FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES

PROYECTO CURRICULAR INGENIERIA AMBIENTAL

INFORME 9: SEPARACION DE PIGMENTOS FOTOSINTETICOS
Andrs Oden 20132180893
RESUMEN
La fotosntesis, proceso que permite a los vegetales obtener la materia y la energa que
necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se lleva a cabo gracias a la presencia en las
hojas y en los tallos jvenes de pigmentos, capaces de captar la energa lumnica. Entre los
distintos mtodos que existen para separar y obtener esos pigmentos se encuentra el de la
cromatografa, que es una tcnica que permite la separacin de las sustancias de una mezcla y
que tienen una afinidad diferente por el disolvente en que se encuentran. De tal manera que al
introducir una tira de papel en esa mezcla el disolvente arrastra con distinta velocidad a los
pigmentos segn la solubilidad que tengan y los separa, permitiendo identificarlos perfectamente
segn su color.
Palabras claves: pigmentos fotosintticos, clorofila, carotenoides, cromatografa.
ABSTRACT
Photosynthesis, the process that allows plants to obtain matter and energy they need to develop
their vital functions performed by the presence on the leaves and young stems of pigments, able
to capture the light energy. Among the various methods available for separating and obtaining
such pigments is the chromatography, a technique that allows separation of the substances in a
mixture and which have a different affinity for the solvent in which they are. Such that when
inserting a paper strip in that the solvent mixture with different drag speed as pigments having
solubility and separates, enabling perfectly identifiable by color.
Keywords: photosynthetic pigment, chlorophyll, carotenoids, chromatography.
OBJETIVO GENERAL
Separar los pigmentos fotosintticos presentes en las hojas de espinaca por medio de
cromatografa
Especficos
Identificar los pigmentos fotosintticos por medio de cromatografa.
Evaluar el factor de retencin de los pigmentos en los solventes etanol y ter.
MARCO TEORICO
La energa que posibilita la vida de la
mayora de los seres vivos procede directa
o indirectamente del sol, a travs del

proceso fotosinttico. En este proceso se

distinguen dos etapas:
Etapa fotoqumica: la energa luminosa es
absorbida por los pigmentos fotosintticos y
transformada en energa qumica bajo la
forma de ATP o NADPH.

Etapa bioqumica: consiste en la fijacin del

CO2 mediante el ciclo de Calvin. Este
proceso requiere del NADPH y el ATP
producido en la etapa anterior.
La energa radiante es absorbida por
pigmentos que se encuentran embebidos en
la membrana tilacoidal del cloroplasto (en el
caso de las clulas eucariotas) en la
membrana plastatica (en el caso de las
bacterias fotosintticas), o en las lminas
internas (cianobacterias). Se distinguen dos
tipos de pigmentos fotosintticos:
a) Pigmento principal: se trata de la
molcula de clorofila a: el nico
pigmento capaz de iniciar los
proceso de xido-reduccin en la
etapa fotoqumica.
b) Pigmentos accesorios: son aquellos
que absorben luz en regiones del
espectro electromagntico donde
no absorbe la clorofila a. Es el caso
de la clorofila b, los carotenoides y
las ficobilinas.
Las clorofilas son pigmentos verdes que
constan de cuatro anillos pirrolicos que
forman un macrociclo con diversos
sustituyentes laterales. Los pirroles a travs
de sus tomos de nitrgeno forman un
centro del anillo un complejo catin Mg 2+
quedando una estructura casi plana. El
anillo IV se encuentra un residuo del cido
propanoico esterificado con un alcohol de
veinte tomos de carbono (fitol). La nica
diferencia en la estructura de la clorofilas a y
b es que la primera presenta en el anillo II
un grupo metil y la segunda un formilo.
Los carotenoides son polisoprenoides de 40
tomos de carbono. Pueden ser del tipo
caroteno en cuyo caso la molcula consta
exclusivamente de carbono e hidrogeno o
del tipo xantofila que contiene oxigeno
adems de carbono e hidrogeno. Los
principales carotenoides de cloroplastos de
plantas superiores son: -caroteno, lutena,
violaxantina y neoxantina.
Las ficobilinas (por ejemplo la ficocianina y
la ficoeritrina) son tetrapirroles de cadena
abierta. Estn presentes en algas

verdeazuladas y rojas. La separacin de

estos pigmentos se puede realizar por
diversas tcnicas de cromatografa las
cuales permiten determinar y cuantificar los
tipos de pigmentos presentes.
La cromatografa
La cromatografa es esencialmente un
mtodo fsico de separacin en el que los
componentes a separar se distribuyen en
dos fases, una inmvil (lecho estacionario) y
otra mvil (fase mvil) la cual percola a
travs de la primera. El proceso
cromatgrafo se da como resultado de
repetidos procesos de sorcion-desorcion
durante el movimiento de los componentes
de la mezcla arrastrados por la fase mvil a
lo largo del lecho estacionario (elucin),
producindose la separacin debido a las
diferencias en las constantes de distribucin
de los componentes de la mezcla entre la
fase estacionaria y la mvil (Fernndez
2011).
Tipos de cromatografa
La cromatografa puede clasificarse de
acuerdo al tipo de equilibrio involucrado,
mismo que esgobernado por el tipo de fase
estacionaria utilizada. As la cromatografa
puede ser de (1) adsorcin, (2) particin, (3)
intercambio inico, (4) exclusin, y (5)
afinidad.
1. Cromatografa de adsorcin
La fase estacionaria es un slido en el que
los componentes de la muestra son
adsorbidos. La fase mvil puede ser un
lquido (cromatografa lquido-slido) o un
gas
(cromatografa
gas-slido;los
componentes se distribuyen entre dos fases
a travs de la combinacin de los procesos
deadsorcin y desorcin.
2. Cromatografa de particin
La fase estacionaria de la cromatografa de
particin es un lquido soportado en un
slido inerte. Otra vez, la fase mvil puede
ser un lquido (cromatografa de particin
liquido-liquido) o un gas (cromatografa de

particin
gas-liquido,
GLC).
La
cromatografa en papel es un tipo de
cromatografa de particin en la cual la fase
estacionaria es una capa de agua adsorbida
en una hoja de papel.

Ilustracin 2: Cromatografa de elucin. Fuente:

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cro
magraf.pdf

Ilustracin 1: Cromatografa de particin. Fuente:

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cro
magraf.pdf

3. Cromatografa de cambio inico

Las separaciones por intercambio inico, se
llevan a cabo con materiales insolubles y de
textura porosa, los cuales presentan
reactivos asociados a iones lbiles capaces
de intercambiarse con los del medio que los
rodea, por lo que inevitablemente este tipo
de cromatografa ha de realizarse en medio
liquido. La cromatografa de intercambio
ionico es utilizable para la separacin de
substancias ionicas, tanto inorgnicas como
organicas (Tejon 2006).
4. Cromatografa de elucin por
tamao
En la cromatografa de exclusin puede
separarse molculas solvatadas de acuerdo
a su tamao y habilidad a penetrar en una
estructura tamiz (la fase estacionaria).
La separacin en cromatografa de particin
y en cromatografa de intercambio inico se
logra mediante interacciones de solutos con
la fase mvil y la fase estacionaria. En
contraste, la separacin en cromatografa
de exclusin por tamao se lleva a cabo por
diferencias en tamao molecular y la
habilidad de diferentes molculas para
penetrar los poros de la fase estacionaria a
diferentes tamaos o magnitudes. Esta
tcnica se utiliza extensivamente para las
separaciones
preparativas
de
macromolculas de origen biolgico, asi
como para la purificacin de polmeros
orgnicos sintticos.

5. Cromatografia de afinidad
Este tipo de cromatografa utiliza
interacciones altamente especficas entre un
tipo de molculas de soluto y una segunda
molcula
unida
covalentemente
(inmovilizada) a la fase estacionaria. Por
ejemplo, la molcula inmovilizada podra ser
un anticuerpo especfico para una protena
particular. Cuando una mezcla cruda que
contiene miles de protenas se pasa a
travs de una columna, solo una protena
reacciona con el anticuerpo que est unido
a la columna. Despus de lavar todos los
solutos de la columna, la protena deseada
es desplazada del anticuerpo cambiando el
pH, la fuerza inica o la polaridad.

Ilustracin 3: cromatografa de afinidad. Fuente:

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cro
magraf.pdf

MATERIALES
Mortero
Tubo de ensayo
Capilar y micropipeta
Tira de papel cromatografico

RESULTADOS
Imagen

Resultados
Se trituraron las hojas de
espinaca con ayuda de un
mortero
y
pistilo,
se
aadieron 15 ml de etanol, se
obtuvo una mezcla de una
tonalidad verde muy intensa
la cual indica que hay varios
tipos de clorofila presentes.

Prueba con etanol

Con la ayuda de un capilar se

procedi a tomar 10 gotas de
solucin de pigmentos y se
fueron aadiendo al papel
cromatgrafo a una distancia
de 3 cm. Al paso de un
tiempo
los
pigmentos
adquirieron una coloracin
verde amarilla lo que indica
una uniformidad en la clorofila
presente en la muestra.
Despus se introdujo el papel
cromatgrafo al interior de un
vaso de precipitado con
0.3mm de etanol tapado con
un vidrio de reloj y se dej
actuar por un periodo de 30
minutos. Al finalizar se
marcaron los tipos de clorofila
presentes en la muestra
analizada y un sistema de
referencia para validar el
resultado.

Para la prueba con ter se obtuvo

3.5 para Xantofila, 2.5 para clorofila

Clorofila A = 2.2

Clorofila B= 1.05

Xantofila y Carotenos=
3.1
A y 1.5 para clorofila b
Tabla 1: Resultados. Imgenes: Ariza, D.

ANALISIS DE RESULTADOS
Los cloroplastos deben su color verde a un
pigmento denominado clorofila. Sin
embargo, lo que en realidad existe entre los
cloroplastos es una mezcla de pigmentos
representados principalmente por 2 tipos de
clorofila (clorofila a y b), por caroteno y
xantofila, todas estas sustancias presentan
un grado diferente de solubilidad, lo cual
permite su separacin cuando una solucin
de la misma asciende por capilaridad por
una tira de papel poroso, ya que las mas
solubles se desplazaran a mayor velocidad,
pues acompaaron fcilmente al disolvente
a medida que este va ascendiendo. De esta
forma al cabo de un cierto tiempo a lo largo
del papel filtro se irn situando los distintos
pigmentos, tanto ms desplazadas ms
solubles sern los pigmentos a los que
pertenecen y tanto ms anchas mayor ser
la abundancia de estos en la mezcla.
Se pudo observar como la clorofila b
permaneci ms fija sobre el papel debido a
que es menos soluble en estas sustancias a
diferencia de la clorofila b y la xantofila y
carotenos.

Se procedi a calcular los factores de

retencin por medio de la siguiente
expresin teniendo en cuenta que la
distancia recorrida por ambos disolventes
fue 4.7 cm,
Rf =

distanciarecorrida por el compuesto

distancia recorrida por el disolvente

Compuest
o
Clorofila a
Clorofila b
Xantofila y
Carotenos

Etanol

Eter

2.2
0.22
0.66

0.53
0.31
0.74

Tabla 2: Factores de retencin.

La xantofila es un compuesto que se ubica

en la parte mas alta del papel de
cromatografa debio a que es el que posee
mayor solubilidad lo que lo hace un
compuesto muy polar dado a que se
solubiliza fcilmente en ter y etanol.

Ilustracin 4: Estructura Xantofila.

La clorofila A es ligeramente menos soluble

que la xantofila por lo que queda debajo en
el papel de cromatografa ya que posee
tanto grupos apolares como grupos
ligeramente polares lo cual dificulta su
recorrido en la fase mvil del sistema
cromatografico.
La clorofila b es menos soluble y por esto no
presenta un alto factor de retencin. Se
observ cmo permaneci en la parte
inferior del papel debido a que presenta una
alta cantidad de grupos apolares en su
estructura.

Ilustracin 5: Estructura clorofila a y b. Fuente :

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cro
magraf.pdf

El ter tiene la capacidad de solubilizar

tanto
compuestos
apolares
como
compuestos ligeramente poplares por lo que
es ms eficaz al momento de mostrar los
pigmentos en el papel de cromatografa ya
que el etanol solo solubiliza compuestos
totalmente apolares.
CONCLUSIONES
El pigmento de mayor solubilidad siempre
quedara evidenciado en la parte superior del
papel de cromatografa debido a que la
mayor solubilidad de este lo hace
desplazarse en la corriente de fase mvil
con mayor facilidad, mientras que el
pigmento con menor solubilidad ascender
a una velocidad menor por lo que queda en
la parte inferior.
El ter es mucha ms efectivo que el etanol
en las pruebas de cromatografa ya que
este puede solubilizar tanto compuestos
apolares como compuestos ligeramente
polares. El factor de retencin obtenido nos
indica que una mayor cantidad de pigmento
fue retenido en la prueba con ter que con l
de etanol debido a la capacidad que el
primero tenia de solubilizar los pigmentos.
En la prueba tambin se evidencia la
presencia de carotenos que son incluso ms
solubles que la xantofila.

BIBLIOGRAFIA
Fernndez, C. (2008) Principios de
fundamentales de cromatografa. Museo
Nacional de Ciencias naturales. Gobierno
de Espaa.
Tejn, J. Fundamentos de Bioqumica
estructural. Madrid, Espaa. Tbar.

Aguilar, J. (2005). Manual de prcticas de

qumica inorgnica. Medelln, Colombia.
Universidad de Medelln.
Bailey, A. (1994) Aceites y grasas
industriales. Madrid, Espaa. Reverte.