Tincion de Ziehl Neelsen Descargar
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Fundamento
La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decoloracin con
cidos fuertes despus de ser coloreadas con solucin de fucsina caliente, permite
reunirlas bajo la denominacin general de bacterias cidoresistentes o cidoalcohol resistentes. La cido-alcohol resistencia es la capacidad de incorporar
ciertos colorantes y retenerlos despus de someterlos a la accin de cidos y
alcohol y est determinada por la presencia en la pared celular de los cidos
miclicos que son cidos grasos de cadenas ramificadas de alto peso molecular
(60 a 70 tomos de carbono). Las micobacterias son bacilos cido-alcohol
resistentes, cortos, ligeramente curvos. El gnero Mycobacterium, incluido en esta
clasificacin, comprende especies patgenas para el hombre, animales y especies
saprfitas. El grado de cido-alcohol resistencia es variable entre las especies de
este gnero y est relacionado muchas veces con las condiciones culturales, no
pudiendo utilizarse esta diferencia para distinguirlos entre s. Los bacilos cidoalcohol resistentes (BAAR) se observan de color rojo al ser coloreados con los
colorantes para Ziehl Neelsen, mientras que otros grmenes y clulas toman
distintos tonos de azul debido al azul de metileno que se utiliza como colorante de
contraste. La coloracin de Ziehl Neelsen consituye una tcnica sencilla rpida y
econmica, de baja sensibilidad pero es una valiosa herramienta para detectar los
casos de tuberculosis pulmonar.
Materiales:
Fucsina fenicada
Alcohol- cido
Azul de metileno
Agua destilada
Equipo de tincin
Mechero Bunsen
Microscopio
Portaobjetos
Asa de siembra de platino
Fucsina fenicada
Alcohol- cido
Azul de metileno
Agua destilada
Metodologa
Frotis:
1. Colocar los frascos con las muestras en orden consecutivo de izquierda a
derecha
2. Poner las lminas en la mesa (en este caso dentro de la CSB) y numerarlas
con los nmeros correspondientes a las muestras usando 1/3 de la lmina al
reverso (para que al momento de hacer la decoloracin no se borre)
3. Abrir el frasco de la muestra de manera firme y lenta
4. Ver el contenido del frasco y obtener la parte ms purulenta
5.
Con
un
palillo
de
madera
escoger
la
porcin
ms
6. Extender la muestra en un frotis de una capa no muy gruesa (sobre loso 2/3 de
lmina sobrante) sin llegar a los bordes
7. Si es necesario, desmenuzar las partculas grandes con las puntas del palillo
de madera quebrado por la mitad
8. Desechar el aplicador en un frasco de boca ancha con alcohol o cloro
9. Dejar secar el frotis
10. Tomar la lmina por el extremo numerado con la muestra hacia arriba, pasarla
tres veces por la llama del mechero para fijar el frotis, dejar enfriar el frotis (2-3
min.)
Tincin:
1. Cubrir toda el porta-objeto con fucsina filtrada
2. Calentar hasta la emisin de vapores (aprox. 5 min.)
3. Lavar con agua (poniendo la lmina de una manera inclinada para evitar barrer
la muestra) y escurrir
4. Cubrir con solucin decolorante durante 2 min.
5. Lavar con agua (poniendo la lmina de una manera inclinada para evitar barrer
la muestra) y escurrir
6. Cubrir con azul de metileno de 45seg.-1min.
7. Lavar con agua y luego poner en la tabla de secado (para escurrir)
Reactivo
fucsina fenicada
Tiempo
1 minuto en frio y 5 minutos a
emisin de vapores.
Azul de metileno
Agua detilada
Alcohol-acido
Referencias
http://practicasmicrobiologiadelaura.blogspot.mx/2014/10/practica-13-tincionde-ziehl-neelsen.html
http://www.britanialab.com/productos/183_inserto_es.pdf
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen
http://apuntesytrabajosdemicrobiologia.blogspot.mx/2014/06/tincion-de-ziehlneelsen.html
http://www.ugr.es/~cjl/tinciones.pdf