Stuhrp700 2
Stuhrp700 2
Stuhrp700 2
Catalog Number: STUHRP700 H, L10 Materials and Reagents Needed but Not Provided cont'd:
Deionized or distilled water
Description: 25, 110 ml Wash buffer*(TBS/PBS)
Pretreatment Reagents*
Enzyme Digestion*Avidin-Biotin Blocking Kit*(Labeled Streptavidin Kits Only)
Intended Use: Peroxidase block*
For In Vitro Diagnostic Use Primary antibody*
Negative Control Reagents*
Summary & Explanation: Hematoxylin*
Streptavidin is a protein that has similar binding properties to egg white avidin. It is Bluing Reagent*
isolated from streptomyces avidinii. Streptavidin has a molecular weight of 60 kDa Mounting medium*
and has 4 subunits. Each subunit can bind one molecule of biotin. Biotin is a water-
soluble vitamin. Streptavidin has an extremely high binding affinity (Kd=10-15) for * Biocare Medical Products: Refer to a Biocare Medical catalog for further information
biotin. It has proven useful in the detection of antigens coupled with biotinylated regarding catalog numbers and ordering information. Certain reagents listed above are
secondary antibodies. based on specific application and detection system used.
There are several advantages when using streptavidin versus an avidin complex (ABC). Species Reactivity:
In contrast to avidin, streptavidin is not glycosylated and is therefore uncharged at N/A
neutral pH (6.5 versus 10). This lowers nonspecific background staining. Streptavidin
Storage and Stability:
also lacks carbohydrate side chains that may be another cause of non-specific
background. Another key advantage of streptavidin is the significant increase in Store at 2ºC to 8ºC. Do not use after expiration date printed on vial. If reagents are
sensitivity (probably due to less steric hindrance), thus facilitating an increase in stored under conditions other than those specified in the package insert, they must be
overall binding capacity. verified by the user.
Finally, streptavidin-enzyme conjugates are much more stable than an ABC complex. Protocol Recommendations:
The ABC complex must be freshly made 30 minutes prior to use and is stable only for
a few days. In contrast, a streptavidin-conjugate can be stored for up to 1-2 years. The Tissue Preparation:
1. Cut tissue 4-5 microns thick and float on a water bath. Do not use adhesives in the
reagent comes in a ready-to-use format, thus saving time and potential mistakes. water bath.
Biocare’s Starr Trek detection system has been developed to provide a significant 2. Place the tissue section on a positive-charged slide.
increase in staining sensitivity. Starr Trek Universal Detection system can be used with 3. Drain excess water off the slides.
both mouse and rabbit primary antibodies. After labeling the antigen with a primary 4. Dry tissues 30-60 minutes in a 37ºC oven; and then dry for 30 minutes at 60ºC.
antibody, a universal, affinity-purified, biotinylated secondary antibody is added to Starr Trek HRP-DAB Staining Protocol:
bind to the primary antibody. Horseradish peroxidase (HRP) labeled-streptavidin is 1. Deparaffinize warmed tissues sections in 3 changes of Slide Brite for 3 minutes
then added to bind to the biotinylated secondary antibody. A chromogen/substrate is each.
then applied and reacts with a specific enzyme to produce an intense color signal. Starr 2. Hydrate slides in a graded series of alcohol (100%, 95% and 70 %) to tap water.
Trek detection systems work well with paraffin-embedded tissues, frozen sections and Rinse slides in deionized water (D.I.)
3. Apply 4 drops of Peroxidazed 1 (endogenous peroxidase blocker). Incubate for
cell preparations. 5 minutes. Wash in tap water and rinse in DI water.
Starr Trek universal detection systems can be used with BioGenex and Dako prediluted 4. Optional Pretreatment: Heat designated slides for 40 minutes at 95°C in Diva or
or concentrated antibodies at a significant cost reduction. Biocare's Borg Decloaker (or other HIER buffers). Cool slides for 20 minutes.
Known Applications: Wash in tap water and rinse with D. I. Water. Alternatively, a pressure cooker can
Immunohistochemistry (formalin-fixed paraffin-embedded tissues) be used at 125°C for 30 seconds to 3 minutes (Biocare’s Decloaking Chamber).
5. Optional Pretreatment: Digest designated tissues with either Carezyme I
Supplied As: (Trypsin) for 10-20 minutes at 37ºC or Carezyme II (Pepsin) for 5 minutes at
37ºC. Wash in slides in tap water and rinse in D. I. water.
Starr Trek HRP Universal Detection (25ML) 6. Carefully wipe around the tissue section to remove excess water. Make a
1. Trekkie Universal Link (STU700H) 1x25 ml hydrophobic barrier above and below tissue section with Super PAP Pen
2. TrekAvidin-HRP (STHRP700H) 1x25ml (approximately 30mm or 48mm in length). Do not allow tissues to dry out!
3. Betazoid DAB Chromogen (BDB900C) 1x1ml 7. Flood all slides with 1X PBS wash buffer.
4. Betazoid DAB Substrate Buffer (DS900H) 1x25ml 8. Drain slides and apply 4 drops of Biocare's Background Sniper (protein blocker)
for 15 minutes at room temperature.
5. Background Sniper (BS966H) 1x25ml 9. Drain protein blocker and apply 4 drops of the appropriate Primary Antibody for
6. Mixing Vial (VL103) 1ea. 30-60 minutes. Apply 4 drops of antibody diluent or negative control serum to the
Starr Trek HRP Universal Detection (110ML) negative control.
1. Trekkie Universal Link (STU700L10) 1x110 ml 10. Wash in 2 changes of 1X PBS wash buffer for 2 minutes each. Drain slides.
11. Apply 4 drops of the Trekkie Universal Link. Incubate for 20 minutes at room
2. TrekAvidin-HRP (STHRP700L10) 1x110ml temperature.
3. Betazoid DAB Chromogen (BDB900G5) 1x5ml 12. Wash in 2 changes of 1X PBS wash buffer for 2 minutes each. Drain slides.
4. Betazoid DAB Buffer (DS900L10) 1x110ml 13. Apply 4 drops of TrekAvidin-HRP (Label). Incubate for 10 minutes at room
5. Background Sniper (BS966L10) 1x110ml temperature.
14. Wash in 2 changes 1X PBS wash buffer for 2 minutes each. Drain slides.
6. Mixing Vial (VL103) 1ea. 15. Apply 4 drops of the Betazoid DAB Chromogen solution. Develop 3-5
Materials and Reagents Needed But Not Provided: minutes at room temperature.
Microscope slides, positively charged Directions:
Add 1 drop of DAB Chromogen to 1.0ml of substrate buffer and mix well.
Desert chamber* (Drying oven) 16. Wash in D. I. water.
Positive and negative tissue controls 17. Add 4 drops of CAT Hematoxylin for 30-60 seconds. Wash in tap water.
Xylene (Could be substituted with xylene substitute*) 18. Blue nuclei in 1X PBS wash buffer for 1 minute. Drain slides.
Ethanol or reagent alcohol 19. Wash in tap water and rinse in D.I. water.
20. Dehydrate in 3 changes of 100% alcohol and clear in 3 changes of xylene.
Decloaking chamber* (Pressure cooker) 21. Mount and coverslip.
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Starr Trek Universal HRP Detection System ISO
Sodium Azide and Thimerosal Free 9001&13485
CERTIFIED
Detection Kit
Control Number: 901-STUHRP700-090314
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Data Sheet
Starr Trek Universal HRP Detection System
Kit di rilevazione
Descrizione:
La streptavidina è una proteina che ha proprietà leganti simili al bianco d'uovo avidina. È isolato da
streptomyces avidinii. La streptavidina ha un peso molecolare di 60 kDa e ha 4 subunità. Ogni subunità può
legare una molecola di biotina. La biotina è un vitamina idrosolubile. La streptavidina ha un'affinità di
legame estremamente elevata (Kd = 10-15) per la biotina. Si è dimostrato utile nella rilevazione di antigeni
accoppiati con anticorpi secondari biotinilati.
Ci sono diversi vantaggi nell'uso della streptavidina versus un complesso avidinico (ABC).
In contrasto con l'avidina, la streptavidina non è glicosilata e pertanto non è caricata pH neutro (6,5 contro
10). Questo riduce la colorazione di fondo non specifica. La streptavidina no ha anche catene laterali di
carboidrati che possono essere un'altra causa di fondo non specifico. Un altro vantaggio chiave della
streptavidina è il significativo aumento di sensibilità (probabilmente a causa di un ostacolo meno sterico),
facilitando così un aumento di capacità vincolante complessiva.
Infine, i coniugati dell'enzima streptavidina sono molto più stabili di un complesso ABC.
Il complesso ABC deve essere preparato 30 minuti prima dell'uso ed è stabile solo per pochi giorni. Al
contrario, un coniugato streptavidina può essere conservato fino a 1-2 anni. Il reagente è disponibile in un
formato pronto all'uso, risparmiando così tempo e potenziali errori.
Il sistema di rilevamento Starr Trek di Biocare è stato sviluppato per fornire un significativo aumento della
sensibilità alla colorazione. Il sistema Universal Detection di Starr Trek può essere utilizzato con anticorpi
primari sia di topo che di coniglio. Dopo aver marcato l'antigene con un primario si aggiunge anticorpo, un
anticorpo secondario biotinilato universale purificato per affinità. La streptavidina marcata con perossidasi
di rafano (HRP) è quindi aggiunto per legarsi all'anticorpo secondario biotinilato. Un cromogeno / substrato
è quindi applicato e reagisce con un enzima specifico per produrre un segnale di colore intenso. Starr
Trek funzionano bene con i tessuti inclusi in paraffina, le sezioni congelate e preparati cellulari.
I sistemi di rilevamento universale Starr Trek possono essere utilizzati con BioGenex e Dako prediluiti
o anticorpi concentrati con una significativa riduzione dei costi.
Data di pubblicazione:
15/03/2018
Bio-Optica Milano S.p.A. Via San Faustino 58 - 20134 Milano
Phone +39 02.21.27.13.1 - Fax Italia +39 02.21.53.000 - Fax Export +39 02.21.54.155
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Data Sheet
Applicazione nota:
Immunoistochimica (tessuti fissati in formalina e inclusi in parafina
Fornito come:
Starr Trek HRP Universal Detection (25ML)
1. Trekkie Universal Link (STU700H) 1x25 ml
2. TrekAvidin-HRP (STHRP700H) 1x25ml
3. Betazoid DAB Chromogen (BDB900C) 1x1ml
4. Betazoid DAB Substrate Buffer (DS900H) 1x25ml
5. Background Sniper (BS966H) 1x25ml
6. Mixing Vial (VL103) 1ea.
Starr Trek HRP Universal Detection (110ML)
1. Trekkie Universal Link (STU700L10) 1x110 ml
2. TrekAvidin-HRP (STHRP700L10) 1x110ml
3. Betazoid DAB Chromogen (BDB900G5) 1x5ml
4. Betazoid DAB Buffer (DS900L10) 1x110ml
5. Background Sniper (BS966L10) 1x110ml
6. Mixing Vial (VL103) 1ea.
Data di pubblicazione:
15/03/2018
Bio-Optica Milano S.p.A. Via San Faustino 58 - 20134 Milano
Phone +39 02.21.27.13.1 - Fax Italia +39 02.21.53.000 - Fax Export +39 02.21.54.155
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Data Sheet
Conservazione e stabilità:
Conservare a temperature comprese tra 2 ° C e 8 ° C. Non usare dopo la data di scadenza stampata sulla
fiala. Se i reagenti sono conservati in condizioni diverse da quelle specificate nel foglietto illustrativo,
devono essere verificato dall'utente.
Data di pubblicazione:
15/03/2018
Bio-Optica Milano S.p.A. Via San Faustino 58 - 20134 Milano
Phone +39 02.21.27.13.1 - Fax Italia +39 02.21.53.000 - Fax Export +39 02.21.54.155
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Data Sheet
Indicazioni:
Aggiungere 1 goccia di cromogeno DAB a 1,0 ml di tampone di substrato e mescolare bene.
16. Lavare in D. I. acqua.
17. Aggiungi 4 gocce di ematossilina CAT per 30-60 secondi. Lavare in acqua di rubinetto.
18. Nuclei blu in tampone di lavaggio PBS 1X per 1 minuto. Scolare le diapositive.
19. Lavare nell'acqua del rubinetto e sciacquare in D.I. acqua.
20. Disidratare in 3 cambi di alcool al 100% e deselezionare in 3 cambi di xilene.
21. Montare e coprioggetto.
Caratteristiche di performance:
I protocolli per un'applicazione specifica possono variare. Questi includono, ma non sono limitati a
fissazione, metodo di recupero del calore, tempi di incubazione, spessore della sezione del tessuto
rilevament kit usato. A causa della sensibilità superiore di questi reagenti unici, raccomandat i tempi di
incubazione e i titoli elencati non sono applicabili ad altri sistemi di rilevamento, com i risultati possono
variare. Le raccomandazioni e i protocolli della scheda tecnica sono basati in uso esclusivo dei prodotti
Biocare. In definitiva, è la responsabilità de investigatore per determinare le condizioni ottimali. Questi
prodotti sono strumenti che possono essere utilizzato per l'interpretazione dei risultati morfologici in
combinazione con altri test diagnostici e dati clinici pertinenti da parte di un patologo qualificato.
Controlli qualità:
Fare riferimento alle linee guida approvate dalla NCCLS sulla garanzia di qualità per le immunocitochimiche,
Dicembre 1999 MM4-A Vol.19 No.26 per ulteriori informazioni sui controlli dei tessuti.
Data di pubblicazione:
15/03/2018
Bio-Optica Milano S.p.A. Via San Faustino 58 - 20134 Milano
Phone +39 02.21.27.13.1 - Fax Italia +39 02.21.53.000 - Fax Export +39 02.21.54.155
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Data Sheet
Precauzioni:
Questo prodotto non è classificato come pericoloso. Il conservante utilizzato in questo reagente è Proclin 950 e la
concentrazione è inferiore allo 0,25%. Sovraesposizione a Proclin 950 can causa irritazione e irritazione della pelle e
degli occhi alle mucose e alle vie respiratorie superiori tratto. La concentrazione di Proclin 950 in questo prodotto
non soddisfa l'OSHA criteri per una sostanza pericolosa. Indossare guanti monouso quando si maneggiano i reagenti.
I campioni, prima e dopo la fissazione, e tutti i materiali esposti ad essi dovrebbero essere gestito come se fosse in
grado di trasmettere infezioni e smaltito con le dovute precauzioni. Non pipettare mai i reagenti con la bocca ed
evitare di toccare la pelle e le mucose con reagenti e campioni. Se reagenti o campioni entrano in contatto con aree
sensibili, lavare con abbondanti quantità di acqua. La contaminazione microbica dei reagenti può causare un
aumento della colorazione non specifica. Tempi di incubazione o altre temperature di quelli specificati possono dare
risultati errati. L'utente deve convalidare tali modificare. L'MSDS è disponibile su richiesta.
Consultare le normative OSHA, federali, statali o locali per lo smaltimento di qualsiasi sostanza tossica. ProclinTM è
un marchio registrato di Rohm and Haas Company o delle sue filiali o affiliati.
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