Manual de Hematologia

Instructivo para el procesamiento de
muestras del rea de Hematologa
Cdigo: I-FQUI-LAC-02
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1.- OBJETIVO
Realizar de manera correcta las diferentes metodologas para el procesamiento de muestras
biolgicas; as como brindar informacin sobre la utilidad de la realizacin de las mismas.
2.- ALCANCE
Aplica a todas muestras biolgicas referenciadas al rea de Hematologa
3.- DESCRIPCIN DE LA OPERACIN

Los datos de los usuarios a quienes les soliciten nicamente Velocidad de Sedimentacin Globular,
Reticulocitos, Clulas LE y/o Grupo-Rh debern:
Ser transcritos en el formato F-FQUI-LAC-72.
Toda muestra deber:
Tener una etiqueta con cdigo de barras y un nmero asignado segn la orden de trabajo.
Ser analizada segn instructivo I-FQUI-LAC-02.
Los resultados del proceso debern:
Ser transcritos en los formatos F-FQUI-LAC-18, F-FQUI-LAC-20, F-FQUI-LAC-21, F-FQUILAC-72, F-FQUI-LAC-88.
Ser capturados en el sistema Syslabs.
Ser firmados por el responsable del rea de Hematologa, o personal asignado a la misma,
en los formatos antes mencionados.
Ser entregados al rea de recepcin debidamente transcritos en los formatos
correspondientes.
Diariamente se deber:
Procesar materiales de control de calidad: Controles e-check en 3 niveles, (L1-bajo, L2normal y L3-alto), de acuerdo a la Gua rpida del analizador XS-1000i proporcionada por
el fabricante; Controles Biorad en 3 niveles (1-bajo, 2-normal y 3-alto) de manera manual
como muestra sin diferencial.
Actualizar la bitcora de mantenimiento y uso diario del Sysmex XS-1000i (F-FQUI-LAC-54)
y la hoja estadstica de estudios (F-FQUI-LAC-48).
No se procesarn muestras coaguladas.
En caso de ser muestras remitidas, no se aceptarn si han sido recolectadas el da anterior.
Las muestras biolgicas (sangre total) procedentes del rea de toma de muestras son transportadas
por el personal del laboratorio hacia el rea de Hematologa.
1.- Procesamiento de control de calidad interno segn Gua rpida del Sysmex XS-1000i.
F-CIPLADE-CC-39/REV:00

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2.- Cada una de las muestras biolgicas es procesada segn el instructivo I-FQUI-LAC-02.
3.- Los resultados son registrados en los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72.
4.- Los resultados registrados en los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72 son transcritos en el
programa Syslabs de la siguiente manera:
4.1.- Se enciende la computadora (regulador, CPU y monitor)
4.2.- Se abre el icono de acceso directo a Syslabs y se procede de la siguiente manera al abrirse
las ventanas:
4.2.1.- Sistema de control para Laboratorios de anlisis clnicos [ACEPTAR]
4.2.2.- Syslabs [ACEPTAR]
4.3.- Seleccionar el USUARIO [NOMBRE DEL QUMICO] o [ESTUDIANTES] segn sea el caso.
4.4.- Ingresar el PASSWORD del USUARIO [CLAVE DEL QUMICO] o [HEMATO]
respectivamente. Luego [ACEPTAR] para tener acceso directo al programa Syslabs.
4.5.- Seleccionar el cono [CAPTURA DE ANLISIS]
4.6.- Al abrirse la ventana de Resultados:
4.6.1.- Seleccionar [Por Depto]
4.6.2.- Seleccionar Departamento [HEMATOLOGA]
4.6.3.- Verificar que la fecha corresponda al da del proceso.
4.6.4.- Seleccionar [VER ESTUDIOS] para visualizar los datos del usuario (Nombre, Solicitud,
Estudio, Estatus de la prueba, Nmero de muestra).
4.7.- Se abre el cono acceso directo a Sconnect y se procede de la siguiente manera al abrirse
las ventanas:
4.7.1.- Sistema de interfaz para equipo de laboratorio clnico [ACEPTAR]
4.7.2.- SyslabsConnect [ACEPTAR]
4.7.3.- Seleccionar el USUARIO [NOMBRE DEL QUMICO] o [ESTUDIANTES] segn sea el
caso.
4.7.4.- Ingresar el PASSWORD del USUARIO [CLAVE DEL QUMICO] o [HEMATO]
respectivamente. Luego [ACEPTAR] para tener acceso a la interfaz.
4.7.5.- En la ventana SyslabsConnect Interfaz autoanalizadores seleccionar el equipo XS1000i Sysmex dando un click en [CONECTAR]
4.8.- Reporte de resultados:
4.8.1.- Parte de los resultados son transferidos directamente del analizador hematolgico al
programa Syslabs mediante la interfase (Frmula roja, nmero de plaquetas y nmero total de
Leucocitos)
4.8.2.- Despus del conteo diferencial de Leucocitos se registran los datos en el formato FFQUI-LAC-20 y se capturan de forma manual en el programa Syslabs.
5.- La validacin se realiza verificando nuevamente los datos ingresados de cada paciente. Si no
existiera ninguna correccin, los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72 son firmados por el
qumico responsable de rea y enviado a recepcin.
6.- Llenar hoja estadstica del rea de Hematologa F-FQUI-LAC-48/REV00 y bitcora diaria de equipo
Sysmex XS-1000i

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7.- Una vez en recepcin los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72 con nombre y firma del
responsable de rea, las secretarias proceden a imprimir los resultados transcritos en el programa
Syslabs.
*En caso de ser necesario (cambio o preparacin de reactivos) actualizar la bitcora de consumo de
reactivos F-QUI-LAC-51/REV00 y el formato de control y preservacin de reactivos F-QUI-LAC52/REV00.
MANEJO DEL XS-1000i
CMO ENCENDER EL EQUIPO SYSMEX XS-1000i?

1. Extensin mltiple y Regulador: Mantener encendidos.
2. Monitor: Encender y esperar que se abra automticamente el programa IPU, posteriormente
escribir en usuario las letras xs y pulsar [ACEPTAR].
NOTAS: No se requiere contrasea. En caso de no abrirse automticamente el programa
dirigirse a [START], luego [ALL PROGRAMS] seguido de [XS] y finalmente [IPU].
3. Impresora.
4. Equipo: Esperar que realice el ciclo de inicializacin completo.
Anlisis automtico
1) Haga clic en el botn [L.Trab.] de la barra de conos o pulse F6:
Se abrir la siguiente ventana, despus hacer clic en el botn [Regist] de la barra de conos o pulse
F9:

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Se abrir el siguiente cuadro de dilogo y se ingresarn los siguientes datos:

1. ID Muestra: Nmero de muestra.
2. Anlisis: CBC+DIFF o CBC (en caso de que slo haya solicitud de Velocidad de
Sedimentacin Globular y/o Conteo de Reticulocitos).
3. Id. Pacie.: Nmero de orden.
4. Nombre: Primer nombre del usuario.
5. Apellidos: Apellidos del usuario.
6. F. nac.: Fecha del da.
7. Sexo: Hombre o mujer.
8. Aadir siguiente: Hacer clic si se va a agregar a ms usuarios en la lista de trabajo.
9. Aceptar: Hacer clic si ya se ha finalizado la lista de trabajo.
En el modo de anlisis automtico la agitacin, aspiracin y anlisis de las muestras se realizan

automticamente.
Los volmenes de muestra necesarios para el anlisis se indican a continuacin:
Dimetro del tubo de muestras
Volumen de muestra requerido
Volumen de muestra aspirado
12 mm
1.0 5 mL
Aprox. 20 L
15 mm
1.0 7 mL
Aprox. 20 L

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2) Haga clic en el botn [AUTOM] de la barra de conos o pulse F3:
Se abrir el siguiente cuadro de dilogo:
3) Introduzca el ID Muestra (nmero inicial de la muestra o poner 1)

4) Introduzca el nmero de racks (gradillas)
5) Posicin de inicio del anlisis: seleccione el cuadro combinando la posicin del tubo en la que
debe comenzar el anlisis (gradilla (rack) 1 2, posiciones 1-10).
6) Especifique el tipo de anlisis: CBC o CBC+DIFF.
7) Abra la tapa del alimentador de muestras.
8) Coloque las muestras en el alimentador e introduzca las gradillas en el alimentador comenzando
por el interior.
9)
Cierre la tapa del alimentador de muestras.
10) Pulse el botn de inicio del alimentador de muestras para comenzar el anlisis.

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VI. Ejemplo del impreso de una muestra normal
(1) Datos de anlisis

(3) Histograma de hemates
(4) Histograma de plaquetas
(5) Dispersograma del diferencial
(6) Mensajes interpretativos de leucocitos
(7) Mensajes interpretativos de hemates
(8) Mensajes interpretativos de plaquetas
NOTA: Para conocer los detalles sobre el procesamiento de muestras de volmenes iguales o menores a
500 uL en el equipo SYSMEX XS-1000i consultar el manual de operacin (Instrucciones de uso) y/o gua
rpida proporcionada por la compaa SYSMEX.

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VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG)

INTRODUCCIN
La velocidad con la cual se produce el descenso de estos hemates se denomina velocidad de
sedimentacin globular (VSG).
El Mtodo de Westergren se basa la precipitacin de los eritrocitos en un tiempo determinado (1 hora)
que se relaciona directamente con la tendencia de los glbulos rojos hacia la formacin de cmulos
(pilas de monedas) as como a la concentracin plasmtica de protenas (globulinas y fibringeno). La
capacidad y la velocidad de formar estos cmulos dependen de la atraccin de la superficie de los
glbulos rojos. La velocidad se eleva si las protenas del grupo de las globulinas esta elevado con
respecto a la albmina; tambin una alta proporcin de fibringeno puede provocar esta elevacin.
Los principales usos de la medicin de la VSG son: para detectar procesos infecciosos e inflamatorios;
como control de la evolucin de ciertas infecciones crnicas para detectar procesos crnicos
inflamatorios ocultos o tumores.
La VSG es una prueba inespecfica por lo cual no es una prueba diagnstica definitiva de ninguna
enfermedad o lesin determinada.
PROCEDIMIENTO
Obtencin de sangre por puncin venosa y colocarlo en tubos con EDTA.
Se coloca la cnula de hematocrito en la jeringa y se aspira 1.5 mL (aprox) de muestra (Figura 1).
Tomar un tubo Wintrobe limpio y rotularlo con el nmero del usuario (Figura 2).
Llenar el tubo Wintrobe hasta la marca superior (0, 10), para esto se introduce la cnula de
hematocrito hasta el fondo y lentamente se deposita la sangre (a medida que se va llenando el tubo,
retirar la cnula lentamente) evitando que la formacin de burbujas (Figura3).
Se coloca en un portatubos Wintrobe durante una hora.
El resultado se obtiene poniendo la mirada al nivel de la gradilla a la altura del menisco y se lee;
posteriormente se le hace una correccin segn la tabla del Anexo A donde se contrapone el
hematocrito con la velocidad observada y se reporta el resultado en milmetros en una hora.
FIGURA 1.- Cnula para tubos Wintrobe. La cnula se coloca en una jeringa
normal que puede ser de 3 mL o de 5 mL.

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FIGURA 2.- Tubos Wintrobe. Los tubos deben estar limpios, y se deben marcar
con el nmero del usuario.
FIGURA 3.- Llenado de tubos Wintrobe. Se introduce la cnula al fondo del tubo y
conforme se deposita la sangre, se va retirando lentamente.
BIBLIOGRAFIA
Iovine E. y A. A. Selva. Laboratorio en la clnica. 3 ed. Panamericana, Buenos Aires, Argentina. 1985.
William R. Platt. Atlas de Hematolgica en color. Editorial JIMS, Barcelona.1972
Turallas, J.M. Mtodos de recuento celular sanguneo. Manual de tcnicas de laboratorio en
hematologa. Salvat, Barcelona, Espaa, 1987.
Davidsohn, I., J.B.Henry. Diagnstico clnico por el laboratorio. 6 ed., Salvat, Barcelona, Espaa,
1978.
Quintana, G.S.; Martnez, M.C. Fisiologa de la hemostasia secundaria. Manual de hemostasia y
trombosis. Mxico, Editorial Prado; 1996, pp 23-48.

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RECUENTO DE PLAQUETAS (MTODO MANUAL)

INTRODUCCIN
Las plaquetas son elementos normales de la sangre, muy pequeos, de 2 a 3 micrones, aislados o
agrupados entre los hemates. Son de color azulado o gris azulado y presentan grnulos de color
rojizo, azurfilos, redondeados.
Las plaquetas se caracterizan por su extrema adhesividad a las superficies ntimas de los vasos
sanguneos lesionados. Asimismo, participan en la formacin de tromboplastina y liberan factores
necesarios para la coagulacin normal y otros de los que depende la retraccin del coagulo. La
concentracin normal de plaquetas en la sangre es de 150,000 a 450,000 por mm3.
Hay aumento del nmero de plaquetas en las prdidas agudas significativas de sangre, en la leucemia
mieloide crnica, en las fracturas seas, en estados de asfixia, en la policitemia vera, en la
convalecencia de infecciones agudas y en la esplenomegalia. Hay disminucin en la prpura
trombocitopnica idioptica o en condiciones congnitas, en algunas infecciones virales como la
mononucleosis infecciosa y bacterianas como la meningitis meningoccica.
MATERIAL BIOLOGICO:
Sangre obtenida con EDTA
EQUIPO
Pipetas automticas
Tubos de ensayo
Cmara de Neubauer
Caja de Petri
Gradillas
Guantes
Microscopio
REACTIVOS
Lquido de dilucin para el mtodo directo (oxalato de amonio al 1% en agua destilada).
PROCEDIMIENTO
1. Se obtiene sangre por puncin venosa con anticoagulante EDTA.
2. Se homogeniza bien la muestra y se realiza una dilucin 1:200 (5L de muestra + 995 L de
Oxalato de amonio al 1%).

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3. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.

4. Cargar la cmara de Neubauer. (Figura 1)
5. Dejar en reposo 15 minutos, dentro de una caja de Petri con papel hmedo para evitar la
desecacin.
6. Efectuar el recuento de plaquetas al microscopio (N) en toda la superficie cuadriculada central
(1 mm2). (Figura 2)
7. La cifra obtenida se multiplica por 10 para obtener su nmero en 1 mm3 y por 200 para
compensar la dilucin, o bien directamente por un factor de 2000. El resultado ser el nmero
de plaquetas por mm3.
N x 10 x 200 = plaquetas por mm3

En donde:
N = Recuento de plaquetas al microscopio.
10 = Volumen del rea contada.
200 = Factor de dilucin.
Figura 1.- Cmara de Neubauer. Se coloca el cubre sobre la cmara y con la pipeta se deja caer
una gota en el borde. Por capilaridad la muestra entra entre el cubre y la cmara de Neubauer

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Figura 2.- Cmara de Neubauer. La cuenta de plaquetas se realiza en toda el rea central de la
cmara.
OBSERVACIONES
Actualmente, en muchos laboratorios, los recuentos de plaquetas se realizan en forma automatizada
en contadores hematolgicos o en contadores especficos, habindose logrado un alto nivel de
precisin (incluso en trombocitopenias). El recuento manual suele efectuarse para la comprobacin de
la cifra de plaquetas en trombocitopenias muy graves y en el caso de plaquetas gigantes en las que el
recuento automtico no es fiable. Valores inferiores a 100,000 plaquetas en el mtodo automatizado,
no son confiables y debern verificarse por ste mtodo.
VALORES DE REFERENCIA
La concentracin normal de plaquetas en la sangre es de 150,000 a 450,000 por mm3.
BIBLIOGRAFIA
Iovine E. y A. A. Selva. Laboratorio en la clnica. 3 ed. Panamericana, Buenos Aires, Argentina. 1985.
William R. Platt. Atlas de Hematolgica en color. Editorial JIMS, Barcelona.1972
1978.
Quintana, G.S.; Martnez, M.C. Fisiologa de la hemostasia secundaria. Manual de hemostasia y
trombosis. Mxico, Editorial Prado; 1996, pp 23-48.
Sonnenwirth, A.C., L. Jarett. Mtodos y diagnsticos del laboratorio clnico. 8 ed., Panamericana,
Buenos Aires, Argentina. 1983.
Lynch, M.J., S.S. Raphael, L.D. Mellor, P.D. Spare, M.J.H. Inwood. Mtodos de laboratorio. 2 ed.,
Interamericana, Mxico, D.F. 1987.

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RECUENTO DE RETICULOCITOS
INTRODUCCION
El RNA residual, que ocasiona la basofilia difusa del eritrocito policromtico, es precipitado y teido
con una tincin vital como el azul de metileno o azul de cresil brillante, que le da una imagen
filamentosa reticular fcilmente visible al microscopio. Para ello, se preparan extensiones delgadas y
se cuenta el nmero de eritrocitos que contiene dicho precipitado teido, los que se consideran como
reticulocitos. Los resultados se informan en porcentaje de reticulocitos (con relacin al total de
eritrocitos), en cifras absolutas por mm3 de sangre y en ndice reticulocitario.
MATERIAL BIOLGICO
Sangre obtenida con EDTA.
EQUIPO
Tubos de ensayo
Pipetas Pasteur
Portaobjetos
Gradilla
Bao Mara a 37 C
Microscopio
REACTIVOS
Solucin de azul de cresil brillante al 1% en citrato de sodio al 3.8%
Aceite para inmersin.
PROCEDIMIENTO
1. Usando la pipeta Pasteur, colocar dos gotas de sangre perfectamente mezclada en un tubo de
ensayo.
2. Agregar dos gotas del colorante (azul de cresil brillante).
3. Mezclar suavemente e incubar a 37 C durante 20 minutos.
4. Resuspender los eritrocitos mediante mezclado suave y hacer extensiones delgadas.
5. Cuando el frotis est seco, leer al microscopio con objetivo de inmersin en aceite (100x). Contar
1000 eritrocitos, anotando el nmero de reticulocitos encontrados durante esa cuenta.

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6. Obtener el porcentaje de reticulocitos mediante la siguiente frmula:

% de reticulocitos =
reticulocitos x 100
1000
7. Para obtener la cantidad de reticulocitos por mm3 de sangre (cifras absolutas), se requiere realizar
una cuenta de eritrocitos y posteriormente se calculan usando la siguiente frmula:
Reticulocitos / mm3 =
% de reticulocitos x eritrocitos / mm3

100
Los resultados se reportan en %, cifras absolutas y el ndice Reticulocitario (IR).
VALORES DE REFERENCIA
Porcentual: 0.5 2 %
Absolutos: 50 000 100 000/mm3
COMENTARIOS
El recuento de reticulocitos es un excelente mtodo indirecto para evaluar la eritropoyesis, ya que
cuando hay respuesta eritropoytica, se incrementan; sin embargo, cuando la mdula sea no
responde, los reticulocitos se encontrarn normales o disminuidos. Es de mayor utilidad an, como un
ndice de la magnitud de la eritropoyesis, al realizar una Correccin de la cuenta de reticulocitos, es
decir, obtener indice reticulocitario (IR) de la siguiente manera:
IR =
% de reticulocitos x Hto real / Hto ideal

1 + 0.1 (por cada 2 unidades
en aumento o disminucin
con respecto al hematocrito ideal)
Hto ideal en Mujeres 38

Hto ideal en Hombres 40

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BIBLIOGRAFA
1978.
Hurtado, R., R. Crdenas, J. Cortes y J. Labardini. Manual de hematologa. Instituto Nacional de la
Nutricin, Mxico, D.F., 1991.
Iovine, E. y A.A.Selva. El laboratorio en la clnica. 3 ed., Panamericana, Buenos Aires, Argentina,
1985.
Leavell, B., O. Thorup. Hematologa clnica. 4a ed., Interamericana, Mxico, D.F., 1978.
Lynch, M.J., S.S. Raphael, L.D. Mellor, P.D. Spare, M.J.H. Inwood. Mtodos de laboratorio. 2 ed.,
Interamericana, Mxico, D.F. 1987.
Ruiz Arguelles, G.J. Fundamentos de hematologa. Panamericana, Mxico, D.F., 1994.
Sonnenwirth, A.C., L. Jarett. Mtodos y diagnsticos del laboratorio clnico. 8 ed., Panamericana,
Buenos Aires, Argentina. 1983.
Williams, M.J., E. Beutler, A.J. Erslev, M.A. Lichtman. Hematology. 4a ed., Mc Graw Hill, New York,
USA, 1990.

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TINCIN Y OBSERVACIN DE FROTIS SANGUNEOS

INTRODUCCION
El examen microscpico de un frotis de sangre perifrica, sobre un porta o cubreobjetos de vidrio, nos
permite obtener una valiosa informacin acerca de los elementos formes de la sangre, muchos de los
cuales no pueden ser evaluados mediante las mediciones cuantitativas realizadas por otros mtodos.
En general, en un frotis podemos evaluar lo siguiente:
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
Morfologa eritrocitaria.
Concentracin y distribucin de la hemoglobina.
Distribucin de los eritrocitos.
Inclusiones y artificios de los eritrocitos.
Morfologa y recuento diferencial de los leucocitos.
Inclusiones y artificios de los leucocitos.
Morfologa y apreciacin cualitativa del nmero de plaquetas.
Artificios y agrupacin de las plaquetas.
Por lo mencionado anteriormente, se considera que la preparacin de un frotis de sangre perifrica es

una tcnica fundamental en hematologa. El qumico o el tcnico laboratorista debe ser capaz de
realizar preparaciones excelentes sin conformarse con resultados mediocres, ya que para observar
adecuadamente la morfologa sangunea se necesita tener preparaciones de calidad.
MATERIAL BIOLGICO
Sangre recolectada en tubos con EDTA como anticoagulante.
EQUIPO
Microscopio.
Contador de clulas
Jeringa
Tubos vacutainer con EDTA
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cronmetro
REACTIVOS
Colorante de Wright
Buffer para tincin de Wright (agua destilada).
Metanol.
Aceite de inmersin.

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PROCEDIMIENTO
TECNICA DE FROTIS LONGITUDINAL Y TINCIN DE WRIGHT
1 Colocar una gota de sangre de 5 uL aproximadamente a 1 a 2 cm del borde del portaobjetos,
colocando ste en posicin horizontal sobre la mesa de trabajo (ver figura 1).
2.- Colocar un segundo portaobjetos (extensor) de modo que forme un ngulo de 30 con el
portaobjetos horizontal, con su eje mayor paralelo a l. El borde mas bajo del portaobjetos
extensor, que debe ser liso y regular, se aplica firmemente sobre la superficie del primero, de
manera que la gota de sangre est por debajo de l (ver figura 2)
3.- El segundo portaobjetos se desliza lentamente hacia la sangre hasta que se produzca el
contacto, despus del cual la sangre se desliza uniformemente entre la superficie de contacto de
ambos portaobjetos (ver figura 3).
4.- El portaobjetos extensor es movido rpida y suavemente en direccin opuesta, manteniendo el
contacto y el ngulo entre los portaobjetos. La extensin formada debe ser uniforme y de
aproximadamente la mitad de la longitud de la laminilla. El grosor de la extensin depende de la
velocidad de movimiento del portaobjetos extensor y del ngulo en que se sita ste: a mayor
ngulo mayor grosor, a mayor velocidad, menor grosor (ver figura 4)
5.- Una vez que la sangre se ha extendido, se deja secar. Nunca se debe secar soplando con la
boca pues el aire hmedo ocasionara alteraciones morfolgicas.
6.- Rotular el frotis con el nmero de usuario.
7.- Posteriormente se coloca metanol hasta cubrir completamente el extendido por 2 minutos y se
decanta.
8.- Se cubre completamente con el colorante de Wright (preparacin ANEXO B) por 2 minutos,
sin decantar se adiciona agua destilada (como buffer) hasta la formacin visible de una pelcula
de impresin metlica y se deja por 12 min.
9.- Decantar y lavar con agua destilada hasta eliminar los residuos de colorante y se deja secar
para observar al microscopio con el objetivo 100 x.
10.- Se procede hacer el conteo diferencial de leucocitos en el extendido de sangre siguiendo una
trayectoria como la figura 5.
NOTA: La distribucin de los leucocitos con esta tcnica, no es homognea, debido a que la
distribucin de las clulas ms grandes, como polimorfonucleares y monocitos, tienden a
acumularse cerca de los extremos.

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Gota de sangre
del paciente
Figura 1.- Frotis en portaobjetos (tcnica longitudinal). Se coloca una gota de sangre
sobre el portaobjeto.
30
Figura 2.- Frotis en portaobjetos (tcnica longitudinal). El portaobjetos extensor forma

un ngulo de 30 con respecto al portaobjetos con la muestra de sangre.
Figura 3.- Frotis en portaobjetos (tcnica longitudinal).Deslizamiento del portaobjetos

extensor hacia atrs, hasta que toque la gota de sangre.
Figura 4.- Frotis en portaobjetos (tcnica longitudinal). Deslizamiento del portaobjetos

extensor hacia el frente.

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Figura 5.- Frotis en portaobjetos, trayectoria para realizar el conteo diferencial de

leucocitos
BIBLIOGRAFIA
Fundamentos de interpretacin clnica de los exmenes de laboratorio. Ruz-Reyes G. Ed.
Panamericana. 1. Edicin. Mxico. 2004
Qumica analtica. Skoog D.A., West D.M., Holler F.J., Crouch S.R. Mcgraw-Hill 7 edicin.
Interamericana editores. Mxico 2001.
Codex del laboratorio clnico. Fuentes X. Castieiras M. J. Ferr M. Elseiver. Espaa. 2003.

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CLULAS DEL LUPUS ERITEMATOSO (LE)

PRUEBA DE ZIMMER Y HARGRAVES
INTRODUCCIN
La clula LE fue descrita en 1948 por Hargraves y colaboradores. Una sustancia presente en la
fraccin gammaglobulnica del plasma o del suero de pacientes con lupus eritematoso diseminado, el
llamado factor LE, reacciona con la nucleoprotena de los ncleos de los leucocitos. El factor LE
parece ser un anticuerpo. La nucleoprotena transformada adquiere propiedades quimiotcticas y atrae
a los fagocitos, generalmente granulocitos neutrfilos segmentados y a veces monocitos. Rara vez se
observa que otros leucocitos acten como fagocitos. Estos, con el material nuclear ingerido,
constituyen las clulas LE. El fenmeno, y su formacin, requiere la presencia en el suero del factor
LE, de leucocitos lesionados y de leucocitos activos normales. El factor LE es el agente que acta en
el leucocito lesionado, el substrato, y lo transforman en burbujas redondas homogneas. Estas ltimas
adquieren propiedades quimiotcticas a consecuencia de la transformacin qumica. Los leucocitos
normales ingieren los ncleos transformados.
Morfologa. La clula LE contiene dos ncleos. El del fagocito es aplanado y se encuentra en la
periferia de la clula, con una cromatina de estructura bien conservada. La mayor parte de la fraccin
citoplsmica de la clula est invadida por la masa nuclear transformada e ingerida, el substrato, y el
citoplasma forma un estrecho margen en la periferia. En la clula LE plenamente desarrollada falta la
estructura normal de cromatina del ncleo ingerido y en su lugar hay una masa redonda, amorfa,
homognea y de color prpura que vara de tamao, pero que suele ser ms grande que los eritrocitos
en la misma preparacin. Un fagocito puede englobar ms de un ncleo. Es posible que, en algunos
casos, los mltiples ncleos sean segmentados de un granulocito que todava no se han unido. La
transformacin del ncleo es un proceso progresivo y las fases pueden seguirse paso por paso. La
accin quimiotctica precoz del ncleo en transformacin o transformado, puede atraer a varios
granulocitos neutrfilos que lo rodean formando la llamada roseta. Este dato no tiene valor
diagnstico.
La nucleofagocitosis es un hallazgo bastante frecuente que se distingue esencialmente del fenmeno
de la clula LE, dado que el fagocito ms frecuentemente es un monocito, aunque puede ser un
granulocito. El ncleo fagocitado conserva normal el dibujo de cromatina. Puede presentar cambios
degenerativos, principalmente picnosis difusa o que aparece a lo largo de los bordes, y vacuolas
nucleares. A menudo, la inclusin es ms pequea que una verdadera clula LE; stas son las
llamadas clulas de tarta.
MATERIAL BIOLGICO:
Sangre sin anticoagulante
EQUIPO
Tubos de ensayo
Portaobjetos
Aplicadores de madera
Tubo de Wintrobe
Microscopio

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REACTIVOS
Colorante de Wright
Agua destilada o Buffer para tincin de Wright.
Metanol.
Aceite de inmersin.
PROCEDIMIENTO
1. Se recolectan 8 mL de sangre venosa en un tubo de ensayo esterilizado y seco, se deja coagular a
temperatura ambiente durante unas 2 horas o a 37 C durante 30 minutos.
2. Se fragmenta el cogulo con varios aplicadores de madera y se retiran los restos del cogulo del
suero sanguneo. La mezcla restante de suero y clulas se centrifuga durante 20 minutos a 2500 r.p.m.
3. Se retira la mayor parte del sobrenadante con una pipeta, dejando una columna de 5 mm
aproximadamente.
4. Se traslada la capa leucocitaria gris bien visible a un tubo Wintrobe y se centrifuga durante 20
minutos a 2500 r.p.m.
5. Se retira cuidadosamente el suero con una pipeta, dejando un estrato de 1 2 mm por enciman de
la capa leucocitaria. Con la ayuda de una cnula se toma cuidadosamente la capa leucocitaria para
realizar los extendidos, los cuales se tien con el colorante de Wright (ver tincin de frotis sanguneos,
pgs. 19 - 21).
6. Se observa la placa en el microscopio con los objetivos de pequeo y de gran aumento (10x y 40x
respectivamente) para localizar reas que sugieran la presencia de clulas LE. Estas reas se
examinan luego con el objetivo de inmersin en aceite (100x).
BIBLIOGRAFIA
Fundamentos de interpretacin clnica de los exmenes de laboratorio. Ruz-Reyes G. Ed.
Panamericana. 1. Edicin. Mxico. 2004
Qumica analtica. Skoog D.A., West D.M., Holler F.J., Crouch S.R. Mcgraw-Hill 7 edicin.
Interamericana editores. Mxico 2001.
Codex del laboratorio clnico. Fuentes X. Castieiras M. J. Ferr M. Elseiver. Espaa. 2003.
Iovine, E. y A.A.Selva. El laboratorio en la clnica. 3 ed., Panamericana, Buenos Aires, Argentina,
1985.

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EOSINFILOS EN MOCO NASAL

(TINCIN DE HANSEL)
INTRODUCCIN
La dificultad en el diagnstico diferencial entre el asma bronquial y otros sndromes obstructivos, tanto
en el adulto como en el nio, es un problema frecuente y conocido. Desde un punto de vista clnico, a
veces es imposible hacer la diferenciacin lo que obliga a recurrir a diversos exmenes de laboratorio
que permitan comprobar o no la presencia de alergia, requisito indispensable para formular el
diagnstico definitivo de asma bronquial. Uno de los elementos que es posible estudiar en el
Laboratorio es la secrecin nasal. Eyermann en 1927 hizo notar que la eosinofilia de la secrecin nasal
era un hecho frecuente en pacientes hipersensibles. Murray y Anderson demostraron que es posible
diferenciar las rinitis alrgicas de las vasomotoras e infecciosas mediante una tincin especial para
eosinfilos en secrecin nasal: en las rinitis alrgicas se encuentra gran cantidad de eosinfilos, los
que en cambio estn ausentes o en escasa cantidad en los otros tipos de rinitis.
En base a estos hechos y considerando que la base patognica de las rinitis alrgicas y del asma
bronquial es semejante, numerosos autores han propuesto usar el estudio de los eosinfilos en la
secrecin nasal como un mtodo ms para probar el carcter alrgico de un cuadro bronquial
obstructivo.
MATERIAL BIOLOGICO:
Secrecin nasal
EQUIPO:
Portaobjetos
Hisopos estriles
Microscopio
REACTIVOS:
Eosina 1/200 (0,30 grs. de eosina en 60 ml. de alcohol metlico).
Azul de metileno 1/100 (0,60 grs. de azul de metileno en 60 ml. de alcohol metlico).
Agua destilada.
Etanol al 95%.
Hipoclorito al 1%
Aceite de inmersin
La eosina y el azul de metileno deben mantenerse en frascos mbar y deben ser renovados cada 6
meses.
PROCEDIMIENTO:
1. Se realiza el extendido del moco nasal en un portaobjetos limpio.
2. El extendido se deja secar al aire.
3. Se cubre con eosina y se deja 1 minuto.
4. Se agrega igual volumen de agua destilada y se deja 1 minuto.
5. Se decanta y se cubre con agua destilada hasta remover el exceso de colorante.
6. Se cubre con etanol y se decanta inmediatamente.
7. Se cubre nuevamente con azul de metileno durante 1 minuto.
8. Se agrega igual volumen de agua destilada y se deja 2 minutos.
9. Se lava hasta remover el exceso de colorante.

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10. Se agrega etanol, se decanta inmediatamente y se deja secar al aire.

11. Se examina al microscopio con lente de inmersin (100x).
OBSERVACIONES:
Con esta tincin el moco nasal aparece de aspecto homogneo y de color azul, las bacterias se tien
azules y se puede distinguir 3 tipos de clulas:
1. Clulas epiteliales nasales, con citoplasma azul plido abundante y ncleo azul no lobulado.
2. Neutrfilos, que tienen ncleos azul lobulado y citoplasma azul plido y,
3. Eosinfilos, que tienen ncleo lobulado azul y citoplasma con grnulos intensamente eosinfilos
(rojos) que permiten distinguirlos con facilidad.
RECOMENDACIONES:
Si los neutrfilos no se han teido bien se debe repetir el mtodo desde el punto N 7. Si los neutrfilos
o el moco se han teido de un azul demasiado intenso se coloca una solucin que contenga una gota
de hipoclorito al 1% en 30 cc de agua destilada sobre el extendido y se repiten los pasos desde el
punto No. 9 en adelante.
BIBLIOGRAFIA
Cerutl E. Asma bronquial. En Meneghello J. Pediatria. Pag. 63. Intermdica, Buenos Aires, 1972.
Dees S. Asthma. En Kendig E, Disorders of the Respiratory Tract in Children. W. B. Sauders Co. Pag.
449.
Tujt L., Mueller II. Allergy in Children. W. B. Saunders, Philadelphia, 1970.
Rhyne M. Pruebas cutneas: conceptos y realidades. Clnicas Peditricas de N. A., Febrero, 1969,
pag. 227.
Mansmann H. Tratamiento del nio con asma bronquial. Clnicas peditricas de N. A. Mayo, 1968, pag.
357.
Eyermann C. Nasal manifestations of allergy. Ann. Otolaryng Rhin and Laryng 32: 808, 1927. Citado
por Murray y Anderson, The J. of Allergy, 43: 1, 1969.
Murray A. and Anderson D. The epidemiological relationship of clinical nasal allergy to eosinophils and
to goblet cells in the nasal smears. The J. of Allergy, 43; 1, 1969.
Leeks H. and Kravis L. Alergia y eosinfilos. Clnicas Peditricas de N. A. Febrero, 1969, pag. 125.
Epstein R. Sputum Eosinophilia in Obstructive Lung Disease. Annals of Internal Medicine. 75: 317,
1972.
Ferndndez H. Ceruti E., Cassar C. y Diaz. A. Estudio del nio asmtico mediante induccin de
broncoconstriccin con inhalacin de acetil colina y polvo de habitacin. Presentado en las ID
Jornadas de Pediatra, Punta Arenas, 1971. En prensa Rev, Chilena de Pediatria.
Sheldom /., Loweell R., and Mathews E. A Manual of Clinical Allergy. Pag. 72. W. B. Saunders Co.,
Philadelphia, 1967.
Crawford L. Ann Allergy, 18: 19, 1960.

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CITOLOGA DE MOCO NASAL

INTRODUCCIN
Como se ha mencionado, la rinitis es la inflamacin de la mucosa nasal de cualquier etiologa,
expresada clnicamente por congestin, estornudos e hipersecrecin serosa o mucosa como
sntomas de respuesta fisiolgica normal a la irritacin-. Para considerarse patolgicos deben aparecer
al menos de media hora a una hora al da la mayor parte de los das.
Se manejan diversas clasificaciones sin que ninguna se haya aceptado universalmente, por el
solapamiento frecuente entre unos grupos y otros. Esto se debe a la necesidad de agrupar
enfermedades de etiologas y patogenias diversas (frecuentemente desconocidas), con un espectro de
sntomas limitado y reiterativo. Esta situacin en la clasificacin de las rinitis se traduce en la dificultad
de abordaje en la prctica clnica habitual, debido a que es frecuente que coexistan, por ejemplo, una
alteracin anatmica, con una enfermedad alrgica y problemas irritativos, facilitando, todo ello, la
sobreinfeccin.
Se clasifican en agudas o crnicas si la duracin es menor o mayor a 14 das. Segn su etiologa, se
clasifican en infecciosas y no infecciosas. En funcin de su patogenia se dividen en tres grupos:
inflamatorias, no inflamatorias y estructurales
MATERIAL BIOLOGICO:
Secrecin nasal
EQUIPO
Portaobjetos
Hisopos estriles
Microscopio
REACTIVOS:
Colorante de Wright
Agua destilada o Buffer de colorante de Wright
Metanol
Aceite de inmersin
PROCEDIMIENTO:
1. Se realizan dos extendidos del moco nasal en portaobjetos limpios (uno por cada fosa nasal).
2. El extendido se deja secar al aire.
3. Los extendidos se tien con el colorante de Wright (ver tincin de frotis sanguneos, pgs. 19
21)
4. Se
observa al microscopio a 100x y se realiza conteo diferencial de

POLIMORFONUCLEARES, MONONUCLEARES y EOSINFILOS para obtener el porcentaje
en 100 leucocitos.

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RESULTADOS:
Se reporta el conteo en:
POLIMORFONUCLEARES____________ en %
MONONUCLEARES _________________ en %
EOSINOFILOS______________________ en %
NOTA: Reportar otras estructuras de importancia encontradas como son levaduras, hifas entre otros.
BIBLIOGRAFA
Mygind N. Nasal Allergy. Ed by Blactwel Scientific Publications, 2 Ed. Oxford, 1982.
Mygind N and Weeke B. Allergic and nonallergic rhinitis. In: Allergy PrincipIes and Practice. Ed by E.
Middleton, Ch. E. Reed. and E. F. EIlis. 2 Ed. The Mosby Co. St. Louis, 1983: 1101- II 17.

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TIPIFICACIN SANGUNEA
INTRODUCCIN
Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas de la sangre que dependen de
los antgenos presentes en la superficie de los glbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos
clasificaciones ms importantes para describir grupos sanguneos en humanos son los antgenos AB
y el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccin
inmunolgica que puede desembocar en hemlisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte.
Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan antgenos de tipo A en su
superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre del
tipo B tienen la combinacin contraria, glbulos rojos con antgenos de tipo B en su superficie y
anticuerpos contra los antgenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O 0
(cero) no expresan ninguno de los dos antgenos (A o B) en la superficie de sus glbulos rojos pero
pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan
ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos.
A causa de estas combinaciones, el tipo 0 puede ser transfundido sin ningn problema a cualquier
persona con cualquier tipo AB0 y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo AB0. La denominacin O
y cero es confusa, y ambas estn muy extendidas. El austriaco Karl Landsteiner design los grupos
sanguneos a principios del siglo XX.
Algunas fuentes indican que O podra deberse a la preposicin Ohne, que es "sin" en alemn (Sin
antgeno). Sin embargo all se dice Null Blutgruppe, y casi nunca la alternativa O Blutgruppe. En
alemn O se dice /o/ y 0 (cero) se dice Null. En ingls O se lee /ou/ y a veces el cero se lee /ou/
(por ejemplo en un n de telfono). Sistema ABO y O blood-group es de uso mayoritario en ingls.
Otros idiomas de Europa mantienen la designacin null, en sus variantes zero,cero,nula, etc. En
Latinoamrica es ms comn O positivo, evitando la similitud cero positivo con el trmino
seropositivo -se llama seropositivo al individuo que presenta en sangre anticuerpos que, cuando se
le somete a la prueba diagnstica apropiada, prueban la presencia de un determinado agente
infeccioso- que mucha gente relaciona con el retrovirus VIH, causante del SIDA (sndrome de
inmunodeficiencia adquirida).
MATERIAL BIOLOGICO:
Sangre con EDTA
MATERIAL
Papeleta interna del laboratorio
Portaobjetos
Aplicadores

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REACTIVOS:
Antisuero Anti-A
Antisuero Anti-B
Antisuero Anti-D
PROCEDIMIENTO:
1.- Se toma una papeleta interna del laboratorio para tipificacin de grupo-Rh y rotularlo con los datos
del paciente.
2.- Se coloca una gota de sangre en cada uno de los espacios destinados para la reaccin de
aglutinacin en la papeleta.
2.- Se adiciona una gota de Anti-A, Anti-B, Anti-D respectivamente.
3.- Se mezclan las gotas con un aplicador y se observa la presencia de aglutinacin en cada rea.
RESULTADOS:
Si se observa aglutinacin con el Anti-A el paciente es tipo sanguneo A
Si se observa aglutinacin con el Anti-B el paciente es tipo sanguneo B
Si se observa aglutinacin con el Anti-A y Anti-B el paciente es tipo sanguneo AB
Si NO se observa aglutinacin con el Anti-A ni con el Anti-B el paciente es tipo sanguneo O
Si se observa aglutinacin con el Anti-D el paciente es factor Rh POSITIVO
Si NO se observa aglutinacin con el Anti-D el paciente es factor Rh NEGATIVO y se procede a
realizar la variante Du.

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MTODO DE PRUEBA Du
INTRODUCCIN
Du es una variante del antgeno Rho (D). Se encuentra en el locus de caucsicos: Existen dos tipos de
Du a) Producido por supresin del gen C en transposicin: CDe/Cde, no hereditaria b) Forma
congnita Du: CDue/cde. Anticuerpos Rh. El antgeno al ser tipiado con Anti-D, tipean como Rh
negativo o dan reaccin dbil y tardada. Por lo tanto de rutina, a todo paciente Rho (D) negativo se
debe determinar la variante Du. Si la prueba por variante Du es negativa, el paciente es tipiado como
Rho (D) negativa y variante (Du) negativo Si es positiva, el paciente es Rho (D) negativo y variante
(Du) positivo. Este ltimo es considerado Rho (D) positivo y por lo tanto si se utiliza como donador no
debe administrarse a recipientes Rho (D) negativo (Du) negativo puesto que dicho recipiente puede
producir Anti-D. Como recipientes son considerados como Rho (D) negativo. El cuidado especial que
debe hacerse al tipearse por Du es asegurarse que el paciente tiene Test de Coombs. Directo negativo
y que no se trate de un paciente que recientemente ha recibido sangre de diferente tipo Rh. Tambin
las madres Rho (D) negativo y variante (Du) negativo con hijos Rho (D) negativo y variante (Du)
positivo pueden causar Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido por Rh. Es decir madre Rho (D)
negativa y (Du) negativo puede producir anti-D y si el nio es Rh' positivo, puede causar Enfermedad
Hemoltica del R.N. En cambio madre Rho (D) negativo y variante Du positivo no produce Anti-D, pues
es para fines prcticos Rho (D) positivo. Adems de los anticuerpos mencionados, existen otros
anticuerpos Rh capaces de producir reacciones transfusionales, Ej. Anti-Cw, AntiG (CE), Anti V, etc.
MATERIAL BIOLOGICO:
Sangre con EDTA del usuario
Sangre con EDTA Rh positivo (control)
EQUIPO
Tubos de ensayo
Pipetas de transferencia
Gradilla
Bao Mara a 37C
REACTIVOS:
Anti-Rh0 (Anti-D)
Solucin salina
Suero antiglobulina humana (Suero de Coombs).

Revisin: 10
Fecha de emisin:
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PROCEDIMIENTO:
1.
2.
3.
4.
5.
Preparar una suspensin de glbulos rojos al 2% con solucin salina 0.9% (20 L + 980 L).
Colocar dos gotas de la suspensin celular en un tubo de ensayo.
Agregue una gota de Suero ORTHO Anti-Rh0 (Anti-D).
Incubar a 37C por 15 minutos.
Sacar el tubo del bao mara y lavar las clulas tres veces con solucin salina (en cada lavado se
centrifuga por 3 minutos a 1500 rev/min). Decantar completamente despus del ltimo lavado.
6. Aadir dos gotas de Suero antihumano ORTHO* al tubo. Mezclar y centrifugar por un minuto a
1000 rpm.
7. Resuspender el botn celular mediante ligera agitacin del tubo y observar presencia de
aglutinacin.
8. Interpretacin de los resultados:
a) Ausencia de aglutinacin: Rh negativo, es decir, Rh0 (D) negativo.
b) Presencia de aglutinacin: esto indicar que la clula tiene una dbil o modificada forma del
facto Rh0 (D) y deber identificarse como Du.
NOTA: Todos estos especmenes de sangre Du positivos debern verificarse con la Prueba de
Coombs Directa sobre la clula para eliminar cualquier posibilidad de que la clula no est
especficamente cubierta. En el caso de una prueba de Coombs positiva directa, que siga del
procedimiento Du, deber tomarse en cuenta, que el espcimen de sangre deber ser considerado
como Rh negativo.
BIBLIOGRAFIA
1) Huestis, WD, Bobe Jr. Bush, S. "Practieal Blood Transfusin", 2nd Edition, Little Browin and
Co.1976.
2) Owen A. C. Bowe, W.G.N., thompson N.J., "The Diagnosis of Bleeding Desorden" 2nd Edition, Little
BrowerandCo. 1978.
3) Race R.R. Sanger R. "Blood Groups in man", 2nd Edition, Blachwell suetigic Publications, 1975.

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FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS

INTRODUCCIN
El objetivo de esta prueba es valorar la fragilidad osmtica eritrocitaria que se altera en varios
procedimientos hemolticos. Existen padecimientos que se manifiestan por un aumento en la
resistencia a la fragilidad osmtica y otros en los cuales disminuye. Esto es una expresin de la
alteracin de la membrana.
Cuando se incuban eritrocitos en un medio hipotnico se favorece un fenmeno de smosis hacia
el eritrocito. Este fenmeno va a depender de la capacidad de regulacin de la membrana eritroctica.
La disminucin de esta funcin llevara a un estado de hemlisis.
CONSIDERACIONES: Todo material que se use debe ser estril. Puede usarse como testigo
cualquier tipo de sangre normal. No debern ser testigos personas con anemia hipocrmica, ya que en
estos se encuentra disminuida la fragilidad osmtica.
MATERIAL BIOLOGICO.
2 tubos con EDTA de sangre del paciente.

2 tubos con EDTA de sangre del testigo.
MATERIAL.
Tubos de ensaye de 13 x 100 estriles.

Pipetas.
REACTIVOS.
SOLUCIN STOCK
NaCl.......................................... 180g
Fosfato de Sodio-dibsico......... 27.35g
Fosfato de Sodio monobsico....4.86g
Agua Destilada................c.b.p...2,000 ml
Esta solucin se conserva por varios meses en un frasco bien cerrado.
SOLUCIN DE TRABAJO
Se hace a partir de la solucin Stock, diluyendo 1:10 con agua destilada. El PH de esta solucin
deber ser de 7.4. Conviene prepararla semanalmente.

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TECNICA.
1. Incubar uno de los tubos del paciente y testigo por 24 horas a 37 C.
2. Con la sangre restante hacer la prueba de fragilidad osmtica de 30 minutos usando tubos de
13 x 100 estriles de la siguiente manera:
PACIENTE
TUBO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
CONCENTRACIN
0.90
0.85
0.80
0.75
0.70
0.65
0.60
0.55
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.20
0.10
0.00
BUFFER
4.50mL
4.25mL
4.00mL
3.75mL
3.50mL
3.25mL
3.00mL
2.75mL
2.50mL
2.25mL
2.00mL
1.75mL
1.50mL
1.00mL
0.50mL
0.00mL
H20
0.50mL
0.75mL
1.00mL
1.25mL
1.50mL
1.75mL
2.00mL
2.25mL
2.50mL
2.75mL
3.00mL
3.25mL
3.50mL
4.00mL
4.50mL
5.00mL
SANGRE
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
0.05mL
Hacer lo mismo con un testigo normal.

3. Mezclar bien las soluciones antes de agregar la sangre y al agregar esta, mezclar por inversin
usando papel parafilm.
4. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.
5. Centrifugar 5 minutos a 3,000 r.p.m.
6. Leer la absorbancia del sobrenadante a 546 nm frente a blanco de agua. Hacer diluciones de
1:2 o ms en el caso de no poder leer directamente.
7. Para la fragilidad osmtica de 24 horas se procede de igual manera.
8. Correr un testigo normal simultneamente al problema.
9. Graficar en papel milimtrico: Abscisas Concentracin de Cloruro de Sodio y Ordenadas % de
hemlisis.
CLCULOS (nota: tomar en cuenta las diluciones realizadas).

% de Hemlisis = D.O de cada tubo (del 1 al 15)/ D.O del tubo 16 X 100

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VALORES DE REFERENCIA.
En condiciones normales es de esperarse que el 50 % de hemlisis se produzca con una
concentracin de Cloruro de Sodio de 0.445 a 0.40 % a los 30 y a una concentracin de 0.465 a 0.59
% a las 24 horas, si se obtiene el 50 % de hemlisis o ms a concentraciones elevadas se considera
que hay fragilidad aumentada. Situacin contraria puede suscitarse en talasemias y hepatopatas.
INTERPRETACIN.
El aumento de la fragilidad osmtica se observa en la esferocitosis hereditaria hacindose ms
evidente el fenmeno despus de la incubacin. Tambin se observa aumento en la fragilidad
osmtica en la enfermedad hemoltica autoinmune. El aumento de la resistencia osmtica es
caracterstico de las talasemias, en el dficit de hierro y en cualquier situacin en la que se encuentra
un aumento en la superficie de los eritrocitos como sucede en las enfermedades hepticas.
BIBLIOGRAFIA.
Beutler, E.: Osmotic fragility. En Hematology por Williams Beutler Erslev Rundles. Mc Graw-Hill
Company, 2 Edi. P. 1609-1610. 1977.

Revisin: 10
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ANEXO A

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ANEXO B
PREPARACIN DEL COLORANTE DE WRIGHT
1. Se pesan 2.2 gramos de colorante de Wright en la balanza analtica.
2. El colorante en polvo pesado se transfiere a un matraz y se afora con metanol hasta un
volumen final de 1 litro.
3. Agitar hasta su completa homogenizacin.
4. Posteriormente se guarda en un frasco rotulado con el nombre del colorante y fecha de
elaboracin.
5. El colorante deber ser filtrado previo al uso.

Revisin: 10
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ANEXO C
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO
1.
2.
3.
4.
Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente.

Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
Comenzar la observacin con el objetivo de 4x 10x.
Para realizar el enfoque:
a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que
se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de
ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el
micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin desde
el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que
ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el
objetivo de inmersin.
.
Empleo del objetivo de inmersin:

Bajar totalmente la platina.
a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
b. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el
de x40.
c. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
d. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin.
e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo
de accidente es muy grande.
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede
volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si
desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso
3.
h. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el
objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la
preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin
de observacin.

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i.
Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel suave. Comprobar

tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de
observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con
un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier
caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o
xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en
exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina,
revlver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido,
secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en alcoholacetona.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin.

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4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA

Cdigo
(cuando aplique)
Nombre del documento
N/A
N/A
MGC-CIPLADE-CC-01
P-FQUI-LAC-04
N/A
N/A
NOM-007-SSA3-2011 Para la organizacin y

funcionamiento de los laboratorios clnicos
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Proteccin
ambiental - Salud ambiental - Residuos peligrosos
biolgico infecciosos - Clasificacin y especificaciones
de manejo.
Manual de Gestin de la Calidad
Procedimiento para el anlisis de muestra
Gua rpida. Analizador SYSMEX serie XS
Manual del analizador HEMATOLOGA XS-1000i
Lugar de almacenamiento
LACSC
LACSC
Pgina Web del SGC

LACSC
LACSC
LACSC
5.- CONTROL DE REGISTROS
(cdigo)
Nombre del
registro
Lugar de
almacenamiento
Responsable de su
proteccin
Tiempo
de
retencin
F-FQUI-LAC-20
Hematologa
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
Archivo
muerto
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
Archivo
muerto
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
Archivo
muerto
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
Archivo
muerto
rea de trabajo
Responsable de rea
1 ao
Archivo
muerto
Identificacin
F-FQUI-LAC-72
F-QUI-LAC-88
F-FQUI-LAC-21
F-FQUI-LAC-48
F-FQUI-LAC-54
F-FQUI-LAC-18
F-FQUI-LAC-19
F-FQUI-LAC-24
F-FQUI-LAC-40
Parmetros
hematolgicos
Fragilidad osmtica
eritrocitaria
Citologa
Hoja estadstica de
estudios
Bitcora de
mantenimiento y
uso diario del
Sysmex XS-1000i
Pruebas de
hemostasia
primaria
Formato para el
registro diario de la
temperatura de la
estufa
Formato para el
temperatura de la
refrigerador
Formato para el
temperatura de la
Disposicin
de los
registros
Archivo
muerto
Archivo
muerto
Archivo
muerto
Archivo
muerto
Archivo
muerto

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congelador
6.- GLOSARIO
6.1 .- SIGLAS
UADY: Universidad Autnoma de Yucatn
LACSC: Laboratorio de Anlisis Clnicos de Servicio a la Comunidad
6.2 .- DEFINICIONES
Muestra biolgica. Parte anatmica o fraccin rganos o tejido, excreciones o secreciones obtenidas de un ser
humano o animal vivo o muerto para su anlisis.
Usuario. Cualquier persona que acuda al laboratorio para solicitar algn anlisis clnico
Formato de Trabajo. Trmino que engloba a todos los formatos utilizados para reportar los resultados de sus
anlisis.
7.- CONTROL DE REVISIONES

NIVEL DE
REVISIN
01
02
03
04
SECCIN
Y/O PGINA
20
2y3
1, 24 y 38
4
9, 19 y 27
8, 15, 24,
26, 29-31 y
34
2
05
06
07
08
38
22
1 40
1
29
38
FECHA DE
MODIFICACIN
DESCRIPCIN DE LA MODIFICACIN Y MEJORA
Descripcin de la tincin de frotis con el colorante de

Wright
Modificaciones en el diagrama y actividades
Modificacin del orden de las polticas, cambio en los
tiempos de centrifugacin en el anlisis de clulas LE
y creacin del Anexo C
Adicin de la lista de trabajo.
Modificacin de la tcnica.
Ortografa.
18 de Febrero 2009
28 de Mayo 2009
14 de Octubre de
2009
23 de Abril de 2010
Cambio de responsable de rea.

Se elimin Directorio y Prefacio.
Cambio en el diagrama de procesamiento.
Redaccin de actividades y manejo del Sysmex
14 de Marzo de
2011
adecuado al nuevo Software del laboratorio
(Syslabs).
Cambio de figura 5.
Ortografa y redaccin.
Cambio de responsable de rea.
5 de Septiembre de
2011
Se agreg tcnica para la prueba de Fragilidad
osmtica de los eritrocitos.
2 de Noviembre de
Cambio al nuevo formato para instructivos.
2012
Cambio de responsable sanitario
9 de Julio de 2013

Revisin: 10
Fecha de emisin:
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NIVEL DE
REVISIN
SECCIN
Y/O PGINA
09
10
3
23 24
38
1
36
38
FECHA DE
MODIFICACIN
DESCRIPCIN DE LA MODIFICACIN Y MEJORA
Modificacin de la descripcin de la operacin en el

apartado referente a los resultados del proceso.
Se agreg la descripcin detallada del encendido del
equipo Sysmex XS-1000i
Ortografa y redaccin
Cambio de Director
Se agregan actividades a la Descripcin de la
operacin.
Se adicionaron la Gua rpida del analizador
SYSMEX serie XS y Manual del analizador
HEMATOLOGA XS-1000i a los documentos de
referencia
Cambio de Responsable Sanitario.
15 de Agosto de
2013
12 de Noviembre
de 2013
Nota: La seccin 7 ser utilizada a partir de la primera modificacin a este documento. La revisin 00, se
mantendr en blanco.
Elabor
Revis
Aprob
QFB. Isis Noem vila Caldern. EBC

Responsable rea de Hematologa
M. en C. Gabriel ngel Montero Lara

Responsable sanitario
Dra. Zulema Osiris Cantillo Ciau

Directora de la Facultad de Qumica
Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que: elaboran el documento, revisan su adecuacin
y aprueban para su implementacin dentro del Sistema de Gestin de la Calidad de la Universidad
Autnoma de Yucatn.

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Instructivo para el procesamiento de

muestras del rea de Hematologa

3.- DESCRIPCIN DE LA OPERACIN

Instructivo para el procesamiento de

Instructivo para el procesamiento de

MANEJO DEL XS-1000i

CMO ENCENDER EL EQUIPO SYSMEX XS-1000i?

Instructivo para el procesamiento de

Se abrir el siguiente cuadro de dilogo y se ingresarn los siguientes datos:

En el modo de anlisis automtico la agitacin, aspiracin y anlisis de las muestras se realizan

Instructivo para el procesamiento de

2) Haga clic en el botn [AUTOM] de la barra de conos o pulse F3:

Se abrir el siguiente cuadro de dilogo:

3) Introduzca el ID Muestra (nmero inicial de la muestra o poner 1)

Cierre la tapa del alimentador de muestras.

Instructivo para el procesamiento de

VI. Ejemplo del impreso de una muestra normal

(1) Datos de anlisis

Instructivo para el procesamiento de

VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG)

Instructivo para el procesamiento de

Instructivo para el procesamiento de

RECUENTO DE PLAQUETAS (MTODO MANUAL)

Sangre obtenida con EDTA

Instructivo para el procesamiento de

3. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.

N x 10 x 200 = plaquetas por mm3

Instructivo para el procesamiento de

Instructivo para el procesamiento de

Sangre obtenida con EDTA.

Solucin de azul de cresil brillante al 1% en citrato de sodio al 3.8%

Aceite para inmersin.

Instructivo para el procesamiento de

6. Obtener el porcentaje de reticulocitos mediante la siguiente frmula:

% de reticulocitos x eritrocitos / mm3

Los resultados se reportan en %, cifras absolutas y el ndice Reticulocitario (IR).

% de reticulocitos x Hto real / Hto ideal

Hto ideal en Mujeres 38

Instructivo para el procesamiento de

Instructivo para el procesamiento de

TINCIN Y OBSERVACIN DE FROTIS SANGUNEOS

Por lo mencionado anteriormente, se considera que la preparacin de un frotis de sangre perifrica es

Tubos vacutainer con EDTA

Buffer para tincin de Wright (agua destilada).

Instructivo para el procesamiento de

Instructivo para el procesamiento de

Figura 2.- Frotis en portaobjetos (tcnica longitudinal). El portaobjetos extensor forma

Figura 3.- Frotis en portaobjetos (tcnica longitudinal).Deslizamiento del portaobjetos

Figura 4.- Frotis en portaobjetos (tcnica longitudinal). Deslizamiento del portaobjetos

Instructivo para el procesamiento de

Figura 5.- Frotis en portaobjetos, trayectoria para realizar el conteo diferencial de

Instructivo para el procesamiento de

CLULAS DEL LUPUS ERITEMATOSO (LE)

Instructivo para el procesamiento de

Instructivo para el procesamiento de

EOSINFILOS EN MOCO NASAL

Instructivo para el procesamiento de

10. Se agrega etanol, se decanta inmediatamente y se deja secar al aire.