EFECTO DE TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI (CEPA T-22) SOBRE CULTIVOS HORTCOLAS.

GALEANO, M., F. MENDEZ y A. URBANEJA Departamento I+D. Koppert Biological Systems. Finca Labradorcico del Medio, 65. Apartado Correos 286. 30880 Aguilas (Murcia).

RESUMEN T. harzianum es un hongo que produce un mayor vigor a las plantas tratadas con ste a la vez que le proporciona al cultivo una proteccin frente a patgenos del suelo. En el presente trabajo, se ha estudiado el efecto la aplicacin de T. harzianum sobre plantas de semillero de distintos cultivos hortcolas en Almera y Murcia. Las plantas a las que se aplic T. harzianum en la siembra mostraron una fraccin radicular y area mayor con respecto a las plantas no tratadas, pudiendo hacer frente a condiciones de estrs con mayor xito que las no tratadas que mostraron un crecimiento menor.

INTRODUCCIN

Trichoderma harzianum Rifai, 1969, se halla dentro de los hongos deuteromicetos o tambin llamados hongos imperfectos donde se incluyen un gran nmero de especies de reproduccin nicamente asexual, ya sea porque no tienen o porque no se conoce su reproduccin sexual. T. harzianum se caracteriza por sus conidiforos terminados en filidas, esporas lisas, hialinas, con un solo ncleo, verdosas, subglobosas u ovoides y colonias de crecimiento rpido (7-9 cm) (GAMS & BISSETT, 1998). Los conidiforos estn muy ramificados teniendo cada ramificacin forma de ngulo recto con la pequea rama que la soporta. Cada conjunto de ramificaciones tiene forma piramidal semejante a un pequeo arbusto, morfologa caracterstica y tpica de este hongo (Fig. 1). Todos los mecanismos de accin de T. harzianum se basan en el principal papel como promotor de crecimiento vegetal que tiene, el cual se manifiesta desde las primeras fases de la plntula, y que le confiere mayores ventajas a la hora del trasplante. T. harzianum se asocia a las races de la planta proporcionndole un mayor vigor y crecimiento (Fig. 2) (CHANG et al., 1986). Este hongo crece a medida que lo hace el sistema radicular del vegetal con el que se encuentra asociado, alimentndose de los productos de desecho y de exudados que excreta la planta. sta a su vez se beneficia al poder colonizar mayor cantidad de suelo gracias al sistema de hifas del hongo, aumentando considerablemente de esta manera el crecimiento de la planta. Por ello, se produce un aumento de la captacin de nutrientes y de agua en las races, ya que explora mayor volumen de suelo, y a su vez, incrementa la solubilizacin de nutrientes orgnicos como el fsforo. Este mayor vigor a su vez le proporciona a la planta una mayor tolerancia frente a diferentes tipos de estrs tanto abiticos (causado por fertilizacin,

salinidad, riegos y condiciones climticas no-ptimas como sequa, temperaturas altas, etc) como biticos (ataques de patgenos). T. harzianum en sentido estricto, comprende la mayora de las cepas utilizadas en el control biolgico de hongos fito-patgenos (GAMS & BISSETT, 1998), siendo la cepa T-22 una de las ms efectivas de las que se producen (HARMAN et al., 1996), dada su compatibilidad con gran cantidad de productos fungicidas e insecticidas, y por su adaptacin a las diferentes condiciones ambientales. T. harzianum como hongo antagonista de muchos hongos patgenos puede realizar un control biolgico sobre agentes patgenos de vegetales y dicho control se puede resumir principalmente en tres mecanismos de accin (no siendo los nicos): -micoparasitismo: un tipo de antagonismo donde el patgeno es empleado como patgeno por el hongo, parasitando un amplio espectro de especies de hongos como Rhizoctonia, Sclerotium, Sclerotinia, Helminthosporium, Fusarium, Armillaria, Colletotrichum, Verticillium, Venturia, Endothia, Pythium, Phytophthora, Rhizopus, Diaporthe, Fusicladium (AHMED et al., 1999, 2000; HARMAN et al., 1996; LEWIS et al., 1995; CALVET et al., 1993). -antibiosis: inhibicin del desarrollo o muerte del patgeno por un producto metabolizado por otro, incluyendo tanto antibiticos como enzimas lticas extracelulares (TRANE et al., 1997; BENITEZ, et al., 1998; SCHIRMBOCK et al., 1994). -competencia: por el espacio en la rizosfera de la planta y por los recursos nutritivos, propiedad que le proporciona la habilidad de desplazar al patgeno, suprimindolo o no expresndose la enfermedad. El objetivo del presente trabajo ha sido evaluar el efecto de la cepa T-22 de T. harzianum, componente del preparado comercial TRIANUM, sobre diferentes cultivos hortcolas para comprobar su efecto en los primeros estados de la planta. Para ello se analiz la altura, peso seco y fresco de la raz y de la parte area, de las plntulas antes del trasplante en tomate, pimiento y pepino.

MATERIAL Y METODOS

Agente biolgico: Trichoderma harzianum Rifai. Para el presente ensayo se utiliz TRIANUM (Koppert B.S.), un preparado comercial cuya materia activa es T. harzianum cepa T-22. sta es hbrida de otras, las cuales resultan ser muy eficaces en sus rangos de temperaturas y pH, y resistentes a distintos patgenos. La T-22 puede vivir en cualquier tipo de suelo, y soporta un elevado rango de temperaturas (10-34 C) y de pH (4-8,5). En los ensayos se han utilizado los dos formulados disponibles de TRIANUM (ambos con 1,15 % p/p polvo de esporas):

-TRIANUM-G contiene 1,5x108 CFU (unidades formadoras de colonias) por gramo de materia seca. Es un granulado que se puede mezclar con el sustrato. -TRIANUM-P contiene 6x108 CFU (unidades formadoras de colonias) por gramo de materia seca. Es un polvo mojable que se usa con el agua de riego.

Cultivos hortcolas.Los ensayos se han llevado a cabo en los siguientes cultivos: Tomate (Lycopersicum esculentum L.), pepino (Cucumis sativus Mill.) y pimiento (Capsicum annumm L.). En la tabla 1 se resumen las caractersticas y peculiaridades de A los distintos ensayos . Metodologa y diseo experimental.En el diseo experimental se sigui un protocolo comn para todos los ensayos, en el que se diferenciaban plantas tratadas con T. harzianum (Trichoderma) y plantas no tratadas (Control). Las dosis empleadas fueron las siguientes: -TRIANUM G (para mezclar con el sustrato): 0,75 Kg / m3. -TRIANUM P (con el agua de riego): 3g / m2 (2,5-5 l agua). TRIANUM-G era mezclado con el sustrato en la mayora de los ensayos, y cuando esto no era posible por el manejo del semillero la aplicacin se realizaba con TRIANUM-P a la salida de las primeras hojas verdaderas de las plntulas (Tabla 1). Las aplicaciones de T. harzianum no interfirieron en las prcticas habituales de los semilleros por ser un producto compatible con la mayor parte de los tratamientos qumicos. Se procesaron al menos 25 plantas por tratamiento a partir de un mnimo de 5 bandejas por tratamiento, de las cuales se analizaron los parmetros vegetativos de las plntulas: peso fresco y seco de la raz y de la parte area, y altura de las mismas, sobre el desarrollo inicial de los distintos cultivos hortcolas de la zona de Almera y Murcia.

Anlisis de los datos.Para conocer la existencia de diferencias estadsticas entre los distintos parmetros estudiados, se aplic un modelo de anlisis de la varianza (ANOVA, P<0,05) de un solo factor (SPSS, 1999).

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

La altura de las plantas tratadas con T. harzianum en todos los ensayos fue mayor y con diferencias significativas entre tratamientos (Fig. 3). Comparando el tratamiento con T. harzianum con el testigo, este aumento represent un 36% ms en tomate, un 17% en pimiento y un 6% en pepino. La parte area de las plantas tratadas segn el parmetro de peso fresco areo fue mayor en todos los cultivos ensayados (Fig. 4 A), mostrando diferencias significativas en los dos de tomate, en pepino y en el pimiento spiro . Por otra parte, teniendo en cuenta el peso seco de dicha fraccin, las diferencias se repitieron en todos los ensayos mencionados salvo en pepino (Fig. 4 B) . En la figura 5A, se observa el peso fresco de la parte radicular de la planta. El sistema radicular fue mayor con diferencias significativas, a excepcin del tomate injertado (tomate 2). Estas diferencias no se corroboraron en cuanto al peso radicular seco a excepcin del tomate 1 (Fig. 5 B). La aplicacin de T. harzianum en los primeros estados de la planta para los cultivos hortcolas ha mostrado un aumento general del sistema radicular y de la parte area proporcionndole un mayor vigor y proteccin a las mismas a la hora del trasplante. El efecto de este hongo en los primeros estados del cultivo es pues claramente positivo, como muestran los resultados, ya que a la hora del trasplante la planta se haya ms protegida ante los estados de estrs que sufre. Los ensayos presentados en este trabajo forman parte de un estudio de T. harzianum desde el inicio del cultivo hasta el final del mismo, por lo que se est haciendo un seguimiento en campo de dichas partidas para comprobar el efecto de control biolgico que T. harzianum realiza ante los patgenos del suelo debido a su poder antagonista y micoparsito ya comentado.

AGRADECIMIENTOS Los autores agradecen a los tcnicos responsables de los semilleros D. Juan Ignacio Tijeras de los Semilleros Crisel y a D. Manuel Cremades de Semilleros El Plantel, ambos sitos en La Mojonera (Almera), y a D. Pedro Crdoba de Adesur en guilas (Murcia), por permitir realizar los diferentes ensayos en sus semilleros y con su material vegetal, as como a los responsables tcnicos de Koppert Biological Systems de Almera y Murcia por su valiosa colaboracin, y a los compaeros del departamento I+D, D. Javier Calvo y D Ana Gallego.

BIBLIOGRAFA AHMED, S. A., PEREZ-SANCHEZ, C. EGEA, C. & CANDELA, M. E. 1999. Evaluation of Trichoderma harzianum for controlling root rot caused by to Phytophthora capsici in pepper plants. Plant Pathol., 48: 58-65. 4

AHMED, S. A., PEREZ-SANCHEZ, C. & CANDELA, M. E. 2000. Evaluation of induction of systematic resistance in pepper plants (Casicum annuum) to Phytophthora capsici using Trichoderma harzianum and its relation with capsidiol accumulation. Eur. J. Plant Pathol., 106: 817-824. BENITEZ, T., LIMON, J. DELGADO-JARANA, J. & REY, M. (1998). Glucanolytic and other enzimes and their control. In: Trichoderma and Gliocladium. Vol. 2. 101127 pp. Eds. Taylor & Francis. London. CALVET, C., PERA, J. & BAREA, J. M. 1993. Growth response of marigold (Tagetes erecta L.) to inoculum with Glomus mosseae, Trichoderma aureoviridae and Pythium ultimum in a peat-perlite mixture. Plant Soil, 148: 1-6. CHANG, Y. C. , BAKER, R. , KLEIFELD, O. & CHET, I. 1986. Increased growth of plants in the presence of the biological control agent Trichoderma harzianum. Plant Dis., 70: 145-148. GAMS, W & BISSETT, J. (1998). Morphology and identification of Trichoderma. In: Trichoderma and Gliocladium. Vol. 1. 3-34 pp. Eds. Taylor & Francis. London. HARMAN, G. E. 2000. Myths and dogmas of biocontrol. Changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T-22. Plant Dis., 84(4):377-393. HARMAN, G. E., LATORRE, B., AGOSIN, E., SAN MARTN, R., RIEGEL, D. G., NIELSEN, P. A., TRONSMO, A. & PEARSON, R. C. 1996. Biological and integrated control of Botrytis bunch rot of grape using Trichoderma spp. Biol. Control, 7: 259266. LEWIS, J. A., FRAVEL, D. R. & LUMSDEN, R. D. (1995). Application of biocontrol fungi in granular formulation of pregelatinized starch-flour to control damping-off diseases caused by Rhizoctonia solani. Biol. Control, 5: 397-404. SCHIRMBOCK, M., LORITO, M., WANG, Y. L., HAYES, C. K., ARTISAN-ATAC, I., SCALA, F. HARMAN, G. E. & KUBICEK, C. P. (1994). Pararell formation and synergism of hydrolytic enzymes and peptaibol antibiotics, molecular mechanisms involved in the antagonistic action of Trichoderma harzianum against phytopathogenic fungi. Appl. Environ. Microbiol., 60 : 4364-4370. SPSS, 1999. SPSS Manual del usuario, versin 10.0 para Windows 98. SPSS, Chicago, IL. TRANE, C. TRONSMO, A. & JENSEN, D. F. (1997). Endo-1, 3- beta gluconase and cellulase from Trichoderma harzianum purification and partial characterization, induction of biological activity against plant pathogenic Pythium spp. Eur. J. Plant Pathol, 103: 331-344.

Tabla 1.- Caractersticas agronmicas de los ensayos de Trichoderma harzianum T-22 sobre los diferentes cultivos en semillero. Fecha Siembra 10/07/02 8/7/02 (He-man) Tipo sustrato Turba+ vermiculita Turba + vermiculita Turba + perlita Turba Aplicaciones y fecha TRIANUM-G Fecha muestreo 14/08/02

Cultivo Tomate 1 Tomate 2 Pepino

Variedad

Localizacin

Daniela Boludo injertado en He-man Neptuno

Almera

guilas (Murcia) La Mojonera (Almera) La Mojonera (Almera) guilas (Murcia)

TRIANUM-G

26/08/02

22/08/02

TRIANUM-G TRIANUM-P TRIANUM-P

15/09/02

Pimiento 1 Pimiento 2

Beret

27/7/02

3/09/02

Spiro

31/07/02

Turba

TRIANUM-G

9/09/02

Figura 1.- Microfotografas de Trichoderma harzianum. A) y B) Morfologa de los conidiforos y observacin de las esporas. C) Conidios.

Figura 2.- Efecto de Trichoderma harzianum T22 sobre tomate. A) Injerto de tomate Boludo sobre He-man , tratada (derecha) y no tratada (izquierda). D) Plantas de tomate Daniela tratada (izquierda) y no tratada (derecha).

Figura 3.- Altura de las plantas en los distintos ensayos (Media ES). Entre barras dentro de cada tratamiento, letras distintas indican diferencias significativas (ANOVA, P< 0,05).

Figura 4.- Peso areo (A) fresco y (B) seco de las plantas en los distintos ensayos (Media ES). Entre barras dentro de cada tratamiento, letras distintas indican diferencias significativas (ANOVA, P< 0,05).

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Figura 5.- Peso radicular (A) fresco y (B) seco de las plantas en los distintos ensayo (Media ES). Entre barras dentro de cada tratamiento, letras distintas indican diferencias significativas (ANOVA, P< 0,05).

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