Higiene, Inspeccin y Control Alimentario Tcnicas analticas en carne y productos crnicos Coordinadora: M Jess Periago Castn

PRACTICA TCNICAS ANALTICAS EN CARNE Y PRODUCTOS CRNICOS

Determinacin del pH Determinacin de Triquina en carne. Mtodo de digestin Determinacin del grado de alteracin de la carne: Prueba amino-sdica Deteccin de residuos antimicrobianos en carne Determinacin cualitativa de almidn en productos crnicos Determinacin de nitritos en productos crnicos Determinacin de nitratos en productos crnicos Determinacin de fosfatos Determinacin del cloruro sdico

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DETERMINACIN DEL pH
Principio: El pH es una medida de la concentracin de protones o iones hidrgeno, es decir, de la acidez del medio. En numerosos alimentos el pH constituye un factor importante para su estabilidad ya que determina el crecimiento de grupos de microorganismos especficos. En el caso de la carne, el pH del msculo vivo est prximo a la neutralidad; cuando se produce la muerte del animal, el aporte de oxgeno a los tejidos cesa, y predominan los procesos anaerbicos (glucolisis anaerbica) que generan la formacin de cido lctico a partir de glucgeno muscular. La formacin de cido lctico provoca el descenso del pH en el msculo de modo que dicho valor es ndice del desarrollo de las modificaciones bioqumicas post-mortem. Cuando se ha completado el proceso de maduracin de la carne la misma debe tener un pH comprendido entre 5.4 y 5.6 como pH idneo de la carne, que permite una buena vida comercial, al inhibir el crecimiento de microorganismos, y le proporciona las caractersticas fsico-qumica adecuadas. Sin embargo, ante determinadas situacin el pH de la carne se ve alterado debido a que los procesos de glucolisis anaerobia no se desarrollan adecuadamente. En este caso podemos encontrar dos situaciones: Si el pH disminuye rpidamente tras la muerte del animal debido a una glucolisis acelerada el pH final queda por debajo de 5.4, y da lugar a carnes PSE (plida, blanda y exudativa). Este tipo de carne tiene una menor capacidad de retencin de agua y exuda agua al exterior que favorece la proliferacin microbiana. Este tipo de carne se da principalmente en ganado porcino. Si por el contrario el animal llega cansado al sacrificio tras realizar un ejercicio intenso en el que se ha agotado el glucgeno muscular, la glucolisis anaerobia finaliza antes de alcanzar el pH final debido a que no hay sustrato, quedando el pH muscular por encima de 5.6. En este caso se producen carnes DFD (oscura, firme y dura) que se caracterizan por tener una alta capacidad de retencin de agua y un pH elevado que favorece la proliferacin microbiana. Este tipo de carnes es tpica de la carne de lidia y de caza. Estas carnes tienen alterada sus propiedades tecnolgicas por lo que hay que tener mucho cuidado a la hora de elaborar embutidos y determinar el destino final que se le da. Sin embargo, durante el almacenamiento de la carne se produce un incremento del pH en las etapas finales cuando el crecimiento de microorganismos proteolticos produce una degradacin de las protenas y la consecuente liberacin de compuestos nitrogenados En cuanto al pH de los productos crnicos, en los embutidos crudos picados se aaden azcares como sustrato para que determinados microorganismos acidfilos produzcan un deseable descenso del pH, adecuado para la estabilidad del producto frente a otros microorganismos de carcter patgeno o alterativo.

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Material Balanza PH-metro Varilla de vidrio Soluciones de calibracin Vasos de precipitado de 50 mL Procedimiento La medida del pH se realiza sobre muestras homogeneizadas al 10% en agua destilada utilizando un pH-metro. Se pesan 5 gramos de muestra (carne) previamente picada y se homogenizan con 45 ml de agua destilada utilizando la varilla de vidrio. Se deja reposar media hora antes de efectuar la medida en el pH-metro, previamente ajustado con las soluciones de calibracin. Tambin se puede medir el PH directamente sobre el extracto de la carne utilizando un papel indicador. Interpretacin La interpretacin de los resultados se realizar en funcin de los valores reflejados en la siguiente tabla del pH en carnes normales y alteradas. Valores de pH 5.4- 5.6 <5.4 >5.6 Tipo de carne Normal PSE (Pale, soft and exhudative) DFD (Dark, Firma and Dry)

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DETERMINACIN DE TRIQUINA EN CARNE. MTODO DE DIGESTIN Instrumental y Reactivos Cuchillo o tijeras Agitadores magnticos Triturador Embudo de decantacin Embudos Vasos de precipitado, pipetas y probetas Placa de Petri Acido clorhdrico al 25% Solucin de pepsina con una concentracin de 1:10000 NF (US National Formulary) correspondiente a 1:12500 BP (British Pharmacopoea) y a 2000 FIP (Federation Internationale de Pharmacie). Recogida de muestras y cantidad que debe digerirse Para canales enteras de porcino Se toma una muestra de un peso mnimo de 1 g procedente de los pilares del diafragma, en la zona de transicin muscular y la parte tendinosa. En el caso de cerdas de cra y los verracos, deber tomarse una muestra mayor de un peso mnimo de 2 g en uno de los pilares del diafragma. Cuando no se disponga de pilar de diafragma, deber tomarse una muestra de doble tamao (2 g) de la parte del diafragma situada cerca de las costillas o del esternn, de los maseteros, la legua o los msculos abdominales. Para los trozos de carne de porcino Se toma una muestra con un peso mnimo de 5 g de msculo estriado, que contenga poca grasa y en la medida que sea posible, que est situado cerca de los huesos o de los tendones. Para muestra congeladas Se toma una muestra de un peso mnimo de 5 g de msculo estriado. Procedimiento Aadir 8 ml de cido clorhdrico a un vaso de precipitado con 1 litro de agua previamente calentada a 46-48C y agitar y aadir 5 g de pepsina. Triturar hasta 50 g de las muestras de carne obtenidas para analizar y llevar la carne picada al vaso de precipitado con el cido clorhdrico y la pepsina. Lavar el vaso en el que se ha triturado la carne para recoger todos los restos de carne adheridos al recipiente. Cubrir el vaso con una hoja de aluminio y mantener en agitacin a 46-48C,con una velocidad que favorezca la mezcla de la suspensin y la desaparicin de las partculas ms grandes de carne. Tras la agitacin verter el lquido al embudo de decantacin hacindolo pasar a travs de un tamiz, dejndolo reposar durante 30 min para favorecer la decantacin. Traspasar 40 ml del lquido de digestin a la probeta graduada y dejar reposar durante 10 min. Aspirar con cuidado 30 ml de lquido sobrenadante para retirar las capas superiores y dejar un volumen que no supere 10 ml. La muestra de 10 ml se vierte en un Placa de Petri y se enjuaga la probeta con agua adicionando tambin el volumen a la placa.

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Proceder a la observacin en el estereomicroscopio con aumento de 15 a 20 veces para evaluar la ausencia de larvas de triquina. Los lquidos de digestin se examinaran desde el momento que estn dispuestos. En ningn caso se podr posponer el examen al da siguiente.

Informacin complementaria: REGLAMENTO (CE) no 2075/2005 DE LA COMISIN de 5 de diciembre de 2005, por el que se establecen normas especficas para los controles oficiales de la presencia de triquinas en la carne.

Consulta del Reglamenteo en el siguiente enlace:

http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2005:338:0060:0082:ES:PDF

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DETERMINACIN DEL GRADO DE ALTERACIN DE LA CARNE: PRUEBA AMINO-SDICA

Fundamento Esta prueba se utiliza para determinar el grado de alteracin de las carnes, basndose en las reacciones de los productos de degradacin proteica (aminas y amoniaco) frente a determinados reactivos) Material Matraz de 100 ml Pipeta de 10 ml Varilla de vidrio Hidrxido sdico 10% cido clorhdrico puro Papel indicador de pH Procedimiento Colocar en un matraz 20 ml de solucin de hidrxido sdico y aadir 5 g de carne desmenuzada y calentar a ebullicin. Interpretacin En la carne no alterada los vapores desprendidos no deben alcalinizar el papel indicador, previamente humedecido, ni formar vapores blancos de cloruro amnico en contacto con una varilla de vidrio mojada en clorhdrico

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DETECCIN DE RESDUOS ANTIMICROBIANOS EN CARNE

Fundamento Los antibiticos se emplean en animales de granja como medicamentos o promotores del crecimiento. Tales tratamientos conllevan la acumulacin de residuos en el msculo, rin o hgado durante un cierto periodo de tiempo. PremiTest es un test de screening sensible que detecta un gran nmero de antibiticos por debajo o al nivel mximo permitido. Se basa en la inhibicin del crecimiento de Bacillus stearotermophilus, una bacteria muy sensible a muchos antibiticos y compuestos sulfurados. Un nmero standard de esporas se suspenden en un medio de agar con una seleccin especfica de nutrientes. Al ser colocadas en el bloque incubador de premiTest o en un bao Mara a 64 C, las esporas germinan. En ausencia de sustancias inhibidoras, las bacterias se multiplican y producen cidos. La produccin de cidos se manifiesta visualmente por un cambio de color de prpura a amarillo. En presencia de compuestos antimicrobianos por encima del lmite de deteccin, no habr crecimiento y ningn cambio de color ocurre, permaneciendo por tanto prpura. Procedimiento Tomar una muestra de 2 cm3 de carne magra y utilizar un prensador de ajos para extraer aproximadamente 250 l de exudado muscular. Pipetear 100 l lentamente dentro del tubo del kit con el agar y el bacilo. Dejar reposar a temperatura ambiente durante 20 min para permitir su difusin Eliminar el extracto adicionando lavando cuidadosamente el tubo del kit con agua destilada. Sellar el tubo con parafilm e incubar en el bao a 64C (comprobar la temperatura del agua con un termmetro) durante 3 horas aproximadamente. El Control negativo ha de cambiar de color y virar a amarillo en este tiempo. Si la muestra se mantiene de color morada, con el mismo color que el inicial, la carne analizada tendr antibiticos por encima de los valores admitidos por la legislacin. Si por el contrario est exenta de antibiticos virar a color amarillo tras la incubacin.

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DETERMINACIN CRNICOS

CUALITATIVA

DE

ALMIDN

EN

PRODUCTOS

Fundamento La molcula de almidn es helicoidal y est formada por -amilosa y amilopectina. La amilosa es lineal y est formada por glucosas unidas por enlaces -1,4. La amilosa se dispersa en el agua y forma complejos con el yodo y es el responsable del color azul. Material Erlenmeyer de 150 ml de capacidad. Pipeta de 10 ml de capacidad. Solucin yodo iodurada: Mezclar 1g de yodo y 2 g de ioduro potsico en agua destilada hasta 200 ml. Mantener la solucin en el frasco cuentagotas.

Procedimiento Preparacin de la muestra mediante trituracin. Introducir 2 g de la muestra triturada en un Erlenmeyer de 150 ml. Aadir 40 ml de agua destilada. Hervir durante 5 minutos. Transcurrido este tiempo enfriar exteriormente el matraz en corriente de agua fra. Con pipeta de 10 ml. Atravesar la capa grasa superior, tomando 10 ml del lquido inferior, transvasndolos a un tubo de ensayo. Aadir 5 gotas de la solucin yodo-iodurada.

Interpretacin En presencia de almidn aparecer una coloracin azul-negra.

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DETERMINACIN DE NITRITOS EN PRODUCTOS CRNICOS

Principio Al reaccionar el nitrito presente en el extracto del producto crnico con el reactivo de cido sulfanlico a-naftilamina se produce una reaccin colorimtrica con la formacin de un compuesto de color rosado, de tal modo que la intensidad de color es proporcional a la cantidad de nitrito presente en la muestra. La concentracin se determina tras medir la absorbancia mediante colorimetra o espectrofotometra y comparar con una recta patrn. Material y aparatos Matraces aforados de 100 y 1000 ml de capacidad. Probetas de 100 o 200 ml de capacidad. Bao Mara. Papel de filtro plegado de 15 dm de dimetro. Tubos de ensayo de 150x25 mm. Matraces Erlenmeyer de 300 ml de capacidad. Espectrofotmetro capaz de leer a 520 nm. Cubetas de 1 cm de paso especficas para luz visible.

Reactivos Solucin patrn de nitrito sdico: Pesar, con aproximacin de 1 mg, 1 g de nitrito sdico, disolver en agua y completar hasta 1000 ml. Tomar con la pipeta 5 ml de esta solucin e introducirla en otro matraz aforado de 1000 ml. Enrasar. Reactivo colorimtrico: Solucin I: Disolver calentando al bao Mara 6 g de cido sulfanlico en 200 ml de cido actico glacial y 400 ml de agua destilada. Aadir 200 ml de una solucin de cloruro sdico que contiene 100 g/l de cloruro sdico. Diluir con agua hasta 1000 ml. Solucin II: Disolver calentando al bao Mara 0.3 de cloruro de a naftilamina en 100 ml de agua destilada. Filtrar si es necesario y aadir 200 ml de actico glacial. Diluir hasta 1000 ml con agua destilada. Manipular con precaucin esta disolucin por su carcter cancergeno.

Ambas soluciones deben conservarse en frascos topacios (opacos) bien cerrados. El reactivo colorimtrico se obtiene mezclando volmenes iguales de ambas soluciones. Procedimiento Preparar el extracto de la manera siguiente: Pesar con precisin de 1 mg un peso de 10 g de la muestra homogenizada previamente, introducindola en un Erlenmeyer de 250 ml. Aadir 200 ml de agua destilada y adicionar consecutivamente 5 ml de cada uno de los reactivos de Carrez. Agitar durante 2 horas y dejar 10 min en reposo y filtrar.

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Valoracin de la muestra: Del extracto obtenido, tomar 25 ml y aadir 1 g aproximadamente, de carbn activo si es necesario decolorar. Filtrar hasta que el filtrado sea transparente. Del filtrado tomar una alcuota de 10 ml y ponerla en un tubo de ensayo. Si se toman menos de 10 ml, completar hasta 10 ml con agua destilada. Aadir 10 ml del reactivo colorimtrico, mezclar y dejar reposar la solucin 15 minutos a temperatura ambiente al abrigo de la luz (oscuridad). A partir de 20 min. y antes de 4 horas, medir la densidad ptica de la solucin en una cubeta de 1 cm de paso de luz a 520 nm de longitud de onda. Si la solucin coloreada problema presenta una coloracin superior a la de la solucin patrn ms concentrada, tomar una alcuota menor de 10 ml. Efectuar dos determinaciones de la misma muestra. Preparacin de la curva patrn: Tomar de la solucin patrn, alcuotas de 5, 10 y 20 ml y llevar a 100 ml con agua. El contenido de estas soluciones es respectivamente, de 0.25, 0.50 y 1ppm de nitrito sdico. Transferir 10 ml de cada una de estas soluciones a un tubo de ensayo y aadir 10 ml del reactivo colorimtrico y proceder a su valoracin colorimtrica a 520 nm, llevando absorbancias frente a concentraciones expresadas en ppm de nitrito sdico. Clculos Calcular el contenido en nitritos de la muestra expresado en ppm por medio de la frmula: Ppm NO2Na = C 2500 MxV Siendo m= peso de la muestra de la que se ha obtenido el extracto (g). V= volumen, en ml tomado del extracto decolorado C= concentracin en nitrito sdico expresada en ppm determinada sobre la curva patrn. Tomar como resultado la media de los valores obtenidos en dos determinaciones paralelas.

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DETERMINACIN DE NITRATOS EN PRODUCTOS CRNICOS

Principio Al reaccionar en medio cido y en presencia de cido sulfrico los nitratos presentes en la muestra con la brucina, se produce una coloracin amarilla-marrn, cuya intensidad es proporcional al contenido en nitratos presente, lo que permite su valoracin colorimtrica o espectrofotomtrica y su posterior cuantificacin al compararlo con una recta patrn. Material y aparatos Matraz aforado de 50 ml de capacidad. Espectrofotmetro o colormetro capaces para lecturas a 410 nm. Cubetas de 1 cm de paso especficas para luz visible.

Reactivos Solucin patrn de nitratos: Disolver 0.1629 g de nitrato potsico anhidro en agua y enrasar a 1 litro. 1 ml de esta solucin contiene 0.1 mg de nitrato. Reactivo de brucina-cido sulfanlico: Disolver 1 g de brucina y 0.1 g de cido sulfanlico en unos 70 ml de agua destilada caliente, aadir 3 ml de cido clorhdrico concentrado, dejar enfriar y enrasar a 100 ml con agua. La solucin debe guardarse en frasco color topacio. Solucin de cido sulfrico: Aadir con cuidado 500 ml de cido sulfrico concentrado a 75 ml de agua destilada. Debe conservarse hermticamente cerrado. Procedimiento. Preparar el extracto de la manera siguiente: Pesar, con precisin de 1 mg, alrededor de 10 g de la muestra homogenizada previamente, introducindola en un Erlenmeyer de 250 ml. Aadir 200 ml de agua destilada y adicionar consecutivamente 5 ml de cada uno de los reactivos de Carrez. Agitar durante 2 horas y dejar 10 min en reposo y filtrar. Valoracin de la muestra: Introducir en un matraz aforado de 50 ml de capacidad 10 ml del extracto, 1 ml de la solucin brucina-cido sulfanlico y 10 ml de la solucin de cido sulfrico muy lentamente, mezclar y dejar en reposo durante diez minutos al abrigo de la luz. Pasado este tiempo, aadir agua destilada, agitando hasta completar unos 40 ml. Y dejar reposar durante quince minutos en la oscuridad. Enfriar el matraz en un bao de hielo hasta que alcance la temperatura ambiente, preferiblemente tambin en la oscuridad. A continuacin, enrasar a 50 ml con agua, homogenizar el contenido del matraz y leer la absorbancia a 410 nm. El cero se ajusta con 20 ml de agua sometida al proceso anteriormente descrito.

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Preparacin de la curva patrn: Tomar distintas alcuotas de la solucin patrn y tratar del mismo modo que la muestra. Clculos Calcular el contenido en nitratos de la muestra expresado en ppm por medio de la frmula: Ppm NO3 = C 210 m Siendo: m= peso de la muestra de la que se ha obtenido el extracto (g). 210 el volumen de extraccin (200 ml de agua y 10 ml de las soluciones de Carrez). C= concentracin en nitrato sdico expresada en ppm determinada con la curva patrn. Tomar como resultado la media de los valores obtenidos en dos determinaciones paralelas.

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DETERMINACIN DE FOSFATOS
Principio Transformacin en cido pirofosfrico, posterior hidrlisis del mismo y medida del color producido al aadirle el reactivo molibdato vanadato. Material y Reactivos Espectrofotmetro capaz de medir a 400 nm. Mufla 550 C. Cpsulas de porcelana. Matraces aforados de 50 ml. Solucin de molibdato amnico: 20 g de molibdato amnico tetrahidrato en 200 mL de agua caliente. Solucin de metavanadato amnico: 1 g de metavanadato amnico en 300 ml de agua caliente, enfriar y aadir 140 ml de cido ntrico. Solucin de metamolibdovanadato: verter lentamente y agitando la solucin de molibdato amnico sobre la solucin de metavanadato amnico. Enrasar a 1 L con agua. Ntrico concentrado. Sulfrico concentrado. KH2PO4 (desecado previamente unas 2h a 150C), para preparar la curva patrn. Procedimiento Preparacin de la curva patrn: Disolver 4.393 g de fosfato monopotsico, previamente secado. Aadir 2 ml de cido sulfrico y diluir a 1 L. Esta solucin contiene 1 mg/ml (A). Diluir 10 ml de esta solucin en 250 ml (B) y preparar las siguientes diluciones: 1) A partir de la solucin (B) tomar: 5 ml, 7 ml, 10 ml, 15, 20...50 ml y llevarlos a 50 ml con agua. 2) A partir de la solucin (A) tomar: 3ml, 3.5 ml, 4 ml, 4.5 ml... 9 ml y llevarlos a 50 ml con H2O destilada. De esta manera tendremos: 0.2, 0.28, 0.40, 0.60, 0.80, 1.20, 1.60, 2.00, 3.00, 3.5, 4, 4.5, 5, 7.5, 8, 9 mg de P en 50 ml. A continuacin tomamos 5 ml de cada patrn y aadimos 10 ml de reactivo colorimtrico y lo llevamos a 50 ml. Medir frente a un blanco a los 30 min., a una longitud de onda de 400 nm.

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Preparacin de la muestra: Recoger las cenizas aadiendo a cada cpsula 2 ml de ntrico concentrado y 5ml de clorhdrico concentrado. Calentar en el hornillo durante 10 min y verter con mucho cuidado con un embudo en un matraz aforado de 50 ml. Aforar con agua destilada. Para medir el P, tomar 5 ml de la solucin final y proceder como en la curva patrn, aadiendo 10 ml de reactivo colorimtrica y llevando a 50ml con agua. Leer a 400 nm tras 30 min. de reposo. Clculos Los resultados se obtienen en mg de P en 50 ml. Concentracin de P (mg/100 g) = 2. V.C P Siendo V= volumen del matraz en que se recoge la muestra (ml) C= concentracin registrada en el espectrofotmetro (mg/50 ml) P= peso de la muestra que pusimos en el crisol de porcelana (g) Para calcular la concentracin de fosfatos (P2O5) en mg/100g multiplicamos por 2.29 el resultado anterior.

Abs 1,8
1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0 2 4 6 8 10 y = 0,178x - 0,004 R = 0,997

Concentracin

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DETERMINACION DEL CLORURO SODICO Principio Los cloruros reaccionan con los iones plata para formar cloruro de plata (precipitado blanco) .El punto final se obtiene al formarse cromato de plata, de color, rojo, al reaccionar el nitrato de plata con el cromato de potasio una vez agotados todos los cloruros de la muestra. Material Matraz aforado de 100 ml. Vasos de precipitado de 200 ml y 100 ml. Agitador. Disoluciones de Carrez (I y II). Pipetas 1 ml. Bureta de precision. Dicromato potsico al 10% disuelto en agua (p/v). Solucin de nitrato de plata 0.1 N.

Procedimiento Pesar 10 g de muestra homogeneizada en un vaso de precipitado de 200 ml y aadir 100 ml de agua. Agitar para homogeneizarla mezcla. A continuacin aadir 1 ml de cada una de las solucione de Carrez (I y II) y agitar durante 15 minutos, tapando la boca del vaso. Dejar reposar 10 min y filtrar sobre papel resistente, considerando un volumen final de 102 ml. Tomar 10 ml del filtrado en un vaso de precipitado y aadir 2 o 3 gotas de la solucin de dicromato potsico. La muestra se pondr de un color naranja fuerte. Valorar con nitrato de plata 0.1 N hasta el punto de viraje. Clculos e interpretacin

El porcentaje de cloruro sdico se calcula sustituyendo los ml de nitrato de plata gastados en la siguiente ecuacin:

% de Cloruros = V x 0.585 x ml AgN03 gastados M xB

Donde: V= volumen de extraccin de la muestra (102 ml). M= peso de la muestra (g). B= volumen de filtrado que se somete a valoracin (10 ml).

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VALORES A CONSIDERAR COMO REFERENCIA EN EL PRODUCTO FINAL

Parmetro

Crudos curados

Productos esterilizados -

Cocidos

Sal

3.5% -

1.6-2.2%

Almidn

2.5-8%*

Nitrito sdico o,potsico***

150 ppm* 50 a 175 ppm**

100 ppm*

150 ppm*

Se admiten niveles Nitrato sdico o potsico 150 ppm* residuales segn producto

Fosfatos

8000 ppm

7500 ppm

*En el momento de la fabricacin. ** Contenido residual que vara en funcin del producto ***Solo puede utilizarse como aditivo dentro de una mezcla de sal