENICILIN PORTUGAL Fundacao de amparo a pesquisa -
ACILASA Institute for Biotechnology and Bioengineering BRASIL
* CARACTERIZACIÓN DE PENICILIN - PORTUGAL Stichting voor de technische
ACILASA DE DIFERENTES CEPAS Universidade Federal de São Carlos - BRASIL wetenschappen - HOLANDA
Academy of Sciences of the Czech Republic - Fidia farmaceutici S.P.A - ITALIA
REPUBLICA CHECA Codexis, Inc - USA
Chinese Academy of Sciences - CHINA
Tianjin University - CHINA
NR: NO REPORTADO
20
3. Objetivos
3.1. Objetivo general

Realizar un estudio de vigilancia tecnológica (V.T) y de mercado para el antibiótico
betalactámico “amoxicilina”, que permita identificar y evaluar las nuevas tendencias en
tecnologías tanto en la producción de materia prima, como en la producción de nuevos
medicamentos, con el fin de plantear oportunidades de desarrollo de productos y evaluar
alternativas para su desarrollo en Colombia.
3.2. Objetivos específicos

3.2.1. Realizar un estudio de VT en relación a la producción del antibiótico betalactámico
“amoxicilina” como materia prima y la formulación de nuevos medicamentos
basados en dicho principio activo.
3.2.2. Realizar una investigación sobre el mercado nacional e internacional del antibiótico
betalactámico “amoxicilina” como materia prima y de los medicamentos
actualmente comercializados y de los medicamentos nuevos desarrollados con
base en innovaciones en la formulación.
3.2.3. Identificar competidores, socios potenciales y nuevos mercados para la producción
del antibiótico betalactámico “amoxicilina” como materia prima.
3.2.4. Caracterizar el suministro y distribución del antibiótico betalactámico “amoxicilina”
como materia prima, identificando las ventajas y desventajas competitivas para
producirlo en Colombia.
21 Marco teórico
4. Marco teórico
4.1. Definiciones
La vigilancia tecnológica (VT) se encuentra definida como un sistema organizado de
observación y análisis del entorno, tratamiento y circulación interna de los hechos observados
y posterior utilización en la empresa (Palop & Vicente, 1999), ó como un proceso organizado,
selectivo y sistemático, para captar información del exterior y de la propia organización sobre
ciencia y tecnología, para ser seleccionada, analizada, difundida y comunicada y ser
convertida en conocimiento, y de esta manera tomar decisiones con menor riesgo y poder
anticiparse a los cambios.(Benavides & Quintana, 2006).
De acuerdo a lo anterior para el presente trabajo tomará como definición de la Vigilancia
tecnológica e inteligencia competitiva (VT e IC), como un proceso organizado, basado en
el análisis de información estructurada y no estructurada sobre un tema en particular, para
captar, analizar, seleccionar y comunicar adecuadamente el conocimiento generado, con
el fin de establecer las estrategias necesarias para la toma de decisiones, frente a la
problemática planteada.
4.2. Generalidades
Las empresas siempre han observado su entorno con el propósito de obtener información
relevante para su actividad haciendo seguimiento a los productos de los competidores, a
los clientes y a los proveedores, consultando revistas específicas para su industria o
asistiendo a ferias, es decir, acuden a prácticas de “vigilancia tecnológica tradicional”. Sin
embargo, en las últimas décadas esa tarea ha vivido desarrollos sustanciales y hoy existen
prácticas de vigilancia con objetivos y niveles heterogéneos de avance (Vásquez, 2009).
Cuando esta labor se hace como una rutina en la empresa, sobre un amplio conjunto de
fuentes de datos y con la expectativa de encontrar información de interés para el desarrollo
de su negocio, se está en presencia de una vigilancia pasiva o scanning. Cuando la
búsqueda de información sobre actividades relevantes seleccionadas tiene un carácter
investigativo, con el fin de proveer un conocimiento continuo sobre los desarrollos y las
tendencias emergentes, se le llama vigilancia activa o monitoring. Si en ella se incluye la
búsqueda puntual de información sobre un determinado tema, se denomina search.
Cuando la búsqueda incluye tanto al scanning como al monitoring, es decir, tiene un
carácter más general, se denomina watching. En este caso el proceso de vigilancia está
mucho más organizado y es más sistemático y se está en presencia de un sistema de
organización de la observación, análisis y difusión precisa de la información para la toma
de decisiones. Ese sistema de vigilancia filtra, interpreta y valora la información para
permitir a sus usuarios actuar con más eficacia. (Mejía, 2008); (Vásquez, 2009)
22 Marco teórico
4.3. Clases de vigilancia

Vigilancia tecnológica: Centrada en el seguimiento de los avances del estado de la
técnica y en particular de la tecnología y de las oportunidades/amenazas que genera. Se
enfoca en avances científicos y técnicos, productos y servicios, procesos de fabricación,
materiales y su transformación.
Vigilancia competitiva: Implica un análisis y seguimiento de los competidores actuales,
potenciales y de aquellos con producto sustitutivo.
Se enfoca en competidores actuales y potenciales, la cadena de valor del sector y la
situación de la empresa.
Vigilancia comercial: Se dedica a la atención de los clientes y proveedores. Se enfoca en
mercados, clientes y proveedores.
Vigilancia del entorno: Centrada en la observación sobre el conjunto de aspectos
sociales, legales, medio ambientales, socio-culturales, que configuran el marco de la
competencia (Vásquez, 2009)
4.3. Beneficios
 Anticipar o detectar cambios, riesgos o amenazas procedentes del mismo sector,
frente a las diferentes actividades tecnológicas, sociales y comerciales.
 Identificar competidores o socios potenciales, con el fin de establecer nuevas
alianzas e inversiones.
 Evaluar las fortalezas y debilidades de los competidores e identificar las propias.
 Enfrentar la explosión de información, debido a que se hace más difícil la toma de
decisión
 Disminuir la incertidumbre sobre el futuro.
 Mejorar la planificación estratégica.
 Identificar nuevos mercados, nuevos productos, que ayuden a la toma de decisión
frente al abandono de un proyecto.
 Colocar competitivamente nuevos productos y servicios, detectando desfases entre
los productos vs las necesidades de los clientes o desfases entre nuestras
capacidades vs la de los competidores.
 Aceleración del ritmo de lanzamiento de productos y de mejora de procesos,
necesarios para mantener la competitividad. (Mejía, 2008); (J Sánchez, 2011a)
4.4. Ciclo de vigilancia

Es un proceso sistemático, donde se establecen las etapas secuenciales que se deben
seguir para la generación de conocimiento, cada una de ellas tienen procesos particulares
23 Marco teórico
que pueden ser fácilmente medibles, con el fin de evaluar la evolución del proceso (ver
Figura 4 – 1), adicionalmente exísten herramientas que pueden facilitar el análisis de cada
etapa del ciclo(ver anexo A)
4.4.1.Etapa de planeación e identificación de necesidades

Implica la definición de los factores críticos de vigilancia (FCV), los cuales establecen el
alcance del sistema de vigilancia, y por ende definen recursos y responsables. Dichos FCV
determinan los ejes de búsqueda y están directamente relacionados con la ficha de
necesidades y los objetivos de la investigación.(J Sánchez, 2011a)
4.4.2. Etapa de búsqueda y captación

Comprende las actividades para identificar, obtener y organizar las diferentes fuentes de
información para satisfacer las necesidades planteadas; una vez establecida la ficha de
necesidades, se inicia el proceso de búsqueda el cual se clasifica en información
estructurada y no estructurada
4.4.3. Etapa de análisis y organización

En esta etapa se procesa la información obtenida de las diferentes fuentes ya analizadas,
con el fin de dar respuesta a todas las preguntas claves de vigilancia (PCV) planteadas en
la ficha de necesidades y de esta forma establecer conclusiones de los FCV.
4.4.4. Etapa de inteligencia

Definida como la “interpretación de los resultados”, donde se da sentido, se interpreta y se
genera un valor agregado a la información procesada, mediante la identificación de
aspectos como las tendencias tecnológicas o en el avance del conocimiento y su
incidencia directa sobre la estrategia de la empresa
4.4.5. Etapa de comunicación

Donde se divulgan a los entes decisores dentro de la empresa los resultados de la
vigilancia, se formulan propuestas orientadas a fortalecer la toma de decisiones y la
definición de estrategias enfocadas hacia lo que requiere la empresa.(J Sánchez, 2011b)
24 Marco teórico
Figura 4 - 1: Ciclo de vigilancia tecnológica(Jenny Sánchez, 2011)

25 Metodología
5. Metodología
Para el desarrollo del presente trabajo se aplicó el ciclo de vigilancia tecnológica, donde se
explica de manera detallada cada etapa y su posterior desenlace.(J Sánchez, 2011b)
5.1. Etapa de planeación e identificación de necesidades

5.1.1. Selección de FCV y PCV
En esta etapa se plantean de manera general los tópicos a tener en cuenta en la
investigación; es importante no limitar o sesgar estos ítems debido a que de esto depende
la profundidad de la vigilancia, para efecto de esta investigación se enunciaron los
siguientes FCV:
1. Producción del antibiótico.
2. Metodología de obtención de la amoxicilina.
3. Fabricantes de antibióticos -lactámicos a nivel mundial.
4. Análisis de mercado de la amoxicilina a nivel nacional e internacional.
5. Tiempo de explotación de la amoxicilina.
6. Características de la materia prima.
7. Resistencia presentada por la amoxicilina.
8. Aporte a la maestría en Ciencias Farmacéuticas.
Ahora bien, debemos a cada ítem relacionarle todas las preguntas claves de vigilancia
(PCV) que puedan resolver los FCV, por lo que no se debe descartar cualquier pregunta
por sencilla que esta sea; fase denominada “lluvia de ideas”. En esta etapa influyen de
manera directa las entrevistas realizadas a las personas expertas en el tema; en este caso
corresponde al director de la investigación profesora Sonia Ospina, al gerente general de
Coaspharma Miguel Cueca y a los profesionales Químico Farmacéuticos de la empresa
mencionada.
Los (8) FCV relacionados anteriormente, se les asociaron 46 PCV (ver anexo B), los
cuales según concepto del asesor metodológico la Dra Yenny M. Sánchez1 dicho proceso
de vigilancia se extendería por más de (2) años con un sólo analista; por tal razón se
debieron seleccionar por su importancia para la investigación en los (3) siguientes FCV:
1. Producción del antibiótico.
1
Doctora en Economía y Gestión de la Innovación y Política Tecnológica por la Universidad Autónoma de Madrid
(2006), Magister en Análisis y Gestión de la Ciencia y Tecnología de la Universidad Carlos III de Madrid (2001).
Magíster en Ingeniería de Sistemas de la Universidad Nacional de Colombia (1998), evaluadora de Colciencias,
actualmente trabaja como Asesora de la Vicerrectoría de Investigacion, Miembro de la Junta Directiva del Observatorio
Colombiano de Ciencia y Tecnología, Miembro como Investigadora del Grupo de Investigación en Gestión y
Organizaciones (GRIEGO), y es Profesora Asociada del Departamento de Ingeniería de Sistemas e Industrial de la
Universidad Nacional de Colombia, ha escrito (8) artículos indexados, (6) capítulos de libros y (21) libros
26 Metodología
A los cuales se les asociaron 26 PCV (ver anexo B).
5.1.2. Construcción de la ficha de necesidades

Una vez relacionados los FCV y las PCV, se debe iniciar la construcción de la ficha de
necesidades, (J Sánchez, 2011a) donde se mencionan las razones del porqué? y para
qué? de la vigilancia, los cuales para la investigación corresponden a los objetivos
planteados. ( ver anexo B); los descriptores y restrictores de cada PCV corresponden a
palabras claves y restricciones de tiempo y espacio respectivamente, estos parámetros
son importantes para la búsqueda porque la limitan y son parte fundamental de las
ecuaciones.
Para finalizar esta etapa se deben priorizar los PCV de acuerdo con la pertinencia que
pueden tener en la solución del proyecto, los cuales son:
1. Muy importante.
2. Importante.
3. Medianamente importante.
4. Para evaluar.
5. Es necesario conocerlo.
5.1.3. Etapa de búsqueda y captación

Una vez establecida la ficha de necesidades se deben identificar los tipos de fuentes de
información donde se resolverán las PCV, los cuales pueden ser artículos científicos
indexados, patentes, foros, documentos no indexados, congresos, reportes, entrevistas,
etc.., para lo cual es necesario clasificar la información en estructurada2 y no
estructurada3, donde se identificarán los trabajos realizados sobre el tema en diferentes
países con objetivos similares a la presente investigación. Ver Tabla 5 – 3.
TABLA 5 - 3 : Fuentes de información

Datos basados en (Jenny Sánchez, 2011)
FUENTES DE INFORMACION (ver Anexo C)
NO ESTRUCTURADAS ESTRUCTURADAS PATENTES
GOOGLE SCIENCE DIRECT USPTO
YIPPI SPRINGER- JOURNAL KIPRISS
BING EBRARY SIPO
SEARCH.CARROT2 NATURE WIPO
POLYMETA BLACKWELL SINERGY GOOGLE PATENTS
IBOOGIE GENERAL SCIENCE FULL TEXT
CONGRESOS Y FERIAS
SINAB UN
COMERCIALES FARMACEUTICOS
2
Corresponde a la información que está relacionada con las bases de datos de artículos científicos, de patentes o de
mercados. Sánchez, J. (2011b). Información Estructurada y No estructurada. On Dinámica de generación de
conocimiento. Departamento de Ingeniería industrial e ing de sistemas y computación: Universidad Nacional De
Colombia.
3
Corresponde a la información que no se encuentra almacenada en una base de datos estructurada, esta se obtiene a
través de motores de búsqueda de internet (buscadores y metabuscadores).
27 Metodología
5.1.4. Formulación de la ecuación de búsqueda

Debido a la gran cantidad de información sobre el tema de investigación, hace que los
procesos de análisis sean mas dispendiosos; por tal razón en esta fase se hace necesario
establecer unos filtros que consisten en varias palabras claves o sintagmas validados por
el investigador experto, con sus operadores booleanos en el idioma inglés en diversos
buscadores y metabuscadores según (J Sánchez, 2011a), con una ventana de tiempo
comprendida entre el año Ene-1996 y Mar-2013 como factor restrictivo, pero a nivel de
patentes su tiempo fue comprendido entre Ene-2000 y Nov-2012.
En el anexo D y E, se evidencian varias ecuaciones preliminares de búsqueda, las cuales
dan origen a la ecuación formulada para la investigación, de acuerdo a la pertinencia de
los artículos encontrados:
((amoxicillin) AND (production) AND (enzymatic) AND (process) AND (penicillin*)

AND (acylase OR amidase) AND (6 APA) AND (lactam*) AND (antibiotic*) AND
(immobilized) AND (enzyme) AND (phenylglycinemethylester) AND (pgme))
Ahora bien, para la búsqueda en las bases de datos de patentes las palabras clave, se
basan en la clasificación internacional de patentes (IPC), por tal razón en la Tabla 5- 4, se
evidencian los códigos de clasificación, junto con las palabras clave escogidas:
TABLA 5 - 4: Términos de búsqueda según la Clasificación Internacional de Patentes

(IPC)
Fuente: IPC
CLASIFICACIÓN
DESCRIPCIÓN PALABRAS CLAVE KEY WORDS
IPC
Preparados para uso medicinal, dental y
A61K aseo
amoxicilina amoxicillin
Preparados para uso medicinal que
amoxicillin,
A61K 31/00 contienen péptidos (péptidos que amoxicilina
6-aminopenicillanic acid
contienen anillos betalactámicos).
C07D Compuestos heterocíclicos amoxicilina amoxicillin
Compuestos heterocíclicos que contienen
C07D 499/00 anillo 4-tia-1-azabiciclo [3.2.0] heptano, amoxicilina amoxicillin
(p.e: penicilinas, penems)
Proceso de
Fermentación o procesos que usan fermentación,
Process enzymatic,
C12P enzimas para sintetizar un compuesto inmovilización de
Production enzymatic,
químico deseado enzimas, reacción
enzimática
Proceso de
Preparación de compuestos que tienen un fermentación,
Process enzymatic,
C12P 37/00 aniillo 4-tia-1-azabiciclo [3.2.0] heptano, inmovilización de
Production enzymatic,
(p.e: penicilina) enzimas, reacción
enzimática
Microorganismos o enzimas (compuestos Enzima penicilin G Penicillin G Acylase
C12N relacionados) acylase (PGA)
Enzima penicilin G Penicillin G Acylase

C12N11 Enzimas y células inmovilizadas
acylase (PGA)
De acuerdo a lo anterior se define la ecuación formulada para patentes así:
((amoxicillin) AND (production) AND (enzymatic) AND (process) AND (6-apa))

28 Metodología
5.1.5. Elaboración del corpus de información4:

Consiste en la recopilación de datos bibliográficos correspondientes a los artículos
pertinentes a la investigación, los cuales fueron obtenidos en las diferentes búsquedas
registradas en las bitácoras (ver anexo D y E) y son clasificados de acuerdo a su origen
así:
LOS ARTÍCULOS CIENTÍFICOS son referenciados y manejados por el programa endnote
web®5, el cual clasifica en orden alfabetico por autor, evidenciando el año y título; además
cada artículo seleccionado clasifica la información de acuerdo al tipo de referencia, journal,
volumen, tipo de artículo, palabras clave, registro ISSN, la dirección URL, proveedor de la
base de datos, fecha de adición a la biblioteca entre otros.
LAS PATENTES son manejadas por el programa Microsoft Office Excel®, donde son
clasificadas por la fuente, país, número de la patente, título, fecha de publicación,
clasificación IPC, autor, entidad solicitante, finalidad y uso (ver anexo F).
5.2. Etapa de análisis y organización:

En esta etapa se realiza el procesamiento y análisis de la información que posee el
“corpus”; este tipo de información se maneja con el programa Microsoft Office Excel® y
Matheo Analyzer®, los cuales facilitan el proceso de análisis, puesto que establecen
tendencias.
Primero se analizarán las fuentes de información que estructuraron el corpus del estudio,
con el fin de determinar su importancia en el trabajo final y después se resolverán los (3)
FCV más relevantes para el presente trabajo:
1. Producción del antibiótico
5.2.1. Distribución de la información no estructurada

La información encontrada puede clasificarse para la presente investigación de acuerdo a
su pertinencia en los metabuscadores (Gráfica 5 – 1) y los buscadores (Gráfica 5 – 2),
concluyendo que el metabuscador mas importante es "POLYMETA.COM" con el 57% del
total de articulos pertinentes6 encontrados, esto se debe a que posee enlaces con
4
Es un archivo que se obtiene de fuentes estructuradas en la que se almacenan los registros que son útiles y es
fácilmente identificable los nombres de los atributos y su contenido, es considerado el insumo para realizar análisis
cienciométrico. Sánchez, J. (2011a). Guia para la práctica en la empresa de la vigilancia tecnologica e inteligencia
competitiva. Universidad Nacional de Colombia.
5
Programa de gestión de referencias bibliográficas, que se encuentra disponible dentro de ISI Web of Knowledge. Se
accede de forma gratuita gracias a la licencia que posee la Universidad Nacional de Colombia. EndNote Web permite
crear una base de datos personalizada de hasta 10.000 referencias, organizar la bibliografía personal, elaborar listados
bibliográficos e insertar citas en un documento que se esté elaborando entre otras mas funciones.
6
Se refiere a la información seleccionada de acuerdo al aporte que pueda tener un artículo frente al tema de
investigación y que resuelva las PCV.
29 Metodología
diferentes motores de búsqueda entre ellos "GOOGLE, YAHOO y BING"; y por otra parte
el buscador más importante para el tema de investigación es "BING.COM" con el 42% del
total de articulos pertinentes encontrados, puesto que posee algoritmos de agrupamiento
(clustering) lo que hace que sea más rápido y completo, al compararlo con GOOGLE y
SEARCH.CARROT2.ORG.
GRÁFICA 5 - 1: Distribución de la información "NO ESTRUCTURADA" en los

metabuscadores
(Fuente: Bases de datos UN, de acuerdo a los documentos citados en la bibliografía,
evaluados desde Ene.1996 a Mar.2013)
GRÁFICA 5 - 2 : Distribución de la información "NO ESTRUCTURADA" en los buscadores

5.2.2. Distribución de la información estructurada en las bases

de datos científicas
Como se puede observar en la Gráfica 5 - 3, la base de datos más importante para esta
investigación es "SCIENCE DIRECT" con un 41% del total de artículos pertinentes
encontrados, seguido por "SPRINGER - JOURNAL" con un 37% y "BLACKWELL
SINERGY" con un 20%; mientras que las bases "EBRARY" y "NATURE" que mencionan
poseer información cientifica referente al tema, pero sólo muestran datos médicos que no
son pertinentes a la investigación.
GRÁFICA 5 - 3 : Distribución de la información “Estructurada” en las bases de datos

30 Metodología
5.2.3. Distribución de la información estructurada en patentes

Por la información encontrada sobre tema de investigación en las bases de datos de
patentes según (Gráficas 5 – 4 y 5 – 5), se evidenció que la base que reporta un mayor
porcentaje es “GOOGLE PATENTS” en un 68%, seguida por “WIPO PATENTSCOPE” en
un 28%, pero de acuerdo a su pertinencia la base que datos que más aportó información
fue “SIPO” en un 57%, siendo esta, la que menos patentes tenía relacionadas (1.1%) en la
búsqueda principal, en lo que se puede inferir que dicha base de datos es la mas
especializada para el presente tema de investigación.
GRÁFICA 5 - 4 : Distribución de la información estructurada en patentes por buscador.

evaluados desde Ene.2000 a Nov.2012)
GRÁFICA 5 - 5 : Distribución de la información estructurada pertinente en patentes.

evaluados desde Ene.2000 a Nov.2012)
31 Análisis cienciométrico
6. Análisis cienciométrico7
6.1. Publicaciones científicas

Las bases de datos científicas arrojan una cantidad de 7979 artículos relacionados con el
tema (ver anexo D), de los cuales 218 son pertinentes a la investigación y al analizarlos se
filtran hasta 179 referencias, las cuales fueron clasificadas por su aporte en la solución de
las PCV de la siguiente forma:
A. (18) Referencias que aportan datos para el análisis de mercado.
B. (16) Referencias que aportan datos para la revisión del informe.
C. (23) Referencias que aportan datos sobre nuevas formulaciones con el principio
activo amoxicilina.
D. (113) Referencias que aportan datos sobre la investigación técnica del informe.
Ahora bien, se presentaron (9) referencias del total que están enfocadas a análisis
instrumental, las cuales son descartadas por no aportar al tema investigado, por lo tanto el
análisis cienciométrico hará énfasis en los numerales (C) y (D), debido a que dichas
referencias manejan un gran número de información la cual debe ser analizada para dar
solución a los FCV planteados en el capítulo anterior, con el software Matheo Analyzer, el
cual evidencia las tendencias gracias a sus algoritmos de relación.
De las 113 referencias exportadas de las diferentes bases de datos, se eliminan (9)
referencias, puesto que solamente 104 poseen la información pertinente frente al tema
“Síntesis enzimática de antibióticos Betalactámicos (SEAB)”, haciendo referencia a: (AU)
Autor, (PY) año de publicación del Journal, (IN) institución donde se realizó la
investigación, (CO) país de origen del investigador principal, (ST) titulo de la investigación,
(AD) país de origen de la revista que publica, (KW) palabras clave, (JF) revista donde se
publicó la investigación y (AB) resumen de la investigación, aunque cabe resaltar que se
presentaron algunas limitaciones derivadas de la propia naturaleza de las fuentes
empleadas, puesto que unas bases reportan los mismos títulos de manera diferente,
algunos no publican la institución, la revista, el año de publicación, etc.., haciendo que el
mismo artículo sea investigado en diferentes bases de datos con el fin de complementar
los datos faltantes.
Ahora bien, se evidenció que el tema de nuestra investigación continúa vigente para
futuros trabajos, debido a un incremento considerable en la producción bibliográfica en el
periodo analizado, desde el año 1996 (0.96%) a Marzo del 2013 (1.92%), mostrando picos
de producción bibliográfica los años 2007 y 2010 con un 11.54% (12 artículos), 2004 y
2005 con un 10.58% (11 artículos), ver Gráfica 6 - 6.
7
Ciencia que estudia el desarrollo de la producción científica donde se mide y analizan factores como el número de
investigadores, su distribución geográfica o por especialidad, fuentes de financiamiento, productividad y repercusión
entre otros.
GRÁFICA 6 - 6 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEAB.

evaluados desde Enero 1996 a Marzo 2013 y graficados con el software Matheo
Analyzer®)
Ahora bien, de estos artículos publicados se evidencia que los autores mas
representativos con respecto al tema SEAB, corresponde al Dr Andrés Illanes8(Chile), el
cual tiene una participación del 10.71% (18 trabajos); la Dra. Raquel de Lima Camargo
Giordano9(Brasil), con una participación del 8.33% (14 trabajos); Dr. Roberto de Campos
Giordano10 (Brasil) con una participación del 7.74% (13 trabajos); Dra Carolina Aguirre
Cespedes11(Chile) con una participación del 7.14% (12 trabajos); Dra. Lorena Wilson12
(España) con una participación del 6.55% (11 trabajos); Dra Luciana Goncalves Rocha
Barros13(Brasil); Dr. José Manuel Guisán Seijas14(España) y Dr. Roberto Fernandez-
Lafuente15(España) con una participación del 5.95% (cada uno con 10 trabajos), ver
Gráfica 6 – 7.
8
ANDRES ILLANES, M.Sc. Biochemical Engineering, Massachussets Institute of Technology (MIT), trabaja como
investigador en la escuela de ingeniería bioquímica, de la Pontificia Universidad Católica de Valparaiso (Chile), quien
ha participado en 61 artículos y 6 libros de tipo científicos relacionados con procesos enzimáticos.
9
RAQUEL DE LIMA CAMARGO GIORDANO, M. Sc. Chemical Engineering, Massachussets Institute of Technology
(MIT), Profesor del centro de ciencias exactas y de tecnología, de la Universidad Federal de San Carlos (Brasil), dirige
el grupo de investigación de ingeniería de procesos enzimáticos, quien ha participado en 76 publicaciones científicas.
10
ROBERTO DE CAMPOS GIORDANO, M. Sc. Chemical Engineering, Massachussets Institute of Technology (MIT),
profesor del centro de ciencias exactas y de tecnología, de la Universidad Federal de San Carlos (Brasil), dirige el
grupo de investigación de inteligencia computacional aplicada a bioprocesos y desarrollo de bioreactores no
convencionales, ha participado en 76 publicaciones científicas.
11
CAROLINA AGUIRRE CESPEDES, Doctor en Ciencias con Mención en Química, de la Pontificia Universidad
Católica de Valparaiso, profesor de la Facultad de Ciencias de la Universidad Católica de la santísima concepción
(Chile), investigador en enzimas de aplicación industrial, ha participado en 18 publicaciones científicas.
12
LORENA WILSON, Ph.D. Universidad Autónoma de Madrid, (España), Magíster en Ciencias de la Ingeniería con
mención en Ingeniería Bioquímica, Pontificia Universidad Católica de Valparaíso (PUCV), directora de programas de
posgrados de la escuela de ingeniería bioquímica (PUCV), ha participado en 48 publicaciones científicas.
13
LUCIANA GONCALVES ROCHA BARROS, Ph.D. en Ingeniería Química de la Universidad Federal de San Carlos,
profesor asociado de la Universidad Ceará (Brasil), dirige los grupos de investigación enfocados a la Ingeniería de las
reacciones enzimáticas, la inmovilización y el desarrollo de los procesos de fermentación enzimática, ha participado en
53 publicaciones científicas, 111 actas de congreso.
14
JOSE MANUEL GUISAN SEIJAS, Ph. D. en Bioquímica de la Universidad Autónoma de Madrid, Vicepresidente del
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas (CSIC-UAM) España, Instituto de Catálisis Química y Petroquímica,
trabaja en el grupo de investigación de Ingeniería de Biocatalizadores y Biotransformaciones, ha participado en 40
publicaciones científicas.
15
ROBERTO FERNÁNDEZ-LAFUENTE, Ph. D. University Collegue London (Reino Unido), trabaja en el Instituto de
Catálisis Química y Petroquímica (España), maneja el grupo de investigación de optimización de biocatalizadores y
bioprocesos enzimáticos, ha participado en 36 publicaciones científicas.
GRÁFICA 6 - 7 : Autores que más publican sobre el tema SEAB

Analyzer®)
Continuando con el análisis, se encontró que los países que más investigan sobre el tema
SEAB, son en mayor proporción Brasil con el 19.42% (20 publicaciones), Chile con el
17.48% (18 publicaciones), seguidos muy de cerca por China con el 14.56% (15
publicaciones) y finalmente entre los más representativos están India y países bajos con
un 8.74 y 7.77% respectivamente (9 y 8 publicaciones), ver Gráfica 6 – 8.
GRÁFICA 6 - 8 : Porcentaje del país de origen de los autores que más investigan sobre
SEAB, respecto al número de publicaciones
Analyzer®)
Sin embargo, cuando se realiza el análisis con la red asimétrica16 según Gráfica 6 – 9, que
relaciona el país vs número de autores, se confirma que los países en donde hay mas
investigadores con respecto al tema de investigación (SEAB), son Brasil y Chile (15 y 11
investigadores respectivamente), seguidos por España y China (8 investigadores cada
16
Es una representación cartográfica de las relaciones que existen entre los elementos de una población, permitiendo
una interpretación rápida y fácil, está formada por nodos y relaciones, en el programa Matheo Analyzer se pueden usar
filtros de formas, conectividad y pares, permitiendo un mayor poder de interpretación.
uno), Paises bajos (7 investigadores) y República Checa (4 investigadores). Además se

evidencia mediante las líneas gruesas los autores que mas publican, muestra también una
relación entre Brasil y España frente a los autores Fernandez-lafuente, y Guisan, debido a
investigaciones conjuntas en temas específicos como la sintesís de amoxicilina y entre
España y Chile, debido a investigaciones en síntesis enzimáticas usando la penicilin G
acilasa.
investiga sobre el tema SEAB.
Analyzer®)
De acuerdo a lo anterior, es necesario hacer un análisis del porqué la baja participación

frente a estos temas en potencias científicas como Estados Unidos, Alemania, Reino
Unido, Canadá, Australia y Francia, por lo que se puede inferir que sus centros de
investigación están enfocados en la búsqueda de tratamientos mejorados para el cáncer,
enfermedades virales, enfermedades del sistema nervioso central, del aparato circulatorio
y la artritis (como se puede observar en la sección 7.2.5.3 de la presente investigación),
debido a que son las enfermedades más comunes en dichos países, siendo sus resultados
altamente comercializables y por supuesto rentables; en cambio en países como Chile,
Brasil y Mexico, sus centros de investigación están más enfocados al desarrollo de la
química fina con el fin de apoyar el crecimiento de su economía interna.
Por otra parte, en la red asimétrica Gráfica 6 - 10, se evidencia que el centro de
investigación que más investigadores asociados posee es el Departamento de Ingeniería
Química de la Universidad Federal de Ceará (Fortaleza-Brasil) con 11 investigadores y la
escuela de Ingeniería Bioquímica de la Pontificia Universidad Católica (Valparaiso-Chile)
con 7 investigadores, seguidos por el Departamento de Química de la Universidad

Zhejiang (China), el Departamento de Biocatálisis de la Universidad Autónoma de Madrid
(España) y del Instituto de Microbiología (Laboratorio de tecnología de enzimas) de la
Academia de Ciencias de la República Checa con 4 investigadores cada uno.
De igual forma se evidencian unas líneas gruesas que indican los investigadores que más
publican sobre SEAB y se evidencia la relación de trabajos publicados entre las diferentes
universidades chilenas como: Universidad Técnica Federico Santa Maria, la Pontificia
Universidad Católica Valparaiso y la Universidad Católica de la Santísima Concepción,
donde los autores Wilson, Illanes y Aguirre, se han integrado para investigaciones
específicas en la sintesis de antibióticos betaláctamicos tipo cefalosporínicos (Cefalexina),
por otra parte la Universidad Federal de Ceará y la Universidad Autónoma de Madrid con
el investigador Guisan, se han integrado para la realización de investigaciones conjuntas
en temas específicos como la síntesis de amoxicilina.
Como se ha observado hasta el momento, conocemos cuales son los centros de
investigación, su ubicación y los investigadores más destacados que desarrollan el
presente tema de investigación; Ahora en la red asimétrica Gráfica 6 - 11 , se da a conocer
cúal es la revista científica donde más se publica, donde se evidencia la frecuencia de las
publicaciones Journal-Autor, demostrando que el Journal Enzyme and Microbial
Technology17 es la más empleada por los investigadores para sus publicaciones con un
15,66% del total de publicaciones; Seguido por el Journal of Molecular Catalysis B –
Enzymatic18 con un 12,05% del total de publicaciones y el Journal Process
Biochemistry19 con un 8.43% del total de publicaciones, igualmente se confirma la
importancia de los autores Illanes, Aguirre, y Wilson.
17
Revista creada en Estados Unidos y perteneciente a la editorial Elsevier, enfocada principalmente a la investigación
en los aspectos básicos y aplicados de procesos biotecnológicos, relacionados con el uso de enzimas,
microorganismos y células animales y vegetales, posee un factor de impacto de 2.592 y factor de impacto acumulado
en los últimos 5 años de 3.003 (según Journal citation Reports 2013, publicados por Thomson Reuters®)
18
Revista creada en Amsterdam y perteneciente a la editorial Elsevier, la cual está catalogada para investigadores y
desarrolladores de productos donde se permite hacer foros de discusión frente a las aplicaciones de células
enteras y enzimas libres de células como catalizadores en la síntesis orgánica, posee un factor de impacto de 2.823 y
factor de impacto acumulado en los últimos 5 años de 2.805 (según Journal citation Reports 2013, publicados por
Thomson Reuters®)
19
Revista creada en Amsterdam y perteneciente a la editorial Elsevier, enfocada a la ciencia y la tecnología de
los procesos que involucran moléculas bioactivas y organismos vivos, enfocada a la producción de metabolitos, siendo
sus principales áreas de interés los nuevos bioprocesos y tecnologías de apoyo, posee un factor de impacto de 2.414 y
factor de impacto acumulado en los últimos 5 años de 2.983 (según Journal citation Reports 2012, publicados por
Thomson Reuters®),
GRÁFICA 6 - 10 : Red asimétrica que relaciona la institución vs número de autores que

más investiga sobre el tema SEAB.
Analyzer®)
GRÁFICA 6 - 11 : Red asimétrica que relaciona el Journal vs número de publicaciones por

autor sobre el tema SEAB
Analyzer®)
Y las palabras claves más citadas por los autores para el tema de investigación son:
14.18% para PENICILLIN G ACYLASE con 39 citaciones, 11.64% para PENICILLIN
ACYLASE con 32 citaciones, 6.55% para ENZYMATIC SYNTHESIS con 18 citaciones y el
5.82% para β-LACTAM ANTIBIOTICS y AMOXICILLIN con 16 citaciones cada uno, de
acuerdo a la Gráfica 6 - 12, aunque cabe mencionar que hay ciertos artículos que citan
diversas palabras con significados iguales, como 6-apa y 6-aminopenicillanic acid, pero
son catalogados diferentes por escribirse de otros caracteres.
GRÁFICA 6 - 12 : Porcentaje de las palabras claves más citadas por los autores que
investigan sobre el tema SEAB.
Analyzer®)
6.2. Patentes
Para el análisis de patentes se construyó una base de datos, donde el corpus de
información va desde enero/2000 a noviembre/2012, la cual fue filtrada de acuerdo a las
palabras claves elegidas basados en la IPC (Tabla 5 – 4), lo cual ayudó a la eliminación de
patentes que no tienen relación con el tema y trabajadas en el programa Microsoft Office
Excel, debido a la no disponibilidad de software especializado para esta labor.
Cabe recordar que la base de datos que mas aportó fue “SIPO” correspondiendo a la base
de datos de patentes de China, esto se debe a que las patentes de los innovadores se
están venciendo y los investigadores de origen chino hacen una mejora pequeña y la
patentan. Ahora bien, en la Gráfica 6 - 13, se evidencia la distribución de las 125 patentes
pertinentes, donde se presenta un crecimiento constante frente al tema investigado y
presenta una disminución en los años 2007 y 2012 que deben ser analizádos frente a la
fecha de publicación con respecto a los años siguientes, con el fin de establecer
tendencias.
GRÁFICA 6 - 13 : Tendencia de publicación de patentes pertinentes registradas

evaluados desde Enero 2000 a Noviembre 2012)
Ahora bien, se establecen varios tópicos de análisis, con el fin de poder clasificar la
información de las patentes como son:
A. Entidades más representativas, Siendo el más representativo DSM IP Assets B.V
con sede en Holanda, con una participación de 14% en patentes del tema de
investigación y corresponde a una de las compañías mas grandes que comercializan
el antibiótico.(ver Gráfica 6 - 14), seguido por Beijing Ruiyiren Technology
Development Co. Ltd y Shanghai Hengfengqiang Animal Medicine Co. Ltd con sede
en China, representando el 6% y 5% su participación del total de invenciones, las
cuales están enfocadas a la I&D de nuevas formas farmacéuticas y nuevos productos.
GRÁFICA 6 - 14 : Distribución de las principales entidades solicitantes de patentes

B. Pais de origen de la entidad solicitante, si se observa en la Gráfica 6 - 15, la

sumatoría de los porcentajes de participación de las entidades (18%) tienen como
país de origen China, ahora bien, cuando se analiza la invención individualmente el
porcentaje aumenta a un 58%, correspondiendo a empresas esporádicas que realizan
I&D pero no son constantes en registrar patentes; En segundo lugar encontramos a
Holanda con un 17% el cual está directamente relacionado con la empresa DSM.
GRÁFICA 6 - 15 : Distribución del país de origen del autor de la patente

C. Distribución de las investigaciones de patentes, se clasifica la información en (3)

ítems, la Gráfica 6 – 16, se evidencia que el mayor porcentaje corresponde a la
formulación de nuevos productos (58%) y dentro de estos su mayor desarrollo está en
tabletas (53%), seguido de polvo para inyección (18%)(ver Gráfica 6 - 17), seguido por
mejoramiento de la reacción enzimática (22%) y el nuevo desarrollo de materia prima
(20%), lo anterior se debe a que el primer ítem no demanda tanto tiempo para su
desarrollo y estandarización, caso contrario en los siguientes ítems
GRÁFICA 6 - 16 : Distribución del campo de aplicación de la patente

GRÁFICA 6 - 17 : Distribución de las investigaciones en la formulación de nuevos

productos.
D. Campo de aplicación, En la Gráfica 6 – 18, se observa que las patentes generadas

presentan un nuevo enfoque direccionado al uso veterinario en un 7%, pero
notablemente se encuentra marcado su desarrollo al uso humano con un 67%.
GRÁFICA 6 - 18 : Distribución del campo de aplicación.

41 Resultados
7. Revisión del estado del arte

La presente revisión corresponde a los resultados establecidos en el capitulo anterior,
donde se analizarán (3) FCV, los cuales son:
7.1. FCV - Producción del antibiótico

Los antibióticos son por definición moléculas con actividad antimicrobiana, que
incluyen una gran cantidad de compuestos pertenecientes a diferentes familias
químicas. Son metabolitos secundarios, producidos en la mayoría de los casos
después de la fase de crecimiento. Alexander Fleming descubrió de forma accidental
la penicilina en 1928; esta sustancia demostró su eficacia frente a cultivos de
laboratorio de algunas bacterias patógenas como las de la gonorrea, o algunas
bacterias responsables de meningitis o septicemia. Este descubrimiento permitió el
desarrollo de posteriores compuestos antibacterianos producidos por organismos
vivos. Howard Florey y Ernst Chain, en 1940, fueron los primeros en utilizar la
penicilina en seres humanos.(Price, 2005)
Los primeros procesos para la producción de penicilina, implicaban el crecimiento de
Penicillium notatum sobre la superficie de un medio líquido; después en 1945 con el
descubrimiento de una nueva especie, P. chrysogenum, se pudierón incrementar los
rendimientos del producto y trabajar en cultivo sumergido, empleando lactosa como
fuente de carbono y energía y agua de macerado de maíz (corn-steep liquor) como
fuente de nitrógeno, lo cual hizo mas rentable el proceso (Demain & Elander, 1999).
Ahora bien, en el proceso industrial el tamaño de los reactores pasó de un volumen de
30,000 a 100,000 galones, con operaciones de separación del micelio por filtración y
extracción del antibiótico del caldo, seguida por la cristalización o precipitación ácida
del mismo.(Demain & Elander, 1999). Su tiempo de ciclo oscila entre 120 – 200 horas,
requiere altos niveles de oxígeno disuelto esencialmente en las fases de crecimiento
(40 – 50 horas); en la actualidad estos procesos de fermentación son altamente
automatizados donde se controla la temperatura, el pH, la cantidad de oxígeno
disuelto, dióxido de carbono, el azúcar, el precursor, cantidad de amoníaco,
etc…(Elander, 2003)
La producción de penicilina como otros procesos biotecnológicos está dominada por
su aspecto competitivo entre los grandes laboratorios productores, que realizan
permanentes esfuerzos de mejoramiento en cada etapa del proceso: cepa,
fermentación y separación, mostrando incrementos en su velocidad de producción
42 Resultados
hasta 40 veces (las cuales van desde 1950 produciendo 10 unidades ml-1 h-1 hasta en
1980 produciendo 400 unidades ml-1 h-1) (Schäfer et al., 2007). En la Tabla 7 - 5, se
resumen los cambios realizados desde 1950 hasta el 2000.
TABLA 7 - 5: Evolución en la tecnología de fabricación de la penicilina

Basado en (Elander, 2003)
FERMENTACION 1950 2000
Fuente de Carbón Lactosa Glucosa / Sacarosa
Tipo de cultivo Lote Lote-alimentado
Esterilización del medio Lote Continuo
Filtración del aire Filtros de profundidad Membranas de filtración
Alimentación Ninguna Continuamente
Morfología del hongo Filamentoso Granulado
Tiempo de ciclo 120 horas 120 - 200 horas
Volumen del tanque (galones) 10,000 - 20,000 20,000 - 60,000
Análisis Bio-ensayo HPLC
Únicamente Todas las variables
Control
la temperatura automatizadas
Concentración (g / l) 0,5 - 1,0 > 40
Cantidad Producida (Toneladas) 83 33.000
RECUPERACIÓN Y PURIFICACIÓN
Eliminación del micelio Filtración al final Contínuo
Tipo de operación Lote Semi-continuo
Etapas de extracción >8 <8
Recuperación y re-utilización del
precursor NO SI
Eficiencia (%) 70 - 80 > 90
Costo del granel ( US $ / kg) 275 - 350 15 – 20
La práctica industrial usada para producir antibióticos betalactámicos semisintéticos es

la ruta química, proceso que la empresa Bristol Myers Company patentó en 1976
(Grossman, 1976), que incluye protección y desprotección de grupos reactivos, bajas
temperaturas (menores a -30°C), el uso de solventes órganoclorados (cloruro de
metileno), agentes de sililación y altos volúmenes de desechos (Elander, 2003) ;
(Alemzadeh, Borghei, Roostaazad, & Roostaazad, 2010)
Por lo tanto, la síntesis enzimática ha recibido mucha atención hasta el punto de ser
denominada "química verde", presentando un creciente interés en las reacciones
enzimáticas para la producción de compuestos biológicamente activos, razón por la
cual las investigaciones se han enfocado principalmente en dichas reacciones en
sistemas acuosos u orgánicos y/ó mezclas de los mismos; además durante los
procesos enzimáticos se dan diferentes subprocesos como: La disolución y
cristalización del sustrato y producto, la síntesis enzimática del producto y la hidrólisis
enzimática del sustrato y producto(L. R. B Goncalves, Giordano, & Giordano, 2005),
por lo que se hace necesario controlar cada variable que pueda, de una u otra forma,
incidir sobre la obtención del producto en cuestión como lo es el pH, temperatura de la
43 Resultados
reacción, suministro de oxigeno, velocidad de agitación, velocidad de agregado de

nutrientes y agitación del reactor en otras (Diender, Straathof, van der Does,
Zomerdijk, & Heijnen, 2000).
De acuerdo a lo mencionado anteriormente, se puede afirmar que antes de obtener la
amoxicilina (ver Anexo G), es necesario tener su precursor como lo es la penicilina V ó
G, el cual es un proceso de fermentación complejo, por ser a gran escala y por tener
un gran número de variables a controlar, lo cual hace que la presente investigación
fuera en un principio una idea insensata debido al desconocimiento de la tecnología de
producción y por ende haciendo que el proyecto sea abortado. Ahora bien la obtención
de la amoxicilina por síntesis enzimática ha tomado gran importancia por su baja
contaminación al medio ambiente y por no requerir condiciones especiales como las
requeridas por la síntesis química, lo cual hace que este proceso sea más rentable,
razón por la cual surgió como alternativa a la fermentación, realizar una reacción de
síntesis enzimática a partir del precursor 6-APA y la enzima Penicilin G Acilasa.
7.3.1. Producción industrial

La producción enzimática de la amoxicilina se da por la reacción del éster metílico de
la hidroxifenil glicina (PHFGME) y el ácido 6 amino penicilánico (6-APA) en relación
3:1, catalizada por la enzima penicilin G acilasa (PGA), donde dicha enzima debe
mantenerse a una concentración, temperatura y pH determinados; para que la
reacción sea favorable se requiere que el grupo carboxilo del PHFGME se encuentre
protonado (donador acilo) y que el grupo amino del 6-APA sea neutro para estar
disponible a las interacciones nucleofílicas, pero se tiene el inconveniente que en el
rango donde la enzima es activa (pH: 6-8) las cargas del sustrato son despreciables
(2010), razón por la cual muchas investigaciones están dirigidas a buscar las
condiciones ideales de reacción con el fin de obtener un mayor rendimiento de la
amoxicilina.
A continuación se plantean las diferentes estrategias diseñadas para mejorar la
producción del antibiótico:
7.3.1.1. Continuar con la investigación de las vías hidrolíticas

44 Resultados
Figura 7 - 2: Reacción enzimática para la obtención de la amoxicilina

Basado en (Giordano, Ribeiro, & Giordano, 2006)
Para esta estrategia los diferentes investigadores establecen dos enfoques para
abordar la síntesis, uno es el termodinámico (Figura 7 - 2, parte A), el cual se basa
en influenciar el equilibrio de la reacción hacia el producto, donde se evidencian
inconvenientes frente a la activación de la enzima al pH de reacción, baja solubilidad
de PHFGME y pérdida de la actividad enzimática en presencia de co-solventes, el otro
enfoque es el cinético (Figura 7 - 2, parte B) donde se evidencia un problema de
optimización, mostrando desventajas frente la acción de la PGA, debido a que puede
ser transferasa ó hidrolasa y las moléculas de agua compiten con núcleos β-
lactámicos para el ataque nucleofílico al intermediario acil-enzima. Por lo tanto, la
viabilidad económica de esta ruta, será determinada en gran parte por la optimización
de las condiciones operativas del reactor (Giordano, et al., 2006).
Ahora bien, el enfoque cinético analiza el mecanismo de las tres reacciones, que
suceden durante la síntesis (Figura 7 - 2, parte B) como son:
1. Síntesis de antibiótico, Reacción irreversible, donde la cantidad de producto final
se puede ver afectada si se presenta la hidrólisis.
2. La hidrólisis del precursor de la cadena lateral, La cual genera como producto
final p-hidroxifenilglicina (PHFG).
3. La hidrólisis del antibiótico. generando como producto final PHFG y el 6-APA
(Giordano, et al., 2006).
Con lo cual se puede concluir que una síntesis eficiente sólo se logra cuando la
hidrólisis se reduce al mínimo tanto del producto final, como del sustrato, evitando de
esta forma la formación de PHFG.
45 Resultados
7.3.1.2. Modificaciones en el medio de reacción

En Tabla 7 - 6, se relacionan cambios de pH, precipitación del producto de síntesis,
efecto co-solvente en la mezcla de reacción y las concentraciones iniciales ideales de
PHPGME, 6-APA y PGA, evidenciando que la mejor estrategia usada para mejorar el
rendimiento hasta un 88%, es la planteada por (C. Chen, Wu, Liu, Lv, & Lin, 2008),
partiendo del 6-APA y usando tert-pentanol anhidro como co-solvente, y las otras
alternativas viables parten de la sal potásica de penicilina G (PGK) como: (1) Se usa
como co-solvente el etilenglicol, la enzima PGA de E. coli, donde su rendimiento global
fue del 55.20% (Wu, Chen, Du, & Lin, 2010) y (2) Se usa la enzima PGA de Kluyvera
citrophila, adicionando iones de Zinc donde su rendimiento global fue del 71.50% (Y.-
W. Zhang, Liu, & Xu, 2010), mostrando una eficiencia del proceso, puesto que se
realiza la síntesis enzimática de la amoxicilina en un solo paso, debido a que no
requiere el intermediario 6-APA.
Ahora bien, se demostró que en todas las estrategias se busca una total conversión
del 6-APA por ser más costoso que la cadena lateral y que la PGA no pierde la
actividad después de la exposición prolongada a los solventes usados; igualmente se
demostró que para una mayor eficiencia del proceso de síntesis es necesario
mantener una mayor proporción de PHPGME que de 6-APA, pero la relación varía
entre los diferentes autores, mostrando un mejor resultado cuando la relación es 3:1
respectivamente.
TABLA 7 - 6: Estrategias realizadas para el mejoramiento de la síntesis de amoxicilina

(Fuente: Bases de datos UN, de acuerdo a los documentos citados en la bibliografía)
TITULO / T Tiempo PRODUC-

ESTRATEGIA RESULTADOS PGK 6-APA PHFGME PGA pH
AUTOR (°C) (H) CION
Course of pH during
El modelo puede ser utilizado como una
the formation of
herramienta para la optimización de una
amoxicillin by a
CONTROL reacción enzimática tipo suspensión-
suspension to 6.2 -
ADECUADO suspensión, donde el control de pH es muy NR 63 g/l 65 g/l 25 1.5 100 mU NR
suspension 5.5
DEL pH importante e influye directamente en la
reaction
producción del antibiótico, siendo el mejor
rango de pH (6.2 - 5.5)
(Diender, et al., 2000)
Enzymatic synthesis of Se estudia la viabilidad de precipitación de
b-lactam antibiotics via la amoxicilina mediante la adición de iones
PRECIPITACION DEL
direct condensation Zn+2 en la reacción de síntesis, 10 10
PRODUCTO NR 2 10 NR 6 30 mmol/ kg
presentando rendimientos que aumentan mmol mmol
DE SINTESIS (Ulijn, De Martin, Halling, hasta 30 veces, cuando es contralada la
Moore, & Janssen, 2002) sintesis termodinámicamente.
La reacción en medio orgánico llevó más
tiempo para alcanzar el máximo
Anhydrous tert-
rendimiento, en comparación con medios
EFECTO CO- pentanol as a novel
acuosos (normalmente 4-5 h), evidenciando
media for the efficient
SOLVENTE EN LA que la enzima muestra una menor actividad 100 200 20
enzymatic synthesis of NR 15 20 6.8 88%
MEZCLA DE en medios orgánicos; además la hidrólisis mmol mmol UI / mL
amoxicillin
REACCION de HPGM y la amoxicilina fue muy baja
debido a la menor actividad de agua del
(C. Chen, et al., 2008)
sistema de reacción, obteniendo un mayor
rendimiento de síntesis.
46 Resultados
TABLA 7 - 6: (Continuación)
AUTOR (°C) (H) CIÓN
Se evalúa la presencia del Termosoma de

Redirecting the Methanocaldococcus jannaschii (rTHS) el
inactivation pathway of cual estabiliza la enzima PGA hasta un 35%
penicillin amidase and mas(reduciendo la tasa de inactivación)
increasing amoxicillin cuando se trabajan con mezclas
production via a hidroalcohólicas (Metanol : Agua) con el fin 1.5 2.5 4 veces mas
NR 37 40 2 µM 8.5
thermophilic molecular de disminuir la hidrólisis del antibiótico; mmol mmol que sin rTHS
chaperone además se evidenció que en presencia del
EFECTO CO- rTHS y la adición de iones de Calcio(8
SOLVENTE EN LA (Bergeron, Tokatlian, mmol) se obtiene hasta 4 veces mas
MEZCLA DE Gomez, & Clark, 2009) antibiótico y es 3 veces mas selectivo que
en ausencia de los mismos.
REACCIÓN
Modeling and Se evaluó la adición de co-solventes tales
optimization of como etilenglicol y metanol, siendo el
methanol as a metanol el que da una mejor relación entre
cosolvent in síntesis/hidrólisis cuando se combina con 80 80 38
NR 35 NR 6.5 20 mmol
Amoxicillin synthesis unas elevadas concentraciones de los mmol mmol UI / ml
and its advantage over sustratos, que contrasta con el mayor efecto
ethylene glycol co-solvente a bajas concentraciones de
(Chow et al., 2007) sustrato.
Inhibitory effects in the
EFECTO CO-
side reactions
SOLVENTE EN LA occurring during the El metanol se ha utilizado con frecuencia
MEZCLA DE enzymic synthesis of para mejorar el rendimiento de las
REACCIÓN amoxicillin: p- reacciones de sintesis catalizadas por la

hydroxyphenylglycine PGA, su efecto en la reacción enzimática
Y 37 112 30
methyl ester and depende del sustrato y de los cambios NR 25 NR 6.5 51.4%
CONCENTRACIONES mmol mmol UI / mL
amoxicillin hydrolysis conformacionales de enzimas, encontrando
IDEALES en el estudio que disminuye los
INICIALES DE (L. R. B. Goncalves, rendimientos, ya que favorece la hidrólisis
PHPGME, 6-APA y Fernandez-Lafuente, del antibiótico en comparación con el éster.

Guisan, Giordano, &
PGA
Giordano, 2003)
The role of 6-
aminopenicillanic acid Se plantea que el modelo semi-empírico es
on the kinetics of capaz de representar la sintesis de la
amoxicillin enzymatic amoxicilina en concentraciones de 50 a 100
synthesis catalyzed by mM de 6-APA y puede ser utilizado para
penicillin G acylase simular el reactor, donde se confirma que
50 -100 0 - 80 30 30 - 50
immobilized onto durante la síntesis de amoxicilina, el 6-APA NR 25 0 -15 6.5
mmol mmol UI / mL mmol
glyoxyl-agarose tiene que ser unido al complejo de acil-
enzima antes de la desacilación, debido a
(L. R. B. Goncalves, una dependencia lineal entre la relación de
Fernandez-Lafuente, constantes aparentes y las concentraciones
Guisan, & Giordano, de 6-APA.
RACIONALIZACIÓN 2002)
Enzymatic synthesis of
DE LA Se compararon los modelos mecanicista,
amoxicillin: Avoiding
EXPERIMENTACIÓN semi - empírico y una red híbrida neuronal
limitations of the
POR MEDIO DE (NN), evidenciando que la (NN) podría
mechanistic approach 5 -100 40 - 80 30 5 - 10
predecir con precisión las velocidades de NR 25 0 -10 6.5
MODELOS for reaction kinetics mmol mmol UI / mL mmol
reacción en las concentraciones de interés,
incluyendo las bajas donde el modelo semi-
(L. R. B. Goncalves et
empírico no es confiable.
al., 2002)
Se evaluaron los reactores con referencia a
Mathematical modeling
la selectividad, índice de rendimiento y el
of batch and semibatch
rendimiento global, donde su elección
reactors for the
depende de la evaluación económica, donde
enzymic synthesis of 10-100 30 - 80 30
se muestran mejores resultados en el NR 25 0 -17 6.5 NR
amoxicillin mmol mmol UI / mL
reactor semi-continuo, además la red hibrida
neuronal fue capaz de representar la
(L. R. B Goncalves, et
cinética compleja de la síntesis enzimática
al., 2005)
de amoxicilina.
One-pot, two-step Se evaluó la obtención de la amoxicilina a
REDUCCIÓN DE
enzymatic synthesis of apartir de la sal de Penicilina G en un sólo
PASOS EN LA amoxicillin by recipiente, con "2" reacciones catalizadas
100 200 1 RX - 37 1 RX - 8.0 1 RX - 93.8%
SÍNTESIS, EFECTO complexing with Zn2+ por la penicilina acilasa inmovilizada de NR NR NR
mmol mmol 2 RX - 25 2 RX - 6.0 2 RX - 76.2%
CO-SOLVENTE Y Kluyvera citrophila, en presencia de iones
(Y.-W. Zhang, et al., de Zinc, obteniendo un rendimiento global
ADICIÓN DE IONES
2010) del 71,5%
47 Resultados
AUTOR (°C) (H) CION
Enzymatic Synthesis of Se demostró que se puede obtener la

Amoxicillin via a One- amoxicilina apartir de la sal potásica de
REDUCCIÓN DE pot Enzymatic penicilina G y PHFGME con etilenglicol
Hydrolysis and como co-solvente orgánico. El novedoso
PASOS EN LA
Condensation Cascade protocolo para la síntesis enzimática de 150 450 50
SÍNTESIS, EFECTO NR 25 10 6 55.20%
Process in the amoxicilina tendrá potencial aplicación en la mmol mmol UI / mL
CO-SOLVENTE Y Presence of Organic producción industrial de antibióticos β-
ADICIÓN DE IONES Co-solvents lactámicos, debido a la reducción de pasos
enzimáticos a pesar de sus bajos
(Wu, et al., 2010) rendimientos.
RACIONALIZACIÓN
Use of neural networks El uso de redes neurales junto con los
DE LA in the mathematical modelos híbridos son una alternativa
EXPERIMENTACIÓN modelling of the interesante para simular los datos
POR MEDIO DE enzymic synthesis of experimentales de la producción enzimática

amoxicx|xillin de amoxicilina en los reactores tipo batch, 5.2 -
MODELOS 8.5 - 16.2 2 0.02 - 0.10
catalysed by penicillin los cuales proporcionan resultados precisos, NR 30.8 25 0 - 8.3 6.5
Y mmol UI / g mmol
G acylase immobilized dentro del rango de concentración de mmol
DIFERENTES in chitosan sustrato evaluado.
SOPORTES PARA LA (J. A. Silva, Neto, Se evaluaron los (2) tipos de reacciones con
INMOVILIZACIÓN DE Adriano, Ferreira, & 15 nodos y con 10.000 interacciones para el

Goncalves, 2008) antibiótico y 65.000 para la PHFG.
LA PGA
Enzymatic Synthesis of
Se evaluó el rendimiento de la sintesis a
Amoxicillin
diferentes concentraciones de 6-APA, 20 60 5
with Immobilized NR 35 4.7 6.3 50%
PHPGME Y PGA, a diferentes rangos de pH mmol mmol g/L
Penicillin G Acylase
CONCENTRACIONES y temperatura.
(Alemzadeh, et al., 2010)
IDEALES Influence of 6-
INICIALES DE aminopenicillanic acid
PHPGME, 6-APA y on amoxicillin El 6-APA es capaz de inhibir

synthesis and p- competitivamente la hidrólisis de HPGM y
PGA NR 0.50% 3% NR NR 20 µL 6.5 NR
hydroxyphenylglycine afecta directamente la tasa de formación de
methyl ester hydrolysis amoxicilina
(Chow, Jinchuan, &
Ruijiang, 2005)
PGK: Sal potásica de Penicilina G

NR: No reporta
7.3.1.3. Mejoramiento del sistema enzimático

En la Tabla 7 - 7, se relacionan estrategias como la búsqueda de una mejor enzima
que la PGA, como las hidrolasas de éster de alfa-aminoácidos (AEHs), creación de
cepas superproductoras mediante mutagénesis sitio-específica y la modificación de las
técnicas de inmovilización, ya sea por atrapamiento simultáneo con nano-partículas
magnéticas en una matriz de sílica o por atrapamiento en un hidrogel de sílice amino
modificado, con el fin de garantizar que la enzima posea una mayor eficiencia
catalítica. Ahora bien, dichas estrategías permiten mejorar los rendimientos de
producción de los diferentes antibióticos β-lactámicos (cefalexina ver Anexos H y I) y
(ampicilina ver Anexos J y K) lo cual puede ser extrapolable para la producción de
amoxicilina; aunque cabe mencionar que de los diferentes autores clasificados para
esta estrategia, tan sólo (Dong, He, Gong, & Yang, 2010) son los únicos autores que
muestran datos numéricos relacionados con la inmovilización de la enzima aplicado a
la amoxicilina, evidenciando un rendimiento de la síntesis en medios acuosos del 38%
a una temperatura de 25°C y con un tiempo de 2,5 h, que al comparar dichos
resultados con los reportados en la Tabla 7 – 7 son muy bajos, pero loables en la
48 Resultados
posible aplicación de dichas técnicas de inmovilización conjugadas con la síntesis que

parte de la PGK.
TABLA 7 - 7: Estrategias de mejoramiento del sistema enzimático

(Fuente: Bases de datos UN, de acuerdo a los documentos citados en la bibliografía)
TÍTULO /
ESTRATEGIA RESULTADOS TIPO DE ENZIMA Y APLICACIÓN
AUTOR
Demuestra que hay un gran número de enzimas
Three-dimensional
que están siendo investigadas con el fin de Se menciona que las hidrolasas de éster de alfa-
structures of enzymes
determinar su estructura y de esta forma aminoácido(AEHs) son capaces de catalizar la
useful for b-lactam
dilucidar la conversión del nucleo beta-lactámico eliminación o fijación de la cadena lateral de antibióticos
antibiotic production
ó la cadena lateral buscando su aplicación β-lactámicos y que poseen un mecanismo diferente que
(Barends, Yoshida, &
industrial en la producción antibióticos β- las PA(penicilin Acilasas)
Dijkstra, 2004)
lactámicos
TIPO DE ENZIMA
Novel penicillin G
A UTILIZAR Sus características moleculares como secuencias de
acylase from
aminoácidos y la composición de la subunidad son
Achromobacter sp. Se caracterizó la PGA de la cepa bacteriana de
similares a la conocida PGA, la especificidad por el
CCM 4824 Achromobacter sp. CCM 4824, su máxima
sustrato es diferente, mientras PGA conocida prefiere el
(Skrob, Becka, actividad hidrolítica se encontró a pH 7,5 y
resto de cadena lateral de la penicilina G, la nueva PGA
Plhácková, temperatura de 60 °C.
prefiere los alfa-amino acil penicilinas como la ampicilina,
Fotopulosová, & Kyslík,
amoxicilina y cefalexina.
2003)
El mutante BmPGA α145Y mostró una relación (S/H =

Se presenta mutagénesis(cambios dirigidos en 2,3), siendo la menor frente a las demas PGAs
Increasing synthetic
posiciones cercanas al sitio activo) a la PGA de recombinantes de Alcaligenes facaelis (S/H = 2,5),
performance of
Bacillus megaterium (BmPGA), con el fin de P.rettgeri (S/H = 3,3), E. coli (S/H = 13) y Kluyvera
penicillin G acylase
aumentar su rendimiento en la síntesis cryocrescens (S / H = 17). Sin embargo, el rendimiento
from Bacillus
controlada cinéticamente de cefalexina, sintético de la E. coli era mejor que la de K. cryocrescens,
megaterium by site-
generando velocidades de S/H hasta 3,0 veces esto se debe a la forma de activación de la cadena lateral
directed mutagenesis
mas que la cepa nativa y mayor rendimiento donante, es decir, D-fenilglicina metil éster usado,
MUTAGÉNESIS
sintético, permitiendo la acumulación hasta dos sumado a la forma de preparación, la concentración de
DE LA ENZIMA (Wang et al., 2007)
veces más cefalexina. sustrato, temperatura de reacción y el pH, lo que impacta
sobre la evaluación del desempeño de la enzima.
The realm of penicillin Los avances en la tecnología de enzimas como La PGA cataliza la hidrólisis de los enlaces amídicos de
G acylase in β-lactam la creación de nuevas cepas mediante penicilina G y cefalosporina G, para producir 6-APA y 7-
antibiotics mutagénesis sitio-específica, modificación de las ADCA respectivamente, actúa como una transferasa ó
técnicas de inmovilización y la optimización en el hidrolasa, cataliza dos reacciones secundarias no
(Chandel, Rao, Narasu, proceso de fermentación podrían mejorar la deseadas: la hidrólisis del precursor de la cadena lateral
& Singh, 2008) producción de PGA. acilo y la hidrólisis de la propia antibiótico.
Optimization in the
Se presenta una evolución en la inmovilización
immobilization of Con esta metodología la inmovilización de la PGA puede
de la PGA, por atrapamiento simultáneo con
penicillin G acylase realizarse con éxito en xerogeles de sílice micro-
nano-partículas magnéticas en una matriz de
by entrapment in partículas (< 30 micras) con propiedades magnéticas, con
sílica.
xerogel particles with retención de la actividad de 65% hasta la inmovilización.
Los efectos sobre la actividad PGA de diferentes
magnetic properties El escalonamiento del método de inmovilización podría
precursores sol-gel, aditivos, la concentración de
(Bernardino, Estrela, conducir a mejorar los resultados, desde las pérdidas
enzima, el envejecimiento, las condiciones de
Ochoa-Mendes, físicas por los procedimientos de inmovilización y los re-
SOPORTE DE secado y la estabilidad mecánica fueron
Fernandes, & Fonseca, usos podrían ser minimizados.
INMOVILIZACIÓN satisfactorios
2011)
DE LA ENZIMA
Los resultados mostraron que el proceso de
Immobilization of inmovilización era eficiente y la enzima inmovilizada
penicillin G acylase Se realizó un nuevo ensayo de inmovilizacion de mostró una alta eficiencia catalítica. El rendimiento de la
onto amino-modified la PGA en un Hidrogel de sílice amino síntesis de amoxicilina en medios acuosos fue del 38%
silica hydrogel modificado (N-MSHG) aplicandola en la síntesis para los 2,5 h a 25°C que al compararla con la PGA
enzimática de amoxicilina. nativa no brindaba ningún resultado.
(Dong, et al., 2010) Esta preparación de sol-gel es simple y muestra
destacado valor potencial en el procesamiento industrial.
49 Resultados
ESTRATEGIA TITULO / AUTOR RESULTADOS TIPO DE ENZIMA Y APLICACION
Se establece que el uso de la PGA de E. Coli en medio

Kinetics of β-lactam acuoso, en un sistema de fed-batch, con la cristalización
Se hace una revisión que se enfoca
antibiotics synthesis simultánea del producto, es adecuado para la aplicación
especialmente en los aspectos de la cinética de
by penicillin G de modelos de optimización dinámicos y de control
las reacciones que pueden afectar el rendimiento
acylase (PGA) from óptimo, como técnicas de la ingeniería del reactor, sin
CINÉTICA DE LA del reactor enzimático, como son: (1) los
the viewpoint of the embargo se plantea que esta lejos de un completo
REACCIÓN enfoques control cinetico y termodinámico, (2) la
industrial enzymatic modelo mecanicista que podría tener en cuenta todos los
inmovilización y tipo de enzima y (3) los efectos
reactor optimization fenómenos involucrados como: pH , temperatura, efectos
de pH, temperatura, concentraciones de sustrato
de la concentración sobre las velocidades de reacción,
en las velocidades de reacción.
(Giordano, et al., 2006) transferencia de masa líquido-sólido y la difusión entre
partículas.
Por lo anterior se sugiere conjugar varias estrategias realizadas para la obtención de la

amoxicilina por vía enzimática a nivel industrial, como la utilización de redes
neuronales para simulaciones en los reactores con el fin de disminuir los costos de
experimentación, realizar la síntesis partiendo directamente de la sal potásica de
penicilina G(PGK) con un adecuado manejo de pH, usando la enzima PGA de
Kluyvera citrophila inmovilizada en soportes de hidrogel de sílice amino modificado,
puesto que dicha asociación presenta una buena estabilidad y selectividad a los
diferentes pHs, brindando a la enzima una alta actividad específica y por ende una alta
productividad; además se puede usar el terpentanol anhidro en el medio de reacción
como co-solvente con el fin de evitar la hidrólisis o adicionar iones de Zinc con el fin de
generar complejo con la amoxicilina.
7.3.2. Tendencias en investigación relacionadas con la síntesis

enzimática de amoxicilina (SEA) analizada a través de
las publicaciones científicas
Es el segundo tema específico (con un 22.11% del total de las referencias
pertinentes), después de la enzima penicilin acilasa(con un 54.8%), que más aporta
referencias específicas para la investigación; en cuanto a la producción cientifíca se ha
mantenido constante, mostrando un pico de producción en el año de 2010 del 17.39%
según la Gráfica 7 - 19 , con lo cual se demuestra que el tema continúa vigente para el
desarrollo de más investigaciones a razón que el antibiótico amoxicilina es uno de los
que más demanda tienen en el mundo y por supuesto en Colombia.
50 Resultados
GRÁFICA 7 - 19 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEA.

Analyzer®)
En la Gráfica 7 – 20, se observan los principales investigadores de SEA (según el

número de publicaciones) en su orden de importancia corresponden a la Dra. Luciana
Goncalves Rocha Barros (Brasil) con una participación del 7.08% (8 publicaciones),
Dr. Roberto de Campos Giordano (Brasil) con una participación del 6.19% (7
publicaciones), Dra. Raquel de Lima Camargo Giordano (Brasil) con una participación
del 5.31% (6 publicaciones), Dr. José Manuel Guisán Seijas (España) y al Dr. Roberto
Fernández-Lafuente (España) con el 4.42% (5 publicaciones) cada uno.
GRÁFICA 7 - 20 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEA

Analyzer®)
Igualmente se observa en la Gráfica 7 - 21, un gran número de investigadores de

diferentes países que han aportado de una (1) sola publicación, con lo cual se
51 Resultados
extrapola que hay un gran interés en los diversos centros de investigación de los
diferentes países sobre la SEA, demostrando que Brasil es el país que más investiga
con un aporte de 21 investigadores, seguido por China con 15 investigadores y
finalizando en orden de importancia por Singapur y los países bajos con 11
investigadores cada uno.
GRÁFICA 7 - 21 : Red asimétrica que relaciona el país de origen del autor vs número
de publicaciones del autor
Analyzer®)
Ahora bien, si observamos en la Gráfica 7 – 22, se evidencia una relación entre el

Departamento de Química de la Universidad de Zhejiang (China) y La División de
Ciencias Bioquímicas del Laboratorio Nacional de Quimica (India), donde
investigadores como Wu, Qi; Lin, Xian-Fu y Chen, Chun-Xiu han trabajado sobre el
establecimiento del medio ideal de reacción enzimática para la formación de la
amoxicilina.
Además, se evidencia que en Brasil la Universidad Federal de Ceará con (17)
investigadores y la Universidad Federal de San Carlos con (6) investigadores están
integradas por investigaciones conjuntas, las cuales están encaminadas a mejorar los
rendimientos de la SEA con presencia de co-solventes, para evitar la hidrólisis del
producto final, donde dichos trabajos son liderados por los investigadores Giordano,
R.C; Giordano, R.L.C; Marin, G; Bussamara, R y Dupont, J.
52 Resultados
GRÁFICA 7 - 22 : Red asimétrica que relaciona el centro de investigación vs número

de investigadores por publicación
Analyzer®)
En la Gráfica 7 – 23, se evidencia que las revistas donde más se publica son: “Journal
Biotechnology and Bioengineering”20 y “Journal Enzyme and Microbial
Technology” con un 16.7% del total de publicaciones cada uno, lo cual está
directamente relacionado con los autores principales anteriormente mencionados y las
palabras claves más usadas para referenciar este tema es AMOXICILLIN con un
19.18% (en 14 publicaciones) y PENICILLIN G ACYLASE con un 15.07% (en 11
publicaciones).
GRÁFICA 7 - 23 : Red asimétrica que relaciona el Journal vs autor sobre la SEA.

Analyzer®)
20
Revista Alemana, perteneciente a la editorial Wiley-VCH Verlag, enfocada a sistemas enzimáticos y sus aplicaciones,
ingeniería de proteínas, ingeniería de bioprocesos, etc.., posee un factor de impacto de 3.648 (según ISI Journal
Citation Reports®, 2012)
53 Resultados
7.3.3. El ácido 6-amino penicilánico (6-APA)
Es un compuesto químico que forma el núcleo fundamental de la molécula de los

antibióticos penicilínicos, como lo es el 7-ACA en los cefalosporínicos, y es usado en
la fabricación de penicilinas sintéticas. La estructura comprende un anillo
betalactámico unido a un anillo tiazolidínico. La adición de diferentes moléculas sobre
el 6-APA determina la farmacología esencial y las propiedades antibacterianas de los
compuestos así formados. (Shewale & Sudhakaran, 1997).
Durante el proceso de obtención de las penicilinas G o V por fermentación se observa
que estas se degradan en medio ácido con una cinética de primer orden a una
velocidad proporcional a la temperatura y recíproca con respecto al pH. Esto hace que
la vida media en condiciones de eficiente extracción en medio ácido sea muy reducida,
por lo que estas penicilinas pueden ser empleadas directamente ó como
intermediarios que serán convertidas a 6-APA para obtener nuevas penicilinas semi-
sintéticas (Ospina, Barzana, Ramírez, & López-Munguía, 1996).
El 6-APA fue descubierto a finales de 1950, pero su desarrollo químico-industrial se
dió en 1970 por la empresas holandesas “Weissenburger y van der Hoeven”, pero los
problemas ambientales y los elevados costos de solventes y energía han hecho que
se retomen las rutas ezimáticas, donde el proceso enzimático también ha
evolucionado desde la pérdida de enzima por la reutilización de la misma, hasta llegar
a la inmovilización en módulos o paneles. (Elander, 2003)
La producción industrial del 6-APA se realiza por deacilación enzimática de la
penicilina G ó V por acción de la enzima penicilin acilasa, proceso realizado en medio
acuoso a 37°C, lo que reduce considerablemente los costos. Después de la
deacilación se obtiene una solución de sales sódicas del ácido fenilacético y 6-APA los
cuales son separados de acuerdo a sus características(Shewale & Sudhakaran, 1997),
obteniendo el 6-APA que es más estable químicamente y por lo tanto es ampliamente
utilizado en la industria farmacéutica para la producción de diversas penicilinas semi-
sintéticas (L. R. B. Goncalves, Fernandez-Lafuente, et al., 2002)
7.3.4. Penicilin acilasa (PA)

Como se ha mencionado anteriormente, uno de los mercados biotecnológicos mas
importante en el mundo es el de los antibióticos betalactámicos tipo penicilínicos y
cefalosporínicos con unas ventas anuales de US $ 15.000´.000.000 correspondiendo a
una producción de 50.000 Tn/año y el consumo de la enzima PA está en un promedio
de 10 – 30 toneladas/año (Chandel, et al., 2008), razón por la cual para la presente
investigación es importante hacer una reseña de esta enzima.
54 Resultados
7.3.4.1. Características
La enzima penicilin acilasa (PA) tiene forma de riñón y posee una depresión profunda
céntrica. En su parte inferior se encuentran los sitios activos de la enzima, siendo
eficaz como biocatalizador para la síntesis e hidrólisis, pero su aplicación industrial es
limitada por presentar baja estabilidad a largo plazo, debido a los numerosos pasos
para su recuperación y su reutilización.
La PA de E. coli, ha sido la más estudiada en profundidad, la más empleada y
caracterizada completamente, siendo un heterodímero compuesto por dos
subunidades, α=19500 Da (209 aa) y β=60000Da (557 aa) y tiene un punto
isoeléctrico de 6,8 (Barends, et al., 2004); (Spence & Ramsden, 2007) Esta enzima se
ha mejorado por ingeniería genética (para incrementar la productividad por inducción
propia de la enzima y la manipulación de las condiciones de fermentación) (Wen,
Feng, Yuan, & Zhou, 2005) y por ingeniería de proteínas (donde se emplea la
mutagénesis dirigida al sitio activo para mejorar el rendimiento). Los híbridos han
permitido mejorar el rendimiento (mayor conversión y mayor proporción de síntesis a
velocidades de hidrólisis) (Quratulain, Nasira, & Kashmiri, 2006; Wang, et al., 2007).
Por el contrario, la información sobre las PAs de B. megaterium está dispersa (Pinotti,
Silva, Silva, & Giordano, 2000) (R. G. Silva et al., 2006) (Souza, Silva, Pinotti, Araújo,
& Giordano, 2005) (Yang et al., 2006) y en su gran mayoría protegida por secretos
industriales.
La PA de E. coli (EC 3.5.1.11), se acumula en el periplasma, lo que exige la ruptura
celular por métodos mecánicos como la permeabilización ó la homogenización a alta
presión, siendo este el proceso más común usado a gran escala para la ruptura celular
microbiana y de esta forma la producción de proteínas intracelulares. Su principal
desventaja es la contaminación de la enzima con otros constituyentes celulares,
principalmente con otras proteínas con propiedades físico-químicas similares, lo que
implica un número elevado de etapas de recuperación y purificación, alcanzando un 50
– 70% del costo total de producción de la proteína de interés (Ospina, et al., 1996).
La PA es una de las enzimas industriales más importantes (puede producir 2000 kg de
producto / kg de catalizador) usadas para hidrolizar la penicilina G o V y obtener el 6-
APA, clave en la manufactura de las penicilinas semi-sintéticas según la Figura 7 - 3.
Se ha demostrado que diferentes grupos de bacterias, levaduras y hongos
filamentosos, producen y secretan al medio la enzima (Martinez, Iliyná, Dominguez, &
Dustet, 2005). Entre los microorganismos que la producen intracelularmente se
encuentran entre las Gram-negativas: Escherichia coli, Proteus rettgeri, Kluyvera
citrophila, Bacillus subtilis, Alcaligenes faecalis, Providencia rettgeri, Pseudomonas sp,
55 Resultados
mientras que las Gram-positivas: Bacillus megaterium, Arthrobacter viscosus y los

hongos Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Penicillium chrysogenum y Mucor
griseocyanus la producen extracelularmente donde estos últimos son más ventajosos,
puesto que reducen considerablemente el costo del proceso de purificación de la
enzima (Chandel, et al., 2008), siendo las más usadas industrialmente las de E. coli y
B. megaterium. Actualmente se han incrementado las investigaciones para aislar
nuevos biocatalizadores de diferentes fuentes, debido a que más del 60% del 6-APA
producido en el mundo usa la ruta enzimática (p.e: Para la producción de 7.500
toneladas de 6-APA son requeridas entre 10 – 30 toneladas de PA) (Shewale &
Sudhakaran, 1997), de ahí su importancia
Figura 7 - 3: Reacciones de la enzima Penicilin Acilasa (PA)

Basado en (Spence & Ramsden, 2007)
La nomenclatura de la penicilin acilasa depende de la especificidad del sustrato, si

hidroliza la penicilina G se denomina penicilin G acilasa (PGA) y si hidroliza la
penicilina V se denomina penicilin V acilasa (PVA); dichas enzimas se utilizan en la
fabricación de 6-APA y 7-ADCA. En 1988, el 85 % de 6-APA producido
enzimáticamente utilizó la PGA y sólo el 15% restante utilizó la PVA. (Diender,
Straathof, van der Wielen, Ras, & Heijnen, 1998).
El éxito de usar esta tecnología en la obtención de la amoxicilina se basa en la
selectividad de la PA, la cual hidroliza mediante un ataque nucleofílico al carbono
carbonílico de enlaces amida o éster de la cadena lateral manteniendo estable el
enlace 2,3 del anillo betalactámico; sin embargo, hay diferencia entre varios autores en
que el 6-APA se uniría a la enzima después de la formación del complejo acil-enzima,
mientras que otros autores mencionan que la síntesis del antibiótico solo se dará
cuando el 6-APA se une a la enzima antes de la formación del complejo acil-enzima.
56 Resultados
Por lo tanto para tener éxito en la producción del antibiótico se deben tener en cuenta
los desarrollos frente a la purificación de la enzima en su proceso de obtención y su
reutilización debido a su uso inmovilizado (L. R. B. Goncalves, Fernandez-Lafuente, et
al., 2002),(Marcos, Fonseca, Ramalho, & Cabral, 1999).
7.3.4.2. Inmovilización de la enzima

El presente trabajo se ha enfocado en el mecanismo de acción de la síntesis de
amoxicilina y cómo crear un ambiente ideal para la reacción; sin embargo las nuevas
investigaciones se han enfocado al mejoramiento del biocatalizador, con el fin de
mejorar los rendimientos de las diferentes reacciones donde intervenga la PA. Es el
caso donde el proceso de inmovilización surge como un factor importante para superar
los problemas principales inherentes a la utilización de enzimas solubles como: su
elevado costo, la contaminación del producto, dificultad de separación a partir de la
mezcla de reacción y de reutilización limitada (hasta 100 ciclos) permitiendo el uso
continuo en el proceso. También brinda una estabilidad mejorada tanto para su
almacenamiento y condiciones operacionales, debido a que proporciona una
“micro”protección frente a la desnaturalización por el calor, solventes orgánicos o por
autolisis.
Algunas desventajas encontradas son: (1). La pérdida de actividad después de la
inmovilización y las limitaciones de difusión. (2). El aumento de los costos del proceso,
debido a los pasos para la inmovilización y consumo del biocatalizador. Las técnicas
principales para la inmovilización, reportados en la literatura incluyen unión covalente
multipunto, adsorción iónica e hidrofóbica, agregación y atrapamiento (Bernardino, et
al., 2011), siendo el método de mayor eficiencia el CLEAS “cross-linked enzyme
aggregates” (Giordano, et al., 2006; Illanes, Wilson, & Aguirre, 2009; A. Illanes et al.,
2007; Rajendhran & Gunasekaran, 2007) puesto que hay agregación física de las
enzimas y entrecruzamiento químico, aunque presenta inconvenientes por la
capacidad de las enzimas para resistir a este entrecruzamiento y las limitaciones de
difusión debidas a la agregación, razones por las cuales surge la inmovilización con la
técnica sol-gel, con el fin que la enzima esté confinada dentro de un soporte
químicamente inerte de sílica, brindando estabilidad electroquímica, térmica y
lumínica, aunque su inconveniente se presenta en la fuga de enzima, razón por la cual
las matrices deben tener un tamaño de poro suficientemente grande para permitir el
flujo de sustratos y productos, pero suficientemente pequeño para evitar la fuga de la
enzima (Bernardino, et al., 2011; Andrea L. O. Ferreira, Giordano, & Giordano, 2007).
Otras investigaciones se han enfocado al acoplamiento de la enzima y la ingeniería
genética, debido a que son mutaciones dirigidas al sitio activo de la enzima mejorando
57 Resultados
el número de residuos de lisina y por ende la unión covalente al soporte, generando

mayor estabilidad del biocatalizador (Bernardino, et al., 2011).
7.3.4.3. Tendencias en investigación relacionadas con la enzima (PA)

analizada a través de las publicaciones científicas
El tema de la PA, es el que mas aporta (con un 54.8% del total de las referencias
pertinentes) en cuanto al número de investigaciones relacionadas con el tema de
investigación, lo anterior se debe a que la PA tiene diferentes campos de aplicación,
tanto en la síntesis final para obtención de antibióticos tipo: ampicilina, amoxicilina,
cefalexina y cefadroxilo (ver Gráfica 7 - 24), como en la de hidrólisis de la penicilina G
ó V para la obtención del precursor 6-APA, siendo el mas importante para la
producción de diferentes antibióticos betalactámicos tipo penicilínicos.
Como se observa la Gráfica 7 - 24, se evidencia que el tema tomó gran importancia
desde el año 2002 donde se ha incrementado su investigación debido a que los
procesos industriales están migrando de la síntesis química a la síntesis enzimática, a
partir de ese año ha estado vigente la investigación, mostrando un pico de producción
científica en el año de 2007 (15.79%) y un decrecimiento en el 2011(1.75%), sin
embargo, el tema continúa siendo vigente para investigación, debido a que se ha
determinado que la rentabilidad en los procesos industriales dependen directamente
de la incidencia de la PA en sus procesos, razón por la cual muchas de las
investigaciones son patrocinadas por multinacionales como DSM siendo uno de los
principales proveedores de principios activos en antibióticos betalactámicos en el
mundo. En el Anexo L, se muestran las publicaciones más relevantes de la PA.
GRÁFICA 7 - 24 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema PA

Analyzer®)
Sus principales investigadores de acuerdo con el número de publicaciones, en su

orden de importancia corresponden a la Dra. Raquel de Lima Camargo Giordano
58 Resultados
(Brazil), Dr. José Manuel Guisán Seijas (España) y al Dr. Roberto Fernandez-Lafuente
(España), los cuales están relacionados entre si, frente a investigaciones relacionadas
con la síntesis enzimática de amoxicilina.
Por otra parte, en la Gráfica 7 – 25, se evidencia un mayor número de investigadores
(213) que han escrito sobre el tema PA, de los cuales el 15.79% son de origen chino,
seguidos por brasileños e Indios con un 12.28% cada uno, lo anterior no se evidencia
en dicho gráfico, debido a la baja frecuencia de publicaciones del mismo autor de
origen chino, pero que se ve reflejado frente al número de autores vs su país de
origen.
GRÁFICA 7 - 25 : Porcentaje del país de origen de los autores que más investiga
sobre el tema PA, con respecto al número de publicaciones.
Analyzer®)
7.4. FCV – Análisis de mercado: Contexto nacional e

internacional
Los antibióticos -lactámicos son los principales productos de biotecnología,
representando ventas mundiales en el 2003 aproximadamente por US $15 mil millones
(US $10 mil millones para los cefalosporínicos, correspondiendo a una producción de
4,300 toneladas, siendo los mas comercializados en orden de importancia: cefalexina,
cefuroxima, cefaclor, cefixima, ceftibuten, cefprozil, cefepima y con sus intermediarios
7-ADCA y 7-ACA con una producción de 1,950 y 2,140 toneladas respectivamente y
US $5 mil millones para los penicilínicos, correspondiendo a una producción de 33,000
toneladas; siendo los más comercializados en orden de importancia: amoxicilina,
meticilina, ticarcilina, con su intermediario 6-APA con una producción de 8,800
toneladas) y representan el 65% del mercado mundial de antibióticos, donde Europa
siendo el líder en estas tecnologías ha visto que los costos por mano de obra, energía
59 Resultados
utilizada y los costos de materia prima se han incrementado, razón por la cual la
fabricación de estos antibióticos como materia prima se ha desplazado al Lejano
Oriente, en China, Corea e India convirtiéndose en los principales países de
producción. Los países dominantes en producto terminado son Puerto Rico e Irlanda.
(Elander, 2003).
Ahora bien, por su parte el mercado de los Estados Unidos en el 2003, los antibióticos
representan las ventas por US $8 mil millones, distribuidos así: US $3,6 mil millones
en cefalosporínicos, US $1,2 millones en penicilínicos, US $0,9 mil millones en
fluoroquinolonas, US $0,5 millones tetraciclínas y US $0,4 mil millones en macrólidos
(Elander, 2003), demostrando que el mercado de los antibióticos -lactámicos es muy
atractivo por su nivel en las ventas.
Por todo lo anterior, desde el punto de vista económico se hace atractiva para la
industria privada nacional, la idea de sintetizar la amoxicilina, con el fin de convertirse
en un distribuidor estratégico para suramérica aprovechando su ubicación geográfica.
En la Tabla 7 – 8, se evidencian las empresas líderes a nivel mundial en la fabricación
de los antibióticos -lactámicos (Elander, 2003).
TABLA 7 - 8 : Clasificación de empresas manufactureras de antibióticos β-lactámicos

Adaptado de (Elander, 2003)
PENICILINICOS CEFALOSPORINICOS
#
1995 1999
1 Gist-Brocades (DSM) Holanda Antibióticos Spa Italia
2 Antibióticos Spa Italia Biochemie/Hoechst Alemania
3 Biochemie GmbH (Sandoz) Austria Glaxo/Wellcome Inglaterra
4 North China Pharma Works China Fujisawa Japón
5 Glaxo/SmithKline Inglaterra Cheil Jedang (Korea) Korea
6 Bristol-Myers Squibb USA Bristol-Myers Squibb USA
En la Tabla 7 – 9, se muestran las empresas líderes a nivel mundial en la fabricación

de antibióticos penicilínicos, observando que el país donde se encuentran la gran
mayoría de empresas es la República Popular de China (R.P.C), teniendo su origen en
otros países; esto sucede por diversas razones que se comentarán más adelante en el
presente trabajo.
60 Resultados
TABLA 7 - 9 : Empresas manufactureras de antibióticos penicilínicos.

(Fuente: Bases de datos UN, Laboratorios Coaspharma y bases de patentes)
EMPRESA UBICACIÓN (PAÍS) TIPO DE PLANTA
DMS Fersinsa Ramos Arizpe-Coahuila (México) Reacción química/enzimatica
DMS Sinochem Pharmaceuticals joint Yushu-Jilin (R.P.C) Reacción enzimática 6 APA
venture (DSP) Shandong (R.P.C) Reacción enzimática
Harbin Pharmaceutical Group Co Heilongjiang(R.P.C) Fabricación de medicamentos
Shanxi Guardián Pharmaceutical Taiyuan, Shanxi(R.P.C) Reacción química(semisintesis)
Biochemie(Novartis) Frankfurt (Alemania) Reacción química/enzimatica
North China Pharmaceutical
Group Corp (R.P.C) Reacción química/enzimatica
Glaxo SmithKline Beecham Singapur Reacción enzimatica
Asahi Chem(Toyo Jozo) Japon Reacción química/enzimatica
Biesterfeld International Hamburgo (Alemania) Reacción química
Elder Pharmaceuticals Ltd. Mumbai (India) Reacción química/enzimatica
Parabolic Drugs Ltd. Haryana(India) Reacción enzimatica
Surya Pharmaceutical Ltd. Chandigarh (India) Reacción química
Zhuhai United Laboratories Co., Ltd. Zhuhai-sanzao(R.P.C) Reacción química
Josun International Limited Shijiazhuang – Hebei (R.P.C) Reacción química
Aurobindo (Empresa Indu) (R.P.C) Reacción química/enzimatica
Pfizer New York (USA) Fabricación de medicamentos, I&D
Shanghai - Minghang (R.P.C)
Bristol-Myers Squibb New York (USA) Reacción química/enzimatica
7.4.1. Análisis del mercado: Caso China

Es el segundo mayor productor mundial de ingredientes farmacéuticos, con una
producción anual de 800.000 toneladas en el 2003, sus empresas ocupan el primer
lugar en el mundo en la producción los siguientes productos farmacéuticos:
1. Penicilinas 28.000 Tn/año, es decir el 60% de la producción mundial.
2. Vitamina C 98.000 Tn/año, de las cuales 54.000 Tn se venden en el extranjero,
es decir el 50% de la producción mundial
3. Terramicina 10.000 Tn/año, es decir el 65% de la producción mundial.
4. Doxiciclina y clorhidrato de cefalosporinas. (Grace, 2004)
Dichas producciones aportan un total de US $9,3 millones; estos datos al compararlos
con las empresas indias las cuales producen aproximadamente el 1,5% del mercado
farmacéutico mundial, correspondiendo en valores a US $480 mil millones. Sin
embargo, este pequeño porcentaje indica que la industria India en términos de valor
desmiente la importancia en términos de volumen.(Grace, 2004)
61 Resultados
En China, hay aproximadamente 6.800 compañías farmacéuticas, de las cuales 5.000

producen medicamentos, y 3.101 certificadas en BPM por la SFDA21 y el resto están
involucradas en actividades relacionadas, como envases y suministro de equipos. De
los 1.300 medicamentos sintéticos producidos en China, el 97% son copias de los
productos líderes(Grace, 2004). Sólo alrededor del 15% de las empresas tienen BPM,
esto debido a la inversión extranjera en las fábricas, lo cual ha generado un
considerable exceso de capacidad, haciendo que dichas empresas financiadas por el
estado nacional no sean rentables, razón por la cual el gobierno tomó medidas para
exigir a las empresas cumplir con BPM en junio de 2004. Sus empresas son muy
fuertes en fermentación y sus exportaciones de ingredientes activos representan el
84%, produciendo 1500 ingredientes activos con un volumen de aproximadamente
732.000 toneladas métricas. (Bumpas & Betsch, 2009)
Las fortalezas para aumentar su mercado global se centran en:
1. Ser un país atractivo para las empresas extranjeras en la fabricación de
medicamentos genéricos, y por tener uno de los mercados más grandes del
mundo con una población de 1354´.000.000 de habitantes.
2. Producir a bajo costo los ingredientes activos y el producto terminado, donde la
relación en precio frente al ingrediente activo vs el producto terminado en
China es de 1:3, en India de 1:5 y en países desarrollados es de 1:10 (Bumpas
& Betsch, 2009)
3. Cambio en la reglamentación de la protección de la propiedad intelectual en
1993, con el fin de extender las patentes a veinte años.
4. Las industrias farmacéuticas están migrando a la I&D enfocándose a productos
biotecnológicos, nuevas moléculas (retrovirales), medicinas tradicionales y
tecnologías de formulación; para tal efecto las empresas están invirtiendo
alrededor del 2% de sus ventas en I&D. A continuación se mencionan las (7)
empresas chinas mas importantes en I&D:
 Zensun (Shanghai) Sci & Tech Co.
 Harbin Pharmaceutical Group Co.
 Shijiazhuang Pharma Group
 Wuxi Pharmatech
 C & O Pharmaceutical Technology Holdings
 Sinovac Biotech
 Tonghua Dongbao Pharmaceuticals Ltd (E. Zhou, 2007 )
5. Alto conocimiento en biotecnología y medicina tradicional.
21
SFDA, corresponde al ente regulatorio que certifica el cumplimiento de las BPM en la República Popular de China
62 Resultados
6. En diciembre de 2007, la FDA y la SFDA firmaron un acuerdo con el fin de

fortalecer la cooperación entre el departamento de Salud y Servicios Humanos,
y la SFDA, por tal razón se establecieron tres puestos satélites de la FDA en
China para acompañamiento de las certificaciones en BPM por parte de la
SFDA. (Bumpas & Betsch, 2009)
7. Las empresas tienden a alejarse de la empresa estatal para enfocarse al sector
privado; en el 2006 el 36% de las empresas eran propiedad del gobierno, 35%
de propiedad privada y el 29% oferta al mercado extranjero, la SFDA ha
aprobado 1.600 genéricos en 2002, 6.100 en 2003 y más de 8.000 entre el
2004 y 2005. (Bumpas & Betsch, 2009)
Las debilidades para aumentar su mercado global se encuentran en:
1. Alto nivel de intervención del Estado, donde el gobierno indica las condiciones
de trabajo a las cuales las empresas se deben ceñir. (p.e. 6 meses antes de los
olímpicos de 2009, el gobierno restringió las cantidades de aguas residuales
producidas por las empresas manufactureras, con el fin de tener un ambiente
limpio para las justas, lo que llevó un desabastecimiento y aumento en los
precios mundiales de ciertas materias primas). (Bumpas & Betsch, 2009)
2. Baja capacidad tecnológica.
3. Bajo conocimiento en síntesis química, comparado con India.
4. El entorno institucional de apoyo a derechos de propiedad intelectual no está
alineado con las reformas a las leyes de patentes de productos.
5. Las alianzas de I&D entre las empresas multinacionales se encuentran en una
etapa incipiente, por lo tanto hay necesidad de una mejor traducción de
procesos entre los centros académicos y de la industria.
6. El comprador tiene dificultades para ver todo el proceso desde la fabricación
hasta su distribución.
7. Las regulaciones ambientales son muy laxas, esto se evidencia por demandas
interpuestas a varias empresas farmacéuticas por intoxicación con residuos
(Kahn, 2003) sin embargo, se ha evolucionado frente a la exigencia mundial
por la preservación del medio ambiente.
8. El lenguaje es una barrera de comunicación.
9. Posee una industria próspera para el medicamento falsificado, donde las
entidades regulatorias SFDA ponen en funcionamiento en el 2008, un sistema
de seguimiento electrónico, con el fin de que en el 2009, todos los productos
farmacéuticos y biológicos vendidos en China sean marcados con etiquetas de
su código de barras (Bumpas & Betsch, 2009)
63 Resultados
Ahora bien, revisiones recientes del 2011, indican que las diez principales industrias
farmacéuticas que venden en China, generaron más de US $ 20 mil millones en
ventas y sus tasas de crecimiento entre un 15 -32% (Shobert, 2012), pero dicho
crecimiento se está viendo afectado por cambios en sus políticas internas (porque
durante casi 20 años, estos medicamentos se han beneficiado de un precio especial
en el marco de un acuerdo entre el gobierno chino y la industria farmacéutica), debido
a que se está implantando la reducción de precios de aproximadamente 100
medicamentos, mediante la modalidad de licitaciones públicas, donde inicia la
competencia con la industria nacional, lo cual ha logrado la reducción de precios en
algunos medicamentos hasta en un 90%, siendo esto ventajoso para la población
China y desventajoso para las multinaciones, razón por la cual la única forma de
competir es por medio del manejo de volúmenes en producción.
China, no solamente se ha enfocado en la producción de la amoxicilina como materia
prima (con crecimiento anual del 20-30%) (Li et al., 2010) y como producto terminado,
sino también con los precursores de los antibióticos β-lactámicos, como es el caso: El
6-APA, se ha estimulado su producción a razón del aumento en las ventas de
principios activos, mostrando datos desde el 2000 con una producción de 1,921.5 tn
que aumentaron un 42,4% en el 2001 a 2,736.4 tn, y en el primer trimestre de 2002 la
producción fue 751,6 tn con un aumento del 83,1% en comparación con el mismo
período del año anterior (Li, et al., 2010). Otro caso es el PHFG, siendo otro
intermediario utilizado principalmente para la síntesis de antibióticos β-lactámicos,
tales como la amoxicilina, hidroxibencil cefalosporinas, clorobenceno cefalosporinas,
cefoperazona, cefalosporinas, hidroxilamina cefalosporinas, cefaclor, cefradina, etc. y
su demanda en 1999, fue de 80.000 toneladas, siendo sus principales consumidores
Corea del Sur, Suecia, India y Alemania; dicho intermediario ha incrementado su
demanda interna, debido a la producción de amoxicilina que ha aumentado
rápidamente.
En la actualidad, las sales penicilínicas representan 28.000 toneladas de producción
por fermentación, representando un 60% de la cuota de mercado mundial. (Li, et al.,
2010), sin dejar de lado las ventas del 7-ADCA que fueron 589 tn en 2004, 800 tn en
2005, 1.000 tn en 2006 y 1.500 tn en 2007; recientemente la producción superó las
4000 tn y será más de 5000 tn, con el lanzamiento de las nuevas líneas de producción
del Grupo farmacéutico Lunan y otras empresas de producción farmacéutica.(Li, et al.,
2010).
64 Resultados
7.2.2. Análisis del mercado: Caso India

En el 2003, India exportó el 40% de los medicamentos y el 60% de la materia prima
del total de las exportaciones, donde el 44% fue a mercados altamente regulados
como: EE.UU, Europa, Japón y Australia, y el restante 56% fue a los mercados
"menos regulados", categoría que se aplica a todos los países en desarrollo. (Grace,
2004)
La industria India, ha progresado a través de la escala de valor añadido de la
producción de productos farmacéuticos como resultado de sus políticas nacionales
como la búsqueda de la excelencia científica a bajo costo y la amplia demanda
nacional de productos farmacéuticos, permitiendo la viabilidad económica para escalar
en la producción de materia prima.
Las empresas multinacionales se sienten atraídas para trabajar con empresas de la
India (Grace, 2004) por:
1. Mejoramiento de procesos: aproximadamente 122.000 químicos e ingenieros
químicos se gradúan anualmente, enfocados en la re-ingeniería, los cuales
pueden rediseñar los procesos de fabricación de los productos ya
comercializados o para la fabricación de principios activos o productos
intermedios, cumpliendo con las normas de calidad internacional.
2. Propiedad intelectual: Se generó el cambio en la reglamentación de la
propiedad intelectual, con el fin de proteger todos los desarrollos científicos y
tecnológicos, puesto que pasa de 7 años en 1974 a 20 años de protección en
el 2005.
3. Mercado potencial interno: El gran tamaño del mercado interno es atractivo
puesto que el 30% de un total de 1.247´.000.000 de habitantes en el 2004,
pueden pagar relativamente los costosos medicamentos.
4. Los costos fijos de los activos, donde la construcción de una nueva planta de
producción farmacéutica que cumpla con las normas internacionales es cuatro
veces más económica que construirla en EEUU (de US$ 8 -12 por pie
cuadrado en India frente a US$ 75 en EEUU), también esto va relacionado con
los costos de los equipos y materiales.
5. Mano de obra barata: Donde la relación de salarios de analistas de laboratorio
(Indios) es ocho veces más económico que en EEUU, a nivel científico la
relación es tres veces menos más económico que en EEUU y los empleados
de la planta costaran US $ 120 - $ 150 por mes.
6. Costos de los estudios clínicos: Hay grandes poblaciones de pacientes sin
tratamientos previos, lo que facilita la contratación para grandes estudios
clínicos y los costos por paciente son 10 veces más económicos que EEUU
65 Resultados
7. Costo de la fuerza de ventas: El salario promedio de un representante de

ventas con todos los beneficios está en US$ 4.000/año.
En India, tienen segmentado el mercado en (2) grupos para la fabricación de sus
productos farmacéuticos: el primer grupo consiste en la elaboración del ingrediente
activo, el cual corresponde a una producción de elevado desarrollo tecnológico, que
demanda exigentes procesos bioquímicos de síntesis y/o fermentaciones, que
constituye un gran porcentaje del costo en el producto final; de ahí que sean altos
volúmenes de fabricación, puesto que el margen de ganancia esta en un 3%(Grace,
2004).
Este grupo creció un 8.2% en materias primas especiales en el 2004, vendiendo un
41% del mercado total, mientras que los genéricos crecieron un 10.9% vendiendo un
43,5% del mercado total y su venta fue 42% para América del norte, 19% para Europa
occidental y el 21 % para las empresas asiáticas(Grace, 2004); el segundo grupo
consiste en la formulación del medicamento donde se realizan las mezclas de los
ingredientes activos con los excipientes para una formulación determinada, requiriendo
personal capacitado para las formulaciones y equipos de manufactura especiales, este
grupo tiene un mayor margen de ganancia representado en un 20 -30%(Grace, 2004).
Las exportaciones farmacéuticas de la India crecieron de $ 1.9 millones en 1999 a $
5,2 mil millones en 2005 y representan aproximadamente el 40% de la producción total
de la industria y casi el 30% de sus ingresos.(Greene, 2007)
La Industria farmacéutica India tiene la visión de tener un crecimiento sólido a largo
plazo; actualmente ocupa el lugar 14 en el ranking mundial, con unas ventas de
aproximadamente US $19 billones en marzo 2009. Sin embargo, Price Waterhouse
Coopers estima que crecerá aproximadamente a US $ 50 billones en 2020 y estará en
los 10 mercados de la industria farmacéutica mundial para este mismo año. A
continuación se relacionan las principales industria indias según valores en ventas
(Friend & Shetty, 2010 ); (Greene, 2007):
1. Cipla US $ 510 millones / año (antibióticos)
2. Aurobindo US $ 477 millones / año (antibióticos)
3. Sun Pharmaceuticals US $ 449 millones / año
4. Piramal Healthcare US $ 428 millones / año
5. Ranbaxy (Daiichi) US $ 368 millones / año
6. Cadila Healthcare US $ 357 millones / año (antibióticos)
7. Lupin US $ 286 millones / año
8. Dr. Reddy’s Lab. US $ 232 millones / año
66 Resultados
7.2.3. Análisis del mercado: Caso México

Está ubicado como el (4°) país que tiene una producción de antibióticos penicilínicos
suficiente para satisfacer su consumo interno y la capacidad de exportar sus
excedentes (241 tn), después de China (1399 tn), España (700 tn) e India (513 tn),
según la INTRACEN22 (estadística de países que tienen una balanza comercial
positiva de penicilina y sus derivados).
La empresa mas representativa es DSM/Fersinsa la cual fue creada en el año 2007,
de la fusión entre Fersinsa Gist-brocades y DSM Royal Dutch, posee planta de
fermentación y síntesis en Coahuila, posee certificaciones por la FDA, Industria limpia,
ISO-14001, reconocida en Colombia por sus estándares de calidad y actualmente es
protegida su producción debido a que salió favorecida su solicitud en el 2012 la
investigación antidumping23 y antisubvención24 sobre las importaciones de amoxicilina
trihidrato originarias de China e India, en la Gráfica 7 – 26, se observa un comparativo
en los valores locales con respecto a los precios internacionales, donde se evidencia
que el precio del producto importado es mucho mas bajo que el interno (Garcia de
Alba, 2012), reflejado en una disminución de las ventas(2009 – 2010) en el mercado
interno y externo, y por ende en la producción nacional mexicana.
GRÁFICA 7 - 26 : Precios nacionales y de las importaciones investigadas aportados

por Fersinsa y SIC.
Fuente: SIC (Sistema de Información Comercial de México)
22
INTRACEN, centro de comercio internacional (www.intracen.org), entidad encargada de impulsar el desarrollo
económico sostenible de los países en desarrollo y países con economías de transición a través del comercio y
el desarrollo de negocios internacionales.
23
Dumping, considerado como una práctica proteccionista del comercio internacional ante la industria local,
permitiendo en muchos casos que las economías locales puedan mantenerse firmes ante eventuales crisis
internacionales.
24
Subvención, Práctica de contribución financiera de un gobierno u organismo público a una entidad comercial
de un país, haciendo que los costos internos de sus producto sean inferiores, donde dichos productos no
pueden ser exportados.
67 Resultados
7.2.4. Análisis del mercado: Caso Brasil

Es uno de los países suraméricanos que presenta mayor desarrollo económico en la
región, que al compararlo con los demás países del BRICS25 (Brasil, Rusia, India,
China y Surafrica) es el de menor crecimiento (China 10.6%, India 8.8%, Rusia 8.5% y
Brasil 5,8%) (Hasenclever & Paranhos, 2009)
Brasil forma parte de los "mercados farmacéuticos emergentes", mostrando un buen
potencial para el futuro crecimiento de los productos farmacéuticos siendo algunos de
los factores que apoyan el crecimiento de la economía del país, las nuevas políticas de
desarrollo y surgimiento de nuevas clases sociales; en cuanto a la producción de
química fina hay una tendencia para el consumo de la amoxicilina y la ampicilina,
representado en ventas en el 2009 por más de US $46 millones/año representadas en
6.000 billones de unidades. Este país ha presentado un déficit de US $ 3 y 35 millones
/año de ampicilina y amoxicilina respectivamente, lo que hace que dicho mercado sea
atractivo puesto que actualmente el mercado farmacéutico mundial continúa
mostrando un crecimiento promedio anual del 7%, pero América latina ha crecido entre
un 14-15%, haciendo que Brasil juegue un papel importante en la región, debido a la
gran demanda de ampicilina y amoxicilina que va a representar.
7.2.5. Análisis del mercado: Contexto Nacional

Teniendo en cuenta el Plan Nacional de Desarrollo (PND) 2010 – 2014, el cual plantea
garantizar una tasa de crecimiento sostenible y competitividad del país, basado en la
innovación, en la política de competitividad y de mejoramiento de la productividad y la
dinamización de sectores que a través de su impacto directo e indirecto lideren el
crecimiento y la generación de empleo (planeación, 2011), la innovación bien
direccionada en un mundo globalizado genera crecimiento económico, puesto que
aumenta la productividad en los sectores como la industria farmacéutica; por lo tanto,
el gobierno implementará una nueva generación de reformas regulatorias que van
encaminadas a: (1) simplificar los trámites ligados a la producción y exportación de
alimentos y medicamentos, fortaleciendo al ICA e INVIMA frente a los procesos de
vigilancia y control(planeación, 2011), (2) promover la asociatividad frente al desarrollo
de proveedores con el fin de sustituir gradualmente las importaciones.
25
BRICS, constituye el grupo de países más adelantados entre los estados con economías emergentes, creado desde
el 2008 y conformado por Sudáfrica en el 2011 en representación del continente africano, estas 5 naciones tienen en
común una gran población, grandes extensiones de territorio, una elevada cantidad de recursos naturales y una fuerte
presencia en la economía internacional, con crecimientos importantes de sus PIBs, que los hacen especialmente
atractivos como destinos de inversión. Estos cinco países reúnen al 43 por ciento de la población mundial y acumulan
el 25 por ciento de la riqueza, generando el 56 por ciento del crecimiento económico registrado en el mundo en los
últimos años. (fuente: Ministerio de Asuntos Exteriores y de Cooperación, Gobierno de España, 2013)
68 Resultados
7.2.5.1. Materia Prima

Con el fin de ligar el presente informe de vigilancia con el PND, es necesario conocer
el mercado de la amoxicilina como materia prima en Colombia, para lo cual se ha
evidenciado una tendencia en el aumento de las importaciones, que han pasado de
10,125 kg en el año 2002 a 37,750 kg en el año 2012, presentando un aumento del
26,82% en el periodo, lo cual demuestra que el mercado nacional requiriere esta
materia prima para suplir las necesidades de la población colombiana. (Turismo, 2002-
2012) Gráfica 7 – 27.
GRÁFICA 7 - 27 : Importaciones colombianas de amoxicilina como materia prima.

Fuente:(Turismo, 2002-2012), Datos obtenidos de motores de búsqueda en la base
datos Bacexcp, 2013.
Una vez conocidas las cantidades importadas, es necesario conocer cuáles son las
empresas colombianas que compran dicha materia prima en el periodo analizado 2002
- 2012, evidenciando que existen (2) empresas que manejan el 84,7% del total de las
importaciones, siendo la empresa líder Manufacturera Mundial Farmacéutica S.A. (filial
de Laboratorios La Santé), la cual ha manejado el 54.4% del total de las importaciones
y presenta un incremento del 36%, debido a que pasa de manejar en el 2002 la
cantidad de 2,950 a 30,550 kg en el 2012; la razón se debe a su posición estratégica,
puesto que se encuentra ubicada en la zona franca de Bogotá. Seguida por
Laboratorios Genfar S.A. la cual maneja el 30.3% del total de las importaciones y
presentó un incremento del 31%, debido a que pasó de manejar en el 2002 2,950 a
24,500 kg en el 2007 aunque presenta un decrecimiento del 19% en el 2012 llegando
a manejar 3,650 kg, ver Gráfica 7 – 28.
69 Resultados
GRÁFICA 7 - 28 : Empresas importadoras nacionales de amoxicilina como materia

prima.
Fuente: (Turismo, 2002-2012), Datos obtenidos de motores de búsqueda en la base
datos Bacexcp, 2013.
Por otra parte es fundamental analizar el país de origen de dichas importaciones, para
tal efecto en la Gráfica 7 – 29, se evidencia que el 77% del total de las mismas se
encuentran centralizadas en (2) países como México (42%) y la República Popular de
China (35%), cabe aclarar que aunque México presentó un incremento del 33% desde
el 2002 de pasar de 7,150 a 19,675 kg en el 2005, pero desde ese año ha presentado
un decrecimiento del 42%, llegando a manejar 4,250 kg en el 2012. Situación diferente
ha ocurrido con La Republica Popular de China debido a que sus importaciones han
pasado de 2,502 kg en el 2005 a 33,500 kg en el 2012, lo anterior se debe a que los
precios ofrecidos por las empresas China e India son menores a los mexicanos,
debido a los múltiples beneficios fiscales en programas de subsidios, provisión
gubernamental de bienes y servicios públicos a precios por debajo del mercado y
programas de políticas de financiamiento; este fenómeno ha afectado al mismo
México, puesto que la empresa Fersinsa Gist-Brocades solicitó una investigación por
prácticas desleales de comercio internacional en sus modalidades de discriminación
de precios y de subvenciones, en contra de las importaciones de amoxicilina trihidrato
originarias de China e India el 20/08/10 y dicho fallo se dio el 27/11/12; (Garcia de
Alba, 2012), además, se evidenció que la producción de los antibióticos de tipo
penicilínico es en mayor proporción en la República Popular de China, mientras que la
producción de los antibióticos de tipo cefalosporínicos es en mayor proporción en
India. (González, 2012).
70 Resultados
GRÁFICA 7 - 29 : Origen de las importaciones de amoxicilina como materia prima

Fuente: (Turismo, 2002-2012), Datos obtenidos de motores de búsqueda en la base
datos Bacexcp, 2013
7.2.5.2. Producto Terminado

Las ventas de los medicamentos con el principio activo amoxilina en Colombia de
acuerdo con el (IMS, 2013)26 . En la gráfica 7 - 30, demuestra una tendencia positiva
durante los años del muestreo (2009 – 2013), lo cual confirma que el presente trabajo
posee una proyección a nivel Colombia sin embargo, los datos que reflejan las ventas
a nivel de instituciones no se encuentran almacenadas en ninguna base de datos y por
ende los valores dependen únicamente de cada empresa.
GRÁFICA 7 - 30 : Valores totales de las ventas nacionales de medicamentos con el
principio activo amoxicilina.
Fuente: IMS 2013, Periodo analizado: marzo 2009 a marzo 2013.
Al analizar la tendencia en las ventas según muestra la Gráfica 7 – 31, se observa que
los principales actores nacionales son Genfar y La Santé, que al compararlos con la
multinacional Glaxo SmithKline presentan un crecimiento global de sus empresas con
un (8.16%) y (8.82%) respectivamente por otro lado, se presenta un decrecimiento de
26
IMS Colombia, Firma que mediante auditorias periodicas ofrece información estadística certera para la medición de
la distribución de medicamentos en el canal comercial (distribución en puntos de venta como droguerías, cadenas, etc.
– gasto de bolsillo), pero que NO mide el Canal Institucional (distribución que se realiza a través del Sistema General
de Seguridad Social en Salud - SGSSS). (Adaptado de www.afidro.org.co)
71 Resultados
la empresa Tecnoquímicas (11.15%) y Coaspharma (22.44%), esto sustentado en que

las empresas que importan directamente son las mejor posicionadas en dicho
mercado, de esta situación se puede inferir que es necesario que la empresa
Coaspharma importe directamente el activo, para mejorar su participación en el
mercado (IMS, 2013).
GRÁFICA 7 - 31 : Tendencia en las ventas de medicamentos con amoxicilina de los

laboratorios más representativos.
(Fuente: IMS 2013, Periodo analizado: marzo 2009 a marzo 2013)
Como se evidenció en el ítem anterior exísten laboratorios nacionales que importan la

materia prima y la modifican para convertirla en producto terminado, ya sea en sus
propias instalaciones como Manufacturera Mundial Farmacéutica (filial de laboratorios
La Santé) ó en otras instalaciones (proceso denominado Maquila) como el caso de
laboratorios Icofarma y Ophalac (ver anexo M) entre otros, es por esta razón que para
robustecer el presente informe es necesario analizar las ventas nacionales de los
medicamentos que tienen como principio activo la amoxicilina.
En la Gráfica 7 - 32, se evidencia que la empresa que más vende en Colombia en el
periodo analizado, corresponde a laboratorios Glaxo SmithKline® ($50.754´.601.218)
con un porcentaje de 37,79% del total de las ventas, seguido por laboratorios Genfar®
($17.427´.964.328) con un 12,98%, laboratorios La sante® ($15.361´.901.570) con un
11,94% y laboratorios Roemmers® (industria Argentina) ($13.935´.478.665) con un
10.38%, lo que demuestra que el mercado nacional es dominado por la multinacional
Glaxo debido principalmente a que sus productos corresponden a marcas
posicionadas como AMOXAL®, donde la forma farmacéutica más representativa en
valores corresponde a los polvos para suspensión al 48.82% y las cápsulas en un
46,15%.
72 Resultados
GRÁFICA 7 - 32 : Tendencia en las ventas de medicamentos con el principio activo

amoxicilina en valores
El comportamiento en valores es diferente a las unidades comerciales, como se puede

observar en la Gráfica 7 – 33, el laboratorio que más comercializa unidades es
laboratorios Genfar® (5´.210.966) con un porcentaje de 27,22% del total de unidades
vendidas, seguido por laboratorios La Santé® (4´.264.833) con un 22,28%,
laboratorios Mckesson® (3´.050.116) con un 15,94% y laboratorios Glaxo SmithKline®
(2´.285.510) con un 11.94%, lo que demuestra que el mercado nacional es dominado
por las empresas nacionales de ahí que estos valores estén relacionados con el alto
consumo de materia prima importada.
GRÁFICA 7 - 33 : Laboratorios farmacéuticos que más comercializan medicamentos

con amoxicilina en unidades.
73 Resultados
La situación actual de la empresa Coaspharma se encuentra ubicada en sexto lugar

en ventas por $6.702´.069.900 correspondiendo al 4.99%, y séptimo lugar en unidades
872.048 correspondiendo al 4.56%, lo cual demuestra que está entre las principales
del país frente a este tipo de productos con dicho principio activo, siendo esta una
razón más de la conveniencia en la realización de esta investigación, con el fin de
posicionar este tipo de productos en el mercado tanto nacional como internacional.
7.2.5.3. Nuevos Desarrollos

Con la introducción de la amoxicilina en 1972, se fue incrementando la resistencia de
algunas bacterias a estos antibióticos, tanto a nivel hospitalario como fuera del mismo,
lo anterior por uso inadecuado del antibiótico, razones por las cuales se creó un grupo
internacional llamado (APUA) en 1.981 de sus siglas en ingles de “the Alliance for the
Prudent Use of Antibiotics”. Esto permitió que las entidades gubernamentales
ayudaran a promover el uso adecuado de los antibióticos y para proteger su eficacia a
largo plazo mediante la comunicación y la educación (Price, 2005). Además los
investigadores para buscar la forma de mantener vigente el antibiótico, lo unen con un
inhibidor de las enzimas que producían la inactivación de dicho compuesto, surgiendo
la combinación de la amoxicilina y el ácido clavulánico (Demain & Elander, 1999),
debido a que éste tiene la capacidad inhibitoria por tener una semejanza estructural
que mantiene con las penicilinas y cefalosporinas. La acción de inhibición que ejerce
es de tipo progresivo e irreversible y tiene una afinidad por las betalactamasas
considerablemente mayor que la de los antibióticos betalactámicos, lo que constituye
una propiedad esencial en un buen inhibidor suicida (Saglimbeni, 2002). Esta situación
ha hecho que se tomen medidas por el Ministerio de Salud, como restringir su venta
con fórmula médica, las cuales fueron tomadas bajo el proyecto de ley 85 de 2008,
con el fin de disminuir la resistencia presentada a los antibióticos27
Desde 1981 fue comercializado el primer medicamento con amoxicilina + ácido
clavulánico “AUGMENTIN®” de Smith Kline Beecham, presentado unas ventas en
1995 por US $ 1,3 mil millones y posteriormente fueron desarrolladas nuevas
formulaciones como: ticarcilina + ácido clavulánico “TIMENTIN®”, ampicilina +
27
La síntesis de un gran número de antibióticos en las últimas tres décadas ha generado la complacencia sobre la
amenaza de la resistencia bacteriana, haciendo que las bacterias sean resistentes a los agentes antimicrobianos, como
resultado de cambios cromosómicos o el intercambio de material genético a través de plásmidos y transposones,
donde los hospitales y el amplio uso sin restricciones han impulsado esta crisis, haciendo de esta manera
enfermedades comunes resistentes a prácticamente todos los antibióticos más antiguos. Mecanismos como los
programas de control de antibióticos, una mejor higiene y la síntesis de nuevos antibióticos con mayor actividad
antimicrobiana se deben adoptar con el fin de limitar la resistencia bacteriana.Neu, H. C. (1992). The Crisis in Antibiotic
Resistance. Science, 257(5073), 1064-1073.
74 Resultados
sulbactam “UNASYN®”, cefoperazona + sulbactam “SULPERAZONE®” y piperacilina

+ tazobactam “TAZOCIN®”, los cuales no han presentado resistencia. (Demain &
Elander, 1999).
En Colombia hay radicados ante el INVIMA desde el 2005 varias marcas como:
CLAVULIN®, CURAM® liderados por las multinacionales GlaxoSmithkline Colombia
S.A y Novartis de Colombia S.A. respectivamente, Ahora bien, hay laboratorios que se
han encargado de buscar mezclas como: Ampicilína + Sulbaltam Sódico TRIFAMOX
IBL® de Laboratorios BAGO de Colombia. Además se han desarrollado nuevas formas
farmacéuticas y nuevas dosificaciones como las tabletas de Amoxal BD® 875 mg y
Amoxal 1 g de la multinacional GlaxoSmithkline corporation USA, lo cual demuestra
que el uso de la amoxicilina se está potenciando ya sea por la mezcla con otros
fármacos, aumento de la concentración y por nuevas formas farmacéuticas (ver anexo
N)
Cabe mencionar que la Organización Mundial de la Salud (OMS), ha incluido en su
formulario para niños del 2010 en el caso de neumonías, mal nutrición severa, la
mezcla amoxicilina + ácido clavulánico, ATC code: J01CR02, Oral liquid: 125 mg
amoxicillin + 31.25 mg clavulanic acid/5 ml; 250 mg amoxicillin + 62.5 mg clavulanic
acid/5 ml, Tablet: 500 mg + 125 mg.
Si se realiza una revisión de artículos científicos de acuerdo a lo que muestra la

Gráfica 7 -34, se evidencia la asociación amoxicilina + ácido clavulánico (Kaye et al.,
2001); (File et al., 2005), encontrando una producción científica de 18 artículos
analizados desde el 2000 al 2012, mostrando a Estados Unidos como el país que más
investiga sobre este tema con el autor Jabos, Michael R. y la revista científica donde
más se publica es el International Journal of Antimicrobial Agents.
En el proceso cienciométrico de la revisión de patentes se encontraron nuevas

asociaciones que pueden marcar la tendencia en los futuros desarrollos de productos
que tienen como principio activo la amoxicilina, donde la formulación mas investigada
es amoxicilina + clavulanato de potasio con un 30% del total de las patentes, seguida
por amoxicilina de liberación controlada con un 25%; sin embargo se encontraron
asociaciones de la amoxicilina con diferentes principios activos como: ambroxol,
flucoxacilina, dicloxacilina, sulbactam pivoxil, probenecid, danofloxacino, oxacilina,
flurobenzenicore, sulfato de colisitina y prednisolona, ver Gráfica 7 - 35.
75 Resultados
GRÁFICA 7 - 34 : Red asimétrica que relaciona país vs número de autores sobre

amoxicilina combinado con ácido clavulánico.
Analyzer®)
GRÁFICA 7 - 35 : Distribución de las nuevas invenciones patentadas, frente a las

nuevas asociaciones con amoxicilina.
Analyzer®)
Ahora bien, si analizamos la forma farmaceútica más empleada para los nuevos
desarrollos encontramos que son las formas sólidas con el fin de dar mayor estabilidad
al principio activo, donde las tabletas poseen un mayor porcentaje de distribución en
las nuevas formulaciones con un 53%, seguido por los polvos para inyección con un
18% y en menor proporción los polvos para suspensión vía oral con un 15%.
76 Resultados
Frente a las nuevas formulaciones se encuentran desarrollos con respecto a nuevas

formas farmacéuticas no comercializadas como tabletas de 500 y 1000 mg, debido a
que el mercado global usa cápsulas con estos mismos gramajes, igualmente el activo
usado para este tipo de formas es la polvo y no la trihidrato, lo anterior es porque
dentro de la cápsula es fácilmente entregable el activo para ser biodisponible de forma
no compactada, razón por la cual se busca que la disminución en costos al trabajar
con activos de compresión directa (Pasqualoto, Funck, da silva, & Kratz, 2005).
7.3. FCV - Características de la materia prima

La materia prima suministrada por los diferentes proveedores puede variar en su
naturaleza, en la fuente de obtención (síntesis química o enzimática), en las
condiciones de almacenamiento y dispensación, en su transporte y manejo,
ocasionando una gran diferencia en sus características físicas, químicas,
microbiológicas y farmacotécnicas, las cuales deben estar en los límites permitidos
según la farmacopea adoptada.
En Colombia, se presentan problemas complejos relacionados con la ausencia de
especificaciones farmacotécnicas de las materias primas, debido principalmente a que
cada empresa debe definir sus propias especificaciones porque son diferentes los
equipos (según su tecnología), la falta de un control adecuado de lo importado, la no
existencia de un centro de patrones de referencia y que las especificaciones exigidas
para dicho principio activo no contemple información farmacotécnica completa.
Actualmente, la industria farmacéutica ha evolucionado para poder estandarizar sus
procesos implementado pruebas organolépticas como apariencia, color y olor, análisis
rutinarios de control de calidad como pH, identidad, pureza, tamaño, solubilidad,
tamaño y distribución de tamaño de partícula, fluidez, densidad aparente y apisonada
(Rios, 2001)
La problemática que presenta Coaspharma, corresponde a la diferencia de calidades
de materia prima, lo cual afecta de manera directa los procesos de fabricación de
antibióticos, en sus operaciones de: mezcla, compresión, encapsulado y envasado de
polvos para suspensión, debido a problemas de uniformidad de contenido, fluidez,
laminado de tabletas, rebose de producto en las cápsulas, etc.., razón por la cual se
ha retomado la aprobación o no para proceso de una materia prima que cumpla con
las especificaciones farmacotécnicas internas establecidas, como tamaño y
distribución de tamaño de partícula (retención por malla 20, 40, 80, 200), fluidez
(ángulo de reposo), densidad aparente y apisonada, con esto quedaría resuelto el
77 Resultados
problema en planta, generando una problemática cuando se decide generar un

rechazo al proveedor de la materia prima, debido a que cumple con las
especificaciones de la farmacopea americana 26, lo cual se está solucionando con una
estrategia denominada “desarrollo de proveedor”.
7.3.1. Presentacion Comercial
La amoxicilina trihidrato se presenta como un polvo cristalino casi blanco, ligeramente

soluble en agua, metanol y alcohol, e insoluble en hexano, benceno, acetato de etilo y
acetonitrilo(Budavari, 1996), se utiliza para la fabricación de medicamentos y la
farmacopea de cada país establece sus especificaciones de producción, que deben
coincidir con la Farmacopea Internacional emitida por la Organización Mundial de la
Salud (OMS) y su número de identificación CAS (Chemical Abstract Service) es el
61336-70-7 (Budavari, 1996).
En el Anexo M se muestran las 31 compañías nacionales que comercializan la
amoxicilina en sus diferentes formas farmacéuticas: tabletas, cápsulas y polvo para
suspensión, siendo esta última la mas comercializada, evidenciando un gran número
de compañías que ofertan dicho principio activo, donde todas permanecen en el
mercado mostrando su rentabilidad.
78 Conclusiones
8. Conclusiones
1. La complejidad del proceso de vigilancia depende directamente de los factores

críticos establecidos previamente, siendo un factor determinante en la profundidad
de la investigación, donde se estableció que la producción, la situación comercial
nacional e internacional y las características físicas y farmacotécnicas del
antibiótico son los factores relevantes, encontrando que la información pertinente
que resuelve los interrogantes mas importantes fueron encontrada en mayor
proporción con el metabuscador Polymeta, la base de datos científica de Science
Direct y la base de datos de patentes Sipo.
2. Los costos de obtención de la sal potásica de penicilina G, son elevados por la

magnitud de las instalaciones que se requieren para las fermentaciones, razón por
la cual al enfocar el presente trabajo a una reacción enzimática se hace más
viable sin embargo, los costos del principal precursor el ácido 6-aminopenicilánico
(6-APA) son similares a los de la amoxicilina, inclusive con algunos proveedores
son superados. Lo anterior se debe a que este intermediario no es comercializado
en Colombia, o lo manejan los proveedores como barrera comercial para no
sintetizar los antibióticos fuera de su país de origen. Por lo anterior se sugiere
partir de la sal potásica de penicilina G para obtener amoxicilina, además porque
es más fácil su consecución.
3. La reacción enzimática es mediada por el biocatalizador penicilin acilasa, que ha

tomado gran importancia comercial por su intervención en diferentes procesos
industriales, razón por la cual es uno de los temas más investigados y que
presenta mayor desarrollo tecnológico en la actualidad, siendo el líder en
investigación la multinacional DSM IP assets B.V que a su vez es uno de los
mayores proveedores de antibióticos betalactámicos en el mundo.
4. Al realizar un análisis de los volúmenes de las importaciones de materia prima

amoxicilina durante el periodo de análisis (2002 – 2012) ha presentado un
crecimiento global del 26.8% y en los últimos 2 años su crecimiento promedio fue
del 23%; además la monopolización en el abastecimiento, el control del precio
internacional y las variaciones en la calidad de la materia prima por parte de las
industrias productoras, hacen pensar que la posibilidad de crear una planta para la
79 Conclusiones
fabricación de principios activos tipo antibióticos betalactámicos sea una

alternativa para el desarrollo del país tanto en la generación de empleo como en el
posicionamiento científico y tecnológico, aprovechando su posición geográfica y
que a nivel de Suramérica ocurre el mismo fenómeno de importación.
5. Con el fin de desarrollar la presente investigación en Colombia, es necesario

hacer alianzas estratégicas nacionales entre Colciencias, Universidad Nacional de
Colombia y la industria farmacéutica nacional, con las instituciones de
investigación Brasileñas (Universidad Federal de Ceará y la Universidad Federal
de San Carlos), Indias (Laboratorio Nacional de Química) y Chinas (Universidad
de Zhejiang), con el fin de optimizar la reacción enzimática de la amoxicilina a
partir de la sal potásica de penicilina, para lo cual en un trabajo posterior es
necesario iniciar con el desarrollo de ensayos a escala piloto que maneje
fermentadores de bajo volumen, que puedan generar un posterior escalonamiento
cuando los resultados sean favorables
6. Es posible promover desarrollos de nuevos productos con amoxicilina, los cuales

se pueden realizar ya sea con el aumento en la concentración, con nuevas formas
farmacéuticas no comercializadas y/ó la combinación con otros activos tipo:
clavulanato de potasio, ambroxol, flucoxacilina, dicloxacilina, sulbactam pivoxil,
probenecid, danofloxacino, oxacilina, flurobenzenicore, sulfato de colisitina y
prednisolona.
7. Los países que más aportan a la investigación de procesos en síntesis enzimática

de amoxicilina son Brasil y China, los cuales están enfocados al desarrollo de la
química fina con el fin de promover el crecimiento de su economía interna,
mientras que países como Estados Unidos, Alemania, Reino Unido, Canadá,
Australia y Francia, consideradas potencias científicas están enfocados en la
búsqueda de tratamientos a enfermedades de alto impacto como cáncer,
enfermedades del sistema nervioso central, del aparato circulatorio, virales y
artritis, debido a que son afecciones comunes en dichos países y sus resultados
son altamente comercializables.
80
A. Anexo: Herramientas de software para

VT e IC
Basado de
PRINCIPALES HERRAMIENTAS DE SOFTWARE PARA VIGILANCIA TECNOLOGICA
NOMBRE PLANEACION BUSQUEDA ANALISIS INTELIGENCIA DIFUSION
askOnce ++
CI Spider + ++ +
Competitor-
+ +
analysis.com
Copernic 2001 Basic +++
Denodo Soluciones + +++ ++
DigOut4U ++ +++ + +
Elementary Watson + ++ + +
Find Agent ++ ++ ++
GoldFire + ++++ ++ +
Hoovers Online + +++
Inxight Star ++ +++
Knowledge Works ++++ ++++ ++ ++++ ++
Knowledgist +++ ++ +
Matheo Analyzer +++ ++ +
MindModel + ++
Online miner +++ ++
OpenPortal4U + +++ ++ ++ ++
Plumtreo Software ++ ++++ +
Seekip.com + ++++ +
Sernio Software + ++++ +
Sonar Professional ++++ + +
Strategic Finder ++ ++++ + +
Tetralogic + ++ +
TextAnalyst ++
WebFerret + ++ +
WebSeeker + ++++ +
Wincite + +++ + +++ ++
WatchSite + ++
WebQL ++
Xcize + + ++
TIPO DE APOYO: (+)Muy poco, (++)Poco, (+++)Bueno, (++++)Fuerte
81 Anexos
B. Anexo: Ficha de necesidades

(Fuente: Bases de datos UN, de acuerdo a los documentos citados en la bibliografía, evaluados desde Ene. 1990 a Sep.2012)
FICHA DE NECESIDADES
PORQUÉ VIGILAR? Identificar y evaluar las nuevas tendencias en tecnologías para la producción de materia prima amoxicilina
TABLA DE PRIORIZACIÓN
Formular nuevos medicamentos que tengan como base el principio activo "amoxicilina" Muy importante 1
Investigar cómo es el mercado en Colombia del principio activo "amoxicilina" importante 2
PARA QUÉ Investigar cuáles son los productores del principio activo "amoxicilina" medianamente importante 3
VIGILAR?
Plantear oportunidades de producción de "amoxicilina" en Colombia. Para evaluar 4
Proponer estrategias para abastecer al país del principio activo "amoxicilina" Es necesario conocerlo 5
KIT - FCV KIQ - PCV DESCRIPTOR RESTRICTOR FUENTES PRELIMINARES PRIORIDAD
Entrevistas con especialistas del tema a nivel

Desde el año 2000 en
Esto ya se hizo en Colombia? production Colombia of amoxicillin
Colombia
farmacéutico Profesora Luisa Fernanda Ponce 5
D´Leon y Profesora Sonia Ospina
colombian manufacturing company Desde el año 2000 en

Quién lo realizó?
amoxicillin Colombia 5
problems for the manufacture of amoxicillin Desde el año 2000 en
Porqué ya NO lo hace?
in Colombia Colombia 5
En el país quién fabrica mp para producción colombian manufacturing company Desde el año 2000 en
farmaceutica? amoxicillin Colombia
Evento de la cámara Colombiaindia 1
PRODUCCIÓN
Hay en Colombia este tipo de metodologías Desde el año 2000 en
desarrolladas para sintesis enzimatica?
Technology enzymatic in Colombia
Colombia
www.invima.gov.co y www.ica.gov.co; IBUN 4
DEL
Cuáles son los requisitos legales para fabricar
la A en Colombia?
www.invima.gov.co y www.ica.gov.co 1
ANTIBIÓTICO normatividad colombiana para fabricar Desde el año 2000 en
materias primas y/ó principios activos Colombia
Cuáles son las Implicaciones sanitarias para
fabricar la amoxicilina en Colombia?
www.invima.gov.co y www.ica.gov.co 2
Que se hacen con los residuos? Como es la normatividad colombiana para el manejo de Desde el año 2000 en
disposición final de residuos? desechos Colombia
Icontec 1
Enzyme and Microbial technology
Process Biochemistry
Qué métodos se utilizan para producir la Journal of Fermentation and Bioengineering
amoxicilina?
Amoxicillin methods production Desde el año 1990
Journal of Biotechnology 1
Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic
Current Opinion in biotechnology
82 Anexos
Anexo B. (Continuación)
KIT - FCV KIQ - PCV DESCRIPTOR RESTRICTOR FUENTES PRELIMINARES PRIORIDAD
Patentstorm - Patent 3980637 Issued on September

La amoxicilina tiene patente en Colombia y en
Colombia amoxicillin patents Desde el año 1990 14, 1976. 1
PRODUCCIÓN el mundo? O ya se venció?
United States Patent, 6.110.69, 2000
Enzyme and Microbial Technology
DEL Cómo se obtienen los precursores y los otros methods of taking 6-APA, PGA, ampicillin,
antibióticos de la misma categoría? cephalosporin.
Desde el año 1990 Process Biochemistry 2
Journal of Fermentation and Bioengineering
Journal of Biotechnology
ANTIBIÓTICO Como son las reacciones químicas ó chemical or enzymatic reactions for Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic
enzimáticas? amoxicillin
Desde el año 1990 3
Current Opinion in Biotechnology
Desde el año 2000 en el Min de comercio, industria y turismo(DANE)
Qué paises y empresas la fabrican? countries that make amoxicillin
mundo www.chemweek.com 1
Desde el año 2000 en el Min de comercio, industria y turismo(DANE)
Qué paises y empresas la comercializan? amoxicillin trading countries
mundo www.chemweek.com 1
Base de datos COASPHARMA, desde 1990,
Precio de compra? Cotizaciones por kg de mp En Coaspharma
muestra la tendencia por 11 años 1
ANÁLISIS Cuánto se vende de amoxicilina en Colombia? Ventas de A como M/S en Colombia Información del IMS Consulta IMS 1
DE Exportaciones de antibióticos Desde el año 2000 en
MERCADO
Cuánto se exporta de M/S con amoxicilina?
betalactamicos en Colombia Colombia
Consulta IMS 1
Hacia que países se exporta los productos Desde el año 2000 en Ministerio de Comercio, Industria y Turismo(DANE)
tereminados con amoxicilina? los paises vecinos www.chemweek.com 1
Qué laboratorios farmacéuticos colombianos Empresas colombianas que producen m/s Desde el año 2000 en Ministerio de Comercio, Industria y Turismo(DANE
compran la amoxicilina? y en que cantidades? betalactamicos Colombia www.chemweek.com 1
Cuanto importa Colombia de los antibióticos importaciones de materia prima en Desde el año 2000 en Ministerio de Comercio, Industria y Turismo(DANE
betalactámicos? Colombia Colombia www.chemweek.com 1
specifications of amoxicillin as a raw Base de datos COASPHARMA, desde 1990,
Qué características FQ y MB debe tener la mp
material
En coaspharma
CARACTERÍSTICAS Con qué características llega la mp a Características fisicoquímicas, Base de datos COASPHARMA, desde 1990,
Colombia? microbiológicas y farmacotécnicas.
En coaspharma
DE LA
MATERIA Farmacotecnia evaluation of amoxicillin as a Base de datos COASPHARMA, desde 1990,
PRIMA Pre-compactada? Polvo?
raw material
En coaspharma
Desde el año 2000 en
Bioequivalencia entre las diferentes A? Bioequivalence studies of amoxicillin
Colombia
Tesis Universidad Nacional de Colombia 4
83
C. Anexo: Ficha técnica de las herramientas

de búsqueda y procesamiento de la
información
evaluados desde Ene. 1990 a Sep.2012)
BUSCADORES DE INFORMACIÓN ESTRUCTURADA
PLATAFORMA UTILIDAD PARA EL INFORME PLATAFORMA INTERFAZ PAGINA WEB
Base de datos en línea que ofrece información

SCIENCE académica revisada por pares, en texto completo, Web - on
en las siguientes áreas del conocimiento: Ciencias line
DIRECT Físicas y de Ingeniería, Ciencias de la Vida ,
Elsevier B.V.
acceso
http://www.sciencedirect.com/
1995 - 2012 Ciencias de la Salud y Ciencias Sociales y restrictivo
Humanas.
Base de datos en línea, que ofrece información

académica relevante en texto completo de
SPRINGER- Web - on
diferentes áreas del conocimiento. La información
line
JOURNAL está organizada en 23 áreas temáticas, parte de Springer
acceso
http://www.springer.com
1995 - 2012 los artículos que se publican tienen como autores
restrictivo
premios nobel (150) así como científicos
renombrados.
Web - on
Es un recurso electrónico que permite tener
line
EBRARY acceso a los contenidos de los libros de más de Ebrary
acceso
http://www.e-brary.com
200 editoriales académicas del mundo
restrictivo
Colección de revistas en línea en texto completo

de diferentes áreas del conocimiento. Las Web - on
publicaciones son producidas por las sociedades line
NATURE científicas de diferentes áreas del conocimiento.
nature.com
acceso
http://www.nature.com
Las publicaciones tienen con un alto factor de restrictivo
impacto.
Base de datos que ofrece información en recursos Web - on

Wiley
Blackwell continuos en el ámbito de las Ciencias Puras, las line
Knowledge for http://onlinelibrary.wiley.com
Sinergy Humanidades y las Ciencias Sociales y las
Generations
acceso
Ingenierías restrictivo
Índice de 300 publicaciones desde 1984. Los

General resúmenes son escritos por profesionales con Web - on
especialización en el área. Ofrece información line
Science Full académica como de difusión científica. Texto
EBSCO HOST
acceso
http://www.ebscohost.com
Text completo de 100 publicaciones desde 1995. Su restrictivo
contenido cubre disciplinas de las ciencias puras.
84
Anexo C. (Continuación)
BUSCADORES DE PATENTES
PLATAFORMA UTILIDAD PARA EL INFORME INTERFAZ PAGINA WEB
Agencia de patentes y marcas de los Web - on

USPTO http://www.uspto.gov/patents/process/search/
Estados Unidos line
Oficina Coreana de Propiedad Web - on http://patent2.kipris.or.kr/pateng/searchLogina.do?next=Gen

KIPRISS
Intelectual line eralSearch
Oficina estatal de propiedad Web - on

SIPO http://english.sipo.gov.cn/index.html
intelectual de la República de China line
Oficina Europea de patentes ofrece

acceso gratuito a más de 70 millones
de documentos de información sobre
Web - on
WIPO patentes en todo el mundo, que http://patentscope.wipo.int/search/en/result.jsf
line
contiene aproximadamente inventos y
desarrollos técnicos desde 1836 hasta
la actualidad.
Es un buscador Google especializado

en patentes, lanzado desde 2006, que
realiza consultas dentro de los 7
millones de documentos oficiales
procesados por la Oficina Web - on
GOOGLE.COM www.google.es/patents/
Estadounidense de Patentes y line
Marcas. las búsquedas se pueden
realizar por número de patente,
nombre del inventor y fecha de la
petición de patente
PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE INFORMACIÓN - ANÁLISIS CIENCIOMÉTRICO

PLATAFORMA UTILIDAD PARA EL INFORME LICENCIA INTERFAZ PAGINA WEB
Software que permite explorar

eficientemente grandes volúmenes de
datos y convertirlos en información
Web - on line
MATHEO estratégica, facilita dar respuesta a los
IBUN acceso www.matheo-software.com/es/
ANALYZER ® objetivos del estudio, tales como
restrictivo
publicación cientifica, asociatividad
entre autores, relaciones entre
tematicas, etc...
Procesamiento de datos
MICROSOFT alfanuméricos, graficación de USO Aplicación
N/A
EXCEL® resultados, elaboracion de tablas, PARTICULAR PC
etc...
85
D. Anexo: Bitácora de búsqueda

"Información Estructurada"
SCIENCEDIRECT (Plataforma Elsevier B.V)

NUMERO
FECHA ECUACION DE BUSQUEDA DE PERTINENCIA
ARTICULOS
ENE / 2012 amoxicillin and production and process 2,544 0
ENE / 2012 amoxicillin and production and process and penicillin acylase 67 0
ENE / 2012 amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin acylase 62 32
ENE / 2012 amoxicillin and production and process and penicillin acylase and not chromatography and reactors and batch 54 26
ENE / 2012 amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin g acylase and 6 apa 37 22
ENE / 2012 amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin g acylase and 6 apa and lactam antibiotics 4 2
amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin g acylase and 6 apa and lactam ic antibiotics and
ENE / 2012 immobilized enzyme
4 2
ENE / 2012 immobilized enzyme and penicillin amidase
4 2
ENE / 2012 immobilized enzyme and penicillin amidase and phenylglycinemethylester
3 2
ENE / 2012 immobilized enzyme and penicillin amidase and phenylglycinemethylester and pgme
1 1
89
SPRINGER- JOURNAL (Plataforma Springer)

NUMERO
PALABRA
FECHA DE PERTINENCIA
CLAVE ARTICULOS
ABR / 2012 amoxicillin and production and process 2,312 0
ABR / 2012 amoxicillin and production and process and penicillin acyls 57 8
ABR / 2012 amoxicillin and production and process and penicillin acylase not therapy not medicine not clinical 24 17
ABR / 2012 amoxicillin and production and process and penicillin acylase and not chromatography and reactors and batch 4 4
amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin g acylase and 6 apa and not chromatography and
ABR / 2012 4 4
reactors and batch
ABR / 2012 amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin g acylase and 6 apa and lactam antibiotics 20 15
ABR / 2012 immobilized enzyme
20 15
ABR / 2012 immobilized enzyme and penicillin amidase
20 14
amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin acyls and 6 apa and lactamic antibiotics and
ABR / 2012 immobilized enzyme and penicillin amidase and phenylglycinemethylester
1 1
amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin acylase and 6 apa and lactamic antibiotics and
ABR / 2012 immobilized enzyme and penicillin amidase and phenylglycinemethylester and pgme
2 2
80
EBRARY
NUMERO
PALABRA
CLAVE ARTICULOS
BUSCA EN LOS LIBROS INSCRITOS, DE LOS CUALES SE DEBE BUSCAR UNO A UNO HACIENDO EL
ABR / 2012 PROCESO MAS DIFICIL, MOSTRANDO AL FINAL DATOS CLINICOS CENTRADOS EN ENFERMEDADES, 0 0
MEDICAMENTOS.
0
86
Anexo D: (Continuación)
NATURE
NUMERO
PALABRA
CLAVE ARTICULOS
NO SE ENCONTRARON DATOS QUE PUEDAN SERVIR PARA LA INVESTIGACION, UNICAMENTE SE CENTRA
ABR / 2012 EN DATOS CLINICOS 0 0
Blackwell Sinergy (Plataforma Knowledge for generations)

NUMERO NUMERO DE
PALABRA
FECHA DE ARTICULOS
CLAVE ARTICULOS FILTRADOS
ABR / 2012 amoxicillin and production and process 2,442 0
ABR / 2012 amoxicillin and production and process and not clinical and not chromatography 169 8
amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin g acylase and 6 apa and not chromatography and
ABR / 2012 reactors and batch 4 4
ABR / 2012 amoxicillin and production and enzymatic process and penicillin g acylase and 6 apa and lactam antibiotics 20 15
ABR / 2012 immobilized enzyme 0 0
44
General Science Full Text (Plataforma Ebsco host)

NUMERO
PALABRA
CLAVE ARTICULOS
ABR / 2012 amoxicillin and production and process 8 2
ABR / 2012 amoxicillin and production and enzymatic process 37 3
ABR / 2012 amoxicillin and production and process and not clinical and not chromatography 0 0
5
87 Anexos
E. Anexo: Bitácora de búsqueda “Información NO Estructurada”

(Fuente: Bases de datos UN, de acuerdo a los documentos citados en la bibliografía, evaluados desde Ene. 1990 a Sep.2012)
GOOGLE.COM YIPPY.COM BING.COM SEARCH.CARROT2.ORG POLYMETA.COM IBOOGIE.COM

NOV A DIC - 2011 DIC - ENE 2011 FEB - 2012 MAR - 2012 MAR - 2012 ABR - 2012
ECUACIONES DE BÚSQUEDA
NÚMERO NÚMERO NÚMERO NÚMERO NÚMERO NÚMERO
DE (*) DE (*) DE (*) DE (*) DE (*) DE (*)
ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS
amoxicillin + production + process 622,000 0 831 0 118,000 0 73,300 0 105 100 100 43
amoxicillin + production + process + penicillin acylase 23,000 0 47 22 26,400 0 450 41 112 112 100 51
amoxicillin + production + enzymatic process + penicillin acylase 15,800 0 48 18 38,800 0 421 39 102 102 100 37
amoxicillin + production + enzymatic process + penicillin acylase + 6 apa 4,690 0 49 18 131 0 331 38 98 98 100 49
amoxicillin + production + enzymatic process + penicillin g acylase + 6 apa 4,720 0 46 18 16 3 282 45 100 85 100 32
amoxicillin + production + enzymatic process + penicillin g acylase + 6 apa +

2,950 0 46 15 286 38 52 52 100 28
lactamic antibiotics
734 0 45 10 14 5 16 16 43 43 74 38
lactamic antibiotics + immobilized enzyme

601 0 45 10 10 5 6 5 37 27 68 52
lactamic antibiotics + immobilized enzyme + penicillin amidase

lactamic antibiotics + immobilized enzyme + penicillin amidase + 131 53 0 0 0 0 4 4 3 2 14 6
phenylglycinemethylester
lactamic antibiotics + immobilized enzyme + penicillin amidase + 24 24 0 0 0 0 3 3 2 1 2 0
phenylglycinemethylester + pgme
trends + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa 36,500 5 161,000 37 144,000 0 276 27 119 119 100 61
outlook + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized 149,000 1 49,200 32 51 5 27 10 57 57 100 41

outlook + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin G
217 3 119,000 26 8 3 9 9 52 52 14 8
acylase
trends + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin G
48 4 318 18 4 3 4 2 32 21 8 2
acylase + pgme
trends + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin G
6 6 2 1 0 0 2 2 22 12 4 2
acylase + pgme filetype:pdf
foresight + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin G
0 0 12 6 0 0 0 0 0 0 0 0
88 Anexos
Anexo E: (Continuación)
GOOGLE.COM YIPPY.COM BING.COM SEARCH.CARROT2.ORG POLYMETA.COM IBOOGIE.COM
NOV A DIC - 2011 DIC - ENE 2011 FEB - 2012 MAR - 2012 MAR - 2012 ABR - 2012
ECUACIONES DE BÚSQUEDA
NÚMERO NÚMERO NÚMERO NÚMERO NÚMERO NÚMERO
DE (*) DE (*) DE (*) DE (*) DE (*) DE (*)
ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS ARTÍCULOS
roadmaps + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized
0 0 57 5 0 0 0 0 1 0 0 0
+penicillin G acylase + pgme filetype:pdf
forecasting + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized
2 2 81 8 0 0 1 1 7 5 1 1
overview + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin
10 10 98 14 1 0 1 1 41 25 1 1
G acylase + pgme filetype:pdf
reviews + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin
10 10 179 9 1 0 1 1 21 10 1 1
outlook + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin G
0 0 75 10 2 1 1 1 6 3 1 1
market + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin G
5 5 127 11 2 1 3 3 10 6 4 2
report intelligence + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized
0 0 75 2 1 1 0 0 2 0 0 0
research + amoxicillin + enzymatic + process + 6 apa + immobilized +penicillin
8 6 197 18 7 2 7 6 39 23 14 8
the copenhagen institute for futures studies + amoxicillin + enzymatic process
143 0 0 0 0 0 0 0 100 12 0 0
filetype:pdf
the copenhagen institute for futures studies + amoxicillin + 6 apa + enzymatic
7,250 0 0 0 0 0 0 0 88 12 0 0
process filetype:pdf
the copenhagen institute for futures studies + amoxicillin + 6 apa + immobilized
1,600 0 0 0 0 0 0 0 65 12 0 0
+ enzymatic process filetype:pdf
the copenhagen institute for futures studies + amoxicillin + 6 apa + immobilized
8 0 0 0 0 0 0 0 52 12 0 0
enzyme + penicillin amidase + enzymatic process filetype:pdf
(*) PERTINENCIA 129 308 29 292 1003 464
89
Anexos
F. Anexo: Bitácora de búsqueda “Patentes”

evaluados desde Enero 2000 a Noviembre 2012).
GOOGLE PATENTS
FECHA ECUACIÓN DE BÚSQUEDA NÚMERO DE ARTÍCULOS PERTINENCIA
jun-13 amoxicillin 16,300 0
jun-13 amoxicillin + production 3,060 0
jun-13 amoxicillin + production + enzymatic 216 0
jun-13 amoxicillin + production + enzymatic + process 118 28
jun-13 amoxicillin + production + enzymatic + process + 6 apa 68 16
TOTAL 19,762 16
WIPO PATENTSCOPE
jun-13 amoxicillin + production + enzymatic 2,569 0
jun-13 amoxicillin + production + enzymatic + process 2,460 0
TOTAL 17,902 14
SIPO
TOTAL 1,250,633 67
ESPACENET
jun-13 amoxicillin 602 0
jun-13 amoxicillin + production 56 14
TOTAL 658 14
KIPRIS
jun-13 amoxicillin 295 0
jun-13 amoxicillin and production 65 7
jun-13 amoxicillin and production and enzymatic 8 0
jun-13 amoxicillin and production and enzymatic and process 0 0
jun-13 amoxicillin and production and enzymatic and process and 6 apa 0 0
TOTAL 368 7
90
Anexos
G. Anexo: Definición y estructura de la

amoxicilina
Es un antibiótico semisintético derivado de la penicilina que actúa contra un amplio espectro
de microorganismos, tanto Gram-positivos como Gram-negativos, con un espectro de
actividad antibacteriana superior al de la penicilina, se utiliza para el tratamiento de
infecciones tanto en medicina humana como veterinaria (neumonía, bronquitis, gonorrea,
infecciones de oído, nariz, garganta, vías urinarias y piel); también se utiliza en combinación
con otros medicamentos para eliminar la bacteria H. pylori que causa úlceras (Price, 2005).
Sus presentaciones son todas vía oral como: cápsulas (250 y 500mg), tabletas (500 mg y 1 g)
y polvos para suspensión (250 y 500 mg)
Su nombre según sistema IUPAC es ácido [2S-[2α, 5α, 6(S*)]]-6-[[amino (4-hidroxifenil)

acetil] mino]-3,3-dimetil-7-oxo-4-thia-1-azabiciclo [3.2.0] heptano-2-carboxílico; ácido 6-(p-
hidroxi-α-aminofenilacetamido) ácido penicililanico; p-hidroxiampicilina; su fórmula molecular
condensada es: C16H19N3O5S, su estructura química esencial es el ácido 6-aminopenicilánico
(6 - APA), que consiste en un anillo tiazolidínico con un anillo betalactámico
condensado.(Budavari, 1996). ver figura 9 - 4
Figura 9 - 4: Estrutura de la amoxicilina

(Budavari, 1996)
91
Anexos
H. Anexo: Artículos más representativos sobre

“sintesis enzimática de cefalexina”
evaluados desde Ene. 1990 a Jun.2013)
SINTESIS CEFALEXINA
TÍTULO DE LA
AUTOR PAÍS REVISTA ABSTRAC
INVESTIGACIÓN
The kinetically controlled synthesis of cephalexin in aqueous two-phase systems was
studied, using immobilized penicillin acylase, 7-amino 3-desacetoxycephalosporanic acid
as nucleophile and phenylglycine methyl ester as acyl donor. The organic phases used
were 80% (v/v) polyethyleneglycol 400 and 600 and the aqueous phase was 2.5M (NH 4)
2SO 4. 7-amino 3-desacetoxycephalosporanic acid and cephalexin partition coefficients
(Aguirre, Concha, were determined at pH 7.4 and 7.8, at 14°C and 20°C. Highest partition coefficient for
Partition and substrate
Vergara, Riveros, cephalexin was obtained for polyethyleneglycol 400-(NH 4) 2SO 4 at pH 7.4 and 20°C,
concentration effect in
& Illanes, 2010) while the lowest partition coefficient for 7-amino desacetoxycephalosporanic acid was
Process the enzymatic synthesis
CHILE obtained in the same system at pH 7.8 and 14°C. No significant effect of pH was observed
Biochemistry of cephalexin in
on conversion yield and productivity of cephalexin synthesis; however, higher values were
aqueous two-phase
obtained with polyethyleneglycol 400 as organic phase. Higher conversion yields with both
systems
biphasic systems were obtained at the lowest temperature, where product hydrolysis was
lower; volumetric productivity was higher for the fully aqueous medium (control), being
higher at 20°C. All parameters of synthesis were improved at higher substrates
concentrations, obtaining conversion yields of 78.2% and 65.4%, with 60mM 7-amino
desacetoxycephalosporanic acid for the polyethyleneglycol 400-(NH 4) 2SO 4 system and
the control
The use of very high substrate concentrations favors the kinetically controlled synthesis of
cephalexin with penicillin acylase (PA) not only by Michaelian considerations, but also
because water activity is depressed, so reducing the rates of the competing reactions of
product and acyl donor hydrolysis. Commercial PGA-450, glyoxyl agarose immobilized
(PAIGA) and carrier-free cross-linked enzyme aggregates of penicillin acylase (PACLEA)
were tested in aqueous media at concentrations close to the solubility of nucleophile and
Applied Synthesis of cephalexin at previously determined enzyme to nucleophile and acid donor to nucleophile ratios. The
Biochemistry in aqueous medium with best temperature and pH were determined for each biocatalyst based on an objective
CHILE and carrier-bound and function considering conversion yield, productivity, and enzyme stability as evaluation
(Illanes, et al., Biotechnolog carrier-free penicillin parameters. Stability was higher with PAIGA and specific productivity higher with PACLEA,
2009) y acylase biocatalysts but best results based on such objective function were obtained with PGA-450. Yields
were stoichiometric and productivities higher than those previously reported in organic
medium, which implies significant savings in terms of costs and environmental protection.
At the optimum conditions for the selected biocatalyst, operational stability was determined
in sequential batch reactor operation. The experimental information gathered is being used
for a technical and economic evaluation of an industrial process for enzymatic production
of cephalexin in aqueous medium.
The presence of organic cosolvents was previously considered necessary to obtain high
conversion yields in the synthesis of β-lactam antibiotics with immobilized penicillin
acylase, and it is so when working at moderate substrate concentrations. Conversion
yields close to stoichiometric and high productivities were recently reported for the
synthesis of cephalexin at high substrate concentrations in ethylene glycol medium. Under
such conditions, the effect of cosolvent concentration on yield is not significant so we
Synthesis of cephalexin
raised the hypothesis that stoichiometric yields and high productivities are attainable at
Journal of with immobilized
very high substrate concentrations in fully aqueous medium leading to substantial process
Molecular penicillin acylase at very
(Andrés Illanes et CHILE improvement in terms of costs and environment. To test the hypothesis, the kinetically
Catalysis B: high substrate
al., 2007) controlled synthesis of cephalexin with immobilized penicillin acylase was conducted in
Enzymatic concentrations in fully
aqueous medium at substrates concentrations up to and beyond their solubilities at
aqueous medium
varying temperature, pH, enzyme to substrate and acyl donor to nucleophile ratios. At the
best conditions, 99% conversion yield was attained with volumetric productivity of 300
mM/h and specific productivity of 7.8 mmol/h g cat. These values are slightly higher than
those previously obtained under optimized conditions in organic medium so that the
hypothesis has been confirmed, which opens up the possibility of efficiently produce the
antibiotic through an environmentally friendly process.
The kinetically controlled synthesis of cephalexin in ethylene glycol was previously
optimized at moderate substrate concentrations obtaining yields close to stoichiometric. A
study is now presented on the production of cephalexin at very high substrates
concentrations, up to 750 mM acyl donor, with immobilized and cross-linked enzyme
aggregates (CLEA) of penicillin acylase. Since conversion yield close to 100% was already
Production of obtained, attention was given to productivity under the hypothesis that increasing
cephalexin in organic substrates concentration will produce a substantial increase in productivity without
Enzyme and medium at high reducing yield. An increase of 29 times in volumetric productivity and 4.5 times in specific
CHILE Microbial substrate productivity was obtained with PGA-450 with respect to the results obtained at moderate
(A. Illanes, et al., Technology concentrations with substrates concentrations (below 100 mM acyl donor). Volumetric productivity was lower
2007) CLEA of penicillin for CLEA than for PGA-450, but specific productivity was almost the same for both.
acylase and PGA-450 Sequential batch reactor operations were conducted to assess the biocatalyst operational
stability and global productivity, considering one half-life as biocatalyst life cycle. Under
such criterion, 40.1 and 135.5 g of cephalexin/g of biocatalyst were obtained for PGA-450
and CLEA, respectively. Yields remained close to 100% during the whole cycle. These are
very good values which can be improved by optimizing the biocatalyst replacement
criterion
92
Anexos
Anexo H: (Continuación)
SINTESIS CEFALEXINA
TÍTULO DE LA
INVESTIGACIÓN
The effect of temperature was studied for the kinetically controlled synthesis of cephalexin
and ampicillin with penicillin acylase immobilised in glyoxyl agarose. Yield increased at low
temperatures in the absence and presence of ethylene glycol, while the initial ratio of
Low temperature effect synthesis to hydrolysis decreased. Arrhenius equations were used to describe the
on production of temperature dependency of the hydrolysis and synthesis rates. The effect of ethylene
ampicillin and glycol was stronger over the yield of synthesis of cephalexin than ampicillin. In the case of
Process
(Aguirre, Opazo, CHILE cephalexin in ethylene cephalexin, yield increased from 82.8% in aqueous buffer to 97.6% in 50% (v/v) ethylene
Biochemistry
Venegas, Riveros, glycol medium with glycol medium at 0 °C, while at 20 °C an increase from 68.8% to 78.7% was obtained. The
& Illanes, 2006) immobilized penicillin presence of ethylene glycol produced a greater increase in the energies of activation of the
acylase hydrolysis reactions than of the synthesis reactions, which explains the higher conversion
yields obtained in the presence of the cosolvent, both for cephalexin and ampicillin.
Cephalexin synthesis was optimized using an experimental design based on surface of
response methodology
The kinetically controlled synthesis of cephalexin (CEX) in ethylene glycol (EG) was
previously optimized at moderate substrate concentrations and high enzyme to substrate
ratio, obtaining yields close to stoichiometric. However, substrate concentrations were low
and enzyme loads high enough for production purpose. The synthesis of cephalexin in
40% (v/v) ethylene glycol at 20°C and pH 7.0 with glyoxyl-agarose immobilized penicillin
Synthesis of cephalexin acylase (GAPA) was studied at high substrates concentrations to the point of saturation
(Illanes, Journal of in organic medium at and beyond. Phenylglycine methyl ester (PGME) was the acyl donor at a molar ratio of 3
Altamirano, Molecular high substrate with respect to nucleophile. At initially homogeneous conditions with nucleophile
CHILE
Fuentes, Catalysis B: concentrations and low concentration close to its solubility and at low enzyme to substrate ratio, productivity
Zamorano, & Enzymatic enzyme to substrate increase eight times and specific productivity five times with respect to a control at
Aguirre, 2005) ratio moderate substrates concentrations and high enzyme to substrate ratio. At initially
heterogeneous conditions with partially undissolved nucleophile and low enzyme to
substrate ratio, increases in productivity and specific productivity were eleven and seven
times, respectively. The biocatalyst was very stable under reaction conditions, so that a
very high global productivity is anticipated, making the enzymatic process competitive with
existing chemical synthesis.
Organic cosolvents, and among them, polyols, are suitable media to perform the
enzymatic synthesis of β-lactam antibiotics with immobilized penicillin acylase, because
they effectively reduce water activity, depressing hydrolytic reactions in favor of synthesis.
Among polyols, ethylene glycol has proven to be particularly suited as reaction medium for
their synthesis. Previous studies have shown that pH, temperature, and cosolvent
concentration are the most relevant variables in the kinetically controlled synthesis of
Optimization of cephalexin from 7-amino-3-deacetoxy cephalosporanic acid and phenylglycine methyl
Journal of cephalexin synthesis ester, conversion yield increasing at low temperatures and high cosolvent concentrations.
Molecular with immobilized The objective of this work is the optimization of temperature, pH, and ethylene glycol
CHILE
(Illanes, Anjarı, Catalysis B: penicillin acylase in concentration in the kinetically controlled synthesis of cephalexin with immobilized
Altamirano, & Enzymatic ethylene glycol medium penicillin acylase at lower than ambient temperature in terms of substrate molar
Aguirre, 2004) at low temperatures conversion yield. Phenylglycine was used as acyl donor and 7-amino-3-deacetoxy
cephalosporanic acid was the limiting substrate at 30 mM. Optimization was performed
using surface of response methodology, optimum conditions being 12°C, pH 6.8, and 60%
(v/v) ethylene glycol, at which cephalexin yield was close to stoichiometric with respect to
the limiting nucleophile, which is unattainable in aqueous medium. Stability of the
biocatalyst at optimum conditions for cephalexin synthesis was very high, with a projected
half-life of 1500 h, making it a suitable catalyst for the large-scale production of cephalexin
The synthesis of cephalexin with glyoxyl-agarose immobilised penicillin acylase (GAPA) in
50% (v/v) ethylene glycol at 90 mM acyl donor was optimised in terms of pH and
temperature, using molar yield as objective function. Yield was substantially increased by
Synthesis of cephalexin
the presence of the cosolvent and stability was also higher than in aqueous medium. pH
in ethylene glycol with
and temperature optima were 7.0 and 28°C and maximum yield was 96%, substantially
Process glyoxyl-agarose
(Illanes, Cabrera, CHILE higher than previously obtained with a commercial biocatalyst. The operational stability of
Biochemistry immobilised penicillin
Wilson, & Aguirre, the biocatalyst was determined as a half-life of 135 h at 28°C. Synthesis of cephalexin at
acylase: Temperature
2003) low temperatures is being studied to determine if the increase in biocatalyst stability will
and pH optimisation
outweigh the longer times and higher enzyme loads required. Optimisation is still to be
conducted at higher substrate concentrations. Reduction in acyl donor excess is advisable
but it will reduce yield.
The effect of co-solvents was studied on the kinetically controlled synthesis of cephalexin
with immobilised penicillin acylase (PA). Yield correlated well with the ratio of initial rates of
cephalexin synthesis to acyl donor hydrolysis and water activity. Yield was substantially
Effect of cosolvent and
higher in EG than in aqueous medium and was selected to study the effect of (apparent)
pH on the kinetically
pH on initial rates of synthesis and hydrolysis. The ratio of initial rates of product synthesis
Process controlled synthesis of
(Aguirre, Toledo, CHILE to hydrolysis (r2), adequate to assess the potential for synthesis in kinetically controlled
Biochemistry cephalexin with
Medina, & Illanes, systems under excess acyl donor, was maximal at pH 7.5 and correlated well with yield.
immobilised penicillin
2002) The effect of ethylene glycol was very strong with an improvement of 230% in r2, whose
acylase
value was higher than 1, hardly attainable in aqueous medium. This reflected in a
considerable improvement (13%) in product yield, which highlights the potential of EG as a
medium for the production of cephalexin.
Synthesis of cephalexin with immobilized penicillin acylase at high substrates
concentration at an acyl donor to nucleophile molar ratio of 3 was comparatively evaluated
in aqueous and ethylene glycol media using a statistical model. Variables under study
Comparative study of were temperature, pH and enzyme to substrate ratio and their effects were evaluated on
the enzymatic synthesis cephalexin yield, ratio of initial rates of cephalexin synthesis to phenylglycine methyl ester
Biotechnology
of cephalexin at high hydrolysis, volumetric and specific productivity of cephalexin synthesis, that were used as
and
(Bahamondes, CHILE substrate concentration response parameters. Results obtained in both reaction media were modeled using
Bioprocess
Wilson, Aguirre, & in aqueous and organic surface of response methodology and optimal operation conditions were determined in
Engineering
Illanes, 2012) media using statistical terms of an objective function based on the above parameters. At very high substrates
model concentrations the use of organic co-solvents was not required to attain high yields and
actually almost stoichiometric yields were obtained in a fully aqueous media with the
advantages of higher productivities than in an organic co-solvent media and compliance
with the principles of green chemistry.
93
Anexos
Anexo H: (Continuación)
A mathematical model is presented for the kinetically controlled synthesis of cephalexin

that describes the heterogeneous reaction-diffusion process involved in a batch reactor
with glyoxyl-agarose immobilized penicillin acylase. The model is based on equations
considering reaction and diffusion components. Reaction kinetics was considered
according to the mechanism proposed by Schroën, while diffusion of the reacting species
was described according to Fick's law. Intrinsic kinetic and diffusion parameters were
experimentally determined in independent experiments. It was found that from the four
kinetic constants, the one corresponding to the acyl-enzyme complex hydrolysis step had
Batch reactor
the greatest value, as previously reported by other authors. The effective diffusion
performance for the
coefficients of all substances were about 5×10 -10m 2/s, being 10% lower than free
enzymatic synthesis of
New diffusion coefficients and therefore agreed with the highly porous structure of glyoxyl-
CHILE cephalexin: Influence
Biotechnology agarose particles. Simulations made from the reaction-diffusion model equations were
of catalyst enzyme
(Valencia, Flores, used to evaluate and analyze the impact of internal diffusional restrictions in function of
loading and particle
Wilson, & Illanes, catalyst enzyme loading and particle size. Increasing internal diffusional restrictions
size
2012) decreases the Cex synthesis/hydrolysis ratio, the conversion yield and the specific
productivity. A nonlinear relationship between catalyst enzyme loading and specific
productivity of Cex was obtained with the implication that an increase in catalyst enzyme
loading will not increase the volumetric productivity by the same magnitude as it occurs
with the free enzyme. Optimization of catalyst and reactor design should be done
considering catalyst enzyme loading and particle size as the most important variables. The
approach presented can be extended to other processes catalyzed by immobilized
enzymes.
The impact of mass transfer limitations on penicillin G acylase immobilized in glyoxyl-
agarose particles of different sizes and enzyme loads was evaluated for the reactions of
hydrolysis of penicillin G and synthesis of cephalexin under the hypothesis that the impact
of internal diffusional restrictions on the catalytic potential of the enzyme will be of a
greater magnitude for a fast reaction of hydrolysis than a slower reaction of synthesis.
Experimental evidences were obtained from batch reactor operation where increase in
enzyme load and particle size has a much stronger impact on the former reaction.
Additional evidences were obtained by the impact of the above biocatalyst properties on
Evaluation of the
the apparent Michaelis constants for substrates. Michaelis constants of penicillin G
incidence of
acylase catalysts of different enzyme load and particle sizes varied between 0.73 and
diffusional restrictions
Enzyme and 4.55. mM and between 3.0 and 11.1. mM for the hydrolysis of penicillin G and the
on the enzymatic
CHILE Microbial synthesis of cephalexin respectively. Michaelis constants for penicillin G acylase
reactions of hydrolysis
(Valencia, Wilson, Technology biocatalysts subjected to progressive size reduction were reduced from 5.0 to 0.46. mM
of penicillin G and
Aguirre, & Illanes, and from 7.2 to 2.1. mM for hydrolysis of penicillin G and synthesis of cephalexin
synthesis of
2010) respectively. Higher fluctuation between these values in hydrolysis of penicillin G reflects
cephalexin
higher impact of diffusional restrictions on this reaction. Thièle modulus for the substrate
was much higher for penicillin G hydrolysis than for cephalexin synthesis in a wide range
of substrates concentrations. Ratio between moduli for hydrolysis of penicillin G and
synthesis of cephalexin was 15 at saturating concentration of phenylglycine methyl ester
and increased at lower concentrations of such substrate. Results highlight the importance
of designing the biocatalyst according to the reaction in which it will be used, being
particularly important in the case of penicillin G acylase that is currently being used both in
reactions of hydrolysis and synthesis.
Synthesis of cephalexin with immobilized penicillin acylase at high substrates
concentration at an acyl donor to nucleophile molar ratio of 3 was comparatively evaluated
Comparative study of in aqueous and ethylene glycol media using a statistical model. Variables under study
the enzymatic were temperature, pH and enzyme to substrate ratio and their effects were evaluated on
synthesis of cephalexin yield, ratio of initial rates of cephalexin synthesis to phenylglycine methyl ester
Biotechnology
(Bahamondes, et cephalexin at high hydrolysis, volumetric and specific productivity of cephalexin synthesis, that were used as
and
al., 2012) CHILE substrate response parameters. Results obtained in both reaction media were modeled using
Bioprocess
concentration in surface of response methodology and optimal operation conditions were determined in
Engineering
aqueous and organic terms of an objective function based on the above parameters. At very high substrates
media using statistical concentrations the use of organic co-solvents was not required to attain high yields and
model actually almost stoichiometric yields were obtained in a fully aqueous media with the
advantages of higher productivities than in an organic co-solvent media and compliance
with the principles of green chemistry.
94
Anexos
I. Anexo: Análisis Cienciométrico de la síntesis

enzimática de cefalexina (SEC)
La cefalexina perteneciente a la familia de los cefalosporínicos, toma un gran interés en la
presente investigación, porque pese a sus diferencias estructurales con la amoxicilina, posee
muchas características en común, tanto en su método de preparación, como en su mecanismo de
acción, donde la enzima que cataliza la síntesis (PA) es la misma y que necesitan de un precursor
(7-ACA “ácido 7 aminocefalosporínico”) diferente al 6-APA, ambos producidos por vía enzimática,
y actúan inhibiendo la síntesis de la pared celular de las bacterias.
Una vez clasificadas las investigaciones, se observa que hay más investigaciones sobre la
sintesís enzimática de amoxicilina (23 publicaciones) que sobre la sintesís enzimática de
cefalexina (15 publicaciones), esto se debe a su importancia comercial, aunque la rentabilidad los
cefalosporínicos es mayor que el de los penicilínicos en un 23%, pero frente a los volúmenes de
fabricación es mayor los penicilínicos.(Bhattacharyya & Sen, 2006); En la Gráfica 9 - 36, se
evidencia que a partir del año 2004, la investigación se ha incrementado y mantenido a través del
tiempo, demostrando que el tema es vigente para la investigación.
GRÁFICA 9 - 36 : Porcentaje de artículos publicados sobre el tema SEC

evaluados desde Enero 1996 a Marzo 2013 y graficados con el software Matheo Analyzer®)
Ahora bien, los principales investigadores de SEC (según el número de publicaciones) en su

orden de importancia corresponden al Dr. Andrés Illanes, el cual tiene una participación del
20% (13 trabajos) (Chile), Dra Carolina Aguirre Cespedes (Chile) con una participación del
16.92% (11 trabajos), Dra. Lorena Wilson (Chile) con una participación del 10.77% (7
95
Anexos
trabajos), sus trabajos están relacionados entre si, debido a que han trabajado el
mejoramiento de la SEC entre sus diferentes grupos de investigación de la Universidad
Católica de Concepción, Universidad Técnica Federico Santa María y Universidad Católica de
Valparaiso y dichas investigaciones han sido patrocinadas por FONDECYT (Fondo Nacional
de Desarrollo Científico y Tecnológico Chileno).
Por otra parte, en la gráfica 9 - 37 se evidencia un mayor número de investigadores (23) de origen
chileno, que corresponden a un 86,67% del total de los investigadores que ha publicado sobre la
SEC lo que demuestra su liderazgo en este tema, seguidos por suizos e Indios en un 6.67% con
(4) y (3) investigadores respectivamente.
investiga sobre el tema SEC
Las revistas donde más se publica sobre la SEC, corresponden a “Journal Process
Biochemistry”28 con un 26.67% que corresponde a (4) publicaciones, seguido por “Journal of
Molecular Catalysis B – Enzymatic” con un 20% que corresponde a (3) publicaciones; y las
palabras claves más usadas para referenciar este tema es CEPHALEXIN y PENICILLIN
ACYLASE con un 16.22% (en 12 publicaciones) cada uno.
28
Revista creada en Amsterdam y perteneciente a la editorial Elsevier, enfocada a los avances novedosos en bioprocesos que
involucran moléculas bioactivas y organismos vivos, posee un factor de impacto de 2.414 y factor de impacto acumulado en los
últimos 5 años de 2.983 (según Journal citation Reports 2013, publicados por Thomson Reuters®)
96
Anexos
J. Anexo: Artículos más representativos sobre

“síntesis enzimática de ampicilina”
evaluados desde Ene. 1990 a Jun.2013)
SÍNTESIS AMPICILINA
TÍTULO DE LA
ITEM PAÍS REVISTA ABSTRAC
INVESTIGACIÓN
The enzymatic synthesis of β-lactam semi-synthetic antibiotics has been receiving increasing
attention as a green-chemistry alternative for the industrial production of these drugs, because
mild reaction conditions may be used. A nonconventional fed-batch reactor is presented here,
using a bi-disperse gel matrix for immobilization of the enzyme penicillin G acylase (PGA) [EC
3.5.1.11]. The catalyst particles are suspended within Taylor-Couette vortices, performing the
kinetically controlled synthesis of ampicillin (AMP) from phenylglycine methyl ester (PGME) and
6-aminopenicillanic acid (6-APA). This is a serial-parallel set of reactions, where the desired
Nonconventional product (AMP) is the intermediate species, and a high selectivity is essential for the process
Industrial and
(Andrea L. O. reactor for enzymatic economics. With this objective, AMP should be precipitated, withdrawing the antibiotic from the
Engineering
Ferreira, et al., BRASIL synthesis of semi- liquid phase and reducing its hydrolysis. One key point is to protect the physical integrity of the
Chemistry
2007) synthetic β-lactam catalyst within this environment. To avoid damages to the catalyst particle caused by
Research
antibiotics conventional impellers, while preserving a good mixing, Taylor-Couette flow was used. In
addition, a convenient biocatalyst matrix was developed, to allow easy separation between the
crystals and the enzyme support. A bench-scale (50 mL) Taylor vortex flow reactor (VFR), with a
radius ratio of η = 0.27 and operating in fed-batch mode, was used for proof of the concept. To
sustain homogeneous fluidization of the biocatalyst, the VFR operated with a rotational Reynolds
number of Re = 5605, within the turbulent Taylor vortices flow region. With this reactorcatalyst
ensemble, 100% activity and complete physical integrity of the particles were sustained after 200
h of operation.
Penicillin G acylase (PGA) catalyzes the synthesis/hydrolysis of acyl derivatives of phenylacetic

acid through the formation of a covalent intermediate (the acyl-enzyme complex). When used for
the kinetically controlled synthesis of β-lactam antibiotics, this enzyme promotes two undesired
side reactions: the hydrolysis of the acyl side-chain precursor and of the antibiotic. Therefore, a
Selectivity of the
high selectivity (synthesis/hydrolysis, S/H ratio) is very important for the process economics.
enzymatic synthesis
Journal of Here, the enzymatic synthesis of ampicillin from d-phenylglycine methyl ester (PGME) and 6-
(Ribeiro, Ferreira, of ampicillin by E. coli
Molecular aminopenicillic acid (6-APA), using PGA from Escherichia coli (EC 3.5.1.11) is studied. Kinetic
Giordano, & BRASIL PGA in the presence
Catalysis B: assays provided S/H for high concentrations of substrates (up to 200 mM of 6-APA and 500 mM
Giordano, 2005) of high
Enzymatic of PGME), using soluble PGA, at 25°C, pH 6.5. S/H increased with 6-APA concentration, in
concentrations of
accordance with the literature. However, when the concentration of 6-APA approached
substrates
saturation, the rate of enzymatic hydrolysis tended towards zero (i.e., S/H tended to infinity). On
the other hand, when the concentration of ester was augmented, S/H consistently decreased.
This behavior, to the best of our knowledge still not reported, indicates that the acylation step
may occur with 6-APA already positioned for the nucleophilic attack
An experimental design was applied to improve the reaction conditions for enzymatic synthesis of
ampicillin from PHFGME and 6-APA, catalyzed by PGA from E. coli immobilized on an agarose-
Improving selectivity
glyoxyl derivative. The presence and magnitude of interactions between reaction variables were
and productivity of
Brazilian estimated using a 25 factorial design. A batch reactor was employed to assess the influence of
(A. L. O. Ferreira, the enzymatic
Journal of the following variables: pH, temperature, initial 6-APA concentration, buffer concentration, and
Giordano, & BRASIL synthesis of
Chemical the presence of methanol. Response variables were productivity, selectivity, and yield (based on
Giordano, 2004) ampicillin with
Engineering initial 6-APA concentration). The best synthesis yield (56.9%) was at T = 4ºC and pH 6.5. The
immobilized penicillin
highest productivity (49.3 ´ 10-3mM of antibiotic/min) was achieved at T = 25ºC and pH 6.5. Our
G acylase
results indicate that it is possible to achieve high productivity for this system while maintaining a
high selectivity and yield.
Immobilized penicillin acylase is a moderately priced versatile enzyme, that is able to catalyze the
synthesis of derived penicillins and cephalosporins from the corresponding β-lactam nuclei and
proper side-chain precursors. Kinetically controlled synthesis is a better strategy when product
Applied yield is a key issue. Yield should increase at reduced water activity by depressing the competing
Optimization of yield
Biochemistry hydrolytic reactions in favor of synthesis; therefore, organic cosolvents can be a suitable reaction
in kinetically
and media for synthesis. Using response surface methodology and product yield as objective
(Illanes, Anjarí, controlled synthesis
Biotechnology - function, temperature and pH were optimized in the kinetically controlled synthesis of ampicillin
Arrieta, & CHILE of ampicillin with
Part A Enzyme using previously screened cosolvents and reaction conditions. Optimum pH was 6.0 for ethylene
Aguirre, 2002) immobilized penicillin
Engineering glycol (EG) and glycerol (GL) and 6.6 for 1-2 propanediol (PD); optimum temperature was 30°C
acylase in organic
and for GL and for EG and PD was in the lower extreme of the range studied, optimum lying below
media
Biotechnology 26°C. Maximum molar yields predicted by the model were 58, 51, and 46% for EG, GL, and PD,
respectively, which were experimentally validated. Highest yield in aqueous buffer was always
<40%. Molar yields about 60% compare favorably with values reported for the kinetically and
thermodynamically controlled synthesis of ampicillin and other derived penicillins.
A two-step, one-pot synthesis of ampicillin from penicillin G potassium salt (PGK) in aqueous
buffer/organic co-solvent has been achieved. Ethylene glycol (EG) was chosen as the organic co-
solvent. Factors including co-solvent content, enzyme loading, reaction temperature and
A two-step, one-pot
Journal of substrate concentration were investigated. The optimum conditions were as follow: pH 8.0
enzymatic synthesis
(Du, Wu, Chen, Molecular phosphate buffer solution, 50% EG (v/v), 25◦C, 100 mM PGK and 300 mM d-phenylglycine
CHINA of ampicillin
Liu, & Lin, 2009) Catalysis B: methyl ester (D-PGM), 43.2 IU/ml IPA-750.
from penicillin G
Enzymatic The maximum yield was 57.3% after a reaction time of 17 h. It is the ﬁrst report about the
potassium salt
synthesis of ampicillin from penicillin G potassium salt in one-pot combining the enzymatic
hydrolysis and the subsequent enzymatic condensation, and the novel methodology will have
important application in the B-lactam antibiotics industry.
97
Anexos
Anexo J: (Continuación)
SÍNTESIS AMPICILINA
TÍTULO DE LA
ITEM PAÍS REVISTA ABSTRAC
INVESTIGACIÓN
The kinetically controlled synthesis of ampicillin with immobilized penicillin acylase (IPA) from
Escherichia coli in fully organic medium was studied. d-phenylglycine methyl ester (d-PGM) was
selected as the activated acyl donor due to its good solubility in organic solvents. A series of
Journal of Efficient enzymatic organic solvents with different polarity were screened and ethyl acetate was found to be the most
(Pan, Wu, Chen, Molecular synthesis of satisfying solvent for the enzymatic synthesis of ampicillin. Remarkable catalytic activity of the
CHINA
& Lin, 2008) Catalysis B: ampicillin in organic IPA was retained in ethyl acetate, and high yield could be obtained. Furthermore, some
Enzymatic, media signiﬁcant factors that greatly affect the ampicillin synthesis process, such as substrate
concentration, temperature and water content of IPA etc., were investigated in details. As a
result, high yield (92.9%) and synthesis/hydrolysis (S/H) ratio (1.50) were successfully achieved
under the optimum conditions.
Recombinant Escherichia coli cells with high penicillin acylase (PA) activity were immobilized by
gel entrapment with agar. This biocatalyst was used to study the effect of pH on the synthesis of
ampicillin from phenylglycine methylester (PGME) and 6-aminopenicillanic acid (GAPA). The
parallel hydrolysis reactions of PGME and ampicillin were also studied. A selective inhibition of
the hydrolysis of the ester was possible by controlling the pH at 6.0. At such conditions, and using
6-APA solutions ranging from W-200 mM, a 75% conversion to ampicillin was obtained. This yield
Effect of pH in the was higher than obtained with other strategies. The reaction kinetics was described by a second-
Enzyme and
(Ospina, et al., synthesis of order model for ampicillin synthesis with experimentally determined Michaelis-Menten constants
COLOMBIA Microbial
1996) ampicillin by of 27 and 2.5 rnM for 6-APA and PGME, respectively. In addition, ampicillin and PGME were
Technology
penicillin acylase hydrolyzed by the enz_yme following Michaelis-Menten kinetics with K, values of 40.5 and 30
mM, respectively.
A good correlation was found between experimental results of synthesis reactions and rhe kinetic
model derived from initial rate experiments with on& slight deviations at high substrate
concentrations. This is the~rst report where the specific effect of pH on the synthesis of ampicillin
was studied in detail. It is shown that, by controlling the pH, it is possible to inhibit the lateral
undesirable reactions increasing the yield of the main reaction.
98
Anexos
K. Anexo: Análisis cienciométrico de la síntesis

enzimática de ampicilina (SEAM)
En la decada de los 90´s la síntesis de la ampicilina logró su máxima producción científica sin
embargo, se vió opacada por el desarrollo científico de la enzima PA y el 6-APA, y en recientes
publicaciones su investigación fue desplazada por la síntesis enzimática de la amoxicilina, debido
principalmente a que la amoxicilina es una molécula mas rentable y además por su similitud
estructural, hizo que muchos de sus desarrollos científicos hayan sido extrapolados a dicha
molécula.
Por las razones anteriores se observa que la producción científica frente a la ampicilina es muy
bajo (aproximadamente 2 publicaciones /año) pero constante en el periodo de tiempo analizado,
las cuales son lideradas en la actualidad por investigadores de origen chino, además se evidencia
que los mismos autores que publican sobre la ampicilina, también publican para la amoxicilina y
cefalexina (Giordano, R; Illanes, A; Giordano, RC, Wu, Qi; Lin, Xian-Fu, Chen, Chun-Xiu).
GRÁFICA 9 - 38 : Red asimétrica que relaciona el año de publicación del Journal vs autor
sobre el tema SEAM
Ahora bien, frente a los principales investigadores de SEAM (según el número de publicaciones)
se encuentra a: Andrés Illanes (Chile), Wu, Qi(China); Lin, Xian-Fu (China), Chen, Chun-Xiu
(China), Girodano, RLC (Brasil); Giordano, RC (Brasil) y Ferreira, ALO (Brasil), todos con (2)
publicaciones teniendo un porcentaje por autor de 5.13%, además las redes asimétricas no se
muestran ninguna relación entre países, autores e instituciones.
99
Anexos
Frente a los revistas donde más se publica sobre la SEAM, corresponde al “Journal of Molecular
Catalysis B – Enzymatic” con un 55.56% que corresponde a (5) publicaciones; y las palabras
claves más usadas para referenciar este tema son AMPICILLIN con un 17.5% (en 7
publicaciones), PENICILLIN ACYLASE y ENZYMATIC SYNTHESIS con un 10% (en 4
publicaciones) cada uno
100
Anexos
L. Anexo: Artículos más representativos sobre

el tema “penicilin acylase”
ENZIMA PENICILLIN G/V ACYLASE
TÍTULO DE LA
INVESTIGACIÓN
Mass transfer effects were investigated for the synthesis of ampicillin and amoxicillin, at pH 6.5 and
(L. Goncalves, 25°C, catalyzed by penicillin G acylase immobilized on agarose. The influence of external mass
Influence of mass transfer
Ferreira, transfer was analysed using different stirring rates, ranging form 200 to 800 rpm. Above 400 rpm, the
limitations on the
Fernandez- film resistance may be neglected. Intraparticle diffusion limitation was investigated using biocatalysts
Bioprocess and enzymatic synthesis of β-
Lafuente, prepared with different enzyme loads and agarose with different mean pore diameters. When
BRASIL Biosystems lactam antibiotics
Guisan, & agarose with 6, 8 and 10% of crosslinking were used, for the same enzyme load, substrates and
Engineering catalyzed by penicillin G
Giordano, products concentration profiles presented no expressive differences, suggesting pore diameter is not
acylase immobilized on
2008) important parameter. An increase on enzyme load showed that when more than 90 IU of enzyme
glioxil-agarose
activity were used per mL of support, the system was influenced by intraparticle mass transfer. A
reactive-diffusive model was used to estimate effective diffusivities of substrates and products.
Site-directed mutagenesis based on predicted modeled structure of pencillin G acylase from Bacillus
megaterium (BmPGA) was followed to increase its performance in the kinetically controlled synthesis
of cephalexin with high reactant concentrations of 133 mM 7-amino-desacetoxycephalosporanic acid
Increasing synthetic (7-ADCA) and 267 mM D-phenylglycine amide (D-PGA). We directed changes in amino acid residues
Applied
performance of penicillin G to positions close to the active site that were expected to affect the catalytic performance of penicillin
Microbiology
(Wang, et al., CHINA acylase from Bacillus acylase: alpha Y144, alpha F145, and beta V24. Alpha F145 was mutated into tyrosine, alanine, and
and
2007) megaterium by site- leucine. Alpha Y144 and beta V24 were mutated into arginine and phenylalanine, respectively. The
Biotechnology
directed mutagenesis S/H ratios of three mutants, BmPGAα144R, BmPGAβ24F, and BmPGAβ24F+α144R, were up to
1.3–3.0 times higher values. Compared to the wild-type BmPGA, BmPGAβ24F+α144R showed
superior potential of the synthetic performance, allowing the accumulation of up to twofold more
cephalexin at significantly higher conversion rates
With the aim of improving the stability of penicillin G acylase (PGA), functional ionic liquids (ILs) were
used to modify the surface chemistry of the supports on which they were physically adsorbed. Four
kinds of ILs-specifically, 1-methyl-3-(triethoxysilylpropyl)-imidazolium salts, with Cl -, BF 4 -, PF 6 -,
and Tf 2N - as the anions (IL-Cl -, BF 4 -, PF 6 -, and Tf 2N -, respectively)-were used to tune the
hydrophilic or hydrophobic properties of the ILs. The synthesized ILs were first immobilized on
Improving the stability of magnetic silica nanoparticles (Fe 3O 4/SiO 2), and the composite material (Fe 3O 4/SiO 2-IL) was
Industrial and
immobilized penicillin G then applied to immobilize PGA via physical adsorption. The amount of protein loading, the specific
Engineering
CHINA acylase via the activity, the immobilization yield, and the stability of immobilized PGA were investigated to evaluate
(H. Zhou et al., Chemistry
modification of supports the effects of the ILs on the PGA immobilization. The results showed that PGA immobilized on Fe 3O
2012) Research
with ionic liquids 4/SiO 2-ILs was more stable than that immobilized on Fe 3O 4/SiO 2 with no IL modification. Among
the four kinds of ILs tested, the hydrophilic ILs (IL-Cl -, and IL-BF 4 -) were superior to the
hydrophobic ones (IL-PF 6 -, and IL-Tf 2N -) for PGA immobilization. The reusability of the
immobilized PGA on Fe 3O 4/SiO 2-IL (BF 4 -) was evaluated; a high residual activity (70% of the
initial activity) was observed after 9 consecutive operation cycles under the experimental conditions.
This activity was 1.8 times higher than that of immobilized PGA on naked Fe 3O 4/SiO 2 (40%).
In this study, a recombinant strain Bacillus subtilis WB600 (pMA5) was used to produce Alcaligenes
faecalis penicillin G acylase (PGA). The PGA activity and overall PGA productivity were respectively
378 and 7.13 U/l h in a batch culture using a complex medium containing 25 g/l of soluble starch.
Production of Alcaligenes Fed-batch cultures indicated that glucose had a negative effect on the production of PGA. Starch is a
Enzyme and faecalis penicillin G good carbon source, but it could not be directly used as a feed due to high viscosity after heat
(M. Zhang et CHINA Microbial acylase in Bacillus subtilis sterilization. A feed was prepared by limited hydrolysis of starch with a small amount of α-amylase,
al., 2006) Technology WB600 (pMA5) fed with which greatly improved the fluidity with little formation of glucose. The production of PGA increased to
partially hydrolyzed starch 546 U/l by feeding of the partially hydrolyzed starch. When a mixture containing the partially
hydrolyzed starch and Tryptone was added by using a pH-stat strategy, the PGA activity reached
1960 U/l, over five-fold of that obtained in the batch culture, and the overall productivity reached 19.6
U/l h, which was more than two-fold of that in the batch culture
Heterologous production of Kluyvera citrophila penicillin G acyalse (KcPGA) was optimized in

Escherichia coli (E. coli). Several factors, including the effect of different medium and culture
performance were identified to be crucial for the enzyme overproduction. The KcPGA yield was
significantly and conveniently increased by more than 2.4-fold in TB medium compared to that in LB
Expression and
medium, which need inducing by isopropylthio-beta-d-galactoside (IPTG). The results shown the
overproduction of
Enzyme and lower temperature (28°C) was more feasible for the overproduction of KcPGA compared to the higher
recombinant penicillin G
CHINA Microbial temperature (37°C). The highest enzyme activity was obtained at 28°C in TB medium only when
(Wen, et al., acylase from Kluyvera
Technology culture pH was closed to its original pH value and the basic condition was more optimal for the
2005) citrophila in Escherichia
production of KcPGA than that of acidic condition. On the other hand, the higher temperature (37°C)
coli
culture condition resulted in poor enzyme activity although the optimum growth temperature for most
of the E. coli strains is approximately 37°C. It was possible due to the limitation by translation or
posttranslational steps of the heterologous production of KcPGA in E. coli. The results suggest that
culture temperature and pH should be precisely controlled for overproduction of KcPGA in E. coli.
101
Anexos
Anexo L: (Continuación)

TÍTULO DE LA
INVESTIGACIÓN
Penicillin acylases are involved chiefly in the industrial production of semisynthetic penicillins, which
remain the most widely used group of antibiotics. We have isolated a new bacterial strain
ATUAVP1846 that produces penicillin Vacylase (PVA). Phylogenetic analysis using 16S rRNA
(Vellore Characterization of a new sequencing showed 99.37% homology with Bacillus cereus. Maximum PVA production was observed
Sunder, Kumar, Bacillus cereus with B. cereus ATUAVP1846 at 30°C, pH 7 after 24 h fermentation time under submerged conditions.
Naik, & Pundle,
Annals of ATUAVP1846 strain Highest enzyme productivity was achieved using sucrose as carbon source, and tryptone and
2012) INDIA
Microbiology producing penicillin V ammonium hydrogen phosphate as nitrogen sources. Minimal medium containing 0.4% glucose and
acylase, and optimization 0.3% ammonium hydrogen phosphate was found to be optimal for maximum PVA production from B.
of fermentation parameters cereus ATUAVP1846. The crude enzyme from B. cereus ATUAVP1846 was partially purified using
ammonium sulfate fractionation and showed highest enzymatic activity in the hydrolysis of penicillin
Vat 40°C and pH 6. The crude enzyme preparation also showed unique substrate specificity,
preferring ampicillin and cephalexin over penicillin V.
Penicillin G acylase (PGA; EC 3.5.1.11) is a hydrolytic enzyme that acts on the side chains of
penicillin G, cephalosporin G and related antibiotics to produce the β-lactam antibiotic intermediates
6-amino penicillanic acid (6-APA) and 7-amino des-acetoxy cephalosporanic acid (7-ADCA), with
phenyl acetic acid (PAA) as a common by-product. These antibiotic intermediates are among the
potential building blocks of semi-synthetic antibiotics, such as ampicillin, amoxicillin, cloxacillin,
cephalexin, and cefatoxime. Currently, β-lactam antibiotics have annual sales of ∼$15 billion and
make up 65% of the total antibiotics market; the annual consumption of PGA is estimated to be in the
Enzyme and The realm of penicillin G
range of 10-30 million tons. The high demand for PGA is being met through a submerged
(Chandel, et INDIA Microbial acylase in β-lactam
fermentation process that uses genetically manipulated Escherichia coli and Bacillus megaterium
al., 2008) Technology antibiotics
microorganisms. Advancements in biotechnology such as screening of microorganisms, manipulation
of novel PGA-encoding traits, site-specific mutagenesis, immobilization techniques, and modifications
to the fermentation process could enhance the production of PGA. Commercially, cheaper sources of
carbohydrates and modified fermentation conditions could lead to more cost-effective production of
PGA. These methodologies would open new markets and create new applications of PGA. This
article describes the advancements made in PGA biotechnology and advocates its simulation for
production of β-lactam antibiotics
The production of extracellular and mycelia-associated PGA (maPGA) with Mucor griseocyanus
H/55.1.1 by surface-adhesion fermentation using Opuntia imbricata, a cactus, as a natural
immobilization support was studied. Enzyme activity to form 6-APA from PGA was assayed
spectrophotometrically. The penicillin G hydrolysis to 6-APA was evaluated at six different times
using PGA samples recovered from the skim milk medium at five different incubation times.
A Process to Produce
(Martínez- Additionally, the effect of varying the penicillin G substrate concentration level on the PGA enzyme
Penicillin G Acylase by
Hernández, activity was also studied. The maximum reaction rate, Vmax, and the Michaelis constant, Km, were
Applied Surface-Adhesion
Mata-Gómez, determined using the Michaelis–Menten model. The maximum levels for maPGA and extracellular
MEXICO Biochemistry Fermentation Using Mucor
Aguilar- activity were found to be 2,126.50 international unit per liter (IU/l; equal to 997.83 IU/g of support) at
Biotechnology griseocyanus to Obtain 6-
González, & 48 h and 755.33 IU/l at 60 h, respectively. Kinetics of biomass production for total biomass showed a
Aminopenicillanic Acid by
Ilyina, 2010) maximum growth at 60 h of 3.36 and 2.55 g/l (equal to 0.012 g of biomass per gram of support) for
Penicillin G Hydrolysis
the immobilized M. griseocyanus biomass. The maPGA was employed for the hydrolysis of penicillin
G to obtain 6-APA in a batch reactor. The highest quantity of 6-APA obtained was 226.16 mg/l after
40-min reaction. The effect of substrate concentration on maPGA activity was evaluated at different
concentrations of penicillin G (0–10 mM). Km and Vmax were determined to be 3.0×10−3 M and
4.4×10−3 mM/min, respectively
Significant advances have been made in the structure-based engineering of enzymes useful for β-
lactam antibiotic production. Structure-based engineering of penicillin G acylase and cephalosporin
Three-dimensional
acylase has resulted in improved enzymes for use in enzymatic production processes. The structures
(Barends, et PAISES structures of enzymes
Current Opinion of many other enzymes that could be used in the production of β-lactam antibiotics, such as enzymes
al., 2004) BAJOS useful for b-lactam
in Biotechnology from the β-lactam biosynthetic pathway and β-lactam antibiotic-converting enzymes, have been
antibiotic production
determined. The interest in these structures suggests that the future may see an even more
extensive use of rationally engineered biocatalysts in antibiotic production than today
Biocatalysis presents a sound alternative to chemical synthesis in the field of drug production, given
the highly selective nature of biological catalysts. Penicillin G Acylase (PGA) from E. coli is currently
used to hydrolyze penicillin G (PG) and catalyzes the synthesis of β-lactam antibiotics. In this work,
particular emphasis is given to recent developments in penicillin G acylase immobilization, by
Optimization in the entrapment simultaneously with nano-magnetic particles in a silica matrix. The sol–gel biocatalytic
Journal of Sol- immobilization of penicillin particles were prepared either by a conventional method (crushed powder) or by a more recent
PORTUGAL Gel Science and G acylase by entrapment in approach, based in an emulsion system using 150 mM AOT/isooctane, which allowed for the
(Bernardino, et Technology xerogel particles with formation of spherical micro- and nanobeads. The effects on PGA activity of different sol–gel
al., 2011) magnetic properties precursors, additives, enzyme concentration, aging, drying conditions and mechanical stability were
evaluated. After these optimization studies, a mechanically stable carrier based on porous xerogels
silica matrixes, starting from tetramethoxysilane (TMOS) with 65–67% PGA activity yield in these
carriers allowed an immobilization yield of 74 mg protein g dry sol–gel −1 and 930 Ug dry sol–gel −1
for specific activity were obtained.
Studies on the partition and purification of penicillin acylase from Escherichia coli osmotic shock
extract were performed in poly(ethylene glycol)-sodium citrate systems. Partition coefficient behavior
of the enzyme and total protein are similar to those described in other reports, increasing with pH and
Partial purification of
Journal of tie line length and decreasing with PEG molecular weight. However, some selectivity could be
penicillin acylase from
Chromatography attained with PEG 1000 systems and long tie line at pH 6.9. Under these conditions 2.6-fold
Escherichia coli in
(Marcos, et al., PORTUGAL B: Biomedical purification with 83% yield were achieved. Influence of pH on partition shows that is the composition
poly(ethylene glycol)-
1999) Sciences and of the system and not the net charge of the enzyme that determines the behaviour in these
sodium citrate aqueous
Applications conditions. Addition of NaCl to PEG 3350 systems significantly increases the partition of the enzyme.
two-phase systems
Although protein partition also increased, purification conditions were possible with 1.5 M NaCl where
5.7-fold purification and 85% yield was obtained. This was possible due to the higher hydrophobicity
of the enzyme compared to that of most contaminants proteins.
102
Anexos

TÍTULO DE LA
INVESTIGACIÓN
A novel penicillin G acylase from the bacterial strain Achromobacter sp. CCM 4824 was
characterized. The specific activity of purified enzyme was 27.6Umg-1 protein (6-nitro-3-
phenylacetylamidobenzoic acid, NIPAB as the substrate). The enzyme consists of two dissimilar
subunits α and β with a molecular mass of 27.0 and 62.4kDa, respectively. The isoelectric point was
about pH 8.8. The N-terminal amino acid sequence of β subunit (SNMWIVGRDHAKDARSILLN) and
(Skrob, et al., Enzyme and Novel penicillin G acylase
REPUBLICA internal amino acid sequence of α subunit (YGYGYAVAQDRLFQMEMAR) exhibited a significant
2003) Microbial from Achromobacter sp.
CHECA similarity with penicillin G acylases. The Km values for penicillin G and NIPAB were 1.9±0.1 and
Technology CCM 4824
4.5±0.2μM, respectively. The turnover rates kcat for penicillin G and NIPAB were 29±1 and 19±1s-1,
respectively. The maximal hydrolytic activity of the enzyme was found at pH 7.5 and temperature of
60°C. In contrast to the published substrate specificities of penicillin G acylases, the enzyme
exhibited an almost two-fold hydrolytic activity with ampicillin, amoxicillin and cephalexin compared to
penicillin G.
Nucleophile reactivity of two most known nuclei of penicillins and cephalosporins, 6-aminopenicillanic
(6-APA) and 7-aminodesacetoxycephalosporanic (7-ADCA) acids, was quantitatively characterized.
In penicillin acylase (PA)-catalyzed acyl transfer reactions the relative reactivity of the added
nucleophile compared to the water (i.e. nucleophile reactivity) is defined by two complex kinetic
Quantitative
(Youshko, Biochimica et parameters β0 and γ, and depends on the nucleophile concentration. In turn, parameters β0 and γ
characterization of the
Chilov, Biophysica Acta were shown to be dependent on the structure of both reactants involved: nucleophile and acyl donor.
nucleophile reactivity in
Shcherbakova, RUSSIA (BBA) - Analysis of the kinetic scheme revealed that nucleophile reactivity is one of a few key parameters
penicillin acylase-
& Švedas, Proteínas y controlling efficiency of PA-catalyzed acyl transfer to the added nucleophile in an aqueous medium.
catalyzed acyl transfer
2002) Proteómica Computation of the maximum nucleophile conversion to the product using determined nucleophile
reactions.
reactivity parameters in the synthesis of three different antibiotics, ampicillin, amoxicillin and
cephalexin, showed good correlation with the results of corresponding synthetic experiments.
Suggested approach can be extended to the quantitative description and optimization of PA-
catalyzed acyl transfer reactions in a wide range of experimental conditions.
The purpose of this work was to characterize the enzyme penicillin G acylase (PGA) produced by
Bacillus megaterium. Purification of the enzyme by ultra/diafiltration did not allow the detection of the
PGA band by SDSPAGE electrophoresis due to the high content of remaining proteins. However,
using the DNA of the microorganism, it was possible to replicate the genes of the two B. megaterium
BRAZILIAN Characterization of the
PGA reported in literature, showing that the enzyme consisted of two sub-units, having 245 and 537
(Souza, et al., ARCHIVES OF Penicillin G Acylase from
BRASIL amino acids each and an average molecular mass of 26950 and 59070 Da, respectively. The
2005) BIOLOGY AND Bacillus megaterium ATCC
parameters studied were: 1) the influence of temperature in the 25-60 °C range, 2) pH in the 5-10
TECHNOLOGY 14945
range and 3) substrate concentration, this was tested to obtain results on the Penicillin G hydrolysis
reaction rate, using the initial velocities approach. The maximum hydrolysis rate was obtained at
37ºC and pH 8.0. The Michaelis-Menten model fitted well, resulting in estimated Km and Vmax
parameters values of 1.83 mM and 0.165*10-3 mmol/min/UI, respectively
Background: During the last years B. megaterium was continuously developed as production host for
the secretion of proteins into the growth medium. Here, recombinant production and export of B.
megaterium ATCC14945 penicillin G amidase (PGA) which is used in the reverse synthesis of β-
lactam antibiotics were systematically improved.
Results: For this purpose, the PGA leader peptide was replaced by the B. megaterium LipA
High yield recombinant
counterpart. A production strain deficient in the extracellular protease NprM and in xylose utilization
penicillin G amidase
(Yang, et al., Microbial Cell to prevent gene inducer deprivation was constructed and employed. A buffered mineral medium
ALEMANIA production and export into
2006) Factories containing calcium ions and defined amino acid supplements for optimal PGA production was
the growth medium using
developed in microscale cultivations and scaled up to a 2 Liter bioreactor. Productivities of up to 40
Bacillus megaterium
mg PGA per L growth medium were reached.
Conclusion: The combination of genetic and medium optimization led to an overall 7-fold
improvement of PGA production and export in B. megaterium. The exclusion of certain amino acids
from the minimal medium led for the first time to higher volumetric PGA activities than obtained for
complex medium cultivations.
The penicillin G amidase (PGA) activity of a parent strain of E. coli (PCSIR-102) was enhanced by
chemical mutagenization with N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG). After screening and
optimization, a penicillinase deficient mutant (MNNG-37) was isolated and found effective for the
production of penicillin G amidase as compared to the parent strain of E. coli (PCSIR-102). Penicillin
Development and
World Journal of G amidase activity of MNNG-37 appeared during an early stage of growth, whereas PCSIR-102 did
characterization of a
(Quratulain, et PAISES Microbiology not exhibit PGA activity due to the presence of penicillinase enzyme which inhibits the activity of
potent producer of
al., 2006) BAJOS and enzyme PGA. However, MNNG-37 gave a three-fold increase in enzyme activity (231 IU mg−1) as
penicillin G amidase by
Biotechnology compared to PCSIR-102 (77 IU mg−1) in medium containing 0.15 and 0.1% concentrations of
mutagenization
phenylacetic acid, respectively which was added after 6 h of cultivation. The difference in K m values
of the enzyme produced by parent strain PCSIR-102 (0.26 mM) and mutant strain MNNG-37 (0.20
mM) is significant (1.3-fold increase in K m value) which may show the superiority of the latter in
terms of better enzyme properties.
Whereas the β-lactam acylases are traditionally used for the hydrolytic processing of penicillin G and
cephalosporin C, new and mutated acylases can be used for the hydrolysis of alternative
fermentation products as well as for the synthesis of semisynthetic β-lactam antibiotics. Three-
Improved β-lactam
(Sio & Quax, PAISES Current Opinion dimensional structural analyses and site-directed mutagenesis studies have increased the
acylases and their use as
2004) BAJOS in Biotechnology understanding of the catalytic mechanism of these enzymes. The yield of hydrolysis and synthesis
industrial biocatalysts
has been greatly improved by process design, including immobilization of the enzyme and the use of
alternative reaction media. Significant advances have also been made in the resolution of racemic
mixtures by means of stereoselective acylation/hydrolysis using β-lactam acylases.
Aims: Optimization of 6-aminopenicillanic acid (6-APA) production using cross-linked enzyme
aggregates (CLEA) of Bacillus badius penicillin G acylase (PAC). Methods and Results: CLEA–PAC
was prepared using purified/partially purified PAC with phenylacetic acid as active-site blocking agent
Application of cross-linked
and glutaraldehyde as cross-linker. Conversion of penicillin G to 6-APA by CLEA–PAC was optimized
enzyme aggregates of
(Rajendhran & Letters in using response surface methodology (RSM) (central composite rotatable design) consisting of a
Bacillus badius penicillin G
Gunasekaran, INDIA Applied three-factor–two-level pattern with 20 experimental runs.
acylase for the production
2007) Microbiology Conclusion: Nearly, 80% of immobilization yield was obtained when partially purified enzyme was
of 6-aminopenicillanic
used for the preparation of CLEA–PAC. Quantitative conversion of penicillin G to 6-APA was
acid.
observed within 60 min and the CLEA–PAC was reusable for 20 repeated cycles with 100% retention
of enzyme activity. Significance and Impact of the Study: The faster conversion of penicillin G to 6-
APA by CLEA–PAC and efficient reusability holds a strong potential for the industrial application.
103
Anexos

TÍTULO DE LA
INVESTIGACIÓN
The production of penicillin G acylase (PGA, an important industrial enzyme) from a wild strain of
Using a medium of free Bacillus megaterium using a pool of free amino acids as substrate was studied in a bench-scale
amino acids to produce bioreactor. Experiments carried out in shakers showed that the substitution of casein for free amino
(R. G. Silva, et Brazilian Journal
penicillin G acylase in fed acids in the presence of cheese whey was the culture medium that provided the highest productivity.
al., 2006) BRASIL of Chemical
batch cultivations of Several cultivations were carried out in a bioreactor operated in either batch or fed-batch mode.
Engineering
Bacillus megaterium ATCC Batch runs showed that enzyme production is associated with microorganism growth. The following
14945 set of amino acids was preferentially consumed: Ala, Arg, Asp, Gly, Lys, Ser, Thr and Trp. On the
other hand, the rates of consumption of His, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Tyr and Val were lower.
Different carbon sources were investigated for overproduction penicillin G acylase from Alcaligenes
faecalis in recombinant Escherichia coli strains. The results indicated that the enzyme was optimally
High-level production
produced with 45 g/l of dextrin, and about 43,385 and 79,880 U/l for the highest enzyme activities
penicillin G acylase from
Enzyme and were obtained in batch cultivations of shaken flasks and a 3.7 l bioreactor, respectively. Active site
(Cheng, Song, Alcaligenes faecalis in
CHINA Microbial titration and SDS-PAGE electrophoretic analysis demonstrated that the maximum yield of the active
Wei, & Gao, recombinant Escherichia
Technology enzyme was 2.54 g/l, which was about 40% of total soluble proteins. The highest specific activity of
2007) coli with optimization of
A. faecalis penicillin G acylase obtained was above 10 U/mg protein, and there was almost no
carbon sources
plasmid lost in the whole batch cultivations. Furthermore, the cultivation process was relatively simple
and suitable for large-scale production.
In this study, the bifunctional membrane (epoxy and immobilized copper ion) was constructed to
study the effect on penicillin G acylase (PGA) purification and immobilization. In the procedures, PGA
was firstly chelated with the immobilized copper on the membrane at 18 °C, for 12 h. Then, it was
covalently bound to the membrane via epoxy group under the incubation conditions (i.e., pH 10.0, 18
°C, 76 h). In the construction of bifunctional membrane, iminodiacetic acid disodium (IDA)
Simultaneous purification concentration critically affected the bifunctional group ratio in the membrane. When IDA
Journal of
(C.-I. Chen, and immobilization of concentration was higher than 0.500 M, the chelated copper ion in membrane reached its a
CHINA Membrane
Chen, Huang, & penicillin G acylase using saturation of 52.2 μmol/disc. Meanwhile, when IDA concentration was 0.050 M, the chelated copper
Science
Liu, 2007) bifunctional membrane ion would reach 29.9 μmol/disc, nearly 58% of its saturation. The membrane prepared by 0.05 M IDA
was employed to simultaneously purify and immobilize PGA. The resulting PGA membrane was
stable even when the chelated copper ion was eluted with ethylenediaminetetraacetic acid disodium
salt dehydrate. It was noted that 96.3% of the PGA activity could be retained under 26 times’
reactions within more than 2 months. With this stable property, this immobilization approach could be
further developed and applied for industrial processes.
The surface carboxylic groups of penicillin G acylase and glutaryl acylase were chemically aminated
in a controlled way by reaction with ethylenediamine via the 1-ethyl-3-(dimethylamino-propyl)
carbodiimide coupling method. Then, both proteins were immobilized on glyoxyl agarose. In both
cases, the immobilization of the chemically modified enzymes improved the enzyme stability
Improved stabilization of
(López-Gallego compared to the stability of the immobilized but non-modified enzyme (by a four-fold factor in the
chemically aminated
et al., 2005) Journal of case of PGA and a 20-fold factor in the case of GA). The chemical modification presented a
ESPAÑA enzymes via multipoint
Biotechnology deleterious effect on soluble enzyme stability. Therefore, the improved stability should be related to a
covalent attachment on
higher multipoint covalent attachment, involving both the lysine amino groups and also the new
glyoxyl supports
amino groups chemically introduced on the enzyme. Moreover, the lower pKa of the new amino
groups permitted to immobilize the enzyme under milder conditions. In fact, the aminated proteins
could be immobilized even at pH 9, while the non-modified enzymes could only be immobilized at pH
over 10.
We have previously shown that a single-subunit thermosome from Methanocaldococcus jannaschii
(rTHS) can stabilize enzymes in semi-aqueous media. In the present study, rTHS was used to
stabilize penicillin amidase (PGA) in methanol–water mixtures. Including methanol in the reaction
medium for amoxicillin synthesis can suppress unwanted hydrolysis reactions but inactivate PGA.
Redirecting the Inactivation and reactivation pathways proposed for PGA illustrate the predictability of enzyme
inactivation pathway of stabilization by rTHS in co-solvents. Calcium was necessary for reversible dissociation of the two
(Bergeron, et Biotechnology penicillin amidase and PGA subunits in methanol–water and the presence of calcium resulted in an enhancement of
al., 2009) EEUU and increasing amoxicillin chaperone-assisted stabilization. rTHS also acted as a stabilizer in the enzymatic synthesis of the β-
Bioengineering production via a lactam antibiotic amoxicillin. rTHS stabilized PGA, increasing its half-life in 35% methanol by fivefold
thermophilic molecular at 37°C. Stabilization by rTHS was enhanced but did not require the presence of ATP. Including rTHS
chaperone in fed-batch reactions performed in methanol–water resulted in nearly 4 times more amoxicillin than
when the reaction was run without rTHS, and over threefold higher selectivity towards amoxicillin
synthesis compared to aqueous conditions without rTHS. The thermosome and other thermophilic
chaperones may thus be generally useful for stabilizing enzymes in their soluble form and expanding
the range of conditions suitable for biocatalysis.
104
Anexos
M. Anexo: Compañías colombianas que

comercializan el principio activo amoxicilina
en sus diferentes formas farmacéuticas
Fuente: (Carrasco, 2012)
PRODUCTO LABORATORIO
AMOTAL ICOFARMA
AMOTEX IFSA
AMOXAL GLAXOSMITHKLINE
BAYER SCHERING
AMOXIBAY PHARMA
AMOXICILINA AMERICAN GENERICS
AMOXICILINA ANGLOPHARMA
AMOXICILINA A-Z PHARMA
AMOXICILINA BCN BCN MEDICAL
AMOXICILINA BEST
AMOXICILINA BIOQUIMICO PHARMA

AMOXICILINA CARLON
AMOXICILINA COLGENERICOS
AMOXICILINA DIZMOFAR
AMOXICILINA COASPHARMA
AMOXICILINA GENFAR
AMOXICILINA LAFRANCOL
AMOXICILINA LA SANTÉ
MEDALCO
AMOXICILINA FARMACEUTICA
AMOXICILINA MEDICALEX
AMOXICILINA MEMPHIS
AMOXICILINA MK MK
AMOXICILINA OPHALAC
AMOXICILINA PENTACOOP
AMOXICILINA PROCAPS
AMOXICILINA RECIPE
AMOXICILINA SYNTHESIS
AMOXICILINA WIN WINTHROP
AMOXICILINA + VITALIS
A. CLAVULANICO
AMOXIDAL DUO ROEMMERS
AMOXIGA GALENO QUIMICA
AMOXIL JUNIOR GLAXOSMITHKLINE
105 Anexos
N. Anexo: productos farmacéuticos desarrollados y radicados ante el

INVIMA con base en la amoxicilina
Fuente:(Turismo, 2002-2012), bases de datos UN de acuerdo a los documentos citados en la bibliografía, evaluados desde Ene. 1990 a
Sep.2012
FORMA
PRODUCTO LABORATORIO AÑO COMPOSICIÓN INDICACIONES
FARMACÉUTICA
Cada 25mg de polvo para reconstituir a 100mL contiene

GlaxoSmithKline Infecciones producidas por gérmenes productores de betalactamasa, en las cuales la
Clavulin Junior 12H 2006 Polvo para suspensión oral amoxicilina trihidrato equivalente a amoxicilina base 5gr y
Corporation USA amoxicilina o la ampicilina es el medicamento de elección.
clavulonato de potasio equivalente a ácido clavulónico
1,25g.
Cada vial contiene 500mg de amoxicilina sódica
GlaxoSmithKline
Clavulin 600mg 2006 Polvo estéril para inyección equivalente a amoxicilina clavulonato de potasio
Corporation USA
equivalente a ácido clavulónico 100mg. Tratamiento a corto plazo de infecciones bacterianas en vías respiratorias altas, vías
respiratorias bajas, vías urinarias, piel y tejido blando, infecciones óseas y articulares
GlaxoSmithKline 1 g de amoxicilina como amoxicilina base y 200mg de
Clavulin 1200mg Iny. 2006 Polvo estéril para inyección
Corporation USA ácido clavulónico como clavulonato de potasio.
Cada 25g de polvo para reconstituir a 100mL contiene 5g
GlaxoSmithKline Infecciones producidas por gérmenes productores de Betalactamasa, en las cuales la
Clavulin 250mg 2005 Polvo para suspensión oral amoxicilina más clavulanato de potasio equivalente a
Corporation USA amoxicilina o la ampicilina es el medicamento de elección.
1.25g de ácido clavulánico.
Cada 16,673g de polvo para reconstituir a 100mL de
Smithkline Beecham suspensión oral contienen amoxicilina trihidratada Otitis media recurrente o refractaria causada por Streptococcus pneumoniae,
Clavulin ES 600 2005 Polvo para suspensión oral
P.L.C. equivalente a 12g de amoxicilina más clavulanato de Haemophilus influenzae y Moraxella catarrhalis
potasio equivalente a 0,858g de ácido clavulánico.
Cada Tableta contiene amoxicilina trihidratada
GlaxoSmithKline
Clavulin 1g 2006 Tabletas recubiertas equivalente a 875mg de amoxicilina mas clavulanato de
Colombia S. A.
potasio equivalente a 125mg de ácido clavulanico Infecciones producidas por germenes productores de betalactamasas, en las cuales la
amoxicilina o la ampicilina son los medicamentos de eleccion
Cada tableta recubierta contiene amoxicilina trihidrato
GlaxoSmithKline
Clavulan Tab 2005 Tabletas recubiertas equivalente a 500mg de amoxicilina más clavulanato de
Colombia S. A.
potasio equivalente a 125mg de ácido clavulánico
GlaxoSmithKline Cada tableta contiene amoxicilina trihidratada equivalente
Amoxal BD Tab x 875mg 2006 Tableta
Corporation USA a 875mg de amoxicilina base
Infecciones producidas por gérmenes sensibles a la amoxicilina
GlaxoSmithKline
Amoxal Tab x 1g 2006 Tableta Cada tableta contiene amoxicilina trihidrato equivalente a
Corporation USA
amoxicilina base 1g
Infecciones agudas y crónicas de vías respiratorias superiores, vías respiratorias
inferiores, gastrointestinales, genitourinarias, piel y tejidos blandos, vías biliares, pélvicas
GlaxoSmithKline Cada 100mL de suspensión reconstituida contiene:
Amoxal 12H 2006 Polvo para suspensión oral y en gonorrea, meningitis, infecciones dentales. Infecciones causadas por Streptococcus
Corporation USA amoxicilina trihidrato equivalente a amoxicilina base 8g.
pneumoniae resistente a la penicilina y ampicilina. Coadyuvante en la erradicación del
helicobacter pylori.
GlaxoSmithKline
Amoxil 700mg/5mL 2006 Polvo para suspensión oral Cada frasco con polvo para reconstituir a 5mL contiene
Colombia S. A.
700mg de amoxicilina trihidrato equivalente a amoxicilina. Infecciones producidas por gérmenes sensibles a la amoxicilina
Novartis de Colombia Polvo liofilizado para reconstituir Cada vial contiene 1g de amoxicilina sodica más 200mg Tratamiento a corto plazo de infecciones bacterianas en vías respiratorias altas y bajas,
Curam 1000mg IV 2007
S.A. a solución inyectable de clavulanato potásico vías urinarias, piel y tejido blando, infecciones óseas y articulares.
106 Anexos
FORMA
PRODUCTO LABORATORIO AÑO COMPOSICIÓN INDICACIONES
FARMACÉUTICA
Cada 100mL de solución contiene 125mg de

clavulonato de potasio equivalente a ácido
Polvo para suspensión oral
clavulónico más 0.5mg de amoxicilina Para el tratamiento de las infecciones bacterianas donde la terapia oral está indicada: Infecciones de las vías
trihidrato equivalente a amoxicilina base respiratorias superiores y ORL: Sinusitis, tonsilitis y otitis media, Infecciones del tracto respiratorio inferior:
Cada 100mL de suspensión contiene 625mg Bronquitis aguda y crónica, neumonía y absceso pulmonar, Infecciones de piel y tejido blando: Celulitis,
Novartis de Colombia de clavulonato potásico equivalente a ácido heridas infectadas y mordeduras, Infecciones del tracto urinario: Cistitis, uretritis, pielonefritis, infección pélvica,
Curam 2006 Polvo para suspensión oral
S.A. clavulónico más 2500mg de amoxicilina entre otras, Otras infecciones: Osteomielitis, septicemia, peritonitis e infecciones posoperatorias.
trihidrato equivalente a amoxicilina base.
Cada tableta contiene 500mg de amoxicilina
trihidrato equivalente a amoxicilina base más
Tabletas recubiertas
125mg de clavulónato potásico equivalente a
ácido clavulónico
Amoxicilina 500mg
Novartis de Colombia
+ ácido 2010 Tabletas recubiertas 1 tableta contiene 500 mg de amoxicilina y
S.A.
clavulánico 125mg 125 mg de ácido clavulánico. Infecciones de los senos nasales, del oído, del pecho como: bronquitis y neumonía, de la vejiga y riñones, de
Amoxicilina 250mg la piel y capas subcutáneas
+ ácido Novartis de Colombia amoxicilina 250 mg + ácido clavulánico 62.5
2010 Polvo para suspensión oral
clavulánico 62,5mg S.A. mg/ 5 mL
/ 5mL
Cada 5mL de solución contiene amoxicilina
Laboratorios Bagó de sódica equivalente a 500mg de amoxicilina Tratamiento de infecciones causadas por microorganismos resistentes a monoterapia con antibacterianos
Trifamox IBL 750 2006 Polvo estéril para inyección
Colombia Ltda más sulbactam sódico equivalente a 250mg betalactámicos y cefalosporínicos debido a su capacidad de producción de betalactamasas
de sulbactam
Cada 5mL de solución contiene amoxicilina

Laboratorios Bagó de sódica equivalente a 1000mg de amoxicilina Infecciones de vias respiratorias altas y bajas, otorrinolaringológicas (sinusitis, otitis), de las vias urinarias,
Trifamox IBL 1500 2006 Polvo estéril para inyección
Colombia Ltda más sulbactam sódico equivalente a 500mg ginecologicas y obstetricas, de piel y tejidos blandos y del tracto digestivo.
de sulbactam
Trifamox IBL Laboratorios Bagó de amoxicilina trihidrato equivalente a amoxicilina Amoxicilina más sulbactam es una asociación que conjuga un antibiótico bactericida con un inhibidor de las
2005 Tabletas
DUO Comprimidos Colombia Ltda 875 mg y Sulbactam 125 mg. betalactamasas. La elección de amoxicilina mas sulbactam debe basarse en datos de sensibilidad bacteriana.
Quimicos Farmaceuticos Cada tableta contiene a 875mg de amoxicilina Agente antibiótico con un espectro de actividad notablemente amplio contra los patogenos bacterianos que
Koact 1000 2006 Tabletas
Abogados Ltda y 125mg de ácido clavulánico aparecen comúnmente en la práctica general y hospitalaria
107 Bibliografía
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EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DEL ANTIBIÓTICO BETALACTÁMICO

AMOXICILINA COMO MATERIA PRIMA EN COLOMBIA, MEDIANTE

MIGUEL ANGEL GONZÁLEZ NAVARRETE

Universidad Nacional de Colombia

MIGUEL ANGEL GONZÁLEZ NAVARRETE

Tesis presentada como requisito parcial para optar al título de:

Magister en Ciencias Farmaceuticas

Ph. D en Biotecnología Sonia Amparo Ospina Sanchez

Universidad Nacional de Colombia

Miguel Angel González Navarrete

Quiero agradecer a la Dra Yenny M. Sánchez, Ph.D en Economía y Gestión de la

6-APA……….Ácido 6-amino penicilánico.

PHFGME……Éster metílico de la hidroxifenil glicina.

FCV………….Factor crítico de vigilancia.

PCV………….Pregunta clave de vigilancia.

SEAB………..Sintesis enzimática de antibióticos betalactámicos.

SEA………….Sintesis enzimática de amoxicilina.

SEAM………..Sintesis enzimática de ampicilina.

SEC………….Sintesis enzimática de cefalexina.

Palabras Clave: Amoxicillina, Antibiótico betalactámico, Ácido 6 aminopenicilánico,

Keywords: Amoxicillin, B-lactam antibiotic, 6 aminopenicillanic Acid, penicillin acylase

4.4.2. Etapa de búsqueda y captación ...................................................................... 23

4.4.3. Etapa de análisis y organización .................................................................... 23

4.4.4. Etapa de inteligencia........................................................................................ 23

4.4.5. Etapa de comunicación ................................................................................... 23

5.1.2. Construcción de la ficha de necesidades....................................................... 26

5.1.3. Etapa de búsqueda y captación ...................................................................... 26

5.1.4. Formulación de la ecuación de búsqueda...................................................... 27

5.1.5. Elaboración del corpus de información: ........................................................ 28

5.2. Etapa de análisis y organización: .......................................................................... 28

5.2.3. Distribución de la información estructurada en patentes ............................. 30

6.1. Publicaciones científicas ....................................................................................... 31

7.3.1.2. Modificaciones en el medio de reacción ..................................................... 45

7.3.1.3. Mejoramiento del sistema enzimático ......................................................... 47

7.3.2. Tendencias en investigación relacionadas con la síntesis enzimática de

7.3.4.2. Inmovilización de la enzima ......................................................................... 56

7.3.4.3. Tendencias en investigación relacionadas con la enzima (PA)

7.4. FCV – Análisis de mercado: Contexto nacional e internacional ............................ 58

7.2.5.2. Producto Terminado ..................................................................................... 70

7.2.5.3. Nuevos Desarrollos ...................................................................................... 73

7.3. FCV - Características de la materia prima ............................................................ 76

H. Anexo: Articulos más representativos sobre “sintesis enzimática de Cefalexina” .. 91

Figura 4 - 1: Ciclo de vigilancia tecnológica ........................................................................ 24

GRÁFICA 7 - 34 : Red asimétrica que relaciona país vs número de autores sobre

TABLA 2 - 1: Ventajas y desventajas de las estrategias para la sintesis enzimática de

El hecho de basar únicamente el proyecto en el antibiótico amoxicilina está fundamentado,

De acuerdo a lo anterior, el presente trabajo, además de pretender establecer una

complicados procesos de purificación y los volúmenes de desechos son menores,

medida a la disminución en el número de operaciones unitarias necesarias para la

TABLA 2 - 1: Ventajas y desventajas de las estrategias para la sintesis enzimática de

Análisis de la información encontrada

TABLA 2 - 2: Principales empresas/instituciones relacionadas con la investigación

3.1. Objetivo general

3.2. Objetivos específicos

4.3. Clases de vigilancia

4.4. Ciclo de vigilancia

4.4.1.Etapa de planeación e identificación de necesidades

4.4.2. Etapa de búsqueda y captación