See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/342953446

Aktivitas Antioksidan Isolat Steroid Hasil Kromatografi Lapis Tipis dari Fraksi
n-Heksana Hydrilla verticillata

Article · March 2020

DOI: 10.18860/al.v8i1.9936

CITATIONS READS

0 332

4 authors, including:

Ahmad Ghanaim Fasya Luluatul Hamidatu Ulya

Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
37 PUBLICATIONS   77 CITATIONS    1 PUBLICATION   0 CITATIONS   

SEE PROFILE SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

Monolith organic View project

Phytoremediation by Hydrilla verticillata (L.f.) Royle Ranu Grati Lake Pasuruan with Lead Concentration Variations View project

All content following this page was uploaded by Luluatul Hamidatu Ulya on 27 July 2020.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

Artikel Penelitian

Aktivitas Antioksidan Isolat Steroid Hasil Kromatografi Lapis Tipis dari Fraksi n-Heksana
Hydrilla verticillata
Ahmad Ghanaim Fasya1*, Bagas Purwantoro1, Lulu’atul Hamidatu Ulya1, Mujahidin Ahmad2

1Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, Indonesia, 65144
2Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, Indonesia, 65144

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Riwayat Artikel Hydrilla verticillata is one of Allah SWT creations that potential as an antioxidant.
Diterima 3 Juni 2020 This study’s objectives were to determine antioxidant activity and identify steroid
Direvisi 23 Juni 2020 isolates of n-hexane fraction of H. verticillata. The steroid compounds were
Tersedia online 14 Juli 2020 extracted using methanol solvent. The methanol extract was hydrolyzed with HCl
2 N and partitioned using n-hexane. The n-hexane fraction was tested
phytochemically and separated using thin-layer chromatography (TLC). The
steroids compounds were identified using UV-Vis spectrophotometer, FTIR, and
LC-MS/MS. The result showed that maceration extraction produced 5.14% yield,
* Email penulis korespondensi: whereas n-hexane fraction produce 47.95% yield. Steroid separation through
[email protected] analytical TLC revealed that n-hexane: ethyl acetate (4:1) as the best eluant with
12 spots, while separation using preparative TLC yielded 19 spots. Steroid isolate
from TLC preparative has antioxidant activity with EC50 of 5.109 ppm. Identification
of steroid compounds using UV-Vis produced maximum wavelengths at 203.9 and
276 nm, while using FTIR indicated the presence of O-H group, geminal dimethyl,
C=O, C=C, secondary C-OH, and =C-H (alkene) which might contain steroid
compounds. The result of LC-MS/MS showed the presence of β-sitosterol.

Keywords: Hydrilla verticillata, steroid compounds, thin-layer chromatography,

antioxidant assay, UV-Vis, FTIR, LC-MS/MS

Hydrilla verticillata merupakan salah satu ciptaan Allah SWT yang memiliki potensi
sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan mengetahui aktivitas antioksidan dan
mengidentifikasi senyawa steroid pada isolat hasil pemisahan fraksi n-heksana H.
verticillata. Senyawa steroid diekstraksi menggunakan pelarut metanol. Ekstrak
pekat metanol dihidrolisis dengan HCl 2 N dan dipartisi dengan n-heksana. Fraksi
n-heksana hasil partisi diuji fitokimia dan dipisahkan senyawanya menggunakan
KLT (Kromatografi Lapis Tipis). Identifikasi dilakukan menggunakan UV-Vis, FTIR,
dan LC-MS/MS. Hasil penelitian menunjukkan ekstraksi maserasi menghasilkan
rendemen 5,14%, sedangkan rendemen partisi n-heksana sebesar 47,95%.
Pemisahan steroid menggunakan KLT analitik menunjukkan bahwa variasi eluen
terbaik adalah n-heksana: etil asetat (4:1) dengan 12 noda, sedangkan pemisahan
KLT preparatif menghasilkan 19 noda. Isolat steroid hasil KLT preparatif memiliki
aktivitas antioksidan dengan EC50 5,109 ppm. Identifikasi senyawa steroid
menggunakan UV-Vis menunjukkan bahwa panjang gelombang maksimum
sebesar 203,9 dan 276 nm, sedangkan untuk identifikasi isolat steroid
menggunakan FTIR menunjukkan gugus fungsi O-H, geminal dimetil, C=O, C=C,
C-OH sekunder dan =C-H (alkena) yang diduga merupakan senyawa steroid.
Hasil LC-MS/MS menunjukkan adanya senyawa steroid β-sitosterol.

Kata kunci: Hydrilla verticillata, steroid, kromatografi lapis tipis, uji antioksidan, UV-
Vis, FTIR, LC-MS/MS
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

1. Pendahuluan
Keanekaragaman sumberdaya alam di Indonesia baik hayati maupun nonhayati perlu dieksplorasi, salah satunya
sebagai sumber senyawa aktif yang berpotensi untuk bahan obat. Hal ini didukung wilayah Indonesia yang berada di daerah
tropis dan sebagian besar (75 %) terdiri dari perairan, baik air laut ataupun air tawar. Selain itu, jumlah danau yang ada di
Indonesia sangat banyak yaitu 526 danau. Namun, hanya sedikit danau yang potensi alamnya telah dikaji dan
dimanfaatkan secara mendalam [1]. Seperti halnya Danau Ranu yang terletak di Kabupaten Pasuruan, danau ini memiliki
keanekaragaman hayati yang tinggi salah satunya adalah Hydrilla (Hydrilla verticillata (L.f) Royle) atau lebih dikenal oleh
masyarakat setempat sebagai “ganggeng”.
Tumbuhan hydrilla masih belum banyak dimanfaatkan karena kurangnya pengetahuan dari masyarakat. Di Indonesia,
pemanfaatan hydrilla masih terbatas sebagai tanaman hias untuk akuarium. Hydrilla sering dianggap sebagai ancaman
bagi ekosistem danau dan sungai karena pertumbuhannya yang cepat [1]. H. verticillata dapat dimanfaatkan dalam
fitoremediasi pada pengolahan limbah [2] dan diproduksi sebagai suplemen. Tumbuhan ini juga dimanfaatkan di bidang
kesehatan antara lain sebagai obat antitumor, antibakteri [3, 4], antimikroba [5], antimalaria [6], dan antioksidan [7, 8] serta
sebagai adsorben terbaik untuk beberapa logam berat [9].
H. verticillata mengandung berbagai metabolit sekunder. Kensa dan Neelamegam [10] menyebutkan hasil skrining H.
verticillata mengandung metabolit sekunder yaitu flavonoid, alkaloid, dan steroid. Penelitian lain menyebutkan hasil skrining
H. verticillata mengandung fenol, glikosida, alkaloid, dan steroid [11]. Penelitian yang dilakukan oleh Amalia dkk. [12] dan
Fasya dkk. [8] menyatakan bahwa fraksi petroleum eter hasil hidrolisis ekstrak etanol H. verticillata mengandung steroid.
Kandungan senyawa aktif H. verticillata dapat diperoleh dengan ekstraksi maserasi. Metode maserasi sering dipilih
karena aman digunakan dan dapat mengantisipasi senyawa yang tidak tahan panas. Proses ini sangat menguntungkan
dalam proses isolasi bahan alam karena mampu memecah dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan di dalam
dan di luar sel sehingga senyawa metabolit sekunder akan larut dalam pelarut organik. Mardiyah [13] menyatakan bahwa
senyawa metabolit sekunder di alam berada dalam bentuk glikosida sehingga ekstraksi dilakukan menggunakan pelarut
yang bersifat polar.
Menurut Lenny [14], pelarut yang sering digunakan dalam proses isolasi senyawa organik bahan alam adalah pelarut
golongan alkohol, salah satunya metanol. Metanol dapat melarutkan senyawa metabolit sekunder dan memiliki titik didih
yang rendah sehingga mudah diuapkan [15]. Hafiz [16] telah melakukan ekstraksi maserasi H. verticillata dengan
menggunakan variasi pelarut antara lain metanol (polar), kloroform (semi polar), dan n-heksana (non polar). Rendemen
yang didapat dengan pelarut metanol sebesar 12,72%. Adapun ekstraksi dengan pelarut kloroform dan n-heksana didapat
rendemen yang lebih kecil yaitu masing-masing sebesar 4,96 dan 3,80%. Oleh karena itu, pada penelitian ini digunakan
pelarut metanol untuk ekstraksi maserasi.
Pemisahan yang lebih spesifik dapat dilakukan dengan cara hidrolisis untuk memutuskan ikatan antara glikon dan
steroid [17]. Senyawa sterol yang merupakan salah satu jenis steroid ditemukan pada tumbuhan dalam keadaan berikatan
dengan glikosida [18]. Pemutusan ikatan glikosida menjadi steroid dan glikon dapat dilakukan dengan hidrolisis
menggunakan larutan HCl 2 N [19]. Partisi dilakukan untuk mengambil metabolit sekunder yang diinginkan yang
mempunyai kesamaan kepolaran dengan pelarut [20]. Tonius dkk. [21] menyatakan bahwa fraksi n-heksana daun buas-
buas (Premna serratifolia L.) diduga mengandung cholestane yang termasuk dalam salah satu golongon steroid. Fraksi
yang diperoleh dari hasil partisi biasanya masih berupa senyawa campuran sehingga perlu dilakukan isolasi lebih lanjut.
Isolasi senyawa steroid dapat dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis (KLT) [22, 23]. Mardaneni [24]
menggunakan eluen n-heksana : etil asetat (17 : 3) pada fraksi etil asetat alga merah menghasilkan 6 noda. Baderos [25]
menyatakan bahwa identifikasi golongan steroid dari fraksi petroleum eter alga merah menggunakan eluen n-heksana : etil
asetat (17 : 3) menunjukkan 11 noda di bawah sinar UV 366 nm. Noda yang menunjukkan adanya steroid adalah noda ke-
5, 6, 7, 9, 10 dan 11. Penelitian Azah [26] menyatakan bahwa identifikasi golongan steroid pada H. verticillata dengan fase
gerak n-heksana: etil asetat (3,75:1,25) diperoleh 13 noda dan 2 noda merupakan senyawa steroid.
Pengujian aktivitas antioksidan dari senyawa steroid dilakukan dengan metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH).
Hasil uji antioksidan pada tumbuhan H. verticillata dengan menggunakan pelarut metanol, kloroform, dan n-heksana
diperoleh nilai EC50 masing-masing 256,6; 457,6 dan 2763 ppm [27]. Laili [28] melakukan uji antioksidan terhadap fraksi
petroleum alga merah menunjukkan bahwa nilai EC50 yaitu 248,1 ppm. Fasya dkk. [29] melakukan uji aktivitas antioksidan
isolat KLT preparatif fraksi petroleum eter mikroalga Chlorella sp. dan diperoleh nilai EC50 sebesar 73,83 ppm. Adapun nilai
EC50 isolat steroid hasil kromatografi kolom dari fraksi petroleum eter hasil hidrolisis ekstrak etanol H. verticillata sebesar
23,00 ppm [8].

24
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

Pada penelitian ini dilakukan pengujian aktivitas antioksidan isolat hasil KLT preparatif fraksi n-heksana dari H.
verticillata dengan metode DPPH dan mengidentifikasi senyawa steroid dalam fraksi n-heksana dengan menggunakan
instrumentasi UV-Vis (Ultraviolet-visible), FTIR (Fourier-Transform Infrared) dan LC-MS/MS (Liquid Chromatorgraphy-
Mass Spectrometry). Hasil dari penelitian ini akan diaplikasikan sebagai sumber senyawa antioksidan alami.

2. Bahan dan Metode

2.1. Bahan
Bahan sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah H. verticillata yang berasal dari Danau Ranu Grati,
Pasuruan. Bahan-bahan kimia yang digunakan adalah metanol 96% (p.a), kloroform 96% (p.a), n-heksana 96% (p.a),
kertas saring, plat KLT GF254, aluminium foil, larutan DPPH 0,2 mM, etanol 95%, HCl 37%, HCl 2 M, natrium bikarbonat,
dan reagen Lieberman-Burchard (asam asetat anhidrat, H2SO4 pekat, dan etanol absolut).
2.2. Preparasi Sampel
Pengambilan sampel di Danau Ranu dilakukan di permukaan air dimana jarak antara permukaan dengan dasar air ±
2 m. Sampel diambil sebanyak 10 kg dan dicuci dengan air. Selanjutnya, dikeringkan di bawah sinar matahari secara tidak
langsung sampai kering. Setelah itu, sampel kering dihaluskan dengan ukuran 90 mesh dan dikeringkan pada suhu 38ºC
selama 24 jam di Materia Medika, Kota Batu.
2.3. Penentuan Kadar Air
Cawan porselen disiapkan terlebih dahulu, lalu dipanaskan dalam oven pada suhu 100-105°C sekitar 15 menit untuk
menghilangkan kadar air. Selanjutnya, cawan disimpan dalam desikator sekitar 10 menit, ditimbang dan dilakukan
perlakuan yang sama sampai diperoleh berat cawan yang konstan. Setelah itu, sebanyak 5 g sampel dimasukkan dalam
cawan porselen, kemudian dimasukkan dalam oven dan dikeringkan pada suhu 100-105°C sekitar ±15 menit. Sampel
kemudian disimpan dalam desikator sekitar ±10 menit dan ditimbang. Sampel tersebut dipanaskan kembali dalam oven
±15 menit, didinginkan dalam desikator sekitar ±10 menit dan ditimbang kembali. Perlakuan ini diulangi hingga tercapai
berat konstan. Kadar air dalam serbuk H. verticillata dihitung menggunakan Persamaan (1).
(b - c)
Kadar air = x 100% (1)
(b- a)
Dimana, a adalah bobot cawan kosong, b adalah bobot sampel ditambah cawan sebelum dikeringkan, dan c adalah bobot
cawan ditambah sampel setelah dikeringkan.
2.4. Ekstraksi Sampel
Ekstraksi komponen aktif dilakukan dengan cara ekstraksi maserasi. Sampel H. verticillata yang telah dihaluskan
kemudian ditimbang sebanyak 50 g dan diekstraksi secara maserasi menggunakan pelarut metanol 96% dengan
perbandingan 5:1 (b/v) sebanyak 3 kali dan dilakukan pengocokan menggunakan shaker selama 3 jam dengan kecepatan
120 rpm. Setelah itu, dilakukan penyaringan menggunakan corong Buchner. Ekstrak pekat ditimbang lalu dihitung
rendemennya dengan Persamaan 2.
berat ekstrak
Rendemen (%) = x 100% (2)
berat sampel
2.5. Hidrolisis dan Partisi
Hidrolisis ekstrak metanol H. verticillata dilakukan dengan cara penambahan HCl 2 M. Selanjutnya, ditambahkan
natrium bikarbonat sampai pH 7 (netral). Ekstrak pekat metanol H. verticillata yang diperoleh pada proses sebelumnya
dipindahkan ke dalam corong pisah dan dipartisi dengan pelarut n-heksana. Pelarut n-heksana ditambahkan sebanyak 25
mL kemudian dikocok dan didiamkan hingga terbentuk dua lapisan yaitu lapisan organik dan lapisan air. Masing-masing
lapisan yang terbentuk kemudian dipisahkan, lapisan air yang ada di bagian bawah ditampung dan dimasukkan lagi ke
corong pisah. Proses partisi dilakukan hingga diperoleh fasa air bening. Lapisan organik dimasukkan ke dalam gelas kimia
kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator vacuum lalu dialiri dengan gas N2. Ekstrak pekat yang diperoleh selanjutnya
ditimbang dan dihitung rendemennya [30].
2.6. Uji Fitokimia Senyawa Steroid
Uji fitokimia dilakukan dengan melarutkan fraksi n-heksana dalam 0,5 mL kloroform, kemudian ditambahkan 0,5 mL
asam asetat anhidrida dan 1-2 mL asam sulfat pekat (melalui dinding tabung). Apabila terbentuk warna hijau kebiruan
menunjukkan adanya golongan senyawa steroid.
25
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

2.7. Pemisahan Senyawa Steroid dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

2.7.1. Pemisahan dengan KLT Analitik
Pemisahan senyawa steroid dengan KLT analitik menggunakan metode modifikasi Sriwahyuni [31]. Identifikasi
dengan KLT menggunakan plat silika gel GF254 yang diaktivasi terlebih dahulu dalam oven pada suhu 100°C selama 30
menit untuk menghilangkan air yang terdapat pada plat. Selanjutnya, masing-masing plat diberi ukuran 1x10 cm.
Ekstrak H. verticillata diperoleh dengan melarutkan ekstrak kasar sebanyak 10 mg dengan 1 mL pelarut n-heksana.
Ekstrak H. verticillata kemudian ditotolkan pada jarak ±1 cm dari tepi bawah plat dengan pipa kapiler dan dalam 1 plat KLT
diberi 1 totolan dimana dalam 1 tempat totolan diberikan 3-5 kali penotolan. Plat yang sudah berisi totolan tersebut,
kemudian dikeringkan dan dielusi dengan masing-masing fase gerak (eluen).
Eluen untuk pengembangan ini dilakukan penjenuhan terlebih dahulu dalam suatu bejana tertutup selama 20-30 menit.
Penjenuhan ini dilakukan untuk menyamakan tekanan uap pada seluruh bagian bejana. Setelah gerakan fase gerak sampai
pada garis batas, elusi dihentikan. Noda-noda pada permukaan plat diperiksa di bawah sinar UV pada panjang gelombang
366 nm, diamati pemisahan noda dan dihitung nilai Rf-nya. Pada penelitian ini digunakan 5 macam variasi eluen (Tabel 1).

Tabel 1. Variasi Eluen Campuran n-Heksana dan Etil Asetat

Eluen Perbandingan n-Heksana : Etil Asetat Referensi
1 4,75 : 0,25 [32]
2 4,50 : 0,50 [33]
3 4,25 : 0,75 [34]
4 4,00 : 1,00 [35]
5 3,75 : 1,25 [36]

2.7.2. Pemisahan KLT Preparatif

Pemisahan dengan KLT preparatif digunakan plat silika gel GF254 dengan ukuran 10x20 cm. Ekstrak pekat hasil
ekstraksi ditotolkan sepanjang plat pada jarak 1 cm dari garis bawah dan 1 cm dari garis tepi. Selanjutnya, dielusi dengan
menggunakan eluen yang memberikan pemisahan terbaik pada KLT analitik. Noda-noda pada permukaan plat diperiksa
di bawah sinar UV pada panjang gelombang 366 nm, kemudian diamati pada masing-masing hasil nodanya. Noda yang
diduga merupakan senyawa steroid dikerok dan dilarutkan dalam 5 mL pelarut n-heksana, selanjutnya disentrifugasi untuk
mengendapkan silika.
2.8. Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
2.8.1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Etanol 95% dipipet sebanyak 4,5 mL kemudian ditambahkan larutan DPPH 0,2 mM sebanyak 1,5 mL dan dimasukkan
ke dalam kuvet. Selanjutnya, ditentukan dan dicatat hasil pengukuran λmax DPPH untuk digunakan pada tahap selanjutnya
[37].
2.8.2. Pengukuran Aktivitas Antioksidan pada Sampel
Masing-masing isolat dilarutkan dalam etanol 95% dengan konsentrasi 50 ppm dan diuji aktivitas antioksidannya.
Ekstrak untuk uji aktivitas antioksidan divariasikan konsentrasi menjadi 1, 2, 3, 4, dan 5 ppm. Ekstrak pada masing-masing
konsentrasi dipipet 4,5 mL dan ditambahkan 1,5 mL DPPH 0,2 mM kemudian diinkubasi dengan suhu 37°C selama 90
menit, dan diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada λmax yang telah didapatkan. Data
absorbansinya yang diperoleh digunakan untuk menghitung persen (%) aktivitas antioksidan menggunakan Persamaan (3)
dan ditentukan pula nilai EC50nya [27].
(Absorbansi sampel - Absorbansi kontrol)
Aktivitas antioksidan (%) = x 100 % (3)
Absorbansi kontrol

2.9. Identifikasi Senyawa Steroid

2.9.1. Identifikasi dengan Spektrofotometer UV-Vis
Isolat yang diperoleh dari hasil KLT preparatif yang diduga senyawa steroid dianalisis dengan menggunakan
spektrofotometer UV-Vis. Isolat dimasukkan dalam kuvet dan dianalisis pada rentang panjang gelombang 200–800 nm.
Blanko yang digunakan adalah pelarut n-heksana yang dianalisis rentang panjang gelombang yang sama dengan isolat.
Spektra yang terbentuk diamati, dicatat panjang gelombang dan absorbansinya pada puncak yang terbentuk.

26
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

2.9.2. Identifikasi dengan FTIR

Hasil isolat steroid n-heksana dan petroleum eter yang menunjukkan nilai aktivitas antioksidan terbaik diidentifikasi
menggunakan FTIR. Ekstrak kasar tersebut dicampur dengan pelet KBr lalu digerus bersamaan dengan mortar agate.
Campuran pelet KBr dan sampel yang telah halus ditekan dengan tekanan 80 torr (8 – 20 Torr per satuan waktu) selama
10 menit. Selanjutnya, pelet yang telah ditekan dianalisis menggunakan FTIR.
2.9.3. Identifikasi dengan LC-MS/MS
Isolat senyawa steroid yang memiliki kemampuan antioksidan yang paling baik dianalisis menggunakan LC-MS/MS.
Kolom yang digunakan dengan spesifikasi hypersil gold (50 mm x 2,1 mm x 1,9 µm). UHPLC merk ACCELLA type 1250
buatan Thermo Scientific yang terdiri dari degasser vakum, pompa quartener, autosampler. Thermostatic yang dikendalikan
oleh komputer melalui program x-calibur 2.1. Fase gerak yang digunakan adalah 0,1% asam format dalam air (fase A) dan
0,1% asam format dalam asetonitril (fase B). Pengaturan eluen secara gradien linier 100% (A) : 0% (B) sampai 0% (A) :
100% (B) yang diatur selama 5 menit dengan laju alir 500 µL/menit. Volume yang diinjeksikan sebanyak 2 µL. Kolom
dikontrol pada suhu 30ºC, dan kompartemen autosampler ditetapkan untuk 10ºC.
MS yang digunakan adalah MS/MS triple Q (Quadrupole) spektrometer massa TSQ QUANTUM ACCESS MAX dari
Thermo Finnigan dengan sumber ionisasi APCI (Atmospheric Pressure Chemical Ionization) dikendalikan oleh software
TSQ Tune yang dikendalikan dengan mode positif. Kondisi ion APCL 41 adalah sebagai berikut: arus yang digunakan 4
µA, suhu penguapan 250ºC, suhu kapiler 300ºC, sheath gas pressure 45 arbitrary units, dan aux gas pressure 15 arbitary
units.

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Preparasi Sampel
Preparasi sampel meliputi pencucian untuk menghilangkan pengotor yang terdapat pada sampel dan pengeringan
untuk mengurangi kandungan air. Proses pengeringan dilakukan tanpa pemanasan sinar matahari langsung. Pengeringan
tanpa menggunakan pemanasan matahari ini dilakukan agar senyawa aktif yang diinginkan tidak mengalami kerusakan
akibat suhu yang tinggi. Penghalusan bertujuan untuk memperluas permukaan dari sampel sehingga mempermudah pada
tahap ekstraksi. Menurut Voight [38], semakin kecil bentuk sampel maka luas permukaannya akan semakin besar sehingga
kontak yang terjadi antara sampel dengan pelarut akan semakin besar. Sampel yang telah dihaluskan dan diayak dengan
ukuran ±90 mesh. Sampel kering sebanyak 1,1 kg menghasilkan serbuk kering sebanyak 950 g.
3.2. Penentuan Kadar Air secara Termogravimetri
Kandungan air dalam sampel memiliki pengaruh besar terhadap proses ekstraksi. Menurut Khoiriyah dkk. [39], kadar
air yang rendah dapat mempermudah proses penarikan zat aktif dalam sampel karena pelarut mudah menembus dinding
sel sampel tanpa adanya gangguan dari molekul air. Hasil penentuan kadar air pada sampel kering H. verticillata sebesar
6,5%. Nilai tersebut sesuai dengan Setyaningsih dkk. [40] menyatakan bahwa kadar air maksimum yang diisyaratkan untuk
berlangsungnya ekstraksi secara maksimal yaitu sebesar 11 %. Artinya kadar air sampel kering H. verticillata tidak melebihi
ambang batas maksimum kadar air yang disyaratkan untuk proses ekstraksi. Hal ini bertujuan agar sampel yang telah
berbentuk ekstrak tidak ditumbuhi jamur saat disimpan [41].
3.3. Ekstraksi Sampel
Senyawa metabolit sekunder yang berada di alam berikatan dengan glikosida sehingga bersifat polar. Oleh karena
itu, pada penelitian ini proses ekstraksi maserasi dilakukan dengan pelarut metanol yang bersifat polar. Proses maserasi
dihentikan ketika warna filtrat dari sampel sudah berubah dari hijau pekat menjadi hijau yang lebih bening yang dapat
diasumsikan bahwa senyawa dalam sampel telah terekstrak. Filtrat dari hasil proses maserasi menggunakan metanol yang
telah diperoleh dijadikan satu dan diuapkan menggunakan rotary evaporator untuk memperoleh ekstrak pekat metanol.
Rendemen ekstrak pekat yang didapat dari pada penelitian ini yaitu 5,14%.
3.4. Hidrolisis dan Partisi
Senyawa organik yang terdapat pada tumbuhan dalam bentuk ikatan glikosida yaitu gabugan dua bagian senyawa
antara gugus gula dan gugus bukan gula. Proses hidrolisis akan memutuskan ikatan glikosida menjadi glikon dan aglikon
dengan bantuan katalis asam. Hidrolisat yang diperoleh kemudian dipartisi (ekstraksi cair-cair) dengan menggunakan
pelarut n-heksana. Pelarut ini bersifat nonpolar sehingga dapat melarutkan senyawa yang bersifat nonpolar seperti
senyawa steroid. Proses partisi menghasilkan dua fasa cairan di mana fasa air dan fasa organik pada lapisan atas. Proses
ekstraksi dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan untuk diambil fase organik yang mengandung senyawa steroid hingga

27
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

terjadi perubahan dari hijau kehitaman berubah warnanya menjadi bening. Dari 10 gram ekstrak kasar yang dihidrolisis
didapatkan fraksi pekat n-heksana sebanyak 4,7 g dengan randemen 47,95%.
3.5. Uji Fitokimia
Uji fitokimia bertujuan untuk mengetahui senyawa steroid yang terdapat dalam sampel. Terbentuknya warna hijau
kebiruan menunjukkan fraksi n-heksana H. verticillata mengandung golongan senyawa steroid sebagaimana yang
ditunjukkan pada Gambar 1(a).
3.6. Pemisahan Senyawa Steroid dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
3.6.1. Pemisahan dengan KLT Analitik
Hasil ilustrasi pola pemisahan variasi eluen pada KLT analitik saat diamati di bawah lampu UV 366 nm tergambar
pada Gambar 1(b). Pola pemisahan pada eluen 5 (3,75:1,25) dan 4 (4:1) menghasilkan jumlah noda yang sama dan
terbanyak daripada variasi eluen lainnya. Meskipun demikian, variasi eluen 4 memiliki pola pemisahan noda yang terduga
steroid lebih bagus dibandingkan dengan variasi eluen 5 karena adanya jarak yang jelas antara senyawa terduga steroid
dengan senyawa terduga triterpenoid.

(a) (b)
Gambar 1. (a) Uji fitokimia fraksi n-heksana H. verticillata, dan (b) Penampakan noda KLT analitik pada 366 nm.

Tabel 2. Jumlah Noda yang Terbentuk pada KLT Analitik

Jumlah Dugaan Dugaan
Eluen Rf Warna Rf Warna
Noda Senyawa Senyawa
1 4 0,0375 Merah Triterpenoid 0,1625 Hijau Steroid
(4,75:0,25) 0,1 Merah Triterpenoid 0,1875 Merah Triterpenoid
2 4 0,05 Merah Triterpenoid 0,2125 Hijau Steroid
(4,50: 0,50) 0,0875 Merah Triterpenoid 0,25 Merah Triterpenoid
3 9 0,075 Merah Triterpenoid 0,35 Merah Triterpenoid
(4,25: 0,75) 0,15 Merah Triterpenoid 0,425 Merah Triterpenoid
0,2 Merah Triterpenoid 0,6 Hijau Steroid
0,25 Merah Triterpenoid 0,7625 Merah Triterpenoid
0,2875 Merah Triterpenoid
4 12 0,1125 Merah Triterpenoid 0,5625 Merah Triterpenoid
(4,00:1,00) 0,2 Merah Triterpenoid 0,625 Merah Triterpenoid
0,25 Merah Triterpenoid 0,675 Merah Triterpenoid
0,3625 Merah Triterpenoid 0,725 Hijau Steroid
0,4 Merah Triterpenoid 0,7875 Merah Triterpenoid
0,475 Merah Triterpenoid 0,8625 Merah Triterpenoid
5 12 0,1625 Merah Triterpenoid 0,6375 Merah Triterpenoid
(3,75 : 1,25) 0,25 Merah Triterpenoid 0,7 Merah Triterpenoid
0,325 Merah Triterpenoid 0,7375 Merah Triterpenoid
0,4875 Merah Triterpenoid 0,775 Hijau Steroid
0,5625 Merah Triterpenoid 0,8125 Merah Triterpenoid
0,5875 Merah Triterpenoid 0,8625 Merah Triterpenoid

28
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

Adapun variasi eluen 1 (4,75:0,25) dan 2 (4,50:0,50) menghasilkan jumlah noda yang sedikit (Gambar 1(b)). Pada
variasi eluen 1 memiliki jumlah noda sebanyak 9, namun noda yang diduga steroid mengalami overlap dengan noda yang
diduga senyawa triterpenoid. Berdasarkan hasil tersebut, variasi eluen 4 dengan perbandingan n-heksana : etil asetat yaitu
4:1 digunakan untuk analisis lebih lanjut pada pemisahan KLT preparatif.
Berdasarkan Tabel 2, dari kelima variasi eluen yang digunakan, variasi eluen 4 dan 5 menghasilkan jumlah noda
terbanyak dengan jumlah yang sama yaitu 12, sedangkan pada variasi eluen 3 (4,25:0,75) hanya menghasilkan 9 noda.
Adapun pada variasi eluen 1 dan 2 masing-masing menghasilkan 4 noda.
3.6.2. Pemisahan dengan KLT Preparatif
Pemisahan senyawa steroid dengan KLT preparatif dilakukan untuk mendapatkan isolat steroid. Hasil pemisahan
menggunakan KLT preparatif terbentuk 19 noda yang ditunjukkan pada Tabel 3. Berdasarkan Tabel 3, dapat diketahui
terdapat 1 steroid dan 18 triterpenoid. Jumlah noda yang dihasilkan pada KLT preparatif tidak sama dengan KLT analitik.
Hal ini dikarenakan jarak elusi yang berbeda sehingga pada KLT preparatif senyawa yang awalnya masih berhimpit
akhirnya terpisah.

Tabel 3. Hasil Pemisahan Senyawa Steroid dengan KLT Preparatif

No. Rf Warna Dugaan Senyawa No. Rf Warna Dugaan Senyawa
1 0,067 Merah Triterpenoid 11 0,4 Merah Triterpenoid
2 0,094 Merah Triterpenoid 12 0,461 Merah Triterpenoid
3 0,12 Merah Triterpenoid 13 0,51 Merah Triterpenoid
4 0,183 Merah Triterpenoid 14 0,55 Merah Triterpenoid
5 0,21 Merah Triterpenoid 15 0,66 Merah Triterpenoid
6 0,239 Merah Triterpenoid 16 0,75 Hijau Steroid
7 0,283 Merah Triterpenoid 17 0,8 Merah Triterpenoid
8 0,31 Merah Triterpenoid 18 0,856 Merah Triterpenoid
9 0,36 Merah Triterpenoid 19 0,917 Merah Triterpenoid
10 0,383 Merah Triterpenoid

Gambar 2. Hasil pemisahan senyawa steroid dengan KLT preparatif.

Ilustrasi hasil pemisahan KLTP ditunjukkan pada Gambar 2. Pemisahan dengan KLT preparatif menghasilkan 1 noda
positif steroid pada noda 16. Noda tersebut dikerok, dilarutkan dalam pelarutnya, dipisahkan menggunakan sentrifuge dan
diuapkan pelarutnya. Isolat tersebut kemudian diuji antioksidannya menggunakan metode DPPH.

29
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

3.7. Uji Aktivitas Antioksidan dengan metode DPPH

3.7.1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Penentuan panjang gelombang maksimum bertujuan untuk mengetahui panjang gelombang yang mempunyai
serapan tertinggi. Pengukuran sampel dilakukan panjang gelombang maksimum untuk mengoptimalkan kepekaan DPPH
dan meminimalkan kesalahan [42]. Panjang gelombang maksimum DPPH yang diperoleh sebesar 515 nm sebagaimana
yang ditunjukkan pada Gambar 3. Panjang gelombang ini akan digunakan untuk menentukan aktivitas antioksidan pada
isolat senyawa steroid hasil KLT fraksi n-heksana dari H. verticillata.
Absorbansi

Panjang Gelombang (nm)

Gambar 3. Spektra panjang gelombang maksimum larutan DPPH.

3.7.2. Pengukuran Aktivitas Antioksidan pada Sampel

Persen aktivitas antioksidan pada isolat senyawa steroid hasil KLT preparatif dengan variasi konsentrasi 1, 2, 3, 4
dan 5 ppm ditunjukkan pada Tabel 4. Pembuatan larutan DPPH dibuat dalam keadaan baru untuk menghindari terjadinya
perubahan nilai yang signifikan. Berdasarkan data pada Tabel 4, dapat diketahui nilai EC50 sampel yaitu sebesar 5,109
ppm. Suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat apabila memiliki nilai EC50 kurang dari 50 ppm [43].

Tabel 4. Hasil Pengukuran Persen Aktivitas Antioksidan pada Sampel

Konsentrasi Absorbansi Kontrol Absorbansi Sampel Aktivitas Antioksidan (%)
1 ppm 0,1167 0,1125 3,59
2 ppm 0,4052 0,3849 5,009
3 ppm 0,1173 0,0973 17,05
4 ppm 0,7741 0,5601 27,6
5 ppm 0,7774 0,3875 50,154

3.8. Identifikasi Senyawa Steroid

3.8.1. Identifikasi dengan Spektrofotometer UV-Vis
Berdasarkan Gambar 4, isolat steroid menghasilkan serapan maksimum pada panjang gelombang 203,9 dan 276
nm. Panjang gelombang 203 nm terdapat ikatan C=C tidak terkonjugasi dengan transisi π- π*. Sesuai dengan penelitian
Aprelia dan Suyatno [44] yang melakukan identifikasi senyawa metabolit sekunder pada tumbuhan paku terdapat adanya
serapan maksimum pada 203 nm yang menunjukkan adanya senyawa β-sitosterol, sedangkan panjang gelombang 276
nm menunjukkan bahwa hasil isolasi ini memiliki ikatan rangkap terkonjugasi.
Absorbansi

Panjang Gelombang (nm)

Gambar 4. Spektra UV-Vis pada isolat steroid hasil KLT preparatif.
30
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

3.8.2. Identifikasi dengan FTIR

FTIR merupakan suatu metode yang digunakan untuk mengidentifikasi gugus fungsi suatu senyawa dimana terjadi
interaksi antara energi dengan molekul yang menyebabkan terjadinya transisi akibat adanya vibrasi molekul sehingga
setiap gugus fungsi mempunyai tipe ikatan yang berbeda dan serapan IR yang khas. Spektra FTIR dari isolate steroid H.
verticillata dapat dilihat pada Gambar 5.
% Transmitan

Bilangan Gelombang (cm-1)

Gambar 5. Spektra FTIR isolat steroid hasil KLT preparatif.

Hasil analisis pola serapan FTIR yang dihasilkan dari isolat steroid H. verticillata menunjukkan adanya pita serapan
pada daerah 3460,150 cm-1 yang melebar menunjukkan adanya gugus O–H pada isolat. Pita serapan 2958,771 cm-1
menunjukkan CH3 stretching, –CH2– asiklik (2927 dan 2840 cm-1) dan ikatan C=C (1650 cm-1). Gugus fungsi penting lainnya
yaitu gugus karbonil C=O untuk ester (1731 cm-1) yang didukung dengan serapan C–O ester (1286 cm-1) dan serapan C–
O–C (1076 cm-1). Serapan C–O untuk alkohol sekunder muncul 1123,154 cm-1. Gugus geminal dimetil pada bilangan
gelombang 1460 cm-1 dan 1383,5 cm-1. Serapan gugus geminal dimetil ini adalah serapan khas dari senyawa steroid dan
triterpenoid [45].

3.8.3. Identifikasi dengan LC-MS/MS

Identifikasi dilakukan pada isolat steroid yang didapat dari pemisahan menggunakan KLT. LC-MS/MS merupakan
salah satu instrumen yang dapat memisahkan senyawa berdasarkan berat dan struktur molekul, serta distribusi
kepolarannya terhadap fasa diam dan fasa gerak yang digunakan. Dugaan jenis steroid hasil identifikasi LC-MS/MS
berdasarkan waktu retensi dan nilai m/z yang terdapat pada Tabel 5. Berdasarkan Tabel 5, diketahui bahwa isolat hasil
KLT preparatif fraksi n-heksana hasil hidrolisis ekstrak metanol H. verticillata menghasilkan spektra massa dengan m/z ion
prekursor sebesar 397 dan m/z ion produk sebesar 161. Nilai ini sesuai dengan ion prekursor dan ion produk senyawa
steroid β-sitosterol. Struktur ion prekursor, ion produk dan β-sitosterol ditunjukkan pada Gambar 6.

161
Ion Produk

m/z 397
[M-H2O+H]+
Ion prekursor
β-sitosterol

(a) (b)
Gambar 6. (a) Struktur ion prekursor dan ion produk [18], dan (b) struktur β-sitosterol.
31
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

Tabel 5. Hasil Identifikasi LC-MS/MS Isolat Steroid H. verticillata

Waktu Retensi Massa (m/z)
. Jenis Steroid
(Menit) M M-H2O Ion Prekursor Ion Produk Kelimpahan
β-sitosterol 2,26 414 396 397 160,5 – 161,5 1326

4. Kesimpulan
Pemisahan steroid fraksi n-heksana pada H. verticillata menggunakan KLT dengan variasi eluen n-heksana dan etil
asetat. Pemisahan terbaik untuk memisahkan steroid dengan KLT analitik menggunakan eluen 4 (4:1) dengan 12 noda.
Pemisahan steroid menggunakan KLT preparatif menghasilkan 19 noda dimana 1 noda yang diduga steroid. Aktivitas
antioksidan isolat steroid hasil KLT preparatif menghasilkan nilai EC50 sebesar 5,109 ppm yang menunjukkan aktivitas
antioksidan yang sangat kuat. Hasil identifikasi dengan spektrofotometer UV-Vis, FTIR dan LC-MS/MS menunjukkan
bahwa isolat hasil KLT preparatif fraksi n-heksana hasil hidrolisis ekstrak metanol H. verticillata mengandung senyawa
steroid β-sitosterol.

Daftar Pustaka
[1] F. Goltenboth, K. H. Timotius, P. P. Milan, & J. Margraf, Ekologi Asia Tenggara Kepulauan Indonesia. Jakarta:
Salemba Teknika, 2012.
[2] A. Artiyani, "Penurunan Kadar N-Total dan P-Total pada Limbah Cair Tahu dengan Metode Fitoremediasi Aliran Batch
dan Kontinyu Menggunakan Tanaman Hydrilla verticillata," Spectra, vol. 9, no. 18, pp. 9–14, 2011.
[3] H. Araki, M. Inoue, & T. Katoh, ”Total synthesis and Absolute Configuration of Otteliones A and B, Novel and Potent
Antitumor Agents from a Freshwater Plant," Organic Letters, vol. 5, no. 21, pp. 3903-3906, 2003.
[4] B. Das, D. Pal, & A. Haldar, "Pharmacognostical and Physiochemical Study of the Aquatic Weed Hydrilla verticillata
(L.f.) Royle Known as Nutrient Power House," International Journal of Research in Pharmacy and Science, vol. 5, no.
1, pp. 1–6, 2015.
[5] P. Prabha & J. Rajkumar, "Phytochemical Screening and Bioactive Potential of Hydrilla verticillata," Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research, vol. 7, no. 3, pp. 1809-1815, 2015.
[6] S. W. Annie, R. Raveen, M. G. Paulraj, T. Samuel, & S. Arivoli, "Screening of Hydrilla verticillata (L. F.) Royle
(Hydrocharitaceae) Crude Leaf Extracts for Larvicidal Efficacy against the Filarial Vector Culex quinquefasciatus Say
(Diptera: Culicidae)," International Journal of Entomology Research, vol. 1, no. 3, pp. 43-48, 2016.
[7] D. K. Pal & S. B. Nimse, "Little Known Uses of Common Aquatic Plant, Hydrilla verticillata (Linn. f.) Royle," Natural
Product Radiance, vol. 5, no. 2, pp. 108-111, 2006.
[8] A. G. Fasya, S. Amalia, D. S. Megawati, F. Salima, V. A. Kusuma, & B. Purwantoro, "Isolation, Identification, and
Bioactivity of Steroids Isolates from Hydrilla verticillata Petroleum Ether Fraction," in IOP Conference Series: Earth
and Environmental Science on the 10th International Conference on Green Technology, vol. 456, no. 012009, 2020.
[9] Z. J. Yi, J. Yao, M. J. Zhu, H. L. Chen, F. Wang, & X. Liu, "Uranium Biosorption from Aqueous Solution by the
Submerged Aquatic Plant Hydrilla verticillata," Water Science and Technology, vol. 75, no. 5-6, pp. 1332-1341, 2017.
[10] V. M. Kensa & R. Neelamegam, "Preliminary Phytochemical Analysis of Hydrilla verticillata (L.F.) Royle. Collected
from Polluted and Unpolluted Water Sources," International Journal of Informative & Futuristic Research, vol. 3, no. 3,
pp. 1125-1128, 2015.
[11] K. Roma, S. Kiran, & D. Sahoo, "Extraction and Screening of Bioactive Compounds of Some Common Hydrophyticand
Wetland Plants from East Singbhum, Jharkhand, India," IOSR Journal of Pharmacy, vol. 7 no. 11, pp. 23-29, 2017.
[12] S. Amalia, A. G. Fasya, F. Hasanah, & D. Yuliani, "Pemisahan Senyawa Aktif Fraksi Petroleum Eter dan Etil Asetat
Hasil Hidrolisis Ekstrak Etanol Hydrilla verticillata Pasuruan dari Ranu Grati, ALCHEMY: Journal of Chemistry, vol. 6,
no. 2, pp. 50-56, 2018.
[13] U. Mardiyah, "Uji Aktivitas Antioksidan terhadap 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil (DPPH) dan Identifikasi Golongan Senyawa
Aktif Alga Merah Eucheuma spinosum dari Perairan Banyuwangi," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik
Ibrahim, Malang, 2012.
[14] S. Lenny, "Senyawa Flavonoida, Fenil Propanoida dan Alkaloida," USU Repository, 2006.
[15] S. Atun, "Metode Isolasi dan Identifikasi Struktur Senyawa Organik Bahan Alam," Jurnal Konservasi Cagar Budaya
Borobudur, vol. 8, no. 2, pp. 53-61, 2014.
[16] M. N. Hafiz, "Uji Toksisitas Ekstrak Metanol, Kloroform dan n-Heksana Hydrilla verticillata (L.f) Royle dari Danau Ranu
Kab. Pasuruan terhadap Larva Udang Artemia salina Leach," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim,
Malang, 2017.
32
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

[17] A. G. Fasya, A. Baderos, A. D. R. Madjid, S. Amalia, & D. S. Megawati, "Isolation, Identification, and bioactivity of
Steroids Compounds from Red Algae Eucheuma cottonii Petroleum Ether Fraction," in AIP Conference Proceedings,
vol. 2120, no.1, 2019.
[18] I. Khalaf, A. Corciovia, L. Vlase, B. Ivanescu, & D. Lazar, "LC/MS Analysis of Sterolic Compounds from Glycyrrhiza
glabra," Studia UBB Chemia, vol. 3, no. 1, pp. 97-102, 2011.
[19] D. S. P. Handoko, "Kinetika Hidrolisis Maltosa pada Variasi Suhu dan Jenis Asam sebagai Katalis," SIGMA: Jurnal
Sains dan Teknologi, vol. 9, no. 1, 2006.
[20] A. G. Fasya, A. R. Dinasti, M. Shofiyah, L. M. Rahmawati, N. Millati, D. A. Safitri, S. Handoko, A. Hanapi, & R. Ningsih,
"Ekstraksi, Hidrolisis dan Partisi Metabolit Sekunder dari mikroalga Chorella sp.," ALCHEMY: Journal of Chemistry,
vol. 5, no. 1, pp. 5-9, 2016.
[21] J. Tonius, M. A. Wibowo, & N. Idiawati, "Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Steroid Fraksi n-Heksana Daun Buas-
Buas (Premna serratifolia L.)," Jurnal Kimia Khatulistiwa, vol. 5, no. 1, pp. 1-7, 2016.
[22] A. Mohammad, S. A. Bhawani, & S. Sharma, "Analysis of Herbal Products by Thin-Layer Chromatography: A Review,"
International Journal of Pharma and Bio Sciences, vol. 1, no. 2, pp. PS16, 2010.
[23] D. S. Megawati, A. G. Fasya, R. A. Pratiwi, & N. Maghfiroh, "Pharmacology Potency of Thin Layer Chromatography
Steroid Isolates of Chlorella sp. Chloroform Fraction," IOP Conference Series Earth and Environmental Science, vol.
456, no. 012012, 2020.
[24] I. Mardaneni, "Pemisahan Senyawa Steroid Fraksi Etil Asetat Alga Merah Eucheuma cottonii Perairan Wongsorejo
Banyuwangi Menggunakan Metode KLT dan LC-MS," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim,
Malang, 2017.
[25] A. Baderos, "Pemisahan Senyawa Steroid Fraksi Petroleum Eter Alga Merah (Eucheuma cottonii) dengan Metode
Kromatografi Lapis Tipis dan Identifikasi Menggunakan LC-MS," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik
Ibrahim, Malang, 2017.
[26] S. N. Azah, "Uji Toksisitas dan Identifikasi Isolat Steroid Hasil KLTP Ekstrak n-Heksana dan Petroleum Eter Hydrilla
verticillata Menggunakan UV-Vis dan LC-MS/MS," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang,
2019.
[27] S. Ikfi, "Uji Antioksidan Ekstrak Metanol, Kloroform dan n-Heksana Hydrilla verticillata (L.f) Royle dari Danau Ranu
Kab. Pasuruan Menggunakan Metode DPPH (1,1–diphenyl-2-picrylhydrazyl)," Skripsi, Universitas Islam Negeri
Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2017.
[28] R. Laili, "Uji Aktioksidan dan Identifikasi Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis Senyawa Steroid Fraksi Petroleum
Eter Hasil Hidrolisis Ekstrak Metanol Alga Merah," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang,
2016.
[29] A. G. Fasya, N. Millati, L. M. Rahmawati, R. Iyani, A. Hanapi, R. Ningsih, D. Yuliani, & D. S. Megawati, "Isolation and
Bioactivity of Steroids Isolates from Petroleum Ether Fraction of Chlorella sp.," in AIP Conference Proceedings, vol.
2243, no. 1, 2020.
[30] N. Imamah, "Pemisahan Senyawa Steroid Fraksi Etil Asetat Hasil Hidrolisis Ekstrak Metanol Mikroalga Chlorella sp.
Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Identifikasinya Menggunakan Spektrofotometer FTIR," Skripsi,
Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2015.
[31] I. Sriwahyuni, "Uji Fitokimia Ekstrak Tanaman Anting-Anting (Acalypha indica Linn) dengan Variasi Pelarut dan Uji
Toksisitas Menggunakan Brine Shrimp (Artemia salina Leach)," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik
Ibrahim, Malang, 2010.
[32] Muharram, "Isolasi dan Uji Bioaktivitas Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak N-Heksan Daun Pare (Momordica
charantia L.)," Bionature, vol. 11, no. 2, pp. 70-78, 2010.
[33] U. Zahra, Muharram, & A. Ilyas, "Isolasi dan Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak n-Heksan dari Umbi
Lobak (Raphanus sativus Lamk)," Al-Kimia, vol. 1, no. 1, pp. 1-9, 2013.
[34] L. N. Azizah, "Uji Toksisitas Isolat Steroid Hasil KLTP Fraksi Petroleum Eter Hasil Hidrolisis Ekstrak Metanol Alga
Merah," Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2016.
[35] E. K. Hayati, A. Jannah, & R. Ningsih, "Identifikasi Senyawa dan Aktivitas Antimalaria In Vivo Ekstrak Etil Asetat
Tanaman Anting-Anting (Acalypha indica L.)," Molekul, vol. 7. no. 1. pp. 20-32, 2012.
[36] I. Dukomalamo, M. S. Sangi, & J. A. Rorong, "Analisis Senyawa Toksik Tepung Pelepah Batang Aren (Arenga pinnata)
dengan Spektroskopi UV-Vis dan Inframerah," Jurnal MIPA, vol. 5, no. 1. pp. 54-59, 2016.
[37] E. Hanani, A. Mun'im, & R. Sekarini, "Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia sp. dari Kepulauan
Seribu," Majalah Ilmu Kefarmasian, vol. 2, no. 3, pp. 127-133, 2005.
[38] R. Voigt, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi Edisi 5. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press, 1995.
[39] S. Khoiriyah, A. Hanapi, & A. G. Fasya, "Uji Fitokimia dan Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat, Kloroform dan
Petroleum Eter Ekstrak Metanol Alga Coklat Sargassum vulgare dari Pantai Kapong Pamekasan Madura,"
ALCHEMY, vol. 3, no. 2, pp. 133-144, 2014.
33
 Fasya dkk. / ALCHEMY: JOURNAL OF CHEMISTRY, 8 : 1 (2019) 23-34

[40] D. Setyaningsih, O. Y. Nurmillah, & S. Windawati, "Kajian Aktivitas Antioksidan dan Antimikroba Ekstrak Biji, Kulit
Buah, Batang dan Daun Tanaman Jarak Pagar (Jatropha curcas L.)," Jurnal Teknologi Pangan, vol. 4, no. 2, pp. 1-7,
2010.
[41] R. D. Ratnani, I. Hartati, Y. Anas, D. E. Puspaningrum, & D. D. D. Khilyati, "Standarisasi Spesifik dan Non Spesifik
Ekstraksi Hidrotropi Andrographolid dari Sambiloto," dalam Prosiding Seminar Nasional Peluang Herbal sebagai
Alternatif Medicine, 2015, pp. 147-155.
[42] A. Rohman, Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar, 2007.
[43] B. Hidajat, "Penggunaan Antioksidan pada Anak," Continuing Education XXXV. Hot Topics in Pediatric, pp. 3-4, 2005.
[44] F. Aprelia & Suyatno, "Senyawa Metabolit Sekunder dari Ekstrak Etil Asetat Tumbuhan Paku Christella arida dan Uji
Pendahuluan Sebagai Antikanker," UNESA Journal of Chemistry, vol. 2, no. 3, pp. 93-99, 2013.
[45] M. D. Astuti, A. Maulana, & E. M. Kuntowati, "Isolasi Steroid dari Fraksi n-Heksana Batang Bajakah Tampala
(Spatholobus littoralis Hassk.)," dalam Prosiding Seminar Nasional Kimia Jurusan Kimia FMIPA Universitas Negeri
Surabaya, 2014, pp. B-9 - B-12 .

34

View publication stats