Practicas Bromatologia

prcticas de:
INICIACIN A LA BROMATOLOGA
protocolos de anlisis qumico (anlisis qumico de alimentos)
recopilacin, adaptacin y puesta a punto: Francesc Fernndez Borrs profesor de Anlisis i Qumica Industrial
Iniciacin a la Bromatologa / anlisis qumico de alimentos /protocolos de anlisis
prcticas de: INICIACIN A LA BROMATOLOGA

(anlisis qumico de alimentos)
recopilacin, adaptacin puesta a punto: Francesc Fernndez Borrs profesor de Anlisis y Qumica Industrial
NDICE
cdigo Pg.
Prlogo del autor Tratamiento previo de las muestras Preparacin de disoluciones reactivas Substancias voltiles a 100C Humedad por el mtodo de disolventes Protena bruta Casena en la leche en polvo Grasa bruta en muestras slidas Determinacin de cenizas Fibra bruta pH del agua Residuo seco en el agua Dureza del agua Alcalinidad del agua Dixido de carbono libre en el agua Amonio en el agua Determinacin del calcio Haluros en agua Haluros no voltiles en alimentos slidos Identificacin de plomo Identificacin de mercurio de arsnico Fsforo por espectrofotometra Hierro en agua por espectrofotometra Hierro en alimentos (espectrofotometra) Sodio por fotometra de llama Humedad por centrifugacin (grasas) Humedad por desecacin (grasas) Punto de fusin en grasas Acidez en grasas Residuo slido en grasas ndice de saponificacin ndice de yodo en grasas ndice de perxidos de una grasa Insaponificable de una grasa cidos oxidados en grasas Identificacin de almidn en crnicos Azcares reductores Azcares totales Determinacin espectrofotomtrica de almidn Anlisis organolptico del vino Ttulo alcohomtrico del vino
-1.1 3.1 4.1 4.2 5.1 5.2 6.1 7.1 7.2 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 9.1 9.2 9.3 10.1 10.2 10.3 11.1 11.2 11.3 12.1 13.1 13.2 13.3 13.4 13.5 13.6 13.7 13.8 13.9 13.10 15.1 15.2 15.3 15.4 16.1 16.2 4 5 7 9 11 13 17 19 22 24 27 29 31 33 36 38 40 43 45 48 51 52 54 58 61 64 67 68 70 72 74 76 78 80 82 84 87 88 92 94 97 99
cdigo Pg.
Acidez voltil del vino Acidez total del vino Extracto seco total del vino Acidez total del vinagre Grasa en leche Fenolftalena en la leche en polvo Lactosa en la leche Carotenos y xantofilas en el pimentn Harina de pumas (microscopia) cidos grasos por C.G. Aminocidos por C.G. Apndice I: Boletn de anlisis Apndice II: Propuesta de trabajos Bibliografa
16.3 16.4 16.5 16.6 17.1 17.2 17.3 19.1 20.1 22.1 22.2 ---102 105 107 109 111 114 115 117 121 122 126 132 134 135
PRLOGO DEL AUTOR

De entrada, pido disculpas por adjudicarme el ttulo de autor, pues no soy el creador de los mtodos descritos; nicamente me he limitado a hacer una recopilacin de mtodos clsicos de anlisis y solo en algunos casos he hecho alguna pequea adaptacin o modificacin. Los protocolos de anlisis descritos corresponden a las prcticas de los cursos de anlisis qumico de alimentos subvencionados por el CECOT y el Fondo Social Europeo, que se realizaron en el IPFP de Terrassa. Dichas prcticas estn orientadas a: - Seleccin de prcticas para ciclos profesionales de Grado Medio y Superior de Qumica. - Seleccin de prcticas para estudiantes universitarios de Qumica Analtica, Veterinaria, Farmacia o Agricultura, y estudios de postgrado o masteres de estas especialidades. - Consulta para profesionales de estas especialidades que trabajen en el campo del anlisis qumico de alimentos. Espero que esta obra les sea de utilidad. Un cordial saludo: El Autor
Iniciacin a la bromatologa (prcticas)
Protocolos de anlisis
Ref: 1.1
TRATAMIENTO PREVIO DE LAS MUESTRAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS La prctica tiene por objeto el tratamiento previo de las muestras con el objeto de dejarlas en condiciones que faciliten su ulterior anlisis. Las muestras a analizar deben estar homogeneizadas, a fin de que sean representativas del conjunto de la poblacin a la que pertenecen. Si se trata de muestras slidas debern estar reducidas a estado pulverulento o de harina (molturadas), por tal de facilitar su ataque por los diversos agentes qumicos. La molturacin implica una mejor homogeneizacin (representatividad) de la muestra, especialmente en aquellos casos, relativamente frecuentes, en que se precisa trabajar con poca cantidad de sustancia problema. En muestras lquidas suele ser suficiente con una buena agitacin mecnica. En esta prctica se describe el tratamiento previo para una muestra slida, obviando el paso inicial de la toma de la misma. El procedimiento seguido es apropiado para preparados alimentarios granulados y en polvo grosero, piensos, cereales en grano, legumbres secas, turts, harinas de carne y de pescado y en general para todas aquellas substancias de caractersticas similares a las de los productos mencionados.
MATERIAL Trapo de algodn. Esptula grande. Estufa de desecacin Hoja grande de papel (aproximadamente DIN A2). Molinillo de laboratorio (aunque puede servir un molinillo domstico de caf). Pincel.
REACTIVOS Agua corriente. Agua destilada. Alcohol etlico PA.
METODOLOGA 1.- Extender la muestra en un montn sobre la hoja de papel. 2.- Con la esptula, dividir el montn en cuatro cuadrantes aproximadamente iguales. 3.- Construir otro montn con dos cuadrantes opuestos, rechazando los otros dos.
4.- Proceder sucesivamente del modo mencionado hasta obtener un montn de un tamao apropiado para ser contenido en los frascos de guardar las muestras (tener en cuenta que los frascos deben ocuparse hasta sus 2/3 de capacidad) y guardar en dichos frascos. 5.- Tomar una cantidad apropiada para el molino y molturar hasta reducir a harina, agitando simultneamente el molino para evitar centrifugaciones selectivas y apelmazamientos del material. Guardar la muestra molturada en los frascos para muestra molturada. 6 .- Antes y despus de la molturacin, limpiar el interior del molinillo con el pincel y, si es preciso, con un trapo limpio humedecido con agua y alcohol. El pincel debe limpiarse posteriormente con agua y alcohol y secarse en estufa.
CLCUL0S No es preciso ningn tipo de clculo en la realizacin de esta prctica.
OBSERVACIONES La molturacin de aquellas muestras que precisen de un tiempo prolongado de uso del molino, se efectuar en varias etapas, intercalando perodos de descanso, a fin de evitar recalentamientos. Las muestras con alto contenido graso deben molturarse en sucesivos y breves perodos, con agitacin manual continuada del molino, a fin de evitar la formacin de grumos. Las muestras con alto contenido de humedad suelen presentar dificultades en su molturacin; en este caso procederemos previamente a una desecacin de la muestra (es preciso determinar simultneamente su contenido de humedad). Si el secado de las muestras con alto contenido de humedad presentase algn inconveniente (como podran ser la variacin o alteracin de sus componentes, etc...), se podra proceder a la licuacin de la muestra (en muchos casos puede servir una licuadora domstica convencional); en este caso debe prestarse especial atencin en el proceso de trasvase de la licuadora al frasco de muestra para que no haya prdida de representatividad durante el proceso.
Cuestionario 1.1.- Tratamiento previo de las muestras 1.- Qu precauciones deberemos considerar en el uso de un molinillo corriente de caf para molturar las muestras?. 2.- Describir detalladamente la metodologa a seguir para la preparacin previa de las siguientes muestras: trigo chicharrones pastillas de caldo concentrado lechuga (para anlisis que incluye determinacin de substancias que se descomponen con el calor) 3.- Describir la preparacin de la siguiente muestra: Muestra: Caramelo relleno de composicin muy heterognea, de unos 10 gramos de peso (para determinacin de azcares reductores).
Ref: 3.1
PREPARACIN DE DISOLUCIONES REACTIVAS

OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se trata de establecer un procedimiento general para preparar disoluciones reactivas.
MATERIAL Agitadores magnticos. Balanza analtica. Balanza granataria. Desecador. Embudos. Estufa de desecacin. Filtros de papel, rpidos. Frascos de polietileno de 1 litro, con tapn roscado. Matraces aforados de diferentes volmenes. Papel de filtro. Pesasubstancias. Pipetas aforadas de diferentes volmenes. Placas calefactoras. Varillas. Vasos de precipitados de diferentes volmenes.
REACTIVOS (Adems de las propias substancias reactivas) cido clorhdrico concentrado PA. Agua destilada. Amonaco concentrado PA.
METODOLOGA La metodologa adecuada vara segn las caractersticas de cada disolucin reactiva a preparar.
CLCULOS Partiremos del criterio de tener los datos de la concentracin de la disolucin que pretendemos preparar en gramos/litro. Para pasar de normalidad a gramos/litro aplicamos la expresin:
en que c es la concentracin en gramos/litro, N la normalidad y pe el peso equivalente. La cantidad que debe pesarse para preparar un volumen v de disolucin de concentracin c, es:
Si la cantidad resultara demasiado pequea, podemos pesar una cantidad mayor y rediluir posteriormente. Para preparar una disolucin diluida a partir de otra ms concentrada, el volumen que se debe tomar de disolucin concentrada es:
donde Vc es la cantidad que debe tomarse de disolucin concentrada, Vd el volumen de disolucin diluida a preparar, Cd su concentracin (en gramos/litro, molaridad o normalidad) i Cc la concentracin de la disolucin concentrada (en gramos/litro, molaridad o normalidad).
OBSERVACIONES Deben seguirse siempre las precauciones de uso inherentes a cada producto.
Cuestionario 3.1.- Preparacin de disoluciones reactivas 1.- Definir los siguientes conceptos: a) reactivo pa b) reactivo sv c) material volumtrico clase A d) material volumtrico clase B e) volumen por contenido f) volumen por vertido g) reactivo pr h) solucin extempornea 2.- Precauciones en la preparacin y conservacin de reactivos de las siguientes caractersticas: a) disoluciones de reactivos muy corrosivos b) disoluciones de reactivos reductores c) disoluciones de reactivos oxidantes d) disoluciones muy inestables
Ref: 4.1
SUBSTNCIAS VOLTILES A 105 C
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se trata de una gravimetra por volatilizacin. En la mayora de las muestras, casi toda la materia voltil es agua, por lo cual al mtodo tambin se le denomina "determinacin de humedad por desecacin en estufa". El mtodo es aplicable a todas las substancias que no presentes caramelizacin o cualquier tipo de descomposicin o volatilizacin a la temperatura de 105 C .
MATERIAL Balanza analtica. Estufa de desecacin. Desecador. Pesasubstancias.
REACTIVOS Agente desecante (gel de slice u otros).
METODOLOGA 1.- Pesar una cantidad de sustancia de entre 5 y 20 gramos en un pesasubstancias tarado y completamente seco (guardado en desecador). 2.- Pasar el pesasubstancias con la muestra a la estufa con una temperatura no inferior a 105C y no superior a 110C durante 2 horas. 3.- Sacar el pesasubstancias con la muestra de la estufa y pasar a un desecador hasta alcanzar la temperatura ambiente. 4.- Pesar. 5.- Repetir sucesivamente desde el punto 2, pero con tiempo de permanencia en la estufa de hora, hasta peso constante.
CLCULOS El resultado se expresa como "humedad y materias voltiles a 105C":
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en donde:
m1 = peso inicial de pesasubstancias + muestra. m2 = peso de pesasubstancias + muestra al alcanzar constancia de peso. m0 = peso del pesasubstancias. % = % de humedad y materias voltiles a 105C
OBSERVACIONES Para aquellas muestras que puedan presentar proyecciones de material, con la consecuente prdida, bebern mezclrseles una cantidad de arena lavada y tarada.
Cuestionario 4.1.- Substancias voltiles a 105C 1.- Confeccionar una lista de agentes desecantes, indicando sus campos de aplicacin y sus ventajas e inconvenientes. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en el apartado "clculos" . 3.- Explicar, elaborando el protocolo de anlisis, el procedimiento a seguir para muestras que puedan presentar proyeccin de material a 105C (y sin utilizar arena). 4.- Son las siguientes substancias aptas para su determinacin de humedad y materias voltiles a 105C? (indicar "apta", "con arena" y "no apta"): a) arroz b) manteca de cerdo c) azcar d) mezcla de aminocidos e) pienso para gallinas 5.- Sugerir un mtodo alternativo para las substancias del apartado anterior clasificadas como "no apta". 6.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 4.2
HUMEDAD POR EL MTODO DE LOS DISOLVENTES
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El mtodo determina la cantidad total de agua no combinada; est especialmente indicado para grasas i substancias semilquidas. El agua de la muestra se destila mediante arrastre con xilol y se mide su volumen mediante su recogida sobre en un tubo graduado.
MATERIAL Aparato especial que consta de un tubo cilndrico, graduado en ml y provisto de llave de purga en su extremo inferior, con boca esmerilada en la parte superior que conecta con un refrigerante de reflujo y un tubo entre el cuello y el cilindro graduado que comunica con un tubo paralelo a este (ver esquema). Balanza analtica. Manta calefactora. Matraz de cuello corto, esmerilado, de 500 ml. Refrigerante de reflujo.
REACTIVOS Piedra pmez. Xileno.
METODOLOGA Asegurar la total limpieza del montaje, en especial del interior del tubo graduado. Si es preciso, proceder a un prelavado con mezcla crmica antes del lavado con agua destilada y acetona. Secar. 1.- Pesar alrededor de 25 gramos de muestra, en el matraz. 2.- Aadir de 150 a 200 ml de xileno y unos trozos de porcelana porosa o de piedra pmez. 3.- Montar el utillaje y proceder a destilar hasta que el xileno separado se vea "limpio" y no arrastre ms agua. 4.- Dejar reposar hasta perfecta separacin de les capas de xileno (superior) y agua (inferior). Leer el volumen de agua.
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CLCULOS Calcular el contenido de agua expresado en porcentaje:
en donde V es el volumen recogido de agua en cc, ledo en el tubo graduado, y m el peso de la muestra en gramos.
OBSERVACIONES Es preciso tener en consideracin que no deben quedar gotas de agua adheridas a la pared del tubo, ni gotas de disolvente en la fase acuosa.
ESQUEMA DEL MONTAJE:
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Cuestionario 4.2.- Humedad por el mtodo de los disolventes 1.- Relacionar 10 substancias con las que resulte especialmente indicado el procedimiento de esta prctica. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en el apartado de "clculos". 3.- Cual es la funcin de la piedra pmez (o de la porcelana porosa)? 4.- Por qu escogemos xileno como disolvente? 5.- Qu otros disolventes podramos utilizar, adems del xileno? 6.- Porqu en esta prctica, el resultad se expresa como "humedad" y en la anterior como "humedad y materias voltiles"? 7.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 5.1
PROTENA BRUTA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El mtodo que aqu se describe es el llamado mtodo de Kjeldhal. Entendemos por protena bruta el nitrgeno total de la muestra expresado como protena El mtodo no es apto para aquellas substancias que presentan enlaces N-N, NO i NO2. Se somete la muestra a un ataque con cido sulfrico concentrado, durante el cual el nitrgeno pasa a forma amoniacal (como sulfato amnico); el amonio del sulfato amnico pasa a amonaco libre por tratamiento con hidrxido de sodio: (NH4)2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2NH3 + 2H2O y el amonaco as formado se separa mediante destilacin y se recoge sobre una cantidad exactamente conocida de disolucin cida titulada. El amonaco formado se determina mediante valoracin del exceso de cido titulado.
MATERIAL Aparato semimicro Kjeldhal segn esquema adjunto. Balanza analtica. Batera digestora de mantas elctricas. Bureta de 25 ml. Campana-vitrina extractora. Frasco lavador. Matraz erlenmeyer de 100 ml o de 250 ml. Matraz Kjeldhal forma pera de cuello largo de 100 ml. Pipeta de 25 ml Pipeta de 5 ml. Probeta de 25 ml.
REACTIVOS cido clorhdrico 0'1 N, titulado. cido sulfrico concentrado. Agua destilada. Disolucin de hidrxido de sodio 50% p/v. Indicador mixto Shiro-Thasiro. Mezcla cataltica . Papel de fumar.
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Preparacin de reactivos: INDICADOR MIXTO.- Mezclar dos partes de solucin de rojo de metilo al 0'2 % con una parte de azul de metilo al 0'2 %, y dos de alcohol etlico del 96. Guardar en frasco topacio. Viraje: rojo violceo a verde-gris. SOLUCIN DE SOSA AL 50 % P/V .- Disolver 500 gramos de NaOH i 50 gramos de tiosulfato de sodio en agua hasta 1 litro, agitando continuamente y enfriando simultneamente el recipiente en bao de agua fra, con cuidado de no salpicar. MEZCLA CATALTICA.- Mezclar y homogeneizar 150 gramos de sulfato de potasio pa, 4 gramos de xido cprico pa y 12 gramos de sulfato cprico cristalizado pa. Molturar hasta reducir a polvo fino y homogeneizar de nuevo.
METODOLOGA 1.- Pesar, en papel de fumar, al cual se le habr eliminado la parte engomada, una cantidad de muestra molturada y homogeneizada que contenga entre 100 y 120 miligramos de protena bruta. 2.- Pasar la muestra, envuelta en el papel de fumar, al interior del matraz Kjeldhal. 3.- Aadir alrededor de 2'5 gramos de mezcla cataltica y 6 ml de cido sulfrico concentrado . Tapar el matraz con un embudo pequeo. 4.- Calentar la muestra con la batera calefactora en vitrina-campana y poner en marcha el extractor; el calentamiento ser suave durante los 5 primeros minutos y fuerte a continuacin. Continuar el calentamiento hasta que el lquido sea de color verde-azul claro y totalmente transparente. El tiempo de digestin vara segn el tipo de muestra (alrededor de de hora). 5.- Enfriar, y cuando el lquido est fro, aadir entre 5 y 10 ml de agua destilada, lavando el cuello del matraz. 6.- Pasar el lquido al destilador, lavando el matraz tres o cuatro veces con pequeas cantidades de agua destilada. 7.- Con todas las llaves del aparato cerradas, aadir de 20 a 25 ml de disolucin de sosa; pasar al cuerpo del destilador dejando una pequea cantidad en el embudo que actuar como cierre hidrulico. 8.- Lavar el embudo con agua destilada, dejando pasar todo el lquido de lavado, excepto una pequea porcin que acta de cierre hidrulico. 9.- Destilar y recoger el amonaco en un erlenmeyer de 100 ml, sobre 25 ml de HCl 0'1 N titulado, con unas gotas del indicador mixto. 10.- Despus de recoger unos 40-50 ml de destilado, comprobar que ya no destila amonaco, mediante una tira de papel indicador. 11.- Valorar el exceso de cido titulado con disolucin titulada de NaOH 0'1 N. 12.- Peridicamente, efectuar un blanco con papel de fumar del tipo empleado en las determinaciones. El volumen correspondiente de cido titulado empleado se considera consumido como blanco. Es preciso que el papel de fumar sea siempre de l misma marca y tipo; en caso contrario, deber efectuarse una comprobacin en blanco. 13.- Una vez finalizado el proceso, deber procederse a la limpieza del aparato , procediendo al efecto de la siguiente forma: continuando el paso de vapor y con las laves cerradas, llenar con agua destilada el embudo; el extremo del refrigerante se sumerge en unos 100 ml de agua destilada. Se interrumpe la produccin de vapor y se abre ligeramente la llave del embudo, cerrndola antes que toda el agua pase al interior del aparato. La reduccin de presin succiona el agua del vaso al interior del aparato, lavndolo. La llave del tubo de purga se abre a continuacin a
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fin de vaciar el lquido recogido en la camisa exterior. Se repite el proceso volviendo a permitir la produccin de vapor.
CLCULOS Para expresar el resultado como contenido en nitrgeno:
en donde: % N = Contenido de nitrgeno de la muestra, expresado en % V = Volumen, en ml del cido titulado N = Normalidad del cido titulado. V'= Volumen de base titulada empleado en la valoracin. N'= Normalidad de la base empleada en la valoracin. m = masa pesada de muestra, en miligramos. si la normalidad de la base = normalidad del cido = 0'1000 N y el volumen del cido es de 25 ml, la expresin anterior quedar de la forma:
para expresar el resultado en contenido de protena bruta, debe multiplicarse el contenido de nitrgeno por un factor que depende del tipo de muestra y que, en general, tiene un valor que oscila alrededor de 6'25.
OBSERVACIONES Hay otros tipos de mezclas catalticas (las ms empleadas, adems de la mencionada en esta prctica, son a base de selenio o de mercurio). El objetivo de las mezclas catalticas es el de reducir el tiempo de digestin, que de no usarse mezcla cataltica, se prolongara durante varias horas. Debe tenerse en consideracin que la mayora de las mezclas catalticas son txicas y hay que tomar las precauciones de no respirar sus vapores y evitar el contacto con la piel. Para la dosificacin de la mezcla cataltica, podemos hacer una estimacin experimental del volumen aproximado del peso indicado (2'5 gramos en este caso) y as evitarnos el pesarla cada vez que procedamos a un anlisis.
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Aparato Kjeldhal semimicro para determinacin de nitrgeno:
Cuestionario 5.1.- Determinacin de la protena bruta 1.- Escribir las reacciones que tienen lugar en el decurso de la prctica. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- Calcular el factor de conversin de nitrgeno a protena para una muestra de un pequeo pptido formado por la siguiente secuencia de aminocidos: glicina-alanina-glicina-glicina 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 5.2
CASENA EN LA LECHE EN POLVO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El procedimiento se basa en disolver la leche en polvo en agua tibia y precipitar la casena en su punto isoelctrico. Se asla la casena pura eliminando el suero y las impurezas por lavado y se determina el nivel proteico del precipitado, restando el blanco correspondiente. El mtodo es aplicable a leche en polvo descremada, semidescremada i completa.
MATERIAL Montaje completo para la determinacin de la protena bruta y, adems: Balanza analtica. Bao de agua con termostato a 40C. Centrfuga con capacitad para 4.000 rpm. Embudo cnico. Frasco lavador. Papel de filtro Albet 240 o similar. Pipeta aforada de 20 ml. Pipetas aforadas de 5 ml (2). Placa calefactora. Varilla de vidrio. Vaso de precipitados de 100 ml. Vasos de precipitados de 250 ml (2).
REACTIVOS Reactivos necesarios para la determinacin de la protena bruta y, adems: cido actico al 10 % (Llevar 100 ml de cido actico glacial hasta 1000 ml). Acetato de sodio 1 M (Pesar 20'5 gramos de acetato de sodio pa i disolver hasta 250 ml.).
METODOLOGA 1.- Pesar 2 gramos de muestra en un vaso de pp de 100 ml y disolver en 40 ml de agua destilada calentada a 40-45C. 2.- Centrifugar a 4000 rpm durante 15 minutos. 3.- Tomar 20 ml de disolucin, transferir a un vaso de 100 ml calentar en bao de agua a 40C durante 10 minutos. 4.- Aadir 5 ml de cido actico al 10% y dejar precipitar durante 10 minutos. 5.- Agregar 5 ml de disolucin de acetato de sodio y esperar 10 minutos. 6.- Filtrar sobre papel de filtro y lavar con agua destilada hasta conseguir una cuajada de casena
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pura. 7.- Determinar el contenido en nitrgeno del precipitado, segn el mtodo de Kjeldhal.
CLCULOS El factor de conversin de nitrgeno a protena para la casena pura es de 6'38:
siendo N el % de nitrgeno (ver prctica 5.1).
Cuestionario 5.2.- Casena en la leche en polvo 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Cual es la funcin del cido actico y del acetato de sodio en el procedimiento de esta prctica? 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 6.1
GRASA BRUTA EN MUESTRAS SLIDAS
OBJETIVO Y FUNDAMENT0S El objeto de esta prctica prctica consiste en la determinacin de substancias solubles en ter (la mayor parte del extracto soluble en ter est constituido pos grasas), mediante extraccin continua con un aparato de Soxhelt Tradicional y normativamente, esta extraccin se efecta con ter etlico, pero est comprobado empricamente que los resultados obtenidos con ter de petrleo PA son casi igual de exactos e incluso algo ms reproducibles. La ventaja del uso del ter de petrleo est en la disminucin del peligro de inflamacin y sobre todo, en la disminucin del peligro de explosin.
MATERIAL Balanza analtica. Bomba de vaco con equipo de proteccin trompa de vaco. Estufa de desecacin. Evaporador rotatorio con bao termosttico. Extractor tipo Soxhelt. Placa calefactora. Tubo de ensayo de 2 cm de dimetro.
REACTIVOS Algodn desengrasado. ter de petrleo, calidad para anlisis. Papel de filtro.
METODOLOGA 1.- Preparar un cartucho cilndrico de papel de filtro, ayudndose del tubo de ensayo como molde y rellenar interiormente la base del cartucho con un poco de algodn desengrasado, presionndolo. 2.- Pesar unos 5 gramos de muestra y introducirla en el interior del cartucho. Poner un tapn de algodn desengrasado, ejerciendo una presin ligera y cerrar el cartucho. 3.- Pesar, estando completamente seco, el matraz del extractor Soxhelt. 4.- Montar el equipo extractor y llenar el cuerpo central con ter hasta que sea succionado al matraz; aadir un poco ms de ter al matraz. 5.- Introducir el cartucho preparado con la muestra en el cuerpo central. 6.- Proceder a la extraccin, conectando el refrigerante poniendo en marcha la placa calefactora. Es suficiente con 15-20 ciclos; en todo caso, durante las ltimas extracciones el ter del cuerpo
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central estar completamente incoloro. 7.- Antes de empezar la ltima succin, desconectar la placa calefactora, sacar el matraz y substituirlo rpidamente por otro. 8.- Eliminar el ter por destilacin en evaporador rotatorio al vaco y introducir el matraz con el residuo en la estufa de desecacin a 105C durante 1 hora. Enfriar en desecador i pesar. Comprobar la pesada a intervalos de desecacin de 20 minutos hasta peso constante.
CLCULOS El resultado se expresa como "contenido en gasa bruta, por el mtodo de extraccin continua sin hidrlisis previa":
en donde: m' = peso del matraz con el residuo. m'' = peso del matraz sin el residuo. m = peso de la muestra.
OBSERVACIONES Caso de efectuar el vaco con bomba, deber protegerse esta con el equipo de proteccin adecuado.. El cartucho debe estar correctamente construido a fin de evitar prdidas de muestra durante el proceso de extraccin, que serian arrastradas al matraz, dando consecuentemente un error por exceso en el resultado del anlisis. EXTRACTOR SOXHELT:
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Cuestionario 5.3.- Grasa bruta de muestras slidas 1.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en el apartado "clculos". 2.- Redactar el apartado de "metodologa", para el caso de que no dispusiramos de evaporador rotatorio (sugerencia: observar el funcionamiento i diseo del aparato extractor Soxhelt). 3.- Sugerir alguna variante en el diseo del aparato Soxhelt que facilite el trabajo en caso supuesto de la cuestin 2. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 7.1
DETERMINACIN DE CENIZAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Determinacin de cenizas por incineracin. El contenido de cenizas da una idea del contenido total de minerales en la muestra.
MATERIAL Balanza analtica. Quemador (mechero)de Bunsen. Desecador. Estufa de desecacin. Horno elctrico con regulacin de temperatura. Crisol de cermica para cenizas. Tringulo de cermica. Vitrina extractora.
REACTIVOS Agua oxigenada aprox. de 30 volmenes (si se necesita).
METODOLOGA 1.- Pesar alrededor de 5 gramos de muestra (excepto si se trata de productos voluminosos o que tengan tendencia a aumentar de volumen al quemarse), en un crisol previamente calcinado y tarado. 2.- Incinerar la muestra con el quemador Bunsen, colocando el crisol en posicin inclinada sobre el tringulo, hasta desaparicin de los humos (trabajar en vitrina-extractora). 3.- Introducir el crisol con la muestra en el interior de un horno a 550C hasta obtencin de cenizas blancas, gris claro o gris-rojo. 4.- Enfriar en desecador. 5.- Pesar rpidamente.
CLCULOS El resultado se expresa como "porcentaje de ceniza bruta sobre la materia natural":
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en donde: m' = peso del crisol con las cenizas. m'' = peso del crisol . m = peso del crisol con la muestra.
OBSERVACIONES Si se sospecha, por el color de las cenizas, que la calcinacin no es total, despus de enfriar aadir unas gotas de agua oxigenada, introducir unos minutos en estufa a 105C y despus de hora en el horno a 550C.
Cuestionario 7.1 .- Determinacin de cenizas 1.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Describir un mtodo para determinar las cenizas de una muestra lquida. 4.- Por qu deben pesarse rpidamente las cenizas?. 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 7.2
DETERMINACIN DE LA FIBRA BRUTA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Determinacin de la fibra bruta, mediante separacin del resto de componentes por disgregacin hidroltica y filtracin.
MATERIAL Alargadera para crisol de 30 mm. Balanza analtica. Estufa de desecacin. Frasco lavador. Horno de mufla con termostato. Crisol con placa filtrante del nro 2, de 30 mm. Manta calefactora para balones de 1 litro. Manchn de caucho para crisol de 30 mm. Matraz forma baln de 1 litro. Matraz Kitasato de 2 litros y boca de 30 mm. Refrigerante de reflujo. Tapn de caucho, taladrado, de 30 mm. Trompa de vaco. Varilla polica. Vaso de pp de 50 ml.
REACTIVOS Acetona RA. cido sulfrico aprox. 0'26 N. Agua destilada. Hidrxido de potasio aprox. 0'23 N. Papel indicador Silicona antiespumante. Preparacin de los reactivos CIDO SULFRICO APROX 0'26 N.- En un vaso de pp de 250 ml, con 100 ml de agua destilada, aadir, despacio y con agitacin suave y continuada, 14'5 ml de cido sulfrico ra del 96 %; dejar enfriar y transferir a matraz aforado de 2 litros: completar con agua destilada hasta enrase y homogeneizar. Transferir a dos frascos de 1 litro con tapn hermtico. HIDRXIDO POTSICO APROX 0'23 N.- En un granatario, pesar rpidamente 30'5 gramos de hidrxido de potasio ra del 85 %. Transferir a un vaso de pp de 500 ml con 250 ml de agua
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destilada y agitar hasta disolucin completa. Si el calentamiento producido fuera excesivo, esperar a que se enfre antes de continuar. Filtrar al vaco sobre placa filtrante y pasar el filtrado a un matraz aforado de 2 l. Homogeneizar. Transferir a 2 frascos de polietileno de 1 l con tapn hermtico.
METODOLOGA 1.- Pesar unos 3 gramos de muestra y transferir al baln de 1 l con ayuda de una pequea cantidad de agua destilada. 2.- Aadir 250 ml de cido sulfrico 0'26N y unas gotas de antiespumante. Llevar a ebullicin en manta calefactora. 3.- Conectar el refrigerante de reflujo y mantener la ebullicin durante 30 minutos, agitando de vez en cuando el matraz para evitar adherencias de material a las paredes del recipiente. 4.- Desconectar la manta calefactora y aadir unos 50 ml de agua destilada, por la cabeza del refrigerante para detener la ebullicin. Desconectar el refrigerante. 5.- Filtrar, con vaco muy suave, sobre placa filtrante calcinada a 550C, lavando el residuo varias veces con agua muy caliente 6.- Transferir el residuo arrastrado al interior del crisol filtrante, de nuevo al interior del matraz, ayudndonos con pequeas cantidades de agua destilada y con la varilla polica. 7.- Aadir 250 ml de hidrxido de potasio 0'23N y unas gotas de antiespumante. Llevar a ebullicin y proceder a continuacin como en los puntos 3, 4 y 5. 8.- Transferir cuantitativamente el residuo del interior del matraz al interior del crisol filtrante, arrastrando con agua muy caliente. 9.- Continuar los lavados del crisol filtrante con agua caliente hasta la neutralizacin del lquido filtrado (comprobar con papel indicador). 10.- Lavar 3 veces con acetona ra. 11.- Secar el crisol filtrante en estufa de desecacin a 110C y enfriar en desecador. Pesar y repetir este punto hasta peso constante. 12.- Introducir 1 hora en el horno a 500C. Enfriar en desecador y pesar.
CLCULOS El resultado se expresa en "porcentaje de fibra bruta sobre muestra total":
en donde: m = peso de la muestra. m' = peso del crisol con el residuo. m'' = peso del crisol con el residuo calcinado.
OBSERVACIONES Los recipientes calientes deben manipularse con guantes de amianto o pinzas para matraces recubiertas de amianto.
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Cuestionario 7.2.- Determinacin de la fibra bruta 1.- La placa filtrante debe estar previamente calcinada a 550C y posteriormente debe trabajarse calcinando la placa con la muestra a 500C (50C menos). Porqu? 2.- Cuando la placa filtrante ha sido usada para 6 7 determinaciones de fibra bruta, es rechazada . Porqu? 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 8.1
pH DEL AGUA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Determinacin potenciomtrica del pH del agua con un pHmetro equipado con electrodo de vidrio.
MATERIAL Electrodo combinado de vidrio especfico para determinaciones de pH. Frasco lavador. pHmetro. Vasos de pp de 50 ml (3).
REACTIVOS Agua destilada. Disolucin amortiguadora estndar de pH=4'00. Disolucin amortiguadora estndar de pH=7'00. Disolucin de KCl 3M
METODOLOGA 1.- Conexin: 1.1.- Conectar el aparato a la red elctrica. 1.2.- Conectar el electrodo combinado a la base coaxial . 1.3.- Con el selector en posicin 0, accionar el interruptor. 2.- Calibracin (una vez al da, antes de empezar las sesiones de trabajo): 2.1.- Situar el selector "temperatura" en el valor correspondiente a la temperatura de las disoluciones amortiguadoras estndar (suministradas con el aparato). 2.2.- Lavar el electrodo con agua destilada y secar con un pauelo de papel, con precaucin de no rayarlo (al electrodo). 2.3.- Sumergir el electrodo en la disolucin amortiguadora de pH=7 y esperar que se equilibre. 2.4.- Situar el selector en posicin de pH. La lectura se estabiliza en unos 30 segundos. 2.5.- Accionar el cursor de calibracin hasta obtener la indicacin 7'00 estabilizada; volver a situar el selector en la posicin cero. 2.6.- Retirar el electrodo, lavar con agua destilada y secar con cuidado. 2.7.- Sumergir el electrodo en otro vaso con disolucin amortiguadora estndar de pH=4'00. Situar el selector en "pH". 2.8.- Una vez estabilizada la lectura, llevar el cursor "slope" a la posicin necesaria para que la lectura sea 4'00. Llevar el selector a cero.
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2.9.- Retirar el electrodo, lavar con agua destilada y secarlo con cuidado. Si el electrodo no ha de ser utilizado de inmediato, guardarlo protegido en el capuchn con KCl 3M. 3.- Medicin del pH: 3.1.- Despus de lavar el electrodo con agua destilada y secarlo, sumergirlo en el lquido problema. 3.2.- Situar el cursor "temperatura" en la posicin correspondiente a la temperatura del problema. 3.3.- Situar el selector en posicin pH. Una vez estabilizada, la lectura indica el pH del problema. Finalizada la lectura, retornar el selector a 0. 3.4.- Retirar el electrodo de la disolucin, lavar con agua destilada y secar con suavidad con un pauelo de papel. Si no ha de utilizarse de nuevo en corto espacio de tiempo, sumergir en KCl 3M.
OBSERVACIONES El mismo procedimiento es til para la determinacin del pH en vino, zumos de fruta y otros lquidos alimentarios.
Cuestionario 8.1.- pH del agua 1.- Indicar como preparar 1 litro de disolucin tampn de pH=4'00, partiendo de cido actico 0'2M y acetato de sodio (pKa del cido actico = 4'74) 2.- Indicar como preparar 1 litro de disolucin tampn de pH=7'00 partiendo de cido actico 2M, agua destilada y acetato de sodio. 3.- Indicar como preparar 1 litro de disolucin tampn de pH=7'00 partiendo de disolucin de hidrxido amnico 2M (pKb = 4'74), agua destilada y cloruro amnico 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 8.2
DETERMINACIN DE RESIDUO SECO EN AGUA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Determinacin del residuo seco en agua a 180C.
MATERIAL Balanza analtica. Bao Mara. Cpsula de porcelana o vidrio Prex de 250 ml. Desecador. Estufa de desecacin de temperatura regulable.
REACTIVOS Agua destilada, exenta de residuos.
METODOLOGA 1.- Pesar una cpsula de 250 ml, completamente limpia y seca. 2.- Medir 200 ml de agua en una probeta. 3.- Pasar alrededor de aproximadamente 1/3 del agua medida a la cpsula y poner en un bao Mara. 4.- Ir aadiendo el resto del agua problema a medida que se va evaporando. Continuar de esta forma hasta sequedad aparente. 5.- Pasar la cpsula con el residuo a la estufa a 180C, hasta peso constante.
CLCULOS El resultado se expresa como "residuo seco a 180C, en miligramos por litro de agua":
Residuo seco = 5.000 (m - m')

en donde: m = peso de la cpsula con el residuo m' = peso de la cpsula.
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OBSERVACIONES 5.000 es el factor de clculo resultante de:
El agua del bao Mara debe ser agua destilada totalmente exenta de residuos, a fin de evitar incrustaciones en la pared externa de la cpsula.
Cuestionario 8.2.- Determinacin de residuo seco en el agua 1.- Realizar el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 8.3
DUREZA DEL AGUA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Denominamos como dureza del agua a su contenido en sales de calcio y magnesio, medido en grados hidrotimtricos franceses (HTF), de forma que 1 HTF equivale a una cantidad tal de calcio que originara 1 centigramo de carbonato de calcio por cada litro de agua. El contenido total de (calcio + magnesio) expresado en HTF es la dureza total. La dureza residual que permanece despus de provocar la precipitacin por calentamiento al punto de ebullicin, de las sales precipitables de calcio y magnesio es la dureza permanente y la concentracin de las sales precipitables de calcio y magnesio es la dureza temporal. Un mtodo rpido, sencillo y fiable de determinacin de la dureza total y permanente del agua, consiste en la valoracin complexomtrica con disolucin de la sal disdica del cido etilendiamintetraactico (EDTA-Na2), complexona II. Las reacciones de la complexona son de captacin (bloqueo), de los cationes Ca++ i Mg++, determinantes de la dureza del agua, ocluyndolos ("secuestro") en el interior de la molcula.
MATERIAL Bureta de 25 de 50 ml. Embudo cnico. Frasco lavador. Matraces erlenmeyer de 250 ml. Papel de filtro de paso rpido. Placa calefactora. Probeta de 100 ml. Vaso de precipitados de 250 ml. Vidrio de reloj.
REACTIVOS Disolucin titulada de EDTA-Na2 0'01M. Agua destilada exenta de dureza. Disolucin amortiguadora de pH=10 (se prepara con 67'5 gramos de cloruro amnico y 570 ml de amoniaco concentrado, completando el volumen a 1 litro con agua destilada). Negro de eriocromo T (0'15 gramos en 25 ml de metanol).
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METODOLOGA Para la dureza total: 1.- Pasar 100 ml de agua problema a un erlenmeyer de 250 ml. 2.- Aadir 2 ml de disolucin amortiguadora y 2 gotas de indicador. 3.- Valorar con la solucin titulada de complexona II hasta viraje de rojo a azul dbil persistente. Para la dureza permanente: 1.- Pasar 100 ml de agua problema a un vaso de pp de 250 ml. 2.- Tapar con vidrio de reloj y llevar a ebullicin suave durante 15 minutos, procurando que el volumen no disminuya excesivamente. 3.- Trasvasar las salpicaduras del vidrio de reloj al vaso, ayudndonos con una pequea cantidad de agua destilada exenta de dureza. 4.- Filtrar sobre un matraz erlenmeyer, lavando con pequeas porciones de agua destilada exenta de dureza. 5.- Proceder con el filtrado como en los puntos 2 i 3 del subapartado anterior.
CLCULOS Trabajando del modo mencionado en el apartado "metodologa", la dureza es igual al volumen consumido de complexona II. Obviamente, la dureza temporal es la diferencia entre la dureza total y la permanente.
OBSERVACIONES Si se tratara de agua de dureza muy elevada, puede procederse tomando una muestra de 10 ml con pipeta aforada y aadir agua destilada exenta de dureza hasta completar aproximadamente 100 ml. En este caso la dureza ser: HTF = 10 vol complexona.
Cuestionario 8.3.- Dureza del agua 1.- Escribir las reacciones que tienen lugar durante la valoracin. 2.- Calcular las cantidades de cloruro amnico i amonaco (pKb = 4'74) empleadas en la preparacin de disolucin amortiguadora de pH=10. 3.- Dibujar el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Deducir razonadamente porqu, trabajando segn el protocolo especificado en la metodologa, la dureza en HTF coincide muy aproximadamente con el volumen consumido de reactivo. 5.- Por qu debe mantenerse un control del pH durante la valoracin? 6.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref:8.4
ALCALINIDAD DEL AGUA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se trata de determinar el contenido de hidrxidos, carbonatos y bicarbonatos presentes en el agua. Se efecta una valoracin con disolucin valorada de un cido mineral fuerte, referida a los puntos de equivalencia correspondientes a los OH- y CO32- (pH=8'3, zona de viraje de la fenolftalena) y del HCO3- (pH=4'5, zona de viraje del naranja de metileno). En una muestra pueden coexistir carbonatos y bicarbonatos juntos hidrxidos y carbonatos juntos, pero no hidrxido y bicarbonato. Las reacciones en la valoracin hasta el viraje de la fenolftalena son del tipo siguiente (el catin no tiene porqu ser necesariamente sodio ni el cido titulante necesariamente clorhdrico):
y, a partir de aqu, y hasta el viraje del anaranjado de metilo:
siendo el bicarbonato reaccionante en esta fase el que tena originariamente la muestra ms el procedente de la transformacin del carbonato en la fase anterior.
MATERIAL Bureta de 50 ml. Matraces erlenmeyer de 250 ml. Pipetas (el volumen depende del tipo de muestra).
REACTIVOS cido clorhdrico titulado 0'1N (o de normalidad menor). Agua destilada. Fenolftalena al 0'5% en agua/alcohol 1:1. Anaranjado de metilo al 0'05% en agua.
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METODOLOGA 1.- Tomar 100 ml de muestra i trasvasar a un erlenmeyer de 250 ml. 2.- Aadir dos gotas de indicador de fenolftalena y valorar hasta desaparicin del color (rosa a incoloro). Anotar el volumen consumido (V1). 3.- Aadir dos gotas de indicador de anaranjado de metilo y continuar la valoracin hasta virar de amarillo-naranja a rojo. Anotar el volumen total consumido (V2). Caso de que se presenten dificultades para apreciar el cambio de color, hervir durante unos minutos, dejar enfriar y continuar la valoracin. 4.- Efectuar un ensayo en blanco con agua destilada y restar de los valores del problema los obtenidos en el ensayo en blanco.
CLCULOS Los resultados se expresan en miliequivalentes por litro de agua. Si V2 = V1 (viraje inmediato del anaranjado de metilo), la muestra nicamente contiene hidrxidos. Si V2 = 2V1 la muestra nicamente contiene carbonatos. Si V1 = 0 la muestra nicamente contiene bicarbonatos. Si V1 = V2 = 0 la muestra tiene alcalinidad negativa. Si V2 > 2V1 la muestra contiene carbonatos y bicarbonatos. Si V2 < 2V1 la muestra contiene carbonatos y hidrxidos. Teniendo en cuenta las consideraciones anteriores i llamando: VH al volumen consumido de cido titulante correspondiente a los hidrxidos. VC dem para los carbonatos. VB dem para los bicarbonatos. y que estos volmenes son nulos para aquellos componentes inexistentes, podremos calcularlos (los volmenes) mediante las expresiones: V1 = VC + VH V2 - V1 = VC + VB el contenido alcalino en miliequivalentes/litro se calcula segn:
siendo N la normalidad del cido titulante.
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OBSERVACIONES La normalidad del cido titulante estar en funcin del contenido alcalino supuesto de la muestra. Todos los reactivos, as como el agua utilizada en las disoluciones y ensayos en blanco, deben ser de bajo contenido en CO2. El CO2 de una muestra o de un agua destilada puede eliminarse mediante reduccin de presin con trompa de vaco durante 15 minutos o por ebullicin durante igual tiempo (y dejando enfriar en un ambiente exento de CO2). Si la alcalinidad del agua es muy alta, tomaremos una cantidad de muestra inferior a 100 ml, (que disolveremos en agua destilada si el volumen resultante fuera incmodo para la valoracin). En este caso, los clculos sern:
siendo X el resultado (de carbonatos, hidrxidos. o bicarbonatos, segn corresponda), V el volumen consumido, en ml, de reactivo (VH, VC VB, segn corresponda) i v el volumen de muestra en ml.
Cuestionario 8.4.- Alcalinidad del agua 1.- Por qu no pueden coexistir en la misma muestra hidrxidos fuertes y bicarbonatos? 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente las frmulas utilizadas en los clculos. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 8.5
DETERMINACIN DE CO2 LIBRE EN EL AGUA

OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El mtodo est basado en la reaccin del CO2 libre del agua con el NaOH, formando bicarbonato. Es aplicable a muestras de agua que no contengan cantidades apreciables de hidrxido amnico, aminas, fosfatos, boratos, silicatos, sulfuros y nitritos. Tambin puede interferir la presencia de cidos minerales y de sales de cido fuerte y base dbil y en menor grado la presencia de aluminio, hierro cromo y cobre.
MATERIAL Bureta. Matraz aforado de 1 litro. Matraz erlenmeyer. Pipeta de 20 ml. Placa calefactora. Probeta de 100 ml. Tubo de goma.
REACTIVOS Agua destilada. Fenolftalena O'5% en agua-alcohol 1:1. Hidrxido de sodio 1N titulado.
METODOLOGA 1.- Preparar disolucin de NaOH 0'02N a partir de 20 ml de NaOH titulado 1N y enrasar a 1 litro con agua destilada exenta de dixido de carbono (previamente llevada a ebullicin durante 15 minutos o mediante vaco). 2.- Tomar 100 ml de muestra y pasar a matraz erlenmeyer de 250 ml. 3.- Aadir 5 gotas de disolucin hidroalcohlica de fenolftalena y valorar con la disolucin preparada en el apartado 1, hasta viraje (rojo a incoloro).
CLCULOS El resultado se expresa en dixido de carbono libre en mg por litro:
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en donde; V = ml consumidos de NaOH 0'02N. v = volumen de muestra, en ml.
OBSERVACIONES Debe valorarse rpidamente y la agitacin deber ser muy suave, a fin de no absorber CO2 atmosfrico. La disolucin de NaOH 0'02N debe prepararse el mismo da.
Cuestionario 8.5.- CO2 libre en el agua 1.- Escribir la reaccin que tiene lugar durante la valoracin. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- Por qu bebe prepararse diariamente la disolucin de NaOH 0'02N? 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 8.6
DETERMINACIN DE AMONIO EN EL AGUA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El amonaco destilado de la muestra se recoge sobre cido brico con un indicador adecuado y se valora con cido sulfrico titulado. El mtodo es aplicable a muestras con contenido amoniacal superior a 2 mg/litro de en amonio.
MATERIAL Balanza analtica. Bureta de 25 ml. Equipo de destilacin por arrastre de vapor. Frasco lavador de polietileno. Matraz aforado de 1 litro Matraz erlenmeyer de 250 ml. Probeta de 250 ml.
REACTIVOS cido brico PA, solucin al 2 %. cido sulfrico 0'005N Agua destilada. Indicador Shiro-Thasiro. xido de magnesio PR. Preparacin de los reactivos CIDO BRICO AL 2 % .- Disolver 2 gramos de cido brico PA en agua destilada hasta 100 ml. INDICADOR SHIRO TAHSIRO.- Disolver 0'125 gramos de rojo de metilo y 0'080 gramos de azul de metileno en 100 ml de alcohol etlico del 96 % (PA). CIDO SULFRICO 0'005N.- Disolver 50 ml de cido sulfrico 1N titulado hasta 1 litro en agua destilada.
METODOLOGA 1.- Poner en funcionamiento el equipo de destilacin durante unos 5 minutos, haciendo pasar vapor de agua, para eliminar posibles restos de amonaco. 2.- Poner 250 ml de muestra en el matraz de destilacin, junto con 1 gramo de xido de magnesio y iniciar la destilacin.
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3.- Recoger el destilado en un matraz erlenmeyer de 250 ml en el cual se hallan 10 ml de cido brico y dos gotas de indicador, estando el pico del colector del refrigerante sumergido en el lquido del matraz. 4.- Despus de recoger entre 50 y 100 ml de destilado, comprobar la total destilacin del amonaco con un trozo de papel indicador. 5.- Valorar el destilado con la disolucin de cido sulfrico (viraje de verde a violeta).
CLCULOS El resultado se expresa como mg de NH4+ por litro:
siendo V el volumen de cido sulfrico consumido en la valoracin i f el factor de correccin de la normalidad del cido
OBSERVACIONES El factor f es 1 si trabajamos con disoluciones "nuevas" tituladas de normalidad garantizada.
Cuestionario 8.6.- Determinacin de amonio en el agua 1.- Escribir la reaccin que tienen lugar durante la valoracin. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- A qu es debido que el cido brico (un cido), no interfiera en el resultado de la valoracin con cido sulfrico (tambin un cido)? 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 9.1
DETERMINACIN DEL CALCIO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El in calcio es precipitable cuantitativamente como oxalato de calcio, mediante la accin del oxalato amnico:
El precipitado de oxalato clcico es soluble en cido sulfrico, pasando a la forma de cido oxlico:
El cido oxlico formado se valora con disolucin titulada de permanganato potsico:
MATERIAL Balanza analtica Bao de agua Quemador Bunsen Erlenmeyer de 250 ml Frasco lavador Horno de mufla con regulacin de temperatura Crisol de placa filtrante del nm. 4 Crisol para cenizas Matraz aforado de 250 ml Tringulo de cermica Vitrina-campana extractora
REACTIVOS cido clorhdrico d=1'14 cido ntrico 40 B cido sulfrico d=1'13 Agua destilada Amonaco d=0'98 Disolucin al 30 % (p/v) de cido ctrico
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Disolucin al 5 % (p/v) de cloruro amnico Disolucin de verde de bromocresol al 0'04 % Disolucin saturada de oxalato amnico Disolucin titulada de permanganato potsico 0'1 N
METODOLOGA 1.- Pesar alrededor de 5 gramos de muestra en un crisol de cenizas. 2.- Situar el crisol inclinado sobre un tringulo de cermica y calentar con la llama oxidante del quemador Bunsen, hasta carbonizacin (en campana-vitrina). 3.- Calcinar a 550C hasta convertir la muestra al estado de cenizas (puede aprovecharse para determinar el contenido de cenizas totales). 4.- Trasvasar las cenizas a un matraz erlenmeyer de 250 ml y aadir 40 ml de cido clorhdrico (d=1'14), 60 ml de agua destilada y unas gotas de cido ntrico. 5.- Llevar a ebullicin y mantenerla unos 30 minutos. 6.- Enfriar y trasvasar cuantitativamente a un matraz aforado de 250 ml, completando el volumen con agua destilada y homogeneizar. 7.- Filtrar (sin lavar el filtro!) y recoger una porcin alcuota de filtrado que contenga entre 10 i 40 miligramos de calcio y pasar a un matraz erlenmeyer de 250 ml; aadir 1 ml de la disolucin de cido ctrico y 5 ml de la disolucin de cloruro amnico; completar el volumen aproximadamente a unos 100 ml con agua destilada. 8.- Llevar a ebullicin, aadir 10 gotas de disolucin de verde de bromocresol y 30 ml de disolucin caliente de oxalato amnico Si aparece un precipitado, disolver con unas gotas de cido clorhdrico de d=1'14 9.- Aadir amonaco hasta virar el indicador. 10.- Colocar el erlenmeyer en un bao de agua en ebullicin durante 30 minutos, dejar reposar el precipitado formado. 11.- Retirar el erlenmeyer del bao y dejar reposar 1 hora. Filtrar con crisol del n 4, lavando erlenmeyer y crisol con agua hasta la total eliminacin del exceso de oxalato amnico (ausencia de cloruros - ensayo con nitrato de plata en medio cido). 12.- Disolver el precipitado pasando por el filtro unos 50 ml de cido sulfrico de d=1'13. 13.- Lavar el crisol con agua caliente fasta completar un volumen de alrededor de 100 ml. 14.- Calentar a 70-80C y valorar con disolucin de permanganato de potasio 0'1 N hasta obtencin de color rosa persistente por un tiempo de como mnimo 1 minuto.
CLCULOS 1 ml de permanganato 0'1000 N equivale a 2'004 miligramos de calcio. Expresar el resultado en % de calcio en la muestra:
OBSERVACIONES Si la muestra est constituida exclusivamente de materiales minerales (no orgnicos), como por ejemplo un corrector mineral para piensos, proceder a la disolucin mediante cido clorhdrico sin
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incineracin previa. Si se sospecha que el contenido en magnesio en la muestra es muy alto, proceder a una segunda precipitacin con oxalato de calcio.
Cuestionario 9.1.- Determinacin del calcio 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico.. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 9.2
DETERMINACIN DE HALUROS EN AGUA
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El mtodo se basa en la reaccin de los haluros con el nitrato de plata y formacin de un precipitado cuantitativo de haluro de plata.
MATERIAL Bureta de 25 ml. Frasco lavador. Matraz erlenmeyer 250 ml esmerilado 29/32, con tapn. Pipeta aforada de 25 ml. Probeta de 10 ml. Probeta de 100 ml.
REACTIVOS cido ntrico concentrado. Agua destilada Disolucin 0'1N, titulada, de sulfocianuro potsico Disolucin de nitrato de plata 0'1000N, titulada. Disolucin saturada de sulfato frrico amnico. Nitrobenceno. Disolucin titulada de tiocianato potsico.- Desecar alrededor de 10 gramos de tiocianato potsico pa a 105C durante dos horas, dejar enfriar en desecador y pesar con exactitud de 1 mg, alrededor de 9'717 gramos. Disolver hasta un litro en agua destilada. Buscar el factor de la disolucin mediante valoracin con disolucin titulada de nitrato de plata 0'1000 N. Disolucin saturada de sulfato frrico.- Disolver lentamente sulfato frrico amnico, calidad PA, en 200 mililitros de agua destilada, hasta que la disolucin no admita ms soluto. Clarificar con 2 ml de cido ntrico concentrado. Filtrar.
METODOLOGA 1.- Pasar 100 ml de agua problema a un matraz erlenmeyer de 250 ml, esmerilado 29/32. Aadir unas gotas de cido ntrico concentrado y 25 ml de disolucin de nitrato de plata 0'1000N (aparicin de un precipitado blanco). 2.- Aadir unos 7 ml de nitrobenceno y 1 ml de disolucin de sulfato frrico amnico. Tapar y agitar con emerga.
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3.- Lavar el tapn y el cuello del matraz con un chorrito de agua destilada. Valorar con la disolucin de tiocianato potsico hasta virar a color salmn.
CLCULOS El resultado se expresa como "contenido total de haluros, expresado como cloruro de sodio":
en donde V es el volumen consumido, en ml, durante la valoracin, de tiocianato de potasio y N su normalidad (exacta).
OBSERVACIONES Es preciso que los reactivos utilizados estn totalmente exentos de cloruros; si se sospechase su presencia, debe efectuarse un ensayo en blanco. El mtodo tambin es aplicable a vino y lquidos en general. Si la muestra tuviese un contenido excesivamente alto de haluros, diluir previamente en agua destilada.
Cuestionario 9.2.- Determinacin de haluros en agua 1.- Escribir la reaccin que tiene lugar en la valoracin. 2.- Cual es la accin del nitrobenceno? 3.- Sugerir un procedimiento substitutorio del uso del nitrobenceno. 4.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 5.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 6.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 9.3
HALUR0S NO VOLTILES EN ALIMENTOS SLIDOS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El mtodo se basa en la reaccin de los haluros con el nitrato de plata, con formacin de precipitado cuantitativo de haluros de plata. A la muestra se le aade una cantidad exactamente conocida de disolucin titulada de nitrato de plata, determinndose el exceso de nitrato de plata por valoracin con disolucin titulada de tiocianato. La sustancia orgnica interfiere en la valoracin i debe eliminarse previamente por calcinacin.
MATERIAL Balanza analtica. Quemador Bunsen. Bureta de 25 ml. Frasco lavador. Horno incinerador. Crisol para cenizas. Matraz erlenmeyer de 250 ml, esmerilado 29/32 con tapn. Pipeta aforada de 25 ml. Probeta de 10 ml. Soporte, aro y nuez. Tringulo cermico. Vitrina extractora.
REACTIVOS Disolucin de nitrato de plata 0'1000N, sv Disolucin 0'1N, sv, de sulfocianuro potsico. Disolucin saturada de sulfato frrico amnico. cido ntrico concentrado. Nitrobenceno. Agua destilada. Preparacin de los reactivos DISOLUCIN TITULADA DE TIOCIANATO POTSICO.- Desecar alrededor de 10 gramos de tiocianato potsico a 105C durante dos horas, dejar enfriar en desecador y pesar exactamente alrededor de 9'717 gramos. Disolver hasta un litro en agua destilada. Buscar el factor de la disolucin mediante valoracin con disolucin titulada de nitrato de plata 0'1000 N.
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DISOLUCINSATURADA DE SULFATO FRRICO-AMNICO.- Disolver lentamente en 200 mililitros de agua destilada, sulfato frrico-amnico, calidad PA, hasta que la disolucin no admita ms soluto. Clarificar la disolucin con 2 ml de cido ntrico concentrado. Filtrar.
METODOLOGA 1.- Pesar exactamente unos 5 gramos de muestra en un crisol calcinado y tarado y hacer cenizas segn la metodologa de la prctica 7.1. 2.- Dispersar las cenizas con una pequea cantidad de agua destilada y unas gotas de cido ntrico 6 N, y trasvasar, lavando el crisol, a un vaso de pp de 100 ml. 3.- Filtrar sobre un erlenmeyer esmerilado de 250 ml; lavar el residuo sobre el filtro con pequeas porciones de agua destilada, hasta test de cloruros negativo del filtrado (el volumen deber ser de aproximadamente 100 ml) y acidificar con un poco de cido ntrico. 4.- Aadir 25 ml de disolucin titulada de nitrato de plata 0'1000N (aparicin de un precipitado blanco) y a continuacin, entre 7 y 10 ml de nitrobenceno. 5.- Tapar el erlenmeyer y agitar enrgicamente durante 1 minuto; destapar y arrastrar con agua destilada las porciones de partculas y de disolucin adheridas al tapn y a las paredes del erlenmeyer. 6.- Aadir 1 ml de disolucin saturada de sulfato frrico amnico y valorar con disolucin titulada 0'1 N de sulfocianuro potsico, hasta coloracin rosa salmn suave.
CLCULOS El resultado se expresa como "contenido total de haluros, expresado en cloruro de sodio":
en donde V es el volumen consumido, en ml, durante la valoracin, de tiocianato de potasio, N su normalidad y m la masa de la muestra en miligramos.
OBSERVACIONES Los reactivos utilizados deben estar totalmente exentos de cloruros; en el caso de sospechar su presencia, debe efectuarse un ensayo en blanco. Si el contenido de cloruros fuese muy elevado, se aconseja filtrar la muestra reducida a cenizas (punto 3), sobre un matraz aforado de 250 ml, enrasar con agua destilada, homogeneizar y proceder con una porcin alcuota.
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Cuestionario 9.3.- Haluros no voltiles en alimentos slidos 1.- Por qu este procedimiento no es apto para la determinacin de haluros voltiles? 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Escribir las reacciones que tienen lugar en los subapartados 4 i 6 del apartado "metodologa". 4.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 10.1
IDENTIFICACIN DE PLOMO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se trata de identificar la presencia de plomo en alimentos. La materia orgnica es destruida por tratamiento con cido perclrico y adicin de los reactivos de Carrez y el plomo es identificado segn el procedimiento de Arribas Gimeno.
MATERIAL Balanza granataria. Centrfuga. Cuentagotas. Frasco lavador. Papel de filtro. Pipetas graduadas de 2 ml. Placa calefactora. Tubos de ensayo de 20 ml. Tubos de ensayo de 3 ml. Varillas de vidrio. Vasos de pp de 25 ml. Vasos de pp de 50 ml. Vidrios de reloj.
REACTIVOS cido clorhdrico aprox. 2N (1 parte de cido clorhdrico pa del 35 % en 5 partes de agua destilada). cido ntrico concentrado. cido perclrico del 30 % (Mezclar a partes iguales, agua destilada con cido perclrico del 60 % pa) AEDT al 5 % (pesar 5 gramos de AEDT pa y llevar a volumen hasta 100 ml en agua destilada). Agua destilada. Agua oxigenada al 3 %. Carbonato de sodio 1N (53 gramos de carbonato de sodio anhidro pa hasta 1 litro en agua destilada). Cromato potsico 0'5N (4'9 gramos de cromato potsico pa hasta 100 ml en agua destilada). Hidrxido de sodio 1N y 0'1N sv. Nitrato amnico 0'5N (4'05 gramos de nitrato amnico pa en agua destilada hasta a 100 ml) Papel indicador. Reactivo de Carrez I (24 gramos de acetato de zinc pa y 3 gramos de cido actico glacial pa hasta 100 ml en agua destilada).
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Reactivo de Carrez II (10'6 gramos de ferrocianuro potsico trihidrato pa en agua destilada hasta 100 ml). Sulfato amnico, disolucin (13'2 gramos de sulfato amnico pa en agua destilada hasta 100 ml).
METODOLOGA 1.- Tomamos una cantidad de muestra homogeneizada y molturada de alrededor de 1 gramo y se pasa a un vaso de pp de 50 ml. 2.- Aadir 5 ml de cido perclrico al 30 % y dejar en reposo durante 1/2 hora, tapando con un vidrio de reloj y agitando de vez en cuando. 3.- Aadir 10-15 ml de agua destilada y filtrar sobre una vaso de pp, hasta recoger unos 10 -15 ml de filtrado. 4.- Adicionar al filtrado 2 ml de reactivo Carrez I, agitando 5 minutos sobre placa magntica. 5.- Aadir 2 ml de reactivo Carrez II y agitar en placa magntica. 5 minutos. 6.- Filtrar, hasta recoger unos 15 ml de filtrado, sobre un vaso de pp pequeo y apartar unos 5 ml para la prctica 10.3 (determinacin de arsnico). 7.- Aadir, agitando, disolucin de carbonato de sodio 1N hasta reaccin alcalina. 8.- Aadir 3 ml ms de disolucin de carbonato de sodio y llevar a ebullicin suave durante 5 minutos. 9.- Centrifugar; la no aparicin de precipitado indica ensayo negativo de plomo, y no es preciso continuar (en todo caso, efectuar el punto 10 si se desea determinar mercurio y/o arsnico). Si aparece precipitado, continuar. 10.- Separar el lquido claro (reservarlo para la prctica 10.2 - determinacin de mercurio -). Lavar el precipitado con agua caliente, separndolo de los lquidos de lavado mediante centrifugacin. 11.- Secar todo lo que se pueda el precipitado con una tira de papel de filtro y tratamiento al bao Maria. 12.- Tratar el precipitado con 1 ml de cido ntrico concentrado y calentar cuidadosamente a la llama (cuidado con las proyecciones!) hasta casi sequedad. Si el residuo oscurece notablemente, aadir unas gotas de agua oxigenada. 13.- Aadir 1 ml de agua destilada, 10 gotas de nitrato amnico 0'5 N y 1 gota de cido ntrico diluido; dejar 5 minutos al bao Maria, centrifugar y separar el lquido claro. 14.- Al lquido claro, aadirle 1 ml de HCl 2N y continuar, si es preciso, hasta total precipitacin. Si obtenemos precipitado, continuamos en el punto siguiente, y si no, pasamos al punto 16. 15.-Lavar el pp con agua hirviente, centrifugar y separar el lquido cuando todava est caliente. Pasar el lquido claro a un tubo de ensayo y aadir dos gotas de cromato potsico 0'5N; precipitado amarillo indica plomo en cantidades considerables (en este caso, no es preciso continuar). Reservar el precipitado para la prctica 10.2 16.- Al lquido procedente del punto 14, aadir 20 gotas de disolucin de sulfato amnico, calentar hasta ebullicin i dejar 10 minutos al bao Maria. La no aparicin de precipitado confirma ensayo negativo del plomo (no seguir). Si aparece precipitado, centrifugar, lavando el residuo con agua destilada y descargar el lquido. 17.- Aadir al pp 1 ml de AEDT al 5%. Calentar ligeramente y centrifugar. Separar el lquido. 18.- Al lquido procedente del punto anterior, aadir disolucin de sosa hasta pH alcalino y unas gotas de disolucin de sulfuro sdico; precipitado negro indica presencia de plomo.
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INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS - Ensayo - Ensayo - Ensayo - Ensayo del del del del punto punto punto punto 9 negativo (no hay precipitado ) = NEGATIVO. 16 negativo = NEGATIVO. 18 positivo = POSITIVO (Presencia de Pb). 15 positivo = POSITIVO (Presencia de Pb en cantidad notable).
Cuestionario 10.1.- Identificacin de plomo 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Escribir las reacciones de los ensayos correspondientes a los subapartados 9, 15, 16 i 18 del apartado "metodologa". 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 10.2
IDENTIFICACIN DE MERCURIO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se trata de identificar la presencia de mercurio en alimentos. La materia orgnica es destruida por tratamiento con cido perclrico y adicin de los reactivos de Carrez y se identifica el mercurio segn el procedimiento de Arribas Gimeno.
MATERIAL El mismo que para la prctica 10.1 y adems, una placa de gotas.
REACTIVOS (Adems de parte de los necesarios para la prctica 10.1). Amonaco 2N sv. Cloruro estannoso, disolucin 2N. Hidrxido de sodio 2N sv.
METODOLOGA 1.- Si se ha obtenido residuo en el punto 15 de la prctica 10.1, continuar por el punto siguiente; en caso contrario pasar al punto 3. 2.- Al residuo del punto 15 de la prctica 10.1 aadir 1 ml de amonaco 2N; mezclar y centrifugar. Aparicin de pp negro indica mercurio (en forma mercuriosa) y no es preciso continuar. De no aparecer pp negro, pasar al punto siguiente 3.- En una depresin de una placa de gotas, depositar 3 gotas de disolucin de cloruro estannoso y aadir gotas de hidrxido de sodio 2N Hasta total dilucin del eventual pp formado inicialmente, y en todo caso hasta pH alcalino. Aadir 3 gotas del lquido separado en el punto 10 de la prctica 10.1; aparicin de un pp negro indica presencia de mercurio.
Cuestionario 10.2.- Identificacin de mercurio 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Escribir las reacciones que tienen lugar en los subapartados 2 y 3 del apartado "metodologa". 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 10.3
IDENTIFICACIN DE ARSNICO
OBJETO Y FUNDAMENTOS Se trata de identificar la presencia de arsnico en alimentos. La materia orgnica es destruida mediante tratamiento con cido perclrico y adicin de los reactivos de Carrez y el arsnico se identifica segn el procedimiento de G. Charlot.
MATERIAL (Adems del necesario para la prctica 10.1 hasta el punto 6) Bao Mara. Centrfuga. Frascos lavadores. Papel de filtro. Tubos de ensayo de 3 ml. Tubos de centrfuga. Vitrina de gases.
REACTIVOS (Adems de los necesarios para la prctica 10.1 hasta el punto 6) cido clorhdrico aprox. 2N (1 parte de cido clorhdrico concentrado pa i 5 partes de agua). Aluminio en lminas. Antimonio porfirizado pa. Hidrxido de sodio 4N (33 gramos de hidrxido de sodio pa hasta 100 ml en agua destilada). Nitrato de plata, disolucin (2'5 gramos de nitrato de plata hasta 10 ml en agua destilada).
METODOLOGA 1.- A 1 ml de la disolucin preparada en el punto 6 de la prctica 10.1, aadir 1 ml de HCl 2N. Separar por centrifugacin la eventual aparicin de precipitado. 2.- Tomar 4 gotas de la disolucin anterior y aadir 8 gotas de sosa y 2 o 3 pequeas lminas. de aluminio, en un tubo de ensayo. 3.- Situar una tira de papel de filtro impregnado con 2 o 3 gotas de disolucin de nitrato de plata en la boca del tubo de ensayo y calentar 2 minutos al bao Mara; aparicin de una mancha de color variable del amarillo al negro indica ensayo positivo y no es preciso continuar; en caso contrario, continuar. 4.- Tomar unas 10 gotas de la disolucin del punto 1, aadir una punta de esptula de antimonio en polvo y llevar a ebullicin.
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5.- Continuar como en los puntos 2 i 3. Aparicin de la mencionada mancha confirma la
presencia de arsnico.
OBSERVACIONES El mtodo no es efectivo en presencia de mercurio y cantidades notables de cobre.
Cuestionario 10.3.- Identificacin de arsnico 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico 2.- Escribir las reacciones que tienen lugar en el subapartado 3 del apartado "metodologa". 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 11.1
DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE FSFORO
OBJETO Y FUNDAMENTOS Los compuestos fosforados forman un compuesto ortofosforado de color amarillo caracterstico que absorbe la luz a 430 nm, al reaccionar con el reactivo nitromolibdovanadato amnico.
MATERIAL Balanza analtica. Bao de arena. Quemador Bunsen. Espectrofotmetro Frasco lavador. Horno de mufla. Crisol de incineracin de porcelana. Matraz aforado de 500 ml. Pipetas aforadas de 10 ml (2). Tringulo cermico. Tubos de ensayo de 30 ml, boca esmerilada, con tapn (2).
Para la curva de calibrado:

(Adems de parte del material anterior) Estufa de desecacin. Matraz aforado de 1 litro. Matraces aforados de 100 ml (4) Pipeta aforada de 1 ml. Pipeta aforada de 2 ml Tubos de ensayo de 30 ml, boca esmerilada, con tapn (5).
REACTIVOS cido clorhdrico concentrado pa. cido ntrico concentrado aprox. del 70 %. Carbonato de calcio pa. Fosfato monopotsico, pa (para la curva de calibrado).
Reactivo de nitromolibdovanadato, partiendo de la disolucin preparada de molibdato amnico y la de metavanadato amnico, segn el mtodo descrito a continuacin: Disolucin de molibdato amnico: Disolver en agua caliente 100 gramos de molibdato amnico
; aadir 10 ml de amonaco concentrado, transferir a tetrahidratado, matraz aforado de 1 litro, enfriar, enrasar y homogeneizar. Disolucin de metavanadato amnico: Disolver 2'35 gramos de metavanadato amnico, NH4VO3,
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en un vaso de 500 ml con 400 ml de agua destilada caliente y aadir lentamente una mezcla previamente preparada de 7 ml de cido ntrico concentrado con 13 ml de agua. Transferir a matraz aforado de 1000 ml, enfriar, enrasar con agua destilada y homogeneizar. Preparacin del reactivo de nitromolibdovanadato: En matraz aforado de 1litro, mezclar 200 ml de disolucin de molibdato amnico con 200 ml de disolucin de metavanadato amnico; aadir 134 ml de cido ntrico concentrado y completar con agua destilada hasta el enrase.
METODOLOGA 1.- Preparar una curva de calibrado segn el procedimiento indicado al final de este apartado. 2.- Pesar una cantidad de muestra que contenga entre 2'5 y 10 miligramos de fsforo en un crisol de cenizas. 3.- Mezclar con una cantidad aproximada de 1 gramo de carbonato de calcio y hacer cenizas a 550C. 4.- Pasar las cenizas a un vaso de 100 ml con 10 ml de agua, lavando el crisol con cido clorhdrico concentrado, hasta que no haga efervescencia y aadir 10 ml ms de cido (en vitrina extractora) 5.- Evaporar hasta sequedad, mediante calefaccin a ebullicin suave (en vitrina extractora!). 6.- Enfriar y disolver el residuo con 10 ml de cido ntrico aproximadamente del 10 %, preparado con 1 parte de ntrico concentrado y 5 6 de agua; calentar unos 5 minutos, llevando a ebullicin, pero sin llegar a sequedad (vitrina extractora!). 7.- Aadir agua destilada y filtrar sobre matraz aforado de 250 ml, lavando el residuo con agua destilada; enrasar y homogeneizar. 8.- Transferir 10 ml de la disolucin anterior a un tubo de ensayo de 30 ml con boca esmerilada y aadir 10 ml del reactivo de nitromolibdovanadato. Mezclar y dejar reposar 10 minutos. Proceder anlogamente con un blanco formado por 10 ml de agua destilada y 10 ml del reactivo. 9.- Leer la absorbancia a 430 nm, calibrando el 100 % de transmitancia (absorbancia 0), con el blanco. Determinar la concentracin correspondiente con la curva de calibrado. Preparacin de la curva de calibrado 1.- Pesar 4'394 gramos de fosfato monopotsico patrn, previamente desecado, disolver en matraz aforado de 1 litro con agua destilada, enrasar y homogeneizar. Esta disolucin madre contiene 1 miligramo de fsforo por litro (si no se ha pesado la cantidad indicada, hacer la correccin adecuada en los clculos). 2.- Preparar disoluciones de calibrado pasando porciones de 1, 2, 3 i 4 ml a matraces aforados de 100 ml, enrasar con agua destilada y homogeneizar. Las disoluciones as preparadas corresponden a concentraciones de 10, 20, 30 y 40 miligramos/litro. 3.- Pasar 10 ml de cada una de las disoluciones de calibrado a tubos de ensayo de 30 ml con boca esmerilada, junto con 10 ml de reactivo de nitromolibdovanadato; tapar y mezclar. Proceder igualmente con un blanco formado con 10 ml de agua destilada y esperar 10 minutos para el desarrollo del color. 4.- Leer la absorbancia a 430 nm frente al blanco a absorbancia cero. 5.- Construir la curva de calibrado, representando en abscisas las concentraciones y en ordenadas las absorbancias
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CLCULOS El resultado se expresa en % de fsforo:
siendo P(%) el contenido de fsforo en tanto por ciento, C la concentracin correspondiente segn la curva de calibrado y m el peso de la muestra en gramos.
OBSERVACIONES Las cantidades a pesar de cada tipo de muestra son: muestra almendras (peladas) harina de avena cacahuetes (pelados) cebada magro de cerdo cantidad (gramos) 1'500 1'800 1'800 1'700 6'400 Homogeneizar Molturar con molinillo hasta reducir a harina Molturar con molinillo hasta reducir a harina Cortar en pequeas tiras antes de pesar y secar parcialmente en estufa antes de hacer cenizas. Antes de pesar, debe aplastarse la muestra en un mortero y despus de pesar, secar parcialmente en estufa antes de hacer cenizas. Molturar con molinillo hasta reducir a harina Batir con un tenedor antes de pesar. Molturar con molinillo hasta reducir a harina Molturar con molinillo hasta reducir a harina Antes de pesar, debe aplastarse la muestra en un mortero y despus de pesar, secar parcialmente en estufa antes de hacer cenizas. Molturar con molinillo hasta reducir a harina Cortar en pequeas tiras antes de pesar y secar parcialmente en estufa antes de hacer cenizas. Rayar antes de pesar Cortar en pequeas tiras antes de pesar y secar parcialmente en estufa antes de hacer cenizas. observaciones Molturar con molinillo hasta reducir a harina
guisantes frescos guisantes secos huevos (sin cscara) judas secas habas secas habas tiernas (sin vaina) lentejas secas ostras (parte comestible) queso ternera (magro)
5'500 1'800 3'900 1'500 2'000 5'300 1'600 4'500 1'000 3'200
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Cuestionario 11.1.- Fsforo total (espectrofotometra) 1.- Por qu se le aade carbonato de calcio a la muestra en el momento de hacer cenizas? 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 11.2
HIERRO EN AGUA (ESPECTROFOTOMETRA)
OBJETO Y FUNDAMENTOS La ortofenantrolina reacciona con el , originando un complejo de color rojo caracterstico
que absorbe notablemente en las regiones del espectro visible de alrededor de 505 nm. El no presenta absorcin a esa longitud de onda y debe ser reducido a mediante un agente reductor apropiado, como el clorhidrato de hidroxilamina. La reaccin es cuantitativa i reproducible en un amplio intervalo de pH, siendo el ptimo entre 6 i 9.
MATERIAL Cubetas para espectrofotmetro. Dosificador gotero Espectrofotmetro Frasco lavador Matraces aforados de 100 ml (2). pHmetro Pipeta aforada de 2 ml Pipeta aforada de 50 ml Pipetas aforadas de 5 ml Vasos de pp de 100 ml (2). Para la curva de calibrado: (Adems de parte del material anterior) Balanza analtica Bureta de 25 ml Matraz erlenmeyer de 250 ml Matraces aforados de 100 ml (6) Pipeta aforada de 1 ml Pipeta aforada de 2 ml Pipeta aforada de 5 ml Vasos de pp de 100 ml
REACTIVOS 1,10-fenantrolina (Disolver 0'50 gramos de ortofenantrolina monohidrato en agua destilada, calentando y agitando. Dejar enfriar y llevar a volumen hasta 100 ml en matraz aforado). Clorhidrato de hidroxilamina (Disolver 10 gramos en 100 ml de agua destilada). cido sulfrico concentrado y cido sulfrico diluido. Amonaco concentrado y amonaco diluido. Agua destilada.
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Para la curva de calibrado: Sulfato de amonio ferroso, pa. Disolucin de permanganato de potasio 0'1 N (no es preciso que est titulada).
METODOLOGA 1.- Preparar una curva de calibrado tal como se describe al final de este apartado. 2.- Tomar 50 ml de muestra y transferir a un vaso de pp de 100 ml. 3.- Aadir 5 ml de la disolucin de clorhidrato de hidroxilamina y 2 ml de disolucin de reactivo de ortofenantrolina. 4.- Comprobar que el pH est entre 6 i 9. Si no es as, corregir con disolucin de amonaco o de cido sulfrico. 5.- Transferir a matraz aforado de 100 ml, enrasar y homogeneizar. 6.- Proceder desde el punto 2 con un blanco de agua destilada exenta de hierro. 7.- Esperar un tiempo mnimo de 1 hora i leer la absorbancia a 505 nm, calibrando el 0 de absorbancia (100 % de transmitancia) con el blanco. 8.- Determinar la concentracin correspondiente a la curva de calibrado. Obtencin de la curva de calibrado: 1.- Disolver 0'7022 gramos de sulfato ferroso amnico pa, con ayuda de unas gotas de cido sulfrico concentrado, en un erlenmeyer de 250 ml. 2.- Aadir, con bureta, disolucin de permanganato de potasio hasta coloracin rosa persistente. 3.- Transferir a un matraz aforado de 1 litro, enrasar y homogeneizar; un ml de esta disolucin madre contiene 0'1 miligramos de hierro (si no se ha pesado exactamente la cantidad indicada, efectuar la correccin oportuna). 4.- Preparar disoluciones de trabajo, transfiriendo a vasos de precipitados de 100 ml con 50 ml de agua destilada exenta de hierro, porciones de 0 ml (blanco), 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml y 5 ml de disolucin madre, junto con 5 ml de solucin de clorhidrato de hidroxilamina y 2 ml de solucin del reactivo de ortofenantrolina. 5.- Comprobar y corregir el pH (entre 6 i 9), ayudndose, si ello fuera necesario, de amonaco o de cido sulfrico. 6.- Transferir las disoluciones de trabajo a matraces aforados de 100 ml, enrasar i homogeneizar. 7.- Esperar un tiempo mnimo de 1 hora i leer las absorbancias a 505 nm frente al blanco. 8.- Construir una grfica representando en abscisas las concentraciones en miligramos/litro y en ordenadas la absorbancia (las disoluciones de trabajo de 1, 2, 3, 4 y 5 ml de solucin madre corresponden respectivamente a concentraciones de 1, 2, 3, 4 y 5 miligramos/litro).
CLCULOS El resultado se expresa en ppm (partes por milln); una parte por milln equivale a un miligramo de hierro por cada litro de agua:
siendo v el volumen de la muestra en ml y C la concentracin determinada en la curva de calibrado.
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OBSERVACIONES En aguas de alto contenido en hierro, proceder con cantidades menores de muestra ( y corregir adecuadamente los clculos); en todos los casos, la cantidad de muestra deber ser tal que el contenido de hierro en la misma deber estar comprendido entre 0'1 y 0'5 miligramos. El mtodo es apto para aguas incoloras y con niveles inapreciables o muy bajos de cobre y/o cobalto. Si no disponemos de espectrofotmetro pero disponemos de un colormetro de filtros, trabajaremos con un filtro con haz entre 460 y 520 nm.
Cuestionario 11.2.- Hierro en agua (espectrofotometra) 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 11.3
HIERRO EN ALIMENTOS (ESPECTROFOTOMETRA)
OBJETO Y FUNDAMENTOS (Ver el apartado correspondiente de la prctica 11.2)
MATERIAL Crisol para cenizas Tringulo cermico Quemador Bunsen Horno de mufla Vasos de pp de 100 ml (2). Matraces aforados de 100 ml (2). Pipeta aforada de 5 ml Pipeta aforada de 2 ml Embudo cnico Frasco lavador Dosificador gotero Espectrofotmetro Cubetas para espectrofotmetro pHmetro Balanza analtica Para la curva de calibrado: (Ver prctica 11.2)
REACTIVOS (Ver prctica 11.2)
METODOLOGA 1.- Preparar una curva de calibrado tal como se describe en la prctica 11.2 2.- Pesar una cantidad de muestra que contenga entre 0'1 y 0'5 miligramos de hierro en un crisol de cenizas calcinado y tarado. 3.- Hacer cenizas a 525C. 4.- Disolver las cenizas con una pequea cantidad de cido sulfrico diluido (aprox. 1:5) y filtrar sobre vaso de pp de 100 ml; lavar rpidamente con pequeas porciones de agua destilada hasta completar un volumen total no superior a 50 ml. 5.- Continuar como en los puntos 3 al 8 de la metodologa de la prctica 11.2.
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CLCULOS El resultado se expresa en ppm (partes por milln); una parte por milln equivale a un miligramo de hierro por cada kg de sustancia problema:
siendo m el peso de la muestra en gramos y C la concentracin determinada en la curva de calibrado, en miligramos/litro.
OBSERVACIONES El mtodo es apto para substancias que no contengan cantidades apreciables de cobre y/o cobalto. Para muestras con alto contenido en cobre, como por ejemplo algunos piensos compuestos para cerdos, terneros u otros, debe separarse previamente el hierro del cobre por precipitacin del hierro con amonaco y posterior redisolucin del precipitado con disolucin cida (pH < 2). Si en lugar de un espectrofotmetro disponemos de un colormetro de filtros, deberemos proceder con un filtro de haz entre 460 i 520 nm. La cantidad a pesar de muestra ser alrededor de los siguientes valores (en gramos): almendras peladas harina de avena harina de trigo (integral) legumbres secas cacahuetes pelados cebada espinacas ostras (parte comestible) carne de ternera 6'600 6'800 10'000 3'100 10'000 6'300 7'000 5'700 8'600
Aquellas muestras que presenten un contenido alto de humedad (como pe. espinacas, ostras y carne), debern ser cortadas previamente en trozos pequeos con unas tijeras antes de pesarlas y posteriormente secar parcialmente en estufa antes de incinerar.
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Cuestionario 11.3.- Hierro en alimentos (espectrofotometra) 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis". 4.- El cobre interfiere notablemente en esta determinacin. Disear una metodologa para separar el cobre de la muestra segn el procedimiento indicado en el apartado "observaciones"; deber ser razonado con el apoyo de los clculos adecuados (sugerencia: tomar en consideracin los productos de solubilidad de los hidrxidos de hierro y de cobre y el efecto del pH).
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Ref: 12.1 pdf
SODIO POR FOTOMETRA DE LLAMA
OBJETO Y FUNDAMENTOS El sodio presenta una emisin caracterstica amarilla de tipo "lnea atmica" , cuando quemamos, en el seno de una llama, una sustancia que contenga compuestos de sodio. La calcinacin de la muestra no es estrictamente necesaria, perola efectuaremos a fin de facilitar una mejor dilucin y una filtracin ms cmoda.
MATERIAL Equipo para fotometra de llama, con filtro para sodio o con selector de longitud de onda. Vasos pequeos (contenedores de muestra). Frasco lavador. Balanza analtica. Vaso de pp de 100 ml. Vidrio de reloj. Pipeta graduada de 5 ml. Embudo cnico. Matraz aforado de 250 ml. Papel de filtro. Crisol para cenizas. Tringulo cermico. Quemador Bunsen. Horno de mufla. Desecador. Cuentagotas.
Para la curva de calibrado:

Matraz aforado de 1 litro. Matraces aforados de 100 ml (5). Papel milimetrado. Pipetas aforadas de 5, 10 i 25 ml.
REACTIVOS Agua destilada exenta de CO2 (expulsin del CO2 mediante ebullicin). cido clorhdrico concentrado pa. Cloruro de sodio pa (para la curva de calibrado). Gas combustible.
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METODOLOGA 1.- Pesar alrededor de 2 gramos de muestra y hacer cenizas (no es preciso que queden blancas, a no ser que se quiera determinar simultneamente el contenido en cenizas de la muestra - en tal caso se aconseja pesar una cantidad algo mayor - ). 2.- Transferir las cenizas a un vaso de pp de 100 ml y disolver en agua y un poco de cido clorhdrico, tapando con un vidrio de reloj en caso de producirse efervescencia. 3.- Lleva a ebullicin suave durante 5 minutos, teniendo precaucin de que el volumen no disminuya excesivamente. 4.- Filtrar sobre matraz aforado de 250 ml y enrasar con agua destilada exenta de CO2. 5.- Llevar una porcin de muestra a un vasito portamuestras y pasar por el quemador del fotmetro de llama, previamente calibrado segn se indica en el apartado "Preparacin de la curva de calibrado". Preparacin de la curva de calibrado: 1.- Pesar 0'2542 gramos de cloruro de sodio pa previamente desecado. 2.- Disolver en agua destilada exenta de CO2. 3.- Transferir a matraz aforado de 1 litro, enrasar y homogeneizar. 4.- Transferir cantidades de solucin madre de 5, 10, 25, 50 y 75 ml a matraces aforados de 100 ml. Enrasar con agua destilada y homogeneizar. 5.- Ajustar la respuesta 0 del aparato con agua destilada y la respuesta 100 con la disolucin madre y leer las emisiones de las diferentes disoluciones de trabajo (es conveniente reajustar el 0 y el 100 antes de cada lectura). 6.- Construir la curva de calibrado, representando la emisin en ordenadas y la concentracin de sodio en abscisas. Las concentraciones correspondientes de cada disolucin de trabajo son: ml disolucin madre 5 10 25 50 75 sol. madre
conc. dis. trabajo (mg/ml) 0'005 0'010 0'025 0'050 0'075 0'100
En el caso (muy probable), de que la cantidad pesada de NaCl patrn no sea exactamente el mencionado (pero que en todo caso ser un valor muy prximo), las concentraciones de trabajo sern las indicadas multiplicadas por el factor de correccin s/0'2542, siendo s el peso en gramos de patrn de NaCl.
CLCULOS El resultado se expresa en % de sodio:
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siendo C la concentracin que corresponde segn la curva de calibrado, en mg/ml, V el volumen de disolucin de la muestra y m el peso de la muestra en miligramos.
OBSERVACIONES Si el contenido de sodio de la muestra es bajo, deber diluirse la muestra a un volumen inferior a los 250 ml mencionados en la metodologa. Si el contenido de sodio fuese tan alto que al leer la emisin del problema el valor quedase fuera de la escala, tomaremos una porcin de la disolucin y la diluiremos ms. En este caso, deberemos multiplicar la expresin del apartado anterior (clculos), por el correspondiente factor de dilucin.
Cuestionario 12.1.- Sodio por fotometra de llama 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis". 4.- Siempre debe construirse la curva de calibrado en la misma sesin de trabajo en que se determina el Na de la muestra: por qu? 5.- Idear un mtodo alternativo de determinacin de sodio por fotometra de llama, sin construccin de curva de calibrado (supondremos la linealidad de la respuesta).
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Ref: 13.1
HUMEDAD POR CENTRIFUGACIN EN GRASAS
OBJETO Y FUNDAMENTOS El mtodo no nos proporciona una idea rigurosamente exacta de la proporcin de humedad, pero resulta apropiado si lo que nos interesa es tener una idea suficientemente aproximada de forma muy rpida del contenido de agua en un aceite o en una grasa lquida.
MATERIAL Centrfuga elctrica. Placa agitadora con imn de tefln. Probeta de 25 ml. Tubos de centrfuga de 10 ml, graduados (2). Vaso de pp de 250 ml.
METODOLOGA 1.- Transvasar unos 100 ml de muestra a un vaso de pp de 100 ml y agitar 1 minuto en placa agitadora. 2.- Transferir 2 porciones de 10 ml exactos a 2 tubos de centrfuga graduados, de 10 ml; centrifugar durante 5 minutos. El volumen centrifugado de agua nos proporciona una idea aproximada del contenido de humedad de la muestra.
Cuestionario 13.1.- Humedad por centrifugacin (grasas) 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.2
HUMEDAD POR DESECACIN EN GRASAS
OBJETO Y FUNDAMENTOS El mtodo determina la cantidad total de agua y materias voltiles a 105-110C en grasas y aceites; utiliza un sencillo artificio para evitar la proyeccin de la muestra durante el proceso de desecacin, consistente en mezclarla con arena.
MATERIAL Balanza analtica. Desecador. Estufa de desecacin. Pesasubstancias.
REACTIVOS Gel de slice. Arena lavada y desecada.
METODOLOGA 1.- Pesar un Pesasubstancias limpio y seco lleno hasta aproximadamente 1/3 de su capacidad de arena lavada y totalmente seca (por calefaccin a temperatura superior a los 110C). 2.- Pesar, en el Pesasubstancias con arena, unos 10 gramos de muestra. 3.- Desecar en estufa hasta peso constante, a 105C.
CLCULOS El resultado se expresa como "humedad y materias voltiles a 105C":
en donde: m1 = peso de pesasubstancias + arena m2 = peso de pesasubstancias + arena + muestra (hmeda) m3 = peso de pesasubstancias + arena + muestra (seca)
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Cuestionario 13.2.- Hmeda por desecacin (aceites y grasas) 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.3
PUNTO DE FUSIN EN GRASAS
OBJETO Y FUNDAMENTOS Las grasas naturales no tienen punto de fusin neto y definido, sino que presentan un intervalo de fusin definido por dos temperaturas: la inicial o de ablandamiento fluido y la final, o de desaparicin de la turbidez.
MATERIAL Anillos de goma. Quemador de Bunsen. Lupa. Pinzas y soportes. Termmetro hasta 70C, graduado en dcimas de C. Tubo de Thiele Tubos cerrados por un extremo de aproximadamente 1'5 mm de dimetro.
REACTIVOS cido sulfrico u otro lquido no voltil de alto punto de ebullicin.
METODOLOGA 1.- Introducir una pequea cantidad de grasa en el interior del tubo, ayudndonos de un hilo de platino o de acero inoxidable (tambin puede fundirse la grasa y meterla en el interior del tubo, por inmersin de este en la grasa); la columna de grasa ser de 1 cm aproximadamente. 2.- Introducir el tubo con la grasa en el interior de un frigorfico durante unos minutos. 3.- Acoplar el tubo al termmetro, en las proximidades del bulbo, con ayuda de un anillo de goma. 4.- Introducir el conjunto termmetro-tubo en un tubo de Thiele, de tal forma que el bulbo quede entre las dos bifurcaciones del codo y que no toque les paredes del Thiele (es preciso un montaje apropiado con ayuda de pinzas, nueces y soporte). 5.- Acercar la llama del quemador Bunsen al codo del tubo de Thiele, mantenindolo a la distancia suficiente para que el incremento de temperatura sea lento y controlable. 6.- Observar, con ayuda de una lupa, el aspecto del tubo que contiene la grasa. La temperatura inicial es aquella en que se observa una fluidez; la temperatura final es aquella en que desaparece la turbidez y el lquido se observa ntido.
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Cuestionario 13.3.- Punto de fusin en grasas 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref 13.4
ACIDEZ EN GRASAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se conoce como acidez o tambin como grado de acidez al contenido, en tanto por ciento, de cidos grasos libres, expresado en cido oleico. El ndice de acidez expresa los miligramos de hidrxido de potasio necesarios para neutralizar un gramo de materia grasa.
MATERIAL Matraces erlenmeyer de 250 ml (2). Pipetas de 25 ml (2). Balanza analtica. Bureta.
REACTIVOS Alcohol etlico pa. ter etlico pa. Fenolftalena 1 % (disolver 1 gramo de Fenolftalena en 100 ml de alcohol metlico pa) Potasio hidrxido 0'1N sv etanlica
METODOLOGA 1.- Pesar entre 5 i 7 gramos de grasa en un erlenmeyer de 250 ml. 2.- Disolver en 25 ml de alcohol etlico + 25 ml de ter etlico. 3.- Valorar, agitando continuamente, con disolucin de potasio hidrxido 0'1N sv etanlica, hasta viraje del indicador a color rosado. 4.- Efectuar un ensayo en blanco con una mezcla ter + alcohol como la utilizada en el problema.
CLCULOS Sea V el volumen de reactivo consumido en la valoracin del problema, Vo el volumen de reactivo consumido en la valoracin del blanco y m el peso de la muestra en gramos. El grado de acidez se expresa como el % de cidos grasos expresados en cido oleico:
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El ndice de acidez es la cantidad, en miligramos, de hidrxido de potasio necesario para neutralizar un gramo de grasa:
OBSERVACIONES Para muestras con grado de acidez superior a 2, es conveniente utilizar hidrxido de potasio sv 0'5N etanlica en lugar de 0'1N; en ese caso, en los clculos deben multiplicarse las expresiones anteriores por el factor de correccin 5. Si la grasa a analizar tiene un color intenso (como es el caso de ciertos aceites de pescado en bruto o de residuos de aceite de ballena u otros casos), debe utilizarse un pHmetro como medio de indicacin del punto final.
Cuestionario 13.4.- Acidez en grasas 1.- Escribir la reaccin que tiene lugar durante la valoracin. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente las frmulas del apartado "clculos". 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.5
RESIDUO SLIDO EN GRASAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El objetivo es la determinacin de los residuos slidos insolubles en ter etlico i alcohol.
MATERIAL Balanza analtica. Desecador. Embudo cnico. Erlenmeyer de 250 ml Estufa de desecacin. Papel de filtro. Probeta de 25 ml. Varilla de vidrio. Vaso de pp de 100 ml.
REACTIVOS Alcohol etlico pa. ter etlico pa. Gel de slice (para el desecador)
METODOLOGA 1.- Poner un papel de filtro durante unos minutos en la estufa de desecacin a 105C, guardar en el desecador hora y pesar. 2.- Pesar, en un vaso de pp de 100 ml, alrededor de 10 gramos de muestra y disolver en 50 ml de mezcla de ter y alcohol a partes aproximadamente iguales. 3.- Filtrar sobre un erlenmeyer, lavando el vaso con un poco de mezcla ter-alcohol. 4.- Lavar el filtro con pequeas porciones de mezcla ter-alcohol hasta que quede desengrasado. 5.- Poner el filtro en la estufa durante 10 minutos, con cuidado de no perder el residuo, y despus durante hora en el desecador. 6.- Pesar el filtro con el residuo.
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CLCULOS El resultado se expresa en tanto por ciento de residuo slido insoluble:
En que m1 es el peso del papel de filtro, m2 el peso del papel de filtro con el residuo i m el peso de la muestra.
Cuestionario 13.5.- Residuo slido en grasas 1.- Realizar el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente las frmulas del apartado "clculos". 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.6
NDICE DE SAPONIFICACIN EN GRASAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El ndice de saponificacin se define como el peso en miligramos de hidrxido de potasio necesario para saponificar 1 gramo de grasa. Si la grasa es aceptablemente pura, el mtodo constituye un sistema de clasificacin de los aceites y grasas, puesto que el ndice de saponificacin est inversamente relacionado con la longitud de los cidos grasos constituyentes de los glicridos de la grasa. El mtodo es aplicable a aceites y grasas con un contenido de ceras no superior al 5 %.
MATERIAL Balanza analtica. Bureta. Matraces erlenmeyer de 250 ml, esmerilado 29/32 (2). Pipeta aforada de 25 ml. Placas calefactoras (2) Refrigerantes de reflujo, esmerilado 29/32 (2)
REACTIVOS cido clorhdrico 0'5N sv Potasio hidrxido 0'5N sv etanlica Fenolftalena sol. al 1 %.
METODOLOGA 1.- Pesar exactamente alrededor de 2 gramos de muestra en un erlenmeyer de 250 ml esmerilado. 2.- Aadir 25 ml exactos de potasio hidrxido 0'5N sv etanlica i adaptar el refrigerante de reflujo. 3.- Llevar a ebullicin y mantenerla durante 60 minutos. 4.- Retirar de la fuente de calor y aadir 4 o 5 gotas de indicador de Fenolftalena; valorar cuando todava est caliente con la disolucin de HCl 0'5N sv. 5.- Realizar un ensayo en blanco en las mismas condiciones.
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CLCULOS El resultado representa los miligramos de hidrxido de potasio necesarios para saponificar 1 gramo de grasa, y se expresa como "ndice de saponificacin":
en donde: N = Normalidad de la disolucin de cido clorhdrico utilizada V = Volumen utilizado (en ml) de disolucin de cido clorhdrico en el ensayo en blanco. V' = Volumen utilizado (en ml) de disolucin de cido clorhdrico en el ensayo de la muestra.
OBSERVACIONES Algunas grasas de difcil saponificacin necesitan un tiempo de reflujo superior a los 60 minutos.
Cuestionario 13.6.- ndice de saponificacin en grasas 1.- Escribir la reaccin de saponificacin (subapartados 2 y 3 de la metodologa). 2.- Escribir la reaccin de valoracin (subapartado 4 de la metodologa). 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Deducir razonadamente la frmula del apartado "clculos". 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.7
NDICE DE YODO EN GRASAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El ndice de yodo de una grasa depende de su grado de insaturacin (el yodo se fija en los enlaces insaturados de las cadenas de glicridos). Se determina aadindole a la muestra un exceso de reactivo halogenado y valorando el reactivo excedente.
MATERIAL Balanza analtica Bureta. Erlenmeyers de 250 ml, esmerilado 29/32, con tapn (2) Frasco lavador. Pipeta aforada de 10 ml. Pipeta aforada de 25 ml. Probeta de 10 ml. Probeta de 100 ml.
REACTIVOS Agua destilada Almidn soluble (disolver en agua caliente, hasta ebullicin). Yoduro de potasio 10 % p/v (disolver 50 gramos de yoduro de potasio pa, exento de yodo y yodatos hasta 500 ml en agua destilada) Tetracloruro de carbono pa inerte al reactivo de Hanus. Tiosulfato de sodio 0'1N sv Reactivo de Hanus 0'2N re.
METODOLOGA 1.- Pesar una cantidad de muestra entre 0'2 y 0'25 gramos, exenta de humedad, en matraz erlenmeyer de 250 ml, esmerilado. 2.- Disolver la muestra en 10 ml de tetracloruro de carbono. 3.- Aadir rpidamente 25 ml exactos de reactivo de Hanus. 4.- Tapar rpidamente y mezclar con agitacin suave. Dejar reposar en la oscuridad durante 1 hora, agitando de vez en cuando.. 5.- Aadir 20 ml de yoduro de potasio al 10 % y 100 ml de agua. Mezclar. 6.- Valorar con tiosulfato de sodio 0'1N, agitando constantemente, aadir el indicador de
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disolucin de almidn soluble un poco antes de finalizar la valoracin (viraje por decoloracin). 7.- Realizar una prueba en blanco en idnticas condiciones.
CLCULOS El ndice de iodo es el peso de iodo absorbido por cien partes en peso de grasa y se expresa como "ndice de yodo":
OBSERVACIONES Si no se dispone de reactivo de Hanus, puede prepararse disolviendo 10 gramos de yodo monobromuro prs en 500 ml de cido actico glacial pa (guardar en frasco topacio).
Cuestionario 13.7.- ndice de yodo en grasas 1.- Escribir la reaccin de fijacin del yodo en los enlaces insaturados. 2.- Cual es la funcin del yoduro de potasio en este procedimiento? 3.- Escribir la reaccin de valoracin (subapartado 6 de la metodologa) 4.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 5.- Deducir razonadamente la frmula del apartado "clculos". 6.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.8
NDICE DE PERXIDOS EN GRASAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Llamamos "ndice de perxidos" a los miliequivalentes de oxgeno activo contenidos en un Kilogramo de grasa, calculados a partir del yodo liberado del yoduro de potasio, operando en las condiciones especificadas segn la metdica analtica. Las substancias que oxidan al yoduro de potasio en las condiciones descritas, las consideramos perxidos u otros productos similares provenientes de la oxidacin de las grasa, por lo cual el ndice obtenido es considerado, con una aproximacin bastante aceptable, como una expresin cuantitativa de los perxidos de la grasa muestra.
MATERIAL Balanza analtica. Bureta. Frasco lavador Matraces erlenmeyer esmerilados 29/32, con tapn (2). Probeta de 10 ml. Probeta de 100 ml. Probeta de 25 ml
REACTIVOS Disolucin acuosa extempornea de tiosulfato de sodio 0'01N, preparada a partir de tiosulfato de sodio 0'1N sv (10 ml hasta 100 ml). Solucin indicadora de almidn al 1 %. Disolucin saturada de yoduro de potasio (preparacin extempornea a partir de yoduro de potasio pa). Agua destilada.
METODOLOGA 1.- Pesar una cantidad adecuada de grasa en un matraz erlenmeyer limpio y seco. 2.- Aadir 10 ml de cloroformo pa i disolver rpidamente la grasa por agitacin; aadir 15 ml de cido actico glacial pa y 1 ml de disolucin saturada de yoduro de potasio. 3.- Tapar el matraz y agitar suavemente por rotacin durante 1 minuto; dejar reposar 5 minutos en un lugar oscuro. 4.- Aadir 75 ml de agua destilada, sacudir con emerga y valorar el yodo liberado con disolucin de tiosulfato de sodio 0'01N, utilizando disolucin de almidn como indicador. 5.- Paralelamente, efectuar un ensayo en blanco.
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CLCULOS El ndice de perxidos (IP) se expresa en miliequivalentes de oxgeno activo por kilogramo de muestra:
en donde: V = volumen de disolucin de tiosulfato de sodio, en ml, consumido en el ensayo de la muestra. V' = volumen de disolucin de tiosulfato de sodio, en ml, consumido en el blanco. N = normalidad de la disolucin de tiosulfato de sodio. m = peso, en gramos, de la muestra.
OBSERVACIONES La cantidad de muestra a pesar ser: ndice supuesto 0 - 20 20 - 30 30 - 50 50 - 100 peso muestra (gramos) 1'2 - 2 0'8 - 1'2 0'5 - 0'8 0'3 - 0'5
Para aceites de ndices inferiores a 20, es recomendable utilizar tiosulfato de sodio 0'002N.
Cuestionario 13.8.- ndice de perxidos en grasas 1.- Escribir la reaccin entre los perxidos y el yoduro de potasio. 2.- Escribir la reaccin de valoracin (subapartado 4 de la metodologa). 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Deducir razonadamente la frmula del apartado "clculos". Deducir, adems. otra para ndices de yodo bajos (utilizando tiosulfato de sodio 0'002N). 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.9
FRACCIN INSAPONIFICABLE EN GRASAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS
Fraccin insaponificable de una grasa es el peso en gramos de substancias no saponificables, insolubles en agua y solubles en el disolvente empleado en la determinacin, contenidos en 100 gramos de grasa. El mtodo descrito es satisfactorio para grasas de contenido insaponificable bajo y medio.
MATERIAL Balanza analtica. Bao de agua. Desecador. Embudos de decantacin de 500 ml. Estufa de desecacin. Frasco lavador. Matraces esmerilados 29/32 de 250 ml (2) Montaje para destilacin. Placa calefactora. Probeta de 25 ml. Probeta de 50 ml. Refrigerante de reflujo.
REACTIVOS Agua destilada. Alcohol etlico del 96% pa. ter de petrleo pe 40-60 C pa. Gel de slice. Hidrxido de potasio 2N, sol. alcohlica (disolver 28'3 gramos de hidrxido de potasio del 85 % en lentejas pa. hasta 250 ml en alcohol etlico del 96 % pa).
METODOLOGA 1.- Pesar exactamente alrededor de 5 gramos de grasa exento de humedad en un matraz esmerilado 29/32. 2.- Aadir 50 ml de solucin alcohlica de hidrxido de potasio 2N y dejar 1 hora a reflujo suave. 3.- Separar la fuente de calor y aadir 50 ml de agua destilada por la parte superior del refrigerante ; sacudir y dejar enfriar. 4.- Transvasar el contenido del matraz a un embudo de decantacin, lavando el matraz con
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pequeas porciones de ter de petrleo, hasta totalizar 50 ml. 5.- Agitar enrgicamente durante 1 minuto. Dejar en reposo para separar las dos fases. Pasar la fase jabonosa hidroalcohlica otro embudo de decantacin . 6.- Extraer la fase jabonosa del segundo embudo de decantacin con 50 ml de ter de petrleo; separar les dos fases, transfiriendo la fase jabonosa al matraz de reflujo y la fase etrea al primer embudo de decantacin. 7.- Pasar la fase jabonosa del matraz de reflujo al segundo embudo de decantacin, lavando con 50 ml de ter de petrleo; hacer otra extraccin. 8.- Rechazar la fase jabonosa y reunir todas les fases etreas en el primer embudo de decantacin. Lavar tres veces con porciones de 50 ml de alcohol-agua (1:1). 9.- Transferir la fase etrea a un matraz de 250 ml esmerilado 29/32, seco i previamente tarado y eliminar el disolvente por destilacin al bao de agua hirviente (sugerencia: utilizar un montaje Shoxlet, para mayor comodidad). 10.- Secar en estufa a 105C durante 20 minutos y enfriar en desecador. Repetir la operacin hasta peso constante.
CLCULOS Resultado expresado en % de fraccin insaponificable:
siendo m' el peso del residuo insaponificable y m el peso de la muestra.
OBSERVACIONES En los certificados de anlisis debe indicarse "mtodo del ter de petrleo".
Cuestionario 13.9.- Fraccin insaponificable en grasas 1.- Escribir la reaccin de saponificacin de una grasa. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 13.10
CIDOS OXIDADOS EN GRASAS
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Este mtodo determina los cidos oxidados en una grasa, expresados como materia grasa insoluble en ter de petrleo.
MATERIAL Balanza analtica. Bao de agua. Cpsula de porcelana. Mechero Bunsen. Desecador. Embudos de decantacin (2). Estufa de desecacin. Frasco lavador. Horno de mufla, Matraces esmerilados 29/32 de 250 ml (2). Placa calefactora. Probeta de 100 ml. Probeta de 25 ml. Probeta de 50 ml Refrigerante de reflujo. Tringulo cermico.
REACTIVOS Acido clorhdrico 1N sv. Agua destilada. Alcohol etlico neutro 96 % pa. ter de petrleo 40-60C bidestilado pa. ter etlico pa. Gel de slice. Hidrxido de potasio 2N sv alcohlica ( para su preparacin, consultar la prctica 13.9).
METODOLOGA 1.- Pesar exactamente alrededor de 5 gramos de grasa exenta de agua en un matraz esmerilado 29/32 de 250 ml. 2.- Aadir 50 ml de disolucin alcohlica de hidrxido de potasio 2N y dejar 1 hora a reflujo suave.
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3.- Separar la fuente de calor aadir 25 ml de agua destilada por la parte superior del refrigerante ; sacudir y dejar enfriar. 4.- Transvasar el contenido del matraz a un embudo de decantacin, lavando con 25 ml de agua destilada y 100 ml de ter etlico pa. 5.- Tapar y sacudir durante 1 minuto. Dejar reposar para separar dos capas. Si aparece una emulsin persistente, aadir unas gotas de cido clorhdrico 1N sv. 6.- Separar la capa hidroalcohlica y transferirla al matraz de saponificacin; pasar la capa etrea a un segundo embudo de decantacin y lavarla dos veces con porciones de 40 ml de agua destilada; juntar las aguas de lavado con la fraccin hidroalcohlica 7.- Conectar el matraz de la fase hidroalcohlica y de las aguas de lavado del ter a un montaje para destilacin (puede servir un Shoxlet) y evaporar hasta eliminacin del alcohol etlico y de las trazas de ter (apreciar con el olfato). 8.- Trasvasar el contenido del matraz a un embudo de decantacin, arrastrar el residuo con agua destilada hasta totalizar un volumen aproximado de 150 ml. 9.- Aadir disolucin de cido clorhdrico 1N sv hasta que no quede espuma despus de sacudir durante 2 minutos (comenzar inicialmente con 51 ml de solucin cida). 10.- Aadir 100 ml de ter de petrleo y sacudir 1 minuto; dejar reposar un mnimo de 12 horas. 11.- Decantar el agua cida y filtrar la fraccin etrea sobre un filtro lento. 12.- Lavar dos veces el tubo de decantacin con 25 ml de ter de petrleo y filtrar (si es preciso, efectuar ms lavados con pequeas porciones). 13.- Disolver los cidos oxidados contenidos en el tubo decantacin y en el filtro con alcohol etlico caliente (3 o 4 lavados con porciones de 25 ml) y transferir la solucin alcohlica de cidos oxidados a un matraz esmerilado 29/32 de 250 ml. 14.- Evaporar el alcohol hasta un volumen muy pequeo (unos pocos ml). 15.- Transvasar el residuo a una cpsula de porcelana calcinada y tarada, lavando con pequeas porciones de ter etlico. 16.- Evaporar en bao de agua, hasta desaparicin del olor a ter y a alcohol y aparicin de olor acre. 17.- Desecar en estufa a 103C durante 1/2 hora; enfriar en desecador. Repetir el proceso hasta peso constante. 18.- Calcinar el residuo (para determinar las sales minerales extradas conjuntamente con los cidos oxidados), dejar enfriar la cpsula en el desecador y pesar.
CLCULOS Resultado expresado en % de cidos oxidados:
en donde: m' = peso en gramos de cidos oxidados + sales minerales. m'' = peso en gramos de las sales minerales. m = peso en gramos de la muestra.
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OBSERVACIONES El mtodo tiene un carcter eminentemente emprico y debe observarse estrictamente la metodologa descrita. Cualquier modificacin que se ensaye debe ser rigurosamente verificada y contratada.
Cuestionario 13.10.- cidos oxidados en grasas 1.- Que tipo de compuestos pueden originarse por oxidacin de los cidos grasos?; escribir la frmula de unos cuantos. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 15.1
IDENTIFICACIN DE ALMIDN (EN CRNICOS)
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS El almidn es identificable por dar coloracin azul con el yodo.
MATERIAL Balanza granataria. Frasco cuentagotas. Frasco lavador. Matraz erlenmeyer de 100 ml. Pipeta de 10 ml. Placa calefactora. Tubo de ensayo de 30 ml.
REACTIVOS Agua destilada. Solucin yodo-yodurada (mezclar 1 gramo de yodo resublimado prs y 2 gramos de yoduro de potasio pa en agua destilada hasta 200 ml. Guardar en frasco cuentagotas).
METODOLOGA Partir de muestra triturada: 1.- Introducir unos 10 grs de muestra finamente triturada en un erlenmeyer de 100 ml. 2.- Aadir unos 40 ml de agua destilada y llevar a ebullicin; mantener la ebullicin unos 5 minutos y despus enfriar exteriormente el matraz al chorro de agua fra. 3.- Tomar 10 ml del lquido inferior, con una pipeta a travs de la capa grasa superior, y pasarlos a un tubo de ensayo. 4.- Aadir 5 ml de disolucin yodo-yodurada; coloracin azul (o azul-negra) indica ensayo positivo.
Cuestionario 15.1.- Identificacin de almidn en productos crnicos 1.- Escribir la reaccin que tiene lugar en el subapartado 4 de la metodologa. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 15.2
AZCARES REDUCTORES
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Azcares reductores son aquellos que, como la glucosa, fructosa, lactosa y maltosa presentan un carbono libre en su estructura y pueden reducir, en determinadas condiciones, a las sales cpricas. El mtodo analtico se basa en la eliminacin de todas las materias reductoras que no sean azcares mediante defecacin con los reactivos Carrez I y II, previa dilucin de los azcares en medio hidroetanlico y valoracin de los azcares reductores segn el mtodo de Luff.
MATERIAL Agitador mecnico. Balanza analtica. Quemador Bunsen. Bureta de 25 ml. Embudo cnico. Frasco lavador. Frascos cuentagotas. Matraz aforado de 200 ml, Matraz aforado de 250 ml Matraces erlenmeyer esmerilados de 250 ml (2), Papel de filtro, Pipeta aforada de 10 ml, Pipetas aforadas de 25 ml (2), Pipetas aforadas de 5 ml (2), Pipetas graduadas de 25 ml (2), Placa calefactora, Probeta de 250 ml, Refrigerante de reflujo. Reloj. Tela metlica con agujero central de 6 cm de dimetro.
REACTIVOS Etanol al 40 % v/v. Disolucin de Carrez I (disolver 24 gramos de acetato de zinc pa y 3 gramos de acido actico glacial pa en agua destilada hasta 100 ml). Disolucin de Carrez II ( disolver 10'6 gramos de ferrocianuro potsico trihidrato pa y aadir agua destilada hasta 100 ml). Tiosulfato de sodio 0'1N sv.
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Disolucin de almidn soluble al 1% Disolucin de cido sulfrico 6N. Disolucin de yoduro de potasio al 30 % p/v Piedra pmez granulada. Alcohol iso-amlico pa. Reactivo de Luff de. Agua destilada.
METODOLOGA 1.- Pesar 2'5 gramos de muestra e introducirla en un matraz aforado de 250 ml. 2.- Aadir 200 ml de etanol al 40 %(v/v) y mezclar durante 1 hora en agitador mecnico. 3.- Aadir 5 ml de disolucin de Carrez I y agitar 1 minuto. 4.- Aadir 5 ml de disolucin de Carrez II y agitar 1 minuto. 5.- Enrasar a 250 ml con disolucin etanlica; homogeneizar y filtrar. 6.- Tomar 200 ml del filtrado y evaporar hasta reducir el volumen aproximadamente a la mitad. 7.- Transferir el residuo a un matraz aforado de 200 ml, lavando con agua caliente; enfriar, enrasar con agua destilada y filtrar en el caso de apreciar turbidez. 8.- Tomar 25 ml del reactivo de Luff y pasar a un erlenmeyer esmerilado de 250 ml. Aadir una cantidad de la disolucin del problema preparada en el punto 7 que no contenga ms de 60 mg de azcares reductores y cuyo volumen no sobrepase los 25 ml; aadir agua en cantidad suficiente para completar los 25 ml de disolucin problema. 9.- Aadir algo de piedra pmez y calentar con agitacin. 10.- Situar rpidamente el erlenmeyer sobre una tela metlica con un agujero de unos 6 cm de dimetro y calentar, regulando la llama de manera que solamente se caliente la base del erlenmeyer; acoplar inmediatamente un refrigerante de reflujo hervir durante 10 minutos exactos. 11.- Enfriar inmediatamente al chorro de agua fra durante 5 minutos. 12.- Aadir 10 ml de disolucin de yoduro potsico; seguidamente, y con cuidado, aadir 25 ml de cido sulfrico 6N. 13.- Valorar con disolucin de tiosulfato de sodio 0'1N hasta aparicin de coloracin amarillenta; aadir un chorrillo de disolucin de almidn y terminar la valoracin. 14.- Efectuar un ensayo en blanco, sin hervir, con 25 ml de reactivo de Luff, 25 ml de agua, 10 ml de disolucin de yoduro de potasio y 25 ml de disolucin de cido sulfrico.
CLCULOS Establecer, mediante la tabla adjunta, la cantidad de glucosa en miligramo que corresponde a la diferencia de los volmenes de tiosulfato consumido en las dos valoraciones. El resultado se expresa en % de azcares reductores, expresados en glucosa:
siendo q los miligramos de glucosa segn la tabla adjunta, v el volumen de la muestra en la valoracin i m el peso de la muestra en miligramos.
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OBSERVACIONES Si durante la ebullicin se formase una exagerada cantidad de espuma, aadir 1 ml de alcohol isoamlico (por la parte superior del refrigerante). Reservar el resto del lquido obtenido en el punto 7 y que no se utiliza, para la determinacin de azcares totales (prctica 15.3).
Para 25 ml de reactivo de Luff-Schoorl:

tiosulfato 0'1N ml 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 glucosa - fructosa mg 02'4 04'8 07'2 09'7 12'2 14'7 17'2 19'8 22'4 25'0 27'6 30'3 33'0 35'7 38'5 41'3 44'2 47'1 50'0 53'0 56'0 59'1 62'2 inc. 2'4 2'4 2'5 2'5 2'5 2'5 2'6 2'6 2'6 2'6 2'7 2'7 2'7 2'8 2'8 2'9 2'9 2'9 3'0 3'0 3'1 3'1 mg 03'6 07'3 11'0 14'7 18'4 22'1 25'8 29'5 33'2 37'0 40'8 44'6 48'4 52'2 56'0 59'9 63'8 67'7 71'7 75'7 79'8 83'9 88'0 lactosa inc. 3'6 3'7 3'7 3'7 3'7 3'7 3'7 3'7 3'8 3'8 3'8 3'8 3'8 3'8 3'9 3'9 3'9 4'0 4'0 4'1 4'1 4'1 mg 03'9 07'8 11'7 15'6 19'6 23'5 27'5 31'5 35'5 39'5 43'5 47'5 51'6 55'7 59'8 63'9 68'0 72'2 76'5 80'9 85'4 90'0 94'6 maltosa inc 3'9 3'9 3'9 3'9 3'9 4'0 4'0 4'0 4'0 4'0 4'0 4'1 4'1 4'1 4'1 4'1 4'2 4'3 4'4 4'5 4'6 4'6
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Cuestionario 15.2.- Azucares reductores 1.- Escribir las reacciones que tienen lugar en los subapartados 8 al 13 (inclusive) de la metodologa 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 15.3
AZCARES TOTALES
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Eliminacin de todas las materias reductoras que no sean azcares mediante defecacin con los reactivos de Carrez I y II, previa dilucin de los azucares en medio hidroetanlico Valoracin de los azcares segn el mtodo de Luff, previa inversin de todos ellos.
MATERIAL (Adems del necesario para la prctica 15.2) Bao de agua. Matraz aforado de 50 ml. Pipeta aforada de 25 ml Pipetas graduadas de 20 ml (2)
REACTIVOS (Adems de los necesarios para la prctica 15.2) cido clorhdrico 0'1N sv. cido clorhdrico 4N (1 parte de HCl con. pa y 2 partes de agua destilada) Disolucin de rojo de metilo al 0'1% en alcohol. Hidrxido de sodio 0'1N sv.
METODOLOGA 1.- Proceder como en los puntos 1 al 7 de la prctica 15.2. 2.- Tomar 50 ml de la disolucin anterior y llevar a un matraz aforado de 100 ml; aadir unas gotas de disolucin de rojo de metilo i, lentamente, cido clorhdrico 4N hasta viraje al rojo. 3.- Aadir 15 ml de cido clorhdrico 0'1N y sumergir en bao de agua a ebullicin durante 30 minutos. 4.- Enfriar hasta temperatura ambiente y aadir 15 ml de disolucin de hidrxido de sodio 0'1N; enrasar a 100 ml con agua y homogeneizar. 5.- Proceder como en los puntos 8 al 14 de la prctica 15.2.
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CLCULOS Establecer, mediante la tabla adjunta en la prctica 15.2, la cantidad de glucosa en miligramos. El resultado se expresa en % de azcares totales, expresados en glucosa:
siendo q los miligramos de glucosa segn la tabla, v el volumen de la muestra en la valoracin y m el peso de la muestra en miligramos.
OBSERVACIONES Si durante la ebullicin se formase una exagerada cantidad de espuma, adase 1 ml de alcohol isoamlico (por la parte superior del refrigerante). Puede expresarse el resultado en sacarosa, multiplicando la expresin en glucosa por el factor 0'95. El tanto por ciento de sacarosa es igual a la diferencia entre los azcares totales y los reductores, expresados en glucosa y multiplicado por el factor 0'95.
Cuestionario 15.3.- Azcares totales 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 15.4
ALMIDN (ESPECTROFOTOMETRA)
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Eliminacin de los azcares por extraccin, solubilizacin del almidn y reaccin colorimtrica con reactivo de antrona.
MATERIAL Balanza analtica. Bao de agua con regulacin de temperatura. Centrfuga. Embudo cnico. Espectrofotmetro. Frasco lavador. Escala. Matraz aforado de 200 ml. Matraz erlenmeyer de 100 ml. Matraces aforados de 100 ml (8) Papel de filtro. Papel milimetrado. Pipetas de 5 ml. Tubos de ensayo de 20 ml. Tubos de centrfuga de 100 ml, con tapn esmerilado. Tubos para espectrofotmetro.
REACTIVOS cido perclrico del 52% (preparado a partir de cido perclrico del 60% pa y agua destilada). Agua destilada. Alcohol etlico al 80 % (a partir de alcohol etlico del 96% pa y agua destilada). Alcohol etlico del 96 % pa. ter de petrleo 50-70C pa. Reactivo de antrona (preparacin extempornea, mximo 4 das a 0C; disolver 0'2 gramos de antrona pa en 100 ml de cido sulfrico del 96% pa).
METODOLOGA 1.- Pesar entre 0'4 y 2 gramos de muestra (segn sea el supuesto contenido de almidn) en un erlenmeyer de 100 ml. 2.- Aadir 25 ml de disolucin alcohol-ter, tapar y sacudir con energa durante 3 o 4 minutos.
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3.- Pasar a un tubo de centrfuga de 100 ml, lavando con un poco de alcohol-ter y centrifugar; decantar y reservar la disolucin alcohol-ter. 4.- Aadir 10 ml de alcohol etlico caliente al 80 %, sacudir y centrifugar; decantar y reservar la disolucin alcohlica. Repetir la extraccin con alcohol. 5.- Aadir 5 ml de agua destilada y agitar. 6.- Aadir 6'5 ml de disolucin de cido perclrico al 52% y agitar durante 5 minutos; dejar reposar 15 minutos. 7.- Aadir 20 ml de agua destilada y centrifugar. Pasar el lquido a un matraz aforado de 100 ml. 8.- Repetir los pasos 5 y 6, pero dejando reposar 30 minutos. 9.- Transferir todo (lquido y residuo) al matraz aforado, agitar, enrasar y homogeneizar. 11.- Filtrar; tomar 5 ml de filtrado y transferir a un matraz aforado de 200 ml, enrasar y homogeneizar . 12.- Pipetear 5 ml de la disolucin anterior a un tubo i aadir 10 ml de reactivo de antrona; mezclar y calentar durante 5 minutos en bao de agua a 100C; enfriar a continuacin a temperatura ambiente y determinar la absorbancia a 630 nm frente a un blanco con agua y reactivo, antes de que pasen 30 minutos. Curva patrn de glucosa 1.- Preparar una disolucin madre de glucosa, disolviendo 0'1 gramos de D(+)- glucosa anhidra pa hasta 100 ml en agua destilada. 2.- Preparar disoluciones de trabajo disolviendo 1, 2, 5, 7 i 10 ml de disolucin madre de glucosa hasta 100 ml en agua destilada; las concentraciones correspondientes son de 0'01, 0'02, 0'05, 0'07 y 0'10 mg/ml. 3.- Proceder con cada disolucin de trabajo como en el punto 12 de la metodologa y construir una curva de calibrado, representando las concentraciones de glucosa (abscisas) frente la absorbancia (ordenadas).
CLCULOS Determinar la concentracin correspondiente de glucosa en la curva de calibrado, expresndolo en glucosa equivalente.
C = concentracin de glucosa en la curva de calibrado en mg/ml. m = masa de muestra en gramos.
OBSERVACIONES Para muestras con un contenido alto de azcares, es preciso repetir ms veces las extracciones de los primeros pasos. Si queremos expresar el resultado como "almidn real", deber considerarse que el factor de conversin glucosa/almidn es de 1'06
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Cuestionario 15.4.- Almidn (espectrofotometra) 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 16.1
ANLISIS ORGANOLPTICO DEL VINO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Anlisis basado en la observacin visual y olfativa y degustacin del vino.
MATERIAL Copas de cristal fino, incoloras y perfectamente transparentes, de forma ovoide o de tulipa. Servilleta. Cuchillo pequeo. Sacacorchos de espiral.
METODOLOGA 1.- Sacar los precintos del tapn, cortando alrededor del cuello de la botella y a medio dedo de la boca de la misma; limpiar la boca de la botella con una servilleta limpia y inodora. 2- Extraer el tapn, con ayuda del sacacorchos, con cuidado de no atravesarlo y tirar una pequea porcin del vino (para eliminar eventuales restos del corcho). 3.- Llenar la copa a 1/3 de su capacidad, observando si se forman burbujas ms o menos persistentes (anotar); sostener la copa por la base, utilizando los dedos pulgar, ndice y central. 4.- Apreciar visualmente el color. 5.- Agitar el vino en la copa y observar el aspecto y caractersticas de la espuma formada. 6.- Observar si el vino es turbio, claro o brillante y la presencia de depsitos (prueba de nitidez). 7.- Agitar con suavidad, haciendo girar el vino y oler, apreciando y caracterizando el olor. 8.- Catar el vino, sin apurar la copa, hacindolo deslizar suavemente por la lengua y dejndolo unos segundos en el interior de la boca antes de tragarlo o escupirlo. 9.- Si hay que realizar otros anlisis organolpticos, enjuagarse la boca con agua mineral.
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS Utilizar las siguientes calificaciones de color para vinos tintos o rojos: - rojo rub - morado - cebolla - viraje amarillento. Segn la intensidad del color, el vino tinto se clasifica en: - negro (tambin llamado tinto) - rosado - clarete segn tenga ms o menos color dentro de estas clasificaciones, diremos que tiene mucha o poca
capa.
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En vinos blancos, utilizar las siguientes nomenclaturas de color: - verde - casi incoloro - amarillo - dorado - ambarino - paja - paja oscura ( rancia) Formacin de espuma; observar la cantidad, la persistencia y el color. Los pasos 7 y 8 de la metodologa consisten en la "degustacin o cata"; deben consignarse: olores:
vinoso, afrutado, floral, joven, cido, intenso, suave, amaderado, as como olores que puedan denotar defectos o alteraciones.
paladar:
con cuerpo, aterciopelado, ligero, fresco, cido, agrio, etc.

La apreciacin aproximada del grado alcohlico se hace en la degustacin, as como la del tiempo, si bien en esta ltima apreciacin tambin Puede ayudar la observacin visual.
OBSERVACIONES Si hay que efectuar una cantidad relativamente alta (ms de 3 4) de anlisis organolpticos, no debe ingerirse el vino, a fin de evitar alteraciones en la capacidad analtica del laborante. Debern abstenerse de efectuar esta prctica aquellas personas que sufran alguna patologa en que el vino resulte contraindicado (alcoholismo, hepatopatias, etc...) Durante las horas anteriores al anlisis organolptico no se deben comer huevos ni queso, ni beber ningn tipo de bebida alcohlica, ni fumar ni tomar ningn alimento o bebida que dejen sabor persistente.
Cuestionario 16.1.- Anlisis organolptico del vino 1.- Por qu no deben comerse huevos durante las horas inmediatamente anteriores a la prctica?. 2.- Por qu no debe comerse queso durante les horas inmediatamente anteriores a la prctica? 3.- Hacer un informe ("nota de cata") para cada uno de los vinos analizados donde se har constar (no utilizar boletines de anlisis; hacerlo en hojas corrientes de papel): color y intensidad del color capa del color cantidad, persistencia y color de la espuma (si la hay) olores paladar apreciacin aproximada del grado alcohlico.
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Ref: 16.2
TTULO ALCOHOMTRICO DEL VINO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se define el ttulo alcohomtrico como la cantidad de litros de alcohol contenidos en 100 litros de vino, medidos ambos a la temperatura de 20C. Se determina por destilacin simple del vio, en medio alcalino (para evitar arrastres de la acidez voltil) y determinando el contenido alcohlico del destilado mediante medicin de su densidad.
MATERIAL Aermetro. Frasco lavador. Matraz aforado de 250 ml. Montaje por destilacin, competo, con columna rectificadora. Pipeta de 10 ml. Probeta de 250 ml.
REACTIVOS Agua destilada. Lechada de cal (120 gramos de xido de calcio escoriforme pr hasta 1000 ml en agua destilada. Papel indicador. Piedra pmez.
METODOLOGA 1.- Medir 250 ml de vino en matraz aforado y anotar la temperatura. 2.- Introducir el vino en un matraz de destilacin, con unos trocitos de piedra pmez, lavando 3 4 veces el matraz aforado con pequeas porciones de agua destilada. 3.- Aadir 10 ml de lechada de cal. Tomar una gota con una varilla de vidrio y comprobar la alcalinidad con papel indicador; si el medio no es alcalino, aadir ms lechada de cal. 4.- Montar el equipo de destilacin y destilar, recogiendo el destilado en el mismo matraz aforado utilizado para medir el vino, previamente lavado con agua destilada, conteniendo unos 20 ml de agua destilada, en la cual se sumerge el pico de un tubo-alargadera desde el extremo de salida del refrigerante. 5.- Destilar hasta obtener un volumen, como mnimo, de unos 200 ml. 6.- Agitar y enrasar con agua destilada; homogeneizar. 7.- Transferir el lquido a una probeta y determinar el grado alcohomtrico con un aermetro graduado en grados alcohlicos aparentes (utilizar lupa si se presentan dificultades de lectura y hacer tres lecturas como mnimo).
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CLCULOS Calcular el grado alcohlico internacional OIV a 20C, utilizando la tabla adjunta , aadiendo o restando al grado alcohlico aparente (fila superior) a tC la correccin correspondiente.
OBSERVACIONES Para vinos jvenes, de aguja o espumosos (Ribeiro, Empord, cavas, etc..) eliminar previamente el gas carbnico antes de proceder a la metodologa general. Agitar enrgicamente 250 ml de vino en un matraz de 500 ml bien seco, al que se habrn aadido 3 gotas de solucin al 1 % de silicona soluble. montaje destilacin:
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Cuestionario 16.2.- Ttulo alcohomtrico del vino 1.- Cual es la funcin de la piedra pmez en el procedimiento analtico? 2.- Cual es la funcin de la lechada de cal? 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis" 5.- Disear un mtodo alternativo para la determinacin del ttulo alcohomtrico que no est basado en la determinacin de la densidad (sugerencia: puede servir un mtodo ptico).
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Ref: 16.3
ACIDEZ VOLTIL DEL VINO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS La acidez voltil del vino es debida a las substancias cidas voltiles, generalmente cidos grasos ligeros de la serie actica. Se determina por arrastre con vapor de agua y rectificacin de los vapores. No se considera la acidez debida al CO2 libre, que debe eliminarse, ni la del anhdrido sulfuroso libre o combinado , que hay que corregir segn el mtodo de Jaulmes, en el que se considera la influencia del SO2 combinado como la mitad de la del SO2 libre.
MATERIAL Aparato de destilacin segn esquema adjunto. Balanza granataria. Bureta. Cuentagotas. Frasco lavador. Matraz erlenmeyer de 500 ml. Pipeta aforada de 20 ml.
Montaje para determinacin de acidez voltil del vino:
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REACTIVOS cido clorhdrico concentrado pa. cido L(+)tartrico pa. Agua de cal. Agua destilada. Disolucin de yodo 0'01N (diluir yodo 0'02N sv en agua destilada). Fenolftalena al 1% en alcohol. Hidrxido de sodio 0'1N sv Yoduro de potasio, cristales, pa. Almidn soluble, solucin al 1 %. Sodio tetraborato decahidratado, disolucin saturada.
METODOLOGA 1.- Alimentar el generador de vapor con agua de cal o agua de barita; poner en el burbujeador 20 ml de vino exento de gas carbnico (ver prctica 16.2). 2.- Aadir al vino unos 0'5 gramos de cido L(+)-tartrico pa. 3.- Poner en funcionamiento el generador de vapor, manteniendo abierta la salida del tubo purgador de vapor; despus de cerrar esta, calentar el burbujeador (durante la operacin, regular que el volumen de lquido en el burbujeador no sobrepase en exceso de los 20 ml iniciales. 4.- Destilar 250 ml en unos 10 minutos. 5.- Valorar con hidrxido de sodio 0'1N, en presencia de Fenolftalena 6.- Valorar el sulfuroso libre, aadiendo una gota de HCl concentrado pa y valorar el SO2 libre con solucin de yodo 0'01N, aadiendo 2 ml de solucin de almidn soluble (indicador) y un cristal de yoduro de potasio pa. 7.- Determinar el cido sulfuroso combinado con acetaldehdo, aadiendo 20 ml de disolucin saturada de tetraborato sdico decahidratado pa (el lquido toma una coloracin rosa plido) y valorar de nuevo con disolucin de yodo 0'01N.
CLCULOS Se calcula la acidez voltil expresada en gramos/litro de cido actico.
en donde: V = volumen en ml de NaOH 0'1N V' = volumen en ml de yodo 0'01N en la oxidacin del sulfuroso libre V'' = volumen en ml de yodo 0'01N en la oxidacin del sulfuroso combinado.
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OBSERVACIONES Contenidos altos de cido srbico falsean el resultado, por lo cual conviene hacer una determinacin aparte de cido srbico a fin de efectuar la correspondiente correccin. Puede substituirse el montaje de destilacin especfico de la acidez voltil por un destilador Kjeldhal semimicro, perfectamente limpio, sin ningn residuo de disolucin de sosa en el interior del cuerpo, trabajando con volmenes de muestra inferiores y efectuando las correcciones adecuadas en el mtodo de trabajo y en los clculos correspondientes.
Cuestionario 16.3.- Acidez voltil del vino 1.- Escribir las reacciones de los subapartados 5, 6 y 7 de la metodologa. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 16.4
ACIDEZ TOTAL DEL VINO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS La acidez total del vino se define como el total de cidos titulables al llevar el vino a pH = 7 por adicin de una solucin alcalina valorada. No se consideren como integrantes de la acidez total al anhdrido sulfuroso libre o combinado ni al cido carbnico. Para realizar esta prctica, es preciso hacer antes la 16.3 con una muestra del mismo vino problema.
MATERIAL Bureta de 25 ml. Matraz Kitasato de 2 litros. pHmetro con electrodo de vidrio. Pipeta aforada de 20 ml. Placa magntica agitadora con imn de tefln. Probeta de 250 ml. Tapn ajustable al matraz Kitasato. Trompa de vaci. Vaso de pp de 100 ml.
REACTIVOS Hidrxido de sodio 0'1N sv.
METODOLOGA 1.- Poner entre 100 y 200 ml de vino en un matraz Kitasato de 2 litros y hacer el vaco para eliminar el CO2; desconectar el vaco en el momento en que se detiene el desprendimiento de burbujas. 2.- Tomar 20 ml del vino desgasificado y transferir a un vaso de 100 ml. 3.- Situar el vaso sobre una placa magntica, instalar el montaje para la medicin potenciomtrica del pH y aadir mediante una bureta disolucin de hidrxido de sodio 0'1N sv, hasta que el pHmetro marque pH = 7.
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CLCULOS Se expresa en meq/litro, segn la expresin:
Tambin puede expresarse en gramos de cido tartrico:
siendo: V = volumen en ml de NaOH 0'1N. V' = volumen en ml de yodo 0'01N utilizado para la oxidacin del anhdrido sulfuroso libre (prctica 16.3) V'' = volumen en ml de yodo 0'01N utilizado para la oxidacin del anhdrido sulfuroso combinado (prctica 16.3).
OBSERVACIONES Algunos laboratorios y organismos enolgicos, consideran como punto de viraje el de pH = 8'2 en lugar de 7, por tratarse de una valoracin de cidos dbiles con una base fuerte.
Cuestionario 16.4.- Acidez total del vino 1.- Escribir la reaccin que tiene lugar durante la valoracin. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 16.5
EXTRACTO SECO TOTAL DEL VINO
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Se conoce como extracto seco o materia seca total al conjunto de substancias no evaporables por destilacin. Se calcula indirectamente midiendo la densidad del "residuo sin alcohol", es decir la que tendra el vino sin alcohol, restituyendo el volumen correspondiente con agua.
MATERIAL Densmetro. Frasco lavador. Matraz aforado de 250 ml. Montaje para destilacin, completo, con columna rectificadora. Probeta de 250 ml.
REACTIVOS Agua destilada. Piedra pmez.
METODOLOGA 1.- Destilar el vino tal como se describe en la prctica 16.2, pero sin adicionar lechada de cal. 2.- Pasar el residuo de destilacin al matraz en el que se midi el volumen, lavando el matraz de destilacin con agua destilada; enrasar y homogeneizar. 3.- Determinar la densidad.
CLCULOS El extracto seco se expresa como la cantidad de sacarosa que, disuelta en agua hasta 1 litro, da una disolucin de la misma densidad que el residuo sin alcohol, referido a 20C, segn la frmula siguiente:
en que d es la densidad del destilado en g/cc (con una precisin mnima de hasta la milsima) y F es un factor de clculo emprico que depende de la densidad y que se determina con el grfico adjunto:
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Cuestionario 16.5.- Extracto seco total del vino 1.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 16.6
ACIDEZ TOTAL DEL VINAGRE
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS La acidez total del vinagre se determina mediante una volumetra de neutralizacin en presencia de Fenolftalena alcohlica como indicador.
MATERIAL Bureta de 50 ml. Matraz erlenmeyer de 250 ml. Pipeta aforada de 10 ml.
REACTIVOS Agua destilada. Fenolftalena alcohlica al 1 %. Hidrxido de sodio 0'5N sv.
METODOLOGA 1.- Medir 10 ml de vinagre y transferir al matraz erlenmeyer. 2.- Aadir agua destilada suficiente (100 ml como mnimo), recin hervida y fra, para conseguir una coloracin suficientemente dbil como para poder apreciar el viraje de la Fenolftalena. 3.- Aadir 6 gotas de disolucin de Fenolftalena y valorar con hidrxido de sodio 0'5N hasta viraje a rosado.
CLCULOS El resultado se expresa en gramos de cido actico por 100 ml de vinagre:
siendo a el volumen, en ml, de hidrxido de sodio 0'5N.
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Cuestionario 16.6.- Acidez total del vinagre 1.- Escribir la reaccin de valoracin (subapartado 3 de la metodologa). 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis". 5.- Describe una metodologa para un vinagre suave y de coloracin extraordinariamente intensa.
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Ref: 17.1
GRASA EN LECHE
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS La grasa se extrae con disolventes orgnicos y se determina gravimtricamente su contenido.
MATERIAL Balanza analtica. Baln de 250 ml, esmerilado. Desecador. Embudo de decantacin de 300 ml. Estufa de desecacin. Matraz erlenmeyer esmerilado, de 250 ml, con tapn. Montaje para destilacin. Pipeta aforada de 2 ml. Probeta de 10 ml. Probeta de 25 ml.
REACTIVOS Agua destilada. Alcohol etlico 96% v/v pa. Amonaco al 25 % pa. ter de petrleo de pe 40-60C pa. ter etlico pa exento de perxidos.
METODOLOGA 1.- En un matraz erlenmeyer esmerilado de 250 ml se pesan unos 10 ml de leche. Si la muestra no es homognea (puede suceder si se trata de leche natural, no homogeneizada), se calientan lentamente en un vaso de pp de 250 ml unos 100 ml de leche, hasta 35C y se agita suavemente hasta disolver los grumos, evitando la formacin de espuma; dejar enfriar y pesar unos 10 ml en el matraz erlenmeyer esmerilado de 250 ml. 2.- Aadir 1'5 ml de disolucin de amonaco al 25 % y mezclar; aadir 10 ml de alcohol etlico del 96 % v/v y mezclar con suavidad. 3.- Aadir 25 ml de ter etlico pa, cerrar el erlenmeyer y agitar vigorosamente durante 1 minuto, abriendo de vez en cuando el tapn, con cuidado. 4.- Aadir 25 ml de ter de petrleo, lavando el cuello del matraz y el tapn; cerrar y agitar, esta vez con suavidad, durante 30 segundos. 5.- Transferir a un embudo de decantacin, lavando con un poco de los disolventes y de agua destilada.
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6.- Dejar en reposo hasta la total separacin de dos capas (lnea de separacin bien definida y capa superior completamente ntida. 7.- Trasvasar la capa inferior al matraz erlenmeyer, despacio, mediante la llave del embudo. 8.- Aadir unos 10 ml de agua destilada al embudo de decantacin; agitar 30 segundos, dejar separar las dos capas y pasar la capa inferior al erlenmeyer; repetir de nuevo con 10 ml de agua destilada. Pasar la capa inferior al erlenmeyer esmerilado de 250 ml. 9.- Repetir dos veces los pasos 3 al 8, pero esta vez utilizando 15 ml de ter etlico y 15 de ter de petrleo en los pasos 3 y 4. 10.- Transferir la capa superior del embudo de decantacin a un baln esmerilado, limpio, seco y tarado y evaporar por destilacin hasta que no persista olor de disolvente; desecar en la estufa hasta peso constante.
CLCULOS El resultado se expresa en % de grasa:
expresin en la cual: m1 = peso del baln con el residuo graso. m2 = peso del baln. p1 = peso del erlenmeyer lleno de muestra. p2 = peso del erlenmeyer.
OBSERVACIONES a).- El mtodo es utilizable en leche en polvo, condensada o evaporada, previa conversin en leche lquida. Se pesa la cantidad necesaria para hacer 100 ml de leche lquida, se restituye con 80 ml de agua destilada, se pasa a matraz aforado de 100 ml, lavando con agua destilada y enrasando y homogeneizando; a partir de aqu se procede como en la metodologa descrita. Los 10 ml de leche se toman con pipeta aforada y no es preciso pesarlos; los clculos son:
siendo m la cantidad de leche pesada. b).- Verificar que el ter etlico est totalmente exento de perxidos (peligro de explosin). Ensayo de perxidos en ter.- Transferir 10 ml de ter etlico a una probeta esmerilada provista de tapn de vidrio, limpia y seca; aadir 1 ml de disolucin al 10 % de yoduro de potasio recin preparado, agitar y dejar 1 minuto en reposo. No debe formarse coloracin amarilla en ninguna de las dos capas.
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Conservacin del ter etlico.- Sumergir lminas de zinc en tiras (80 cc por litro, por lo menos), preparadas sumergiendo zinc pa en una disolucin cida diluida de sulfato cprico pentahidrato pa durante 1 o 2 minutos y lavar despus con agua destilada.
Cuestionario 17.1.- Grasa en leche 1.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 17.2
FENOLFTALEINA EN LA LECHE EN POLVO

OBJETIVO I FUNDAMENTOS Frecuentemente, a la leche en polvo destinada al consumo animal se le aade Fenolftalena, fcilmente identificable en presencia de disolucin alcalina, a fin de evitar que sea destinada al consumo humano.
MATERIAL Frasco lavador. Pipeta de 2 ml. Probeta de 10 ml. Tapn para tubo de ensayo. Tubo de ensayo.
REACTIVOS Agua destilada. Hidrxido de sodio 2N sv.
METODOLOGA 1.- Poner unos 0'5 gramos de leche en polvo en un tubo de ensayo , aadir 10 ml de agua destilada y agitar hasta conseguir una emulsin uniforme. 2.- Aadir 2 ml de disolucin de hidrxido de sodio 2N sv. 3.- Observar; la presencia de Fenolftalena en la muestra se manifiesta por la aparicin de puntos de color rojo-rosado que van aumentando su tamao e intensificando su color, para ir desapareciendo despus de un tiempo.
Cuestionario 17.2.- Fenolftalena en la leche en polvo 1.- A veces, la leche destinada a consumo animal se somete a un proceso de desengrasado ("desnatado") y la grasa es parcialmente restituida por aceites vegetales de baja calidad. Sugerir un procedimiento para detectar esta eventualidad. 2.- Otra manera de desnaturalizar la leche en polvo consiste en la adicin de harina de alfalfa deshidratada finamente molida. Como se detecta fcilmente esa eventualidad?, 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 17.3
LACTOSA EN LA LECHE
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Este es el mtodo descrito en la norma FIL-28:1964 de la Federacin Internacional de Lechera. El mtodo es aplicable a las leches naturales, homogeneizadas, esterilizadas i, previa reconstitucin, a las leches concentradas, evaporadas, condensadas y en polvo. El contenido en lactosa se determina indirectamente, una vez la leche desproteinizada, por valoracin de la cantidad de halgeno reducido al final de la reaccin entre la lactosa y el reactivo de yoduro potsico-cloramina.
MATERIAL Bureta. Embudo cnico. Frasco lavador. Matraz aforado de 100 ml. Matraces erlenmeyer con tapn, de 100 ml (2) Papel de filtro. Pipeta aforada de 20 ml. Pipetas aforadas de 10 ml (3) Pipetas aforadas de 5 ml (2) Probeta de 25 ml.. Probeta de 50 ml.
REACTIVOS cido clorhdrico 2N sv. Agua destilada. Disolucin de cloramina T 0'040N (5'70 gramos/litro). Yoduro de potasio (disolucin incolora extempornea al 10 %, de yoduro de potasio pa en agua destilada). Almidn soluble, sol al 1 %. Reactivo de cido tungstnico (disolver 7 gramos de tungstato de sodio 2-hidrato pa en 870 ml de agua destilada; aadir 0'1 ml de cido ortofosfrico al 85% pa y 70 ml de cido sulfrico 1N sv). Solucin de almidn soluble al 1 % Tiosulfato de sodio 0'05N (Disolver 25 ml de tiosulfato de sodio 1N sv hasta 500 ml en agua destilada).
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METODOLOGA 1.- Tomar 10 ml de leche homogeneizada (ver prctica 10.1) y pasar a un matraz aforado de 100 ml. 2.- Aadir 25 ml de agua destilada, 40 ml del reactivo de cido tungstnico y mezclar suavemente; completar, a continuacin, con agua destilada hasta el enrase, mezclar y dejar que sedimente el precipitado. 3.- Filtrar y recoger en un matraz seco. 4.- Tomar 10 ml del filtrado y transferir a un matraz erlenmeyer de 100 ml. 5.- Aadir 5 ml de la disolucin de yoduro de potasio y 20 ml de disolucin de cloramina T; mezclar, tapar y mantener en la oscuridad durante 1 1/2 horas a temperatura ambiente. 6.- Aadir un poco de agua destilada y 5 ml de disolucin de cido clorhdrico 2N. 7.- Valorar con disolucin de tiosulfato de sodio 0'05N, aadiendo indicador de almidn soluble cuando falte poco para el final de la valoracin. 8.- Efectuar un ensayo en blanco siguiendo exactamente el mtodo descrito, pero utilizando 10 ml de agua destilada en lugar del filtrado de leche.
CLCULOS Considerando las disoluciones efectuadas y que un ml de tiosulfato 0'05N equivale a 0'0072 gramos de lactosa, expresando el contenido de lactosa en gramos/litro: lactosa(gramos/litro) = f7'2tV siendo V el volumen de disolucin de tiosulfato (al que se le ha restado el volumen correspondiente del blanco), t un factor para corregir el volumen de precipitado (0'992 para leche entera y 0'996 por leche desnatada) y f el factor de la disolucin de tiosulfato.
OBSERVACIONES La disolucin de tiosulfato es muy inestable y debe ser de preparacin extempornea o, en todo caso, debe determinarse el factor antes de cada valoracin.
Cuestionario 17.3.- Lactosa en leche 1.- Describir las reacciones de los subapartados 2, 4 y 7 de la metodologa. 2.- Deducir razonadamente la frmula utilizada en los clculos. 3.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 4.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis
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Ref: 19.1
CAROTENOS Y XANTOFILAS EN EL PIMENTN
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Los colorantes naturales vegetales carotenos y xantofilas presentan una retencin selectiva sobre almina. La concentracin de carotenos o xantofilas de cada fraccin separada se determinan espectrofotomtricamente.
MATERIAL Balanza analtica. Columna cromatogrfica con sistema de vaco, segn esquema adjunto, de unos 2 cm de F. Embudo cnico. Embudo pequeo para slidos. Frasco lavador. Matraz aforado de 100 ml. Matraces aforados de 50 ml (2) Pesasustancias. Pipeta aforada de 1 ml. Pipeta aforada de 2 ml. Pipetas aforadas de 25 ml. Pipetas aforadas de 5 ml. Pipetas graduadas de 5 i 10 ml. Probetas de 100 y 50 ml. Espectrofotmetro. Cubetas para lectura espectrofotomtrica
REACTIVOS Agua destilada. Almina para cromatografa en columna, actividad media. Disolucin de Na2SO4 al 10 % (disolver 50 gramos de sulfato de sodio pa hasta 500 ml en agua) Disolucin patrn de Sudn I [disolver 0'1241 gramos de Sudan I pa en 500 ml de acetonaisopropanol (1/1) pa]. Disolvente HAET (hexano, acetona, etanol y i tolueno, todos de calidad pa, en las proporciones 10/7/6/7). Hexano pa. Hexano-acetona 90/10 (calidad pa en las proporciones indicadas). Hexano-acetona 96/4 (calidad pa en las proporciones indicadas). Hexano-acetona-metanol 80/10/10 (calidad pa en las proporciones indicadas).
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KOH al 40 %, disolucin metanlica (disolver 47'1 gramos de hidrxido de potasio pa del 85% en alcohol metlico hasta 100 ml y filtrar con placa porosa si se presentara residuo insoluble). Na2SO4 anhidro pa.
METODOLOGA 1.- Pesar exactamente alrededor de 0'5 gramos de harina de pimentn y pasar a un matraz aforado de 100 ml. 2.- Pipetear 30 ml de disolvente HAET en matraz aforado; tapar y agitar 1 minuto. 3.- Aadir 1 ml de agua, tapar, agitar 1 minuto y dejar reposar 16 horas en la oscuridad. 4.- Aadir 2 ml de disolucin metanlica de KOH al 40 %, agitar 1 minuto y dejar reposar 1 hora en la oscuridad. 5.- Aadir, con pipeta, 30 ml de hexano, agitar 1 minuto y aadir disolucin de Na2SO4 al 10 % hasta llenar parte del cuello del matraz (no es preciso enrasar exactamente); tapar y agitar con energa durante 2 minutos. 6.- Dejar reposar 1 hora en las oscuridad. 7.- Preparar una columna cromatogrfica al vaco segn el esquema. Llenarla asta 10-12 cm con almina, adicionando la almina en capas pequeas y presionando con suavidad; pone encima una capa de 1 cm de sulfato de sodio anhidro. 8.- Poner 5 ml de la capa superior (zona del cuello) del matraz en la columna; hacer vaco muy suave hasta que los 5 ml aadidos queden absorbidos en la parte superior de la columna. 9.- Pasar por la columna hexano-acetona(96/4), hasta que comience a salir lquido por la parte inferior de la columna. 10.- Pasar hexano-acetona(90/10) hasta eluir la banda de carotenos, recogiendo el lquido en un matraz aforado de 50 ml; llevar a volumen con hexano-acetona(90/10) y homogeneizar. 11.- Pasar hexano-acetona-metanol (80/10/10) hasta elucin de la banda de les xantofilas, recogiendo el lquido en un matraz aforado de 50 ml; llevar a volumen con el mismo disolvente y homogeneizar. 12.- Leer en espectrofotmetro la absorbancia de la disolucin de carotenos a 435 nm y la de la disolucin de xantofilas a 475 nm, frente a un blanco de los disolventes empleados en cada caso. Determinacin de los factores de correccin del espectrofotmetro 1.- Recalibrar el espectrofotmetro de manera que entre 470 y 480 nm, la absorbancia de la disolucin patrn de sudan I (acabada de preparar), tenga el mximo de absorbancia a 475 nm. 2.- Determinar la absorbancia de la disolucin extempornea de patrn de sudan I, a 435 nm y a 475 nm y calcular los factores de correccin.
CLCULOS El resultado se expresa en miligramos/kg (ppm):
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expresiones en las cuales: A435 = Absorbancia a 435 nm. A474 = Absorbancia a 475 nm. Vf = Volumen final de la porcin eluida. Vd = Volumen de la porcin que se pasa por columna. F435 = Factor de correccin espectrofotomtrico a 435 nm. F475 = Factor de correccin espectrofotomtrico a 475 nm. m = peso de la muestra en gramos. Los valores de los factores de correccin son:
en donde los Ao son las absorbancias de la disolucin patrn de sudan I.
OBSERVACIONES El mtodo es aplicable, cambiando la cantidad a pesar y los volmenes de elucin y de enrase de los eluidos, parra alfalfa deshidratada, maz, curry y piensos de contenido graso moderado.
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Cuestionario 19.1.- Carotenos y xantofilas en pimentn 1.- Deducir razonadamente las frmulas utilizadas en los clculos (considerando que la actividad ptica del sudan I en las condiciones mencionadas equivale a la de 255 mg de carotenos y 212 mg de xantofilas, considerando las eluciones hasta el punto 9). 2.- Que objeto tiene la adicin de KOH (subapartado 4 de la metodologa)? 3.- Por que motivo se deja reposar la muestra en la oscuridad en los puntos 3, 4 y 6 de la metodologa? 4.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 20.1
HARINA DE PLUMAS (MICROSCOPA)
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS La harina de plumas tiene un alto contenido de protenas, pero se trata de protenas de difcil digestin, es decir, de baja calidad nutritiva. No se utiliza en preparados alimentarios para consumo humano, estando limitado su uso para los piensos de consumo animal. Tambin se utiliza fraudulentamente para adulterar harinas de carne o de pescado. La harina de plumas es identificable microscpicamente.
MATERIAL Microscopio y accesorios para microscopa.
REACTIVOS Lactofenol (mezclar 20 gramos de cido fnico, 10 gramos de cido lctico, 20 gramos de glicerina y 10 gramos de agua destilada, todos ello de calidad para microscopa).
METODOLOGA 1.- Poner 2 gotas de lactofenol en un porta, extenderlo y dejar caer, con ayuda de una esptula vibratoria, una pequesima cantidad de muestra finamente pulverizada. 2.- Tapar con el "cubre" y observar en el microscopio a 200-400 aumentos; la presencia de plumas se manifiesta por la visualizacin de pequeas estructuras en forma de "caa de bamb".
Cuestionario 20.1.- Harina de plumas (microscopa) 1.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 2.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis".
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Ref: 22.1
CIDOS GRASOS POR CG
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Los steres metlicos de los cidos grasos pueden ser separados y cuantificados por cromatografa de gases. La separacin y cuantificacin de los cidos grasos constituye un mtodo fiable y rpido para la tipificacin y clasificacin de una grasa. La metilacin tiene lugar en dos fases; una primera fase consiste en la interaccin con metilato de sodio como agente saponificante en medio metanlico (agente esterificante) y una segunda fase mediante la accin del metanol acidificado con cido clorhdrico.
MATERIAL Balanza analtica. Balanza granataria. Baln de 250 ml, esmerilado. Columna de las caractersticas indicadas en la metodologa. Cromatgrafo de gases provisto de registrador-integrador, equipamiento complementario y detector de ionizacin de llama. Cronmetro. Fluxmetro de burbuja. Matraz aforado de 100 ml. Microjeringa para C.G., graduada, de 10 l. Pipetas aforadas de 25 ml. Placa calefactora. Refrigerante de reflujo. Tubos de ensayo, de 10 ml, con tapn roscado.
REACTIVOS cido clorhdrico 1'25N en alcohol metlico (Obtener cido clorhdrico gaseoso y anhidro dejando caer cido sulfrico gota a gota sobre cido clorhdrico concentrado, segn se ve en el esquema adjunto. Trabajar en vitrina de gases y tomar las debidas precauciones para evitar succiones, observando continuamente el proceso. La cantidad absorbida de HCl se determina por pesadas sucesivas, hasta llegar a una concentracin ligeramente superior a la deseada. Se admite cierta tolerancia, por la cual podemos utilizar una balanza granataria). Aire sinttico cualidad cromatogrfica. Disolucin saturada de NaCl (disolver NaCl pa en agua destilada hasta saturacin). Hexano pa. Hidrgeno calidad cromatogrfica Metilato de sodio 0'2N (disolver 1'102 gramos de metilato de sodio ps hasta 1 litro en alcohol
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metlico pa). Nitrgeno cualidad cromatogrfica. Trioleato de glicerina pa. Esquema montaje para preparar HCl en metanol: a)cido sulfrico concentrado. b)cido clorhdrico concentrado (35 %). c)Torre de desecacin d)Metanol e)Tapn. f)Embudo. g)Pinzas de Hoffman. h)Gel de slice.
METODOLOGA 1.- Pesar alrededor de 1 gramo de grasa perfectamente homogeneizada en el baln de 250 ml. 2.- Aadir 25 ml de disolucin de metilato de sodio 0'2N, conectar el refrigerante de reflujo y llevar a ebullicin, mantenindola un mnimo de 5 minutos. 3.- Interrumpir la calefaccin y aadir 25 ml de la disolucin metanlica de cido clorhdrico; conectar de nuevo el refrigerante de reflujo y llevar a ebullicin como mnimo 5 minutos ms. 4.- Enfriar, pero no demasiado (el baln debe de quedar entre tibio y caliente) y transferir a un recipiente de cuello largo y estrecho (puede servir un matraz aforado de 100 ml), lavando con 10 ml de hexano, que se pasan tambin al matraz aforado. 5.- Agitar imprimiendo movimientos suaves de rotacin durante 1 o 2 minutos. 6.- Aadir disolucin saturada de cloruro de sodio, hasta que la fase hexnica ocupe la zona del cuello del matraz. Dejar sedimentar hasta que la disolucin hexnica quede bien clarificada (podemos ayudar al proceso imprimiendo rotaciones muy suaves al matraz, en posicin vertical, manteniendo la base del mismo apoyada sobre la mesa de trabajo). 7.- Tomar con microjeringa, previamente limpiada con hexano, unos 2 l de la fase hexnica e inyectar en el cromatgrafo de gases (si no se inyecta al momento, pueden guardarse 4 o 5 ml de fase hexnica en tubos de 10 ml con tapn roscado, durante unos cuantos das).
Parmetros cromatogrficos : Gas portador = nitrgeno Flujo gas portador = 50 ml/mn. Columna = 15% etilenglicolsuccinato sobre polvo refractario de 40/60 mallas. 2 m X 4 mm diam int. Acondicionada de 15 a 24 horas a 220C (sin conectar al detector) a un flujo de gas portador
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de 20 ml/mn. Detector = Ionizacin de llama (FID), con llama de hidrgeno-aire Temperatura de columna = 200 C Temperatura inyeccin = 250 C. Temperatura detector = 250 C. Atenuacin de sensibilidad = entre 1.000 y 2.000. Velocidad registro = 5 mm/mn. El flujo de gas portador se verifica con un flujmetro de burbuja y un cronmetro a la salida de la columna. El valor que aqu sugerimos es nicamente orientativo. El valor ptimo puede determinarse experimentalmente de manera que el metiloleato (preparado a partir de un patrn de trioleato de glicerina) presente un tiempo de retencin de alrededor de 14 o 15 minutos. Una vez establecido el flujo ptimo, lo utilizaremos en todas las determinaciones hasta que la columna empiece a envejecer.
CLCULOS Expresaremos el resultado como composicin relativa de los cidos grasos en %, referidos al total de cidos grasos. Consideremos que la cantidad de cada componente es proporcional al rea del pico correspondiente (esta aproximacin no es, en general, del todo exacta, pero para los cidos grasos se considera aceptablemente satisfactoria). El porcentaje de un determinado cido graso ser:
siendo Ai el rea correspondiente del pico del cido graso y AT la suma de les reas de todos los picos de todos los cidos grasos.
OBSERVACIONES Antes de realizar esta prctica deber efectuarse un estudio previo y unas cuantas prcticas sencillas para familiarizar al estudiante con el uso del cromatgrafo de gases, en el caso de que no se tenga experiencia previa. Para un clculo ms exacto beberan considerarse los factores de respuesta de los diferentes cidos grasos, determinados tericamente considerando la estructura de los steres metlicos y la respuesta relativa del FID para cada configuracin qumica o, todava mejor, experimentalmente utilizando patrones de los diferentes cidos grasos; de todas formas, el clculo sin tomar en consideracin esos factores es, en general, suficientemente aproximado pa efectos de la caracterizacin y clasificacin de la grasa analizada. Si se trata de cidos grasos libres o de oleinas industriales de acidez superior al 80 %, puede omitirse la metanolisis alcalina. El mtodo no es apto para grasas con contenido insaponificable superior al 2 % (la mayora de grasas no superan este valor).
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Cuestionario 22.1.- cidos grasos por CG 1.- Por qu la temperatura de acondicionamiento de la columna es superior a la temperatura de trabajo?. 2.- Como se detecta el envejecimiento de la columna? 3.- Deducir razonadamente las frmulas utilizadas en los clculos. 4.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico. 5.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis". 6.- Por qu puede omitirse la metanolisis alcalina en los cidos grasos libres? 7.- Como serian los clculos teniendo en cuenta los factores de respuesta? 8.- Idear el esquema de un protocolo de anlisis para calcular los factores de respuesta, trabajando con patrones puros de cidos grasos.
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Ref: 22.2
AMINOCIDOS POR CG
OBJETIVO Y FUNDAMENTOS Los trifluorobutilsteres de los aminocidos pueden ser separados y cuantificados por cromatografa de gases. Estos trifluorobutilsteres aminoacdicos experimentan una retencin selectiva dependiente de la temperatura, con etilenglicoladipato (EGA) o con metil-fenil-silicona ("rubber"), (OV-17) La obtencin de los trifluorobutilsteres requiere: 1ro.- Hidrlisis de las protenas. 2do.- Trifluorobutilacin mediante fases intermedias: a)Conversin en metilsteres b) Conversin de los metilsteres a butilsteres. c) Obtencin de trifluorobutilsteres. Se utiliza ornitina como patrn interno, por ser un aminocido inexistente en las muestras objeto del anlisis. Debe prepararse una mezcla estndar de ornitina y los aminocidos que interese determinar, simultneamente con los problemas, a fin de calcular los factores de respuesta y los tiempos de retencin relativos de cada aminocido respecto a la ornitina.
MATERIAL Balanza analtica. Balanza granataria Bal de 250 ml, esmerilado. Columna de las caractersticas indicadas en la metodologa. Cromatgrafo de gases con registrador-integrador, equipamiento complementario y detector de ionizacin de llama. Cronmetro. Reloj avisador. Flujmetro de burbuja. Matraces aforados de 100 ml. Microjeringa para C.G., graduada, de 10 l. Pipetas aforadas de 25 ml. Placa calefactora. Refrigerante de reflujo. Tubos de ensayo 10 ml, con tapn roscado. Evaporador rotatorio ("Buchi") con dispositivo de vaco. Bomba de bacilo. Bao termosttico de agua. Instalacin protectora de la bomba de vaco. Bao de parafina con agitador y termostato regulable. Bateras de agitadores magnticos.
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Para muestras con alto contenido azucares, es preciso, adems: Matraz esmerilado forma baln de 1000 ml. 3 embudos de decantacin esmerilados (en boca y en llave), de 500 ml. Columna con placa filtrante y llave, esmerilado hembra, de 2 cm de F.
REACTIVOS cido clorhdrico 1'25 N en alcohol metlico, obtenido segn el procedimiento de la prctica 22.1 . cido clorhdrico 1'25 N en butanol, obtenido segn el procedimiento de la prctica 22.1, pero con butanol en lugar de metanol. Agua destilada. Aire sinttico calidad cromatogrfica. Hexano pa. Hidrgeno calidad cromatogrfica Nitrgeno calidad cromatogrfica. Cloruro de metileno anhidro, grado espectromtrico. Anhdrido trifluoroactico, calidad C.G. Parafina lquida transparente incolora. Gel de slice (para desecacin). Cloruro clcico (para desecacin). cido clorhdrico ~6N ( HCl conc. y H2O dest.). HCl 0'1N pa. Clorhidrato de ornitina patrn. Disoluciones de aminocidos patrn para test: En un matraz aforado de 50 ml, disolver 130 mg de patrn de aminocido en 20-25 ml de HCl 0,1N (si se presentan dificultades para disolver algn aminocido, aadir unas gotas de HCl concentrado ), enrasar a 50 ml con HCl 0'1N (una disolucin para cada aminocido). Proceder igualmente con la ornitina. Para muestras con contenido alto de azcares, es preciso, adems: Resina Dovex 50 WX-8 (40 cc). Papel indicador. Amonaco 2N NaOH diluido. Nitrato de plata. METODOLOGA 1 (para muestras con contenido de azcares bajo o moderado) 1.- Pesar una cantidad de muestra, homogeneizada y molturada, que contenga unos 200-250 mg de protena. 2.- Hidrolizar con HCl 6N a reflujo (~110 C) durante 22 horas. 3.- Dejar enfriar. Filtrar, lavando el residuo y recogiendo el filtrado. 4.- Evaporar al vaco. a unos 60 C hasta sequedad casi total. Redisolver con agua destilada y repetir la evaporacin 2 veces ms. 5.- Disolver en pequeas cantidades de HCl 0'1 N y pasar a un matraz aforado de 100 ml. Enrasar y homogeneizar. 6.- Pasar 25 ml a un matraz esmerilado de forma pera de 100 ml. Aadir 2 ml del patrn interno de ornitina. Simultneamente, preparar una muestra estndar con 2 ml de patrn interno y 2 ml de disolucin patrn de cada uno de los aminocidos que queremos determinar. A partir de aqu, precederemos paralelamente con esta muestra estndar.
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7.- Evaporar al vaco. a 60 C hasta sequedad. 8.- Dejar un mnimo de 15 horas en un desecador al vaco. 9.- Aadir 10 ml de metanol/HCl 1'25N y agitar durante 30 minutos en placa magntica, a temperatura ambiente y con el frasco tapado. 10.- Evaporar a 60 C hasta sequedad. 11.- Aadir 10 ml de n-butanol/HCl 1'25N, tapar con un tapn de CaCl2 y calentar en un bao de parafina a 100 C 1 C durante 2'5 horas y agitacin magntica. 12.- Evaporar al vaco. a 60 C hasta sequedad. 13.- Aadir 4 ml de diclorometano y 1 ml de anhdrido trifluoractico. 14.- Colocar durante 15 minutos a temperatura ambiente y tapado. 15.- Pasar 2 ml a un tubo de presin con cierre hermtico a rosca y dejar 5 minutos a 150 C ( 5 horas al ambiente). 16.- Enfriar el tubo con agua fra y guardar en frigorfico. Sacar del frigorfico solo el tiempo necesario para inyectar en el CG, a fin de que las condiciones del estndar y el problema sean lo ms idnticas que sea posible.. 17.- Inyectar 2 l en el CG.
METODOLOGA 2 (para muestras de elevado contenido de azcares) 1.- Proceder como en los puntos 1 al 3 del apartado anterior. 2.- Evaporar a casi sequedad al vaco. a 60 C. 3.- Diluir en agua destilada y llevar a pH aprox. de 3, mediante solucin de HCl o de NaOH. El volumen final no ha de sobrepasar de los 300 ml. 4.- Pasar por una columna de 2 cm de F rellena con 40 cc de resina Dowex WX-8, a un flujo mximo de 0'5 ml/mn (se puede dejar a un flujo mucho ms durante la noche), segn el proceso siguiente: a) Activar la columna con 300 ml de HCl 6N. b) Lavar con agua hasta test de cloruros negativo (prueba de turbidez con nitrato de plata). c) Pasar la muestra por la columna (retencin de los aminocidos). d) Pasar agua destilada hasta pH neutro ( aproximadamente). e) Pasar 250 ml de amonaco 2N (elucin de los aminocidos) f) Pasar 250 ml de agua (recoger estas dos ltimas fracciones) 5.- Evaporar al vaco a 60 C hasta sequedad. 6.- Proceder siguiendo desde el punto 5 de la Metodologa 1. Parmetros cromatogrficos : Gas portador = nitrgeno Flujo de gas portador = 80 ml/mn. Flujo de hidrgeno = 50 ml/mn Flujo de aire = 450 ml/mn. Temperatura inicial = 75 C Temperatura final = 215 C. Gradiente de temperatura ("rate") = 4C/mn Detector = Ionizacin de llama. Sensibilidad = 103 X 2. Temperatura del detector = 350 C Temperatura inyector = 200 C.
130
Columna = Vidrio, de 1'5 metros y 4 mm de dimetro interno, con fase estacionaria de etilenglicoladipato al 0'6 % sobre soporte "Chromosorb 60-100".
CLCULOS
en donde: %AX = % del aminocido considerado, sobre el total de la muestra. AX = rea del pico del aminocido considerado. Asi = rea del pico del patrn interno (ornitina). msi = masa de patrn interno (ornitina) m = masa de muestra. FC = factor de correccin del aminocido. El factor de correccin (FC) se calcula considerando:
en donde: Fr = factor de respuesta relativo = F/Fe siendo F el factor de respuesta absoluto del aminocido (rea/masa) i Fe el factor de respuesta absoluto del estndar (rea del estndar / masa del estndar).
OBSERVACIONES El tiempo de hidrlisis de las muestras puede reducirse considerablemente, utilizando la presin (en autoclave). Kaiser, Gehrke y otros investigadores han utilizado el autoclave (4 horas a 145 C), obteniendo resultados tan aceptables y reproducibles como los obtenidos por hidrlisis a 110 C. Basndome en el mtodo de los investigadores mencionados, he comprobado empricamente una relacin entre el tiempo de hidrlisis y la temperatura adecuada de hidrlisis, que responde a la siguiente expresin:
en que T es la temperatura en Kelvin y el tiempo en horas, siendo a i b unas constantes caractersticas para cada aminocido; para la lisina estos valores son bastante aproximadamente de a=1'300 i b=0'0488 (determinados empricamente). Tericamente, cabe esperar ligeras desviaciones de los valores y la reproductibilidad de a y b para la serina, tirosina, isoleucina, valina y leucina, desviaciones bastante ms apreciables para la metionina y francamente inadmisibles para el triptfano. El mtodo no es vlido para determinar cistina y arginina (los picos no aparecen utilizando
131
columna EGA) ni para el triptfano, que queda destruido en buena parte durante la hidrlisis cida. La metionina queda parcialmente destruida durante la hidrlisis. Si se desea determinar cistina y/o arginina, se utilizar una columna de OV-17, pero hay que tener en cuenta que, por lo que respeta a los otros aminocidos. los resultados obtenidos con esa columna son bastante menos fiables que los obtenidos con la columna EGA. Para determinar triptfano, algunos autores han investigado con hidrlisis alcalinas o con disoluciones de cido tiogliclico. El error por defecto para la metionina, puede compensarse multiplicando el resultado obtenido por el factor emprico 1'25. Los resultados son, sin embargo, poco reproducibles si los comparamos con otros aminocidos, pero por supuesto bastante mejores que los obtenidos mediante lo mtodos semicuantitativoss por cromatografa en capa fina. Puede suprimirse el paso de la metilacin efectuando la butilacin con n-butanol/HCl 3N y haciendo un tratamiento con ultrasonidos durante 15 minutos a 100 C
Esquema de las reacciones qumicas del proceso:

Metilacin:
Butilacin:
Trifluoroacetilacin:
132
Aspecto de los cromatogramas Los tiempos de retencin relativos de los aminocidos, referidos a la ornitina, con columnas EGA como la utilizada en esta prctica, son:
El cido glutmico y la glutamina aparecen como un nico pico, por producirse una transformacin del cido glutmico en glutamina durante el proceso. El resultado se expresa como "cido glutmico + glutamina expresados como glutamina". El primer pico que aparece inmediatamente despus de la inyeccin corresponde al disolvente (diclorometano). A continuacin emerge un pico irregular y asimtrico que corresponde al exceso de reactivo. A veces tambin pueden aparecer cierta cantidad de pequeos picos correspondientes a productos de descomposicin y impurezas.
Cuestionario 22.2.- Aminocidos por CG 1.- Deducir razonadamente las frmulas utilizadas en los clculos 2.- Hacer el esquema grfico del procedimiento analtico 3.- Confeccionar el correspondiente "boletn de anlisis". 4.- Idear un procedimiento para la determinacin de aminocidos por CG, basado en ese mismo, para el caso de que no dispusisemos de patrn de ornitina. 5.- Disear un protocolo de anlisis para poder trabajar simultneamente con varias muestras.
133
APNDICE I
Modelo de boletn de anlisis

En la pgina siguiente podemos ver un modelo de boletn de anlisis de tipo profesional. El de este ejemplo es para el caso de un anlisis. Si se hacen varios anlisis distintos, deber tambin adjuntar-se otro modelo de boletn con los resultados de todos los anlisis.
134
NOMBRE Y APELLIDOS:
(aqu el nombre y datos

de la empresa)
Ref. muestra: descripcin de la muestra ANLISIS: fecha inicial: fecha final:
datos
clculos
RESULTADOS
observaciones
firma
135
APNDICE II
Propuesta de trabajos
Esto es una sugerencia sobre trabajos que pueden ser propuestos a estudiantes de ciclos profesionales de qumica (o ramas afines) y universitarios. Propuesta 1.- Elaborar un procedimiento para la determinacin de la acidez voltil del vino, utilizando el aparato de destilacin semimicro Kjeldhal. Hacer un estudio experimental y estadstico comparativo de ambos mtodos (el tradicional de la prctica de la acidez voltil y el nuevo mtodo experimentado). Comentar los resultados obtenidos. Propuesta 2.- Disear una optimizacin del protocolo de la prctica 22.2 (determinacin de aminocidos por C.G.) que reduzca el tiempo de anlisis por muestra. Hacer las comprobaciones experimentales y estadsticas necesarias para confirmar la bondad del procedimiento. Propuesta 3.- Considerando los siguientes datos referentes a los esteroles: elaborar y verificar una metodologa para cuantificar esteroles en grasas a) Los esteroles de las grasas estn contenidos en la fraccin insaponificable1. b) Pueden ser separados del resto de los insaponificables mediante TLC2 (todos juntos en una nica mancha)3. La fase estacionaria es gel de slice con indicador de fluorescencia y la fase mvil cloroformo. c) Los esteroles son separables por C.G., con los siguientes parmetros cromatogrficos4: - columna OV-17 25 %, vidrio, 2m X sobre Chromosorb G80/100. - detector FID (ionizacin de llama) - temperatura = 250 C - temperatura de inyeccin = 300 C - flujo de gas portador = 30 ml/mn d) Los esteroles son solubles en cloroformo y en ter etlico5.
Utilitzar el extracto obtenido de 5 gramos de grasa disuelto en 05 ml de cloroform. Cromatografa en capa fina 3 Como patrn de referencia, utilizar 35 gr de colesterol en cada extremo de la placa. Aplicar un total de 75 150 l de muestra (en banda o en mltiples gotas) 4 Estos parmetros son orientativos; pueden experimentarse variaciones. 5 Se aconseja hacer varias extracciones en cloroformo y la ltima en ter etlic.
2
136
BIBLIOGRAA
ARRIBAS JIMENO, S: "Marcha Analtica de Cationes sin Precipitacin de Sulfuros". Grficas Summa (Oviedo). FERNNDEZ, F: "Introducci a l'Anlisi Qumica Instrumental" EiLibros. FERRANDO, R. i HENRY, N.: "Determinacin Microscpica de los Componentes de los Piensos". Ed. Acribia (Zaragoza). PANREAC: Coleccin "Mtodos Analticos en Alimentaria". M & E. SA. PROBUS SA: "Mtodos de Anlisis. Anlisis de Piensos y sus Materias Primas". Probus SA. VOGEL, A I: "Qumica Analtica Cuantitativa". Ed. Kapelusz (Buenos Aires)
137
Terrassa Reus, 1990-2003 revisado y traducido al castellano: Julio de 2008

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prcticas de: INICIACIN A LA BROMATOLOGA

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PRLOGO DEL AUTOR

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Iniciacin a la bromatologa (prcticas)

TRATAMIENTO PREVIO DE LAS MUESTRAS

REACTIVOS Agua corriente. Agua destilada. Alcohol etlico PA.

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CLCUL0S No es preciso ningn tipo de clculo en la realizacin de esta prctica.

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PREPARACIN DE DISOLUCIONES REACTIVAS

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SUBSTNCIAS VOLTILES A 105 C

MATERIAL Balanza analtica. Estufa de desecacin. Desecador. Pesasubstancias.

REACTIVOS Agente desecante (gel de slice u otros).

CLCULOS El resultado se expresa como "humedad y materias voltiles a 105C":

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HUMEDAD POR EL MTODO DE LOS DISOLVENTES

REACTIVOS Piedra pmez. Xileno.

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CLCULOS Calcular el contenido de agua expresado en porcentaje:

ESQUEMA DEL MONTAJE:

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CLCULOS Para expresar el resultado como contenido en nitrgeno:

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Aparato Kjeldhal semimicro para determinacin de nitrgeno:

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CASENA EN LA LECHE EN POLVO

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CLCULOS El factor de conversin de nitrgeno a protena para la casena pura es de 6'38:

siendo N el % de nitrgeno (ver prctica 5.1).

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GRASA BRUTA EN MUESTRAS SLIDAS

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Iniciacin a la bromatologa (prcticas)

REACTIVOS Agua oxigenada aprox. de 30 volmenes (si se necesita).

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DETERMINACIN DE LA FIBRA BRUTA

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CLCULOS El resultado se expresa en "porcentaje de fibra bruta sobre muestra total":