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Anexo: Compendio de preguntas de parciales anteriores (cursos 2000-2009):

Nota: la inclusin de las siguientes preguntas y, particularmente, las respuestas esperadas que sirvieron de gua para la
correccin de los parciales por parte de los docentes, no tienen otro propsito didctico que el de orientar a los estu-
diantes acerca de cmo son los parciales de la materia y de cmo se corrigen. Aquellas preguntas de parciales que los
docentes consideramos que aportaban a la mejor comprensin de algn captulo de la materia, fueron incluidas en la
gua de problemas y no se repiten aqu. Algunas de las preguntas de parciales integran ms de un captulo de las clases
de problemas. Las preguntas de los parciales de la presente cursada tendrn el mismo espritu pero sern diferentes en
sus enunciados. El orden de los temas no es el mismo que en la gua.
Mendel y extensiones
1) En los cobayos, el color de pelo (negro vs blanco) es
determinado por el gen B. Los smbolos negros represen-
tan a los cobayos negros y los blancos a los cobayos de
fenotipo blanco. Se dispone del siguiente rbol geneal-
gico, en el cual los individuos II1 y II4 pertenecen a lne-
as altamente endocriadas (asumir que pertenecen a lneas
puras).

a) Represente el genotipo probable de cada individuo (en
los casos de que pueda ser ms de uno, represente con un
guin bajo, i.e. B_)
b) Calcule la probabilidad de que un descendiente del
cruzamiento entre III1 y III2 sea blanco. Para contestar es
suficiente que escriba los genotipos al lado de los smbo-
los en el esquema y las probabilidades (slo de las que se
usarn para hacer los clculos) sobre el esquema (puede
dibujarlo o escribir sobre este enunciado). De lo contra-
rio, explique su razonamiento
Respuestas esperadas:

En caso de respuesta con explicacin:
I1 y I2 tienen que ser heterocigotas (Bb) porque si no, no
podran tener un hijo blanco
II1 y II4 son BB por definicin de lneas puras, II2 bb
porque su fenotipo refleja su genotipo
II3 es B_ porque no podemos saber qu segundo alelo
recibi. Tiene 1/3 de posibilidades de ser BB y 2/3 de ser
Bb (son tercios y no cuartos porque se descarta que pueda
ser bb dado que su pelaje es negro).
III1 es Bb porque deriva de un BB y un bb
III2 es B_ dado que, como se explica arriba, existe una
probabilidad de 2/3 que su padre II3 sea Bb
Si II3 era BB, III2 es BB. Si II3 era Bb, existe de pro-
babilidad de que III2 sea BB o Bb.
Slo si III2 resulta Bb, podr tener de posibilidad de
tener un hijo blanco con III1
Por lo tanto, la probabilidad de que se produzca un coba-
yo blanco es (2/3)(1/2)(1/4) = 2/24 = 1/12
2) La anemia de clulas falciformes (ACF) es un proceso
hereditario humano causado por un alelo autosmico re-
cesivo de muy baja incidencia en las poblaciones occi-
dentales. Un matrimonio quiere conocer la probabilidad
de tener un hijo afectado. Con sus conocimientos sobre
herencia mendeliana qu podra decirles si:
a) ambos miembros de la pareja son normales, pero cada
uno de ellos tiene un padre afectado y el otro progenitor
no tiene historia familiar de ACF?
b) el marido est afectado por la enfermedad pero la mu-
jer no tiene antecedentes familiares de ACF?
I) Para cada caso construya las genealogas posibles para
esta familia indicando los genotipos y fenotipos de todos
los individuos involucrados.
II) Sobre qu fundamento(s) incluido(s) en la/s ley(es)
de Mendel) se apoyan sus predicciones en los casos ante-
riores?
Nomenclatura: S alelo determinante de hemoglobina fal-
siforme, N de Hb normal, _ puede ser cualquiera de los 2
alelos (N o S)
Respuesta: a) b) 0
I) a) abuelos SS (enfermo) x NN (sano) padres SN
(sanos en ambos casos) hijos posibles NN, SN o SS
b) abuelos en un caso: S_ x S_ (ambos sanos o enfer-
mos) padre SS (enfermo), abuelos en otro caso NN x
NN padre NN (sanos todos)
II) En el concepto de segregacin de los alelos al formar
las gametas que darn origen a la progenie explicitada en
la primera ley de Mendel.
3) La corea de Huntington es una enfermedad rara, mor-
tal, que aparece normalmente a mediana edad. Se debe a
un alelo dominante. Un hombre fenotpicamente normal,
de poco ms de 20 aos, advierte que su padre ha des-
arrollado la corea de Huntington.
a) Cul es la probabilidad de que ms tarde l mismo
desarrolle la enfermedad?
b) Cul es la probabilidad de que la desarrolle su hijo al
cabo del tiempo? (Nota: Para sus clculos asuma que la
frecuencia del alelo que produce la enfermedad en la
poblacin humana es insignificante).
Respuesta Suponiendo que el padre que desarrolla la
enfermedad fuese heterozigota para el alelo mutante (da-
do que la probabilidad de que tambin lo tenga la madre
es insignificante): a) b) .
Si suponen que el padre tambin poda ser homocigota
(adems de heterocigota) y se hacen los clculos correc-
tos [a) 1 b) ] para esta segunda posibilidad el problema
se considerar bien contestado. Si ponen homocigota co-
mo nica posibilidad an cuando se hagan los clculos
correctos, el problema est mal contestado.
4) Dos plantas enanas de maz (E1 y E2) tenan origen
distinto, pero eran fenotpicamente idnticas. Se cruzaron
I
II
III
1 2
1 2 3 4
1 2
?
Bb Bb
BB BB
bb
2/3
---Bb
1/3
BB
Bb
b BB
Bb
b
I
II
1 2
1 2 3 4
1 2
? III
2
cada una de estas plantas enanas con una lnea altamente
endocriada de plantas altas que, se saba, son homozig-
ticas para todos los genes que determinan el tamao.
Ambos cruces dieron lugar a una F1 constituida nica-
mente por plantas altas. Al autofecundar cualquier planta
de la F1, la proporcin de la F2 fue de 3 altas: 1 enana.
Los cruzamientos entre las dos lneas enanas paternas E1
x E2, solo dieron lugar a plantas altas en la F1. A pesar
de este resultado, en la F2 reaparecieron las variantes
enanas. La proporcin de plantas enanas en la F2 fue de
7/16.
a) Explicar los resultados obtenidos, indicando todos los
genotipos implicados.
b) Qu proporciones genotpicas y fenotpicas esperara
si se realizase el cruzamiento prueba de la F1 del cruza-
miento E1 x E2 con el progenitor E1?
Respuesta a) Dos genes afectan al tamao
A (normal)> a (enanismo 1)
B (normal)> b (enanismo 2)
[Es un caso de epstasis complementaria]
P E1=AAbb x E2=aaBB
F1 AaBb (altas)
F2 9 A_B_ (altas) vs 7 aa__ o __bb (enanas)
b) AaBb x AAbb AABb , AaBb , AAbb , Aabb
.
Proporciones fenotpicas: A- B- 1/2 altas; A- bb 1/2 ena-
nas
5) Un criador de canarios desea en generar aves de color
naranja. Con este objetivo cruza animales de una raza (es
decir, altamente endocriada) amarilla con animales de
una raza roja. A pesar de sus expectativas todos los ani-
males de la descendencia resultaron de color rojo. Sin
darse por vencido, decidi cruzar esta F1 con animales de
la raza parental amarilla. Para su sorpresa no solo los
animales no resultaron naranjas, sino que tuvieron varia-
dos colores: 25 rojos, 27 verdes y 48 amarillos. Comple-
tamente desconcertado decide llamarlo a usted como ge-
netista para responder a los siguientes interrogantes:
a) Es posible que el color de estas aves est determinado
por un solo locus?
b) Y por dos loci?
Justifique por que s o por qu no, indicando los alelos
probables de los parentales y de la descendencia, y algu-
na explicacin bioqumica.
c) Cmo hara para validar estadsticamente su hipte-
sis? Explique brevemente sin realizar los clculos.
Respuesta:
a) En primer lugar asumimos parentales homocigotas
porque se trata de razas en las cuales hay mucha endocr-
a. Si fuera determinado por un solo locus tenemos
AA (rojo) x aa (amarillo)

Aa (rojo) x aa
Aa (rojo); aa (amarillo)
Deberamos tener slo fenotipos rojos y amarillos y en
igual cantidad
b) Si son dos loci tenemos
A1A1B1B1 (rojo) x A2A2B2B2 (amarillo)

A1A2B1B2 (rojos) x A2A2B2B2

A1A2B1B2 (rojos); A1A2B2B2; A2A2B1B2;
A2A2B2B2 (amarillos)
De lo genotipos restantes uno debera dar fenotipo amari-
llo y el otro verde (no importa cual por simetra). Enton-
ces supongamos que A1A2B2B2 es verde y A2A2B1B2
es amarillo.
En este caso la relacin rojo:verde:amarillo debera ser
1:1:2 que es lo que se observa.
Una posible explicacin sera la siguiente va de produc-
cin de pigmentos:
A1 B1


Amarillo verde rojo
Nota: A y B no estn ligados porque si lo estuvieran en
la F1 habra una frecuencia de gametas A1B1 mayor a
con lo cual ms de de la descendencia debera ser roja.
c) Prueba de bondad de ajuste (chi-cuadrado) a una rela-
cin 1:1:2
6) Se present ante los tribunales de justicia el siguiente
caso: la familia Prez reclama que cierto beb (Juan), que
les dieron en la maternidad, no les pertenece y que, en
cambio, el beb Felipe, que tiene la familia Garca, es el
suyo y se lo cambiaron. La familia Garca niega este
hecho, y el tribunal ordena el examen de los grupos san-
guneos de los bebes y de los padres, con los siguientes
resultados:
Ma-
dre
Pa-
dre
Beb
Familia Prez AB O A (Juan)
Flia. Garca A O O (Felipe)
Qu familia tiene razn y por qu?
Respuesta: la Garca. Si escribimos los genotipos com-
pletos de los padres resulta claro que el primer podra ser
resultado de cualquiera de las 2 parejas, pero el segundo
beb slo de la segunda
Ma-
dre
Pa-
dre
Beb
Familia Prez AB OO AO
Flia Garca AO OO OO

Marcadores
1) La corea de Huntington es causada por una mutacin
en el cromosoma 4 que hace que una parte del ADN, lla-
mada repeticin CAG, se itere muchas ms veces de lo
que se supone que debe ser. Normalmente, este segmento
del ADN se repite de 10 a 35 veces, pero en una persona
con Huntington, se repite de 36 a 120 veces. Cuanto ma-
yor sea el nmero de repeticiones, mayor ser la posibili-
dad de presentar sntomas a una edad ms temprana. Se
extrae el ADN de todos los miembros de una familia en
la que algunos individuos estn afectados por corea de
Huntington. Se busca un sistema de diagnstico molecu-
lar sencillo basado en PCR para aconsejar a los hijos de
una familia. Los resultados obtenidos aparecen en el si-
guiente esquema de electroforesis en gel similar a la que
us en el TP de marcadores moleculares (los N a la iz-
quierda indican la cantidad de repeticiones CAG, los
smbolos oscuros representan individuos enfermos):
3

A partir de estos resultados indicar:
a) Qu tipo de marcador se eligi? RFLP, RAPD,
AFLP, microsatlite, SNP? Justificar brevemente su elec-
cin.
b) Cuntos alelos se estn detectando?
c) A partir de estos resultados genealgicos se trata
de un marcador: dominante, codominante, o de dominan-
cia incompleta? (ojo! se pregunta sobre el MARCA-
DOR, NO sobre la enfermedad). Justificar brevemente su
eleccin. Y respecto a la corea de Huntington como
enfermedad Cmo se hereda?
d) Tienen segregacin mendeliana? Demustrelo ma-
temticamente indicando las probabilidades del caso.
e) Este marcador est ligado a la enfermedad? Explique.
f) Tanto en el caso que Ud haya respondido que el mar-
cador est ligado como que no est ligado: podra calcu-
lar la distancia en unidades de mapa?
g) Tiene sentido que en la pregunta anterior se le haya
preguntado la distancia entre un marcador y un gen que
no estn ligados? Pueden 2 genes (o marcadores) estar
en el mismo cromosoma a pesar de no estar ligados (des-
de el punto de vista del clculo matemtico de un ensayo
de cruzamiento)?
h) Cuntos individuos homocigotas observa? y hetero-
cigotas? Conteste tanto para la expresin de la enferme-
dad como para el marcador.
Respuestas esperadas:
a) Microsatlites, porque es un marcador de PCR y el
polimorfismo detectado deriva del nmero de repeticio-
nes del motivo CAG (se deduce del enunciado).
b) 4 (no se pide que contesten que: no hay alelos nulos)
c) Codominante: cada individuo muestra 2 bandas, cada
una de ellas heredadas de uno de sus padres. La enferme-
dad es dominante.
d) S. Es como un cruzamiento A
1
A
2
x A
3
A
4
. Hay entre 5
y 6 (de los 11 hijos) con cada uno de los alelos (segrega-
cin 1 a 1 de cada alelo, calculada como presencia versus
presencia de otro alelo alternativo). Deben mostrar la
probabilidad de cada uno.
e) El alelo 50 parece transmitirse siempre junto con la
enfermedad, ya que todos los individuos afectados lo pre-
sentan. Por consiguiente, parece que el locus podra com-
portarse como ligado a esta enfermedad y no se observar-
a ningn recombinante en los descendientes, ya que el
gen que produce la enfermedad se encontrara en el mis-
mo locus.
f) Distancia = a 0 (en base a estos datos). Si contestaron
errneamente que NO estaba ligado, una respuesta de
>50 u.m. debera considerarse correcta
g) Tiene sentido porque un marcador podra estar en el
mismo cromosoma pero a ms de 50 u.m. y matemtica-
mente aparecera como NO ligado.
h) La madre y los hijos 1, 3, 6, 9 y 11 son homocigotas
recesivos (sanos) para la enfermedad. El padre y los hijos
2, 4, 5, 7, 8 y 10 son heterocigotas enfermos. Para el mar-
cador molecular son todos heterocigotas, no hay homoci-
gotas.
Mapeo
1) En una determinada especie animal los loci A,a; B, b y
C,c se localizan en el mismo autosoma. El locus B,b es el
central. La distancia entre A,a y B,b es de 20 unidades de
mapa, la distancia entre B
,
b y C, c es de 10 unidades de
mapa y el coeficiente de coincidencia es 0,6. Indicar la
proporcin esperada de individuos obtenidos con el feno-
tipo Abc.
Respuesta: Cc = Frecuencia de dobles observadas (FO) /
Frecuencia de dobles esperados (FE) = 0.6
FO= 0.6 x FE= 0.6 x 0.2 x 0.1=0.012
N de dobles observados = 0.012 x 100 = 1,2% indivi-
duos dobles recombinantes: AbC y aBc
distancia. A-B = N de Individuos recombinantes entre
estos marcadores + N de dobles recombinates x 100 / n
total de individuos = 20 n ind. rec. entre estos marca-
dores + 1,2 = 18,8
Es decir, 18,8 % son recom. Abc y aBC por lo tanto
aproximadamente tendremos la mitad de individuos de
cada tipo: 9,4 %
2) Se est estudiando una nueva especie de plantas des-
cubierta recientemente. Se sabe que el alelo Q codifica
para hojas verdes, y el q para hojas moteadas (Q domina
sobre q); por su parte el alelo R codifica para hojas re-
dondas, y el r para puntiagudas (R domina sobre r). To-
dava no se sabe la funcin del gen E/e. A estos investi-
gadores les result raro que, a pesar de haber muestreado
una gran regin en la que este tipo de planta habita, no se
encontr ninguna planta con hojas verdes y puntiagudas
simultneamente. Para dilucidar esta cuestin, se realiz
un cruzamiento prueba, y los resultados fueron los si-
guientes:
a) Qu genes estn ligados?
b) Hay interferencia? Contestar si o no, no
hace falta calcularla numricamente (lo
mismo en a)
c) Por qu piensa que no se observan indi-
viduos de uno de los genotipos posibles?
d) Analizando los resultados, discuta qu
supuestos de los que se utilizan para este
tipo de estudio para calcular las distancias
gnicas en base a las frecuencias observadas
pueden no estar cumplindose.
Rta: a) Q/q y E/e estn ligados, E/e y R/r estn ligados,
q/Q y R/r no pareceran estar ligados porque el porcentaje
de recombinacin es del 50%. Sin embargo, se encuen-
tran en el mismo cromosoma (estn ligados a 50 um o
ms)
Para hacer los clculos (no pedidos para responder la
pregunta), primero tienen que sacar el locus central que
es el E/e. Despus:
dist Q/q E/e = 36,9 um
dist E/e R/r = 13,27 um
clases Nro
EqR 280
eqr 203
EQR 199
eqR 7
Eqr 67
eQr 279
eQR 73
4
dist q/q R/r = 50,07 um (no estn ligados)
Lo correcto para calcular la distancia entre los genes de
los extremos es sumar las distancias internas (da 50,07
um), en vez de realizar una prueba de dos puntos (da
48,92 um), pues de lo contrario no se estaran conside-
rando los dobles recombinantes.
b) Si. Para hacer los clculos (no pedidos para responder
la pregunta)
Cc = 7 / 54,25 = 0,12
Por lo tanto I = 1- 0,12 = 0,88
Siendo 7 el nro de dobles rec observados
Siendo 54,25 el nro de dobles rec esperados (0,369 *
0,1327 * 1108)
Siendo 1108 el total de individuos
c) Una posibilidad es que, como sugera el enunciado, la
combinacin de alelos Q/q r/r sea letal, siempre y cuando
a su vez el genotipo sea E/e. En el campo abierto podra
presentarse el mismo fenotipo generado por el genotipo
anterior por ejemplo por la combinacin de QQ Ee rr, Qq
EE rr Qq eE rr (pues se pueden dar todas las combina-
ciones posibles, al no tratarse de cruzamientos prueba).
Dado que en el enunciado se menciona que a campo
abierto no se observa ese fenotipo (hojas verdes y puntia-
gudas) se puede pensar que tanto Q/Q r/r como Q/q r/r
son combinaciones letales en presencia de por lo menos
un alelo E. (y no en presencia de ee, ya que se observan
parentales del cruzamiento prueba que son Qq ee rr)
d) Hay que recordar que para calcular distancias en base
a frecuencias fenotpicas, se supone que todas las game-
tas son igualmente viables. En este caso vemos que no es
as.
3) Los experimentos que realiz Mendel, con una serie de
marcadores genticos de arveja, le permitieron llegar a la
conclusin de que los caracteres se transmitan indepen-
dientemente unos de otros. Sin embargo, se sabe ahora
que tres de ellos se encuentran en el cromosoma 4, en las
posiciones (en unidades Morgan respecto del inicio del
cromosoma), 78 (fa, vainas axiales/terminales), 199 (te,
altura de planta alta/enana) y 211 (v, vainas hincha-
das/arrugadas), siendo dominantes los alelos que se men-
cionan primero.
a) Dibuje un mapa gentico de los marcadores indicando
las distancias entre ellos. Qu conclusiones puede deducir
respecto a la utilidad que hubieran presentado estos loci
para los estudios de Mendel?
b) Segn los datos aportados, indique las frecuencias
fenotpicas y genotpicas que esperara en la F1 - y su
correspondiente F2- proveniente de un cruzamiento entre
dos lneas puras: una de plantas altas y vainas hinchadas
y otra de plantas enanas y vainas arrugadas. Cules son
las frecuencias que hubiera esperado Mendel?
c) Qu cantidad de individuos de cada fenotipo espe-
rara encontrar, si la F2 estuviera compuesta por 160
plantas? Cuntos hubiera esperado Mendel (no es nece-
sario realizar la verificacin estadstica)?
Solucin
a) La distancia entre estos genes en unidades mapa es
de 199 - 78 = 121 (fa-le) y de 211 - 199 = 12 (le-v). De-
bido a la enorme distancia que separa al gen fa de los
otros dos, en un experimento de cruce se hubieran com-
portado como independientes. Sin embargo, el cruce le x
v hubiera dado resultados muy alejados de la independen-
cia. Por lo tanto, este par de caracteres no le hubiera per-
permitido elaborar sus leyes.
Aclaracin: en el enunciado dice te.
b) Resultados que hubiera obtenido Mendel de haber
cruzado le y v:
Le V/Le V x le v/le v

= Le V/ le v
De acuerdo con la distancia a la que se encuentran estos
dos genes y suponiendo igual frecuencia de recombina-
cin en la formacin de los gametos en los dos sexos,
tendramos: Ac deben saber en funcin de la distancia,
las frecuencias de los que son recombinantes y de los
que no lo son es un conepto terico importante.
0,44 Le V 0,44 le v 0,06 Le v 0,06 le V
0,44 Le V 0,1936 0,1936 0,0264 0,0264
0,44 le v 0,1936 0,1936 0,0264 0,0264
0,06 Le
v
0,0264 0,0264 0,0036 0,0036
0,06 le V 0,0264 0,0264 0,0036 0,0036
(En blanco, fenotipo LeV, en amarillo, lev. En rosa: Le v,
en celeste, le V.
es decir, (Aca deben saber en forma terica cuales
seran las frecuencias esperadas de recombinantes y
no recombinantes)
Le V le v Le v le V
Observado 0,6936 0,1936 0, 0564 0,0564
Esperado 9/16=
0,5625
1/16
0,0625
3/16
0,1875
3/16
0,1875
c) Mendel, en su trabajo sobre hibridacin en plantas,
indica que se hicieron varios experimentos uniendo ca-
racteres de dos en dos o de tres en tres. Si hubiera reali-
zado el cruce anterior unas 160 plantas (nmero de plan-
tas que cont en uno de sus experimentos de dihibridismo
obtenido el siguiente resultado,
Lo que Mendel
hubiera esperado
Lo que Mendel
hubiera encontrado
Le V 90 111 (110,976)
Le v 30 9 (9,024)
le V 30 9 (9,024)
le v 10 31 (30,976)
(Por supuesto, las diferencias son enormes)
Otra forma de resolver el problema
obs L l Total
V 111 9 120
v 9 31 40
Total 120 40 160
Sin suponer ligamiento
esperados L l Total
V 90 30 120
v 30 10 40
Total 120 40 160
4) En los seres humanos, la presencia de uno de los ant-
genos Rh sobre la superficie de los glbulos rojos (Rh +)
se debe a un gen dominante (R). A las clulas Rh - las
produce el genotipo recesivo (rr). Un gen dominante (E)
5
hace que la forma de los eritrocitos sea ovalada (eliptoci-
tosis). Su alelo recesivo (e) produce clulas sanguneas
normales. Ambos genes estn ligados aproximadamente a
20 unidades de mapa en uno de los autosomas. Un hom-
bre con eliptocitosis, cuya madre tena eritrocitos de for-
ma normal y homocigota Rh+ y cuyo padre era Rh- y
heterocigoto para la eliptocitosis, se casa con una mujer
normal Rh-.
a) Cul es la probabilidad de que su primer hijo sea Rh
- y eliptocittico?
b) Si su primer hijo es Rh+, cul es la probabilidad de
que tambin sea eliptocittico?
En ambas respuestas indique cmo realiz el clculo, es
decir, de dnde salen los nmeros.
Solucin.
a) Se debe analizar los genotipos de los progenitores del
hombre con eliptocitosis:
Re/Re x rE/re
madre con eri-
trocitos norma-
les y Rh+
homocigota
padre Rh- y hete-
rocigota para la
eliptocitosis
De esta forma, se puede concluir que el hombre con elip-
tocitosis tiene el siguiente fenotipo:
Re (dado por la madre) / rE (dado por el padre)
Si este individuo se casa con una mujer Rh- y con eritro-
citos normales er/er, la probabilidad de que su primer
hijo sea Rh- y eliptocittico (de genotipo rrEe) se esta-
blece de la siguiente forma:
F1: Re/ rE x re/re
hombre con elipocitosis
y Rh+
mujer con Rh- y con
eritrocitos normales
Como la distancia entre los loci R y E es de 20 cM, se
espera que un 20% de las gametas sean recombinantes y
que el 80% restante correspondan a gametos parentales.
Sin embargo, dentro de este ltimo porcentaje, la mitad
corresponde al genotipo Re y la otra al genotipo rE. Para
que se produzca un nio de genotipo rrEe se debe juntar
un gameto que tenga los genes rE, el cual vendra del pa-
dre, y otro que contenga los genes re, que vendra de la
madre. La probabilidad de que se encuentren estos game-
tos depender de la frecuencia con que se produzcan en
los progenitores. As, en el padre un 40% de los gametos
producidos presentan los genes rE, lo que es igual a una
probabilidad de 0,4, mientras que en la madre la totalidad
de los gametos producidos en la meiosis presentan el ge-
notipo re.
0,4 rE x 1 re = 0,4
O sea, se tiene una probabilidad de 0,4 (2/5)
b) Para que el hijo sea Rh+ se debe considerara tanto los
gametos parentales como los gametos recombinantes.
Re: es un genotipo parental que presenta una
probabilidad de 0,4
RE: Es un genotipo recombinante que presenta
una probabilidad de 0,1
La suma de estas 2 probabilidades (eventos excluyentes)
establecer la probabilidad de tener un nio Rh+: 0,4 +
0,1 = 0,5. Sin embrago, un nio eliptocittico se produ-
cir tras un encuentro entre un gameto masculino, con los
genes RE, y un gameto femenino que presente el geno-
tipo re. De esta forma, la probabilidad de tener un nio
eliptocittico, adems de ser Rh+, se calcula:
0,1 (probabilidad de encontrar un gameto RE) / 0,5
(probabilidad de encontrar un gameto RE Re) = 0,2
Mutagnesis
1) En levaduras, el tratamiento con mutgenos permiti
seleccionar, en forma independiente, varios tipos de mu-
tantes auxtrofas incapaces de utilizar galactosa como
nutriente. El mapeo de las mutaciones responsables de
esta caracterstica permiti clasificarlas en 2 grupos de
ligamiento distintos (mendelianamente independientes).
a) Significa este resultado que los genes involucrados se
encuentran en 2 cromosomas distintos? Por qu?
b) Cul ser el fenotipo resultante del diploide resultado
del cruzamiento entre mutantes (haploides) pertenecien-
tes a distintos grupos de ligamiento? Por qu?
c) Cmo sern las proporciones fenotpicas de las leva-
duras (haploides) derivadas de las ascosporas una vez
producida la meiosis?
d) Qu clase de mutagnesis es la ms apropiada para
este tipo de experimentos? la producida por radiacin
(gamma) o por algn compuesto qumico como el EMS o
la nitrosoguanidina? Justifique muy brevemente.
Respuesta: a) En principio s, los grupos de ligamiento
pueden comprender y extenderse ms all de 50 u de re-
combinacin y pertenecer al mismo cromosoma [es decir,
si bien 2 genes o marcadores pueden comportarse mende-
lianamente como independientes por estar a ms de 50
unidades de mapa, a travs de otros marcadores o genes
intermedios puedo incluirlos a ambos en el mismo grupo
de ligamiento = cromosoma. Sin embargo pueden existir
2 grupos de ligamiento pertenecientes al mismo cromo-
soma si no tengo la suerte de encontrar marcadores o ge-
nes intermedios].
b) Prottrofa. Por complementacin. [Si a es el alelo mu-
tante de A y b de B: Ab x aB AaBb fenotipo salvaje]
c) 3 a 1, auxtrofas a prottrofas [ ab, Ab, aB vs
AB]
d) Usualmente se utiliza algn mutgeno qumico (como
EMS o nitrosoguanidina) que producen mutaciones pun-
tuales y se pueden dosificar ms fcilmente. La radiacin
produce rupturas, deleciones y rearreglos cromosmi-
cos groseros, por lo que sera menos conveniente.
2) Se estudia el efecto de 2 conocidos mutgenos en le-
vaduras: el etil metanosulfonato (EMS) y el bromuro de
etidio (EtBr) observando la frecuencia de aparicin de
petites (levaduras que forman colonias de crecimiento
mucho ms lento que las normales o grandes, debido a un
malfuncionamiento del sistema de fosforilacin oxidati-
va). A primera vista, los resultados parecen similares ya
que ambos mutgenos inducen una abundante aparicin
de mutantes. Sin embargo, ms del 99% de las mutantes
obtenidas con EMS, segregaban en una proporcin men-
deliana de 50% grandes a 50% petites, al ser cruzadas
con levaduras salvajes (grandes). Nota: recordar que las
levaduras son usualmente haploides y que los fenotipos
descriptos se refieren a lo observado con ese nivel de
ploida. En cambio, ms del 90% de las mutantes obteni-
das con EtBr segregaban 100% de petites o 100% de
grandes. Es decir, a pesar de tener un parental petite y un
6
parental grande, la progenie era toda petite o toda gran-
de. Cmo se explican estos resultados?
Solucin: el EMS afecta, fundamentalmente a genes nu-
cleares (que pueden afectar a las funciones mitocondria-
les para resultar en un fenotipo petite -no realizan fosfori-
lacin oxidativa- porque stas importan ciertas protenas
codificadas en el ncleo) y el EtBr tiene mayor especifi-
cidad por los genes mitocondriales que se heredan unipa-
rentalmente.
3) A un grupo de ratones macho se le di de beber 5BrdU
(anlogo de timidina) durante 1 semana y luego se lo
cruz con muchas hembras salvajes. De los 1000 descen-
dientes dos machos presentaron alteraciones respecto del
fenotipo salvaje:
a) Estas mutaciones que se evidenciaron en la cruza, qu
tipo de mutaciones pueden ser: autosmicas recesivas,
autosmicas dominantes, ligadas al X, ligadas al Y? Jus-
tifique todos los casos.
b) Teniendo en cuenta que los oocitos de las hembras se
encuentran detenidos en diplotene desde antes de nacer
antes de recontinuar la meosis en cada ciclo estral (es el
tipo de perodo en ratones como lo es el menstrual en
humanos), considera que hubiera sido efectivo haber
tratado hembras con el agente mutagnico y luego cruzar
por machos salvajes?
Rta:
a) autosmica recesiva: no puede ser porque solo una
gameta porta la mutacin por lo que son heterocigotas
autosmico dominante: s
ligado al X: el macho recibe el cromosoma X de la madre
que es salvaje
Ligado al Y: puede ser
b) Ya ocurri la sntesis de ADN antes de nacer, por lo
que un anlogo de base cuya introduccin de mutaciones
es durante la duplicacin del ADN no va a tener efecto.
Alteraciones cromosmicas y numricas
1) El caballo (Equus caballus) tiene un complemento di-
ploide de 64 cromosomas, de los cuales 36 que son
acrocntricos. El burro o asno (Equus asinus) tiene 62, de
los cuales 22 son acrocntricos.
a) Indique el nmero (diploide) de cromosomas que
tendr el hbrido interespecfico (la mula)
b) A qu atribuye la usual esterilidad (incapacidad de
producir gametas viables) de la mula?
R: a) Las gametas de los caballos tendrn 32 cromoso-
mas (la mitad de 64) y las de los burros 31 32 +31 =
63 (el 2n de la mula es impar!).
b) A los problemas de apareamiento y segregacin mei-
tica derivados de cromosomas tan dismiles y de nmero
impar
2) Describa un ejemplo de alteracin cromosmica es-
tructural que afecte la fertilidad en individuos heterocigo-
tas para la alteracin. Justifique brevemente su respuesta.
Respuesta: Cualquiera de los ejemplos de alteraciones
estructurales que dio Liliana o figuran en los libros
(translocaciones recprocas, por ejemplo) que impliquen
la formacin de configuraciones meiticas como trivalen-
tes, tetravalentes, etc. y que afecten la correcta migracin
de los cromosomas en la anafase meitica. La inclusin
de algn esquema reemplaza buena parte de la explica-
cin.
3) Se desea localizar en qu cromosoma se localiza el
locus para un marcador molecular de tipo codominante
(microsatlite) ligado a un carcter de inters agronmico
(QTL). La especie vegetal tiene un nmero diploide de
2n=10 cromosomas y se dispone de la serie monosmica
completa. Se cruza una planta dismica homocigtica
(muestra una banda de 200 pb) por cada uno de los dife-
rentes monosmicos todos los cuales muestran una banda
de 180 pb. Algunos de los descendientes muestran ambas
bandas (200/180 pb) y otros slo una (la de 200 pb). Las
descendencias obtenidas se desglosan en la tabla clasifi-
cadas de acuerdo a su constitucin cromosmica, es decir
si poseen 9 cromosomas (es decir, monosmicas) o 10
cromosomas (dismicas, ver columna 1) y a su patrn de
bandas (columnas 2 a 5):
Cromosoma en con-
dicin monosmica
Descendencia de los 5 cruza-
mientos

analizados
Dismicos Monosmicos
200/180 200 200/180 200
1 140 0 139 0
2 97 0 93 0
3 193 0 0 196
4 58 0 57 0
5 158 0 145 0
Explique los resultados obtenidos e indique en qu cro-
mosoma se localiza el marcador molecular.
Solucin: Si el locus no est en un cromosoma cualquie-
ra de los que se encuentran en 2 copias (es decir no est
en el monosmico) tendr una segregacin 1:1 mendelia-
na normal y todos sus descendientes sern heterocigotas
200/180. Si el locus est en el cromosoma crtico lo que
realmente estamos cruzando es 200/200 x 180, y de esta
descendencia, los individuos con 9 cromosomas sern
200 y los de 10 cromosomas sern 200/180. Si observa-
mos la tabla vemos que este razonamiento se compatibi-
liza con los resultados del cromosoma 3.
Por ej. para el cromosoma 1: 200/200 x 180/180 to-
dos 200/180 (sean mono- o dismicos)
Para el cromosoma 3: 200/200 x ---/180 50% 200/180
(dismicos) y 50% ---/200 (monosmicos)
4) En una enferme-
dad gentica huma-
na se observa la si-
guiente conforma-
cin cariotpica de
los pares de cromo-
somas 7 y 21 (notar
las similitudes de
bandeo mostradas
por las llaves).
a) Cual fue el origen de esta anomala y qu nombre
recibe?
b) En caso de examinar la gametognesis de este indivi-
duo esperara observar alguna peculiaridad durante la
meiosis? Cul?
c) Podra implicar una reduccin en la fertilidad de las
gametas? Por qu?
Respuesta: a) Translocacin no recproca) 7:21
b) S. Polivalentes formados entre el 7, el 21 y el 21
translocado
7
c) S, como consecuencia de lo descripto en b) se afectar-
a la migracin a los polos provocando aneuploidas ca-
paces de inviabilizar las gametas
5) Un investigador trat con colchicina las famosas arve-
jas de Mendel y obtuvo los tetraploides correspondientes.
Por otro lado, tambin introdujo un transgn proveniente
del trigo que estabiliza una forma de herencia diploide
evitando la formacin de polivalentes (por ej. tetravalen-
tes) que puedan distorsionar la meiosis. Luego repiti los
cruzamientos arvejas de flores blancas por arvejas de flo-
res rojas. Qu proporciones de plantas con flores blancas
y rojas obtuvo en la F2? Describa los genotipos simplifi-
cados de dicha F2, de la F1 que le dio origen y de los pa-
rentales poliploides (usar guiones bajos para ejemplificar
casos en que ambas variantes genotpicas resultan en fe-
notipos equivalentes)
Respuesta ms correcta:
a) 15 a 1; P: AAAA x aaaa F1: AaAa F2. 15 A___
1 aaaa o
Respuesta menos correcta:
b) si se interpreta que todos los bivalentes posibles se
pueden formar (al azar) la frecuencia de individuos aaaa
en la F2 es 1/ 36 (1:35)
6) En un reciente trabajo de Learmonth y colaboradores
se estudiaron los efectos a largo plazo de las artroplastas
(injerto o reemplazo de partes seas por prtesis metli-
cas) que generan debris (restos) en linfocitos de sangre
perifrica. Estos restos metlicos se suelen alojar en las
adyacencias de la prtesis, ganglios linfticos, hgado y
pncreas. Para ello realizaron hibridacin in situ (FISH:
preparados cromosmicos a los cuales hibridaron) con
sondas especficas del cromosoma 1 marcadas con un
fluorforo (rodamina) que lo tie especficamente de ro-
jo, contrastando con el color azul del resto de los cromo-
somas (teidos con DAPI). Observaron que cuando se
utilizan prtesis con cromo-cobalto se observa un aumen-
to de 3,5 veces de conformaciones cromosmicas del tipo
de la figura 1 y 2,5 veces de las de la fig. 2 respecto a la
utilizacin de prtesis de acero inoxidable.
a) Defina el tipo de mutaciones cromosmicas estructura-
les y numricas detectadas en las figs. 1 y 2.
b) En el trabajo se hizo un especial esfuerzo para que el
muestreo realizado se independizara de factores como el
hbito de fumar, el nmero de radiografas, etc. Por
qu?

c) De acuerdo a lo que muestra este trabajo. En principio,
las prtesis de cromo-cobalto inducen mutaciones som-
ticas o germinales? Es decir, podran aumentar la proba-
bilidad de que se produzcan malformaciones genticas en
la descendencia de estos pacientes?
d) En este trabajo solo se examinaron mutaciones de
tipo estructural y no aquellas de tipo puntual? Se le ocu-
rre algn modelo experimental (no humano) para estudiar
este aspecto. Le servira este modelo para contestar con
ms certeza la pregunta c)?
Rta a) traslocacin y aneuploida (triploida) del cromo-
soma 1
b) Porque son otros factores mutagnicos comprobados
que tambin aumentan la tasa de mutaciones y podran
interactuar sinrgicamente (o no) con el factor que estoy
estudiando.
c) Somticas. En principio, no. (los debris no se acumu-
lan en tejidos reproductivos)
d) Los sistemas basados en ratones transgnicos vistos en
clase de problemas injertados con prtesis o inyectados
con debris metlicos en sangre, analizando distintos teji-
dos incluyendo el reproductivo. Pueden contestar otros
sistemas como pueden ser los de intercambio de cromti-
des hermanas (por ej) pero este sistema no detecta tan
bien mutaciones puntuales sino las cromosmicas o el
test de Ames pero no podran examinar tejido reproducti-
vo.
7) Un investigador est estudiando la gentica de una
especie de helecho denominado Verdecitus bonitus, cul-
tivada hace siglos por los indgenas del Amazonas. Le
llama la atencin que en una tribu (que llamaremos 1)
todos los helechos son de hoja verde brillante (v1), de
borde liso (b1) y textura aterciopelada (t1), mientras que
en dos tribus del otro lado del ro (que llamaremos 2 y
3) los helechos son opacos (v2), de borde festoneado (b2)
y textura rspida (t2). Decide estudiar si los helechos de
las distintas tribus pertenecen realmente a la misma espe-
cie y cul es la dominancia entre los rasgos. Al cruzar los
helechos de la tribu 1 con los de las 2 obtiene una F1 in-
tegrada por helechos v1, b1 y t1 y sin problemas de ferti-
lidad. Decide entonces que es vlido considerarlas de la
misma especie y decide mapear los loci estudiados. Ana-
liza para ello 400 gametas producidas por la F1 y encuen-
tra los siguientes resultados:
v1b1t1 87
v2b2t2 79
v1b2t1 19
v2b1t2 21
v1b1t2 77
v2b2t1 80
v1b2t2 15
v2b1t1 22

a) Indique a qu conclusiones lleg el investigador. De-
talle los genotipos en los cruzamientos realizados, la do-
minancia de los alelos y los resultados del mapeo.
Por otro lado, al cruzar los helechos de la tribu 1 con los
de la tribu 3, suponiendo que iba a lograr los mismos re-
sultados, se sorprendi al obtener otro resultado. La F1,
fenotpicamente igual al parental de la tribu 1, present
300 gametas de los siguientes tipos:
v1b1t1 141 v3b3t3 134 v1b3t3 14 v3b1t1 11
Al estudiar ms detalladamente encontr que la F1 era
menos frtil que sus padres (los helechos nativos de cada
tribu presentaban una fertilidad similar)
b) Explique todos los resultados obtenidos, realizando un
esquema que muestre claramente qu se observara en
paquitene de la F1 y la ubicacin relativa de los loci, con
sus distancias.
RESPUESTA
a) Los helechos cultivados en tribus distintas son homo-
cigotas. Por lo tanto el cruzamiento es
V1b1t1/v1b1t1 (tribu1) X v2b2t2/v2b2t2 (tribu 2).
Fig. 1
Fig. 2
8
La F1 es heterocigota y vemos que los rasgos de la tribu
1 son todos dominantes. Al analizar las distancias llega-
mos a
VBT V-B V-T B-T CANTIDAD
111 P P P 87
222 P P P 79
121 R P R 19
212 R P R 21
112 P R R 77
221 P R R 80
122 R R P 15
211 R R P 22
VB: P= 323, R= 77 =>19,25 cM (20 es aceptable)
VT: P=206, R= 194=> 48,5 No ligado
BT: P=203, R= 197 =>49,25 No ligado
VB estn a 20 u.m., T est en otro cromosoma o en el
mismo, pero muy alejado.
b) Ac desaparecen fenotipos. Hay transtornos de fertili-
dad. Al analizar los resultados tenemos:
VBT V-B V-T B-T CANTIDAD
111 P P P 141
333 P P P 134
133 R R P 14
311 R R P 11
VB= P= 275 R=25 => 25/300 0,0833 (aprox 8,3 cM)
VT todos parentales.
BT mismo resultado
Lo ms probable es que haya ocurrido una translocacin.
Entonces, lo que estamos midiendo (8,33cM) es la dis-
tancia entre V y el punto de la translocacin. (F1 es hete-
rocigota estructural)
Es importante que expliquen que los trastornos de fertili-
dad se deben a que las gametas cuya segregacin no es
alterna no prosperan.
Tienen que realizar el siguiente esquema y marcar que
probablemente la distancia entre V y B siga siendo 20,
pero la distancia entre V y el punto de translocacin es
8,33
(V y B pueden ser intercambiables.)
Si la translocacin no ocurre cortando el espacio entre
V y B no cambian las distancias entre ellos, que es lo que
pasa en el problema. Por lo tanto, esas opciones se des-
caetan- Igualmente, las gametas resultantes de quiasmas
entre B y la translocacin o entre t y la translocacin son
desbalanceadas. Slo las recombinantes entre V y la
translocacin son completas. Esas corresponden al 8,33-
Este esquema es uno de los posibles, ya que no hace falta
que los marcadores v y t estn en el mismo cromosoma,
slo es necesario que la translocacin se d entre esos dos
cromosomas. Esta es otra opcin:
Si plantearon que T est en un cromosoma distinto, la
nica opcin es la translocacin. La inversin entre V y B
no modificara a T, por lo tanto VT y BT seguiran dando
no ligados.
La fusin (los 3 cromosomas en el mismo cromosoma)
no es una opcin porque, si bien podra modificar la dis-
tancia de T a los ems no modificara la distancia entre V
y B.
Por otro lado, tampoco es vlida una delecin. Primero,
porque si no es muy grande no debera ocasionar trans-
tornos en la fertilidad. Segundo porque an si cambia la
frec de recombinantes ebtre V y B no cambiara T, que
seguira estando no ligado.
En el caso en que los tres loci estn en el mismo cromo-
soma (T bien lejano) s es vlido considerar que una de
las tribus tiene invertido V-B respecto a la otra. En ese
caso las gametas parentales y las recombinantes entre V y
el punto de inversin son las nicas viables.
8) Usted trabaja en un hospital, en la divisin de Cito-
gentica. Dos familias con padres de fenotipos comple-
tamente normales recurren a usted pues entre sus descen-
dientes tienen una hija que presenta Sndrome de Down.
Este sndrome se produce por tener 3 copias del cromo-
soma 21.
Flia Madre Padre Hija enferma
1 46, XX 46, XY Down
2 45, XX, +T (14q. 21q) 46, XY Down
a) Cul es el cariotipo de las hijas de cada familia?
b) Cmo es posible que la madre de la familia 2 tenga
fenotipo normal?
En la meiosis de la madre de la familia 2 se producen
trivalentes y en la posterior segregacin dos cromosomas
del trivalente, al azar, migran a un polo y el restante al
otro.
c) Para cada uno de los 3 casos descriptos indique en la
meiosis de qu parental se produjo la falla y en qu fase
de la misma. Mencione todas las posibilidades.
9
d) Para cada familia indique si la probabilidad de tener
otro hijo con Down es alta o baja. Justifique.
Respuesta:
a) Hija 1: 47, XX, +21
Hija 2: 46, XX, -14, +T (14q . 21q)
b) El cromosoma 14 y el 21 son acrocntricos por lo que
en la fusin, con prdida de los brazos cortos, posible-
mente se perdieron pocos genes. La madre de la familia 2
tiene 45 cromosomas: dos de cada par, un cromosoma 14,
un cromosoma 21 y uno translocado. Salvo para los ge-
nes de los brazos cortos del 14 y el 21 hay 2 copias de
cada gen. Los genes de los brazos cortos del 14 y 21 que-
dan en hemicigosis (estn en las copias normales) pero si
son pocos puede que el fenotipo de la madre sea normal.
c) Familia 1: Los padres tienen genotipo normal por lo
que lo ms probable es que no haya ocurrido disyuncin
para el cromosoma 21 en la anafase I o la anafase II du-
rante la formacin de gametas en el padre o en la madre.
Familia 2: La madre presenta una fusin entre el cromo-
soma 14 y el 21. Como resultado de esto en metafase I se
forma un trivalente por lo que en anafase I puede haber
una segregacin desbalanceada de cromosomas.
d) Familia 1: La no disyuncin es una falla que ocurre al
azar por lo que, teniendo en cuenta factores de riesgo
como edad de los padres, etc., la probabilidad de que ten-
gan ms hijos con el Sndrome de Down son bajas, o por
lo menos similares a las de cualquier otra pareja.
Flia 2: 1/6 de las gametas darn lugar a descendientes con
Sn-drome de Down. Es decir tiene una alta probabilidad
de tener otro descendiente Down (que en realidad dentro
de los hijos nacidos vivos es ms de 1/6 ya que los casos
resaltados en rojo no son viables, y el ltimo caso gene-
ralmente tampoco).
10) Cuando se cruzaron dos plantas pertenecientes al
mismo gnero, pero de diferentes especies, los hbridos
F1 presentaron mayor viabilidad y tuvieron ms flores.
Desgraciadamente, estos hbridos fueron estriles y slo
se pudieron propagar mediante injertos vegetativos. Ex-
plique la esterilidad de los hbridos. Cmo podra el hor-
ticultor intentar anular la esterilidad. Explique los resul-
tados que obtendra.
Rta.
La esterilidad se debe a que, como son especies diferen-
tes, los cromosomas no son homlogos, sino homelo-
gos. Por lo tanto no se forman bivalentes, o slo se for-
man pocos bivalentes y muchos univalentes, la meiosis es
irregular, y no se producen gametas viables (balancea-
das).
Para anular la esterilidad se puede tratar con colchicina,
lo que produce una duplicacin del nmero de cromoso-
mas. Esto da por resultado un alotetraploide (o anfidi-
ploide), en el cual se forman todos bivalentes, la meiosis
es regular y las gametas son balanceadas.
9) Se realiza el siguiente cruzamiento entre moscas (Dro-
sophila melanogaster). Una hembra heterocigota para los
siguientes caracteres: vestigial (vg) mutacin recesiva
ubicada en el cromosoma II, white (w) mutacin recesiva
ubicada en el cromosoma I (que es el X) y ebony (e) mu-
tacin recesiva ubicada en el cromosoma III es cruzada
con un macho recesivo para los tres caracteres. Se obtu-
vieron los siguientes resultados, siendo que toda la des-
cendencia (sean machos o hembras) presentaron los si-
guientes fenotipos:
vg+ e+ w+ : vg e+ w : vg e w : vg+ e w+
JUSTIFIQUE si las siguientes afirmaciones son correc-
tas (o no):
a) No se observan recombinantes entre vg y w, lo que
puede deberse a la existencia de una inversin que invo-
lucre a ambos genes.
b) No se observan recombinantes entre vg y w lo que
puede deberse a la existencia de una o ms translocacio-
nes recprocas.
c) Entre los machos de la descendencia, la proporcin
de machos con ojos blancos (white) es de 1/4 dado que
este carcter est ligado al sexo.
d) Si hubiese habido una translocacin recproca entre e+
y w+, la proporcin de machos descendientes w+ hubiese
sido distinta a la proporcin esperada (proporcin espera-
da es la que se obtendra si no hubiese una alteracin
cromosmica).
R) a) Incorrecta. Slo puede considerarse la translocacin
recproca ya que los genes estn en cromosomas inde-
pendientes. Esta alteracin permite explicar que los genes
segreguen como si estuviesen ligados.
b) Correcta. Podra ser que vg+ haya translocado al cro-
mosoma donde est w+ o que vg haya translocado al
cromosoma donde est w. Sera menos probable que se
produzcan dos eventos de translocacin recproca.
c) Incorrecta. White s est ligado al sexo pero la propor-
cin es de .
d) Incorrecta. La proporcin esperada de machos con ojos
wild type entre los machos de la descendencia es de .
Ejemplifico el caso en que hubiese habido una transloca-
cin recproca entre w+ y e+.
Gametas que produce la hembra translocada:


Gametas que produce
el macho:



Gametas
Machos
w+ y hete-
rocigota
para e
Machos w
y homocigo-
ta para e
10
Gentica de poblaciones
1) La apolipoprotena E (apoE) fue implicada como un
factor de riesgo en las enfermedades cardiovasculares y
en el Alzheimer. Se describieron 3 alelos comunes:
apoE2, apoE3 y apoE4. La tabla muestra la
distribucin poblacional de los distintos genotipos:
Cul es la frecuencia del alelo apoE2?
Genotipo E2E2 E2E3 E2E4 E3E3 E3E4 E4E4 Total
N indiv 2 64 7 684 169 11 937
a) 0,002 b) 0,040 c) 0,076 d) 0,175
Respuesta:b) [f(E2)= (2x2)+(64)+(7)/(937x2)=0,040]
2) Hagamos un poco de ciencia-ficcin. Supongamos
que la ciencia mdica avanzase hasta el punto de que,
con un tratamiento aplicado a lo largo de toda la vida, la
especie humana dejase de sufrir nuevas mutaciones.
Admitamos tambin que tal tratamiento se aplica a toda
la humanidad en el intervalo de una sola generacin, y
se mantiene as en lo sucesivo. Qu ocurrira con la
variabilidad gentica en las sucesivas generaciones?
Aumentara? Desaparecera? Se mantendra? Expl-
quese tanto como pueda.
Respuesta: Suponiendo panmixia, ausencia de selec-
cin y el alto nmero poblacional de la especie, la va-
riabilidad debera mantenerse constante (en equilibrio
de HW). Por lo tanto, se mantendra. Lo que se impedir-
a es el surgimiento de potenciales nuevos alelos inexis-
tentes en la poblacin actual.
2) Segn algunos las rubias (no teidas) estn condena-
das a la extincin cuando la poblacin humana mundial
llegue a total panmixis. El alelo determinante del color
rubio del principal gen involucrado en el color del cabe-
llo es de expresin recesiva.
Si mediante un clculo arbitrario estimamos que la can-
tidad de rubias/os es de 22 millones sobre una pobla-
cin mundial de 6.600 millones y hay 50 millones de
heterocigotas.
a) Cul ser la proporcin de rubios cuando la pobla-
cin llegue a equilibrio de Hardy-Weimberg?
b) Qu proporcin de rubios de la poblacin tendrn
los dos padres no rubios?
Rta: p=R+1/2H= 22/6600 +50/6600*1/2= 0,0071
q=1-p=0,9929
En equilibrio H-W, la poblacin de rubios ser
p
2
=5*10
-5

b) NO era necesario contestar. La respuesta era q
2

2pq=0,014. La proporcin de matrimonios (0,014)
2
=
2*10
-4

Hijos * 2*10
-4
= 5.10
-5
3) Un investigador est estudiando una poblacin de
peces que habita en una laguna ubicada en un oasis en
el desierto del Sahara. Se propone estudiar dos loci co-
rrespondientes a dos enzimas en 1000 individuos:
Locus 1: A
1
A
1
: 640, A
1
A
2
: 320, A
2
A
2
: 40
Locus 2: B
1
B
1
: 400, B
1
B
2
: 580, B
2
B
2
: 20
a) Determine si los loci antes mencionados se encuen-
tran en equilibrio de Hardy-Weinberg. Evale estadsti-
camente su hiptesis.
b) En caso de que alguno/algunos de los loci no se en-
cuentre en equilibrio, cul/cules pueden ser las cau-
sas: falta de panmixia, seleccin o mutacin? Justifique
tanto su eleccin como aquellas causas que descarta.
Respuesta:
a) Locus 1:
Frecuencias allicas: A1=0,8, A2=0,2
Frecuencias genotpicas esperadas:
A
1
A
1
= (0,8)
2
x1000 = 640
A
1
A
2
= 2x0,8x0,2 x 1000 = 320
A
2
A
2
= (0,2)
2
x 1000 = 40
X
2
= 640
2
/ 640 + 320
2
/ 320 + 40
2
/ 40 = 0 No re-
chazo Ho, por lo que este locus est en equilibrio de H-
W
Locus 2:
Frecuencias allicas: B1=0,69 y B2=0,31
Frecuencias genotpicas esperadas:
Frecuencias genotpicas esperadas:
B
1
B
1
= (0,69)
2
x1000 = 476
B
1
B
2
= 2x0,69x0,31 x 1000 = 428
B
2
B
2
= (0,31)
2
x 1000 = 96
X
2
= (476 - 400)
2
/ 476 + (428 580)
2
/ 428 + (96
20)
2
/ 96 = 126,3
Como este valor es mayor al valor crtico rechazo Ho
este locus no se encuentra en equilibrio de H-W.
b) Falta de panmixia: es poco probable que esta sea la
causa ya que el locus 1 est en equilibrio y si no hubiera
panmixia tambin afectara las frecuencias genotpicas
de este locus.
Seleccin: Es posible. Por ejemplo, el genotipo B
2
B
2

podra estar desfavorecido frente a los otros dos genoti-
pos ya que su frecuencia es mucho menor de la espera-
da.
Migracin: no puede ser ya que se trata de un oasis ais-
lado en el desierto.
Mutacin: Poco probable ya que para que las frecuen-
cias genotpicas observadas se deban a mutacin
aproximadamente 80 de los 620 alelos B2 estudiados
deberan haber mutado a B1, es decir que se requeriran
tasas de mutacin muy altas (ms del 10%). Sin embar-
go, no podemos descartar una mnima contribucin de
las mutaciones a las frecuencias observadas.
4) Un estudioso de las plantas Florecitus lindus, descu-
bre una poblacin silvestre en una apartada regin y
decide investigar sus caractersticas.
Primero decide realizar un muestreo al azar de la pobla-
cin, para lo que extrae ADN de 300 plantas. Entonces,
entre otros estudios, analiza un carcter de importancia
ornamental, la presencia de un patrn determinado de
coloracin en la flor. Por estudios previos en el gnero,
sabe que ese carcter est determinado por un nico gen
autosmico y biallico (siendo la presencia del patrn
de coloracin dominante sobre su ausencia). Como la
planta florece cada tres aos, y an no est en floracin,
decide utilizar un marcador molecular RFLP localizado
en el gen. Obtiene tres tipos de patrn de bandas. El
primero, que por sus estudios est asociado con el
patrn de color, aparece en 100 individuos. El segundo
patrn lo tienen 120 individuos y el tercero, slo 80.
a) Esta poblacin se encuentra en equilibrio de Hardy-
Weinberg para este carcter? Si la respuesta es afirma-
tiva, explique por qu cree usted que se mantiene en ese
equilibrio. Si no lo es, d una explicacin razonable de
por qu no existe el equilibrio en esta poblacin.
VC (valor crtico)=3,84 para 1 GL; VC=5,99 para 2
GL; VC=7,82 para 3 GL.

11

b)Qu supuestos me permitiran a m calcular, a partir
de esta poblacin, cules seran las frecuencias gnicas
dos generaciones despus? Y las genotpicas? Expli-
que su razonamiento. Aclaracin: No se pretende que
esas sean realmente las frecuencias que va a tener la
poblacin en esa generacin, slo que indique qu ne-
cesitara un investigador para poder afirmar cules ser-
an.
1) a) observado
a1a1 a1a2 a2a2
100 120 80
p= 0,53333333
q= 0,46666667
Esperado bajo H-W
a1a1 a1a2 a2a2
85,33 149,33 65,33
X
2
= 11,5752551
No est en equilibrio (VC=3,84)
Posible explicacin: lo ms probable es que no exista
panmixia y que haya algo de endogamia (por ejemplo,
porque las plantas poseen algn grado de autofecunda-
cin facultativa, o porque sus semillas no se dispersan
tanto). Esto se justifica porque hay exceso de homoci-
gotas. Otras explicaciones menos probables: diferencia
entre sexos. (en este caso, si hubiera panmixia, slo se
tardara dos generaciones en alcanzar el equilibrio, sera
raro que el investigador justo hubiera encontrado la po-
blacin en ese punto)
b) En ausencia de mutacin, migracin, seleccin y de-
riva, las frecuencias gnicas seran las mismas que aho-
ra. Si adems, hubiera panmixia, las frecuencias genot-
picas seran las del equilibrio.
5) En 1960 el cacique de una tribu localizada en una
lejana isla del pacfico, preocupado por la gran cantidad
de enfermedades de origen gentico presentes en la po-
blacin de la isla recurri al Dr. Boyd. ste estudi la
distribucin de alelos de grupos sanguneos MN (los
individuos son MM, MN o NN), obteniendo los si-
guientes resultados: MM: 520, MN: 160, NN: 320
a) Se encuentra la poblacin en equilibrio de Hardy-
Weinberg con respecto a los grupos sanguneos MN?
Verifique estadsticamente.
b) Hay mayor, menor o igual homocigosis que la espe-
rada por Hardy-Weinberg?
Sorprendido por estos resultados el Dr. Boyd decidi
averiguar un poco ms sobre esta tribu, y encontr que
la misma est dividida en 5 castas. Los matrimonios
entre personas de distinta casta estaban terminantemen-
te prohibidos. Reanalizando sus datos, ahora teniendo
en cuenta las castas a las que pertenecan las personas,
not que dentro de cada casta se cumplan las frecuen-
cias de H-W.
c) Cmo explica este ltimo resultado en relacin a
su respuesta de la pregunta a? Qu supuestos no se
cumplen en la poblacin total?
d) Por qu le parece que hay tantas enfermedades
genticas en la poblacin?
Debido a estos hallazgos el Dr. Boyd recomend al ca-
cique que quitara toda restriccin en cuanto a los ma-
trimonios, lo cual el cacique acat inmediatamente.
En 1980 el Dr. Boyd regres a la tribu y not que a pe-
sar de que la poblacin general no se encontraba en
equilibrio de Hardy-Weinberg, si slo analizaba las
muestras de sangre de los menores de 20 aos ajustaban
perfectamente a dicho equilibrio.
e) Cmo puede explicar este ltimo resultado?
R) a) M = (520 + 160 /2) / 1000 = 0,6
N = (320 + 160/2) / 1000 = 0,4
Si la poblacin se encontrara en equilibrio de H-W las
frecuencias genotpicas deberan ser:
MM = 0,6
2
* 1000 = 360
MN = 2 * 0,6 * 0,4 * 1000 = 480
NN = 0,4
2
* 1000 = 160
X
2
= (520-360)
2
/360 + (160-480)
2
/ 480 + (320-160)
2
/
160 = 444,4
Como es mayor que X
2
1,0,05
entonces rechazamos la
hiptesis. Es decir la poblacin no se encuentra en equi-
librio de H-W.
b) Dado que los homocigotas esperados son 520 mien-
tras que los observados son 840 podemos decir que hay
mayor homocigosis que la esperada por H-W.
c) Dado que estn prohibidos los matrimonios entre
castas no hay panmixia. Por lo tanto aunque cada casta
se encuentre en equilibrio de H-W la poblacin total no
lo est. Esto tambin explica la mayor homocigosidad
respecto de lo esperado por H-W ya que estn favoreci-
dos los matrimonios co-sanguneos.
d) La alta homocigosidad debida a la endogamia hace
que sea ms probable que una persona sea homocigota
para alelos recesivos responsables de una enfermedad
hereditaria.
e) Al quitar la restriccin en la eleccin de pareja, y
suponiendo que a partir de dicho momento hubo pan-
mixia, las frecuencias genotipicas de aquellos que na-
cieron bajo el nuevo rgimen (los menores de 20 aos)
se ajustarn a H-W. Sin embargo, en la poblacin gene-
ral no sucede los mismo debido a que el grupo de per-
sonas que nacieron antes (y que todava estn vivos al
realizar el anlisis poblacional) presenta las proporcio-
nes genotpicas que no ajustaban a H-W.
6) El sistema de grupo sanguneo MN en humanos est
controlado por un par de alelos codominantes (L
M
L
N
).
El Dr K estudio la cantidad de cada genotipo en dos
pueblos de Nuevo Mxico. Para el pueblo Navajo, ob-
serv 305 del tipo L
M
L
M
, 52 L
M
L
N
y 4 L
N
L
N
y para el
pueblo de Tatoos anot 83 L
M
L
M
, 46 L
M
L
N
y 11 L
N
L
N
.
a) Cules son las frecuencias genotpicas esperadas
por HW en el pueblo Navajo y Tatoos?
b) El gobierno de los Estados Unidos decidi re-
ubicar a ambos pueblos para realizar una explota-
cin minera y les asign una tierra conjunta. Se
encuentra esta poblacin conjunta en equilibrio de
H-W? En caso de que la respuesta sea negativa,
Qu supuestos pueden no estar cumplindose?
12
Rta esperada:
a) Navajos: FREC(L
M
L
M
): 0,845 ,FREC(L
M
L
N
): 0,144,
FREC(L
N
L
N
): 0,011
Las frecuencias allicas son: p: 0,917 q: 0,083
Las frecuencias genotpicas esperadas por HW: p2:
0,841; 2pq: 0,152 y q2: 0,007
En Tatoos: FREC( L
M
L
M
): 0,59, FREC( L
M
L
N
): 0,328,
FREC( L
N
L
N
): 0,078
Las frecuencias allicas son: p: 0,754 q: 0,246
b) Para probar si la poblacin se comporta como una
poblacin panmctica puedo analizar si se encuentra en
equilibrio de HW.
La poblacin como un todo presenta las siguientes can-
tidades de cada genotipo:
L
M
L
M
: 305+83: 388

L
M
L
N
: 52+46

: 98

L
N
L
N
: 11+4: 15
FREC(L
M
L
M
): 0,7745, FREC(L
M
L
N
): 0,195,
FREC(L
N
L
N
): 0,023
Frecuencias allicas
p: 0,7745 + 0,195: 0,872
q: 0,023 + 0,195 o 1-p: 0,128
Frecuencias genotpicas esperadas por HW:
FREC( L
M
L
M
):p2: 0.76 , FREC( L
M
L
N
): 2pq: 0,223,
FREC( L
N
L
N
):q2: 0,016
Valores absolutos esperados: L
M
L
M
: 501 x

0.76

:
380.76

L
M
L
N
:

501 x

0,223

: 111,72

L
N
L
N
: 501 x
0,016: 8,016
El X
2
da: 7,897
VC: 0,05 con 2 grados de libertad: 5,991
EL X2 mayor al VC rechazo la hiptesis nula.
No se cumple el supuesto de panmixia porque los
individuos presentes no vienen de cruzamientos al
azar entre ambas poblaciones (al menos por el
momento). Tambin podra contestarse que no se
cumple el supuesto de no migracin.
Gentica cuantitativa
1) La longitud media internodal en espigas de cebada de
la variedad gran cervecera es de 4,24 mm (con baja
variancia). En la variedad imperial la media internodal
es de 6,34 mm (con baja variancia). La media de la F1
de un cruce entre las dos variedades tiene, aproxima-
damente, 5,4 mm (con baja variancia). La F2 da tam-
bin 5,4 mm pero con un rango de variacin continuo
desde un extremo parental al otro (alta variancia). El
anlisis de la progenie de la autofecundacin de cada
uno de los individuos de la F2 mostr 3 distribuciones
entre sus descendientes: i) tipo gran cervecera con me-
dia de 4,24 mm y baja variancia, ii) tipo imperial de
6,34 mm y baja variancia y iii) igual a la F2. La longi-
tud internodal en espigas de cebada, es un carcter dis-
continuo o cuantitativo?Cuntos loci estn involucra-
dos en la segregacin del carcter?Por qu?
Respuesta: La respuesta puede ser de distintas maneras
(ver ms abajo) pero se debe concluir que la herencia
involucra un nico locus y es tpicamente mendeliana
(en este caso semidominante ) y no de tipo cuantitati-
va. Si gran cervecera es AA e imperial aa, la F1 es Aa
(semidominante) y los individuos de la F2 son AA, aa o
Aa, como lo demuestra el comportamiento de las res-
pectivas pruebas de progenie. Se puede contestar que es
un carcter discontinuo (medido cuantitativamente) o
que es cuantitativo (por su forma de medicin) pero
formado por un nico locus (QTL).
2) Una poblacin vegetal silvestre es sometida durante
muchas generaciones sucesivas a un proceso de selec-
cin artificial basado en sembrar cada ao nicamente
las semillas procedentes de plantas incluidas en el 20%
de mayor produccin. Como consecuencia de la selec-
cin practicada, la produccin media aumenta gradual-
mente. Los valores de heredabilidad del carcter pro-
duccin en dicha poblacin a lo largo del proceso selec-
tivo sern a) creciente, b) decreciente, c) primero cre-
ciente y luego decreciente d) constante. Justifique su
respuesta.
Respuesta: Decreciente. La heredabilidad est en fun-
cin directa con la variabilidad gentica (varianza ge-
notpica), la cual disminuye con el proceso de selec-
cin.[Respuesta alternativa: debera ser decreciente y
despus constante, una vez agotada la variabilidad ge-
notpica].
3) Dados los excepcionales conocimientos de Gentica
que adquiri en tiempo rcord en este curso de verano y
gracias a la devaluacin y sus bajas pretensiones sala-
riales, una exitosa empresa textil exportadora de pro-
ductos regionales decide contratarlo para mejorar la
productividad y la calidad de la lana de sus rebaos de
llamas. El establecimiento del NOA dispone de una po-
blacin de animales cuya produccin de lana y calidad
de la fibra siguen una distribucin de tipo normal y que
se muestran en A y B, respectivamente. Tal como
aprendi en Gentica I, lo primero que hace es estudiar
la heredabilidad del carcter y para ello dividi la po-
blacin en 3 subgrupos cada una (denominados 1, 2 y 3
en la figura) de acuerdo a los valores promedio de pro-
duccin o calidad X1, X2 y X3, respectivamente). Se-
guidamente dej que los individuos de cada una de las
subpoblaciones creadas se aparearan entre s y analiz
la distribucin de valores de la siguiente generacin.
Como se ve en la figura, los valores promedio de la
nueva generacin coincidieron con los valores prome-
dio de cada una de las subpoblaciones paternas en A
(productividad). En cambio en B (calidad) coincidieron
con el promedio de la poblacin original sin seleccio-
nar.
a) Cmo fue la heredabilidad de los 2 caracteres?
Debido a que es un profesional muy serio, antes de
hacer un diagnstico prefiri esperar un par de aos
ms y ver que ocurre en una segunda generacin antes
de emitir un diagnstico y una estrategia de mejora-
miento. Para ello, sin aplicar nueva seleccin, dej cru-
zar entre s a los nuevos individuos pertenecientes a las
subpoblaciones.
b) Cmo seran las distribuciones en esta segunda ge-
neracin?
c) Cul fue su diagnstico y qu plan de mejoramiento
present a la empresa?
Aprovechando su estancia en el NOA decidi hacerse
un viajecito a Bolivia y, en el lago Titicaca observ
unas llamas con una fibra de excepcional calidad (muy
superior a cualquiera de las del establecimiento argenti-
no) aunque de productividad de lana muy inferior. In-
deciso, compra esas llamas y vuelve al establecimiento
a realizar nuevos cruzamientos entre ellas y las argenti-
13
nas. Para su sorpresa, entre los descendientes no slo
obtiene individuos con un aumento de la calidad de la
fibra, sino que algunos (muy pocos) animales tienen
una productividad superior a la observada en la subpo-
blacin seleccionada de A. Desconfiado, supone que
los valores de estos pocos individuos podran estar in-
fluidos por el ambiente, por lo que los pone aparte, deja
que se crucen entre s y analiza sus hijos. Resultado: la
alta productividad se mantiene y obtuvo las mejores
llamas de la historia.
d) Cmo explica su buena suerte? Es decir, a qu
fenmeno gentico atribuye este resultado?
A todo esto, ya pasaron varios aos y decide ir con sus
resultados a pedir un considerable aumento de sueldo.
Sin embargo, a esta altura del partido, vuelve Cavallo al
ministerio de Economa, reimplanta la convertibilidad y
la empresa entra en crisis, entre otras cosas porque, du-
rante los aos en Ud. haca estudios genticos, la pro-
ductividad no aument y decidieron prescindir de sus
servicios por ineficiente (no vale la pena hacer inves-
tigacin y desarrollo en la Argentina, le argumentaron)
y le vendieron las llamas a Telecom para su famosa
propaganda (porque observaron que llamaban por tel-
fono muy seguido a sus familiares bolivianos).
Mientras tanto, su hermanito ms chico decide seguir
sus pasos y en la facultad aprende que un grupo en Aus-
tralia, public un trabajo en el que encuentra una aso-
ciacin entre un RFLP correspondiente a un gen que
interviene en la sntesis de la queratina en la lana en
ovejas y que explica el 90% de la variabilidad (varianza
gentica) del carcter calidad de la fibra.
e) En base a toda esta experiencia y en no ms de 10
renglones qu hubiera hecho distinto (adems de votar
con conciencia) para evitar este final?
Respuesta: a) 1 (100%) y 0, respectivamente, b) igual,
c) Que, dada la alta heredabilidad de A, puedo tratar de
seguir seleccionando individuos en base a produccin y
que, dada la nula heredabilidad de B, no hay variabili-
dad gentica y no tiene sentido seleccionar para este
carcter. Deberan buscarse otras fuentes de variabili-
dad. d) Segregacin transgresiva. e) Hubiera tratado de
hacer mis primeras evaluaciones utilizando la mayor
diversidad gentica disponible (y no limitarme a los
animales del establecimiento) y, en paralelo, hubiera
buscado la literatura cientfica relacionada para evaluar
la factibilidad de encontrar marcadores moleculares
para el carcter estudiado que me sirvan para seleccio-
nar con ms eficiencia. Por ejemplo, intentara usar el
gen de oveja como sonda que, si hibrida con el gen
homlogo de la llama, podra servir para observar si
encuentro un polimorfismo til en llama para RFLP (u
otra tcnica como STS, SSCP, etc.), es decir, ver si hay
cosegregacin de un marcador con mi caracterstica de
inters para as usarla en seleccin asistida por mar-
cadores. Respuesta alternativa: llamas transgnicas con
el gen de la oveja.
4) En el mejoramiento bovino se busca un aumento ms
rpido del peso de los animales en determinados ecosis-
temas de pasturas semitropicales. Se trata de un carcter
cuantitativo y aditivo. Para ello se cruzaron vacas con
cebes (de aumento ms rpido, pero cuya calidad de
carne es menor) obtenindose una F1 con valores in-
termedios (la media se ubic equidistante entre la me-
dia de las vacas y la media de los cebes). La varianza
fue muy similar tanto a la de vacas como de cebes
(que a su vez se parecan entre s). Los integrantes de la
F1 se cruzaron entre s para obtener una poblacin se-
gregante.
a) Cmo supone que fue la media de esta poblacin
segregante? mayor, menor o similar a la de la F1?
b) La varianza fue mayor, menor o igual a la de la F1?
Entre los individuos de esta poblacin se encontraron
algunos que superaron en aumento de peso a los mejo-
res cebes.
c) Conoce alguna explicacin gentica a este fenme-
no?
Respuestas esperadas: a) Similar, b) mayor, c) segre-
gacin transgresiva
5) Un conocido protagonista de Los Simpsons que habi-
tualmente se disfraza de Vaquita de San Antonio se de-
dic a la lucrativa venta de dichos colepteros pero,
para hacerlos ms atractivos, necesitaba aumentar su
tamao dado que naturalmente tienen una media de tan
solo 5 mm. Seleccion los machos y hembras ms
grandes que encontr (promedio de 8 mm) pero como
eran muy pocos decidi reproducirlos para as disponer
de volumen para la venta. Para su sorpresa, la descen-
dencia no mantuvo la esperada longitud media de 8 mm
sino que baj a 6,5 mm. Muy enojado por la baja per-
formance de los bichos, los tir y se fue a recoger co-
lepteros nuevos y repiti el procedimiento de seleccin
(con idnticos resultados).
a) Por qu baj la longitud promedio de la descenden-
cia?
b) Puede calcular la heredabilidad de este carcter?
Despus de admirar el tamao de las cucarachas del bar
de Moe, abandon la idea de seleccionar y se le ocurri
criarlas con una dieta que le recomend Homero. De
esta manera logr aumentar el promedio de longitud de
5 a 6,5 mm (lo mismo que arriba!)
c) Es casualidad que ambas medias hayan coincidido?
Finalmente decidi contratarlo como consultor
d) Qu hubiera hecho Ud en caso de querer convertirse
en vendedor de vaquitas de San Antonio super size,
disponiendo nicamente de una regla milimetrada y
sabiendo que en Springfield NO existen laboratorios de
marcadores moleculares o ingeniera gentica?
Respuestas esperadas
1) a) Porque el tamao observado es la combinacin de
una estructura gentica poblacional particular (variancia
gentica) que puede segregar y de la influencia ambien-
tal (no heredable) o variancia ambiental.
b) La seleccin diferencial fue de 8 5 = 3 mm y la
respuesta selectiva 6,5 5 = 1,5 mm. Por lo tanto, la
heredabilidad fue de h
2
= 1,5/3 = 0,5 (50%)
14
c) S (o no, en el sentido de que se reduce a un mnimo
la variancia ambiental permitiendo expresar el mximo
potencial gentico; de todos modos sigue siendo casua-
lidad que coincida una media general nicamente debi-
da a factores genticos de una poblacin sin seleccionar
con los de una poblacin seleccionada en la que no se
afect la influencia ambiental)
d) Volver a seleccionar en la descendencia y en las si-
guientes generaciones hasta que la heredabilidad se
acerque a 0 (adems de darles la dieta de Homero).
6) La resistencia al patgeno Sclerotinia sclerotiorum
en girasol es un carcter complejo que involucra distin-
tos loci y se evala cuantativamente mediante un ndice
de dao en el captulo floral. Para evaluar la heredabi-
lidad del carcter se sembraron 100 plantas de una lnea
moderadamente resistente (no existen variedades total-
mente resistentes al patgeno) en Balcarce, obtenindo-
se una media de ndice de dao de 0,20. De esta pobla-
cin, se seleccion un grupo de individuos de mayor
resistencia, con una media para el ndice de dao de
0,10, como padres para la siguiente generacin, siendo
la media de esta ltima generacin de 0,13 para la va-
riable evaluada
a) Cul es la heredabilidad del carcter resistencia?
Cuando el mismo experimento, utilizando el mismo
material y presin de seleccin se realiza en otra locali-
dad, la heredabilidad obtenida fue de 0,50
b) A qu se debe la diferencia en la heredabilidad
obtenida en ambos casos?
Sobre una poblacin segregante F2 proveniente del cru-
zamiento de la lnea resistente estudiada arriba y una
lnea susceptible al patgeno, se realiz un es-tudio con
marcadores moleculares codominantes, detectndose 2
marcadores estrechamente ligados a 2 QTLs, uno en el
grupo de ligamiento 8 (GL8) y el segundo en el grupo
de ligamiento 6, que explican el 50 y 35 % de la varian-
za gentica del carcter resistencia respectivamente. En
base a estas conclusiones,
c) Descartara la presencia de otros QTLs para este
carcter en la poblacin en estudio?
El siguiente esquema representa el patrn para el mar-
cador asociado al QTL del GL8 en el padre moderada-
mente resistente (MR), en el sensible (S) y en 10 indi-
viduos F2, evaluados como moderadamente resistentes
o sensibles (ver fila superior)
Padres Resistentes Susceptibles
MR S 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
----
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----
Cmo explica el patrn encontrado para el marcador
en estudio en los individuos 3 y 5 cuya evaluacin fe-
notpica es moderadamente resistente?
Rta:
a) h
2
= Xf Xo = 0,7
Xs - Xo
b) a la varianza ambiental e interaccin genotipo-
ambiente (carcter cuantitativo, con alta componente
ambiental).
c) Dado que entre los dos QTLs explican el 85 % de la
varianza gentica, es muy probable que haya otro/s
QTLs de efecto menor en otros grupos de ligamento no
detectados
d) Se esta evaluando con un marcador ligado a un
solo QTL y la resistencia moderada observada puede
deberse a la presencia de otro/s QTL/s en esos indivi-
duos. Tambin pueden decir que hubo recombinacin
entre el marcador y el QTL, pero dado que se dijo que
estaban estrechamente ligado se espera que deduzcan la
primera respuesta
7) En Drosophila melanogaster se obtuvieron dos lne-
as homocigotas que difieren ampliamente en la longe-
vidad media a 25C. La lnea L tiene una longevidad
media de 120 das mientras que la lnea C tiene una
longevidad media de solo 40 das (ver figura). A partir
de una retro-cruza entre las lneas C y L se construye-
ron lneas RIL. A cada RIL se le midi la longevidad.
El siguiente esquema muestra el cromosoma 3 de las
lneas C y L, y ms abajo resume las RIL ms informa-
tivas para localizar QTL de la longevidad sobre este
cromosoma, considerando que no existe epistasis.
a) Indique dnde estn el o los QTL a lo largo del
cromosoma 3 (en cM) y justifique en menos de 5 ren-
glones si es de esperar que existan ms QTL en otros
cromosomas?
b) Por qu las distancias genticas no son proporciona-
les a lo largo del mapa fsico? (por ejemplo, la distancia
entre 0 y 20 cM es menor que la distancia entre 40 y 60
cM en el mapa fsico, ver figura)
c) Esquematice una posible curva de LOD en funcin
de cM que esperara obtener, de acuerdo a su respuesta
en a en el siguiente grfico, si aplicara un mtodo
bioinformtico tal como hicimos en el trabajo prctico
sobre QTL. Considere que la lnea horizontal es el um-
bral de significacin (LOD = 3).
d) Se analizaron micromatrices mediante chips de
genes que abarcan todo el cromosoma 3. Se identifica-
ron 10 genes que aumentan significativamente sus nive-
les de expresin en las moscas viejas (en edades avan-
zadas se expresan al menos 4 veces ms que en la edad
Lnea C
Lnea L
Lneas RIL
Cromosoma 3 Longevidad (das)
120
40
90
40
40
40
RIL1
RIL2
RIL3
RIL70
0 20 40 60 80 100
Posicin en cM
Posicin en cM
LOD
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
14
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
15
de control). Estos genes y su posicin en el mapa (cM)
fueron:
Gen A B C D E F G H I J K
Posicin 4 5 9 10 22 25 30 42 60 90 93
Sobre la base de su respuesta en a, cules de estos
genes NO estaran incluidos entre los responsables de
las diferencias en la longevidad entre las lneas C y L?
Respuesta: a) el QTL esta entre aproximadamente 80 y
100 cM Es de esperar que existan mas QTL en otros
cromosomas porque el identificado en el cromosoma 3
explica menos (40 90 = 50 dias) que la diferencia en-
tre ambas lineas parentales (120 40 = 80 dias)
b) las distancias genticas no son proporcionales a las
fsicas porque dependen de las frecuencias de recombi-
nacin y las frecuencias de recombinacin no son ctes
a los largo del cromosoma (son mayores en las regiones
telomricas y menores en las regiones centromericas)
c) hacen una curva que supere el LOD de 3 solo entre
80 y 100 cM
d) los genes que seguro NO serian responsables de nin-
guna diferencia de longevidad entre las lineas parenta-
les L y C son A, B, C, D, E, F, G, H e I, porque si bien
cambian de niveles de expresin durante el envejeci-
miento NO estn incluidos en el QTL (a diferencia de
los genes J y K).
8) Un marcador molecular RFLP est ligado en Dro-
sophila a un locus QTL est involucrado en la determi-
nacin del nmero de setas abdominales. Una sonda
que cubre toda la regin del polimorfismo, se hibrida
con un fragmento de restriccin de 6,5 kpb, con un
fragmento de 4,0 kpb o con los dos (en los individuos
heterocigotos). Los genotipos para el QTL son QQ, Qq
y qq y los nmeros de setas abdominales medias que
corresponde a cada genotipo son respectivamente 20,
18 y 16. Se efecta el siguiente cruzamiento:
Hembras
q
Q
q
Q
0 , 4
5 , 6
0 , 4
5 , 6
machos
Se determinan, despus, los fenotipos de cada descen-
diente y se les extrae el ADN que se somete a una co-
rrida electrofortica e hibridacin con la sonda de ma-
nera de determinar su perfil de RFLP. En los casilleros
ubicados en las calles del gel dibujado ms abajo, escri-
ba el nmero medio de las setas abdominales para cada
uno de los tres fenotipos RFLP, suponiendo que la fre-
cuencia de recombinacin entre el QTL y el marcador
es del 10%. Recordar que no existe recombinacin en
los machos de Drosophila. Detalle el cruzamiento y
todos los clculos que realiz para obtener sus res-
puestas.
9) El Dr. Kormy Yot (un importante nutricionista) se
embarc en un proyecto nutrigenmico (una dieta para
cada individuo, segn su genotipo) utilizando una po-
blacin de ratones de laboratorio para determinar con
precisin la influencia relativa de los componentes
genticos versus los componentes ambientales (particu-
larmente la dieta) en el peso corporal. Utiliz una po-
blacin genticamente uniforme para la longitud del
cuerpo (desde la cola a la nariz) cuyo peso promedio es
de 30 g. Para ver si la variacin en el peso es heredable
seleccion a los ratones que pesaban 33 g o ms (35 g
en promedio) como progenitores de la siguiente genera-
cin. En la siguiente generacin el peso promedio au-
ment significativamente 2 g (el peso medio fue de 32
g).
a) Cul es la heredabilidad (h
2
) del carcter en la po-
blacin inicial de 30 g?
16
b) Mediante seleccin y posterior endocra logr obte-
ner dos lneas homocigotas para todo el genoma, una
de bajo peso (25 g) y la otra de alto peso corporal (39
g). Si la varianza ambiental es de 3, cul es la hereda-
bilidad (h
2
) y la varianza fenotpica en cada una de es-
tas dos lneas homocigotas?
c) A partir de las dos lneas mencionadas en b se
construyeron 40 lneas RILs para el cromosoma 7,
pues era el nico autosoma del que se dispona de mar-
cadores moleculares informativos. Teniendo en cuenta
el siguiente esquema que resume las lneas RIL que
resultaron informativas:
- indique si existe uno o ms QTL sobre el cromosoma
7, y la respectiva localizacin (segmento cromosmi-
co).
- Cree Ud que pueden existir ms QTLs para el mismo
carcter (peso) en el resto del genoma? Justifique bre-
vemente.
R) a) R = h
2
S => h
2
= R / S => h
2
= (X
1
X
0
) / (Xs
X
0
) = (32 30) / (35 30) = 0,4.
b) h
2
= 0 en cada una de las lneas porque las lneas son
homocigotas para todo el genoma (incluyendo los posi-
bles genes que afectan al peso), es decir que la varianza
gentica es nula. La VP ser igual a VE porque toda la
variacin observada es ambiental, VP = 3.
c) El primer segmento negro del cromosoma 7 de la
RIL2 (contando de izq a derecha) es el nico QTL ob-
servado en este autosoma porque es el nico que dife-
rencia a las RIL con respecto al peso corporal.
Seguramente existirn ms QTLs en otros cromosomas
porque este cromosoma 7 no explica toda la diferencia
entre las lneas de alto y bajo peso. La mxima diferen-
cia entre las lneas parentales usadas para construir
las RILs es de 39 gr 25 gr = 14 g mientras que la
mxima diferencia entre las RILs explicada por el cro-
mosoma 7 es de 34 25 = 9 g.
10) Mediante un estudio de la capacidad musical en
humanos se concluy que sta representa una funcin
compleja integrada por la apreciacin del tono, memo-
ria tonal, sentido del ritmo, gusto meldico y conjunto
armnico. En un estudio llevado cabo por Musi-Quita
se colectaron muestras de DNA humano de una pobla-
cin altamente endogmica (es decir, con caractersticas
similares a las de un alto grado de endocra o autofe-
cundacin) con pedigr cerrado (y conocido) en Islan-
dia, muy analizada por los laboratorios medicinales pa-
ra realizar estudios de enfermedades hereditarias porque
es lo ms parecido (en humanos) a estudiar los recom-
binantes descendientes de un cruzamiento controlado y
se trat de mapear algn QTL asociado a la capacidad
musical. Para la realizacin de este estudio se muestrea-
ron personas con buena afinacin (incluyendo a la fa-
mosa cantante Bjork) y personas que han demostrado
ser molestamente desafinadas seleccionadas en can-
tando por un sueo en versin vikinga. De esta mane-
ra, se establecieron 2 grupos, de acuerdo a un ndice de
afinacin (Ia) que puede cuantificarse (variando de 0 a
1): Afinados (A) cuyo Ia es mayor a 0.75 y Desafinados
(D) cuyo Ia es menor a 0.25.
a) Cul es la ventaja, para el anlisis gentico, de utili-
zar grandes poblaciones descendientes de muy pocos
individuos parentales?
b) Qu piensa sobre cmo debi ser el muestreo de la
poblacin de individuos estudiada en cuanto a: su esta-
tus social, pas de origen, formacin musical obtenida,
etc.? lo ms homogneo posible, tal como se busc en
el caso de su origen gentico o todo lo contrario?Por
qu?
Se estudi la distribucin de los patrones de marcadores
moleculares (microsatlites). En la tabla slo se mues-
tran algunos de los loci analizados y el resultado de slo
10 individuos de cada grupo (considere que la muestra
evaluada resulta representativa).
TABLA: En cada caso se muestran los homocigotas para 1
2 de cada locus y el heterocigota expresado como H.
c) Cules de estos loci podran servir para mapear
algn QTL asociado a la capacidad de afinacin? Justi-
fique su respuesta.
d) Qu podra decir acerca del nmero de QTLs aso-
ciados al carcter? Para responder bsese en los datos
de la tabla, en sus respuestas de los puntos anteriores y
dems caractersticas sobre el carcter que se mencio-
nan en el enunciado.
En el norte de nuestro pas, se identific una poblacin
de origen indgena con caractersticas similares a las de
Islandia, lo mismo ocurri con una tribu de bosquima-
nos en frica y con la poblacin del problema 1.
e) Discuta la probabilidad de encontrar los mismos
QTLs en estas otras poblaciones.
Respuestas:
a) Como se dice en el enunciado, al tratarse de un
carcter complejo, es probable que haya muchos genes
involucrados. Utilizar poblaciones endogmicas de pe-
digr cerrado permite reducir esta complejidad (el
nmero de genes con variacin, as como de sus varian-
tes allicas), porque muchos de ellos deberan estar en
homocigosis y permanecer constantes.
b) Asumiendo que la varianza ambiental influye en el
fenotipo del carcter estudiado, se sugiere que debe ser
una muestra que rena en cada grupo diversidad en
cuanto a esos y otros factores para que la varianza am-
biental no sea la mayor contribuyente a la variacin fe-
notpica observada.
c) Para los loci A y C ya que existe una correlacin
entre la expresin del carcter cuantitativo Ia y la con-
dicin 1, 2 o H de estos carcteres cualitativos.
d) Segn los datos de la tabla al menos existe 1 QTL.
Si se observan los datos se ve que, con alta frecuencia,
A1 se hereda junto con C2, por lo tanto estos marcado-
res podran estar ligados y mapear junto al mismo QTL.
Sin embargo, dada la introduccin del enunciado y te-
niendo en cuenta la complejidad del acto resulta intuiti-
vo adjudicar el fenotipo a ms de 1 QTL. Incluso el
Grupo: Afinados
Ia 0.9 1 0.75 0.84 0.86 0.88 0.85 0.95 0.77 0.82
Locus A (A1A2) A1 A1 A2 H H H A1 A1 H H
Locus B (B1B2) H H B1 B2 B2 H B1 B1 H B2
Locus C (C1C2) C2 C2 H H H H C2 C2 H H
Desafinados
Ia 0.02 0.23 0.05 0.2 0.15 0.04 0.07 0.08 0.1 0.25
Locus A (A1A2) A2 H A2 H H A2 A2 A2 A2 A1
Locus B (B1B2) B2 B2 B1 H B1 H H B1 B2 B2
Locus C (C1C2) C1 C2 C1 H H C1 C1 C1 H C2
17
hecho de obtener heterocigotas para A o C con valores
tan altos y tan bajos de Ia hace pensar que hay otros
genes que colaboran en la expresin de este carcter y
tambin que el ambiente sera de gran influencia.
No necesariamente. Lo ms probable es que NO, debido
a que hay varios genes distintos involucrados (incluso
distintos alelos de un mismo gen) que se fijaron en for-
ma diferencial en las distintas poblaciones.
11) En una poblacin experimental de Drosophila me-
lanogaster, el peso medio seco de las moscas es de
2000 ug. La varianza fenotpica es 40000 ug
2
y la va-
rianza gentica aditiva es de 10000 ug
2
. Si como proge-
nitores de la siguiente generacin se seleccionan indivi-
duos grandes, que en promedio pesan 2400 ug,
a) cul es el peso corporal promedio esperado en la
progenie?
b) cules son la varianza ambiental y la heredabilidad
en sentido amplio (H
2
) de este carcter suponiendo que
el nico componente gentico de la varianza fenotpica
del carcter es el aditivo?
Suponga ahora que para un estudio de QTL sobre el
peso seco de las moscas se ha seleccionado la poblacin
indicada arriba durante muchas generaciones obtenin-
dose dos lneas muy diferenciadas para este carcter: la
lnea de alto peso (W) y la lnea de bajo peso corporal
(L). A partir de la F3 recombinante entre las dos lneas
W y L se construyeron lneas RIL para localizar los
QTL.
c) A cada RIL se les midi el peso corporal, El siguien-
te esquema muestra el cromosoma 3 de las lneas W y
L) y ms abajo resume las RIL ms informativas para
localizar QTL. Dnde estn los QTL a lo largo del
cromosoma (en cM) y cul es el nmero mnimo de
genes del cromosoma 3 que afectan al peso corporal?
Pueden haber ms QTLs en otros cromosomas Justi-
fique brevemente.
d) Dibuje una posible curva LOD en funcin de cM que
esperara obtener, de acuerdo a su respuesta en c, en
el siguiente grfico si aplicara un mtodo bioinformti-
co tal como hicimos en el trabajo prctico sobre QTL.
Considere que la lnea horizontal es el umbral de signi-
ficacin (LOD = 3).
R) a) S = 2400 ug 2000 ug = 400 ug
h
2
= 10000 / 40000 = 25%
R = h
2
* S = 0.25 * 400 = 100 ug
media esperada X
1
= 2000 ug + 100 ug = 2100 ug
b) VA = VP VA = 40000 10000 = 30000 ug
Como VG = VA, entonces H
2
= h
2
= 0.25
c) Hay un solo QTL aproximadamente a 40 cM. Por lo
tanto el nmero mnimo de genes que afectan al carc-
ter es 1. Deben haber ms QTLs e otros cromosomas ya
que este QTL no explica toda la diferencia entre las
lneas parentales W y L (4000 1000 ug).
d) Una posible curva esperada seria la siguiente. Lo
unico importante es que el LOD seria significativo solo
en el intervalo aproximado que consideraron que era
un QTL en la respuestac.














Posicin en cM
LOD
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
14
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
Lnea de alto peso
Lnea de bajo peso
-
Cromosoma 3
RIL 1
RIL 2
RIL 3
RIL 40
1000
4000
1010
1005
1020
X
40 RIL
0 20 40 60 80 100
Posicin gentica en cM
2900
18
Regulacin e Ingeniera Gentica
1) Los operones mce de Mycobacterium tuberculosis
(bacteria que produce la tuberculosis) codifica para pro-
tenas potencialmente involucradas en la virulencia de
este patgeno. En el genoma de M. tuberculosis hay 4
operones mce similares en secuencia y organizacin,
que codifican para protenas secretadas o de membrana
y una protena de tipo invasina. Estos genes son exclu-
sivos de las micobacterias y no se encuentran en otras
bacterias mejor caracterizadas como Escherichia coli.
Santngelo y col (del INTA Castelar) publicaron en
Microbiology (2002, 148:29973006) un trabajo en el
que estudian la regulacin de este opern en base a la
informacin genmica disponible. Por un lado conocan
las secuencias estructurales de los genes mce pero no
tenan bien caracterizado su promotor. Por otro lado, les
llam la atencin un gen (llamado Rv) ubicado hacia 5
de uno de los operones dado que codificaba para una
protena cuya estructura predicha por los modelos bio-
informticos era similar a la de algunos factores de
transcripcin. Para estudiar la funcin de este gen reali-
zaron las siguientes construcciones quimricas:
pP3Rv contiene el gen Rv completo (incluyendo el
promotor de Rv), la regin intergnica completa hasta el
codn de iniciacin del primer gen mce (es decir, donde
debera ubicarse el promotor de mce). La secuencia co-
dificante para mce fue reemplazada por el gen lac
pP3 es igual, pero sin Rv
pJEM15 es el vector vaco (salvo por el gen lac)
A, B y C representan segmentos de la regin intergni-
ca (1-100, 1-200 y 200-500 pb hacia 5 del ATG, res-
pectivamente)
Lo primero que hicieron fue estudiar el efecto de intro-
ducir las construcciones quimricas en E. coli obtenien-
do los siguientes resultados:
Efecto del gen Rv sobre el promotor mce:
Micobacterias transformadas con
pJEM15 (vector sin insertos) [barras blancas]
pP3 (construccin sin Rv) [barras grises]
pP3Rv (construccin con Rv) [barras negras]
a) Qu tipo de efecto tiene la presencia del gen Rv
sobre la regulacin del gen quimrico?
b) Si la construccin que interesa analizar es pP3Rv
para qu se hicieron los experimentos con pP3 y con
pJEM15?
c) Por qu se reemplaz la secuencia codificante de
mce por la de la -gal?
Para investigar la localizacin del sitio de unin de la
protena codificada por Rv hicieron gel-shifting en los
que se diferencian electroforticamente los DNAs
sueltos de los que tienen pegados una protena por-
que sta les retrasa
su migracin en el
gel. Los DNAs se
detectan por hibri-
dacin con una
sonda del segmen-
to intergnico. Se
incubaron los si-
guientes productos
de PCR:
A) nucletidos 1-
100 B) 1-200,
C) 200-500 con 1)
bfer 2) ex tractos de bacterias transformadas de E.coli
conteniendo la construccin pP3Rv; 3) extractos de
bacterias de E. coli conteniendo la construccin pP3
d) Dnde se localiza el sitio de unin de la protena?
e) Por qu se utilizaron extractos de E. coli
(transformadas con las construcciones) y no de
micobacterias?
Respuestas esperadas a) Activador
b) La comparacin entre la actividad de p3 y p3Rv
es lo que permite determinar que Rv es un elemen-
to activador (o represor si lo hubiese sido).
pJEM15 es un control negativo.
c) Porque es fcil de detectar enzimticamente y los
resultados no son afectados por la expresin de los ge-
nes mce endgenos (cromosmicos) de las micobacte-
rias tranformadas.
d) 100-200
e) Porque necesito extraer de una clula que exprese la
protena Rv, porque si no, nunca podra estudiar su
efecto.
2) El Dr. Cureta, en su eterna bsqueda de la pcima de
la juventud eterna, estudi la estructura y expresin del
gen de la aloeverina que produce una protena de mara-
villosas propiedades curativas y rejuvenecedoras en
Aloe vera (planta no comestible). Este gen da origen a
dos protenas diferentes en las hojas y las races de la
A B C
1 2 3 1 2 3 1 2 3 -






+

pP3

--
pJEM15
Promotor mce
A
-gal
-gal
-gal
B
C
Rv
500 pP3Rv 200 100
19
planta por splicing alternativo. Sin embargo, la nica
que tiene propiedades especiales es la de la hoja que se
produce en cantidades muy pequeas. Adems, su puri-
ficacin es ineficiente, con el agravante de que sus pro-
piedades se ven afectadas por las fenoloxidasas que se
liberan de los lisosomas cuando estas organelas se rom-
pen en el proceso de homogenizacin. Esta es la estruc-
tura del gen de la aloeverina:
Las flechas indican sitios para la enzima HindIII. Los
dos mRNAs difieren porque en uno est presente y en
el otro est ausente el exn E3 de 80 pb. El Dr. Cureta
decidi obtener tomates transgnicos transfectando con
un plsmido recombinante con el gen clonado de la
aloeverina en el que haba reemplazado al promotor
nativo de la aloeverina por el de la actina de tomate, con
el fin de analizar la expresin de mRNAs de aloeverina
en los distintos tejidos:
1) Sabiendo que los tomates no tienen ningn gen
endgeno homlogo al de la aloeverina, dibuje el patrn
de bandas de hibridacin que esperara obtener en un
Southern de DNAs genmicos digeridos con HindIII
provenientes de: a) tomate normal, b) Aloe vera, c) to-
mate transgnico; hibridando con una sonda de cDNA
de longitud completa.
2) Por qu habr elegido tomate y no tabaco, por
ejemplo?
3) Analizando la expresin de los mRNAs de aloeveri-
na en distintos tejidos del tomate transgnico por la
tcnica de Northern, usando como sonda al cDNA de
aloeverina de longitud completa, se observ lo siguien-
te:
a) Cules son los tamaos del mRNA I y mRNA II?
b) En el primer esquema ubique (con flechas) la proba-
ble ubicacin del codn de iniciacin y la del de termi-
nacin.
c) Por qu el Dr. Cureta reemplaz en su experimento
el promotor de la aloeverina por el de la actina de toma-
te? Le parece que eligi el promotor ms adecuado
para sus propsitos? Por qu?
d) Qu conclusiones saca a partir de los resultados del
Northern en cuanto a la especificidad tisular del spli-
cing del RNA del gen de la aloeverina?
e) Qu sugerencias experimentales le hara al Dr. Cu-
reta para mejorar la performance de sus experimentos y
as obtener los resultados deseados?
Respuestas 1) tomate, no da nada. Aloe vera: 3 ban-
das de 7, 3 y 12 kpb. Tomate transgnico: dem. 2)
Porque el tabaco tampoco es comestible. El tomate,
s. Respuesta alternativa: Si la idea es la de mejorar la
productividad, el tabaco (por su alta produccin de
biomasa) podra haber sido una alternativa interesan-
te. 3) a) 790 y 710, b) ATG: Una flecha un poco a la
derecha del extremo del exn 1 (no en el extremo por-
que siempre hay un extremo 5 de mRNA no codifican-
te) o al principio del exn 2. Stop: una flecha un poco a
la izquierda del extremo derecho del exn 4 (siempre
hay un segmento 3 no codificante a 3 del codn de
terminacin), c) El promotor nativo es poco eficiente y
lo reemplaza por uno constitutivo fuerte, pero podra
haber elegido mejor el promotor: por ej. uno especfico
de fruto de tomate, que es el tejido de inters para ali-
mentacin. d) Aparentemente, el sistema que permite
reconocer al exn 3 como tal, es especfico de hoja y de
especie y, tal vez, de gen (pero eso no lo podemos de-
terminar con estos datos). e) Usar una construccin SIN
intrones para evitar el procesamiento incorrecto.
3) Para el opern lactosa de Escherichia coli, indique el
genotipo de al menos uno de los diploides parciales po-
sibles capaces de producir beta-galactosidasa (codifica-
da por el gen Z) constitutivamente y permeasa (codifi-
cada por el gen Y) en forma normal (es decir inducible
con anlogos de la lactosa) usando la nomenclatura
practicada en las clases de problemas. Respuesta: lacI+
lacOc lacZ+ lacY- / lacI+ lacO+ lacZ- lacY+ (en algu-
no de los 2 genotipos lacI puede ser lacI-)
3) En la pelcula Blade II, el hroe (Blade) es un se-
mivampiro que lucha a favor de la humanidad con los
vampiros malos que quieren dominar el mundo. En
una escena trascendental de la pelcula, Blade es captu-
rado para poder extraer su sangre (y su ADN) porque
los vampiros estaban diseando nuevas variantes trans-
gnicas clonadas con mejor adaptacin. Si bien ya hab-
an logrado obtener vampiros resistentes a la plata mo-
dificando el gen de la metalotionina, queran extraer de
Blade un gen de resistencia a la luz solar. Ud. ha sido
contratado por los vampiros para hacer este trabajo (le
han prometido vida eterna como forma de pago) y dis-
pone de un laboratorio de ingeniera gentica excelen-
temente equipado que le permite, entre otras cosas, cul-
tivar in vitro vampiroblastos (clulas equivalentes a los
fibroblastos humanos). Los vampiroblastos extrados de
vampiros comunes se lisan en presencia de luz solar,
mientras que las clulas extradas del cuerpo de Blade
son luminoresistentes. No se dispone de informacin
alguna sobre la secuencia del gen a clonar, ni anticuer-
pos, ni secuencias parciales de aminocidos de la pro-
tena. Tampoco se pueden planear cruzamientos genti-
cos de Blade con vampiresas para estudiar su progenie
porque llevara mucho tiempo. Inspirndose en el ejem-
E 1 E 2 E 3 E 4
7
k b 3

k b 1
2
k b
p r o m o t o r
2 1 0

p b
3
7 0

p b
8
0

p b 1 3 0

p b

E 1 E 2 E 3 E 4
7

k b 3

k b 1
2
k b
p r o m o t o r
d e

a c t i n a
de tomate
2 1

p b 3 7 0

p b
8
0

p b 1 3 0

p b
v e c t o r
RNA de tomate transgnico
_
+
Aloe vera: hoja raz hoja raz fruto flor
RNA de
mRNA I
mRNA II
20
plo histrico del clonado molecular de los primeros on-
cogenes qu estrategia de clonado y caracterizacin
funcional del gen de resistencia a luz solar propondra?
Respuesta: En caso de seguir los pasos histricos des-
criptos en el Recombinant DNA de Watson y col.: se
extrae ADN total de Blade (slo o con una etiqueta
tag- de secuencia nucleotdica conocida ligada) y se lo
usa para transfectar vampiroplastos por la tcnica de
coprecipitacin con fosfato de calcio. Despus se expo-
nen los vampiroblastos a la luz y se extrae ADN total de
las clulas transgnicas resistentes y se fabrica una ge-
noteca en fago lambda. Se releva (screenea) la geno-
teca con ADN repetitivo de Blade (el equivalente a se-
cuencias Alu) o con la sonda para el tag para identificar
el ADN procedente de Blade. Se confirma la identidad
del clon de lambda por transfeccin de vampiroblastos
que se convierten en luminoresistentes.
Con tcnicas ms modernas se aislara el ADN de Blade
y se lo clonara en BACs (se puede aceptar que sea en
otros vectores como csmidos o en fagos lambda). Con
mezclas (pooles) de clones recombinantes se trans-
fectan vampiroblastos para identificar clulas luminore-
sistentes (por electroporacin o usando liposomas). A
las mezclas que producen clones positivos se las separa
en clones individuales hasta identificar el clon conte-
niendo el gen de inters. Una vez identificado el clon se
subclona y secuencia el inserto para ver si hay ORFs
candidatos, los cuales son testados funcionalmente de la
misma manera.
4) La Dra. Romntica est intentando encontrar genes
que aceleren la floracin. Con este objetivo en mente
procede a transformar plantas de Arabidopsis thaliana
mediante la utilizacin de Agrobacterium, con la si-
guiente construccin:

LB y RB: bordes izquierdo y derecho del T-DNA, 35S:
enhancer fuerte y constitutivo, nptII: gen de resistencia
a kanamicina Pnos: promotor constitutivo, t-nos: termi-
nador
Entre las miles de plantas generadas encuentra una mu-
tante
(M) que florece en la mitad de tiempo que las plantas
salvajes (wild type = wt). A partir de una hoja de esta
planta extrae DNA, lo digiere con BamHI, lo corre en
un gel de agarosa, transfiere a una membrana y lo reve-
la con una sonda radiactiva correspondiente al T-DNA
completo. Cuando cruz esta planta con una planta sal-
vaje, dentro de la descendencia, algunas plantas presen-
taron floracin temprana y otras no. Al repetir el Sout-
hern blot con 10 plantas de la F1 se obtuvieron los si-
guientes resultados:
a) Para qu se incluy el gen quimrico npt II en la
construccin?
b) Cul fue el objetivo de introducir un enhancer
suelto no acompaado de un promotor o de una se-
cuencia estructural?
c) Cree que el hecho de que se observen dos bandas en
el mutante parental se deba a que BamHI corte dentro
del T-DNA o a qu se insertaron dos T-DNAs (en lugar
de uno) en ms de un lugar en el genoma? Analice te-
niendo en cuenta los resultados obtenidos con la F1.
d) Qu plantas de la F1 seguira analizando? Justifi-
que. El hecho de conocer la secuencia de la construc-
cin utilizada le permiti a la Dra. Romntica mediante
PCR, secuenciacin y finalmente comparacin con la
base de datos del genoma de Arabidopsis, identificar el
sitio exacto de insercin del T-DNA. Este sitio de in-
sercin se encuentra 1 kpb ro arriba (5) de un marco
de lectura abierto an no estudiado (ORF4329).
e) Qu efecto cree que tiene la insercin del T-DNA
sobre el ORF4329? Qu experimento hara para com-
probarlo? Muestre mediante un diagrama los resultados
esperados.
f) Cree que el ORF4329 es un gen inductor o represor
de la floracin? Disee un experimento complementario
al realizado por la Dra. Romntica que, mediante inge-
niera gentica, le permita comprobar su hiptesis, indi-
cando los resultados esperados. Recuerde que en la
transformacin mediante Agrobacterium el T-DNA no
se integra mediante recombinacin homloga (en bio-
balstica tampoco).
g) Como Arabidopsis es un yuyo y sus flores son bas-
tante feas, un estudiante de doctorado de la Dra.
Romntica est interesado en ver si los rosales tambin
tienen un gen homlogo al ORF4329. Cmo lo hara
experimentalmente sabiendo que el genoma del rosal no
est secuenciado? En caso de que haya un gen homolo-
go al ORF4329 presente, cmo clonara el gen hom-
logo completo?
Respuestas esperadas
a) Como gen marcador selectivo que permite selec-
cionar las plantas transgnicas de las no transgnicas
durante la regeneracin de plantas en un medio conte-
niendo el antibitico kanamicina
b) Porque el objeto del experimento es que este en-
hancer estimule constitutiva y fuertemente los promoto-
res cercanos al sitio de insercin del segmento T con la
esperanza de que alguno de ellos estimule la floracin
temprana.
c) No puede haber ocurrido que haya slo un sitio de
insercin y que BamHI corte dentro del DNA-T pues en
la F1 las dos bandas segregan independientemente. Se-
guramente el DNA-T se insert en dos sitios distintos.
d) Seguira analizando alguna de las siguientes plan-
tas: 1, 6 o 9 ya que presentan floracin temprana, pero
no heredaron el inserto del T-DNA no relacionado con
la induccin temprana de la floracin. El descartar las
plantas 4, 7 y 10 facilita los pasos siguientes de identifi-
cacin del sitio de insercin.
e) Dado que el T-DNA no interrumpe un gen ni el
promotor mnimo, pero s se ubica cercano al promotor,
la insercin del DNA-T estara aumentando la trans-
cripcin del ORF4329 mediante los enhancers 35S. Pa-
21
ra comprobar esta hiptesis habra que realizar un Nort-
hern partiendo de mensajeros de plantas normales y
mutantes (sera interesante comparar tambin tejidos
florales y no florales ya que el enhancer 35S es consti-
tutivo) utilizando una sonda complementaria al
ORF4329.
f) Es un inductor de la floracin pues al aumentar su
expresin se adelanta la floracin. Para comprobarlo se
podra hacer un antisense del ORF4329 y espero ver un
retraso o ausencia de floracin. Si repito el Northern
vera menos mensajero que en el normal.
g) Otra respuesta alternativa que pueden pensar los
alumnos sera realizar un knock out de ese ORF. En rea-
lidad tericamente no sera correcto pues en plantas no
suelen realizarse knock outs, pero ellos probablemente
no lo sepan (conceptualmente no importa, tcnicamen-
te, lo knock outs en la actualidad, salvo en bacterias, se
hacen por interferencia transformando transitoriamente
con RNAi o establemente con construcciones que ex-
presen iRNA). Adems est la aclaracin de que la in-
tegracin del T-DNA no es por recombinacin homlo-
ga y s saben que para hacer un knock out dirigido se
requiere recombinacin homloga.
h) Hara un Southern usando como sonda al ORF4329
y condiciones de baja rigurosidad en la hibridacin. Pa-
ra clonarlo hara una genoteca y localizara el gen
homlogo mediante hibridacin con la sonda de Arabi-
dopsis.
5) Los ritmos circadianos que corresponden a ciclos de
aproximadamente 24 horas permiten a los organismos
regular su actividad con la alternancia da-noche. Aun-
que estos ritmos son autnomos, algunos estmulos ex-
ternos, tales como la luz, pueden poner en hora este
reloj interno. En mamferos, existe un marcapasos cen-
tral, ubicado en el ncleo supraquiasmtico (NSQ) del
hipotlamo anterior. Varios genes estn involucrados en
el mecanismo molecular del reloj interno, existiendo
entre ellos lazos de retroalimentacin positiva y negati-
va a nivel de la expresin y de la actividad de las pro-
tenas que codifican. Se sabe que la fase de este marca-
pasos central se puede adelantar con un estmulo lum-
nico durante la noche relativa que es captado en la
retina y llevado al NSQ a travs del tracto retino-
hipotalmico (que libera el neurotransmisor glutamato)
y que este cambio de fase est asociado a un aumento
rpido de la expresin del gen Per1. Ro arriba (hacia
5) de este gen se encuentra una secuencia cre (elemen-
to de respuesta a cAMP), a la cual se puede unir en cier-
tas condiciones el factor de transcripcin CREB. Se
realiza el siguiente experimento: a un cultivo sincroni-
zado de clulas del NSQ de ratn se lo estimula durante
la noche relativa con concentraciones adecuadas de glu-
tamato (provoca el mismo efecto que la luz provoca in
vivo) o db-cAMP (dibutiril cAMP: anlogo del cAMP
que puede atravesar la membrana celular) o con solu-
cin salina (control). Despus de 30 minutos se extraen
RNA y protenas.
Northern Blot con sonda para Per1:
Control Glut db-cAMP


Relacin entre CREB fosforilado (P) y no fosforilado
Relacin Control Glut. db-cAMP
CREB-P/CREB 0,3 4,2 2,2
Esta relacin se determin realizando Western Blot con
anticuerpos anti-CREB y anti-CREB-P.
Para poder confirmar el rol de CREB se construy el
siguiente sistema indicador (reportero) y se transfect
en clulas del NSQ en cultivo.
Prom: promotor del gen Per1.


La luciferasa (codificada por la secuencia estructural
del luc) es una enzima que reacciona con el agregado de
luciferina produciendo luminiscencia. Se ensaya la acti-
vidad de estas clulas en las siguientes condiciones:

- glutamato
+ inhibidor de AC - (baja expresin)
- sin inhibidor - (baja expr.)

+ glutamato
+ inhibidor de AC + (expr. media)
- sin inhibidor +++ (alta expr.)
AC (adenilato ciclasa): enzima que sintetiza cAMP a
partir de ATP, responsable del aumento de cAMP du-
rante la transduccin de seales de diversos estmulos.
Interpretar estos resultados.
Se sospecha que el glutamato ejerce su accin va
cAMP pero que esta podra no ser la nica va en que lo
hace. Qu opina acerca del rol de CREB en los dos
tipos de estmulo? Justificar.
Respuestas a) Esta respuesta implica un mnimo de
detalle de descripcin de para qu se hicieron los 3 ex-
perimentos y qu datos aporta cada uno. Conclusiones:
tanto glutamato como cAMP inducen la expresin de
Per1. La induccin por glutamato es ms fuerte que por
cAMP. Adems, el glutamato es capaz de activar el
promotor de CREB an en presencia de inhibidores de
la AC.
b) La contestacin a esta pregunta puede tener algunas
variantes de respuesta y se evaluar en funcin de la
coherencia del razonamiento que se emplee. La respues-
ta esperada es que puede deberse a que el glutamato
activa la misma va de seal del cAMP y adems otra (u
otras) o a que activan vas totalmente separadas que
terminan en el mismo efecto (siendo la de glutamato
una va ms fuerte). En cuanto a CREB, se ve que la
fosforilacin de CREB se corresponde con una alta ex-
presin, por lo que podra pensarse que CREB est im-
plicado en la activacin de Per1. El menor efecto de
cAMP tambin se ve en este caso, lo que lleva a pensar
en principio que la menor expresin vista con cAMP se
debera a una menor activacin de CREB y no a que
falte activarse otro factor de transcripcin adems de
CREB que s se active con glutamato.
6) Ciertos individuos de la abeja Apis mellifera presen-
tan un comportamiento particular en cuanto a la limpie-
za de las celdas que contienen a las larvas parasitadas
por el caro Varroa destructor (llamado comportamien-
to higinico). Este comportamiento se debe a la capaci-
dad de las abejas de percibir un compuesto qumico
voltil producido por el caro. Con el fin de establecer
cre
Sec estr.gen luc
Prom
22
si dicho comportamiento tiene una base gentica, se
llevaron a cabo una serie de estudios y experimentos
que permitieron identificar algunos genes candidatos
(es decir, genes responsables del comportamiento
higinico).
a. Qu metodologa/s puede/n haber sido empleada/s
para la deteccin de estos genes candidatos?
A continuacin, los investigadores se interesaron por la
regulacin de uno de los genes de inters, y entender as
la relacin entre la expresin de los mismos y la pre-
sencia de los voltiles emitidos por el caro, se realiza-
ron las siguientes construcciones:
(en blanco se indica la regin del promotor que ha sido
delecionada).

b. Cmo se evalu la relevancia relativa de cada una
de las regiones del promotor? (indique el gen reportero
y la obtencin de los individuos utilizados para realizar
esta medicin). Qu cree usted que representa en el
esquema la regin pintada de negro? Qu informacin
brindan, con respecto a la estructura del promotor, los
resultados que se presentan en el esquema?
c. Finalmente, los investigadores se preguntaban cmo
validar sus resultados, tanto con respecto a la funcin
del gen (efecto sobre el comportamiento) como a su
regulacin. Elija una de estas dos opciones, y detalle al
menos una metodologa para poner a prueba su hipte-
sis.
Rta a. Marcadores, genoteca dif, o arrays (por cualquie-
ra que lo encaren esta bien, mientras que este bien ex-
plicado)
b. Deben mencionar un gen reportero (idealmente luci-
ferasa, proque ese es el que vieron para insectos) y de-
ben explicar brevemente como transfectar insectos con
estas construcciones. luego los deben exponer al olor
para medir actividad. Parte pintada de negro: prom. mi-
nimo, siemrpe debe estar. regulacion: deben decir qu
regiones de importancia se detactan en cada parte (2 reg
positivas, 1a en la primera, 1a en la tercera)
c. Funcin del gen: knockout, transposon-tagging, anti-
sense. Funcion de las regiones regulatorias: apuntamos
a que se acuerden del ejemplo de footprinting de la
guia.
7) Un grupo de criadores de caballos de Tennessee
estn interesados en el fenotipo champagne del pelaje
de sus animales, que es controlado por un gen autos-
mico dominante CH, pero resulta muy difcil distinguir-
lo del efecto producido por dilucin de otros genes rela-
cionados con la sntesis de melanina. Resuelto a revelar
las bases moleculares de este fenotipo acude al Depar-
tamento de Gentica de la Universidad de Tennessee
donde le proveen los siguientes datos de cruzamientos
prueba en los cuales estaba involucrado uno de los ge-
nes candidatos (llamado P de pigmento) y obtiene la
siguiente segregacin genotpica:
CHch Pp = 40 % CHch pp = 10 %
chch pp = 40 % chch Pp = 10 %
a) A qu distancia gentica se encuentran CH y P?
b) Dada la implicancia del gen P en la pigmentacin,
qu tcnica utilizara Ud. para verificar la expresin de
dicho gen si conociera al menos un par de primers que
amplifiquen alguno de sus exones? Puntualice de qu
tejido partira, qu aislara y qu tcnica empleara
Qu control positivo realizara?
Para dilucidar las bases moleculares implicadas en el
mecanismo de pigmentacin y dado que el gen P es un
miembro de la familia de protenas transportadoras que
cumplen un rol importante en el desarrollo del color del
pelaje en mamferos, Ud. decide investigar la regula-
cin de la expresin de esta protena. Segn la biblio-
grafa esta protena haba sido referida previamente co-
mo proton/amino acid transporter en humanos y en
ratn. Para comenzar sus estudios clona la regin pro-
motora (p) ubicada a 5del gen YFP (Yellow Fluores-
cent Protein). Luego, realiza los siguientes experimen-
tos de transfeccin:
Lnea celular Plsmido Fluorescencia YFP
Melanocitos M3 p/YFP +++
Queratinocitos Q8 p/YFP ----
c) Cmo interpreta estos resultados en trminos de
mecanismos de regulacin de la expresin gnica y es-
pecificidad de tejidos?
Para confirmar lo anterior, decide realizar un ensayo de
EMSA (electrophoretic mobility shift assay). Para ello,
utiliza nuevamente la regin promotora de este gen y la
marca en uno de sus extremos 5 con
32
P. Incuba la pre-
paracin con y sin protenas nucleares extradas de teji-
do cutneo de los animales y corre un gel nativo de aga-
rosa. Luego revela por autoradiografa.
Calle 1: Regin promotora del
gen P marcada con
32
P e incu-
bada sin extracto nuclear.
Calle 2: Regin promotora del
gen P marcada con
32
P e incu-
bada con extracto nuclear.


e) Por qu observa diferencias en la corrida electro-
fortica? Explique si estos resultados se relacionan con
los resultados del tem d) y por qu.
Rtas.
a) 20 % de recombinantes, por lo tanto, se encuentran a
20 unidades de recombinacin.
b) Se parte de tejido cutneo y se realiza una extraccin
de RNA. Posteriormente se realiza una retrotranscrip-
cin a fin de obtener cDNA. Finalmente se hace una
PCR usando el par de primers (en lo posible cuantitati-
va qRT-PCR) que amplifiquen alguna regin corres-
pondiente a un exn determinado del gen P y as verifi-
car la expresin del mismo, tejido-especfica. Como
control se podra realizar una PCR para algn gen cons-
titutivo o conocido de ese tejido, por ejemplo B-actina.
c) YFP se regula transcripcionalmente, se expresa bien
en melanocitos y no en queratinocitos. Por lo tanto, en
este tipo celular se encuentran factores de transcripcin
especficos necesarios que se unen a regiones regulato-
1 2
23
rias que posibilitan la expresin del gen reportero y por
lo tanto, regularan tambin la transcripcin del gen P.
e) Las diferencias en la corrida electrofortica se deben
a que al incubar la regin promotora/reguladora con un
extracto nuclear propio del tejido especfico, se le unen
factores de transcripcin y regulatorios y al correr los
complejos en un gel nativo y revelar por autoradiograf-
a, la marca de
32
P aparece retrasada en la calle con ex-
tracto porque pesa ms por tener los factores unidos.
Estos resultados apoyan los obtenidos en el punto ante-
rior donde se verifica la actividad transcripcional en el
caso de existir factores especficos para la regin pro-
motora de P.
8) En un laboratorio se obtuvieron protoplastos (clulas
vegetales sin pared) a partir de clulas de mesfilo de
tabaco. Los mismos fueron electroporados (transforma-
dos en forma transitoria, es decir, sin buscar integracin
estable) con tres plsmidos recombinantes distintos (uno
por vez y en distintas clulas). Los 3 plsmidos portan
la secuencia codificante para la beta-glucouronidasa
(GUS) proveniente de un gen bacteriano llamado uid A
(cuya expresin transitoria puede detectarse mediante
una reaccin que da color azul, en una forma muy simi-
lar a la que se puede detectar al producto del gen lac Z)
y un terminador adecuado para plantas. Lo que vara en
los distintos plsmidos es el promotor (acompaado del
respectivo enhancer en los casos 1 y 2, en el caso 3 no
lo hay) que controla la expresin de las secuencias es-
tructurales.
1 Promotor
Rubisco
secuencia estructu-
ral para GUS
terminador
rubisco

2 Promotor 35S secuencia estructu-
ral para GUS
terminador
rubisco

3 Promotor lac secuencia estructu-
ral para GUS
terminador
rubisco
Aclaraciones: Rubisco = ribulosa bifosfato carboxilasa
(responsable de la fijacin de C0
2
en la fotosntesis) si-
milar al de un problema de la gua; 35S = transcripto del
virus del mosaico del coliflor (CaMV) que se expresa en
forma constitutiva; lac = opern lactosa de E. coli.
1) Los investigadores no agregaron controles negativos
o positivos Es porque alguna/s de las 3 construcciones
podra/n ser, a su vez, control/es positivo y/o negativo?
Explique
2) Con cules de las construcciones observar la apari-
cin de color azul en las siguientes situaciones?
a) protoplastos expuestos a la luz
b) protoplastos en oscuridad
c) protoplastos en oscuridad suplementados con lactosa
d) protoplastos en oscuridad suplementados con lacto-
sa y glucosa
3) El laboratorio no prob variantes de terminadores
Se podra haber agregado el terminador de otro gen?
Explique si esto podra haber afectado los resultados.
RTA:1) Rubisco: promotor INDUCIBLE por luz, slo
inducir expresin cuando hay luz (en (a)). El 35S por
ser constitutivo, se expresar en todas las condiciones.
El lac es un promotor procaritico, por lo que NO es
funcional en plantas. Nunca podr inducir expresin.
Adems, aunque funcionara, carece del gen codificante
para el represor y del gen para CAP (o CRP) como para
poder activarse o reprimirse.
La construccin 1 sirve como control positivo y la 3 de
negativo, por todo lo anterior.
2) a) 1 y 2; b) 2; c) 2; d) 2
3) Salvo excepcin, el terminador no influye en la ex-
presin de un gen. Podra hacerlo en la vida media del
mRNA (esto no se dio en tericas) o en la unin (ad-
hesin) a algn componente subcelular (esto lo vern,
ms adelante, en gentica del desarrollo.
9) Las variantes heredables de la enfermedad de Alz-
heimer, se dividen en varios tipos dependiendo de la
causa gentica que la produce. Una de ellas se cree que
se debe una mutacin en el promotor/enhancer del gen
codificante para la APP (precursor de la protena beta
A4 amiloide, que es la protena que se acumula excesi-
va y descontroladamente en esta enfermedad). Otra se
debe a una falla en el procesamiento (splicing) alterna-
tivo del exn 19.
En un estudio se produjeron ratones transgnicos que
expresan APP murina bajo el control del promo-
tor/enhancer aislado de DNA de humanos enfermos.
Los ratones transgnicos enfermaron de Alzheimer a
edad adulta.
Al analizar por Southern blot a los ratones obtenidos,
mediante hibridacin con cDNA de APP (primera co-
lumna) o con oligonucletidos complementarios a las
secuencias del promotor diferenciales (2 y 3 colum-
nas), se observ el siguiente patrn:
Sonda: cDNA
APP murino
Sonda: promotor
APP murino
Sonda: promotor
APP humana
Ratn
normal
Ratn
transg.
Ratn
normal
Ratn
transg.
Ratn
normal
Ratn
transg.



a) Por qu la banda del segundo carril electrofortico
(columna 1) tiene un color ms intenso?
b) Explique las diferencias observadas al utilizar son-
das de promotores de origen humano y murino.
Posteriormente, realizaron Northern blots con RNA de
cerebro de ratn, usando como sonda cDNA de APP en
ratones transgnicos jvenes (sanos) y adultos (enfer-
mos).
Ratones jvenes Ratones adultos
Normal Transg
.
Nor-
mal
Transg
.


c) Qu conclusin extrae en cuanto al rol de la trans-
cripcin?
d) Qu fenotipos se obtendran si (utilizando el mismo
promotor), en lugar de la secuencia codificante para
APP se hubiera utilizado:
i) un gen indicador (reportero) como GFP,
ii) la secuencia codificante de APP mutagenizada para
contener un codn de terminacin de lectura muy cer-
cano al codn de iniciacin
24
iii) una secuencia antisentido o interferente?
Los ratones transgnicos correspondientes: desarrollar-
an Alzheimer o qu? Estos experimentos serviran
para reforzar su conclusin en c)?
Posteriormente, decidieron cruzar ratones transgnicos
y sanos, comprobando que el carcter fue dominante
(como ocurre en humanos). Por otro lado, consiguieron
una muy rara mutante que, sometida a determinadas
condiciones de alimentacin y estrs mostraba la apari-
cin de Alzheimer por problemas de splicing del RNA
de APP tal como ocurre en humanos.
Decidieron, entonces hacer un cruzamiento entre trans-
gnicos (homocigotas para el transgn) y mutantes
(tambin homocigotas). Para determinar el fenotipo, se
los dej llegar a edad adulta. En caso de no desarrollar
Alzheimer, se los someti a condiciones de alimenta-
cin especial y estrs y, posteriormente, se los volvi a
evaluar.
- Toda la F1desarroll Alzheimer sin necesidad de so-
meterlos a alimentacin especial y estrs.
- En la F2 se obtuvieron 236 ratones Alzheimer sin ne-
cesidad de someterlos a alimentacin especial y estrs,
64 que desarrollaron Alzheimer nicamente despus de
tratamiento especial y 23 que nunca desarrollaron Alz-
heimer.
e) Se ajusta este resultado a las proporciones esperadas
a partir de las leyes de Mendel? En caso de no ser as,
explicar estos resultados y comprobar la hiptesis.
Rta a) Porque detecta las copias endgenas del gen
normal ya presentes en el ratn y, adems, la copia
(adicional) del transgn APP.
b) La sonda murina detecta el gen endgeno pero no el
transgn, la humana: viceversa
c) En ratones jvenes, la expresin es similar. En los
adultos, disminuye notablemente en los normales y au-
menta en los transgnicos. Existira asociacin entre la
expresin de APP y aparicin de Alzheimer.
d) i) Fluorescencia leve en cortes de cerebro de ratn
joven y fluorescencia fuerte en adultos
ii) Ninguna diferencia
iii) Ninguna diferencia o, dependiendo del grado de in-
terferencia, puede haber letalidad debida a la no expre-
sin de APP en ratones jvenes (ambas respuestas se
considerarn correctas)
En ninguno de los 3 casos se desarrollar Alzheimer.
Refuerzan la conclusin de c) porque sirven de contro-
les (testigos) negativos, indicando que no es la muta-
cin en el promotor la causante directa de este compor-
tamiento, sino la resultante sobre-expresin descontro-
lada del gen de APP.
e) Epstasis dominante 12:3:1
10) Hace poco ms de una dcada se desarroll, me-
diante ingeniera gentica, una tecnologa para estudiar
los genes expresados por un determinado patgeno
cuando ste infecta a un husped. Esta tecnologa se
denomin in vivo expression technology (IVET). Esta
estrategia se utiliz para hallar genes que se expresan
diferencialmente en Salmonella cuando sta infecta ra-
tones. Para ello se gener una genoteca genmica em-
pleando ADN genmico de Salmonella digerido con
una enzima de restriccin de corte frecuente, en canti-
dades limitantes, y luego clonado en el MCS del si-
guiente plsmido:

AmpR: gen de resistencia a ampicilina
mob: origen de transferencia conjugativa dependiente
de genes tra (no codificados en el plsmido)
CAT: gen de resistencia a cloranfenicol sin su promotor
oriR6K: origen de replicacin dependiente de la prote-
na pi (codificada por el gen pir+)
Lac Z -galactosidasa sin su promotor
MCS: sitio de clonado mltiple
Luego de ligar, se transformaron E. coli competentes
con el objetivo de transferir mediante conjugacin el
plsmido a las salmonelas dado que estas ltimas no
eran susceptibles de ser transformadas. El propsito de
esta etapa del experimento es generar una genoteca de
salmonelas donde el plsmido de la figura 1 se haya
integrado al genoma bacteriano por recombinacin
homloga (el segmento clonado presenta la secuencia
homloga en el genoma).
a) Cmo debe ser el genotipo de las E. coli en cuanto a
los genes pir, tra, y recA (participa en la recombinacin
homloga)? Cmo se seleccionaron las E. coli trans-
formadas? Justificar
b) Cmo debe ser el genotipo de las salmonelas en
cuanto a los genes pir y recA? Cmo se seleccionan a
las salmonelas que integraron el plsmido? Justificar.
c) Esquematice la regin homloga en el genoma de
Salmonella luego de ocurrir la recombinacin homlo-
ga donde se integra el plsmido.
Una de las particularidades de esta construccin es que
los genes CAT y LacZ estn desprovistos de promotor
por lo que solo se podrn expresar (como mensajero
policistrnico) si en el MCS se clon un fragmento de
ADN que contiene un promotor en la orientacin ade-
cuada.
d) Esquematice el plsmido recombinante incluyendo:
el inserto, secuencias de Shine-Dalgarno, ATG inicia-
dores, codones STOP y terminadores de la transcrip-
cin.
e) Por qu se realiz una biblioteca genmica y no una
de cDNA?
Con estas salmonelas recombinantes (que eran sensibles
a cloranfenicol y LacZ-) se infectaron ratones a los cua-
les se les suministr cloranfenicol. Luego de 3 das se
sacrificaron los ratones y se recuperaron las bacterias
que sobrevivieron las cuales fueron plaqueadas en LB +
X- -galactosidasa).
f) Qu caracterstica tendrn las bacterias aisladas de
los ratones (in vivo) en cuanto a la orientacin y expre-
sin del inserto? Por qu no fue necesario agregar
IPTG?
g) En dichas placas, a qu tipo de insertos correspon-
den las colonias blancas y a cuales las azules? Esperar-
a que haya ms colonias azules o ms blancas? (No
pierda de vista el objetivo de esta estrategia generada).
AmpR mob
OriR6K
MCS
CAT LacZ
AmpR mob
OriR6K
MCS
CAT LacZ
25
h) A partir de la obtencin de colonias de inters,
cmo hara para identificar los genes de Salmonella
que se expresan especficamente durante una infeccin?
Explique brevemente los pasos a seguir.
i) Cmo evaluara funcionalmente los genes identifi-
cados?
Respuestas:
a) Las E. coli deben ser :
- pir+ : para que el plsmido pueda replicar y para poder
transferirlo completo a las salmonelas.
- tra+ : para tener los factores necesarios para poder
transferir el plsmido por conjugacin a las salmonelas.
- recA- : para evitar que el plsmido se integre al geno-
ma en caso de existir alguna zona homloga.
Para seleccionar, luego de transformar, se crecen las
bacterias en medio con ampicilina (no se puede usar
cloranfenicol porque sino se estara sesgando la selec-
cin a aquellas construcciones que incorporaron un
promotor que pueda expresarse en E. coli).
b) Las salmonelas deben ser:
- pir- : para que el plsmido no pueda replicar y cuando
se realice la seleccin solo sobrevivan y repliquen las
bacterias que integraron el plsmido al genoma.
- recA+: para que puedan integrar el plsmido por re-
combinacin homloga.
- AmpR
La seleccin de las bacterias debe realizarse creciendo
las bacterias en medio con ampicilina (no puede ser clo-
ranfenicol por motivos similares a los mencionados en
la pregunta anterior).
c)
X: inserto
X: regin homloga en el cromosoma
d)

Cada gen tiene que tener su propia secuencia de Shine-
Dalgarno (ro arriba del ATG) y su propio STOP. Am-
bos genes tienen que tener la misma orientacin para
que puedan ser traducidos a partir del mismo mensajero
policistrnico. Por otra parte debe haber un solo termi-
nador de la transcripcin rio abajo del lacZ para que se
genere el mensajero policistrnico.
e) Se realiz una biblioteca genmica porque el objeti-
vo es ver que promotores se encienden durante una in-
feccin in vivo utilizando los genes CAT y LacZ como
reporteros. En una biblioteca de cDNA no se encuen-
tran los promotores y s en una genmica.
f) Porque la expresin de la -gal est regulada por el
inserto (en caso de que contenga un promotor) y no por
el promotor y operador del opern Lac.
g) Las bacterias que sobrevivieron luego de la infeccin
en ratn y seleccin con cloranfenicol son aquellas que
expresaron el gen de resistencia a este antibitico. Esto
slo sucede si el inserto contiene un promotor, en la
orientacin adecuada, que se expresa en las bacterias
durante la infeccin y por ende permite la expresin
del mensajero policistrnico que codifica para el gen
CAT.
Cuando se plaquea en medio LB + X-gal las colonias
azules son las que expresan -gal. Dado que esto solo
ocurre si el inserto tiene un promotor que es activo en el
medio LB, las colonias azules corresponden a bacterias
que poseen un inserto que tiene un promotor que se ex-
presa tanto in vivo como in vitro, lo cual incluye genes
de expresin constitutivas.
En cambio, las colonias blancas corresponden a bacte-
rias con insertos donde el promotor que fue activo in
vivo (y por ende sobrevivieron a la seleccin con clo-
ranfenicol) fue inactivo in vitro. Es decir corresponde a
genes que solo fueron activos durante la infeccin.
Por lo tanto esperara que haya ms colonias azules.
h) Partiendo de las colonias blancas se amplifica por
PCR el inserto, utilizando primers complementarios a
las regiones del plsmido flanquantes al MCS y luego
se puede secuenciar dicho inserto. Utilizando dicha se-
cuencia se puede realizar una bsqueda bioinformtica
para ver a que gen corresponde, si el genoma est se-
cuenciado. Si no est secuenciado se puede utilizar el
inserto como sonda para buscar el gen completo en una
biblioteca genmica.
i) Por ejemplo se puede knockear el gen/genes en cues-
tin y evaluar el proceso de infeccin en ratones, com-
parando con la cepa salvaje.
11) El grupo de Ling y col. (2006) desarroll una vacu-
na recombinante para el virus Newcasttle y el virus de
la laringotraquetis infecciosa (ILTV), que son enfer-
medades cuarentenarias de los pollos, utilizando para
ello los genes de 2 antgenos de Newcasttle: el F y el
HN y uno de ILTV: el gB. Para ello, subclonaron estos
genes primero en un plsmido de E. coli con el objetivo
de incorporarlos (en un segundo paso) en el genoma del
virus Fowlpox (FPV, viruela de ave de corral, un pa-
riente del virus vaccinia) bajo el control del promotor
viral LP2EP2 (promotor temprano-tardo). Adems,
agregaron una construccin conteniendo LacZ bajo el
control de otro promotor viral tardo (el P11). Final-
mente se colocaron secuencias homlogas (llamadas
brazos) de FPV (Am1 y Am2 significando arm
brazo- 1 y 2).
Todo esto, en un
vector de E. coli
como se muestra
en la figura y
que es un
plsmido suicida
(no tiene capaci-
dad de replica-
cin propia en
clulas de aves):

Posteriormente,
transfectan este plsmido en clulas de ave previamente
infectadas con FPV.
a)Para qu hacen esta transfeccin en clulas infecta-
das y no en clulas sin virus?
CAT
LacZ
X
S-D S-D
ATG ATG STOP STOP
Terminador
CAT
LacZ
X
S-D S-D
ATG ATG STOP STOP
Terminador
mob
OriR6K
CAT LacZ AmpR X X mob
OriR6K
CAT LacZ AmpR X X
26
Como resultado de lo anterior obtienen, sobre medio
slido conteniendo X-gal, una monocapa de clulas con
muchas placas transparentes y otras pocas azules.
b)Con cules se quedaron y por qu?
De las placas seleccionadas aislaron inculo con el cual
infectaron nuevas clulas que fueron analizadas por
PCR, Western e inmunofluorescencia, como se muestra
en la siguiente figura:
Fig: Clulas aviares in-
fectadas con FPV sola-
mente (C) o selecciona-
das en el paso anterior
(D) despus de tratar con
un anticuerpo marcado
con fluorescena.
c)Con qu anticuerpos
habrn hecho este estudio
y el de western? Es decir,
Qu antgenos recono-
cen estos reactivos?
d)Cul sera el siguiente
paso para comprobar la
efectividad de esta poten-
cial vacuna de nueva ge-
neracin?
e) Enumere 2 ventajas
que tendra usar esta va-
cuna respecto a las vacu-
nas convencionales que se usan hoy en da.
3) a) Para que se produzca el reemplazo allico (recom-
binacin homloga entre plsmido y genoma de FPV) y
se construya as el virus recombinante
b) Con las azules porque la expresin de beta gal es in-
dicativa de la presencia de la insercin en los virus re-
combinantes
c) Anticuerpos que reconocen F, HN, gB y por qu
no? beta galactosidasa. De todos modos, slo son im-
portantes lo 3 primeros porque el objetivo de todo esto
es inmunizar contra estos antgenos y la expresin de
beta galactosidasa ya se evalu enzimticamente.
d) Ensayos de proteccin vacunando y desafiando pos-
teriormente con los virus patognicos.
e) Se puede hacer una nica vacuna para 2 enfermeda-
des distintas y no es necesario utilizar virus infecciosos
para elaborar la vacuna.


























27
Gentica Bacteriana
1) Cmo esperara que fuera la transferencia heredable
del gen lac+ en cruzamientos entre cepas donoras de E.
coli lac
+
a) Hfr, b) F+ y c) F'lac con cepas receptoras F
-

lac
-
incapaces de recombinar (rec
-
)? Justifique su res-
puesta
Respuesta: El nico cruzamiento capaz de transferir el
gen lac+ en forma heredable es aquel en el que inter-
viene la donora c) F'lac debido a que el gen lac+ forma
parte del plsmido transferido que no requiere de re-
combinacin (entrecruzamiento) para mantenerse esta-
blemente en la clula receptora..
La cepa b) es capaz de transferir lac+ pero la cepa re-
ceptora requiere de las funciones de recombinacin
homloga para que se produzca el reemplazo allico
(entrecruzamiento) para integrar establemente el gen
recibido. Como el segmento transferido es inestable (es
lineal, no puede replicarse correctamente y es suscepti-
ble a degradacin por nucleasasas) termina perdindose.
La cepa a) F+ slo puede transferir lac+ con muy baja
frecuencia si en alguna de sus clulas el factor F se in-
tegra previamente al cromosoma principal (esas pocas
clulas se convertiran en Hfr). Sin embargo, tendr
el mismo problema que la cepa b).
2) Se realizaron experimentos de conjugacin interrum-
pida entre cepas Hfr Amp
S
leu
+
mal
+
trp
+
y F
-
Amp
R
leu
-
mal
-
trp
-
. Los resultados se exponen en la siguiente figu-
ra: (mal: capacidad de metabolizar la maltosa)

1) Por qu los recombinantes para leu y mal apa-
recen con mayor nmero de recombinantes?
2) Explique en qu medios se hicieron crecer las bac-
terias para analizar su genotipo, y qu tipo de bacte-
rias (qu genotipo) crece en cada uno.
3) A qu distancia del ori de transferencia mapea el
gen que codifica para trp? Y los que codifican para
leu y mal?
4) Qu experimento hara para determinar el orden
entre leu y mal?
5) Dibuje, indicando Origen de transferencia y termina-
cin, el modo en que el plsmido F se integr al cromo-
soma bacteriano y dio origen a esta HFR.
6) Qu tipo de recombinacin ocurre para que las
bacterias leu
-
pasen a ser leu
+
? Qu tipo de re-
combinacin ocurre cuando el plsmido F se inte-
gra en el cromosoma bacteriano?
Rta: 1) Porque al estar ms cerca del origen de
transferencia pasan antes y le dan menos tiempo a
las bacterias conjugantes a que se separen es-
pontneamente e interrumpan la transferencia.
2) MM + ampicilina + los 2 aac que no se analizan en
cada caso F
-
Amp
R
aac
+
donde aac
+
es leu
+
, mal
+

(que en realidad no es un aminocido) o trp
+
, respecti-
vamente. Para los otros 2 genes cuyos aa estn presen-
tes en el medio, los genotipos pueden ser + o -. Por ej,
en el primer caso el genotipo es F
-
Amp
R
leu
+
mal
+/-
trp
+/-

3) 10, 5
4) una prueba de recombinacin equivalente a una
prueba de 3 puntos con los 3 marcadores de este expe-
rimento. 5) Dibujito
3) Un tema de inters para la medicina humana y vete-
rinaria es el desarrollo de vacunas ms confiables. En el
caso de la brucelosis (que es una zoonosis, es decir, en-
ferma a animales y a humanos) se desarrollaron vacu-
nas para el ganado vacuno que consisten en bacterias
vivas atenuadas por diferentes procedimientos de culti-
vo. En este contexto, en la Argentina se utiliza la cepa
S19 que tiene algunos problemas porque no est sufi-
cientemente atenuada. Con el advenimiento de la inge-
niera gentica se pudieron caracterizar genes como el
bp26 y el bmp18 que, al ser mutados, prcticamente
eliminan la virulencia, tal como lo publican Campos y
col (Veterinary Microbiology, 2002). En un trabajo
previo, lo demostraron mediante el desarrollo de mutan-
tes knock-out para ambos genes.
a) Indique una estrategia de cmo hubiese obtenido Ud
esta mutante knock-out. Utilice exclusivamente esque-
mas para su respuesta
Debido a que no resulta deseable la liberacin de orga-
nismos modificados genticamente conteniendo genes
de resistencia a antibiticos (y menos si stos









28
son patognicos), para la construccin de la cepa
mutante vacunal bp26::luc bmp18 ( simboliza
delecin y :: simboliza insercin y que bautizaron
INTA2) usaron una tcnica de contraseleccin (ver
Figura).
Aclaraciones: El gen sacB (de Bacillus subtilis) codifi-
ca para una levansacarasa que metaboliza la sacarosa en
un levano que es txico para Brucella. Es decir que las
bacterias que contienen este gen se mueren cuando se
agrega sacarosa al medio de cultivo. a y b sealan se-
cuencias homlogas (probables sitios de entrecruza-
miento). El gen luc codifica para la luciferasa de lucir-
naga, los genes Ap
R
y Kn
R
para resistencia a ampicilina
y kanamicina, respectivamente. En varios de los genes
se especifican, con flechas, oligonucletidos diseados
para PCR y el tamao del fragmento de amplificacin
esperado.
b) Qu funcin especfica cumplen los siguientes ge-
nes marcadores en el esquema de obtencin de la cepa
vacunal?
i) Ap
R
y Kn
R
(2 ptos); ii) luc (2 ptos); iii) sacB
c) Porqu se usaron plsmidos suicidas?
d) Disee un sistema molecular de deteccin para dis-
tinguir los 5 genotipos posibles entre s. Explquelo.
e) Un punto importante en cualquier campaa de erradi-
cacin de enfermedades como la brucelosis es poder
distinguir animales vacunados de infectados en forma
sencilla, barata y masiva. Tradicionalmente, el dia-
gnstico se realiza mediante la deteccin de anticuerpos
anti-Brucella en sangre porque la bacteria es muy difcil
de detectar y no resulta sencillo diferenciar entre los
animales que tienen estos anticuerpos debido a que es-
tuvieron infectados o porque fueron vacunados. Qu
solucin le parece que proponen los diseadores de esta
vacuna?
Respuestas: a) Se podra usar el mismo esquema del
enunciado (parte izquierda) reemplazando el gen luc
por un gen de resistencia a antibitico (por ej. a Tetraci-
clina) y manteniendo el gen de resistencia a kanamicina
(o SacB) para seleccionar el doble recombinante.
b) i) Suponiendo que se quiera ir paso a paso (como
sugiere el flujo de esquemas) y seleccionar primero el
cointegrado (construccin 2) y recin despus el doble
recombinante (construccin 3): Kn
R
servira para selec-
cionar en un medio conteniendo kanamicina (en ausen-
cia de sacarosa). En un segundo paso, se pasaran las
bacterias a un medio conteniendo sacarosa, en ausencia
de kanamicina. [De hecho, esto fue lo que hicieron los
autores del trabajo]. Lo mismo con Ap
R
para el gen
bmp18.
Otra respuesta correcta: Suponiendo que se quisiera
seleccionar directamente la construccin 3, sin pasar
por la construccin 2 (doble recombinante directo), Kn
R

no tiene funcin alguna en el experimento del proble-
ma. Al utilizarse el sistema de contraseleccin basado
en SacB podra no estar presente, sin afectar con su au-
sencia el resultado. En este caso, su nica funcin es ser
un marcador selectivo en E. coli (otorga al plsmido
una ventaja selectiva que ayuda a mantenerlo, evitando
su prdida, durante su multiplicacin en E. coli). En el
caso del segundo plsmido conteniendo Ap
R
, esta
aproximacin es mucho ms difcil (aunque no imposi-
ble) porque no tengo un gen indicador y slo puedo dis-
tinguir dobles recombinantes (construccin 5) de sal-
vajes (construccin 3) mediante PCR de las colonias,
por ej.
ii) Este gen sirve para distinguir las mutantes knock
out para el gen bp2 que quiero seleccionar (construc-
cin 3) de las revertantes salvajes (construccin 1), da-
do que ambas sobreviven en el medio conteniendo saca-
rosa.
iii) Como dice el enunciado, este gen sirve para contra-
seleccionar (seleccionar en forma negativa) las cons-
trucciones 2 y 4 en presencia de sacarosa.
c) Bsicamente, el que el plsmido sea suicida me per-
mite seleccionar ms eficientemente al recombinante.
Suponiendo que la seleccin de las construcciones se
hizo paso a paso [como se explica en b) i)], si el
plsmido replicara en Brucella, la seleccin en presen-
cia de kanamicina solo me dara muchsimas bacterias
con el plsmido sin integrar y me sera extremadamente
dificultoso aislar el recombinante (construc. 2) por su
baja probabilidad de ocurrencia.
Ahora, suponiendo la alternativa de seleccin directa
del doble recombinante [como se explica en otra res-
puesta correcta en b) i)], el primer plsmido podra
no ser suicida, porque sera seleccionado en forma ne-
gativa en presencia de sacarosa.
d) Por PCR usando los primers flanqueantes de los ge-
nes. Las construcciones 1, 3 y 5 daran una sola banda
por primer (total 2 bandas), a saber 696 + 990 en 1,
1837 + 990 en 3 y 1837 + 694 en 5. Los cointegrados
daran 2 bandas, para el par de primers p26 en 2 o para
el par de primers p18 en 4. En total 3 bandas.
Tambin se considerarn correctas respuestas con otras
variantes (deteccin de fluorescencia en lugar de la
banda de 1837 combinada con PCR de los otros genes;
RFLPs usando bp26 y bmp18 como sondas, deteccin
de las protenas codificadas mediante Western, etc.),
siempre y cuando la respuesta permita diferenciar cla-
ramente los 5 genotipos.
e) La presencia de anticuerpos anti-luciferasa diferen-
cian animales vacunados con esta cepa respecto de los
que se infectaron con una cepa salvaje no recombinante.
La ausencia (versus presencia) de anticuerpos contra
bp26 y bmp18, es otra variante de la respuesta.
Tambin se considerar correcta (con la mitad de la no-
ta = 2,5 ptos) la respuesta que proponga el aislamiento
de bacterias del animal, las cuales deberan no ser fluo-
rescentes en presencia de luciferina en el caso de la ce-
pa de campo y ser fluorescentes en el caso de la cepa
vacunal. Idem si la tcnica seleccionada es una PCR. En
la realidad, esta ltima variante no es practicable, por-
que la cepa vacunal sobrevive muy poco a las defensas
del animal y resulta lento, peligroso y poco prctico el
aislamiento de bacterias patognicas.
4) Bacterias de una cepa de E. coli Hfr rec
+
bio
+
his+

Str
S
son mezcladas junto a bacterias de otra cepa de E.
coli F
-
rec
+
bio
-
his
-
Str
R
. A diferentes tiempos, se inter-
rumpieron las conjugaciones, se plaque en los
siguientes medios selectivos (todos conteniendo Str) y
al da siguiente se cont el N de colonias. (MM =
medio mnimo)
29
F
his
a) El experimento anterior se aprovech para mapear los
genes involucrados en la sntesis de biotina. Ubique en
el mapa gentico el gen bio. Se aclara la
posicin donde est integrada la
secuencia del plsmido F en
esta cepa Hfr, y adems la
del gen his, previamente
mapeado.
b) Un amigo suyo,
estudiante de Biologa, le
cuenta que hizo un
experimento de conjugacin -
mientras miraba videoclips de
Britney Spears- con una cepa Hfr diferente a la
anterior, la cual, al conjugar con la misma F
-
que en el
experimento anterior, le transfiere el gen his a los 20
min y el gen bio a los 40 min. Le creera a su amigo o
pensara que se distrajo mientras haca los
experimentos?
c) Un fago que hace transduccin generalizada puede
encapsidar fragmentos de DNA genmico de una cepa
bacteriana infectada y lisada que tengan un tamao de
hasta 30.000 pb. Si ese fago es usado para infectar una
cepa de E. coli salvaje, y el lisado resultante es usado, a
baja multiplicidad de infeccin, para infectar a la F
-

mencionada antes. Esperara observar colonias en
MM? Justifique (1 min equivale a 20 kpb aprox)
e) Usara Ud. la cepa F
-
en MM para testear la mutage-
nicidad de una sustancia en un test de Ames?
R a) El gen bio entra a los 10 y el his a los 30, por lo
tanto el gen bio se encuentra a 1/3 de la distancia entre
F e his. b) Le creo, seguramente tiene un Hfr distinto
con el F integrado apuntando al revs y en otra posi-
cin. Ntese que la distancia entre his y bio es de 20
(igual que en este experimento). c) No, estn demasiado
lejos para ser cotransducidos. d) No, porque es una do-
ble auxtrofa y por lo tanto requiero de la mutacin (re-
versin) simultnea de al menos 2 bases distintas y cuya
reversin no necesariamente requieren del mismo me-
canismo de mutacin Respuesta alternativa que, en ca-
so de aparecer, debe ser considerada correcta: S, si uti-
lizo MM+ bio (o MM+ arg).
4) Un investigador est interesado en mapear y estudiar
3 genes a, b y c involucrados en la biosntesis de ami-
nocidos. Se sabe que los productos de los genes a, b y
c catalizan las siguientes reacciones, en las que X es un
compuesto que puede ser sintetizado por ambas cepas
de bacteria creciendo en un medio mnimo (MM):
Leu Ile
A C
X
B
Val
Para realizar el estudio dispone de 2 cepas de bacte-
rias: Hfr a
+
b
+
c
+
Str
S
y otra F
-
a
-
b
-
c
-
Str
R
con las cuales
realiz un experimento de conjugacin interrumpida
obteniendo los siguientes resultados:












a) En qu medios se seleccionaron cada uno de los
genotipos de bacterias del grfico anterior?
b) A qu distancia del origen de transferencia de la
cepa Hfr utilizada mapean los genes a, b y c?
c) Grafique y explique los resultados que hubiera tenido
en el experimento de conjugacin interrumpida si el
genotipo de la cepa dadora hubiese sido:
i) Hfr a
+
b
+
c
+
Str
R

ii) F
+
a
+
b
+
c
+
Str
S


iii) Si el origen de transferencia de la cepa Hfr
se encontrara entre el gen b y el c.
El hecho de que a y b mapearan juntos y formaran parte
de una misma va metablica le sugirieron al investiga-
dor que a y b pertenecen a un mismo opern.
Con el objeto de estudiar esta posibilidad realiz el si-
guiente experimento:
A) Se digiri ADN genmico de una cepa salvaje con la
ER Alu I (de corte frecuente) en cantidades limitantes.
Luego los fragmentos se ligaron en uno de los vectores
que se muestran.
B) Luego se transformaron bacterias a
-
b
-
c
+
Amp
S
con
uno de los vectores y se plaquearon las bacterias trans-
formantes en gar + MM + ampicilina + un aminocido.
Cada una de las colonias que crecieron en estas placas
fueron luego cultivadas en gar + MM + ampicilina
obtenindose los siguientes resultados:
Vector 1: Todas las bacterias que crecieron en
MM+Amp+Leu crecieron tambin en MM+Amp.
-De las bacterias que crecieron en MM+Amp+Val el
60% crecieron en MM+Amp.
Vector 2: De las bacterias que crecieron en
MM+Amp+Leu+Lac, el 55% crecieron en MM+Amp
+Lac.
Tiempo N de colonias en
(min) MM MM+bio MM+his MM+bio+his
5 0 0 0 503
10 0 0 34 487
15 0 0 44 499
20 0 0 50 503
25 0 0 59 498
30 20 30 80 501
4 8 12 16 20 24 t (min)
N

r
e
c
o
m
b
i
n
a
n
t
e
s
c
+
Str
R
a
+
Str
R
b
+
Str
R
4 8 12 16 20 24 t (min)
N

r
e
c
o
m
b
i
n
a
n
t
e
s
c
+
Str
R
a
+
Str
R
b
+
Str
R
Alu I Alu I
P
Amp
R
Amp
R
Vector 1 Vector 2
Alu I Alu I
P
Amp
R
Amp
R
Vector 1 Vector 2
P = promotor del opern
lac
30
-De las bacterias que crecieron en MM+Amp+Val+
Lac, el 50% crecieron en MM+Amp+Lac.
d) Cules son los genotipos de las bacterias que crecen
en cada uno de los 3 medios?
e) Cmo interpreta los resultados de este experimento?
Demuestre que estos resultados son compatibles con la
hiptesis de que a y b estn en el mismo opern.
f) Cul de los genes est ms cerca del promotor: a o
b? Justifique.
g) Cmo hara, utilizando la tcnica de PCR, para de-
mostrar que a y b pertenecen al mismo opern? Indique
los resultados esperados tanto si a y b forman parte de
un opern como si se transcriben independientemente.
Respuesta a) a+ StrR = MM + Str + Val + Ile
b+ StrR = MM + Str + Leu + Ile
c+ StrR = MM + Str + Leu + Val
b) a y b mapean a 12 min del OriT y C mapea a 6 min.
c) i) Se hubieran seleccionado a las bacterias dadoras
por lo que no hubiera habido diferencias entre los dis-
tintos medios ni tampoco entre los distintos tiempos.
ii) Se hubieran obtenido muy pocas recombinantes
(aquellas en las que el plsmido F+ se hubiera incorpo-
rado en la cepa dadora y luego los marcadores a, b o c
se hubieran transferido a la cepa aceptora).
iii) Dependiendo de la orientacin del OriT hay dos po-
sibilidades: -que a y b salgan primero y bastante tiempo
despus salga c -que c salga primero y bastante tiempo
despus salgan a y b.
En el grfico tienen que quedar claro esto, y adems
que la frecuencia de recombinantes para los genes que
salen primero debe ser bastante mayor que la de los ge-
nes que salen al final.
d) MM+Amp+Leu = a- b+ AmpR y a+ b+ AmpR. Es
decir, b+ AmpR
MM+Amp+Val = a+ b- AmpR y a+ b+ AmpR. Es de-
cir, a+ AmpR
MM+Amp = a+ b+ AmpR
La lactosa no importa, slo se usa para inducir la expre-
sin mediada por el promotor lac.
e) De las bacterias transformadas con el vector 1 todas
las bacterias b+ tambin eran a+, pero slo el 60% de
las a+ eran b+.
En cuanto a las bacterias transformadas con el vector 2
el 55% de las bacterias b+ tambin eran a+, y el 50% de
las a+ eran tambin b+.
La diferencia en los resultados obtenidos con ambos
vectores radica en que el vector 1 no contiene un pro-
motor por lo que la expresin de los transgenes se dar
solo si vienen acompaados de su promotor. El hecho
de que todas las bacterias b+ sean tambin a+ nos indi-
ca que b se transcribe utilizando el promotor de a sugi-
riendo que a y b forman parte de un opern.
En el caso del vector 2 dado que aporta un promotor (y
ste est encendido debido a la lactosa) s se obtienen
bacterias a-b+.
f) Dado que, cuando se transform con el vector 1, no
se obtienen bacterias a-b+ pero s a+b- esto nos sugiere
que no se necesita que se transcriba b para que se
transcriba a (pero s al revs). Esto indicara que a se
encuentra ms prximo al promotor que b.
g) RT-PCR usando primers de la regin 5 del gen a y
de la regin 3 del gen b. Si amplifico es porque hay
transcriptos que contienen al gen a y al b. Hay otras
posibilidades que se evaluarn caso por caso
5) Se realiza un experimento de transformacin con una
cepa bacteriana donante resistente a cuatro antibiticos:
A, B, C y D. La cepa receptora es sensible a las cuatro
drogas. La poblacin de clulas receptoras tratada se
divide y se siembra en placas
de medios suplementados con
varias combinaciones de las
drogas. Los resultados fueron:
a) Uno de los genes est cla-
ramente alejado de los otros
tres, los cuales parecen estar
estrechamente ligados. Cul
es el gen distante?
b) Cul es el orden de los
tres marcadores que estn li-
gados?
Rta: a) B es el gen distante;
b) A D C.
6) El Dr. Watson est estu-
diando un fago temperado
descubierto en su laboratorio
(P26) con el objeto de deter-
minar si durante el ciclo li-
sognico ste se inserta en el cromosoma bacteriano, y
si lo hace en qu sitio.
Para ello infecta una cepa Hfr salvaje Amp
S
Str
S
con un
fago deficiente en el cual se ha reemplazado al gen X
(esencial para que el fago entre en ciclo ltico, pero no
para que entre en ciclo lisognico) por un gen de resis-
tencia a ampicilina bajo el control del promotor Lac
(con su regin operadora).
a) En qu medio de cultivo selecciona a las bacterias
Hfr que presentan el fago?
Luego de seleccionar en medio slido 15 clones Hfr
lisognicos y con el objetivo de determinar si el fago
defectivo est integrado en el cromosoma y en qu sito
lo hace, conjuga, por separado, a cada Hfr lisognica
con una cepa F- gal- leu- arg- Amp
S
Str
R
obteniendo, en
todos los casos, el mismo resultado:











b) En qu medios seleccion a cada uno de los geno-
tipos?
c) En base a los resultados obtenidos, cul de las si-
guientes opciones es la correcta?
- el fago no se integra en el cromosoma bacteriano
(queda como episoma)
- el fago se integra al cromosoma en un nico sitio
- el fago puede integrarse en varios sitios del cromoso-
ma bacteriano
Justifique su eleccin y por qu descarta las dems.
Antibiticos N colonias
A 1.156
B 1.148
C 1.161
D 1.139
AB 46
AC 640
AD 942
BC 51
BD 40
CD 786
ABC 30
ABD 42
ACD 630
BCD 36
ABCD 30
Total 7.877
N

d
e

r
e
c
o
m
b
t(min) 10 20 30 40 50 60
Gal+
AmpR
Leu+
arg+
N

d
e

r
e
c
o
m
b
t(min) 10 20 30 40 50 60
Gal+
AmpR
Leu+
arg+
31
Otro investigador, intent reproducir estos experimen-
tos con una cepa Hfr de su laboratorio y el mismo fago
defectivo que solicit al Dr. Watson. Sin embargo, en
este caso el marcador Amp
R
mape a 10 min del origen
de transferencia.
d) Le parece que esto contradice necesariamente los
resultados del Dr. Watson y su respuesta de la pregunta
c?
Nota: Las bacterias gal- no pueden utilizar galactosa
como fuente de carbono y energa, las bacterias leu- y
las arg- no pueden sintetizar los aminocidos leucina y
arginina respectivamente.
R: a) Debe seleccionarlas en medio mnimo, sin gluco-
sa (para que no haya represin catablica) y con IPTG o
lactosa para inducir al opern lac y que se exprese el
gen de resistencia a ampicilina. El medio debe tener
adems ampicilina para matar a todas las bacterias que
no posean el fago.
b) Gal +: MM + gal + arg + leu + Streptomicina
Leu +: MM + glu + arg + Streptomicina
Arg+: MM + glu + leu + Streptomicina
AmpR: MM + lac + leu + arg + Ampicilina + Strepto-
micina (ojo que la fuente de carbono debe ser lactosa y
no glucosa, por un lado para inducir al opern y por el
otro para que no haya represin catablica)
c) Si el fago P26 no se integrara al cromosoma de la Hfr
y quedara como episoma no sera transferido a la cepa
F- en el experimento de conjugacin interrupida y por
ende no se detectara bacterias AmpR (recordar que el
gen de resistencia a ampicilina est dentro del genoma
del fago). Adems podemos decir que el fago se integra
en un nico lugar del genoma porque en los 15 clones
de Hfr lisognicas generadas el marcador AmpR entr
en el mismo tiempo.
d) No contradice los resultados del Dr. Watson ni las
conclusiones sacadas ya que, al ser una cepa Hfr distin-
ta el origen de transferencia puede estar ubicado ms
cerca (o ms lejos) del sitio de integracin del fago. Lo
que s debera ocurrir, es que en todos los clones el gen
de resistencia a ampicilina mapee cerca del gen leu.
7) Halobacterium salinarium es una arquibacteria estu-
diada porque es fototrfica en ausencia casi absoluta de
oxgeno. El gen bop codifica para la protena bacterio-
opsina que cumplira un papel importante en el proceso,
por lo que se lo clon en un plsmido de Escherichia
coli, insertando un gen de resistencia a mevilonina
(Mev
R
) el cual reemplaza la parte central del gen (indi-
cado como bop'-'bop en la figura).

El origen de replicacin de este plsmido (ColE1) per-
mite la replicacin en enterobacterias pero NO en ar-
quibacterias y, salvo por las secuencias del gen bop, no
comparte ninguna homologa de secuencia con arqui-
bacterias. Sin embargo, cuando este plsmido fue intro-
ducido por electroporacin en H.salinarium se resca-
taron bacterias resistentes a mevilonina.
a) Cmo lo explicara? Incluya un esquema explicati-
vo.
Las colonias de bacterias seleccionadas para mevilonina
que pudieron analizarse no mostraron cambios en su
actividad fotosinttica y, al analizrselas se comprob
que el gen bop salvaje se expresaba normalmente.
b) Qu modificaciones introducira al experimento
para conseguir un mutante knock out para el gen bop?
Ms especficamente qu gen incluira donde est la X
en la figura con este objetivo? Explique.
Respuestas a)

b) Requiero que X sea un gen de seleccin letal como
podra ser SacB que est en uno de los problemas del
anexo.

X?
Mev
R

X?

Mev
R

X?
Mev
R

SacB
Mev
R

SacB
Mev
R

32

Transposicin
1) En un estudio sobre mutaciones inestables de maz,
un investigador propuso los siguientes genotipos para
dos plantas distintas de esta especie:
I) C/cd

; Ac
+
/Ac
-

II) C/ca ; Ac
-
/Ac
-

C: alelo silvestre que permite la expresin del color del
grano; cd: es un alelo inestable producto de la insercin
de un elemento mvil no autnomo Ds que inactiva la
expresin del gen. ca: es un alelo inestable producto de
la insercin de un elemento mvil Ac autnomo que
inactiva la expresin del gen. Ac
+
presencia/ Ac
-
ausen-
cia del elemento mvil (atencin que esta nomenclatura
es distinta a la empleada en algunos libros de texto).
Se realizaron los siguientes cruzamientos:
a) plantas con genotipos I y II se cruzaron con plantas
c/c; Ac
-
/Ac
-
, en donde el alelo

c representa una forma
mutante incolora, producto de una sustitucin de bases.
b) planta con genotipo I) se cruz con planta con geno-
tipo II).
Qu fenotipos y en qu proporciones aparecern en la
descendencia de los cruzamientos a) y b)? NOTA:
Asumir que Ac y C no estn ligados, y que la frecuen-
cia de rupturas cromosmicas es despreciable.
Respuesta: a) I) prpuras, blancas, mosaico II)
prpuras, mosaico; b) prpuras, mosaicos
[Todos los genotipos C_, homo- o heterocigotas, son
prpuras; la probabilidad de que un transposn (por ej.
del locus Ac) justo vaya a insertarse en un locus espec-
fico del genoma es extremadamente baja. Todos los
genotipos dobles recesivos (conteniendo c, cd o ca)
son mosaicos si est ca_ o cd_, Ac+_]
4) Se confeccionaron varios mutantes del Tn5 mediante
ingeniera gentica. El mapa y el fenotipo se muestra
ms abajo: grafica una delecin del DNA en-
tre los extremos de la llave. grafica un frag-
mento de 800 pb de DNA forneo que se insert en la
posicin O. Las capacidades del mutante de transponer-
se y de resistir a neomicina (Neo
R
) se indican a la dere-
cha de cada mutante. WT significa wild type (normal o
salvaje). y indican las regiones repe-
tidas invertidas (IR) del Tn5. NOTA: Para su respuesta
suponga que entre los valores de la tabla 90 y 100 o
entre 0 y 0,5 no existen diferencias estadsticamente
significativas.
Qu conclusiones puede sacar acerca de:
a) la(s) region(es) requerida(s) para la transposicin y
region(es) no requeridas?
b) Por qu estos resultados son inesperados y se con-
tradicen con lo que Ud. aprendi en la materia?
c) la(s) regio(es) requeridas para Neo
R
?
Solucin: a) Para la transposicin: completo,
slo el extremo izquierdo (aquella parte afec-
tada en la mutante 135). b) Porque hubiera esperado
que TODO el hubiera sido imprescindible pa-
ra la transposicin. c) El gen Neo
R
(completo o su ex-
tremo 5) est ubicado en algn lugar entre el extremo
derecho de y su regin derecha adyacente (es
decir, parte o todo el fragmento afectado por la delecin
en la mutante 138). [Con los datos suministrados no
puedo afirmar que TODO el gen Neo
R
est en ese seg-
mento. Tampoco puede concluirse, con estos datos, que
haya una superposicin entre parte del gen y el IR iz-
quierdo, pero resulta altamente sospechoso. Para con-
firmarlo, deberan hacerse mutaciones dirigidas usando
deleciones ms pequeas o sustituciones nucleotdicas
puntuales].
5) En un trabajo reciente (Mol Gen Genomics, 2006,
275: 231-241) un grupo japons estudia la coloracin
de las flores en Gentiana scabra, una planta ornamental
muy difundida en Japn. Para ello analizan tres cultiva-
res de G. scabra: cv. Momokorin (flores rosadas), la
lnea mejorada 13-98 (flores rosadas) y el cv. Alta (flo-
res azules); y G. triflora cv. Macyri (flores azules).
Primero, miden la acumulacin de antocianinas median-
te HPLC de extractos obtenidos de los ptalos de las
flores. Los perfiles de HPLC obtenidos fueron los si-
guientes:

a y d) cv. Alta: dos picos, uno mayor correspondiente a
delfinidina y otro menor a cianidina.
cepa
33
b,c y e,f) Lnea 13-98 y cv. Momokorin: un nico pico
correspondiente a cianidina
i) Qu le indican estos resultados en cuanto a la deter-
minacin bioqumica del color de las flores?
La enzima clave en la biosntesis de delfinidina es la
flavonoidil 35-
hidroxilasa
(F35H) que
cataliza la
hidroxilacin en
5 del anillo B
del esqueleto de
la antocianina.
La expresin
gnica de esta
enzima se mues-
tra en la siguien-
te figura:
a) Anlisis de
Northern blot
usando RNA
total de ptalos
de los tres culti-
vares de G. sca-
bra. La mem-
brana fue hibri-
dada con cada
una de las son-
das correspon-
dientes a los genes F35H y F3H (codifica para una
enzima que cataliza la hidroxilacin en 3 del anillo B
de flavonoides). rRNA: control de cantidad de RNA
ribosomal teido con bromuro de etidio.
b) Anlisis de RT-PCR para amplificar el ORF de
F35H usando RNA total extrado de ptalos. Los
nmeros a la derecha indican los tamaos de los frag-
mentos amplificados.
Nota: por 3RACE amplifican transcriptos menores a
1,4 kb en la lnea 13-98
c) Anlisis de PCR para amplificar la secuencia gen-
mica de F35H con los iniciadores empleados para la
RT-PCR. Los nmeros a la derecha indican lo mismo
que en b.
ii) Cul fue el objetivo de los experimentos mostrados
en a y b?
iii) Para qu se realiz la hibridacin con F3H?
iv) Qu explicacin molecular podra dar a los cam-
bios en el perfil de los transcriptos?
A continuacin, a partir de ADN genmico de las plan-
tas amplifican fragmentos conteniendo el ORF F35H
(ver parte c de la figura anterior):
v) Cul fue el objetivo de este experimento?
vi) Qu evidencian estos resultados?
Los fragmentos de 4 kb y 3,3 kb fueron clonados y se-
cuenciados.
El fragmento de 4 kb de la lnea 13-98 presentaba en el
exn 1 una insercin (a la que llamaron dTgs1) cuya
secuencia contena un sitio blanco de duplicacin
(TSD) de 8 pb y repeticiones terminales invertidas
(TIR) de 14 pb. La secuencia TIR presentaba una re-
gin palndromica imperfecta y exhiba similitud par-
cial con un elemento dTph de petunia (el cual se sabe
que es reconocido por la transposasa Ac).
El fragmento de 3,3 kb del cv. Momokorin contena una
insercin en el exn 1, a la que denominaron GsTRIM.
Esta secuencia presentaba repeticiones directas termina-
les (TDR). Esta insercin no contena secuencias que
codificaran para alguna protena. Asimismo, presentaba
similitud con secuencias de Lotus japonicus, designadas
LjTRIM.
vii) Qu le permiten confirmar estos datos de secuen-
cia? Cul es entonces la explicacin para los diferentes
fenotipos observados?
Como los elementos TRIM fueron identificados a partir
de anlisis de bases de datos de secuencias nucleotdi-
cas y mostraron la peculiaridad de estar conservados en
distintas especies de plantas, realizaron un anlisis filo-
gentico empleando las secuencias TDR y usando los
programas CLUSTAL W y TREEVIEW. El rbol obte-
nido se muestra a continuacin:

vii) Qu puede concluir del agrupamiento mostrado en
el rbol?
viii) Sugiera un experimento simple para analizar la
existencia de los elementos dTgs1 y GsTRIM en el ge-
noma de otras especies de Gentiana.
Rta: Aclaracin: Las gentianas rosadas vienen siendo
obtenidas por mejoramiento a partir de mutaciones es-
pontneas a partir de gentianas azules, pero el/los me-
canismo/s involucrado/s eran desconocido/s hasta el
momento.
i) Estos resultados indican que hay diferencias en la
acumulacin de las distintas antocianinas en ambas
plantas (azules y rosadas), en particular, las plantas ro-
sadas carecen de delfinidinas. Pero la acumulacin de
cianidinas es similar para ambas.
ii) Como los autores saben que la F35H es la enzima
clave en la sntesis de delfinidina y viendo los resulta-
dos anteriores, analizan si hay diferencias en cuanto a la
expresin del gen para esta enzima entre los dos tipos
de plantas y analizan si esto podra explicar los fenoti-
pos observados.
iii) La hibridacin con F3H es usada como control.
Tanto en plantas azules como rosas se obtiene el mismo
patrn de expresin. Es otra enzima involucrada en la
sntesis de pigmentos pero que produce otro compuesto
(que no tiene nada que ver con las delfinidinas, si bien
pertenece a la misma ruta biosinttica). Tambin prue-
ban con otros genes relacionados con la sntesis de fla-
vonoides y ven que exhiben los mismos patrones que la
34
F3H pero esto tampoco lo muestran en el trabajo origi-
nal.
iv) Los resultados evidencian que:
No se observa transcripto de F35H para la planta ro-
sada, lnea 13-98 tanto por Northern blot como por RT-
PCR (Aclaracin: los primers para esta RT levantan el
ORF por completo, full length). Adems se aclara que
por 3RACE obtienen fragmentos menores a 1,4 kb.
Para la planta rosada cv. Momokorin, el transcripto de
F35H es de tamao mayor que el observado para la
planta azul cv. Alta (Northern). Por RT-PCR este culti-
var muestra dos fragmentos de 1,3 y 2,1kb que difieren
del de 1,6kb observado para la planta azul.
En conclusin: ninguna de las plantas rosadas acumulan
el transcripto de tamao normal esperado (1,6kb)
v) El objetivo de este experimento fue examinar la es-
tructura del gen para F35H en estas plantas a partir de
amplificacin sobre el ADN genmico de las mismas,
para ver si existen diferencias que puedan explicar los
resultados a nivel de transcriptos.
vi) Se obtienen fragmentos de amplificacin de distinto
tamao para las distintas plantas. Estos resultados
muestran que el cv. Alta (azul) muestra un fragmento
de 2,8kb mientras que para la lnea 13-98 y el cv. Mo-
mokorin (rosadas) las bandas son 1,2 y 0,5kb mas gran-
des, respectivamente (sus tamaos eran 4 y 3,3 kb, res-
pectivamente). Es probable que en el gen de las plantas
rosadas haya alguna insercin.
vii) Estos resultados, dadas las similitudes de las se-
cuencias con elementos transponibles, evidencian que
las inserciones observadas corresponderan a transposo-
nes (dTgs1 y GsTRIM1). La explicacin para los dife-
rentes fenotipos observados es que estos transposones
interrumpen la secuencia del gen, resultando en trans-
criptos anormales (o ausencia de transcripto) que no
permiten la sntesis de la enzima F35H y por lo tanto
no se sintetizan el pigmento que produce la coloracin
azul (delfinidina).
vii) Los resultados claramente muestran que GsTRIM1
y LjTRIM se agrupan juntos y apartados del resto de los
TRIMs reportados previamente, indicando que estos
dos transposones son evolutivamente diferentes de los
otros elementos TRIM de plantas.
vii) Al inicio del problema, en el enunciado, se indica
que tambin disponen de G. triflora cv. Macyri. Por lo
tanto, el experimento sera hacer Southern blot de sta
conjuntamente con las 3 plantas analizadas de G. sca-
bra e hibridar con dTgs1 y GsTRIM1 (Southerns sepa-
rados, obviamente) y observar la aparicin de muchas
bandas (esto mostrara que, como la mayora de este
tipo de transposones, son miembros de una familia de
alto nmero de copias, y que estn distribuidos por todo
el genoma de Gentiana).
6) Se estudiaron los mecanismos de regulacin del
elemento transponible mariner, que est presente en
genomas de invertebrados, hongos y humanos. Ellos
obtuvieron un macho transgnico que tena
reemplazado un fragmento del gen white, localizado en
el cromosoma X, por otro homlogo, pero interrumpido
por un mariner cuya transposasa no era funcional. Esta
variante de transposn con transposasa no funcional se
denomin peach. El gen white codifica para un
pigmento rojo del ojo y cuando est mutado por
insercin, no se expresa y los ojos resultan blancos. Por
sucesivas cruzas, se obtuvo una poblacin de machos y
hembras con todos sus cromosomas X conteniendo el
gen white interrumpido por peach.
Por otro lado, se logr una construccin denominada
hsp, en la que el elemento mariner salvaje se puso bajo
la regulacin del promotor del gen de la protena hsp70
(heat shock protein), que es inducible por calor. Esta
segunda construccin se introdujo en uno de los
cromosomas del par 2 de moscas transgnicas que ya
eran peach, obtenindose moscas hsp/+.
Se realizaron cruzas entre moscas transgnicas peach,
en las que uno de los parentales tena 1 dosis de hsp
(hsp/+) y el otro parental, ninguna (+/+) . Se cont el
porcentaje de la progenie, criada a 25C (actividad basal
de hsp) o a 37C (actividad inducida de hsp), que
exhiba ojos rojos.
Genotipo del
cromosoma 2
de los padres
Temp. % de progenie
con ojos rojos
hsp/+ ; +/+ 25 8
37 17
hsp/+ ; hsp/+ 25 18
37 48
+/+ ; +/+ 25 1
37 2
Preguntas :
a) Interprete los resultados numricos
b) En qu etapa del desarrollo ocurren los eventos que
dan a origen a la progenie con ojos rojos ?
c) En este tipo de cruza tambin aparecen individuos
con ojos blancos con manchas rojas (fenotipo mosaico).
Cmo justifica estos resultados? En qu etapa del
desarrollo ocurrieron los procesos que originaron los
ojos mosaico?
d)Las hembras mosaico presentan un mayor nmero de
manchas rojas que los machos mosaico. Cual es la
causa ?
Solucin:
Super familia mariner Tc1
IR IR

50-28 pb 1000 50-28 pb
trasposasa
D. mauritiana: especie endmica hospedador de mari-
ner: IR tr + IR
mariner (wt)

IR tr - IR
peach


IR tr + IR
hsp
a) hsp/+ ; +/+
25 C, 8%: actividad basal que induce la sntesis de tr,
que acta en trans sobre white interrumpido por peach
37 C, 17%: idem, pero con promotor inducido
25 C: hsp/+; hsp/+
35
A M A M
37 C: 18% y 48%: anlogo a la progenie de los otros
parentales pero con doble dosis de tr y trasposasa.
+/+ ; +/+ : valores basales en ausencia de tr. 1% puede
ser casual, retromutacin debera ser 0%.
b) Durante el desarrollo del embrin, etapas tempranas
c) Desarrollo embrionario, estado multicelular del desa-
rrollo del ojo. La transposicin que elimina a peach de
white ocurri varias veces.
La doble dosis del X en las hembras duplica la probabi-
lidad de la transposicin respecto a los machos, que
tienen una sola dosis del X
7) Un investigador est estudiando el mecanismo de
transposicin del transposn X de ratn. Para ello, par-
tiendo de la secuencia salvaje del transposn, inserta
una construccin entre el gen pol y el LTR de la dere-
cha, que contiene:
- al gen C, cuya expresin le confiere color marrn a los
ratones.
- el promotor del gen C interrumpido por un intrn
hacindolo no funcional
Partiendo de ratones albinos, genera ratones transgni-
cos heterocigotas para dicha construccin (es decir, los
ratones tienen una sola copia del transposn recombi-
nante).
a) Detalle el fenotipo de dichos ratones en cuanto al
color de piel y presencia o ausencia de manchas:
i) si se trata de un retrotransposn, ii) si se trata de un
transposn
Justifique su respuesta.
Los ratones resultaron albinos con algu-
nas manchas marrones. A partir de biop-
sias de piel, se extrajo ADN, se digiri
con EcoRI y se realiz un Southern blot
utilizando como sonda el cDNA de pol.
b) Esquematice los resultados esperados
del Southern si las biopsias se tomaron a partir de por-
ciones albinas de la piel, y si se tomaron a partir de zo-
nas marrones. Justifique.
c) Cmo explica el hecho de que algunas manchas ma-
rrones resultaron grandes y otras pequeas?
R) a) i) En aquellas clulas donde no ocurra transposi-
cin el color de la piel ser albino ya que al estar inte-
rrumpido el promotor de C y no ser funcional el gen C
no se expresar.
En caso de que se trate de un retrotransposn, este
transposn pasar por un intermediario de RNA. En
dicho intermediario podr ocurrir el splicing del intrn
de la construccin y al retrotranscribirse a DNA e inte-
grarse en algn lugar del genoma del ratn se regene-
rar el promotor de C. En aquellas clulas de la piel,
derivadas de aquellas donde ocurri la retrotransposi-
cin, se expresar el gen C dado parches de color
marrn.
ii) En este caso el intrn no se eliminar nunca (ya que
la maquinaria que elimina intrones los elimina del RNA
y no del DNA) por lo que el promotor nunca ser fun-
cional, an cuando haya transposicin. Por lo tanto
los ratones deberan ser ntegramente albinos.
b) En las zonas blancas de la piel no ocurri transposi-
cin por lo que debera ver una sla banda correspon-
diente al tamao del fragmento incluyendo el intrn.
En las zonas marrones de la piel si ocurri retrotranspo-
sicin y se elimin el intrn. Por este motivo debera
ver dos bandas una incluyendo el intrn (el retrotrans-
posn original no se elimina) y otra sin el intrn.
d) Las manchas grandes se deben a eventos de trans-
posicin que ocurrieron temprano en el desarrollo
(y por ende dieron lugar a una porcin grande de la
piel) mientras que las manchas pequeas se deben a
eventos de transposicin que ocurrieron de forma
ms tarda.


pol LTR LTR C
Intron
Promotor
> >
EcoRI EcoRI
LTR LTR C
Intron
Promotor
gag LTR LTR C
Intron
Promotor
> >
EcoRI EcoRI
36
Gentica Extranuclear y Ligada al Sexo
1) La neuropata ptica hereditaria de Leber (NOHL) es
una enfermedad rara en la especie humana que produce
una rpida atrofia del nervio ptico y que genera cegue-
ra en adultos jvenes. Esta enfermedad est caracteriza-
da por una prdida bilateral de la visin central mientras
que se mantiene la visin perifrica. La 1 genealoga
muestra la herencia de esta enfermedad en una familia
bastante amplia:
Cul es el tipo de herencia ms probable para la
NOHL en la especie humana? Explique su razonamien-
to.
Segn su hiptesis complete la 2 genealoga indicando
los individuos afectados.
Respuesta: Observamos que todos los descendientes
independientemente de su sexo, muestran el fenotipo de
la madre. [Esto no podemos explicarlo si el carcter
estuviera en los cromosomas sexuales, ya que el fenoti-
po de la descendencia no depende de si el carcter es
dominante o recesivo, o de la direccin del cruzamien-
to, sino slo del fenotipo de la madre]. Por lo tanto
podramos asegurar que este carcter es un caso de
herencia materna.
En B se sombrean: II 2, 3, 5; III 1, 3, 4, 8,10,11; IV
todos
2) El siguiente rbol muestra una familia que hereda
una forma severa de hidrocefalia causada por una muta-
cin en el gen L1CAM (localizado en el cromosoma X)
y que presenta una herencia recesiva. Utilizando un
marcador intragnico que tiene tres alelos (12, 8 y 7) se
hace el diagnstico del propsito (nombre que reciben
los pacientes por parte de los genetistas mdicos y
que se indica con una flecha).Cul fue el resultado del
diagnstico?
a) La propsito es portadora del alelo mutante
b) La propsito es heterocigota no portadora
c) La propsito es homocigota para el alelo normal
d) El resultado no permite dar un diagnstico preciso
sobre el genotipo.
Respuesta: b)
3) En el antiguo testamento, Dios dispuso que los hijos
de Isaac y su mujer constituiran la nacin juda. Sin
embargo, la esposa de Isaac era bastante mayor y su-
puestamente infecunda. Segn las costumbres locales
de la poca, ella eligi una mujer alternativa con la que
Isaac tuvo un hijo: Esa. Un da, la anciana mujer le
coment a Isaac que estaba encinta y tuvo un hijo: Ja-
cobo. Posteriormente, Jacobo se cas con 5 hermanas
(de otra familia) y tuvo 13 hijos y varias hijas. Supo-
niendo que pudiera acceder a muestras de tejido de Isa-
ac, Esa, Jacobo y de los hijos de Jacobo y, adems,
pudiese extraer DNA y analizarlo:
a) Cuntos haplotipos o secuencias nucleotdicas dife-
rentes en la regin del cromosoma Y en la regin del
gen Sry obtendra? Justifique.
b) Cuntos tipos de secuencias nucleotdicas diferentes
del D-loop de DNA mitocondrial obtendra? Justifique.
Solucin: a) Uno slo: el que proviene de Isaac (heren-
cia ligada al sexo, etc.)
b) 4: el de Isaac (donado por su madre), el que proviene
de la madre de Esa, el que proviene de la madre de
Jacobo y el que proviene de la madre de las 5 hermanas
(herencia materna...)
3) Aproximadamente el 0,3% de la humanidad tiene
una enfermedad gentica leve llamada LHON produci-
da por una mutacin que substituye una Asn por una
Asp en el complejo NADH mitocondrial.
a) Cules son las frecuencias genotpicas para este
carcter? Seran distintas a las frecuencias allicas?
por qu?
b) Si apareciese una corriente eugensica que preconice
mejorar la raza humana que proponga eliminar las
enfermedades genticas por mtodos drsticos deber-
an prohibir tener hijos a todos los individuos con
sntomas de LHON?por qu? Atencin: ignore los da-
tos que se enumeran a continuacin para contestar esta
pregunta.
Gracias a los conocimientos adquiridos en gentica I y
para buscar argumentos cientficos para enfrentar al
movimiento eugensico a Ud se le ocurre hacer 2
estudios: i) diagnstico molecular confirmatorio y ii)
cuantificacin de la frecuencia de aparicin espontnea
de esta mutacin. En el primer caso encontr que,
adems de los enfermos, existen individuos con la mu-
tacin pero asintomticos (debidos a heteroplasmia:
presencia de mitocondrias con genotipo normal y mu-
tante en una nica clula) y en el segundo que la misma
es significativa.
37
c) Argumente por qu estos estudios demostraran la
inutilidad prctica de encarar la seleccin negativa pro-
puesta por los eugensicos.
Respuestas: a) Este es un carcter mitocondrial por lo
que, salvo algn caso raro de heteroplasmia, el alelo
est presente o ausente (como si fuera una especie mo-
noploide)]. Por lo tanto, las frecuencias allicas son
iguales a las genotpicas f(LHON) = 0,3% F(normal) =
0,97%
b) A las mujeres (y no a los varones) porque se trata de
una herencia materna, no hay necesidad de evitar la re-
produccin de los varones dado que no transmiten la
enfermedad
c) Despus de la seleccin negativa la segregacin
somtica de los heteroplsticos y la aparicin constante
de nuevas mutaciones similares llevaran la enfermedad
gentica a las mismas cifras actuales (despus de algu-
nas pocas generaciones)
4) El seor sealado con un crculo rojo tiene una rara
enfermedad gentica y le pregunta: -Vos que hiciste un
curso rpido de gentica me podrs averiguar qu pro-
babilidad tengo de transmitirle esta enfermedad a mis
futuros hijos?
Mi seora
no posee
esta enfer-
medad pero
con la
gentica
nunca se
sabe!. Me
tendr que
hacer un
anlisis yo
o mi seo-
ra?
Le podr contestar sin necesidad de pedirle un anlisis
gentico detallado (pedigr) a la seora? Justifique bre-
vemente.
Rta: La probabilidad es nula porque se trata de un claro
ejemplo de herencia materna. No requiere de ms anli-
sis.
Respuestas alternativas vlidas a esta pregunta (no pe-
didas):
a) Imprinting materno
b) podra ser un gen autonmico recesivo
En el caso b), S debera hacer anlisis genticos.
5) En la siguiente genealoga los smbolos en negro
denotan la condicin patolgica de una enfermedad con
baja incidencia en la poblacin, que afecta mayormente
a hombres. Justifique todas sus respuestas.
a) Cules de los siguientes tipos de herencia puede
descartar: herencia mendeliana, ligada al sexo, liga-
da al cromosoma Y, limitada por el sexo, influencia-
da por el sexo, herencia materna, influencia mater-
na?
b) De las posibilidades que no descart, cul le parece
ms probable?
c) asumiendo como cierta la hiptesis que escogi
en el punto b), cul sera el genotipo de los distin-
tos individuos de la genealoga? Tenga en cuenta
que en algunos casos puede haber ms de una opcin
posible.
d) Si los individuos que poseen el asterisco se ca-
san, cul es la probabilidad que tengan un hijo
que porte el alelo enfermo?

Respuesta:
a) Herencia mendeliana: no la puedo descartar, podra
tratarse de una enfermedad recesiva.
Ligada al sexo: puede ser
Ligada al Y: No puede ser porque sino el hijo varon II
debera ser enfermo y el V no debera serlo.
Limitada por el sexo: no puede ser porque segn el
enunciado en la poblacin tambin hay mujeres enfer-
mas.
Influenciado por el sexo: puede ser
Herencia e influencia materna: no porque las madres de
los enfermos no estn enfermas y el que introdujo el
alelo que da la enfermedad fue el padre de las genera-
cin I
b) Es un gen ligado al cromosoma X. Podra ser un gen
autonmico recesivo, pero eso sera posible si todos los
matrimonios se dieron con personas heterocigotos para
la enfermedad y si sta es rara como dice el enunciado
esta alternativa es muy poco probable. Tambin podra
ser influenciado por el sexo.
c)

d)La probabilidad de que la mujer sea heterocigota es
(dado que recibi X
A
del padre y existe de probabili-
dad que haya recibido X de la madre) y la probabilidad
de que siendo heterocigota transmita el alelo enfermo es
. Por lo tanto la probabilidad de que un hijo varn
porte un alelo enfermo es .
6) El Dr. Visen public hace aos los resultados de la
herencia del color del pelaje de los gatos. Su primera
observacin fue que el pelaje puede ser de color negro o
naranja, entre otros. Posteriormente al cruzar gatos con
estos colores los cruces recprocos dieron resultados
*
?

I
II
V
III
IV
*
?

X
A
X
a
X
A
X
a

X
A
X
a
X
a
Y
X
A
Y X
A
Y X
A
X
a

X
a
Y X
a
Y X
a
Y X
A
Y
X
A
Y
X
a
Y
X
a
Y X
a
Y
X
a
Y
X
A
Y
X
A
Y
X
A
Y X
A
X
a
X
A
X
a

X
A
X
a

X
A
Y X
A
X
--

X
A
X
a

X
A
X
--

X
A
X
--

X
A
X
a

X
A
X
-
-

X
A
X
-
-

X
A
Y
*

I
II
V
III
IV
*
38
diferentes, apareciendo animales con un fenotipo en
mosaico llamado carey, formado por pelos negros y
naranjas distribuidos en forma aleatoria en todo el cuer-
po
Hembras F1 Machos F1
Cruza-
miento
Hem-
bras
Ma-
chos
negro naranja carey negro naranja
1 negro negro 48 46
2 naranja negro 16 20
3 carey naranja 47 43 38 54
4 carey negro 12 21 29 35
a) De qu tipo de herencia se trata?
b) Por qu slo aparecen hembras carey y no as ma-
chos?
c) Cul es la relacin de dominancia entre los genes
que condicionan estos colores?
2) a) Que los dos cruces recprocos den resultados dife-
rentes indica, en principio, herencia en relacin con el
sexo. Fijndonos en los machos de la F
1;
su fenotipo
es igual al de su madre, tpico deherencia cruzada.
Los hijos reciben el cromosoma X de la madre con el
alelo para negro o para
naranja, sin embargo, las hijas presentan el mismo feno-
tipo carey en ambos cruces. De acuerdo con la hip-
tesis de herencia ligada al sexo, las hijas del primer cru-
ce tienen que ser heterozigotas, con un cromosoma X
materno portador del alelo para negro y un cromoso-
ma X paterno con un
alelo para naranja. En las hembras heterozigotas se ex-
presaran los dos alelos, produciendo dicho fenotipo en
mosaico. Esto se debe al fenmeno de inactivacin
aleatoria de uno de los dos cromosomas X de la hem-
bra, que se produce en fases tempranas del desarrollo
(Lionizacin).
b) El resultado de los cruces 3 y 4 nos ayudar a con-
firmar la hiptesis. Una hembra carey, ser hetero-
zigota para negro y naranja (X
ne
X
na
), y tendr hijos
tanto negros (X
ne
Y) como naranjas (X
na
Y), que es lo
que ocurre en los dos cruces. Una hembra carey cruza-
da con un macho naranja tendr hijas tanto carey co-
mo naranja:
X
ne
X
na
x X
na
Y = X
ne
X
na
+ X
na
X
na
+ X
na
Y + X
ne
Y
carey naranja = carey + naranja+ naranja
+negro
En el cruce hembra carey con macho negro la dife-
rencia es que en lugar de hijas naranjas aparecen, lgi-
camente, hijas negras, siendo todo lo dems igual.
Los machos, al ser hemizigotos, sern siempre X
na
Y
(naranjas) o X
ne
Y (negros), pero nunca podrn ser ca-
rey.
c) Aunque negro y naranja son alelos del mismo gen, no
se puede hablar estrictamente o deducir relaciones de
dominancia/recesividad, de herencia intermedia o de
codominancia, ya que en cada clula que produce pelo
se manifiesta uno u otro alelo, en los machos debido a
la hemizigosis y en las hembras heterozigotas debido a
la inactivacin de uno de ellos.
7) En plantas de maz con citoplasma de tipo T se ha
identificado un gen (urf13) cuya expresin induce la
androesterilidad. Asmismo para este tipo de plantas se
han identificado dos genes restauradores nucleares do-
minantes (Rf1 y Rf2) cuya expresin concertada restau-
ra la fertilidad, no habiendo restauracin si slo se
expresa uno de estos genes. El gen Rf1 fue el primer
gen restaurador aislado y caracterizado molecularmente.
Si se dispone de una planta con citoplasma T, homoci-
gota para el gen Rf1 dominante, desconocindose su
constitucin gentica para el locus Rf2,
a) Indique cual/es de las siguientes lneas de maz utili-
zara en sus experimentos para determinar la composi-
cin allica del locus Rf2 en la planta incgnita. Justi-
fique su respuesta, indicando qu planta usara como
padre y como madre en sus experimentos de cruzamien-
to, cmo espera que sea la descendencia en caso de que
la planta a la que se le quiere determinar el genotipo sea
rf2rf2, Rf2rf2 o Rf2Rf2 y por qu descarta las plantasno
elegidas.
i. T rf1 rf1 Rf2 Rf2 iv. N Rf1 Rf1 rf2 rf2
ii. N rf1 rf1 Rf2 Rf2 v. T Rf1 Rf1 Rf2Rf2
iii. T Rf1 Rf1 rf2 rf2 vi. N Rf1 Rf1 Rf2 Rf2
Nota: N corresponde a citoplasma normal, T correspon-
de a citoplasma androestril.
b) Un mejorador recibe una planta con una nueva fuen-
te de androesterilidad citoplasmtica y al cruzarla con
una lnea restauradora para los genes Rf1 Rf2 obtiene
toda la descendencia estril Cmo explica este resulta-
do?
R) a) Utilizara la planta iv como padre que es frtil
(citoplasma normal) y aparte es homocigota dominante
para RF1 (este locus no est en estudio pero es necesa-
rio para restaurar fertilidad) y rf2 doble recesivo para
evaluar la composicin de la descendencia al cruzarlo
por la planta incgnita (T Rf1Rf1 -- --)
Si la descendencia es 100% estril, la planta era T Rf1
Rf1 rf2 rf2 (Rf1 solo no restaura la fertilidad)
Si la descendencia es 100% frtil la planta era T Rf1Rf1
Rf2Rf2
Si la descendencia es 50% esteril, 50% frtil, la planta
era T Rf1Rf1 Rf2rf2
Las otras lneas no daran resultados conclusivos
i), iii): no dan polen viable
ii) , v), vi): toda la descendencia es frtil pero no se
puede establecer que alelos Rf2/rf2 componen el locus
incgnita
b) Es portadora de un gen de androesterilidad distinto
al urf13 para el cual la lnea retauradora no posee el
gen restaurador necesario
7) Un investigador est estudiando una extraa enfer-
medad que afecta a la poblacin de una remota isla del
Pacfico. Analizando la descendencia de los matrimo-
nios en la isla not que:
- Los hijos varones de los matrimonios donde el padre
es enfermo y la madre sana, son todos sanos. En cam-
bio, todas las hijas presentan la enfermedad.
- En la descendencia de los matrimonios donde el pa-
dre es sano y la madre es enferma la proporcin de hijas
enfermas es significativamente mayor a la de hijos en-
fermos.
a) Qu tipos de herencia no son consistentes con estas
observaciones: autosmica dominante, autosmica re-
cesiva, dominante ligada al X, recesiva ligada al X, li-
gada al Y, influenciada por el sexo, limitada por el
sexo, herencia mitocondrial o influencia materna? Justi-
fique cada caso.
39
b) Para aquel/aquellos tipos de herencia que sean con-
sistentes con las observaciones indicar los fenotipos
esperados para cada genotipo y explicar las observacio-
nes del investigador.
Respuesta:
a) autosmica: no es posible pues debera haber igual
frecuencia de hijos que de hijas enfermas.
Dominante ligada al X: Los padres sanos seran X
e
Y y
las madres enfermas X
E
X
e
o X
E
X
E
. De los cruzamien-
tos X
e
Y x X
E
X
e
la mitad de los hijos varones son en-
fermos y la mitad sanos; y la mitad de las hijas son en-
fermas y la mitad sanas. De los cruzamientos X
e
Y x
X
E
X
E
todos los hijos es hijas son enfermos. En conjun-
to, la proporcin de hijos enfermos debera ser igual a la
de hijas enfermas, lo cual no ocurre.
Recesiva ligada al X: no es consistente pues las hijas de
padres sanos y madres enfermas deberan ser todas por-
tadoras sanas mientras que los hijos todos enfermos.
Ligada al Y: no es posible pues hay mujeres enfermas.
Limitada por el sexo: no es posible pues hay enfermos
de ambos sexos.
Herencia mitocondrial o influencia materna: no es posi-
ble pues los padres enfermos no podran pasarle la en-
fermedad a sus hijas.
b) Se trata de una enfermedad influenciada por el sexo,
donde el alelo enfermo (A1) es recesivo en los hombres
y dominante en las mujeres.
Hombres Mujeres
A1A1 Enfermos Enfermas
A1A2 Sanos Enfermas
A2A2 sanos Sanas
- Caso 1: padres enfermos x madres sanas
A1A1 x A2A2
Toda la descendencia es A1A2. Los varones sern sa-
nos y las mujeres presentarn la enfermedad.
- Caso 2: padres sanos x madres enfermas
Los padres sanos pueden ser A1A2 o A2A2; mientras
que las madres enfermas pueden ser A1A1 o A1A2. Al
ser un gen autosmico habr la misma proporcin de
cada genotipo en la descendencia masculina que en la
femenina. Entre estos genotipos aparecen los tres posi-
bles A1A1 (que sern enfermos tantos hijos como
hijas), A2A2 (que sern sanos tanto hijos como hijas) y
A1A2 (que sern sanos si son varones y enfermas si son
mujeres). Es por esto que hay una mayor proporcin de
hijas enfermas que de hijos enfermos.
Gentica Aplicada
1) NNK y NNN son nitrosaminas presentes en el tabaco
y en el humo de cigarrillo, conjuntamente con otros po-
tentes carcingenos y se sospecha que tienen un rol
primario en el cncer de pulmn, boca y otros sitios.
Por otro lado, se cree que el t verde podra funcionar
como quimioprotector, debido a la presencia de anti-
oxidantes fenlicos que actuaran en los pasos depen-
dientes de replicacin que ayudan a fijar las mutaciones
como parte del desarrollo oncognico. Pressentin y col
(2001) estudiaron genotoxicidad de NNK y NNN utili-
zando ratones transgnicos para lacZ (sistema Muta-
mouse) a los cuales suministraron NNN, NNK y/o t
verde en el agua de bebida durante tiempos y condicio-
nes controladas. Despus de los tratamientos, extrajeron
DNA de los rganos de inters, se lo empaquet con un
extracto con cpsides de fago y se infectaron bacte-
rias, las cuales se plaquearon. Se investigaron, adems
de los rganos que desarrollan cncer con mayor fre-
cuencia en fumadores, al hgado y al rin porque se
report que estos compuestos son metabolizados y ex-
cretados por va urinaria en los fumadores (se sabe hace
mucho que la orina de fumadores es mutagnica). En la
figura 1 se cuantifican la cantidad de placas (playas de
lisis) transparentes sobre el total (azules + transparen-
tes).

Fig 1: Promedio de unidades formadoras de placa (pfu)
para NNK, NNN y un control no tratado. Se grafican
los desvos estndar. Un asterisco simple implica P <
0.05 usando el MannWhitney U-test versus el control
correspondiente. El doble asterisco (**) denota P <
0.01. liver, hgado; lung, pulmn; O.T., tejido oral;
esoph., esfago; tongue, lengua; kidney, rin; cont.,
control .
a) Qu ventajas (en trminos temporales) tiene este
mtodo comparado, por ejemplo, con cuantificar el de-
sarrollo de tumores en los ratones, si es esto ltimo es
lo que interesa en ltima instancia?
b) En base a los resultados dira que las nitrosaminas
de tabaco son mutagnicas? Por qu?
c) Dado que la ingestin de agua sin nitrosaminas (con-
trol) resulta en valores significativamente distintos de
cero sospechara que en el experimento hay algn otro
mutgeno que no se est controlando o que es mutag-
nica el agua y que pueda afectar la validez del experi-
mento?
d) A partir de los resultados Considera que existe es-
pecificidad de tejido o no? Se condicen estos resulta-
dos con las evidencias epidemiolgicas previas que in-
dican que pulmn, esfago y boca son los que muestran
mayor incidencia de carcinognesis por efecto del ciga-
rrillo?
e) Una de las ventajas de este sistema de deteccin es
que se puede aislar fcilmente DNA de las placas trans-
parentes y secuenciarlo. Qu informacin aportara
esto ltimo?
Posteriormente, se realizaron experimentos suminis-
trando una infusin de t verde, con los resultados que
se muestran en la Fig 2:
40

Fig. 2. Igual que en la Fig. 1. Las diferencias denota-
das por asteriscos son entre NNK y NNK+T. NNK+T:
NNK + t verde.
f) Indique y justifique si le recomendara tomar t ver-
de a un fumador (aunque no le guste) en vez de aconse-
jarle que deje de fumar.
Respuestas:
a) Porque esperar a que desarrollen tumores lleva, por
lo menos, varias semanas. Este mtodo es ms rpido.
b) S, en todos los casos, salvo la NNK en lengua, por-
que los valores de PFU son significativamente diferen-
tes a los controles.
c) No necesariamente, porque estos valores pueden
estar reflejando las frecuencias de mutacin espontnea
o basal. An en el caso de que hubiera otro mutgeno
adventicio, las diferencias son estadsticamente signifi-
cativas, validando as el experimento.
d) S, porque el rgano ms afectado fue el hgado y los
dems lo hicieron en menor grado. No, por lo antedi-
cho. Podra especularse que existe un efecto diferencial
por la va de entrada. La va de ingreso de las nitrosa-
minas (oral en vez de pulmonar) podra ser un causal de
esta diferencia. Para demostrarlo, habra que suminis-
trar las nitrosaminas por aspiracin en una atmsfera de
humo y comparar los resultados.
e) Aportara informacin sobre el mecanismo molecu-
lar de mutacin (transiciones, transversiones, indels,
etc)
f) Las diferencias significativas indican que el t verde
sera un quimioprotector en todos los tejidos evaluados
salvo en esfago y lengua. Sin embargo, no evita por
completo la genotoxicidad en las condiciones ensaya-
das. Por lo tanto, no reemplaza el efecto benfico de
dejar de fumar.
2) Carol Martinson recibi unas muestras de arndanos
de un productor que aduca que las plantas que haba
comprado en la empresa Truchex (SRL, Sociedad de
responsabilidad MUY limitada) no rendan ni tenan la
calidad prometida. Para genotipificar, Carol compar
los patrones de marcadores moleculares con la muestra
problema (nmero 2, supuestamente perteneciente a la
variedad ONeil) con muestras de material de multipli-
cacin del INTA Concordia de ONeal y de otra varie-
dad muy usada (Misty), tanto de material in vitro como
de las plantas derivadas de micropropagacin puestas
a campo, obteniendo el siguiente electroforetograma:

Fig Patrones de amplificacin de RAPDs. Las diferen-
tes calles representan los productos de amplificacin
obtenidos para las distintas muestras: 1 (ONeal, certifi-
cado, in vitro), 2 (supuesto ONeal), 3 (ONeal de cam-
po), 4 (Misty de campo) y 5 (Misty, certificado, in vi-
tro).
a) Qu significan las bandas marcadas con flechas ne-
gras que Carol dibuj sobre la foto? En qu se diferen-
cian de las bandas marcadas con flechas blancas? Cu-
les de los 2 tipos de bandas fueron tiles para este anli-
sis?
b) Perteneca la muestra 2 a la variedad ONeal o no?
Computando las bandas y armando una base de datos,
Carol calcul la similitud entre las muestras y obtuvo el
siguiente dendrograma:
c) Ubique las muestras 2, 3 y 4 en los casilleros en
blanco del dendrograma.
d) En las comparaciones, Carol incluy material micro-
propagado in vitro y de campo Existe alguna razn por
la cual podran ser diferentes y explicar lo que pas?

Rta: a) Las flechas negras indican las bandas polimrfi-
cas (variables) y las blancas indican bandas mono-
mrficas. Las negras fueron las tiles porque permiten
establecer DIFERENCIAS adems de similitudes.
b) No c) 3, 4 y 2
d) Para los brillantes: podra haber variacin somaclo-
nal (mutacin causada por el hecho de cultivar in vitro).

41
Genmica
1) Mediante el uso de marcadores moleculares se cons-
truy un mapa de ligamiento del ratn, usando como
genotipos parentales de la poblacin de mapeo a dos
lneas endocriadas que presentan una marcada diferen-
cia respecto a su predisposicin a contraer Alzheimer
experimental (enfermedad caracterizada por una acele-
rada desmielinizacin a nivel cerebral). Se localiz en
dicho mapa de ligamiento, adems, un locus (gen de
expresin recesiva) involucrado en dicha predisposi-
cin. El mencionado gen (al que se denomin alz) ma-
pea en el cromosoma 3, flanqueado a 10 cM y 13 cM
por dos marcadores RFLP humanos denominados hs3 y
hs1, respectivamente (Fig. 1) (Nota: fue posible usar
sondas humanas ya que muchas sondas de esta especie
hibridan con DNA de ratn debido a su alto grado de
parentesco). Recientemente, un grupo de investigacin,
clon molecularmente en humanos, un gen (gdm) invo-
lucrado en la regulacin de la produccin de mielina a
nivel cerebral y lo mape en el cromosoma 8, flanquea-
do a 12cM y 15cM, por los mismos marcadores hs3 y
hs1. En la publicacin de dicho trabajo, los autores re-
portaron la localizacin cromosmica del gen y su se-
cuencia completa. Al leer este trabajo, se sospech (y
con fundamento) que el gen de ratn podra ser un
homlogo del gen humano. Lamentablemente ambos
grupos nunca colaboraron para que esto se pudiera de-
mostrar.
a) Cules fueron los fundamentos de la sospecha?
b) Qu estrategia utilizara usted para clonar, al menos
parcialmente, al gen supuestamente homlogo de ratn
(recuerde que el gen de ratn est mapeado pero no est
secuenciado y no se sabe si la similitud de secuencia es
alta, ni tampoco si hibridan entre s)?
c) Cmo verificara, funcionalmente, si el gen de
humanos cumple la misma funcin que su homlogo en
ratones? Disee un experimento recordando que los
genes y las protenas humanas son funcionales en rato-
nes y viceversa.
Respuesta: a) La sintenia evolutiva (conservacin filo-
gentica de mapas genticos entre especies emparenta-
das) y, tal vez, las caractersticas de los genes en cuanto
a su rol fisiolgico.
b) Clonado posicional (cualquiera de sus variantes es
correcta). Otras alternativas de clonado ingeniosas pue-
den llegar a aceptarse.
c) Hacer estudios de complementacin en ratones trans-
gnicos (alz/alz, es decir homocigotas recesivos) usan-
do el gen humano como transgn. Espero que a ninguno
se le ocurra hacer humanos transgnicos para Alzhei-
mer..
2) El clonado molecular de genes de resistencia (R) a
enfermedades en plantas es un viejo objetivo de los fi-
topatlogos que trabajan en interaccin husped-
patgeno. A fines de los 90 se clonaron los primeros
genes R por estrategias de clonado posicional (ver figu-
ra) y en la actualidad ya hay decenas de estos genes en
el GeneBank y otras bases de datos. Ud se involucra en
un proyecto de este tipo para su tesis y tiene que resol-
ver un nmero de cuestiones:
En el paso O se identificaron marcadores moleculares
ligados al locus a distancias genticas del orden de los
10 cM. En el paso O se obtuvieron marcadores ms
cercanos de forma tal de disminuir las distancias fsicas
para que en el paso O poder trabajar con un nmero no
muy grande de clones.
a) Con qu tipo de colecciones (libraries) de clones se
trabaja para hacer esto?
i) genmicos
ii) o de cDNA
y por qu?
b) Qu tipo de vectores se utilizan (plsmidos, fagos,
csmidos, BAC o YAC) y porqu?
c) Suponiendo que los marcadores moleculares emplea-
dos (M1, M2, M3 y M4) son RFLPs Cmo se hace
(metodolgicamente) para identificar los clones 1, 2, 3
y 4 de la figura y su ordenamiento posicional (mapa
fisico)?
d) Cul es el tamao fsico aproximado (en kilo-pares
de bases) de 1 unidad de mapa gentico (1 cM) en el
ejemplo de la figura?
Humano

hs3
hs1
gdm
Fig. 1
15
12
cM
hs3
alz
hs1
13
10
cM
Ratn
42
Por qu esta diferencia de unidades? Cmo se mide
cada una de ellas?
Una vez identificados los clones correspondientes a esta
regin cromosmica, sus insertos se subdividen en ta-
maos ms chicos (paso O) para su subclonado y trans-
ferencia a plantas (paso O) para evaluar a estas ltimas
fenotpicamente como R (resistentes) o S (sensibles) a
la enfermedad.
e) Para introducir los segmentos de ADN en plantas se
requiere de algn paso de subclonado en vectores espe-
ciales? Se requiere, dentro de lo anterior, modificar el
promotor y el terminador? Por qu? Se debe tener
alguna consideracin acerca del genotipo que se va a
transformar? Es decir se puede usar un clon de la
misma planta que se us para clonar el gen de resisten-
cia?
En el ltimo paso (el O) se secuencian los insertos, se
identifican las ORF (secuencias abiertas de lectura) pre-
sentes, las que se constituyen en candidatos a genes R.
f) Cmo se identifica una secuencia ORF en un inser-
to?
g) y si hay ms de una, cmo me doy cuenta de la co-
rrecta?
h) Bioinformticamente de qu manera puedo asignar-
le una posible funcin al gen?
Rta: a) Genmicos porque tengo representada una co-
pia exacta del segmento cromosmico que estoy identi-
ficando, incluyendo regiones no codificantes que me
van a servir para empalmar (identificar solapamientos
entre clones) las secuencias con las que se arma el mapa
fsico de la regin. Si usara clones de cDNA, no podra
empalmar un clon con otro porque no habra secuencias
comunes entre ellos.
b) BACs o YACs porque son los que me permiten con-
tener insertos ms grandes y as poder tener reprensada
la regin cromosmica en el menor nmero de clones
posible.
c) Las sondas utilizadas para RFLP pueden utilizarse
como sondas para inspeccionar (screenear) la genote-
ca y as identificar los clones que se corresponden al
segmento cromosmico en estudio. El ordenamiento de
los insertos lo puedo deducir de estas hibridaciones. S
que el orden deducido del mapa gentico es M1-M3-
M4-M2. El mapa fsico, en cambio, slo me permite
ubicar M3 y M4 porque no tengo clones que abarquen
a M1 y M2 (+ el gen que quiero clonar) y sean conti-
guos a M3 y M4. Por lo tanto, el inserto del clon 1 (que
slo hibrida con M3) tiene que estar ubicado en un ex-
tremo y as sucesivamente. La ocurrencia de insertos
que hibridan un marcador y al gen (clones 3 y 4) facili-
tan este ordenamiento.
d) 600-700 kpb / 0,2 cM = 2000 3500 kpb
Porque uma proviene del mapeo gentico que se realiza
mediante cruzamiento y recuento de recombinantes
(unidades de recombinacin o cM) y la otra por mapeo
de restriccin donde se comparan los tamaos de los
insertos com estndares de tamao molecular en kilo
pare de bases.
e) Si se decide utilizar transformacin mediada por
Agrobacterium tumefaciens, se requiere subclonarlo en
un vector Ti. En el caso de usar biolstica (can gni-
co), no hara falta subclonar en ningn vector especial.
No se requiere cambiar secuencias regulatorias por-
que estamos trabajando con genes y secuencias nativas
y el experimento no requiere cambiar la regulacin de
su expresin. No se puede elegir un clon de la planta de
la cual se clon el gen porque sera resistente indepen-
dientemente del inserto que se le introduzca. Debera
elegirse un genotipo susceptible a la enfermedad.
f, g y h) Identificando codones de iniciacin (ATG) y
terminacin (alguno de los 3 codones STOP) con pro-
gramas informticos. Esto se podra complementar me-
diante la identificacin de secuencias consenso de pro-
motores, terminadores, splicing, etc.Mediante el uso de
BLAST y comparacin con otras secuencias ya publi-
cadas.
3) Dos variedades puras de maz (A y B) pueden ser
distinguidas por una serie de RFLPs, los cuales dan los
siguientes patrones:
Un consorcio internacional de secuenciacin del geno-
ma del maz de otra variedad, le pide que usted le enve
sondas para poder anclar una coleccin de BACs al
mapa gentico. Usted conoce la localizacin en el mapa
gentico de los 7 RFLPs de la figura y sabe, adems,
que las enzimas utilizadas no cortan dentro de los frag-
mentos utilizados como sonda. Cules sondas enviara
y por qu?
Rta: Enviara las sondas correspondientes a los RFLPs
213, 48 y la 1112 dado que parecen ser de copia nica.
Evitara las dems porque parecen hibridizar con ms
de una regin del genoma y por lo tanto podran inducir
al error al hibridizar con BACs que no son contiguos.
4) El Dr. Lirn estudi la duracin de la fase alfa en el
sueo de ratones y encontr un mutante, al que llam
sleepy, cuya fase alfa duraba 2 horas, mientras que en
los ratones salvajes la misma es de 4 horas. Al cruzar
un sleepy con otro ratn salvaje, la mitad de los descen-
dientes result mutante y la mitad salvaje.
a) El ratn analizado era homocigota o heterocigota
para el gen sleepy? Se trata de un alelo dominante, re-
cesivo, codominante o semidominante? Justifique su
respuesta.
Al concurrir a un congreso internacional de sonambu-
lismo, Lirn se encuentra con un colega que encontr
otro mutante similar. El investigador decide verificar si
el gen involucrado es el mismo que l encontr. Para
ello, utiliza una lnea homocigota para el gen sleepy y la
cruza con los ratones, tambin homocigota para el gen
en cuestin, del colega. Todos los ratones de la F1 tu-
vieron sueo alfa reducido. Luego cruz la F1 con rato-
nes salvajes. De los 200 descendientes que obtuvo, 180
presentaron sueo alfa reducido mientras que 20 pre-
sentaban sueo normal.
b) Los alelos mutantes encontrados pertenecan ambos
al mismo gen? Justifique su respuesta. En caso que los
genes fueran distintos estaran ligados? a qu distan-
cia?
El siguiente objetivo del Dr. Lirn decidi mapear el
gen mutado. Para ello, utilizando 200 marcadores mole-
culares, logr ubicarla entre dos marcadores M1 y M2
separados entre s por 0,3 cM (aproximadamente
600.000 pb). Despus, el Dr. Lirn construy una geno-
teca de BAC y encontr 4 BACs solapantes (A-D) que
43
abarcaban toda la regin entre los marcadores M1 y
M2:












Con estos BACs (que haban sido obtenidos utilizando
DNA genmico de un ratn sleepy homocigota) el Dr.
Lirn gener 4 lneas transgnicas (una para cada BAC:
LA, LB, LC y LD respectivamente) transfectando clu-
las de un ratn salvaje. Los ratones de las lneas LB y
LC tuvieron un sueo reducido de 2 horas, igual a la de
sleepy mientras que los ratones de las lneas LA y LD
presentaban duraciones de sueo similares a los norma-
les.
c) Qu caractersticas deberan tener los marcadores
moleculares utilizados por el Dr Lirn para realizar este
mapeo? De qu tipo de marcadores se tratara, proba-
blemente? Cmo explica los resultados obtenidos? En
qu regin del mapa que se presenta se encuentra el gen
mutado?
d) Hubiera obtenido los mismos resultados transfec-
tando ratones sleepy con BACs procedentes de ratones
salvajes? Por qu?
Durante el tiempo que le tom realizar todos estos ex-
perimentos, sali publicado el borrador del genoma de
ratn (salvaje) por lo que, basado en la secuencia de la
regin en la que determin que estaba su gen mutante,
encontr 3 posibles genes.
MM_213: secuencia homloga a un gen de Danio rerio
(pez cebra) pero careciendo promotor.
MM_437: gen constitutivo involucrado en la gluclisis.
MM_854: gen de funcin desconocida que presenta
enhancers propios de genes que se expresan en el siste-
ma nervioso central.
e) Cmo se hizo, bioinformticamente hablando, para
adjudicar estas funciones hipotticas a estos 3 genes?
Explique, si resulta pertinente, si debe emplear tcnicas
moleculares adicionales y programas informticos.
f) Cul o cules elegira como genes candidatos a estar
relacionados con el sueo?
Respuestas esperadas:
a) Heterocigota. Si estas mutaciones se pueden detectar
fenotpicamente es porque son dominantes.
b) Si se tratara del mismo gen la F1 tendra ambos ale-
los del mismo gen mutantes (homocigota). Al realizar la
cruza de la F1 con una cepa salvaje, todos los ratones
(salvo que haya recombinacin intragnica que es muy
poco probable) resultarn heterocigotos:
-la mitad para la mutacin de la lnea sleepy
-la otra mitad para la mutacin de la lnea del colega
Dado que ambas mutaciones son dominantes, todos los
ratones de la descendencia deberan tener sueo reduci-
do. Dado que ste no es el caso (hay un 10% de ratones
salvajes) podemos descartar que se trate del mismo gen.
Si el gen mutado es el C/c y el mutado en la otra lnea
es el R/r entonces la F1 de la cruza ser CcRr. Al cruzar
con ratones salvajes (ccrr), si los genes no estn ligados
tendremos CcRr, Ccrr, ccRr y ccrr donde to-
dos los genotipos salvo el ccrr (que tiene memoria nor-
mal) tienen memoria reducida (algunos genotipos ms
que otros). Es decir que si los genes no estn ligados
esperaramos tener de ratones con memoria normal,
lo cual no es el caso. Por lo tanto, los genes estn liga-
dos.
CCrr x ccRR
C r x c r
c R c r
Las gametas parentales del cruzamiento prueba son Cr
y cR mientras que las recombinantes son CR y cr. Dado
que en la descendencia del cruzamiento prueba 20 indi-
viduos son ccrr, entonces un 10% de las gametas pro-
ducidas por la F1 son cr. Un porcentaje equivalente de-
be ser CR que es el producto complementario de re-
combinacin. Es decir que el 20% de las gametas son
recombinantes con lo que la distancia entre los genes es
de 20 u.m.
c) Debi utilizar marcadores STS, es decir marcadores
de localizacin nica.
Si un BAC porta el alelo mutante al generar la lnea
transgnica, sta tendr insertado en algn lugar del
genoma. Como el alelo mutante es dominante se va a
poder expresar an en presencia de uno (suponiendo
reemplazo allico) o dos (suponiendo integracin ect-
pica) copias del alelo salvaje.
Dado que los BACs B y C presentan el fenotipo mutan-
te ambos BACs contienen al gen completo. Por este
motivo podemos localizar al gen en la zona de solapa-
miento de los BACs B y C (de aproximadamente 100
kpb).
d) No, si hubiese usado BACs procedentes de ratones
salvajes para transfectar ratones sleepy, los ratones
transfectados hubiesen sido todos con fenotipo sleepy
ya que este alelo es dominante sobre el alelo normal.
e) Se secuenci la regin de solapamiento de los clones
BAC B y C, subclonados en vectores plasmdico, se
realiz un ensamblado de los mismos y los contigs ob-
tenidos fueron analizados para la deteccin de marcos
de lectura abiertos y se compararon los mismos con se-
cuencias en bases de datos, utilizando programas de
comparacin local como BLASTX y BLASTN pudien-
do predecir en base a la similitud de las secuencias con-
tenidas en esa regin con secuencias de funcin conoci-
da disponibles en bases de datos
f) El MM_213 no es un buen candidato porque como le
faltan secuencias presentes en los promotores, posible-
mente no se transcriba (y sea un pseudogen).
El MM_437 tampoco es un buen candidato porque es
un gen constitutivo y fundamental para la gluclisis. Su
mutacin debera afectar ms cosas que el sueo y de
hecho posiblemente dicha mutacin sea letal en homo-
cigosis.
El MM_854 es un buen candidato porque es un gen que
posiblemente se exprese diferencialmente en sistema
nervioso central.

M1 M2
A
B
C
D
100 kpb
M1 M2
A
B
C
D
M1 M2
A
B
C
D
100 kpb
44
Desarrollo, epigentica, Determinacin del Sexo,
etc.
1) Las etapas ms tempranas del desarrollo en moscas
se explican, en parte, por la distribucin subcelular de
los transcriptos de genes maternos como el bicoid (bcd)
y el nanos (nos), dado que los mismos estn adheridos
al citoesqueleto. Con el objeto de estudiar por donde se
une un ARN mensajero al citoesqueleto, se realizaron
una serie de construcciones quimricas:
1 Promotor nos 5UTR nos Codif.
nos
3UTR
bcd

2 Promotor nos 5UTR nos Codif.
bcd
3UTR
nos

3 Promotor nos 5UTR bcd Codif.
nos
3UTR
nos
UTR (untranslated regin) simboliza el DNA que espe-
cifica los extremos 5 y 3 no codificantes del mRNA.
Como puede observarse, se reemplazaron 3 segmentos
de nos (de a uno por vez) por los respectivos segmentos
de bcd.
Con los mismos, se transformaron genticamente mos-
cas silvestres y se analizaron los embriones tempranos
por hibridacin in situ de mRNAs en el embrin utili-
zando como sonda un cDNA de nos (segunda fila) o
bcd (tercera fila). En la primera fila, se observa el as-
pecto del embrin en una etapa ms avanzada. La figura
siguiente muestra el resultado que se obtuvo con la
construccin 1 en moscas silvestres (primera columna)
y moscas transgnicas (segunda columna).
a) Describa brevemente las diferencias observadas entre
transgnicas y normales.
b) Cmo interpreta que, en la transgnica, la sonda
detecta mRNA de nos en la parte anterior (izquierda)
del embrin (adems de en la parte posterior)?
c)Por qu el transgnico con la construccin 1 presenta
el fenotipo mutante bicoid?
d) Brevemente qu resultados esperara con la cons-
truccin 3?
e) Eesperara resultados diferentes si, en la construc-
cin 1, se reemplaza el promotor nos por el promotor
bcd? Por qu?
3) a) fenotipos: normal y bicoid. Hibridacin in situ con
sonda nos: hibrida en la parte posterior en el normal,
anterior y posterior en el transgnico. Con la sonda bcd,
no se detectan diferencias.
b) Porque la secuencia 3UTR es la responsable de la
unin a protenas del citoesqueleto. La secuencia
3UTR bcd es diferente a la nos y pega el mRNA del
transgn nos a la parte anterior. Debe recordarse que el
transgn se adiciona y no reemplaza a los genes nor-
males presentes en la mosca. Por eso se detecta, como
era de esperar, mRNA de nos en la parte posterior igual
que en el normal.
c) Es consecuencia de la expresin, en la parte anterior,
del relocalizado producto del transgn nos, que interfie-
re con la del bcd y el resultado es un embrin con 2 co-
las (bicoid)
d) Todo dara igual que en el normal porque la regin 5
no codificante, no tiene funcin en la localizacin sub-
celular.
e) No, porque ambos genes son del mismo tipo (mater-
no) y se expresan en forma relativamente sincronizada
y similar.
2) Muchos tipos de cncer humano tienen su causa en la
hipometilacin del ADN. Para estudiar este fenmeno
se generaron ratones transgnicos conteniendo alguna
de estas construcciones:
i) Vector conteniendo un promotor de SV40 (constituti-
vo, proveniente de un adenovirus) controlando la expre-
sin de la secuencia estructural de la metiltransferasa

1
(Dnmt1) en orientacin antisentido
ii) Vector conteniendo un promotor de SV40 (constitu-
tivo, proveniente e un adenovirus) controlando la ex-
presin de la secuencia de la metiltransferasa

1 (Dnmt1)
en orientacin sentido
iii) Vector conteniendo el promotor constitutivo prove-
niente del fago controlando la expresin de la secuen-
cia estructural de la metiltransferasa

1 (Dnmt1) en
orientacin sentido.
iv) Vector conteniendo el promotor constitutivo prove-
niente del fago controlando la expresin de la secuen-
cia estructural de la metiltransferasa

1 (Dnmt1) en
orientacin antisentido
Se sabe que la enzima Dnmt1 controla la metilacin del
ADN en ratones y que su sobre-expresin permite me-
tilar exhaustivamente todo potencial ADN metilable y
que su disminucin causa una sustancial hipometilacin
del ADN en todos los tejidos.
a) Cul de los 4 vectores usara? Por qu?
b) En base al vector elegido, cmo espera que sea el
grado de metilacin general del ratn transgnico? Ex-
plique el mecanismo
c) Con cul de las siguientes tcnicas corroborara que
el ADN est hipometilado? Justifique:
i) digestin con sendas ER que reconocen sitios metila-
dos y no metilados, respectivamente, seguido de Sout-
hern Blot con la sonda Dnmt1
ii) ensayo de proteccin a la digestin por ADNasaI
iii) preparacin de ARN de ratn salvaje y ratn trans-
gnico, seguida de Northern Blot con la sonda Dnmt1
iv) digestin con ER que reconocen sitios metilados,
seguido de Southern Blot con la sonda de igf2 (insulin-
like growth factor-2, conocido gen que sufre impronta
gnica)
v) secuenciacin bisulftica genmica directa de
Dnmt1y/o igf2
vi) secuenciacin bisulftica del cDNA de Dnmt1y/o
igf2
Para la/s tcnica/s elegida/s indique los controles que
hara.
45
El ratn transgnico desarroll tumores en varios teji-
dos. Se determin que el gen Tm, candidato a causar
tumores en hgado, se encontraba hipometilado en estos
ratones. Ud. sabe que Tm presenta dos alelos, Tm1: sin
sitio para EcoRI y Tm2 con sitio para EcoRI.
d) Cmo hara para probar que Tm sufre impronta (im-
printing) en ratones salvajes? Ud cuenta tanto con rato-
nes homocigotas como con heterocigotas.
e) Suponiendo que realmente existe impronta de Tm en
el macho cmo sera la proporcin de Tm1 y Tm2 me-
tilados y no metilados en la F2, es decir los nietos de un
cruzamiento entre ratones homocigotas para Tm1 y
Tm2?
Respuesta a) El i) porque es el nico que tiene un pro-
motor que se expresa en clulas eucariticas y tiene po-
tencialidad de reducir la actividad de mutilacin blo-
queando la traduccin del gen que codifica la enzima
Dmnt 1. Contestacin no necesaria: Podra venir bien
usar al vector ii) pero slo como CONTROL contras-
tante del experimento. Las construcciones de los vecto-
res iii) y iv) no se expresaran en clulas eucariticas
porque slo funciona en bacterias.
b) Altamente reducida. El RNA antisentido (comple-
mentario) de Dmnt 1 formar una doble cadena de RNA
con el mensajero nativo dificultando su traducibilidad.
Al reducirse la cantidad de enzima, se reduce tambin el
efecto de la misma.
c) La v) dado que este tipo de secuenciacin permite
detectar nucletidos metilados. Se debe secuenciar un
gen ya caracterizado como metilado. No sabemos si
ste es el caso del gen Dmnt1 y lo ms probable es que
no lo sea. En todo caso, Dmnt1 puede servir como con-
trol (no metilado). En realidad, el control ms importan-
te es comparar con la secuenciacin comn (que es in-
sensible a la metilacin) y (como se indica despus)
ratones transgnicos vs no transgnicos. La iv) sirve si
se compara el patrn de restriccin de ratn transgnico
vs no transgnico. Tambin podra ser aceptada como
vlida si se explica que se usa ER que NO reconocen
sitios metilados, adems de los metilados para as com-
parar ambos patrones, dado que usar slo una enzima
que s reconoce sitios metilados, no es capaz de dife-
renciarlos de los no metilados. Una complicacin (que
no es necesario explicitar en la respuesta correcta) es
que los genes metilados por imprinting tienen una copia
(epialelo) metilado y otro no metilado.
d) Cruzara 2 homocigotas: por ej. homocigotas para
Tm1 y Tm2. Despus, analizara en la F1 la corres-
pondencia entre metilacin (por ej. por secuenciacin
bisulftica que, adems, me revelar la presen-
cia/ausencia del sitio EcoRI en el epialelo metilado).
(La otra alternativa es una doble digestin con ER sen-
sible/insensibles a metilacin + EcoRI seguido de
Southern). En base a cual alelo aparezca metilado de-
terminar si el imprinting es paterno o materno. La con-
firmacin del imprinting se puede hacer realizando un
cruzamiento prueba con el parental que no metila sus
gametas. Debera ver un 50% de la progenie con me-
tilacin para cada alelo.
e) 25% de individuos Tm1 homocigotas con una copia
de las 2 metiladas (Tm1
m
/Tm1), 25% Tm2 homocigotas
dem (Tm2
m
/Tm2), 25% de heterocigotas con metilacin
en Tm1 (Tm1
m
/Tm2) y 25% de heterocigotas con me-
tilacin en Tm2 (Tm2
m
/Tm1).
3) Los genes fushi-tarazu (ftz) y engrailed (en) codifi-
can factores de transcripcin con homeodominio y pue-
den producir la expresin de otros genes. Ambos genes
actan aproximadamente en el mismo momento durante
el desarrollo y en la misma regin para especificar des-
tinos celulares en los segmentos corporales. Estudios
experimentales de mutantes evidenciaron que en em-
briones ftz (-), no hay protena engrailed mientras que
en embriones en (-) la expresin de ftz es normal.
i) Regula engrailed la expresin de fushi-tarazu o su-
cede lo contrario?
ii) Indique cuando se expresan estos genes y cual es la
funcin principal de cada uno de ellos.
iii) Se expresan estos genes durante toda la vida del
organismo? En caso afirmativo justifique.
Rta:
4) Durante el desarrollo de la mosca Drosophila mela-
nogaster participan varias molculas conocidas como
morfgenos, siendo en las primeras etapas, de origen
materno (los mRNAs que codifican para dichos morf-
genos se traducen en el huevo, pero provienen de las
clulas nutricias maternas). Ejemplo de esto y respon-
sables del establecimiento del eje antero-posterior son:
-en la parte anterior del embrin, BICOID (bcd) y
ms tardamente HUNCHBACK (hb), productos de los
respectivos mRNA maternos.
-en la parte posterior del embrin, NANOS (nos) y
ms tardamente CAUDAL (cd), productos de los res-
pectivosmRNA maternos. Se demostr tambin que:
-la protena bcd reconoce el 3UTR del mRNA de cd
y enla regin promotora del gen hb
-la protena nos reconoce el 3UTR del mRNA de hb.
I) Qu tipo de accin presentan bcd y nos segn lo
comentado anteriormente? Para contestar complete el
siguiente esquema con flechas de unin: (convencio-
nes: activacin, ---| inhibicin).

II) Con toda la informacin que tiene acerca de bcd,
complete los fenotipos que espera observar en los expe-
rimentos de la Fig asignando en cada caso, alguna de
las 4 opciones que se muestran debajo de la figura, en
donde se ha ensayado el agregado de mRNA bcd en
embriones con diferentes fondos genticos En la Figu-
ra siguiente, complete (con flechas) el esquema de los
resultados de inyeccin de mRNA de bcd.
46

Rta I)

Explicacin: bcd y nos son los morfgenos de la parte anterior y posterior: bcd actua como factor de trans-
cripcin para hb regulando positivamente su transcripcin, pero tambin es un inhibidor de la traduccin del
morfgeno cd, que es ms tardo. Anlogamente, nos es un inhibidor del morfgeno ms tardio de la parte ante-
rior, hb.
II) Explicacin: bcd es el morfgeno principal anterior, ya que donde se coloca, se generan zonas que darn
lugar a estructuras anteriores (cabeza y torax). El esquema del primer experimento sera anlogo a una comple-
mentacin (mutante bcd-, con fenotipo WT por agregado del morfgeno anterior en la zona correspondiente).


5) Usted est estudiando el gen HSP23 de la Rana
de las Pampas ya que se sospecha que est involu-
crado en la determinacin del sexo. Para abordar este
problema en primer lugar realiz el siguiente experi-
mento. Transfect oocitos de rana con las siguientes
construcciones:
Luego de transfectar, cultiv los oocitos a 25
0
C o bien
a 37
0
C durante 24 hs y midi la fluorescencia verde.
Los resultados fueron los siguientes:
Temperatura a la que cre-
ci los oocitos
Construccin
transfectada
25
0
C 37
0
C
nada 2 U.F. 2 U.F.
A 50 U.F. 100 U.F.
B 100 U.F. 100 U.F.
C 100 U.F. 200 U.F.
D 200 U.F. 200 U.F.
Nota: U.F. significa Unidades de fluorescencia
Desarrollo normal Desarrollo en mutante bcd- inyectado adelante inyectado al medio iny. atrs en salvaje
Las 4 opciones para los 3
casos incgnita
? ? ?

bcd nos
hb cd mRNA
hb
mRNA cd gen
HB
47
Nota: Suponga que entr la misma cantidad de DNA
de cada construccin en cada transfeccin.
a) i- Cree usted que la expresion de HSP23 se ve
afectada por la temperatura? Cmo? ii- Cmo com-
probara su hiptesis usando alguna tcnica de biolog-
a molecular (no hace falta describir en detalle) (nota:
usted dispone de anticuerpos anti HSP23 y tambin
conoce la secuencia de HSP23)?
Rta a) esperada: i-Al comparar los niveles de expre-
sin de la protena de fusin Hsp23-GFP en la cons-
truccin A se ve que a 25
0
C hay la mitad de protena
que a 37
0
C.
La expresin de HSP23 no parece estar afectada a
nivel transcripcional como se deduce al comparar los
niveles de GFP en la transfeccin con B, ya que la
abundancia de GFP es igual a ambas temperaturas.
Al observar los resultados de la tranfeccin con C
tambin se observa que la expresin es la mitad a 25
grados. En este caso se uso un promotor constitutivo
que no debera cambiar su transcripcin a distintas
temperaturas como se comprueba del control con la
construccin D.
De todo lo anterior se deduce que el ORF de Hsp23
hace que disminuyan los niveles de protena a la mi-
tad. Esto podra deberse a que: A- la protena Hsp23
tiene una tasa de degradacin un 50% mayor a 25
0
C.
B- Tambin podra ser que la tasa de traduccin del
mensajero sea un 50% menor a 25 grados. C- O que la
tasa de degradacin del mensajero sea un 50% mayor
a 25 grados. Las tres alternativas son correctas.
ii- Para comprobar todas estas alternativas podra
comparar los niveles de mRNA.
En el caso de la hipotesis A y B los niveles de mRNA
no cambian.
En el caso de la hipotesis C habra mas mensajero a
37
0
C.
Pueden elegir la tecnica de RT (Retrotranscripcion) y
luego Q-PCR (Real time PCR). Tambien se puede
aceptar Northern.
Posteriormente llev a cabo cruzamientos de ranas de
distintos genotipos y analiz la descendencia. A con-
tinuacin se muestran los cruzamientos.

b) Cree usted que hay algn efecto de influencia ma-
terna en la determinacin del sexo de los descendien-
tes de las F1?
Rta b) esperada: No, ya que los cruzamientos recpro-
cos dan la misma frecuencia en la descendencia. (La
hiptesis de que la presencia de la protena HSP23
provenga solo de la madre se descarta por este expe-
rimento. Ambos parentales aportan para la dosis de
protena HSP23).
c) Explique los resultados de los cruzamientos.
Proponga una hiptesis para explicar las frecuencias
de las F1.
Rta c) esperada: La dosis de la protena HSP23 podra
determinar el sexo. Si hay una dosis de 100% de
HSP23 o ms los individuos sern hembras y si hay
menos sern machos. En el caso del genotipo
HSP23
+
/HSP23
+
a 37
0
C habra 200% de HSP23 (ca-
da alelo aporta 100 unidades de HSP23) y serian
hembras. A 25
0
C 100% de HSP23 (cada alelo aporta
50 unidades de HSP23) y tambin serian hembras.
Genotipo HSP23
+
/hsp23
-
a 37
0
C hay 100% de HSP23,
y son hembras. A 25
0
C habra 50% de HSP23 y se-
rian machos.
Genotipo hsp23
-
/hsp23
-
hay 0% de HSP23 tanto a 37
como a 25
0
C y serian machos.
6) Las situaciones de estrs en etapas tempranas del
desarrollo neurolgico influyen fuertemente en la sa-
lud mental. Se desarroll un modelo experimental de
estrs consistente en separar peridicamente a las ma-
dres de las cras en edades tempranas de roedores
(estrs temprano), que tiene como consecuencia un
aumento perdurable de la secrecin de glucocorticoi-
des y otros disturbios de tipo hormonal, que estn aso-
ciados a los desrdenes cognitivos y de comporta-
miento que se observan como resultado del tratamien-
to experimental.
La metilacin del DNA es un mecanismo epigentico
de regulacin sospechado de influir en el desarrollo de
enfermedades psiquitricas. En un trabajo, se evalu
el efecto del estrs temprano en el epigenoma (sepa-
rando a las cras de sus madres por determinados per-
odos de tiempo) estudiando la metilacin comparati-
va de distintos genes que contienen regiones ricas en
CGs (islas CG) en ratones estresados y no estresados.
a) Con qu tcnica se puede hacer esta compara-
cin?
Mediante esta tcnica, Murgatroyd y col. (2009) ana-
lizaron el grado de metilacin del DNA de 4 islas CG,
una de las cuales (CGI3) coincide con un enhancer
importante para la expresin del gen de la vasopresi-
na (hormona que estimula la liberacin de glucocorti-
coides).
b) Por qu cree que incluyeron en el anlisis una isla
CG que coincide con el enhancer del gen de vasopre-
sina? qu consecuencias podra traer una alteracin
en la metilacin de esta regin?
Como resultado, se observaron diferencias en la meti-
lacin de las islas CG especficamente en algunos te-
jidos y no en otros.
c) Qu importancia puede tener esto desde el punto
de vista psiquitrico-cognitivo?
Posteriormente, se estudi la unin de la protena
MeCP2 a las 4 islas CG. Esta protena, adems de
unirse a secuencias CG metiladas, es capaz de mediar
el proceso de silenciamiento transcripcional.
d) Traera esto aparejado alguna consecuencia adi-
cional o diferente a lo que contest en b)?
48
Figura: Cuantificacin de la asociacin de MeCP2 a
las distintas regiones analizadas (1 a 7) a los 10 das y
6 semanas de edad en ratones controles (barras blan-
cas) y ratones estresados (barras negras). Los rectn-
gulos blancos de la izquierda representan los exones
del gen de vasopresina (AVT) y el rectngulo gris re-
presenta el enhancer que regula la expresin de este
gen. La cuantificacin se realiz con la tcnica de
ChIP vista en tericas pero no es esencial conocerla
para resolver este problema.
e) Todas las islas de CG mostraron idntico compor-
tamiento respecto a la unin de la protena MeCP2?
Explique.
f) En base a estos resultados el estrs temprano au-
mentara o disminuira el nivel de expresin de la va-
sopresina?
g) Considera que la metilacin ejerce un efecto tem-
poral (reversible con el tiempo) o permanente sobre la
determinacin psicolgica de los ratones? Justifique.
Rtas: a) Secuenciacin bisulftica (tratamiento pre-
vio del ADN con bisulfito para convertir las cito-
sinas no metiladas a uracilos y luego tratar de de-
terminar el nivel de metilacion por PCR utilizan-
do primers especficos o secuenciacin). Otra al-
ternativa: restriccin con enzimas sensibles e insensi-
bles a la metilacin del sitio de reconocimiento segui-
do por PCR o Southern.
b) Porque es una regin particularmente importante
para la regulacin de un gen (el de la vasopresina en
este caso), porque all se unen factores de transcrip-
cin que regulan su expresin. Una regin rica en GCs
ubicada en una regin no codificante o en secuencias
que no tienen funcionalidad reconocida tendrn una
menor probabilidad de tener roles especficos de regu-
lacin de un gen en particular.
Cambios en la afinidad por los factores de transcrip-
cin e histonas.
c) Tiene particular importancia en los tejidos en los
que se produce la hormona porque no es lo mismo un
efecto local o generalizado o en un tejido de secrecin
a sangre que en uno sin esta caracterstica. Una modi-
ficacin en el tejido que se especializa en la produc-
cin de una hormona tiene significacin funcional en
los efectos que esta tenga. En cambio, una modifica-
cin que altere la expresin de una hormona en un
tejido como el pulmn, por ejemplo, slo tendra un
efecto local en el caso que pase de estar reprimido a
expresarse
d) El silenciamiento transcripcional reprime mucho
ms fuertemente la transcripcin.
e) No, solamente la CGI3 muestra afinidad por la
protena y diferencias significativas en su unin entre
tratamiento y testigo.
f) Aumenta porque se produce desmetilacin y, con-
secuentemente, falta de silenciamiento.
g) Permanente porque las diferencias se mantienen
en el tiempo.