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    CK (Spinreact)

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    Este documento proporciona instrucciones para realizar un ensayo cuantitativo de la creatina quinasa (CK) mediante un método cinético UV. La CK cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato entre la fosfocreatina y el ADP. Esta reacción se acopla a otras catalizadas por la hexoquinasa y la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa para formar NADPH, cuya velocidad de formación se mide fotométricamente y es proporcional a la concentración de CK. El

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    Este documento proporciona instrucciones para realizar un ensayo cuantitativo de la creatina quinasa (CK) mediante un método cinético UV. La CK cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato entre la fosfocreatina y el ADP. Esta reacción se acopla a otras catalizadas por la hexoquinasa y la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa para formar NADPH, cuya velocidad de formación se mide fotométricamente y es proporcional a la concentración de CK. El

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    CK -NAC

    Creatin quinasa
    NAC. Cintico UV
    Determinacin cuantitativa de creatin quinasa (CK) IVD
    Conservar a 2-8C
    PRINCIPIO DEL MTODO La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la fosfocreatina al ADP. Esta reaccin se acopla con otras catalizadas por la hexoquinasa (HK) y por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH): Fosfocreatina + ADP Creatina + ATP ATP + Glucosa ADP + Glucosa-6-fosfato
    G6F DH Glucosa-6-fosfato + NADP+ 6-Fosfogluconato + NADPH + H+ HK CK

    RT (mL) Muestra (L)

    25-30C 1,0 40

    37C 1,0 20

    4. Mezclar, incubar 2 minutos. 5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos. 6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (A/min). CLCULOS
    25- 30C A / min x 4127 = U/L CK 37C A / min x 8095 = U/L CK Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 mol de substrato por minuto, en condiciones estndar. La concentracin se expresa en unidades por litro (U/L).

    La velocidad de formacin de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional a la concentracin cataltica de CK en la muestra ensayada1,2. SIGNIFICADO CLNICO La creatina quinasa es una enzima intracelular, distribuida por todo el organismo humano. Su funcin fisiolgica esta asociada con la adenosina trifosfato (ATP) producida cuando el msculo se contrae. El nivel de CK en suero esta elevado en pacientes con alteraciones del msculo esqueltico y en infartos de miocardio1,5,6. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio.
    REACTIVOS R1 Tampn Imidazol pH 7,0 Glucosa Acetato de magnesio EDTA ADP AMP di-Adenosina-5- pentafosfato NADP+ Hexoquinasa (HK) Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH) N-acetilcistena Fosfato de creatina 100 mmol/L 20 mmol/L 10 mmol/L 2 mmol/L 2 mmol/L 5 mmol/L 10 mmol/L 2 mmol/L 2500 U/L 1500 U/L 20 mmol/L 30 mmol/L

    Factores de conversin de temperaturas Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por: Temperatura de medicin 25C 30C 37C 25C 1,00 0,64 0,41 Factor para convertir a 30C 1,56 1,00 0,63 37C 2,44 1,56 1,00

    CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la tcnica. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA1

    R2 Substrato

    25C 30C Hombres, hasta 80 U/L 130 U/L Mujeres, hasta 70 U/L 110 U/L Estos valores son orientativos. Es recomendable establezca sus propios valores de referencia.

    37C 195 U/L 170 U/L que cada laboratorio

    PREPARACIN Reactivo de trabajo (RT): Ref: 1001050 Disolver ( ) una tableta de R 2 en un vial de R 1. Ref: 1001051 Disolver ( ) una tableta de R 2 en 15 mL de R 1. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 5 das a 2-8C o 24 horas a temperatura ambiente (15-25C). CONSERVACIN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No usar las tabletas si aparecen fragmentadas. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partculas y turbidez. - Absorbancias del Blanco a 340 > 1,60. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 340 nm. - Bao termostatable a 25C, 30C 37 C ( 0,1C). - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio. MUESTRAS Suero o plasma1. Estabilidad: 7 das a 2-8C, protegida de la luz. La actividad de la creatin quinasa disminuye un 10% tras 1 da a 2-5C tras 1 hora a 15-25C. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz Temperatura constante . . . . . . . . . . .25C / 30C / 37C 2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada o aire. 3. Pipetear en una cubeta:

    CARACTERSTICAS DEL MTODO Rango de medida: Desde el lmite de deteccin 1,35 U/L hasta el lmite de linealidad 1000 U/L. Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir 1/10 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10. Precisin: Intraserie (n= 20) 166 450 2,36 3,72 1,42 0,82 Interserie (n= 20) 165 446 2,26 5,17 1,37 1,16

    Media (U/L) SD CV (%)

    Sensibilidad analtica: 1 U/L = 0,0001 A/min. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado. INTERFERENCIAS No se ha observado interferencia de la bilirrubina hasta 20 mg/dL y hemoglobina hasta 10 g/L1,2. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinacin de la Creatina quinasa3,4. NOTAS SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este reactivo en distintos analizadores. BIBLIOGRAFA
    1. 2. 3. 4. 5. 6. Abbot B et al. Creatinine kinase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984: 1112-116. Gerhardt W et al. Creatine kinase B-Subunit activity in serum after immunohinhibition of M-Subunit activity. Clin Chem 1979;(25/7): 1274-1280. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

    PRESENTACIN Ref:1001050 Ref:1001051

    Cont.

    20 x 2,5 mL 10 x 15 mL

    BEDTT02

    Ed.2004

    SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]

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