Asignatura de Introduccin a la Nanotecnologa

Sntesis de nanocristales a partir de almidn de yuca por medio de

sonoqumica con pretratamiento de -amilasas (termamyl),
aplicadas a recubrimientos alimentarios de almidn termoplstico

Pieros, N. D1, Sierra, F. D2, Suarez, K. A3, Herrera, C4

Universidad Jorge Tadeo Lozano
Ingeniera
[email protected], [email protected], [email protected],
[email protected].

Abstract.

This Project pretends to optimize the mechanical properties of thermo-plastic starch, though the addition of starch
nanoparticles , to be used in the food coating industry. The nanoparticles synthesis will be possible using a
isoamylase pre- treatment in order to degrade the amorphous section of the starch in a short time; and using an
ecologic method. The sonochemical processing allows the formation of nanoparticles using high frecuency waves;
which due to the high temperatures and high pressures, depending on the size of the spot at these conditions it will
determine the size of the nanoparticle.

volmenes de produccin son excesivos, siendo talvez

Introduccin una de las mayores problemticas de contaminacin a
La necesidad de obtener nuevos materiales de fuentes nivel mundial, estas pueden ser reemplazadas por
renovables y de naturaleza biodegradable ha polmeros biodegradables como el PLA (cido poli
incrementado su auge en las ltimas dcadas, debido a lctico), TPS (almidn termoplstico), PVOH (alcohol
la necesidad de reemplazar compuestos txicos y poli vinlico), etc. [3].
contaminantes con bajos rendimientos de procesos
Las nanopartculas de almidn pueden ser divididas
industriales que generan una mayor demanda
esquemticamente en 2 tipos diferentes: aquellas que
conforme crecen las necesidades de la poblacin con
estn vinculadas con las propiedades semicristalinas
el transcurso del tiempo [1].
del almidn, como los nanocristales de almidn y
Los materiales a base de almidn son una buena aquellas vinculadas con la propiedad de gelatinizacin
alternativa para poder generar estos productos debido del almidn, las primeras son preparadas
a su gran variedad de especies y su alta produccin, principalmente por hidrlisis mientras que las
estos materiales al ser biodegradables y tener bajos segundas son preparadas por tratamiento qumico de
costos de produccin precisan ser una opcin muy solubilizacin o precipitacin o tratamiento mecnico
considerable para reemplazar algunos productos de [4].
procesos productivos a nivel industrial altamente
En el proceso de sonoqumica es usado un ultrasonido
contaminantes [2]. para dar lugar a una reaccin qumica, el ultrasonido
Como es el caso de las bolsas plsticas, estas tienen un extiende frecuencias en el rango de 15kHz a 1GHz, un
tiempo de degradacin de ms de 100 aos y los transductor piezoelctrico es usado para generar ondas
ultrasnicas con una longitud de onda de 1-10.00
micras en un recipiente de reaccin lleno de lquido De la tabla anterior podemos observar que el almidn
[5]. de yuca posee un alto grado de polimerizacin de
amilosa el cual nos permite establecer que se
A continuacin, se presenta el esquema general de
encuentra un mayor nmero de enlaces (1-4) a
obtencin de almidn de yuca a nivel industrial [6].
comparacin del maz lo cual hace ms competitivo y
del cual se esperaran un mayor rendimiento en la
obtencin de nanopartculas [6].

Figura 1.2 cadena ramificada de amilopectina [6]

Figura 1.1 proceso bsico para la obtencin de

almidn de yuca [6].
Figura 1.3cadena lineal de amilosa [6]
Proceso bsico para aislar un almidn de yuca Los
nmeros entre parntesis Representan el balance de Enzimas involucradas en el rompimiento de la
masa (toneladas / da) y el balance de cianuro (kg / da) estructura del almidn:
de una fbrica con la produccin de capacidad ~ 200 Hidrolizan enlaces (1 4) -D-glucosdicos
toneladas de almidn de tapioca / yuca por da. (amilasas)
(Modificado a partir de Sriroth et al 23 y Hidrolizan enlaces (1 6) -D-glucosdicos
Piyachomkwan et al 24) [6]. (isoamilasas)
Tabla 1.1 Propiedades de gelatinizacin de
almidones de diferentes orgenes botnicos [6].
En el presente proyecto se realizar una sntesis de
nanopartculas a partir de almidn de yuca empleando
la tcnica de sonoqumica con un pretratamiento con
-amilasas (termamyl) para realizar la hidrlisis de la
amilopectina para mejorar el rendimiento de sntesis de
nanopartculas y eliminar el uso de reactivos en la
sntesis como cido sulfrico y cido clorhdrico usado
en la sntesis de nanopartculas por precipitacin
qumica, para as lograr un producto biodegradable y
de produccin limpia, estas se adicionarn a una matriz
polimrica de TPS para mejorar propiedades
En la tabla anterior se presentan las propiedades de mecnicas para poder ser usado en la industria de
gelatinizacin de algunos tipos de almidn recubrimientos alimentarios .
informacin importante para el proceso productivo de
nanopartculas de almidn. Tcnicas de caracterizacin
A continuacin, se presenta una comparacin de la
composicin de amilosa y amilopectina en diferentes Caracterizacin cualitativa con lugol
especies de almidn.
Tabla 1.2 Contenido de amilosa y amilopectina en La prueba de yodo se da como consecuencia de la
diferentes fuentes naturales [6]. formacin de cadenas de poliyoduro a partir de la
reaccin entre el almidn y el yodo presente en el
reactivo de lugol[15].

La amilosa y la amilopectina son componentes del

almidn pero la amilosa es de estructura lineal, con
enlaces (1-4), que forma hlices en donde se juntan
Justificacin
La justificacin de este proyecto se basa en la necesidad
de crear nuevos materiales que provengan de fuentes
naturales, optimizar sus propiedades para as poder
remplazar los materiales derivados del petrleo que son
altamente contaminantes y su degradacin es bastante
lenta, dar diferentes aplicaciones en la industria, as
poder retirar componentes qumicos que son
perjudiciales para la salud y generar nuevos mtodos de
sntesis ms amigables con el medio ambiente [2].

REACCIN DE HIDRLISIS Figura 1.7 distribucin de la produccin de yuca

ENZIMTICA estimada al uso local en el mundo [8].

Figura 1.4 reaccin de hidrlisis del almidn [6].

Esta gran produccin de yuca permite que este proyecto

sea viable debido a que siempre se podr contar con
Figura 1.5 Hidrlisis del almidn materia prima disponible para poder reproducir el
proceso a nivel laboratorio y lograr escalarlo a nivel
Ya que nos encontramos en una zona altamente industrial debido a la alta demanda de empaques plsticos
privilegiada para la produccin de yuca en grandes para la industria alimentaria y otras reas que requieran
cantidades con ms de 500.000 toneladas producidas en de empaques [8].
el ao 2014 como lo reporta el DANE [9].

3 Estado del arte

El uso de enzimas en procesos biotecnolgicos ha venido
en auge en las ltimas dcadas, estas enzimas son
capaces de convertir las materias primas aadidas en el
proceso a productos de alto poder comercial. La amilasa
ha sido utilizada en modificacin hidroltica de almidn
creado a partir de diferentes tubrculos tales como trigo,
maz, soya, yuca, ame, entre otros. El uso de la yuca
como materia prima ha sido considerada ms que
aceptable debido a que solo en el Trapecio Amaznica se
encuentran treinta y ocho (38) variedades diferentes de
esta, logrando una obtencin sencilla y econmicamente
factible para los estudios hechos a travs de los aos [10].

En el ao 2008, se modific el almidn de yuca con

enzima -amilasa de Bacillus subtilis para la elaboracin
Figura 1.6 produccin de yuca en Colombia [9]. de salsas, para ello se aisl la enzima y se compar con
una enzima comercial aplicndolas en salsas tipo
Bechamel y Chutney evitando la aparicin de cogulos en
las respectivas salsas. Los procedimientos utilizados
comenzaron con una curva de calibracin por parte de
almidn, que permiti la cuantificacin de la misma para Separamos en 9 vasos precipitados de 100 ml
las dos enzimas, luego de esto, se realiz el mtodo del adicionando 50 mL de la suspensin preparada
cido 3,5- dinitrosaliclico (DNS) donde se muestran el anteriormente, despus de haber separado, dejamos
efecto de las enzimas en el almidn por medio de sus calentando y adicionamos en cada vaso precipitado
azcares reductores [11]. 1.5 mL de termamyl -amilasa y dejamos en la
plancha de calentamiento variando en tiempo de
En 2009, se utilizaron preparaciones solubles e insolubles pretratamiento de la enzima termamyl -amilasa en 5
de -amilasa de Aspergillus niger para la hidrlisis de min, 7 min y 10 min. Pasado el tiempo en el que actu
almidn de yuca, donde el objetivo de estos era lograr una la enzima, se desactiva la enzima con bajas
comparacin de efectos en la hidrlisis enzimtica del temperaturas en un bao de hielo durante 5 minutos
almidn en las formas ya mencionadas, para lograr lo [14].
anterior se optimizaron las condiciones de pH y
temperatura para lograr un cumplimiento en la funcin de Se le programo al ultrasonido unas condiciones de
esta enzima. Cabe destacar que la insolubilizacin se logr frecuencia de 24 kHz, se utiliz un sonotrodo H22 en
con la utilizacin de propanol como un agente precipitante el ultrasonido con un dimetro de 22mm, una
y como agente entrecruzante (agregados entrecruzados del amplitud de 50m y una densidad de poder acstico
-amilasa) glutaraldehido para obtener una rigidez de 85W/Cm2. El sonotrodo se sumergi en el
aceptable en la separacin de la enzima en la reaccin [12]. precipitado con agua destilada durante 5min con el fin
de dispersar las nano partculas que se encuentran en
Como tambin en ese mismo ao publicada en la Revista el precipitado con agua destilada este proceso se
Latinoamericana de Metalurgia y Materiales se tom el ejecut tres veces con las condiciones que se
tema de nanocompuestos biodegradables en matriz muestran en la tabla 1.3 [4].
polimrica de almidn utilizando como materia prima
mandioca y maz. Los nanocristales de almidn de maz
fueron obtenidos por hidrlisis acida de cido sulfrico con Tabla 1.3 Condiciones de operacin del ultrasonido.
36.725 g de almidn que reaccionaron con un cido de Prueba Amplitud Tiempo
concentracin 3.16 M a 40C, agitndola por cerca de 5 (m) (min)
das manejando constantemente un pH neutro. Al aadir la 1 50 5
suspensin de nanocristales y se cur en horno cerca a una 2 50 5
temperatura de 50C obtenindose films con un espesor
3 50 5
medio de 350m [12].
La aparicin de la nanotecnologa ha hecho que los puntos Anlisis de resultados
de vista de investigacin se centren en esta, ya que ha Las micrografas obtenidas en un microscopio ptico
aumentado las posibilidades para la obtencin de de imagen nos sirven de antemano para lo que
productos y aplicaciones innovadores [13]. Las diversas podremos observar en los espectros de tipo infrarrojo
alternativas ya mencionadas son investigaciones hechas y espectroscopia de barrido de electrones (SEM),
que diferentes materias primas, pero no hay ningn donde tambin se pud observar la caracterizacin
antecedente encontrado por nosotros en el que utilicen esta, hecha por el ensayo de lugol, las micrografas
que es de fcil acceso en muchos lugares de Latinoamrica obtenidas (ver anexo 1) se reportan en la siguiente
como es la yuca y su potencial en polmeros tabla:
biodegradables.
Tabla 1.4 Valores de magnificacin en microscopio
4 Materiales y Mtodos ptico de imagen para las sustancias utilizadas
Preparacin del buffer Sustancia Tiempo de Magnificacin
En un baln aforado de 50 mL adiciono 1.28g de mono
reaccin
fosfato de potasio, 3.9865 g de difosfato de potasio y con -
completamos con agua destilada hasta alcanzar un amilasa
volumen de 50 mL. (minutos)
Almidn de 5 10x, 40x
Preparacin de la suspensin yuca
Pesamos 10g de almidn de yuca dulce en un vaso Almidn de 7 10x, 40x
precipitado de 50 mL, luego adicionamos 25 mL de agua yuca
para formar una mezcla. En un vaso de precipitado de Almidn de 10 40x
1000mL adicionamos 500mL de agua y se puso a hervir a yuca
una temperatura de 100C en una plancha de Almidn de 0 40x, 100x
calentamiento. Cuando la temperatura del agua estuvo yuca (puro)
entre 90C y 100C aadimos la mezcla de almidn y agua
y 50 mL del buffer de fosfato previamente elaborado. [14].
Como se pudo observar en el laboratorio y ahora en el las muestras de almidn que contienen los nano
anexo 1, la caracterizacin del ensayo de lugol fue positiva cristales y la muestra de almidn puro, podemos
debido a que se observan en los cristales una superficie de observar que en la zona comprendida en 3500 cm-1 y
color azul oscuro, dando positivo para la presencia de 2000 cm-1 tenemos un espectro de infrarrojo que
almidn, se pudo destacar que la actividad de la enzima muestra una banda de absorcin entre 3300 cm-1 y
durante un tiempo de 5-10 minutos es efectiva para el 3200 cm-1 en el cual se presentan picos de absorcin
proceso evitando la degradacin completa del almidn [4]. para las dos muestras que contienen los nano cristales
de almidn y el almidn puro, estos picos se deben
al estiramiento de los grupos hidroxilos , la amplitud

Figura 1.8 Espectro infrarrojo para muestras con de la banda indica la presencia de puentes de
diferentes tiempos en que acta la termamyl amilasa y hidrgeno en la muestra , la amplitud creciente de la
almidn puro banda de absorcin para las diferentes muestras ya
que con la presencia de los nano cristales de almidn
Tambin se observ el fenmeno del ensayo de lugol para influye la estructura qumica de ms muestras en las
una muestra de almidn puro, comparable para los ensayos que actu la enzima en comparacin con el almidn
realizados en los tiempos respectivos [4]. puro, al ser la amilo pectina del almidn el
componente principal de los nano cristales de
Los espectros infrarrojos para cada muestra de almidn que almidn creando puentes de hidrgeno con las
contiene nanos cristales de almidn a diferentes tiempos en cadenas de glucosa de la amilosa, en el rango de 2900
que actu la enzima termamyl amilasa se presentan en la cm-1 y 2800 cm-1 podemos observar el estiramiento
Figura 1.8 los cuales estn reportas en la Tabla 1.5 [4]. de enlaces de CH presentes en las unidades de glucosa
del almidn [4].
Tabla 1.5 Bandas de absorcin para espectros de infrarrojo
de muestras
En la regin del espectro comprendida entre nmeros
de onda desde 2000 cm-1 hasta 400 cm-1 se presentan
Muestra 5 Muestra 10 picos con valores de nmero de onda entre 1494 cm-1
Almidn
min de min de el cual se encuentra fuertemente asociados a la flexin
puro
reaccin reaccin de enlaces C H. Finalmente se reconocen tambin
en el espectro de infrarrojo bandas de absorcin para
551,5 517,456 N/A cada muestra que contiene los nano cristales de
almidn cuyos picos observados presentan valores de
813,654 847,55 855,391 nmero de onda que van de 847 cm-1 (para la muestra
de 5 min de actividad enzimtica hasta 946 cm-1
945,570 926,253 927,463 (para muestra de 10 min de actividad enzimtica).
1065,050 1026,185 1025,489 Estas bandas de absorcin son caractersticas en los
polisacridos y est asociadas con el estiramiento de
1494,807 1446,910 1446,910 enlaces del grupo metileno CH2 enlaces C C y la
flexin de enlaces C O H [4].
1582,122 1520,597 1530,872
2991,570 2931,881 2929,868
A partir de los resultados obtenidos del ensayo de
FTIR (Fourier transform infrared spectroscopy) para
 Tabla 1.6 Fenmenos de vibracin convierta todo en glucosa, maltosa y fructuosa , si
no que rompa las cadenas para obtener cadenas ms
Muestra pequeas de almidn.
Muestra
Almidn 10 min
5 min de Fenmeno
puro de
reaccin
reaccin Conclusiones
Variacin de
551,5 517,456 N/A anillos de Se logr realizar la sntesis con almidn de yuca
piranosa sustituyendo la accin del cido sulfrico con la accin
estiramiento hidroltica de la enzima -amilasa, aunque est reaccin
de los haya tenido un rendimiento muy bajo, se reduce la
813,654 847,55 855,391 accin de cidos contaminantes.
enlaces de
grupos CH2 Se observ por medio de las micrografas la
aparicin de cristales de almidn, obteniendo un
vibracin de resultado positivo al ensayo de lugol debido a la
enlaces coloracin violeta en las paredes de las mismas, aunque
945,57 926,253 927,463
glucocidicos an no se puede concluir la presencia de nanocristales
alfa 1,4 haciendo uso de esta tcnica.
flexin en Se evidenci la presencia de almidn en las
muestras debido a la similitud de los espectros
los enlaces
1065,05 1026,185 1025,489 obtenidos por el FTIR del almidn puro y las muestras
de grupos C- hidrolizadas comparados con la tesis desarrollo y
O-H caracterizacin mecnica, trmica y estructural de
flexin de nanocompuestos de almidn reforzados
1494,807 1446,91 1446,91 con nanopartculas de almidn
enlaces C-H
absorcin Al obtener un rendimiento tan bajo debemos revisar
1582,122 1520,597 1530,872 las condiciones para que la enzima no actu tan rpido
de agua transformando en almidn en glucosa
estiramiento El rendimiento tan bajo tambin puede que sea tan
2991,57 2931,881 2929,868 de los bajo por la cantidad de almidn tan bajo disuelto
enlaces C-H

Finalmente, el espectro de infrarrojo del almidn puro, al Referencias

igual que los espectros de las muestras que contienes los [1] HUANG, M., YU, J. and MA, X.
nanos cristales de almidn tiene una banda de absorcin Ethanolamine as a novel plasticizer for
con mltiples picos entre 2900 cm-1 y 3500 cm-1 que thermoplastic starch. Polymer Degradation and
muestran la presencia de estiramientos de enlaces de los Stability, 90, 2005, p. 501-507.
grupos hidroxilo O H. Para la banda de absorcin del
almidn puro, de manera particular, el pico mximo se
presenta a 3225 cm-1. Los diversos fenmenos de vibracin [2] GUAN, J., ESKRIDGE, K. and HANNA,
que involucran a grupos funcionales orgnicos se resumen M.
en la Tabla 1.4 [4]. Acetylated starch-polylactic acid loosefill
Rendimiento packaging materials. Industrial Crops and
Products, 22, 2004, p. 109-123.
. .
=
[3] VILLADA, H. Influencia de mezclas de
= . % almidn agrio, perfil de temperatura y velocidad
de tornillo de un extrusor sencillo en la produccin
Figura 2 ecuacin de rendimiento de almidn termoplstico, su caracterizacin
fisicoqumica, mecnica, microestructural y
Como se puede observar en la figura 2 a partir de un compor tamiento durante el almacenamiento.
gramo de almidn pudimos obtener 0.0155 g de [Ph.D. Tesis Doctorado en Ingeniera]. Cali
(Colombia): Universidad del Valle, Facultad de
nanoparticulas de almidn , un rendimiento muy
Ingeniera, 2005, p. 27.
bajo para que no lo acepte la comunidad cientfica
ya que para poder ser aceptado como mnimo
[4] S. L. Martnez Pajuelo, Desarrollo y
debemos tener un rendimiento del 15%, por lo tanto
caracterizacin mecnica,trmica y estructural de
en la sntesis debemos observar el tiempo en que
nanocompuestos de almidn reforzadoscon
debe actuar la enzima para que el almidn no lo
nanopartculas de almidn, pontificia universidad
catolica del Peru, Lima, 2015.

[5] L. Bello y Paredes, El almidn: lo

comemos, pero no lo conocemos, Perspectivas,
vol. 50, n 3, pp. 29- 33, 1999.
[6] J. BeMiller y R. Whistler, Starch Chemistry
and Techcnology, New York, ELSEVIER, 2009,
pp. 1- 10.
[7] M. Pinzn F, O. Garca A. y L. Snchez A,
El almidn: alimento ancestral revestido de
nanotecnologa, Ciencia y tecnologa
alimentaria, vol. 11, n 1, pp. 31-42, 213.
[8]Alarcn, F., & Dufour, D. (1998). Almidn
agrio de yuca en Colombia. Cali: CIAT &
CIRAD.
[9]DANE. (2016). El cultivo de la yuca (Manihot
esculenta Crantz) . Insumos y factores asociados
a la produccin agropecuaria, 1- 89.
4
[10] A. Villada Pinilla, Determinacin
experimental de las condiciones de operacin para
el proceso de hidrlisis enzimatica de almidn de
yuca nativa de la regin amazonica en la ciudad de
leticia, Bogot D.C: Universidad Nacional de
Colombia, 2010.
[11] A. Cala y M. Stefany, MODIFICACIN
HIDROLTICA DE ALMIDN DE YUCA
NATIVO CON ENZIMA -AMILASA
BACTERIANA AISLADA DE Bacillus subtilis
PARA ELABORACIN DE SALSAS, Bogot
D.C: Universidad de la Salle, 2008.

[12] A. Pea, Hidrlisis de almidn de yuca mediante

la utilizacin de preparaciones solubles e
insolubilizadas de alfa-amilasa,
Bucaramanga: Universidad Industrial de Santander,
2009.

[13] INFLUENCIA DEL TIPO DE

ALMIDN
EMPLEADO COMO MATRIZ EN LAS
PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS DE
NANOCOMPUESTOS BIODEGRADABLES,
Revista Latinoamericana de Metalurgia y
Materiales, vol. 3, pp. 903-909, 2009.

[14] U. o. Reading, NATIONAL CENTER

FOR BIOTECHNOLOGY EDUCATION, 02 03
2017. [Enlnea]. Available
http://www.ncbe.reading.ac.uk/MATERIALS/
Enzymes/termamyl.html.

[15] "Qumica Orgnica". Morrison y Boyd 5

Edicin.
FICHAS DE SEGURIDAD
ANEXOS

ANEXO 1: Micrografas
Ilustracin 1. Tiempo de reaccin 7 Ilustracin 2. Tiempo de reaccin 7
minutos con -amilasa en minutos con -amilasa en
magnificacin 10x magnificacin 40x

Ilustracin 3. Tiempo de reaccin 5 Ilustracin 4. Tiempo de reaccin 5

minutos con -amilasa en minutos con -amilasa en
magnificacin 10x magnificacin 40x

Ilustracin 5. Tiempo de reaccin 10

minutos con -amilasa en
magnificacin 40x
Ilustracin 6. Almidn de yuca dulce en Ilustracin 7. Almidn de yuca dulce en
magnificacin 40x magnificacin 100x