Informe de Laboratorio de Bioctenologia - Xavier

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE
GROHMANN TACNA
FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE INGENIERA QUMICA
Curso:
Informe:
Docente:
Estudiante:
Cdigo:
LABORATORIO DE PROCESOS QUIMICOS I

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA VEGETAL
ING JUNIOR S. MIRANDA GUTIERREZ
Xavier April Lira Palza

2010 - 35572
TACNA PER
2016
EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA VEGETAL
OBJETIVOS
El laboratorio de biotecnologa vegetal se ha creado con el objetivo de aplicar la
biotecnologa a la diversificacin, produccin y conservacin de plantas nativas e
introducidas con caractersticas ornamentales y frutcolas para ser incorporadas ms
adelante a los sistemas de produccin agrcola.
Tambin tiene por objetivo potenciar el desarrollo de tcnicas biotecnolgicas clsicas
como es el desarrollo de cultivo in vitro de tejido vegetal, que se ha convertido en una
herramienta innovadora de gran ayuda para el desarrollo agronmico. Esta tcnica se
fundamenta en la capacidad de una clula vegetal de formar una planta completa bajo
condiciones controladas en laboratorio, a partir de cualquier parte aislada de la planta

denominada explante.
La ventaja de la tcnica de cultivo in vitro sobre las tcnicas de multiplicacin
convencional son: una produccin masiva y rpida de material vegetal en espacios
reducidos, permite obtener individuos libres de enfermedades, se obtiene material
homogneo de alta calidad y rendimiento y se puede trabajar en cualquier poca del ao.
El laboratorio ofrece el espacio y la tutora para que los alumnos universitarios puedan
realizar sus prcticas.
MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO
Para el desarrollo de la investigacin y docencia, en el campo del cultivo de tejidos, se
requieren de materiales que permitan la preparacin de frmulas nutrimentales con el
objetivo de cultivar tejidos, rganos y clulas vegetales in vitro. Es muy importante que
los materiales y equipos de uso comn en el laboratorio se identifiquen por su nombre
correcto y uso especfico que tiene cada uno, pero ms importante es saber manejarlo
correctamente en el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas
especiales para el uso de aquellos que as lo requieran.
REAS DEL LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS
Un laboratorio de cultivo de tejidos se puede dividir esquemticamente en reas
separadas para las diferentes funciones que se desarrollan en el. Sin embargo, algunas de
las funciones pueden desarrollarse en un mismo ambiente.
a) REAS DEL NCLEO DEL LABORATORIO DEL CULTIVO DE TEJIDOS
1. rea de preparacin de medios de cultivo
Funcin: se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero debe proveer
tambin un espacio para almacenar los materiales de vidrio y de plstico y los reactivos
qumicos. Este ambiente debe contar con mesas de trabajo para la preparacin de los
medios y para colocar las balanzas, el medidor de pH, los platos calientes con agitacin, y
otros elementos; tambin debe incluir vitrinas, estanteras y espacio para el equipo de
refrigeracin, y para la incubadora o la cmara de crecimiento (o para ambas).
Material y equipo: refrigerador, balanzas, (macrobalanza y de precisin), potencimetro,
plancha elctrica con agitador magntico, frascos erlenmeyer (125, 250 y 500 ml),
botellas y material de vidrio o plstico.
2. rea de lavado y de esterilizacin: puede estar constituida por dos reas conectadas
entre s, o por un solo ambiente, y puede estar localizada dentro del rea general de
preparacin.
Funciones:
- El rea de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con agua caliente y
agua fra y una fuente de agua de alto grado de pureza, preferiblemente agua doblemente
destilada; para el efecto se debe usar un destilador de vidrio o de material no toxico y un
desionizador de agua colocado entre le destilador y el lavadero. Esta rea debe disponer
de un espacio para almacenar agua destilada en botellas de plstico; tambin debe
proveer basureros adecuados para el material vegetal, inorgnico y de vidrio que se
deseche.
- El rea de destilacin debe tener espacio para el autoclave vertical u horizontal, el cual
puede ser pequeo (olla de presin) o grande (de carga frontal y de enfriamiento lento y
rpido), segn sea el volumen del material que se procese. Esta rea tambin debe incluir
espacio para estufas, secadores y un lavadero con agua caliente y fra.
Material y equipo: autoclave manual o automtico, destilador de vidrio, gradillas para
secado, bandejas de aluminio y de plsticos de varios tamaos, recipientes de platico
grandes, estufas para esterilizacin y secado.
AUTOCLAVES
Las autoclaves esterilizan con vapor de presin y tienen dos sistemas de calentamiento: a
base de gas o de electricidad. Los modelos de autoclave son de tipo horizontal o vertical.
La esterilizacin de algodn, gas, papel para envoltura (aluminio, manila), filtros Seitz,
millipore, pipetas probetas, matraces aforados, agua y medio de cultivo se hace en
autoclave.
3. rea de Transferencia
Funcin: en esta rea del laboratorio se realiza el trabajo de excisin, inoculacin, y
transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Dado que este trabajo demanda los
ms altos niveles de limpieza ambiental, se recomienda la instalacin de gabinetes de
flujo horizontal o vertical de aire filtrado bajo presin, o la construccin de cuartos de
transferencia. Sin embargo, ciertas operaciones de inoculacin, como la excisin y el
cultivo de pices y meristemos en tubos de ensayo de boca angosta, se pueden realizar
sobre una mesa limpia, ubicada en un lugar del laboratorio libre de corrientes de aire y
polvo.
Los gabinetes de flujo laminar deben ubicarse, en lo posible, en un lugar alejado de las
puertas y con un mnimo de corriente de aire, con el fin de prolongar la vida til de los
filtros.
Material y equipo: gabinete de flujo laminar, microscopio de diseccin con luz
incidente, e instrumentos de diseccin: cuchillas # 10 y # 11, mangos para cuchillas,
agujas de diseccin, pinzas, tijeras, navaja de afeitar. Tambin se necesitan frascos con
alcohol, mscaras, guantes, marcadores a prueba de agua, bandejas, y tacho para basuras.
4. rea de incubacin
Funcin: los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o cmaras de
crecimiento; estas pueden ser ms eficientes en cuanto al control ambiental, pero son ms
costosas. El rea de incubacin o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control
de la temperatura (20-28 C), de la iluminacin (variable, segn las necesidades: 1000 a
5000 lux) y de la humedad relativa (70-80%).
En este cuarto de incubacin se instalan estanteras metlicas o de madera para colocar
los cultivos. Estas estanteras pueden tener dimensiones variables: el ancho entre 0.3 m 1
m, el largo de acuerdo con el tamao del cuarto, y la altura total de 1.8 a 2.2 m; la
distancia entre peldaos es de 0.2 a .5 m.
Esta rea debe incluir, adems, un espacio para cultivos en agitacin y para cultivos
estticos en la oscuridad.
Es necesario propiciar una buena distribucin del aire en este cuarto para evitar zonas de
recalentamiento por efecto de la luces. Cuando se utilizan tubos fluorescentes, es
conveniente sacar los balastros fuera de este cuarto.
La regulacin de la temperatura se puede logra por medio de aparatos de aire
acondicionado de pared o de un sistema central. En cualquier caso, es necesario tomar
precauciones para evitar el calentamiento excesivo, instalando alarmas y controles para
cortar l iluminacin cuando falle el aire acondicionado.
Material y equipo: un cuarto con temperatura, iluminacin y humedad relativas
controladas; estanteras con iluminacin para los cultivos, bandejas, termmetros de
mxima y mnima, y gradillas para tubos de varios tamaos.
5. rea de observacin y examen (exanimacin): generalmente los microscopios

(estreo, compuesto, invertido y otros) se localizan tanto en el rea de incubacin como
en la de transferencia, pero opcionalmente pueden estar en un rea separada.
Funcin: El objetivo de esta rea es realizar observaciones peridicas de los cultivos,
tanto en medios semislidos como en medios lquidos.
Material y equipo:, microscopio compuesto, y elementos pticos complementarios.
BALANZAS ANALTICAS
En el mercado se tienen diferentes modelos, sin embargo, por lo menos existen 3 tipos de
aparatos:
- De platillo metlico, cuyo sistema de pesaje depende de material de cuarzo
- Electrnica con platillo fijo en el interior del equipo
-.Electrnica con el platillo en el exterior del aparato
Estas balanzas tiene una capacidad de 100 a 160g, y una precisin de 0.1mg, lo cual es
muy til para pesar cantidades pequeas de hormonas, vitaminas y otros microelementos.
CUIDADOS
Para lograr un pesaje adecuado sobre todo exacto, se deben observar algunas
precauciones indispensables para su buen funcionamiento, como son:
- Las balanzas deben estar colocadas sobre una mesa estable, dura y nivelada que impida
que las vibraciones y corrientes de aire afecten las pesadas.
- Deben estar ubicadas en un lugar limpio
- Nunca deben estar sobrecargadas
- Nunca debe pesarse directamente sobre el platillo; para tal efecto hay que emplear
recipientes ligeros o papel.
- Checar continuamente que la balanza este nivelada. En el caso que no lo est, centrar la
burbuja con el nivel del aparato.
- Evtese desplazarlas del lugar donde fue ubicada en el rea de balanzas, de manera que
no se afecte su mecanismo.
MEDIDORES DE pH
Para ajustar el pH de los medidores de cultivo se utilizan indicadores de papel y
qumicos, pero lo ms conveniente es usar un potencimetro con electrodos de vidrio. El
potencimetro no slo se usa para medir el pH de los medio al prepararse, sino tambin
para medir el pH de los medios durante el perodo de incubacin. Recientemente se usan
aparatos con control automtico de pH para los cultivos en suspensin.
DESTILADOR
El agua exenta o con una cantidad mnima de metales pesados es una condicin
primordial en el cultivo de tejidos vegetales, Muchos investigadores utilizan agua
bidestilada o tridestilada, hecha en destiladores de vidrio de alta calidad o bien
combinado el proceso de destilacin por smosis inversa y desmineralizacin. La
preparacin. La preparacin de soluciones madre, medios de cultivo, lavado de
cristalera, etc., requiere de grandes cantidades de agua, por lo que es necesario tener un
destilador grande de metal, tomando en cuenta que el agua obtenida as, contiene una
pequea cantidad de iones de metales pesados, condicin que afecta el desarrollo de las
clulas en cultivo. Para la obtencin de agua tambin se puede usar un desionizador
despus de haberse obtenido el agua en un destilador metal.
Adicionalmente, si se necesita agua completamente exenta de sales, se debe redestilar en
su destilador de vidrio de alta calidad.
AGITADOR MAGNTICO
Este es un aparato fundamental para la preparacin de los medios de cultivo. Su uso
permite la mezcla de los constituyentes del medio durante la elaboracin de las
soluciones madre o bien en la preparacin del medio definitivo. Tambin existen diversos
modelos, pero su funcionamiento se limita a dos aspectos, agitar, lo cual permite mezclar
el soluto con el solvente y con sistema de calentamiento, lo que facilita la disolucin de
algunos compuestos que requieren calor para entrar en solucin. El nmero de
revoluciones oscila entre 60 hasta 1800 rpm. El nmero de plazas varia de acuerdo al
modelo, pero los hay desde un espacio hasta 6.
Complementariamente, se emplean barras magnticas que son las encargadas de realizar

la agitacin de las substancias. Las hay de diferente tamao y dimetro; con o sin
costilla.
b) REAS CONSIDERADAS, ADEMS, PARA LOS LABORATORIOS DE

INVESTIGACIN Y DESARROLLO
6. rea de crecimiento in vivo
Funcin: las plantas que se regeneran en el rea de incubacin se pueden acondicionar o
aclimatar y luego trasplantar en macetas, bandejas o camas apropiadas. Esta operaciones
se pueden llevar a cabo en tinglados, casas de malla o invernaderos, dependiendo de la
condiciones climticas del lugar donde esta ubicado del laboratorio y de los
requerimientos de aislamiento de los materiales por razones fitosanitarias.
Material y equipo: macetas, suelo, bandejas, cmaras de alta humendad, entre otros.
7. reas de cuarentena y de control fitosanitario : esta se incluye en laboratorios con

fines de produccin de materiales elites de sanidad certificada. El rea de cuarentena debe
estar separada del resto del laboratorio pero cercana del rea de control fitosanitario.
En el rea de control fitosanitario se realizan las pruebas necesarias para comprobar la
sanidad de material vegetal, espacialmente causada por virus, hongos y bacterias.
8. rea de oficina: se debe incluir aqu, el mobiliario de oficina como escritorios,
archivos y almacenamiento de datos, los libros de referencia y de control del laboratorio,
los catlogos y otros documentos. Tambin se coloca en ella el equipo de clculo o
computacin.
BIBLIOGRAFIA
http://www.umag.cl/labplantbiotec/?page_id=6
http://annymojica.blogspot.pe/2012/02/212-material-y-equipo-de-laboratorio.html
http://webapp.ciat.cgiar.org/biotechnology/cultivo_tejidos/capitulo1.pdf
http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material%20Didactico/Microbiolog
%C3%ADa%20ambiental/II.%20TecMic-Esterilizaci%C3%B3n.pdf

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condiciones controladas en laboratorio, a partir de cualquier parte aislada de la planta

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