Lab#4 Capa Fina

SEPARACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS
POR CROMATOGRAFIA EN CAPAFINA

Fredery Mojica ID: 4-778-2088 E-mail: [email protected]
Universidad Autnoma de Chiriqu, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Escuela de Qumica,
Qumica Orgnica (cdigo: Qm 236), Ciudad universitaria-El cabrero, David, Chiriqu, Panam
Resumen
Este laboratorio se hizo con el objetivo de estudiar los principios de la cromatografa en capa
fina y sus aplicaciones, adems de aplicar las tcnicas de cromatografa en capa fina para la
separacin e identificacin de compuestos orgnicos; para lo cual se emplearon s
PALABRAS CLAVES
Fase mvil
Fase estacionaria
Polaridad
Adsorbente
Eluyente
almina
OBJETIVOS
Estudiar los principios de la cromatografa en
capa fina y sus aplicaciones.
Aplicar las tcnicas de cromatografa en capa
fina para la separacin e identificacin de
compuestos orgnicos.
MARCO TERICO
La cromatografa en capa fina (en ingls thin
layer chromatography o TLC) es una tcnica
analtica rpida y sencilla. Entre otras cosas
permite:
Determinar el grado de pureza de un
compuesto. Se puede determinar as, por
ejemplo, la efectividad
de una etapa de
purificacin.
Comparar muestras. Si dos muestras corren
igual en placa podran ser idnticas. Si, por el
contrario, corren distinto entonces no son la
misma sustancia.
Realizar el seguimiento de una reaccin. Es
posible estudiar cmo desaparecen los reactivos
y cmo aparecen los productos finales o, lo
que es lo mismo, saber cundo la reaccin ha

acabado.
La muestra a analizar se deposita cerca de un
extremo de una lmina de plstico o aluminio
que previamente ha sido recubierta de una fina
capa de adsorbente (fase estacionaria).
Entonces, la lmina se coloca en una cubeta
cerrada que contiene uno o varios disolventes
mezclados (Eluyente o fase mvil). A medida
que la mezcla de disolventes asciende por
capilaridad a travs del adsorbente, se produce
un reparto diferencial de los productos
presentes en la muestra entre el disolvente y el
adsorbente. (Douglas A. Skoog, F.J. Holler,
T.A. Nieman. 2001).
MATERIALES Y REACTIVOS
Cuadro 1:
MATERIALES
Descripcin
Cantidad
Cmaras
3
Cromatografa
s
Probetas
3
Capilares
18
Placas de capa
6
fina
Lmpara UV
1
Vasos
6
qumicos
Regla
6
Capacidad
----------
10 ml
--------------------------250 ml
---------
Cuadro2 :
REACTIVOS
Descripcin
Toxicidad
ACETONA
FORMULA:
C3H6O
PESO MOLECULAR:
58.08 g/ mol.
ETANOL
FORMULA:
C2H6O
PESO MOLECULAR:
46.07 g/mol.
TRIPTOFANO
FRMULA:
C11 H12 N2 O2
PESO MOLECULAR:
204.23 g/mol
IBUPROFENO
FRMULA :
C13H18O2
PESO MOLECULAR:
206.28 g/mol
En forma de vapor,
causa irritacin de
ojos nariz y trquea.
En concentraciones
muy altas puede
afectar al sistema
nervioso
central,
presentndose dolor
de
cabeza
y
cansancio.
Produce irritacin de
ojos y tracto
respiratorio superior,
nuseas,
vmito,
dolor de cabeza,
excitacin
o
depresin.
Evite el
contacto
con
los
ojos,
irritacin
leve;
de
lo
contrario
no
peligroso
Puede
causar
irritacin en ojos y
piel.
Puede ser irritante de
las
membranas
mucosas y del tracto
respiratorio superior.
HEXANO
FORMULA:
C6H14
PESO MOLECULAR:
86.17 g/mol
N-BUTANOL
FRMULA:
C4H10O
PESO MOLECULAR:
74.12 g/mol
GLICINA
Frmula:
CHNO
Masa molar:
75,07 g /mol
FENILALANINA
Formula:
CHNO
Masa mola:
165,19 g/mol
CIDO ACTICO
NINHIDRINA
FRMULA:
C9H6O4
La sustancia irrita los

ojos, la piel y el tracto
Respiratorio.
Formula Qumica :
CH3COOH
Peso Molecular :
60.05 g/mol
MASA MOLAR:
178,14 g/mol
ACETATO DE ETILO
FORMULA:
C4H8O2
PESO MOLECULAR:
88.1 g/mol
N-PROPANOL
Causa
dolor
de
cabeza, nuseas e
incluso, prdida de la
conciencia y puede
sensibilizar
las
mucosas
inflamndolas.
Frmula molecular:
C 3H8 O
Peso molecular:
60,09502 g / mol
Causa
tos
y
cansancio
a
concentraciones
bajas.
A
concentraciones
altas, tiene efecto
narctico provocando
adormecimiento,
confusin mental e
inconciencia.
Grandes
concentraciones
producen
efectos
narcticos.
Riesgo de lesiones
oculares graves.
No se clasificar
como mutgeno en
clulas germinales,
carcingeno ni txico
para la reproduccin
No pueden excluirse
caractersticas
peligrosas, pero son
poco probables si su
manipulacin
es
adecuada.
Puede
reaccionar
violentamente
con
materiales oxidantes
incluyendo
acetaldehdo,
cromatos,
otros
cidos, fosfatos,
carbonatos.
Irritacin de los ojos,
la nariz, la garganta;
secar agrietamiento
de
la
piel;
somnolencia,
dolor
de cabeza; ataxia,
dolor gastrointestinal.
FASE EXPERIMENTAL
1- Preparar los eluyentes a utilizar con
las soluciones de acetato de etilo,
hexano, n-butanol, NH4OH, agua y los
frmacos prepararlos en acetona.
RESULTADOS
Tabla 1: Datos de recorrido en la CMARA 1
(acetato de etilo: Hexano 1:1)
2- Colocar en la cmaras cromatografas

los eluyentes indicados, en la cmara 1
el Eluyente de acetato de etilo:Hexano
1:1 ; en la cmara 2 el Eluyente
NH4OH:n butanol:H2O 3:5:2 ; en la
cmara 3 el Eluyente de NH4OH: Etanol
7:3.
Placas Eluyente
(cm)
A
10,3
B
10,2
C
10,3
10, 3
Ibuprofeno
(cm)
Rf
5,4
0,52
5,4
0,53
5,7
0,55
5,6
0,54
5,5
0,53
Aspirina
(cm) Rf
3,7
0,36
3,8
0,37
3,8
0.37
3,9
0,38
3,8
O,37
X
3- Colocar una tira delgada de
papel fitltro para saturarla de
vapores del Eluyente.
CLCULOS:
Rf: Distancia recorrida por la muestra
Distancia recorrida por el solvente
4- Indicar con una raya en la

capa fina la lnea de partida de
la muestra y aplicar con un
capilar la muestra.
5- Al terminar de preparar la placa,

colocarla dentro de las cmaras, 2
placas una de aminocidos y otra de
frmacos para cada cmara.
6-Esperar a que el Eluyente

llegue a la parte superior de la
placa; retirar la placa y colocarla
en el horno.
7- sacar la placa y revelar con la

lmpara UV y la que contiene
aminocidos con Ninhidrina , marcar
las manchas obtenidas, medir y
calcular los Rf de cada mancha.
Frmacos
Ibuprofeno
Rf: 5,5 = 0,53
10,3
Aspirina
Rf: 3,8 = 0,36
10,3
Placas Eluyent
e
(cm)
Aspiri
na
(cm)
A
B
C
3,7
3,8
3,8
3,9
3,8
10,3
10,2
10,3
10, 3
Ibuprofeno
R (cm)
f
0,36
5,4
0,37
5,4
0.37
5,7
0,38
5,6
O,3
5,5
7
Rf
0,52
0,53
0,55
0,54
0,53
Aspirin
a
(c
Rf
m)
3,7 0,36
3,8 0,37
3,8 0.37
3,9 0,38
3,8 O,37
CLCULOS: CMARA 2 (NH4OH:n butanol:H2O 3:5:2

)

Aminocidos
Triptfano
Acetil saliclico
Mezcla
Rf: 1.8 = 0.24

7.5
6.0
5.6
CLCULOS: CMARA 3 ( NH4OH: Etanol 7:3.)
Prolina
Rf: 0.4 = 0.05

7.5
Cistena
Aminocidos
Rf: 0 = 0
7.5
Triptfano
Mezcla
Rf: 6.7 = 0.90

7.4
Rf: 1.7= 0.23

7.5
Frmacos
Prolina
Ibuprofeno
Rf: 5.9 = 0.80

7.4
Rf: 2.6 = 0.47

5.5
Cistena
Aspirina
Rf: 6.4= 0.86

7.4
Rf: 2.6 = 0.47

5.5
Mezcla
Acetil Saliclico
Rf: 6.6 = 0.89

7.4
Rf: 2.4= 0.44

5.5
Frmacos
Mezcla
Ibuprofeno
Rf: 2.7= 0.49

5.5
Rf: 5.1 = 0.85

6.0
Cuadro3:
Recorrido de la muestras en la cmara 3
AMINOCIDOS
Descripcin
Distancia (cm)
Eluyente
Triptfano
Prolina
Cistena
Mezcla
FRMACOS
Descripcin
Eluyente
Ibuprofeno
Aspirina
7.4
6.7
5.9
6.4
6.6
Distancia (cm)
6.0
5.1
5.9
Aspirina
Rf: 5.9 = 0.89
6.0
Acetil Saliclico
Rf: 6.0= 1
6.0
Mezcla
Rf: 5.6 = 0.85
6.0
DISCUSIN DE RESULTADOS
Se prepararon la muestras de aminocidos y
de frmacos y se aplicaron con un capilar en
el punto de inicio de la capa fina estas se
introdujeron en la cmaras con los eluyentes
previstos para cada cmara se observ que
para la cmara 1 los aminocidos no tuvieron
recorrido ya que la el Eluyente de esta
cmara es de polaridad casi nula por el
hexano. En cambio s se mostr recorrido de
las muestras en cuanto a los frmacos;
Mediante la distancia recorrida por la muestra
y la recorrida por el solvente se en cada
cmara se pudieron observar las relaciones
de distribuciones Rf. Estos recorridos por lo
general son ideales si su dato final es igual
menor que 1 por lo cual para esta experiencia
se pudo obtener datos que acompaan esta
teora.
Algo que es importante destacar es la
escogencia de los Eluyentes para la
extraccin de un analito en base a la
polaridad de las mismas; por ende
La
muestra a analizar se deposita cerca de un
extremo de una lmina de plstico o aluminio
que previamente ha sido recubierta de una
fina capa de adsorbente (fase estacionaria).
Entonces, la lmina se coloca en una cubeta
cerrada que contiene uno o varios disolventes
mezclados (eluyente o fase mvil). A medida
que la mezcla de disolventes asciende por
capilaridad a travs del adsorbente, se
produce un reparto diferencial de los
productos presentes en la muestra entre el
disolvente y el adsorbente. (
Skoog,
West, Holler 1997.)
Los adsorbentes (fase estacionaria) ms
ampliamente utilizados son la gel de slice
(SiO2) y la almina (Al2O3), ambas de carcter
polar. La almina anhidra es el ms activo de
los dos, es decir, es el que retiene con ms
fuerza a los compuestos; por ello se utiliza
para separar compuestos relativamente
apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo,

teres, aldehdos y cetonas). El gel de slice,
por el contrario, se utiliza para separar
sustancias ms polares (alcoholes, aminas,
cidos carboxlicos).
El proceso de adsorcin se debe a
interacciones intermoleculares de tipo dipolo
dipolo o enlaces de hidrgeno entre el soluto
y el adsorbente. El adsorbente debe ser
inerte con las sustancias a analizar y no
actuar como catalizador en reacciones de
descomposicin. El adsorbente interacciona
con las sustancias mediante interaccin
dipolodipolo o mediante enlace de hidrgeno
si lo presentan.
( K.A. Rubinson, J.F.
Rubinson. 2001).
Figura 1. Estructura del gel de slice e

interacciones con algunos compuestos
polares
Para la revelacin de aminocidos se utiliz

La Ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno)
reacciona con aminocidos que tengan el
grupo amino libre, dando lugar a la formacin
de amoniaco y anhdrido carbnico, con
reduccin del reactivo (ninhidrina) a
hidrindantina; La hidrindantina reacciona a su
vez con el amoniaco y otra molcula de
ninhidrina para dar un compuesto de adicin
doble que presenta una coloracin azulprpura, con la excepcin de la prolina que
da una coloracin amarillenta (recordar que
en la prolina el grupo amino est sustituido).
El derivado coloreado presenta mximo de
absorcin en torno a 570 nm. La reaccin se
lleva a cabo en caliente y a valores de pH

comprendidos entre 4 y 8. Las aminas
primarias (R-CH2-NH2) dan tambin positiva
la prueba de la ninhidrina, aunque en este
caso no se libera CO2. La tcnica es muy
sensible, por lo que es ideal para detectar
concentraciones bajas de aminocidos,
utilizndose para revelar su presencia en
cromatogramas y fracciones procedentes de
otras tcnicas de separacin. La presencia de
aldehdos resultantes de la degradacin de la
ninhidrina por reaccin con los aminocidos
modifica, bajo ciertas condiciones, el color
formado, lo que sirve para identificar el tipo
de aminocido. (Yuri Y. Lurie 1975).
Pudimos apreciar que la tcnica de

cromatografa en capa fina (CCF) tiene
numerosas ventajas, aparte de ser rpida,
sencilla, barata; tiene tambin la ventaja
de utilizar poca cantidad de muestra.
Pudimos aplicar en el tanque de elucin,
el disolvente y notamos como suba por la
placa e iba separando la mezcla, dejando
abajo el patrn ms polar.
Aprendimos que a partir del factor de
retencin sabremos que sustancia es ms
polar, siendo el ms polar aquel que tenga
un Rf menor.
BIBLIOGRAFA
Douglas A. Skoog, F.J. Holler, T.A. Nieman
(2001). Principios de Anlisis Instrumental. 5
ed. Mc Graw-Hill Interamericana.
Skoog, West, Holler (1997). Qumica Analtica.
6 ed. Mc Graw-Hill
K.A. Rubinson, J.F. Rubinson. (2001). Anlisis
Instrumental. Prentice Hall.
Figura 1. Reaccin de aminocidos con la

ninhidrina.
CONCLUSIN
Yuri Y. Lurie (1975).Handbook

analitica. MIR Publicado , Moscow.
Quimica
M. Machtinger. R. Roset. 1977. Qumica

Analtica General de Gastn Charlot. Mc GrawHill Interamericana.

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SEPARACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS

POR CROMATOGRAFIA EN CAPAFINA

que es lo mismo, saber cundo la reaccin ha

La sustancia irrita los

2- Colocar en la cmaras cromatografas

4- Indicar con una raya en la

5- Al terminar de preparar la placa,

6-Esperar a que el Eluyente

7- sacar la placa y revelar con la

CLCULOS: CMARA 2 (NH4OH:n butanol:H2O 3:5:2

Rf: Distancia recorrida por la muestra

Rf: 1.8 = 0.24

CLCULOS: CMARA 3 ( NH4OH: Etanol 7:3.)

Rf: 0.4 = 0.05

Rf: 6.7 = 0.90

Rf: 1.7= 0.23

Rf: 5.9 = 0.80

Rf: 2.6 = 0.47

Rf: 6.4= 0.86

Rf: 2.6 = 0.47

Rf: 6.6 = 0.89

Rf: 2.4= 0.44

Rf: 2.7= 0.49

Rf: 5.1 = 0.85

apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo,

Figura 1. Estructura del gel de slice e

Para la revelacin de aminocidos se utiliz

lleva a cabo en caliente y a valores de pH

Pudimos apreciar que la tcnica de

Figura 1. Reaccin de aminocidos con la

Yuri Y. Lurie (1975).Handbook

M. Machtinger. R. Roset. 1977. Qumica

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