Marco Teorico

MARCO TERICO
Enterococcus faecium es una bacteria Gram-positivo, bacteria alfa hemltica. Puede ser comensal en el
intestino humano, pero podra ser patgeno, causando enfermedades como meningitis neonatal.
son clulas esfricas u ovoides que miden de 0,6 a 2,0 x 0,6 a 2,5 m; son cocos Gram positivos que aparecen
en par o en cadenas cortas en medio lquido; son no capsulados, no forman endosporas; son anaerobios
facultativos; poseen requerimientos nutricionales complejos; son catalasa negativa.
Raras cepas son mviles por la presencia de flagelos. Fermentan una amplia variedad de carbohidratos con
elaboracin de cido lctico sin produccin de gas; la temperatura ptima de crecimiento es de 37 C.
Toleran altas condiciones de pH: 9,6; usualmente fermentan la lactosa; rara vez reducen nitratos. El contenido
de G + C del ADN es de 37 a 45 mol%. Los enterococos se encuentran aproximadamente en todos
los animales, son flora normal del tracto gastrointestinal (TGI), tracto genitourinario (TGU), vas respiratorias
superiores, cavidad oral, piel, vagina y uretra femenina. Tambin se hallan en las superficies del entorno
ambiental, en el agua, en la vegetacin, resultado de la contaminacin por excrementos de animales y en
aguas albaales no tratados. En el humano, la concentracin del enterococo en las heces es de 108 UFC/g.
Los factores microbiolgicos y ecolgicos que favorecen la colonizacin intestinal permanecen an oscuros.
METODOLOGA
TIPO DE INVESTIGACIN
Se realizan dos tipos de investigacin para realizar tal fin:
Investigacin experimental
Investigacin Semi experimental
UNIVERSO DE ESTUDIO
El universo de estudio de la investigacin a realizar corresponde a la inoculacin de la

solucin (agua peptonada y como material de inters el intestino de la vaca) que
sembraremos en dos medios de cultivos, los cuales son:
agar sangre
Tracto intestinal o tripas, en su concepto bsico, es el tubo digestivo de los seres vivos del
reino animal, ya sea considerado en todo o en parte, e indiferentemente expresado en
singular o en plural, integrado, de manera fundamental, por la faringe, el esfago, el
estmago, el intestino delgado y el intestino grueso.
En su concepto culinario, las tripas son un determinado tipo de despojo comestible
procedente de los estmagos de diversos animales de granja. Con ellos se realizan
diversas preparaciones culinarias en diversas cocinas mundiales, usndose
preferentemente el estmago de ternera.
LOCALIZACIN
Se realizaran diferentes anlisis en el laboratorio de Microbiologa de alimentos,

pertenecientes al programa de Ingeniera de Alimentos de la Universidad de Crdoba,
sede Berastegui, municipio de Cinaga de oro, departamento de Crdoba con una
temperatura promedio de 29C y 20 m.s.n.m, situada geogrficamente en las
coordenadas 8 40 26 de latitud norte y 75 46 44 de latitud oeste con respecto al
meridiano de Greenwich.
VARIABLE
TIPO NOMBRE NIVEL CLAS ESCALA

DE E
MEDICI
ON
Independie Temperatu Interval Cuantitati 25 OC - 37
O
nte ra o vo C
Independie Medio de Razn Cualitativ ---------------
nte cultivo o ---
Independie Tiempo de Interval Cuantitati 24h- 36h
nte incubacin o vo
Dependient Crecimient Razn Cualitativ ---------------
e o o --- MATERIALES
microbian
o
Balanza analtica,
asas redonda, mechero, tubos de caldo BHI, agra macconkey, agar xld , gradilla,
microscopio, colorante cristal violeta, lugol, alcohol acetona, safranina de Gram, frasco con
agua destilada, tubos con prueba Kia, tubos con prueba TSI, tubos con prueba Indol (CPT),
tubos con prueba Motilidad y H2S (SIM), portaobjetos, algodn, alcohol, incubadora.20
gramos de harina , ,90 ml de agua de peptona, Pipetas, , Incubadora, 2 medios agar
McConkey y 2 medios agar xld.
MATERIA PRIMA: Intestino de la vaca (tripas)

MTODOS
PROCEDIMIENTO: El procedimiento a seguir para lograr encontrar las caractersticas

principales de Enterococcus faecium:
1. PREPARACIN DE LA MUESTRA: El aislamiento de Enterococcus faecium se
realizara a partir de intestino de vaca (tripas)
Normalmente habitan en el tracto gastrointestinal. Sin embargo, como patgenos
oportunistas, E. faecium puede causar problemas graves.
Se deben tomar 25 gr e introducirlo en 75ml de agua peptonada para enriquecer
la muestra y permitir la proliferacin de la bacteria deseada e incubarla de 25 -37
C por 24 horas.
2. ENRIQUECIMIENTO DE LA MUESTRA: AL finalizar el perodo de incubacin se

debe inocular a una proporcin 1:10 en dos caldos nutritivos, los cuales
posteriormente deben incubarse a 25 y 37 C durante 24 horas.
3. SIEMBRA EN MEDIOS SLIDOS: Al finalizar el perodo de incubacin se

sembrarn microorganismos tomando inoculos del caldo BHI en 2 medios de
cultivo, los cuales son 2 cajas de Agar macconkey y 2 cajas de Agar xld Se
escogieron estos dos medios debido a la que son medios que inhiben a las gram
positivas y permiten el crecimiento del microorganismo (segn teora relacionada),
de los cuales, cada caja de los dos medios ser incubado a 20C y 37C durante
24 horas.
SIEMBRA N 1.
Se realizara en el McConkey Agar: las peptonas, aportan los nutrientes
necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. El agar
es el agente solidifcante. Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH
alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo
neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares. Los
microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras
El inoculo se tomara del caldo BHI a una temperatura de incubacin de 20 oC y
37C durante 24h y se realizara una siembra por agotamiento de estras.
SIEMBRA N2.
Se realizara en el agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo
diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de patgenos entricos
Gram negativos.
El inoculo se tomara del caldo BHI a una temperatura de incubacin de 20 oC y 37
C durante 24h y se realizara una siembra por agotamiento de estras se
presentan colonias de color amarillento.
4. IDENTIFICACIN MORFOLGICA: Posteriormente se realizar la tincin de

Gram para la identificacin morfolgica de Enterococcus faecium. se
visualizaron cocos en pares o en cadenas Gram positivos (color morado),
sugerentes de pertenecer al Gnero Enterococcus
5. PRUEBAS BIOQUMICAS: Para la identificacin de Enterococcus faecium se

realizarn las siguientes pruebas bioqumicas:
PRUEBA DE TSI Y KIA: Determina la capacidad de la bacteria de atacar un
carbohidratos especifico, incorporado en medio de crecimiento bsico, con
produccin o no de gases, junto con la posible formacin de sulfuros ( indicador de
pH: rojo de fenol).
PRUEBA DE INDOL: Determina la capacidad de una bacteria de desdoblar el
indol de la molcula de triptofano.
PRUEBA DE MOTILIDAD Y H2S: Observar la movilidad del microorganismo,
gracias a la baja concentracin de agar, lo cual nos indica la presencia de flagelos.
Por otro lado se puede determinar si se ha liberado H 2S por la accin enzimtico
de los aminocidos que contienen azufre produciendo una reaccin visible de
color negro.
Con el fin de confirmar la presencia de serratia marcescensen los diferentes
medios las cuales se incubaran a 20C y 37C durante 24 horas.
DESCARBOXILASA: Mide la capacidad enzimtica de un organismo para
descarboxilar un aminocido para formar una amina, con la consiguiente
alcalinidad, tambin se observa formacin de H2S. En este medio (LIA) se evala
la lisina Descarboxilasa (LD), los microorganismos LD+ transforman la lisina en
cadaverina, amina que en medio cido provoca el viraje del indicador prpura de
bromocresol; los LD- fermentadores de glucosa producirn otro viraje.
NITRATO: Est prueba permite determinar la capacidad de un organismo de
reducir el nitrato en nitritos o en nitrgeno libre.
OXIDASA: Determina la presencia de la enzima oxidasa, se debe a la presencia
de un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidacin del citocromo reducido
por el oxgeno molecular.
CITRATO: Determina si una bacteria es capaz de utilizar el citrato como nica
fuente de carbono para el metabolismo provocando alcalinidad. La utilizacin de
cidos orgnicos y sus sales como fuente de carbono produce carbonatos
alcalinos en nueva degradacin.
6. ANLISIS DE RESULTADOS: Se realizarn los anlisis respectivos de las

pruebas realizadas y se podr deducir que las caractersticas experimentales son
similares a las tericas, por ende se obtuvo el xito del aislamiento.
PROCEDIMIENTO PARA OBTENCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA
Harina de maiz COLOCAR 80 ml de agua

(20 g) peptonada
20C-37 C horas
INCUBAR
Inoculo de la sln de
Asa redonda TOMAR harina con agua
peptonada
Caldo BHI
COLOCAR
A 20 y 37C
INCUBAR
Inoculo del caldo

Asa redonda TOMAR BHI
Agar
SEMBRAR
macconkey-agar
A 2o y 37C
INCUBAR
por 24 horas
CARACTERISTICAS
OBSERVAR MORFOLOGICAS
KIA TSI-INDOL
REALIZAR Motilidad Y H2S-

citrato
PRUEBAS
Oxidasa-citrato
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
BIBLIOGRAFA
1. http://www.actaodontologica.com/ediciones/2009/1/enterococcus_faecium_dien
tes_fracaso_tratamiento_endodontico.asp
2. http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1017-
85461998000100004
3. http://bvs.sld.cu/revistas/hie/vol51_1_13/hie10113.htm
4. http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=20558
5. https://es.wikipedia.org/wiki/Tripas

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Se realizaran diferentes anlisis en el laboratorio de Microbiologa de alimentos,

TIPO NOMBRE NIVEL CLAS ESCALA

MATERIA PRIMA: Intestino de la vaca (tripas)

PROCEDIMIENTO: El procedimiento a seguir para lograr encontrar las caractersticas

2. ENRIQUECIMIENTO DE LA MUESTRA: AL finalizar el perodo de incubacin se

3. SIEMBRA EN MEDIOS SLIDOS: Al finalizar el perodo de incubacin se

4. IDENTIFICACIN MORFOLGICA: Posteriormente se realizar la tincin de

5. PRUEBAS BIOQUMICAS: Para la identificacin de Enterococcus faecium se

6. ANLISIS DE RESULTADOS: Se realizarn los anlisis respectivos de las

Harina de maiz COLOCAR 80 ml de agua

Inoculo del caldo

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