BILIRUBIN T&D- J

Total and Direct Bilirubin

Jendrassik – Grof. Colorimetric

Quantitative determination of bilirubin CALCULATIONS

IVD  With Calibrator:
( A ) Sample  ( A )Sample Blank x Conc. Calibrator = mg/dL bilirubin
Store at 2-8ºC ( A ) Calibrator  ( A ) Calibrator Blank

PRINCIPLE OF THE METHOD - Theoretical calculation: In the absence of a suitable calibrator, theoretical
Bilirubin is converted to colored azobilirubin by diazotized sulfanilic acid and factors can be used, only as guidelines. The calculation with calibrator is the
measured photometrically. most appropriate.
Of the two fractions presents in serum, bilirubin-glucuronide and free Calculation: (A) Sample - (A) Blank Sample x Factor = mg / dL bilirubin
bilirubin loosely bound to albumin, only the former reacts directly in aqueous Total Bilirubin Factor: 13,8
solution (bilirubin direct), while free bilirubin requires solubilization with Direct Bilirubin Factor: 10,4
caffeine to react (bilirubin indirect). In the determination of indirect bilirubin Conversion factor: mg/dL x 17,1 = mol/L.
the direct is also determined, the results correspond to total bilirubin.
The intensity of the color formed is proportional to the bilirubin concentration QUALITY CONTROL
in the sample1,2,3. Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
CLINICAL SIGNIFICANCE If control values are found outside the defined range, check the instrument,
Bilirubin is a breakdown product of hemoglobin. reagents and calibrator for problems.
It is transported from the spleen to the liver and excreted into bile. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
Hyperbilirubinemia results from the increase of bilirubin concentrations in actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
plasma. Causes of hyperbilirubinemia:
Total bilirubin: Increased hemolysis, genetic errors, neonatal jaundice, REFERENCE VALUES1
ineffective erythropoiesis, and drugs. Total Bilirubin in adults Up to 1,10 mg/dL  18,81 mol/L
Direct bilirubin: Hepatic cholestasis, genetic errors, hepatocellular Total Bilirubin in newborns <12 mg/dL  < 205,2 mol/L
damage1,6,7. Direct Bilirubin Up to 0,25 mg/dL  4,27 mol/L
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own
integrate clinical and other laboratory data. reference range.
REAGENTS PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Sulfanilic acid 30 mmol/L Measuring range: From detection limit of (T) 0,0926 mg/L (D) 0,0453 to linearity
R1
Hydrochloric acid (HCl) 400 mmol/L limit of 20 mg/dL. (T&D).
R2 Sodium nitrite 50 mmol/L If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with
NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
R3 Caffeine 100 mmol/L Precision:
Optional BILIRUBIN CAL Ref: 1002250 T Bilirubin Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Mean (mg/dL) 1,16 4,21 1,15 4,27
PRECAUTIONS SD 0,02 0,04 0,02 0,13
R1: H290-May be corrosive to metals. H314-Causes severe burns and eye CV (%) 2,03 1,06 1,91 3,10
damage. EUH208-Contains sulfanilic acid. May produce an allergic
reaction. D Bilirubin Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Follow the precautionary statements given in MSDS and label of the
Mean (mg/dL) 0,78 2,28 0,80 2,18
product.
SD 0,01 0,01 0,01 0,03
PREPARATION CV (%) 1,28 0,65 1,63 1,53
All the reagents are ready to use. Sensitivity: (T) 1 mg/dL = 0,07880 (A). (D) 1 mg/dL = 0,12772 (A).
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
STORAGE AND STABILITY systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
All the components of the kit are stable until the expiration date on the label The results obtained using 50 samples were the following:
when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and contaminations TOTAL BILIRUBIN
prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date. Correlation coefficient (r)2: 0,9894
Signs of reagent deterioration: Regression equation: y= 0,9832x + 0,0224.
- Presence of particles and turbidity. DIRECT BILIRUBIN
- Color development in R 2. Correlation coefficient (r)2: 0,9867
Regression equation: y= 0,9923x + 0,0048.
ADDITIONAL EQUIPMENT The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 540 nm.
- Matched cuvettes 1,0 cm light path. INTERFERENCES
- General laboratory equipment. Hemolysis causes decreased bilirubin values1,2,3.
A list of drugs and other interfering substances with bilirubin has been reported by
SAMPLES Young et. al4,5.
Serum or plasma, free of hemolysis1.
Protect samples from direct light. NOTES
Stability: Bilirubin is stable at 2-8ºC for 4 days and 2 months at –20ºC. 1. For bilirubin determination in newborns, pipette 50 L of sample. Multiply the
result by 4.
PROCEDURE 2. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
1. Assay conditions: Instructions for many of them are available on request.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .540 nm
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm light path BIBLIOGRAPHY
Temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. Princeton 1984; 1238-1241, 436 and 650.
3. Pipette into a cuvette: 2. Malloy H T et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
J Biol Chem 1937; 112 (2): 481-491.
Total B. Direct B. Blank
3. Jendrassik L et al. Biochemische Zeitschrift Band 1938; 297:80-89.
R 1 (L) 200 200 200 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
R 2 (drop) 1 1 -- 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
NaCl 9 g/L (mL) -- 2,0 2,0 6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
R 3 (mL) 2,0 -- -- 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Sample / Calibrator (L) (Note 1) 200 200 200 PACKAGING
4. Mix and incubate for exactly 5 minutes at 15-25ºC. Ref: 1001041 R 1: 1 x 60 mL
5. Measure the absorbance (A) of calibrator and sample. Cont. R 2: 1 x 10 mL
R 3: 1 x 150 mL

BSIS03-I 21/03/18 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
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Bilirrubina Total y Directa

Jendrassik – Grof. Colorimétrico

Determinación cuantitativa de bilirrubina CÁLCULOS

IVD  Con Calibrador:
( A ) Muestra  ( A ) Blanco Muestra x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina
Conservar a 2-8ºC ( A ) Calibrador  ( A ) Blanco Calibrador

PRINCIPIO DEL MÉTODO -Cálculo teórico: En ausencia de un calibrador adecuado, se pueden utilizar
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico factores teóricos, solo como orientativos. El cálculo con calibrador és el más
diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes adecuado.
en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, sólo Cálculo: (A) Muestra – (A) Blanco Muestra x Factor = mg/dL de bilirrubina
la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la Factor Bilirrubina Total: 13,8
segunda la solubilización con cafeína para que reaccione (bilirrubina Factor Bilirrubina Directa: 10,4
indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina Factor de conversión: mg/dL x 17,1 = mol/L.
también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de CONTROL DE CALIDAD
bilirrubina presente en la muestra ensayada1,2,3. Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
SIGNIFICADO CLÍNICO Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. instrumento, los reactivos y el calibrador.
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia:
Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia VALORES DE REFERENCIA1
neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas. Bilirrubina Total en adultos Hasta 1,10 mg/dL  18,81 mol/L
Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y Bilirrubina Total en recién nacidos <12 mg/dL  < 205,2 mol/L
alteraciones hepáticas1,6,7. Bilirrubina Directa Hasta 0,25 mg/dL  4,275 mol/L
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio. Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca
sus propios valores de referencia.
REACTIVOS
Ácido sulfanílico 30 mmol/L CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
R1
Ácido clorhídrico 400 mmol/L Rango de medida: Desde el límite de detección de (T) 0,0926 mg/dL (D) 0,0453
R2 Sodio nitrito mg/dL hasta el límite de linealidad de 20 mg/dL (T y D).
50 mmol/L
Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con
R3 Cafeína NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
100 mmol/L
Precisión:
Opcional BILIRUBIN CAL Ref:1002250 Bilirrubina T Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Media (mg/dL) 1,16 4,21 1,15 4,27
PRECAUCIONES SD 0,02 0,04 0,02 0,13
R1: H290-Puede ser corrosivo para los metales. H314-Provoca CV (%) 2,03 1,06 1,91 3,10
quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. EUH208-
Contiene ácido sulfanílico. Puede provocar una reacción alérgica. Bilirrubina D Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Seguir los consejos de prudencia indicados en la FDS y etiqueta del Media (mg/dL) 0,78 2,28 0,80 2,18
producto. SD 0,01 0,01 0,01 0,03
CV (%) 1,28 0,65 1,63 1,53
PREPARACIÓN Sensibilidad analítica: (T) 1 mg/dL = 0,07880 (A). (D) 1 mg/dL = 0,12772 (A).
Todos los reactivos están listos para su uso. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad BILIRRUBINA TOTAL
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien Coeficiente de correlación (r)2: 0,9894.
cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la contaminación durante Ecuación de la recta de regresión: y= 0,9832x + 0,0224.
su uso. BILIRRUBINA DIRECTA
No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Coeficiente de correlación (r)2: 0,9867.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Ecuación de la recta de regresión: y= 0,9923x + 0,0048.
- Presencia de partículas y turbidez. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
- Desarrollo de color en el R 2.
INTERFERENCIAS
MATERIAL ADICIONAL La presencia de hemólisis disminuye el valor de bilirrubina1,3.
- Espectrofotómetro o analizador con cubeta para lecturas a 540 nm.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren con la
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio. determinación de la bilirrubina4,5.

MUESTRAS NOTAS
Suero o plasma libre de hemólisis1. Proteger de la luz. 1. Para la determinación de bilirrubina en neonatos, pipetear 50 L de muestra.
Estabilidad de la muestra: 4 días a 2-8ºC o 2 meses a –20ºC. Multiplicar el resultado obtenido por 4.
2. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de
PROCEDIMIENTO este reactivo en distintos analizadores.
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .540 nm BIBLIOGRAFÍA
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Princeton 1984; 1238-1241, 436 and 650.
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC
2. Malloy H T et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
J Biol Chem 1937; 112 (2): 481-491.
3. Pipetear en una cubeta: 3. Jendrassik L et al. Biochemische Zeitschrift Band 1938; 297:80-89.
B. Total B. Directa Blanco 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
R 1 (L) 200 200 200 5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
R 2 (gotas) 1 1 -- 6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed. AACC 1999.
ClNa 9 g/L (mL) -- 2,0 2,0 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.
R 3 (mL) 2,0 -- -- PRESENTACIÓN
Muestra / Calibrador (L)(Nota 1) 200 200 200 Ref: 1001041 R 1: 1 x 60 mL
4. Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25ºC. Cont. R 2: 1 x 10 mL
5. Medir la absorbancia (A) del calibrador y la muestra. R 3: 1 x 150 mL

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Bilirubine totale et directe

Jendrassik – Grof. Colorimétrique

Détermination quantitative de bilirubine CALCULS

IVD  Avec Étalon :
(A)Échantillo n - (A)Blanc Échantillo n x Conc. Étalon = mg/dL de bilirubine
Conserver à 2-8ºC (A)Étalon - (A)Blanc Étalon
PRINCIPE DE LA METHODE - Calcul théorique: En l'absence d'un calibrateur adéquat, des facteurs
La bilirubine se transforme en azobilirubine au moyen de l’acide théoriques peuvent être utilisés, uniquement en tant que lignes directrices. Le
sulfanilique diazoté et se mesure par photométrie. Des deux fractions calcul avec étalon est le plus approprié.
présentes dans le sérum, bilirubine-glucuronide et bilirubine libre liée à Calcul: (A) Échantillon - (A) Échantillon blanc x Facteur = mg / dL bilirubine
l’albumine, seule la première réagit en milieu aqueux (bilirubine directe), la Facteur total de bilirubine: 13,8
seconde demandant une solubilisation avec de la caféine pour réagir Facteur direct de bilirubine: 10,4
(bilirubine indirecte). Dans la détermination de la bilirubine indirecte, on Facteur de conversion : mg/dL x 17,1 = mol/L.
détermine également la directe, ce qui permet ainsi d’obtenir le résultat de CONTROLE DE QUALITE
la bilirubine totale. Il est conseillé d’analyser conjointement les échantillons de sérum dont les
L’intensité de la couleur formée est proportionnelle à la concentration de valeurs ont été contrôlées: SPINTROL H Normal et pathologique (Réf. 1002120
bilirubine présente dans l’échantillon testé1,2,3. et 1002210).
SIGNIFICATION CLINIQUE Si les valeurs se trouvent en dehors des valeurs tolérées, analyser l’instrument,
La bilirubine est produite par la dégradation de l’hémoglobine. les réactifs et le calibreur.
Elle est transportée de la rate vers le foie et est excrétée dans la bile. Chaque laboratoire doit disposer de son propre contrôle de qualité et déterminer
L’hyperbilirubinémie est le résultat d’une augmentation de la bilirubine les mesures correctives à mettre en place dans le cas où les vérifications ne
dans le plasma. Causes plus probables de l’hyperbilirubinémie : correspondraient pas aux attentes.
Bilirubine Totale : Augmentation de l’hémolyse, altérations génétiques, VALEURS DE REFERENCE1
anémie néonatale, altérations érythropoïétiques, présence de drogues. Bilirubine Totale adulte Jusqu’à 1,1 mg/dL  18,81 mol/L
Bilirubine Directe : Cholestase hépatique, altérations génétiques et Bilirubine Totale chez les nouveau-nés <12 mg/dL  < 205,2 mol/L
altérations hépatiques1,6,7. Bilirubine Directe Jusqu’à 0,25 mg/dL  4,275 mol/L
Le diagnostic clinique doit être réalisé en tenant compte de toutes les Ces valeurs sont données à titre d’information. Il est conseillé à chaque
données cliniques et de laboratoire. laboratoire de définir ses propres valeurs de référence.
RÉACTIFS CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
Acide sulfanilique 30 mmol/L Plage de mesure: Depuis la limite de détection de (T) 0,0926 mg/dL (D) 0,0453
R1
Acide chlorhydrique 400 mmol/L mg/dL jusqu’à la limite de linéarité de 20 mg/dL. (T & D).
R2 Nitrite de sodium Si la concentration de l’échantillon est supérieure à la limite de linéarité, diluer
50 mmol/L 1/2 avec du NaCl 9 g/L et multiplier le résultat final par 2.
R3 Caféine Précision:
100 mmol/L
Bilirubine T Intra-série (n= 20) Inter-série (n= 20)
Optionnel BILIRUBINE CAL Réf.:1002250 Moyenne (mg/dL) 1,16 4,21 1,15 4,27
SD 0,02 0,04 0,02 0,13
PRÉCAUTIONS CV (%) 2,03 1,06 1,91 3,10
R1: H290-Peut être corrosif pour les métaux. H314-Provoque des brûlures de Bilirubine D Intra-série (n= 20) Inter-série (n= 20)
la peau et des lésions oculaires graves. EUH208-Contient acide sulfanilique. Moyenne (mg/dL) 0,78 2,28 0,80 2,18
Peut produire une réaction allergique. SD 0,01 0,01 0,01 0,03
Suivez les conseils de prudence donnés en SDS et étiquette. CV (%) 1,28 0,65 1,63 1,53
Sensibilité analytique: (T) 1 mg/dL = 0,07880 A. (D) 1 mg/dL = 0,12772 A.
PRÉPARATION Exactitude: Les réactifs SPINREACT (y) ne montrent pas de différences
Tous les réactifs sont prêts à l’emploi. systématiques significatives lorsqu’on les compare à d’autres réactifs
CONSERVATION ET STABILITE commerciaux (x).
Tous les composants du kit sont stables jusqu’à la date de péremption Les résultats obtenus avec 50 échantillons ont été les suivants:
indiquée sur l’étiquette, et si les flacons sont maintenus hermétiquement BILIRUBINE TOTALE
fermés à 2-8ºC, à l’abri de la lumière et des sources de contamination. Coefficient de corrélation (r)2: 0,9894
Ne pas utiliser les réactifs en dehors de la date indiquée. Equation de la Coubre de régression: y=0,9832 x +0,0224
Indices de détérioration des réactifs: BILIRUBINE DIRECTE
- Présence de particules et turbidité. Coefficient de corrélation (r)2: 0,9867
- Développement de la couleur dans le R 2. Equation de la Coubre de régression: y=0,9923 x +0,0048
Les caractéristiques de la méthode peuvent varier suivant l’analyseur employé.
MATERIEL SUPPLEMENTAIRE INTERFÉRENCES
- Spectrophotomètre ou analyseur pour les lectures à 540 nm.
La présence d’hémolyse diminue la valeur de bilirubine1,3.
- Cuvettes de 1,0 cm d’éclairage.
- Equipement classique de laboratoire. Il a été rapporté que certaines drogues et autres substances interfèrent avec la
détermination de la bilirubine4,5.
ÉCHANTILLONS
REMARQUES
Sérum ou plasma sans hémolyse1. Protéger de la lumière.
1. Pour la détermination de bilirubine chez les nouveau-nés, pipeter 50 L
Stabilité de l’échantillon : 4 jours à 2-8ºC ou 2 mois à –20ºC.
d’échantillon. Multiplier le résultat obtenu par 4.
PROCEDURE 2. SPINREACT dispose de consignes détaillées pour l’application de ce
1. Conditions de test: réactif dans différents analyseurs.
Longueur d’ondes: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 nm BIBLIOGRAPHIE
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm d’éclairage 1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto.
Température : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15 - 25ºC Princeton 1984; 1238-1241, 436 and 650.
2. Régler le spectrophotomètre sur zéro en fonction de l’eau distillée. 2. Malloy H T et al. The determination of bilirubin with the photoelectric colorimeter.
3. Pipeter dans une cuvette: J Biol Chem 1937; 112 (2): 481-491.
B. Totale B. Directe Blanc 3. Jendrassik L et al. Biochemische Zeitschrift Band 1938; 297:80-89.
R 1 (L) 200 200 200 4. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed. AACC 2001.
R 2 (gouttes) 1 1 --
6. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed. AACC 1999.
ClNa 9 g/L (mL) -- 2,0 2,0 7. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. AACC 1995.
R 3 (mL) 2,0 -- --
PRÉSENTATION
Échantillon / Étalon (L) (Remarque 1) 200 200 200
Réf: 1001041 R 1 1 x 60 mL
4. Mélanger et incuber exactement 5 minutes à 15-25ºC. Cont. R 2 1 x 10 mL
5. Mesurer l'absorbance (A) de l'étalon et de l'échantillon. R 3 1 x 150 mL

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