UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE

NICARAGUA, MANAGUA

Manual de Medios de Cultivos

Departamento de Bioanlisis Clnico

MEDIOS DE CULTIVOS

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Introduccin
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa
por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura
la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los
laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que
pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente para
preparar un medio slido, se parte de un medio lquido al que se le aade un
agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel.

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Por regla general los ingredientes de los medios de cultivo se disuelven por
agitacin y calentando ligeramente en agua destilada. Los medios que contienen
agente gelificante se suelen hervir durante 1 minuto para conseguir su disolucin.
Las formulaciones de vanguardia de los medios de cultivo para aplicaciones
microbiolgicas abarcan:

Medios de cultivo deshidratados en forma de grnulos con poco polvo

Medios lquidos listos para usar y medios slidos (agar) listos para usar

Aunque en la mayor parte de los medios hay que calentar, hay que evitar
sobrecalentamientos innecesarios.
Algunos medios presentan turbidez inevitable o precipitados, por ejemplo la Base
de Caldo Tetrationato. Al distribuir el medio debe hacerse de forma uniforme, para
que el precipitado quede bien repartido.
Posteriormente a la disolucin se procede a la esterilizacin del medio. En algunos
casos existen componentes lbiles que no pueden aadirse en el medio de cultivo
deshidratado y que ser necesario su esterilizacin por separado y una posterior
incorporacin de forma asptica para obtener el medio completo.
El pH de los medios de cultivo se ajusta durante su fabricacin a los valores
descritos en cada uno de ellos. Sin embargo, la calidad del agua que se utiliza en
su hidratacin, la utilizacin de medios no recientes etc., pueden modificar este
parmetro por lo que es aconsejable verificarlo y reajustarlo si fuera necesario.
En algunos casos se puede ajustar el pH despus de la esterilizacin de forma
asptica y utilizando soluciones cidas (Acido Clorhdrico 5N) o bsicas (Hidrxido
de Sodio 5N). En los medios slidos la medida se hace a 45-50C (el agar todava
no ha gelificado) mientras que en los lquidos se hace a temperatura ambiente.
Los medios cidos (pH<5) pueden presentar malas gelificaciones debido a la
posible hidrlisis del Agar con la temperatura. Son medios que no es aconsejable
refundirlos, y si es imprescindible, es aconsejable aadirles agar.
El mtodo ms comnmente utilizado para la esterilizacin es el Autoclavado. Sin
embargo, hay ingredientes en algunos medios que no mantienen sus propiedades
si se someten a altas temperaturas.
Esterilizacin
En la etiqueta del producto se indican las condiciones de esterilizacin. A
continuacin se describen unas pautas de carcter general.

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1- Autoclavado: Exposicin durante 15 minutos a 121C. Con este tratamiento

mueren las clulas vegetativas y las endosporas bacterianas. Sin embargo, los
medios que contienen hidratos de carbono, deben esterilizarse a temperaturas no
superiores a los 116-118C, para prevenir su descomposicin y la posible
formacin de compuestos txicos que inhiban el crecimiento bacteriano.
2- Filtracin: Es el medio ms habitual cuando existen productos lbiles.
Habitualmente el producto a esterilizar se filtra a travs de una membrana de
acetato de celulosa o nitrocelulosa de un poro de 0,22 m. Las soluciones de
antibiticos, las de carbohidratos, las vitaminas, etc., se suelen esterilizar por este
mtodo y aadir al medio de cultivo ya esterilizado, cuando ste est a
temperatura no superior a los 45-50C.
3- Tindalizacin: Exposicin a 100C durante 30 minutos. Con este tratamiento
mueren las clulas vegetativas, pero no las endosporas. Cuando el medio esta
fro, se incuba bajo condiciones de germinacin de las endosporas, y si ello
ocurre, se repite el tratamiento trmico.
Existen otros procesos de esterilizacin pero los que se han descrito son
los ms habitualmente utilizados.
Precauciones con algunos Ingredientes Algunos medios contienen productos
txicos. Se deben tomar las medidas de seguridad necesarias al manipular estos
productos. Algunos de estos compuestos son: la Fucsina bsica y cida, la
Pararrosanilina, la Azida Sdica, el Sodio Selenito, etc.
Tipos bsicos de medios de cultivo
Atendiendo a su estado fsico:
lquidos.
semislidos.
slidos.
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en:
Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de
origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la
adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los
componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.
Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una
composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se
usan en trabajos de investigacin.
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De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en:

Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento
de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias
inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se
quieren cultivar (Selenito).
Medios selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) Estn
diseados para el aislamiento de microorganismos especficos. Se aaden
sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo
a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancias aadidas, se vara el tipo
y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina).
Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos
derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn
tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas
fisiolgicas de los microorganismos. Seleccionando los medios adecuados se
puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (OxidacinFermentacin)
Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que
satisfacen requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su
identificacin (Lowenstein Jensen para Mycobacterium tuberculosis).
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de
sus constituyentes bsicos, o por simple rehidratacin de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el
uso de los medios de cultivo deshidratados porque, adems de simplificar el
trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados
reproducibles.
Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:
Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o
proveedores que suministren productos de calidad.
Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y
fisicoqumica adecuada.
Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o
desmineralizada.

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 Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin.

Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante.

Conservacin de los medios de cultivo deshidratados

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados
bajo las condiciones que seale el fabricante. Generalmente se almacenan en un
lugar fresco (entre 15 y 25), con poca humedad y protegidos de la luz solar
directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de
calor o vapor.
Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos. Cuando los envases de
estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe
tener la precaucin de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien
cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorcin de agua produce
cambios de pH, formacin de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica
que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios qumicos o
estar contaminados.

Conservacin de los medios preparados

Lo ms recomendable es preparar el medio cuando se va a emplear, aunque en
muchos casos por razones obvias una parte del medio preparado se consume y el
resto se guarda como medio preparado. El tiempo de vida del medio preparado
depender de la propia naturaleza del medio, de la hermeticidad de los recipientes
que lo contienen, de la temperatura de conservacin y de las condiciones
medioambientales.
Si la hermeticidad es buena y la temperatura baja, 2-8C, la vida del medio puede
llegar a ser de 4 a 6 semanas (nunca por debajo de 0C porque se destruye la
estructura del gel). Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien
cerrados para evitar su deshidratacin y cuando se usa tapn de algodn, se debe
colocar por encima una envoltura de papel (Craft). De todas formas la refrigeracin
favorece la deshidratacin y en algunos casos, como por ejemplo, los medios para
anaerobios, la conservacin es mejor a temperatura ambiente que en frigorfico.
Se deben evitar las condensaciones, ya que el depsito de gotas de agua podr
ser causa de una alteracin casi inmediata del medio. Tampoco deben emplearse
medios preparados en los que se observe un efecto de deshidratacin, ya que la
prdida de agua puede provocar precipitados o hacer que cristalicen ciertas
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sustancias del medio de cultivo, as como originar grietas en las placas

preparadas.
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo
preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en
donde se determinan sus propiedades fisicoqumicas (apariencia, pH, etc.) y
microbiolgicas (esterilidad y promocin de crecimiento) verificando que cumplan
con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos
para su uso.

Medios preparados, listos para su uso

Estas presentaciones permiten la utilizacin del medio de forma inmediata o bien
con un previo tratamiento muy sencillo. Son medios muy delicados, especialmente
las presentaciones en placa. Por ello se recomienda la revisin del material
inmediatamente despus de su recepcin para detectar cualquier alteracin del
producto.
En los medios de cultivo que deben refundirse y que deben contener aditivos
lbiles, se suministra el medio basal preparado y segn la necesidad se deben
aadir los aditivos de forma estril.
Refundido de medios slidos: Cuando se precisa refundir los medios slidos,
preparados y estriles en frascos y tubos, para verterlos en placa, es aconsejable
hacerlo en bao mara, en microondas o en autoclave a vapor fluente. En ningn
caso debe aplicarse calor directo.
Una vez fundidos, debern dejarse enfriar hasta unos 50C para aadir los
aditivos, si fuera necesario y para distribuirlos o sembrarlos. Hay que tener en
cuenta que los medios refundidos tienen una cierta tendencia al oscurecimiento y
precipitacin, que aumenta cuando se mantienen fundidos durante periodos de
tiempo prolongados y a temperaturas entre 45-65C y que ello puede suponer una
prdida de las caractersticas nutritivas o selectivas del medio, por lo que es
aconsejable, no fundirlos ms de una vez y no mantenerlos en el calor largos
periodos de tiempo.
En este sentido son recomendables los mtodos rpidos como el que se obtiene
con el fundido de medios en el microondas, donde se debe dosificar la intensidad
de la radiacin y durante tiempos lo ms cortos posibles. Las fuertes intensidades
de radiacin, pueden provocar refundidos parciales, ebulliciones sbitas con
eventuales derrames del medio pudiendo alterar las cualidades del mismo.
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Fundamento
La preparacin adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de los
nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los
microorganismos en el laboratorio.

EJEMPLOS DE PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS

I-) AGAR MUELLER HINTON (SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA)
Fundamento:
En la preparacin de este medio es fundamental que las concentraciones de
timina, timidina y cido 4-aminobenzoico, sean lo suficiente bajas para no inhibir la
actividad antibacteriana de antibiticos y sulfamidas. Las dos primeras inhiben los
antibiticos y el ltimo las sulfamidas. El ensayo de sensibilidad de un
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microorganismo frente a un antibitico se puede realizar sobre placas de agar

Mueller-Hinton por procedimientos de difusin, por diluciones seriadas o por
tcnicas turbidimtricas en el Caldo Mueller-Hinton. En las tcnicas de difusin se
mide el halo de inhibicin del crecimiento confluente alrededor del depsito de
antibitico (discos, torrecillas, etc.). El dimetro del crculo de inhibicin es
inversamente proporcional a la concentracin mnima inhibitoria (CMI) del agente
antibacteriano.

Composicin:
Infusin de carne, hidrolizado de casena, almidn, Agar.

Procedimiento para la preparacin:

1- Pesar 38 gramos para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(7.30.1), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Autoclavear a 121 oC,15 libras de presin durante 15 minutos.
5- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC .
6- Vertir 25 ml cerca del mechero encendido.
7- Dejar secar y luego guardar los platos invertidos en incubadora a 37 oC durante
24 horas.
8- Revisar los platos cerca del mechero para ver si hubo contaminacin.
9- Empacar los platos en bolsas plsticas de forma invertidas.
10- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

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II-) AGAR SANGRE DE CARNERO (MEDIO UNIVERSAL)

Fundamento:
Este medio de cultivo universal es adecuado para el crecimiento de
microorganismos exigentes, aerobios comunes y bacterias facultativas. La
presencia de sangre permite comprobar la presencia de algunas hemolisinas y tipo
de hemlisis.
Estreptolisina O (SLO): Es lbil al oxgeno, antignica, inhibida por el colesterol y
txica para una gran variedad de tipos celulares. Debido a su labilidad frente al
oxgeno, es la responsable fundamental de la beta hemlisis, que se ve por debajo
de la superficie del agar.
Estreptolisina S (SLS): Es estable frente al oxgeno, no es antignica pero txica
para una gran variedad de tipos celulares. Es activa tanto en la hemlisis
superficial como en la profundidad del agar.
Composicin:
Triptosa, 15 g, Peptona, 5 g Extracto de levadura, 3 g Glucosa, 5 g
Cloruro sdico, 5 g Agar, 15 g.
Para su preparacin se pueden utilizar diferentes bases como: Tripticasa Soya
Agar (TSA), Triptona Blood Agar, Blood Agar Base para sangre.
Procedimiento para la preparacin:
1- Pesar 40 gramos para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(7.30.1), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Autoclavear a 121 oC,15 libras de presin durante 15 minutos.
5- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC .
6- Adicionar sangre de carnero al 5%(5 ml por cada 100 ml de base preparada)
7- Homogenizar en hot plate en fro.
8- Vertir 25 ml del medio con el mechero encendido.
9- Dejar secar y luego guardar los platos invertidos en incubadora a 37 oC durante
24 a 48 horas.
10- Revisar los platos cerca del mechero para ver si hubo contaminacin.
11- Empacar los platos en bolsas plsticas de forma invertidas.
12- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

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III-) AGAR MAC CONKEY (MEDIO DIFERENCIAL)

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Es un medio selectivo y diferencial que se emplea para discriminar las bacterias

gramnegativas en fermentadoras y no fermentadoras de la lactosa. Las sales
biliares y el cristal violeta inhiben a los grampositivos.
Fundamento:
Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de
las bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces
de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando
colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al
precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras.
Composicin:
Peptona, Sustrato, Lactosa, Inhibidores, Sales biliares y cristal violeta,
Amortiguador, Cloruro de Na, Indicador de pH Rojo neutro.

Procedimiento para la preparacin:

1- Pesar 50 gramos para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(7.10.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate .
4- Autoclavear a 121 oC,15 libras de presin durante 15 minutos.
5- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
6- Vertir 25 ml del medio con el mechero encendido.
7- Dejar secar y luego guardar los platos invertidos en incubadora a 37 oC durante
24 horas.
8- Revisar los platos cerca del mechero para ver si hubo contaminacin.
9- Empacar los platos en bolsas plsticas de forma invertidas.
10- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

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IV-) AGAR BASE GC PARA AGAR CHOCOLATE

Es un medio selectivo diferencial que se utiliza para el aislamiento de
Haemophilus spp,Estreptococcus exigentes.
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Fundamento
La mezcla de peptonas constituye el elemento nutritivo del medio. Los dos fosfatos
tamponan el pH y el Sodio Cloruro mantiene el nivel salino adecuado para el buen
crecimiento de los grmenes. El Almidn de Maz ejerce una accin neutralizante
ante la posible presencia de txicos producidos en el metabolismo bacteriano. La
adicin de los suplementos como la sangre de caballo lisada o hemoglobinsoluble
completa la funcionalidad del medio. Pueden adicionarse antibiticos para evitar el
desarrollo de flora acompaante.
Composicin:
Almidn de Maz 1,0 g,Peptona 15,0 g,Potasio di-Hidrgeno Fosfato 1,0 g,diPotasio Hidrgeno Fosfato 4,0 g,Sodio Cloruro 5,0 g,Agar 10,0 g,pH final: 7,2
0,2.
Procedimiento para la preparacin:
1- Pesar 7.2 gramos de base GC por cada 100ml de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(7.20.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Autoclavear a 121 oC,15 libras de presin durante 15 minutos.
5- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
6- Adicionar sangre de carnero al 5%, es decir 5 ml por cada 100ml de base
preparada.
7- Homogenizar en hot plate en fro hasta su total distribucin en todo la base.
8- Enfriar en bao Maria a una temperatura de 95 a 100 oC durante 10 minutos
hasta que el medio se achocolate.
9- Homogenizar en hot plate en fro para eliminar la natilla que se forma tras la
adicin de la sangre.
10- Enfriar el medio en bao Maria de 50 a 55 oC .
11- Adicionar el suplemento II (Factor X) al 1%(1ml por cada 100ml de base
preparada)
12- Homogenizar en hot plate en fro.
13- Vertir 25 ml del medio con el mechero encendido.
14- Dejar secar y luego guardar los platos invertidos en incubadora a 37 oC
durante 24 horas.
15- Revisar los platos cerca del mechero para ver si hubo contaminacin.
16- Empacar los platos en bolsas plsticas de forma invertida.
17- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

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NOTA: Los suplementos empleados para la preparacin de agar Chocolate o

Thayer Martin se reconstituyen con agua destilada segn prescripcin facilitada
por casa comercial.

V-) AGAR HTM (Para aislamiento de Haemophilus influenzae)

Fundamento: Este medio de cultivo selectivo que se emplea para hacer prueba
de susceptibilidad del Haemophilus influenzae.
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Procedimiento para la preparacin:

1- Pesar 38 gramos de la base HTM para un litro de agua destilada. Homogenizar
en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el ph (7.40.2), ajustar con
soluciones de naoh y HCL para alcalinizar o acidificar.
2- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
3- Autoclavear a 121 oC,15 libras de presin durante 15 minutos.
4- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
5- Adicionar 30 ml de factor X(Hematina) y 3 ml de factor V(NAD)
6- Vertir 25 ml del medio con el mechero encendido.
7- Dejar secar y luego guardar los platos invertidos en incubadora a 37 oC durante
24 horas.
8- Revisar los platos cerca del mechero para ver si hubo contaminacin.
9- Empacar los platos en bolsas plsticas de forma invertidas.
10- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.
NOTA: En caso de no tener la base HTM se puede realizar por ingredientes:
utilizando la base el Mueller Hinton (38 gr) mas extracto de levadura (5 gr) e igual
procedimiento de preparacin de medio de cultivo.
Preparacin de los factores: Hematina: Pesar 50mg para reconstituir con 100
ml de NaOH 0.01N ya que es insoluble en agua. La solucin de NaOH debe
prepararse el mismo da para que se logre activar la hematina y permita el
crecimiento del Haemophilus. Este factor una vez disuelto con NaOH debe
aplicarse calor es decir se debe poner bao Maria para que se active el factor. El
periodo de vigencia es de 1 mes, pasado de este tiempo la hematina ya no es
posible activarla y no crece el H.influenzae

VI-) AGAR TCBS: (MEDIO SELECTIVO)

Fundamento: El medio es utilizado para el aislamiento y cultivos selectivos de V.
cholerae y otros vibriones entero patgenos (V. parahaemolyticus).
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Composicin: Peptonas, Sustrato,Sacarosa, Inhibidores,Bilis de buey, Indicador

de pH, Azul de bromo timol y azul timol.
Procedimiento para la preparacin:
1- Pesar 89 gramos de la base para un litro de agua destilada estril.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(8.60.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate 2 3 veces.
4- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
5- Homogenizar en hot plate en fro.
6- Vertir 25 ml en cada placa petry con el mechero encendido.
7 - Dejar secar y luego guardar los platos invertidos.
8- Empacar los platos en bolsas plsticas de forma invertidas.
9- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC

CARY AND BLAIRD (MEDIO DE TRANSPORTE)

PREPARACIN DE MEDIOS DE TRANSPORTE

VII-) AGAR AMIES
Fundamento: Es un medio que se obtiene de la modificacin de medio Stuart
eliminando el glicerol fosfato y adicionando un buffer inorgnico superior. Es
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recomendado para infecciones respiratorias causdas por microorganismo

fastidiosos difcil de mantener viable como Strepcoccus, Haemophilus, Neisserias
y Listerias.
El Amies mas carbn activado permite recuperar microorganismo fastidiosos
sometidos a antibioticoterapia o expuestos a metabolitos txicos para su
desarroll.

Procedimiento para la preparacin:

1- Pesar 20 gr de medio para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(7.20.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Enfriar en bao Maria de 50 a 55oC durante 30 minutos.
5- Entubar 3 ml en tubos 100 x 13 mm rotando el medio cada vez que dispense
en cada tubo para que el medio quede uniformemente parejo.
6- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
7- Dejar enfriar y rotular.
8- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

VIII-) AGAR CHARCOAL

Fundamento: Es un medio recomendado para infecciones respiratorias causadas
por m.o fastidiosos difcil de mantener viable como Boedetella pertussis y
Bordetella parapertussis.

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Procedimiento para la preparacin

1- Pesar 64 gr de medio para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(7.20.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Enfriar en bao Maria de 50 a 55 oC durante 30 minutos rotando el medio cada
vez que dispense en cada tubo para que el medio quede uniformemente parejo.
5- Entubar 3ml en tubos estriles de 13 x 100mm.
6- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
7- Dejar enfriar y rotular.
8- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.
IX-) Cary and Blaird
Fundamento: Es un medio de transporte que se utiliza para el aislamiento de V.
cholerae y otros vibriones como el V. parahaemolyticus de muestras de heces
principalmente en pacientes convalecientes. En este caso el PH ptimo debe ser
alcalino (8.8)
Es til tambin para recuperar otro microorganismo como las enterobacterias pero
para ello se le debe ajustar el pH 7.3.

Procedimiento para la preparacin:

1- Pesar 12.6 gramos de la base para un 991 ml de agua destilada.
2- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
3- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 15 minutos.
4- Adicionar 9 ml de Ca2CI al 1% para completar los 1000 ml.
5- Homogenizar en hot plate en frio y determinar el pH (7.30.1), ajustar con
soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
6- Entubar 3 ml en viales de vidrio y tapar sin tallar mucho el tapn.
7- Esterilizar en bao Mara a una temperatura de 90 a 100 oC durante 15 minutos.
8- Dejar enfriar a temperatura ambiente
9- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.
PREPARACIN DE PRUEBAS BIOQUMICAS
X-) AGAR TSI: (TRES AZUCAR)

Fundamento: Es una prueba usada para la fermentacin de la glucosa, lactosa y

sacarosa y la produccin de H 2S por parte de la bacteria sumndole produccin de
gas. El cambio de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica
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fermentacin. Si se fermenta nicamente la glucosa el cambio de color del medio

ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos
concentrada que la sacarosa y la lactosa, adems los radicales libres no son
suficientes para hacer virar el medio.
Si se fermentan los 3 azucares hay cambio de color tanto en la superficie como en
el fondo. La presencia de burbujas que rompen el medio y a veces tienden a
expulsarlo indica presencia de gas como producto final de la fermentacin. La
produccin de H2S se manifiesta por la aparicin de un precipitado color negro
debido a la reduccin de la sal de hierro presente en el medio.
Composicin: Peptona, Sustratos, glucosa, Lactosa, sulfato Ferroso, Tiosulfato
de Sodio Indicador de pH.
Procedimiento para la preparacin
1- Pesar 60 gramos de la base para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(7.30.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
5- Entubar 3ml en tubos de 100 x13 mm.
6- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
7- Dejar los tubos inclinados para que se forme el slan para inclinacin adecuada.
8- Empacar los tubos en bolsas plsticas
9- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC

XI-) AGAR LIA

Fundamento: Es un medio que sirve para demostrar la produccin de dos
enzimas: la lisina descarboxilasa y la lisina desaminasa, adems la presencia de
sales de hierro sirve para detectar la produccin de H 2S por algunos
microorganismos.

MEDIOS DE CULTIVOS

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La descarboxilacin de la lisina ocurre en ambiente anaerbico o sea en el fondo

del tubo y se pone de manifiesto por la alcalinizacin del medio produciendo un
viraje del indicador prpura de bromocresol. La presencia de glucosa en los
componentes del LIA determina primero una reaccin de fermentacin,
produciendo acidificacin y cambio de color del medio a amarillo y el pH favorable
para la reaccin de descarboxilacin que ocurre despus, volviendo a su color
violeta original la parte del fondo del tubo.
La desanimacin de la lisina que se puede producir por los gneros Proteus y
Providencia tiene lugar en la parte superior del tubo produciendo
cido acetocarbonico que al combinarse con la sal de hierro y en presencia de
oxigeno forma un color violeta rojizo. La produccin de H 2S se evidencia por la
presencia de un precipitado negro por utilizacin de las sales de hierro.
Composicin: Peptona, Sustratos: Lisina, glucosa, citrato de amonio frrico,
tiosulfato de sodio, Indicador de pH: Rojo fenol.
Procedimiento para la preparacin:
1- Pesar 36 gramos de la base para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH
(6.70.2), ajustar con soluciones de NaOH Y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
5- Entubar 3ml en tubos de 100 x 13mm.
6- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
7- Dejar los tubos inclinados
8- Empacar los tubos en bolsas plsticas
9- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC

XII-) AGAR MIO (MEDIO SEMISOLIDO)

Fundamento: Es un medio que se utiliza para determinar la presencia de flagelos,
as como las enzimas descarboxilasa de ornitina y triptofanasa. Por lo tanto, sirve
para determinar la movilidad, descarboxilacin de la orinitina y produccin de
indol.
Procedimiento para la preparacin:
MEDIOS DE CULTIVOS

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1- Pesar 31 gramos de la base para un litro de agua destilada.

2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el PH
(7.00.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
5- Entubar 2 ml en tubos de 100 x 13 mm.
6- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
7- Los tubos no se inclinan quedan normal forma de cua.
8- Empacar los tubos en bolsas plsticas
9- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC

XIII-) AGAR UREA:

Fundamento: Detecta la presencia de la enzima ureasa. Cuando la bacteria tiene
la enzima, la urea es desdoblada a amonio y CO 2. El amonio alcaliniza el medio
haciendo virar el indicador al rosado intenso.
Composicin:
Peptona, Sustratos: Urea, Amortiguadores, Cloruro de sodio, fosfato de potasio
monobsico, Indicador de pH: Rojo fenol.
MEDIOS DE CULTIVOS

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Procedimiento para la preparacin

1- Pesar 15 gramos de agar para 900 ml de agua destilada.
2- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
3- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
4- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 45 minutos.
5- Determinar el pH de la base de urea previamente preparada (6.80.2), ajustar
con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
6- Adicionar 100 ml de la base de urea para completar los 1000 ml.
7- Entubar 3 ml en tubos estriles de 100 x 13 mm, utilizando pipeta automtica y
cerca del mechero.
8- Dejar los tubos inclinados y dejar que se enfren.
9- Empacar los tubos en bolsas plsticas
10- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

Preparacin de la base de urea: Suspenda 29 gr de la base de urea en 100 ml

de agua destilada. Mezcle bien y luego esterilizar por el mtodo de filtracin de
membrana 0.22 m o 0.45 m y guardar a temperatura de 4 a 8 oC.
Preparacin de la base de urea (V/V) segn MERCK:
1- Suspenda 21gr de la base de urea en 900 ml de agua destilada.
2- Disolver y ajustar PH con soluciones de NAOH o HLC de ser necesario su PH
final es de 6.8 0,2.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
MEDIOS DE CULTIVOS

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5- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC.

6- Adicionar 100 ml de urea al 40% para 1000 ml de base preparada..
7- Entubar 3 ml en tubos estriles de 100 x 13 mm, utilizando punta esterilizada
con pipeta automtica y cerca del mechero.
8- Dejar los tubos inclinados y dejar que se enfren.
Preparacin de urea 40%. Mtodo por filtracin
Suspenda 40 gr de urea grado reactivo (GR) en 100 ml de agua destilada
disolver por homogenizacin manual y luego filtrar con membrana 0.22 m o
0.45 m y guardar a temperatura de 4 a 8 oC.
Medios para tcnica de filtro de membrana: Azcares, urea, etc
Recomendaciones:
La utilizacin de las tcnicas de filtracin se ha impuesto en diversas disciplinas
por una serie de ventajas que aporta a distintas problemticas. La filtracin
permite la concentracin de grandes volmenes de lquidos con pequeas
poblaciones de microorganismos, permite separar a los microorganismos del
medio en que se encuentran, incluso transferirlo a otros, sin interrumpir su ciclo de
crecimiento.
Esencialmente la tcnica consiste en filtrar el producto a travs de un filtro de 0,22
micras o 0,45 micras, segn determinacin, ayudado por un sistema de vaco. Si
el fluido filtrado contena inhibidores, se lava la membrana varias veces para
asegurar su eliminacin. La membrana se recupera de forma asptica y se coloca
en el medio de cultivo adecuado segn la determinacin que se desea realizar.
Para la enumeracin de colonias, se utiliza un medio slido o una almohadilla
absorbente impregnada de medio lquido. La membrana debe entrar en contacto
con el medio sin que queden burbujas de aire entre ellos que limitara el
crecimiento de los microorganismos.
XIV-) AGAR SIMONS CITRATO
Fundamento: Determina la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato
como nica fuente de carbono.
Composicin:
Citrato de Na, fosfato de amonio monobsico, Amortiguadores: Fosfato de potasio
di bsico, cloruro de sodio, sulfato de magnesio, Indicador de pH: Azul de
bromotimol.

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Procedimiento para la preparacin

1- Pesar 23 gramos de la base para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH (7.0
0.2), ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Hervir hasta disolver en calor en hot plate.
4- Enfriar en bao Mara a una temperatura de 50 a 55 oC durante 15 minutos.
5- Entubar 3 ml en tubos de 100 x 13 mm.
6- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
7- Dejar los tubos inclinados
8- Rotular y empacar los tubos en bolsas plsticas
9- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

XV-) CALDO MRVP (ROJO DE METILO Y VOGUES PROSKAUER)

Fundamento del MR:
Esta prueba permite diferenciar 2 vas metablicas para la utilizacin de la
glucosa: cido mixta y butanodilica.Las bacterias RM positivas producen grandes
cantidades de cidos, capaces de disminuir el pH < 4.4.
Las bacterias RM negativas continan metabolizando los cidos hasta productos
neutrales que causan una reversin del pH inicial hasta 6.902. Este
comportamiento diferencial se pone en evidencia al agregar un indicador de pH
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(Rojo de Metilo) que vira de color al rojo si el pH del medio es menor de 4.4 o no
vara de color si el pH est por encima de ese valor o es amarillo si el pH es > 6.2
Fundamento del VP:
Evala la utilizacin de la glucosa por una va alterna a la del cido pirvico.El
producto terminal es el acetil metil carbinol (acetona, 3-hidroxi-2-butanona), un
compuesto incoloro que es detectado en dos pasos: 1. alcalinizacin del medio
con hidrxido de potasio (KOH al 40%). En presencia de oxgeno, el compuesto
vira a lo cual provoca, en presencia del Oxigeno, la oxidacin del Acetil-MetilCarbinol a diacetilo. 2. Al agregarle alfanaftol, el diacetilo vira a un color zapote
intenso.
Composicin:
Peptonas, Sustrato: Glucosa, Amortiguador: Fosfato de potasio di bsico.
Procedimiento para la preparacin
1- Pesar 17 gramos de la base para un litro de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver el medio y determinar el pH,
ajustar con soluciones de NaOH y HCL para alcalinizar o acidificar.
3- Entubar 2 ml en tubos de 100 x 13 mm.
4- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
5- Enfriar a temperatura ambiente.
6- Rotular y empacar los tubos en bolsas plsticas
7- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC.

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PREPARACIN DE REACTIVOS Y SOLUCIONES

1- SOLUCION SALINA AL 0.85%
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Fundamento: Es una solucin que se utiliza para hacer suspensiones de

diferentes microorganismos, ya sea para serologa, pruebas bioqumicas
(ONPG,PYR, Esculina, Urea en disco) o para susceptibilidad.
Procedimiento para la preparacin
1- Pesar 0.85 gr de cloruro de sodio para 1000 ml de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver.
3- Entubar 3 ml en tubos estriles de 13 x 100 mm usando dispensador.
4- Autoclavear a 121 oC, 15 libras de presin durante 15 minutos.
5- Dejar enfriar y rotular.
6- Guardar en cuarto frio a una temperatura de 4 a 8 oC
2- SOLUCION DE KOH AL 40%
Fundamento: Es una solucin que se utiliza para evidenciar reacciones en la
prueba de VP.
Procedimiento para la preparacin:
1- Pesar 40 gr de KOH para 100 ml de agua destilada.
2- Homogenizar manualmente por rotacin.
3- Guardar en frasco mbar.
4- Guardar a una temperatura de 4 a 8 oC
3- SKIM MILK AL 20 %.
Fundamento: Es un medio que se utiliza especialmente para guardar y preservar
cepas de diferentes microorganismo.
Procedimiento para la preparacin
1- Pesar 20 gr de leche pasteurizada para 100 ml de agua destilada.
2- Homogenizar en hot plate en frio para disolver.
3- Adicionar 1.8 ml en viales plsticos y poner en gradilla cubierta con papel
aluminio.
4- Esterilizar en autoclave por 10 minutos a 100 oF.
5- Enfriar a temperatura ambiente.
6- Guardar a una temperatura de 4 a 8 oC.
4- REACTIVO DE INDOL
REACTIVOS A UTILIZAR:
4 DIMETILAMINOBENZALDEHIDO --------------10 GR.
BUTANOL---------------------------------------------------750 ML.
CIDO CLOHIDRICO------------------------------------250 ML.
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Primero se pesar 10 de gr de 4 dimetilaminobenzaldehido seguidamente se

disuelve con el butanol esto se termina de disolver en bao maria a temperatura
de 50 a 55oC una vez disuelto se le agrega lentamente el cido clorhdrico y listo
para su uso guardar en frasco mbar a temperatura de 4 a 8 oC.

5- PREPARACIN DE REDUCCIN DE NITRITO A NITRATO

Solucin A
Acido Sulfanilico pesar 0.8 gr y disolver en 100 ml cido Actico.
Solucin B
AlfaNaftilamina pesar 0.5 gr y disolver en 100 ml cido Actico.
Rotular y guardar en frasco mbar a temperatura ambiente.

6- PREPARACIN DE CIDO CLORHIDRICO AL 5 N

HCI = 131.57894
H2O = 868.4211

FORMULA A UTILIZAR
V1 = V2 C2

1000 ML

C1
= 1000 ml x 5%

= 131.6 mL

38%
131.6 mL de HCI para 868.4 de agua destilada para un total de 1000 ml

7- PREPARACIN DE HIDRXIDO DE SODIO AL 5 N

Pesar 400 gramos de NaOH para un litro de agua destilada total de preparacin al
5 normal.
Esto al agregar el agua al hidrxido se homogeniza por rotacin manual hasta su
total disolucin.
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8- PREPARACIN DE CLORURO DE POTASIO AL 3 MOLAR

PM KCI = 35.5 + 39 = 74.5 GR
74.5 gr de KCI - 1M
X

- 3M

X = 74.5 X 3

= 223.5 gr KCI /litro

1
X = 223.5 / 10 = 22.35 para 100 ml de agua destilada

9- PREPARACIN DE ALFA NAFTOL

Pesar 5 gramos de naftol 1.
Disolver en 100 ml de alcohol etlico al 95%
Guardar en frasco mbar a temperatura de 6 oC a 8o C.

10- PREPARACIN DE REACTIVOS

SUPERFICIE EN LA REA DE TRABAJO

PARA DESCONTAMINACIN

DE

REACTIVOS A UTILIZAR:

k2cr2o7. Pesar 750 gramos.

Agua destilada medir 9000 ml.
H2So4. 1000 ml.
Pesar primero el Dicromato de Potasio, y diluir en 9000 ml de agua destilada una
vez disuelto se agrega lentamente el cido Sulfrico y lista la solucin para su
uso.
11- PREPARACIN DE ESCALA DE MAC FARLAND
Pesar 1.175 gramos de cloruro de bario disolverlo en 100 ml de agua destilada.
En un matraz volumtrico de 100 ml medir 100 ml de agua destilada estril y quitar
con pipeta automtica 50 microlitros de agua y reponela con 50 microlitros del

MEDIOS DE CULTIVOS
Para el estndar mac farland de 0.5 ambasPgina
alcuotas31
Lecturas aproximadas en el espectrofotmetro.

cloruro de bario preparada tapar con tapa y homogenizar y medir en

espectrofotmetro frente a una absorbancia de 620 nanmetros.
0.0897
0.0905
Una vez realizada la lectura medir con equipo de lectura de tubidometro el rango
de lectura debe de ser de 0.5.
Despus se entuba 5 ml en tubos de tapn rosca, sellarlo con parafil y guardar a
temperatura de de 6 oc a 8o C.

12- PREPARACIN DE REACTIVOS PARA CONTROL DE RESIDUOS

DTERGENTE EN LA CRISTALERIA DE LABORATORIO

DE

Pesar 0.16 gramos de Azul de Bromotimol en 16 ml de NaOH al 0.01N esto se

disuelve en 250 ml de agua destilada.
Disolver 0.1 de Azul de Bromotimol en 16 ml de NaOH al 0.01N para 234 mL de
agua destilada esto se hace por aforo en un baln esmerilado.
El color de la solucin preparada es verde.
La prueba consiste en que a la cristalera una vez lavada se adiciona una gota de
la solucin de Azul de Bromotimol en las paredes del material a hacerle prueba
dejando que esta se deslice por el cristal si esta en su trayecto no cambia de color
el cristal esta sin residuos de detergente, esta bien lavada. Pero si esta cambia de
color verde a amarillo al instante quiere decir que la cristalera presenta residuos
de detergente, esta mal lavada.

MEDIOS DE CULTIVOS

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ANEXOS

CADUCIDAD DE ALGUNOS MEDIOS DE CULTIVOS ENTUBADOS SEGN

TEMPERATURA Y SEGURIDAD DE CIERRE

MEDIOS DE CULTIVOS

Pgina 33

CIERRE NO HERMETICO

Medios de Cultivos

4o C

CIERRE
HERMETICO
EN BOLSAS
PLASTICO

TAPON DE
ROSCA
SELLADO

SEMANAS

To AMBIENTE
MESES

To AMBIENTE
MESES

To AMBIENTE

Agar Bilis Esculina

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar Simons Citrato

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar Lisina

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar MIO

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar Mueller-Hinton

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar OF Mdium

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar Sangre

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar T.S.I

3-4

1-2

2-4

3-6

Agar Urea Christensen

3-4

1-2

2-4

3-6

CADUCIDAD DE ALGUNOS MEDIOS DE CULTIVOS EN PLACAS SEGN

TEMPERATUTA DE ALMACENAMIENTO Y PROTECCION
MEDIOS DE
CULTIVOS

TEMPERATURA A 4 C

TEMPERATURA A 4o C

SIN BOLSAS PLASTICAS

CON BOLSAS PLASTICAS

MEDIOS DE CULTIVOS

Pgina 34

Agar Sangre

15 das

50 das

Agar Chocolate

15 das

60 das

Agar Thayer Martin

15 das

60 das

Agar Mueller-Hinton

15 das

70 das

Agar Mac Conkey

15 das

70 das

Agar EMB

15 das

70 das

Agar CLED

15 das

70 das

Agar Saboraud

21 das

90 das

Agar Manitol Sal

15 das

60 das

Agar Salmonella
Shigella

6 das

10 das

CADUCIDAD DE ALGUNOS CALDOS ALMACENADOS EN DISTINTAS

CONDICIONES
CIERRE NO HERMETICO

Medios de Cultivos

CIERRE
HERMETICO
EN BOLSAS
PLASTICO
4o C

MEDIOS DE CULTIVOS

To

To

TAPON DE
ROSCA
SELLADO
To
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AMBIENTE
SEMANAS

AMBIENTE
MESES

AMBIENTE
MESES

Caldo MuellerHinton

3-4

1-2

2-4

3-6

Caldo BHI

3-4

1-2

2-4

3-6

Caldo TSA

3-4

1-2

2-4

3-6

Caldo Selenito F

3-4

1-2

2-4

3-6

Caldo Tetrationato

3-4

1-2

2-4

3-6

Caldo de azcar 1%

3-4

1-2

2-4

3-6

INDICADORES BIOLGICOS
Control de Esterilidad
Para el control de los ciclos de esterilizacin en autoclave
Sirven para controlar los ciclos de esterilizacin por vapor saturado a 121C. Cada
ampolla de contiene una suspensin de esporas de Bacillus stearothermophilus
(ATCC n 7953) en un medio de cultivo que contiene prpura de bromocresol, el
cual juega el papel de indicador de pH. El crecimiento bacteriano produce cido
que hace virar el indicador prpura de bromocresol a amarillo.
MEDIOS DE CULTIVOS

Pgina 36

Frecuencia de uso
Para controlar mejor los productos esterilizados se recomienda incluir una o ms
ampollas de Indicadores Biolgicos en cada una de las cargas.
Precauciones
Destinados nicamente a los ciclos de esterilizacin por vapor a 121C. No utilizar
despus de la fecha de caducidad.
Debido a que contienen cultivos vivos, las ampollas deben manipularse con
prudencia.
Conservacin
Conservar entre +2 y +8C. NO CONGELAR
Eliminacin
Esterilizar todas las unidades positivas o caducadas antes de su eliminacin.
Instrucciones de Uso
A. EXPOSICIN: Colocar uno o varios Bio-indicadores en los lugares de ms
difcil esterilizacin del autoclave. Normalmente se colocan en las canalizaciones o
en suspensin en un volumen lquido. Realizar un ciclo.
Advertencia: Manipular las ampollas cuidadosamente ya que, una vez
esterilizadas, su contenido estar a alta temperatura y bajo presin. Para evitar la
explosin de la ampolla, dejar enfriar el tiempo suficiente (10-15 minutos).
B. INCUBACIN: Colocar la ampolla tratada en posicin vertical en una estufa
incubando de 55 a 60C. Para asegurar la viabilidad de las esporas, poner una
ampolla de control junto con las ampollas procesadas. Se recomienda para este
fin un perodo de incubacin de 48 horas.
C. CONTROL: Revisar las ampollas todos los das durante el transcurso de la
incubacin y anotando cualquier incidencia. Localizar y eliminar las ampollas
positivas inmediatamente
D. INTERPRETACIN:
Control: La ampolla de control debe presentar turbidez y/o cambio de color hacia
amarillo. El test no es vlido, si la ampolla de control no presenta cambios.
Test: El proceso de esterilizacin no ser correcto si la ampolla test presenta
turbidez o cambio de color (amarillento).
MEDIOS DE CULTIVOS

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 Una ampolla test que conserve su color prpura indicara un ciclo de

esterilizacin correcto.

Caractersticas de resistencia
Resisten en el vapor saturado a 121C.
Tiempo de supervivencia (en minutos) = no menos de (valor-D indicado) x [(log10
del recuento de esporas encontrado por soporte)-2](1)
Tiempo de muerte (en minutos) = no ms de (valor-D indicado) x [(log10 del
recuento de esporas encontrado por soporte)+4](1)
Ejemplo de certificado de lote Organismo: Bacillus stearothermophilus ATCC n
7953 Poblacin (2): 1,0 x 104 unidades formadoras de colonia / 4 ml suspensin

CARACTERISTICAS DE RESISTENCIA
En vapor saturado:
TEMPERATURA SUPERVIVENCIA MUERTE 121,1 0,5C 3,2 minutos- 12,8
minutos
ALMACENAMIENTO: Mantener refrigerado entre 2-8C.
ELIMINACIN: No debe utilizarse nunca despus de la fecha de caducidad.
Esterilizar todos los cultivos antes de eliminarlos. Est recomendado nicamente
para evaluar procesos de esterilizacin por vapor saturado a 121C.
Los indicadores biolgicos cumplen con las especificaciones de calidad del
fabricante, as como con los requisitos de la USP24
RECOPILADO POR:
Roberto Enrique Flores Daz
Docente Departamento Bioanlisis Clnico
POLISAL-UNAN-MANAGUA

MEDIOS DE CULTIVOS

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BIBLIOGRAFA
Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de
Mtodos Generales (2da edicin). Facultad de Farmacia. Universidad
Central de Venezuela.
Difco y BBL. 2003. Manual de Medios de Cultivo Microbiolgicos.
dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm
Merck. 2002. Microbiology Manual.
Manual Bsico de Microbiologa CULTIMED.

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