Informe N. 2 Instru

Ao de la consolidacin de Mar de Grau
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de Amrica)
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

E.A.P DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
OBTENCION DEL ESPECTRO DE AZOSULFAMIDA LONGITUD DE ONDA OPTIMA

Y CURVA DE RINGBOWN
Asignatura:
Qumica Analtica
Instrumental.
Docente:
Norma Carlos Casas.
Grupo:
Jueves de 10:00 am 2:00
pm
Integrantes del grupo:
Abanto Bello, Angela Rebeca.

Cndor Ambulay, Pablo Csar.
Osorio Ayala, Mara Elena
Reyes Len, Ronald Alberto.
Tito Pillaca, Nancy Jenny.
LIMA PER
2016 - II
I.
OBJETIVOS:
Aprender a graficar la curva de Ringbom
Demostrar el postulado de la ley de Beer
II.
FUNDAMENTO:
La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y se basa en
la relacin que existe entre la absorcin de la luz por parte de un compuesto y su
concentracin. Cada sustancia tiene su propio espectro de absorcin, el cual es una
curva que muestra la cantidad de energa radiante absorbida.
Una de las alternativas de cuantificar la sensibilidad espectral de los fotorreceptores
es a travs de su absortancia. El espectro de absorcin es la funcin que nos da la
absortancia para cada longitud de onda. Sin embargo se han encontrado pocas
excepciones a la generalizacin de que la absorbancia est relacionada en forma
lineal con la longitud de la trayectoria. Por otra parte, se ha encontrado desviaciones
frecuentes de la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentracin cuando la longitud es constante. Para que no ocurra errores durante
nuestro anlisis y hacerlo de manera adecuada hacemos uso de la curva de
Ringbown.
La curva de Ringbown relaciona la absortancia con la concentracin del analito. Se
da la medicin de la absorbancia de diferentes concentraciones del analito, se
procede a hallar el porcentaje de transmitancia y con esto la absortancia, luego se
relacionara sus concentraciones y de acuerdo a la curva espectral reconoceremos la
contraccin ptima en la cual cumpla con la ley de Lambert-Beer.
El intervalo de concentracin ptimo para un mtodo analtico y un aparato
determinados se puede establecer mediante un grfico llamado de Ringbown, en el
que se representan en ordenadas las transmitancias por ciento y en las abscisas los
logaritmos de las concentraciones del constituyente buscado. Si el intervalo de
concentraciones tomadas para construir este grafico es suficientemente amplio, se
obtendr una curva de tipo sigmoideal con una porcin central rectilnea. Esta parte
central virtualmente recta del grfico de Ringbown corresponde al intervalo ptimo
de concentraciones.
III. DESARROLLO DE LA PRCTICA:
Prender el estabilizador
220v
Encender el espectrofotmetro
Mientras tanto tenemos que ir preparando la

sustancia estndar (azosulfamida) a diferentes
concentraciones:
0.1/mL;0.5/mL;1/mL;3/mL;4/mL;6;8;10;1
2;14;16;18;20;25;30;40;45;50;60;80;100/mL
Al tener ya todas las disoluciones de

diferentes concentraciones pasaremos a
llevarlo
al
espectrofotmetro
para
determinar el % de transmitancia
Seleccionar la longitud de onda

(450nm a 600nm)
Primero el blanco es insertado en el

paso de luz
Luego nos dar un porcentaje de

transmitancia y nosotros debemos de hallar
la absortancia restando 100-%T
IV.
RESULTADOS:
ESPECTROFOTOMETRO:
Marca: Termo Scientific
Modelo: Genesys 10S UV-UIS Espectro Photometric
Sustancia: Azosulfamida
Longitud de onda en la que se trabaj: 525 nm.
Concentracin
g/mL
0.1
%Transmitancia
(%)
Absortancia
(100-%T)
98
0.5
89.3
10.2
92.1
7.9
82.5
17.5
77.8
22.2
68
32
66.1
33.9
10
52.6
47.4
12
52.8
47.2
14
46.1
53.9
16
40.7
59.3
18
34.8
65.2
20
33.5
66.5
25
23.1
76.9
30
15.6
84.4
40
91
45
6.7
93.3
50
4.8
95.2
60
1.6
98.4
80
0.9
99.1
100
0.2
99.8
V.
CUESTIONARIO:
1. A qu se deben los mximos de absorcin en una curva espectral?

A partir de una solucin diluida de un compuesto, cuya absorbancia mxima entra dentro
del rango de medida del espectrofotmetro, se ver el valor de absorbancia a diferentes
longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solucin de la
muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorcin se obtendr el valor de al
que el compuesto presenta la mayor absorbancia ( mx.). Dicho se utilizar a la hora
de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El espectro de
absorcin de un cromforo depende, fundamentalmente, de la estructura qumica de la
molcula.
No obstante, hay una gran cantidad de factores que originan variaciones en los valores
de mx. y M, entre los que se incluye el pH, la polaridad del solvente o molculas
vecinas y la orientacin de los cromforos vecinos; y cada uno afecta de forma
particular. Por ejemplo, variaciones originadas por cambios de pH son debidas al efecto
de ste sobre la ionizacin del compuesto. A continuacin se muestran como ejemplo
los espectros de absorcin de HNTS (un reactivo empleado para la determinacin de
especies oxidantes) y comprobndose que por espectrofotometra se puede seguir el
efecto que ejercen el pH y los oxidantes.
Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones de
diferentes concentraciones del mismo, determinndose para cada una de ellas el valor
de absorbancia a mx. Estos valores de absorbancia se representan en el eje de
abscisas (eje de x) y los de concentracin en el eje de ordenadas (eje de y). Se
observar que, a bajas concentraciones, el aumento de concentracin se corresponde
con un incremento lineal en la absorbancia (zona de cumplimiento de la ley de LambertBeer). A concentraciones altas la linealidad se pierde y se observa que la lnea se
aplana, por lo que las medidas son poco fiables. La representacin de Lambert-Beer, A
= cl, nos permitir calcular el valor del coeficiente de extincin molar, que corresponde
a la pendiente de la recta. (1)
2. Deacuerdo a la estructura qumica del compuesto estudiado ubique
el o los grupos cromforos, seale las transiciones electrnicas

respectivas
CROMOFOROS
ESTRUCTURA
TRANSICIONES
ELECTRNICAS
Aso
Alqueno
3. Cules son las transiciones electronicas y sus valores de longitud
de onda de maxima absorcion, en que consisten las bandas b, e k y

r que presentan los hidovarburos aromticos?
Son generadas entre distintos niveles de energa, proveniente de la absorcin de la
radiacin. Existen cuatro tipos de transiciones. A) * B) * C) n * D) n *
1.
Transiciones *. Se presentan en todos los compuestos orgnicos. Son en

general de gran energa (UV de vaco) e intensidad.
2. -Transiciones "* y "*. Son posibles solo en compuestos insaturados. Son

transiciones de baja intensidad (regiones de definicin de los orbitales
involucrados diferentes)en el UV lejano. Carecen de inters prctico.
3. Transiciones n*. Se presentan en compuestos con heterotomos (O, N, S, Hal),

generalmente en la regin cercana a los 200 nm. La intensidad es variable
dependiendo de la naturaleza del orbital n
4. Transiciones *. Presentes solo en compuestos insaturados. En ausencia de
conjugacin estas transiciones se presentan en UV de vaco. Dan lugar a bandas
intensas que `pueden aparecer en UV cercano si est presente insaturacin
conjugada.
5. Transiciones n*. Presentes en compuestos insaturados con heterotomos

(grupos carbonilo, nitro, azo, tiocarbonilo). Dan lugar a bandas dbiles
usualmente en la regin UV cercana (baja energa de transicin).
. EN QUE CONSISTEN LAS BANDAS B, E K Y R QUE PRESENTAN LOS
HIDOVARBUROS AROMATICOS
Un caso aparte son los hidrocarburos aromticos que poseen dos absorciones
caractersticas conocidas como banda E (etilnica) y banda B (bencenoide) que se ven
modificadas por la presencia de dobles enlaces conjugados (E -> K (conjugacin)) y la
presencia de elementos con pares de electrones sin compartir: banda R (radicalaria)
4. En qu consiste la absortividad molar? Qu factores hacen variar
sus valores?
La absortividad molar es una constante de proporcionalidad, donde su magnitud
depender de la concentracin (moles por litro), longitud de la celda (centmetros),
de las especies y de la probabilidad de que tenga lugar una transicin que absorba
energa.
Absortividad molar
5.
De acuerdo a la curva de Ringbown, explique y fundamente A qu

se debe la formacin de mesetas, inferior y superior?
Se fundamenta segn la ley de Beer: a mayor concentracin mayor absorbancia
y menor transmitancia. Como se trabaj con soluciones diluidas y concentradas de
azosulfamida, en las soluciones concentradas el %T ser menor y la absortancia
hallada ser mayor segn la frmula: A= 100-%T esto originar en la curva de
Ringbown mesetas superiores, de la misma manera con soluciones diluidas se
genera mesetas inferiores.
6. Investigue en los principales errores en la lectura de absorbancia
relacionados con la concentracin

absoluto /
Cul es la aplicacin prctica de la curva de
crackford?
Bien sea una medida directa (la que da el aparato) o indirecta (utilizando una frmula)
existe un tratamiento de los errores de medida. Podemos distinguir dos tipos de errores
que se utilizan en los clculos:
Error absoluto. Es la diferencia entre el valor de la medida y el valor tomado como
exacta. Puede ser positivo o negativo, segn si la medida es superior al valor real o
inferior (la resta sale positiva o negativa). Tiene unidades, las mismas que las de la
medida.
Error relativo. Es el cociente (la divisin) entre el error absoluto y el valor exacto. Si se
multiplica por 100 se obtiene el tanto por ciento (%) de error. Al igual que el error
absoluto puede ser positivo o negativo (segn lo sea el error absoluto) porque puede
ser por exceso o por defecto. No tiene unidades.
Esta grfica indica que el error depende en forma compleja de la medida de la

transmitancia y para valores muy bajos o muy altos de transmitancia, el error en la
concentracin crece exponencialmente, mientras que para valores intermedios el error
permanece aproximadamente constante, presentndose un mnimo error en la
concentracin para la transmitancia correspondiente a 0.368 o 36.8 %T.
VI.
DISCUSIN:
Un buen anlisis sea cuantitativo o cualitativo, debe ser considerado
cuando se trabaje en una zona optima, libre de errores o de que
estos sean mnimos, la curva de Ringbown nos determina una zona
de trabajo de acuerdo a las concentraciones y de la absortancia;
debemos discernir entre en el trmino absorbancia y absortancia.
La absortancia es la fraccin de radiacin incidente absorbida por la
muestra; mientras que la absorbancia es la intensidad de la luz con
una longitud de onda especfica y que es pasada por una muestra.
(Harris, 2001).
La curva de calibracin sirve para determinar la zona de trabajo y
permite evaluar la sensibilidad del mtodo, es posible utilizar menor
cantidad de muestra para as obtener una mayor pendiente. Lo cual
sera una buena observacin para la prctica ya que utilizamos
cantidad no medidas de las muestra problema. (Eugene, 2004).
En la prctica realizada del laboratorio se trabaj con la solucin

azosulfamida, el cual era nuestro analito, se procedi a preparar una
solucin de 1ml en 100 ml, el cual contena 500 ug/ml y luego a partir de
esta se prepar diferentes soluciones con diferentes concentraciones de
100ug/ml, 80 ug/ml, 60 ug/ml, 50 ug/ml, 45 ug/ ml, 40 ug/ml, 30 ug/ml, etc.
Para efectuar el anlisis de las soluciones en el espectrofotmetro, se
utiliz una longitud de onda de 525nm, pues como se determin
anteriormente a esta longitud la absorbancia (luz que se absorbe al incidir
sobre un cuerpo) es mayor y el porcentaje de transmitancia (luz que al
incidir sobre un cuerpo lo atraviesa y no se absorbe) es menor. Segn la
ley de Lambert-Beer la absorbancia es directamente proporcional a su
concentracin, pues a mayor nmero de molculas mayor interaccin de

luz con ellas y esto se pudo comprobar pues cuando tuvimos la
concentracin de 100 ug/ml se tuvo un porcentaje de transmitancia de
0,2%, esto nos quiere decir que hubo mayor absorbancia y menos luz
atraves la muestra, en cambio, cuando se utiliz la concentracin de 0,1
ug/ml, se tuvo un porcentaje de transmitancia de 98%.
VII.
CONCLUSIONES:
Se concluye que mediante esta tcnica a partir de los valores de transmitancia,

nos servir para hallar los valores de absortancia ( ABSORTANCIA = 100 - %T)
que nos servir luego para trazar la grfica de la curva sigmoidal (curva de
Ringbown) en relacin absortancia vs. Concentracin.
Logramos comprobar mediante los datos obtenidos con el espectrofotmetro , la

ley de Beer , donde nos dice que a mayor concentracin menor transmitancia y
que a menor concentracin hay mayor transmitancia, estando en razn
directamente proporcional absorbancia con concentracin.
VIII.
BIBLIOGRAFA:
1. Skoog D. Principios de anlisis instrumental. Mxico: EDITORIAL

CENGAGE; 2008. Pag. 336
2. Rodrguez C. Gmez H. Retegui S. ESTUDIO DE LA SENSIBILIDAD
ESPECTROFOTOMETRIS DEL CROMO (III) Y DEL CROMO (VI).
Revista Peruana de Qumica e Ingeniera Qumica. vol. (5) N (1). 2002.
Pg. 29-36
3. Clavijo A. Fundamentos de qumica analtica: equilibrio inico y anlisis
qumico. Bogot: Unibiblos; 2002. Pg. 828.
4. Artigas J. Fundamentos de colorimetra. Valencia: Maite Simn; 2002.
Pg. 27.
5. 1.- Harris D. Anlisis Qumico Cuantitativo. 5 Edicin. Editorial Revert.
Espaa; 2001.
6. Eugene O. Mtodos pticos de anlisis. 1 Edicin. New York: edit.
Revert 2004.
7. Abril, N. Espectrofotometra: Espectros de absorcin y cuantificacin
colorimtrica de biomolculas. Departamento de bioqumica y biologa
molecular. 2010. Vol. (1). Pg. 4-5.

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III. DESARROLLO DE LA PRCTICA:

Mientras tanto tenemos que ir preparando la

Al tener ya todas las disoluciones de

Seleccionar la longitud de onda

Primero el blanco es insertado en el

Luego nos dar un porcentaje de

1. A qu se deben los mximos de absorcin en una curva espectral?

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3. Cules son las transiciones electronicas y sus valores de longitud

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2. -Transiciones "* y "*. Son posibles solo en compuestos insaturados. Son

3. Transiciones n*. Se presentan en compuestos con heterotomos (O, N, S, Hal),

5. Transiciones n*. Presentes en compuestos insaturados con heterotomos

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Esta grfica indica que el error depende en forma compleja de la medida de la

En la prctica realizada del laboratorio se trabaj con la solucin

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