Determinacion de Flavonoides
Determinacion de Flavonoides
Determinacion de Flavonoides
PRCTICA N 08
DETERMINACiN DE FLAVONOIDES
8.1
FLAVONOIDES:
Los flavonoides,
responsables
de la coloracin de numerosas
esta relacionado
flavonoides
se encuentras
generalmente
en
farmacolgicas
la
estn
ampliamente
forma
soluble
asociadas
el 2-fenil cromano.
distribuidos
de
Los
en el reino vegetal,
glicsidos.
con la reduccin
Sus
propiedades
de la permeabilidad
At
OH
HO
R2
OH
H
OH
OCH3
H
H
OH
H
R2
OH
Aglycone
Quercetin
Kaempferol
. Myricetin
Isorhamnetin
OBJETIVOS:
8.2
para flavonoides.
DETERMINACiN DE LA RUTINA:
8.2.1 FUNDAMENTO:
La rutina
es un flavonoide
que tiene
una mejor
solubilidad
en medio
alcohlico, que se caracteriza por dar positiva la prueba de Shinoda con una
variacin
de
color
que depende
del tipo
de estructura,
asimismo
se
--
__________
~------------~----~~--~--~~-------------------65
Universidad
F+3
frente a la
luz UV.
8.2.2 MUESTRA:
8.2.3 MATERIALES
~
~
>
Y REACTIVOS:
ter etlico
Equipo soxhlet
Beaker de 100 y 250mL
Mg metlico
Tubos de ensayo
Alcohol etlico
H2S04 concentrado
>-
~
~
HCI concentrado
FeCb 1% y EtOH
Lmpara de Luz UV
Alcohol amilico
Placas cromatogrficas
Acetato de Plomo 5%
8.2.4 EXTRACCiN
Fraccionar las hojas y proceder a un desengrasado
el fin de eliminar
Concentrar
cristalizaciones
DE IDENTIFICACiN
efectuar
8.2.5 REACCIONES
>-
Al residuo
cual cristalizar
empleando
las grasas,
tratarlo posteriormente
compuestos
de estructura
en alcohol, se diluye
en agua, se procede de la
>-
~ __ ~~~,-~
__ ~~~
__ ~~~~~
__ ~ __ ~~~
Universidad Los ngeles de Chimbote / Escuela de Farmacia y Bioqumica
66
>8.3
Gua de Prcticas
de FarmaCOg/10Sia
V FitOQumlca
DETERMINACiN
La hesperidina
DE LA HESPERIDINA:
es un complejo
ctroflavonolde
que se encuentra
en la
8.3.1
~
8.3.2
OBJETIVOS:
Determinar la presencia de hesperidina
FUNDAMENTO:
La Hesperidina, se caracteriza por ser soluble en alcohol diluido y como todo
flavonoide
tiene fluorescencia
alcalino.
8.3.3
8.3.4
MATERIALES
~
~
~
~
~
~
~
>8.3.4
Y REACTIVOS:
~
);>
Alcohol diluido
NaOH 1%
Beaker de 100 y 250MI
HC110%
Pipetas de 5MI
Tubos de Ensayo
Lmpara UV
CIFe3
Embudo
H2S04 concentrado
Papel Filtro
HN03 concentrado
HCI concentrado
NaOH 30%
NH3 QP
Placas Cromatogrficas
~
);>
~
~
>~
EXTRACCiN:
Tratar 5 9 de la parte blanca de la cscara de naranja con una mezcla de 20
mL de alcohol diluido y 5mL de una solucin de NaOH 10%, dejar en reposo
24 h Y aadirle HCI al 10% hasta pH 5, con lo que se consigue precipitar la
hesperidina.
Dejar en reposo y filtrar, el lquido filtrado se vuelve a dejar en reposo, filtrar
nuevamente
sobre
el anterior
y lavar
el
pp.
hasta
reaccin
neutra.
__________
~~--~~~--~--~~~--~--~~~----------------67
Universidad
Posteriormente
y Fitoqufmlca
que cristalice la
hesperidina.
8.3.5
>-
REACCIONES DE IDENTIFICACiN:
Tratar
de
H.2S04
concentrado,
>
inicialmente
da
pasa a rojo.
da coloracin
amarillo
intenso.
>
>-
>-
Observar la Fluorescencia
cromatograma
8.4
RESULTADOS:
__________
~~ __--~
Universidad
----~~--~--~~~-----------------68
/ Escuela de Farmacia y Bioqumica
8.6
CONCLUSIONES:
8.7
CUESTIONARIO:
de la rutina y la hesperidina
Color de la fluorescencia
despus
de hacer la
reaccin de Shinoda.
~
Mencione
otros
tipos
de
flavonoides
que
existan
y esquernatice
su
estructura qumica.
~
De las reacciones
de identificacin
por se producen
Propiedades
~ __ ~~~-,
Universidad
farmacolgicas
__ ~~~~
__ ~~
de los flavonoides.
__ ~~~
__ ~~~~~
70
PRCTICA N 9
DROGAS CON CUMARINAS
9.1
E IRIDOIDES
son derivados
de la -benzopirona,
es una lctona
se
cumarina
acenta
en
"coumarou'
medio
alcano.
El nombre
de
proviene
de
sustituidas en
7 por un hidroxilo.
Cumarina
Fraxino
OCH3
HO~
HCO~O~O
:3
OBJETIVO:
~
Observar la Fluorescencia
a la Luz UV
9.1.1 FUNDAMENTO:
Las cumarinas se extraen con acetona tambin en medio alcohlico dando
soluciones
coloreadas.
La Reaccin
de Baljet
es para detectar
grupos
9.1.2 MUESTRA:
un compuesto condensado.
de Len"
____~~
Universidad
__~~--~~~
__~--~~~--~~~~~-----------------73
~
~
Matraz de 250 mi
Refrigerante
Embudo
Tubos de ensayo
NaOH 5%
N03Ag 1N en acetona
FeCb
Acido Pcrico 1% en EtOH
>
NaOH 5%
Hel 0.5 mol/L
NaOH 2N
cido actico glacial
NH3
Clorhidrato de hidroxilamina
KOH 10%
en EtOH a110%
9.1.40BTENCfN:
Se toman 5 g de raz, fresca o desecada,
adiciona 50 mL de acetona
triturada
y pulverizada
y se le
una solucin
de color amarillo.
Filtrar.
Reaccin
evaporaras
de Baljet: Si la alcuota
el solvente
no se encuentra
en alcohol,
debe
en la menor
>
1%. El desarrollo
cumarinas.
~
>-
CCF.
o
Sistema de solvente:
Soporte
: Silicagel G
~-- __--~~~-----------------74
Revelador
9.2
monoterpenos
ciclopentapirnico,
australianas:
que
los
se
iridoides
caracterizan
toman
por
su
un
nombre
esqueleto
de
unas
biciclico
hormigas
Iridoide
un papel de defensa.
Loganina
VaJepotriato
HO
Q-Gluc
ORl
Loganine
9.2.1 OBJETIVO
~
la presencia de iridoides
9.2.2. FUNDAMENTO:
Se fundamenta
9.2.3 MUESTRA:
9.2.4 MATERIALES
y REACTIVOS
Matraz de 250 mi
__________
~----~--~~~~------------~~----------------75
Universidad
Capilar de vidrio
Vainillina
Papel de filtro
HCI
Alcohol de 70
Placas cromatogrficas
H2S04 concentrado
Ans aldehdo
Lmpara UV
~
9.2.5 EXTRACCIN
Macerar algunos gramos de hojas de Plantaga
Va/erana
cantidad
Off valeriana",
y finamente
triturados
en
9.2.6 REACCIONES
>-
recolectados
suficiente
espacio de
recin
DE IDENTIFICACiN
calentar suaver:nente
9.3
CCF
o
Soporte:
(63:10:27)
Silicagel G
Anisaldehdo
en medio clorhdrico
AcOH:HCI (2:8)
Lmpara UV
RESULTADOS:
__________~------------------------------~-------------------76
Universidad
9.5
CONCLUSIN:
9.6
CUESTIONARIO:
~
Qu
color de fluorescencia
tiene
la cumarina
V Fltoqumica
y cuando se aade
Qu
otras
especies
vegetales
contienen
glicsidos
cumarinicos
iridoides?
~
__________
~--------------------------------~-------------------78
los ngeles de Chimbote I Escuela de Farmacia y Bioqumica
Universidad
PRCTICA N 10
DROGAS CON TANINOS GLlCOS
y CA TQUICOS
OG
COOH
OH
~OH
08~OG
HO
0,----
HO
OH
OH
-,
Tanino glico
lB ~
OH
cido glico
10.1
,\
,\\\
OH
Catequina
OBJETIVOS:
Caracterizar
diferenciacin
~
10.2
Cuantificar espectrofotomtricamente
FUNDAMENTO:
Los taninos
degradarse
general
son sustancias
o hidrolizarse
son
coloidales
polmeros
se obtienen polifenoles
de alto peso
relativamente
molecular
que forman
simples. En
soluciones
azules o verdes,
con las
tienen capacidad
Pb+2, Hg+2.
10.3
MUESTRAS:
Vainas de Caesalpnea spnosa "tara" Raz de Krameria triandra "ratania del Per"
Hojas de Piper elongatum "matico"
__________
Universidad
~----------------~~----
de
__ ----~
---------------81
10.4
MATERIALES
10.5
Y REACTIVOS:
Tubos de Prueba
FeCb 1%
Matraz de 250 mL
KMn041%
Refrigerante
Acetato de Hg 5%
Papel de Filtro
Solucin de gelatina
Embudo
Solucin de alcaloides
Cocina elctrica
Acetato de Pb 5%
EXTRACCiN:
Preparar
extractos
anticipacin,
etanlicos
al 50 % de las muestras
con 48 horas de
REACIONES
cualitativas,
y de cuantifcacin.
CUALITATIVAS
DE IDENTIFICACiN:
y concentrar
y prep~rar una
REACCiN
DE COLORACiN
Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas del re activo de FeCb
1%;
>>-
Color azul-negruzco:
Taninos glicos
Color verde-azulado:
Taninos catquicos
REACCiN
DE XIDO REDUCCiN:
Tomar una alcuota de las muestras y aadirle gotas del reactivo de KMn04
1%. La reaccin es positiva si desaparece el color violeta del permanganato
REACCiN
DE PRECIPITACiN:
.~ __ ~~
Universidad
__ ~~
__ ~~~
__ ~ __ ~~~
__ ~ __ ~~~
Los ngeles de Chimbote / Escuela de Farmacia y Bioqumica
82
la formacin
de precipitados
por la formacin
de complejos
metlicos
REACCiN
DE
ClORHIDRICO
DIFERENCIACiN:
REACCiN
DEL
FORMOl
O REACCiN DE STIASNY
glicos
permanecen
se polimerizan
en solucin,
formando
mientras
una sustancia
10.6
10.7
MATERIALES
Y REACTIVOS:
Matraz de 250 mL
Embudo
Beaker
HCI concentrado
Refrigerante
>
Formol al 38-40%
Cocina elctrica
Pipetas de 5,10 mL
>
Papel de Filtro
FeCb
PROCEDIMIENTO:
"
30 minutos
en un sistema
de reflujo.
Los taninos
precipitados.
glicos
no forman
insolubles de color
rojo. Enfriar y filtrar la solucin, tomar una alcuota del filtrado y aadirle
gotas del reactivo de FeCI3 en presencia de acetato de sodio al 5%. Si se
forma una coloracin
elgicos.
10.8
CUANTlFICACIN
DE
TANINOS
POR
ESPECTROFOTOMETRIA:
en la capacidad
reductora
del tanino
sobre
el cido
ledo al espectrofotometro
a 700 nm.
____
~~--~~--~~~--~~~~~--~~~~~-----------------83
Los ngeles de Chimbote I Escuela de Farmacia y Bioqumica
Universidad
:
:
>
Etanol
Equipo de reflujo
Balanza Analtica
Tungstato de sodio
Erlenmeyer
>
>
Acido fosfomolbidico
Na2C03
Embudo
:
:
cido tnico
>
Papel de Filtro
>
Fiola de 50 mL
Pi eta de 5mL, 1 mL
2 mL
10.8.2 PROCEDIMIENTO
Pesar 10g de la droga en polvo, se lleva a un frasco cnico de 1000 mL con
500 mL de alcohol al 50%. Mantener en agitacin
durante 6 horas en un
agitador magntico, dejar en reposo por 8 horas, luego volver a agitar por 30
minutos y filtrar. Se transfieren
de la siguiente manera:
REACTIVOS
Solucin Muestra
Solucin de Referencia
Agua destilada
3.0 mL
5.0 mL
2.0 mL
4.0 mL
Leer la absorbancia
M1 Y M2
1.0 mL
2.0 mL
1.0 mL
10.8.3 CLCULOS:
o/
/0
T anmos
.
AmpxStxlOOO
== .
x 100
AstxMpx(IOO - %H)
__________~----------------~~----------~-------------------84
Universidad
/ Escuela de Farmacia
Bioqumica
Amp
= absorbancia
Ast
St
Mp
%H
10.9
de la muestra problema
RESULTADOS:
__________
~~--~~~--~--~~~--~~~~~----------------85
Universidad
10.12
CUESTIONARIO:
Propiedades
de los taninos
"rnatico"?
____~~--~~--~~~~~--~~~--~~~~~-----------------87
Universidad