ANTIMICROBIAL TEST OF “TUTUP” FLOWERS  

(Macaranga tanarius (L.) Mull.Arg.)  

Fungki Sri Rejeki, Endang Retno Wedowati, and Diana Puspitasari 
 
Agricultural Industrial Technology of Wijaya Kusuma Surabaya University 
Corresponding author: [email protected] 

Abstract 
Preservation  “siwalan”  sap  in  Lamongan  done  in  two  ways,  namely  by  the  addition  of  lime  solution 
and by addition of liquid of “tutup” flowers.  “Tutup” flowers ((Macaranga tanarius (L.) Mull.Arg.) (name 
of Lamongan district) is included in the family Euphorbiaceae. Sugar is produced from the sap with liquid 
of “tutup” flowers preservative have better quality than the other sap preservative. The results also showed 
that the sap with liquid of “tutup” flowers preservative have a longer shelf life, with a fewer the number of 
total  microbes.  Therefore,  it  needs  to  be  studied  a  potential  “tutup”  flowers  extract  as  an  anti‐microbial 
material. The purpose of this study is as follows: (1) to know and effectiveness test of “tutup” flowers pre‐
servative  against  pathogenic  microorganisms  and  food  destroyer, (2)  to determine  part  of  “tutup”  plants 
which potentially as a preservative, and (3) to determine the minimum concentration of preservative with 
Contact Method. 
The results showed the following: (1) Growth of Saccharomyces cerevisiae and Staphylococcus aureus 
can be inhibited by liquid of “tutup” flowers, but the growth of Pseudomonas fluorecens are not inhibited 
by liquid of “tutup” flowers; (2) Pseudomonas fluorecens bacterial growth can be inhibited by a solution of 
lime, but the growth of Staphylococcus aureus and the Saccharomyces cereviseae not inhibited by a solu‐
tion of lime; (3)  Inhibited the growth of Staphylococcus aureus by addition of “tutup” plant leaves extract 
with concentration 30 % and “tutup” plant flowers extract with 20% and 30% concentration,  inhibited the 
growth of Pseudomonas fluorecens by addition of “tutup” plant leaves and flowers with 20% and 30% con‐
centration,  whereas  inhibited  the  growth  of  Saccharomyces  cereviceae  by  the  addition  of  leaf  extract  of 
“tutup” plant with a concentration of 20% and 30% and a flower extract of “tutup” plant with a minimum 
concentration of 10%; and (4)  furthermore used flower extract of “tutup” plant with concentration of at 
least 20% can inhibited the growth of Staphylococcus aureus, Pseudomonas fluorecens, and Saccharomyces 
cereviceae. 
 
Key words: “tutup” flowers (Macaranga tanarius);  antimicrobial;  natural preservatives  

1. Introduction  servative  produce  solid  sugar  with  higher  yield, 

Siwalan  (Borassus  flabellifer  Linn)  farmers  in  shorter boiling time, color and hardness as well as 
Lamongan  Indonesia  using  “tutup”  flowers  better  quality  in  comparison  with  used  of  lime 
((Macaranga tanarius (L.) Mull. Arg)) and lime so‐ solution  as  a  preservative  (Rejeki,  F.S.,  et  al., 
lution as palm sap preservative at the time of har‐ 2009).  This  is  because  the  use  of  “tutup”  flower 
vesting.  Photo  of  “tutup”  flowers  can  be  seen  at  plants as palm sap preservative will produce palm 
Figure 1.  sap with better quality and the number of micro‐
organisms  that  are  less  than  with  the  use  of  lime 
solution as a preservative (Rejeki, F.S., et al., 2013). 
Formaldehyde,  benzoic  acid  and  the  antioxi‐
dant  BHT,  BHA,  TBHQ  and  sourced  from  petro‐
leum  or  synthetic  materials  are  widely  used  as  a 
preservative  (Deiana  M,  2003;  Freidon  Shahidi, 
2003 and Anonymous, 2008). The use of synthetic 
preservatives  and  antioxidants  are  not  currently 
recommended by the Ministry of Health for alleg‐
edly  can  cause  cancer  (carcinogenic  Agent) 
Figure 1. “Tutup” flowers plants 
(Hernani; Mono Rahardjo, 2005), so it is necessary 
to  look  for  alternative  natural  preservative.  For 
Used “tutup” flowers extract as a palm sap pre‐ that needs to be further investigated as a potential 

94
of “tutup” flowers as a natural preservative.  The  minimum  inhibitory  concentration  causing 
  bacteria  do  not  grow  on  plates  after  24  hours  of 
2.  Methodology  contact time with the sample. 
2.1   Research place 
 
This research was conducted at Microbiology 
3. Results and Discussion 
Laboratory  and  Analysis  of  Industrial  Products 
Optimization  of  part  of  the  “tutup”  plants 
Laboratory,  Study  Program  of  Agriculture  Indus‐
that has the potential as preservatives  
trial Technology, Department of Engineering, Wi‐
This study was conducted to determine which 
jaya Kusuma Surabaya University 
parts  of  the  “tutup”  plants  are  leaves  and  flowers 
 
has a potential as Staphylococcus aureus. Pseudo‐
2.2   Materials and Tools  monas  fluorescens  and  Saccharomyces  cereviceae 
The  materials  used  are  leaves  and  flowers  of  antimicrobial. 
the  “tutup”  plant,  Staphylococcus  aureus  FNCC  Pure  microbial  cultures  obtained  from  the 
0047,  Pseudomonas  fluorescens  FNCC  0070,  and  Inter‐University  Center  for  Food  and  Nutrition, 
Saccharomyces cereviceae FNCC 3012, Agar Nutri‐ University of Gadjah Mada (PAU Food and Nutri‐
ent  medium,  Nutrient  Broth  medium,  peptone,  tion UGM) are Staphylococcus aureus FNCC 0047, 
Yeast  Extract,  Glucose.  The  tools  used  are  Lami‐ Pseudomonas  fluorescens  FNCC  0070,  and  Sac‐
nair Air Flow, autoclave, vortex, test tubes, Erlen‐ charomyces cereviceae FNCC 3012. Pure microbial 
meyer, and measuring tools  isolate can be seen at Figure 2. 
 
2.3   Research Methods 
This study consists of two phase, namely: 
First  Stage  of  Research:  Optimization  of  part 
of the “tutup” plants that has the potential as pre‐
servatives.  This  study  used  a  randomized  block 
design  (RBD)  with  2  factors  pattern  that  was  re‐
peated  three  times.  The  first  factor  is  part  of  the 
plant  (S1)  with  two  levels,  namely:  
S1:  flowers  of  “tutup”  plant  and  S2:  leaves  of  of 
“tutup”  plant.  The  second  factor  is  solution  con‐
centration  (K)  with  three  levels,  namely:  K1:  10%, 
K2: 20%. And K3: 30%    
Optimization of part of the “tutup” plants that  Figure 2. Pure microbial isolate 
has  the  potential  as  preservatives  will  be  deter‐  
mined  by  testing  a  preservative  against microbial  The results of antimicrobial activity test with 
activity test, namely: Staphylococcus aureus, Pseu‐ two factors, namely the part of the plant (S) and 
domonas  fluorescens  and  Saccharomyces  cer‐ concentration (K) can be seen at Figure 3 and Ta‐
eviceae.  Analysis  is  conducted  by  descriptive  ble 1. 
analysis 
Second  stage  of  Research:  Determination  of 
antimicrobial  minimum  concentration  with  Con‐
tact Method 
10  ml  of  Nutrient  Broth (NB)  sterile  in erlen‐
meyer  addition  the  sample  extract  to  obtain  the 
concentration  (%  w/v)  as  desired.  Furthermore, 
this medium was inoculated with 0.1 ml of bacte‐
rial suspension test 24 hours old. 1 ml of this mix‐
ture were taken on plates (0 hour) with a dilution  Figure 3. Inhibition zone of “tutup” plant leaves  
rate of 10‐5, 10‐6, and 10‐7. The rest of the mixture of  and flowers 
sample  and  bacteria  shaking  in  a  shaker  at  150   
rpm,  370C  for  24  hours.  At  24th  hour,  1  ml  of  the  Antimicrobial  test  results  showed  that  the 
mixture was taken and made the level of dilution  leaves and flowers of “tutup” plants has antimicro‐
10‐5,  10‐6,  and  10‐7.  10  NB  sterile  without  the  addi‐ bial effects with varying concentrations. Staphylo‐
tion  of  extract  used  as  control. Each  dish  was  in‐ coccus aureus growth inhibited by the addition of 
cubated  for  48  hours  at  a  temperature  of  370C.  “tutup”  plants  leaves  extracts  at  concentration  of 
95
30% and “tutup” plants flowers extract at concentration  30%.  While  Saccharomyces  cereviceae 
of  20%  and  30%.  Pseudomonas  fluorescens  growth  in‐ inhibited  growth  with  the  addition  of 
hibited  with  the  addition  of  “tutup”  plants  leaves  ex‐ “tutup”  plants  leaves  extracts  at  concen‐
tracts  at  concentration  of  20%  and  30%;  and  “tutup”  tration of 20% and 30% and “tutup” plants  
plants  flowers  extract  at  concentration  of  20%  and  flowers extract with concentration of 10%, 
20%  and  30%.  Based  the  test  results 
shown  that  the  inhibition  zone  diameter 
Table 1.  Test results of antimicrobial  of  “tutup”  plant  leaves  relatively  smaller 
Microbes  Parts of  Concentration  Antimicrobial  than  the  zone  of  inhibition  of  “tutup” 
the  activity  plants flowers. This is probably caused by 
plant  the  concentration  of  the  antimicrobial  at 
Staphylococcus  Leaves  10 %  ‐  the  “tutup”  plants  flowers  is  higher  than 
aureus  the  concentration  of  the  antimicrobial  at 
20 %  ‐ 
the  “tutup”  plants  leaves.  “Tutup”  plants 
30 %  +  contains  diterpenoids,  flavonoids,  and 
flowers  10 %  ‐  tannins.  Phommart,  S.,  et  al.  (2005)  have 
isolated  tanarifuranonol,  tanariflavonona 
20 %  +  C, and tanariflavonona D of “tutup” plant 
30 %  +++  leaves.  Furthermore,  Kawakami,  A.,  et  al. 
(2008)  have  isolated  seven  prenylated 
Pseudomonas  Leaves  10 %  ‐  flavonones  compounds  are  macafla‐
fluorescens 
20 %  +  vonones  A  ‐  G.  Compounds  alkaloids, 
saponins,  phenolics,  flavonoids,  triterpe‐
30 %  ++  noids are compounds that can inhibit mi‐
flowers  10 %  ‐  crobial activity  
 
20 %  ++ 
3.2.  Determination  of  Antimicrobial 
30 %  +++  Minimum  Concentration  with 
Contact Method 
Saccharomyces  Leaves  10 %  ‐  Antimicrobial  Minimum  Concentration 
cereviceae  Test with Contact Method conducted to deter‐
20 %  + 
mine  the  minimum  concentration  “tutup” 
30 %  ++  flower  extract  that  can  inhibit  microbial 
growth  of  Staphylococcus  aureus,  Pseudomo‐
flowers  10 %  + 
nas  fluorescens  and  Saccharomyces  cereviceae 
20 %  ++  after  contact  with  preservative  for  24  hours. 
The  results  of  antimicrobial  minimum  inhibi‐
30 %  +++  tory concentration test can be seen at Table 2 
and Figure 4. 
Description:   ‐) no inhibition of growth    
                        +) There is inhibition of growth 

Table 2. Antimicrobial minimum inhibition concentration 
Microbes  Parts of  Consentration (%) 
the plant  10  12,5  15  17,5  20  22,5  25  27,5  30 

Staphylococcus aureus  Leaves  +  +  +  +  +  +  +  +  ‐ 
Flowers  +  +  +  +  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐ 
Pseudomonas  Leaves  +  +  +  +  +  ‐  ‐  ‐  ‐ 
fluorescens 
Flowers  +  +  +  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐ 
Saccharomyces  Leaves  +  +  +  +  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐ 
cereviceae 
Flowers  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐  ‐ 

Description:   ‐) no growth ;    +) There is growth 

96
 Table 2 shows that the growth of Staphylococ‐ concentration  of  at  least  20%  can  inhibit  the 
cus  aureus  inhibited  by  the  addition  of  “tutup”  growth  of  Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas 
plant leaves extracts at concentration of 30%, and  fluorescens, and Saccharomyces cereviceae. 
inhibited  started  with  the  addition  of  “tutup” 
plants  flowers  extract  at  concentration  of  20%.  Acknowledgement 
Pseudomonas  fluorescens  inhibited  by  the  addi‐ The  authors  would  like  to  thank  the  Director‐
tion of “tutup” plant leaves extracts at concentra‐ ate of Research and Community Service, the Direc‐
tions of 22.5%, and inhibited started with the ad‐ torate  General  of  Higher  Education,  Ministry  of 
dition of “tutup” plants flowers extract at concen‐ National  Education  has  financed  this  research 
tration  of  17.5%.  While  Saccharomyces  cereviceae  through Competitive Grants Research Program. 
began  inhibited  by  the  addition  of  “tutup”  plant 
leaves  extracts  at  concentrations  of  20%,  and  in‐  
hibited started with the addition of “tutup” plants  REFERENCES 
flowers  extract  at  concentration  of  10%.  This  is  Anonymous,  2008,  Penggunaan  Bahan  Pengawet, 
likely due to “tutup” plants flowers contains more  http://www.disnaksumbar.org.  Downloaded  at 
inhibitors than “tutup” plant leaves. Based on the  15th March 2008. 
results of antimicrobial minimum inhibitory con‐ Apriantono,  A.,  D  Fardiaz,  NL  Puspitasari,  and 
centrations test, it can be concluded that the use  Budiyanto.  1989.  Petunjuk  Laboratorium 
of  “tutup”  plants  flowers  extract  with  concentra‐ Analisa  Pangan.  PAU  Pangan  dan  Gizi.  IPB. 
tion  of  at  least  20%  can  inhibit  the  growth  of  Bogor. 
Staphylococcus aureus,   Ardiansyah,  2007.  Antimikroba  dari  Tumbuhan 
  (Bagian  Pertama),  http://
Pseudomonas fluorescens, and Saccharomyces  www.beritaiptek.comzberita‐beritaiptek‐2007‐
cereviceae.  06‐03‐Antimikroba‐dari‐Tumbuhan‐(Bagian‐
  Pertama).shtml.htm.  Downloaded  at  11th  April 
  2008. 
  As‐Sayyid,  A.,  B.M,  2006.    Pola  Makan  Rasulullah, 
  Penerbit Almahira, Jakarta. 
  Barus,  Pina,  2009.  Pemanfaatan  Bahan  Pengawet 
  dan  Antioksidan  Alami  pada  Industri  Bahan 
  Makanan.  Pidato  Pengukuhan  Jabatan  Guru 
  Besar Tetap Universitas Sumatera Utara. 
  Deiana  M.,  A.  Rosa.,  V.  Casu.,  F.  Cotiglia.,  L.  Bon‐
  sing  More  and  M.A.  Dessi,  2003.  Chemical 
  Composition  and  Antioxidant  Activity  of  Ex‐
  tract from Dephegnidium L. JAOCS. 80 1 65‐70. 
Freidon  Shahidi.,  Cryil  Desilva  and  Ryszard  Ama‐
Figure 4. Result of minimum inhibition   rowiz,  2003.  Antioxidant  Activity  of  Extract  of 
concentration test   Defatted  Seeds  of  Niger  (Goizotia  Abyssinica). 
  JOACS. 80. 5. 443‐450. 
4. Conclusions  Hammer,  KA,  Carson,  CF.  and  Riley  TV,  1999.  An‐
Staphylococcus  aureus  inhibited  by  the  addi‐ timicrobial  Activity  of  Essential  Oil  and  Other 
tion  of  leaves  of  “tutup”  plant  extracts  with  con‐ Plant Extract. J. Appl. Miccrobial 86. 
centration  of 30%  and  flower  of “tutup” plant  ex‐ Hernani  and  Mono  Raharjo.,  2005.  Tanaman  Berk‐
tracts  with  concentration  of  20%  and  30%;  Pseu‐ hasiat Antioksidan, Penerbit Swadaya, Jakarta. 
domonas  fluorescens  inhibited  by  the  addition  of  Kawakari, Tsiomi et al, 2008.  Macaflavanones A‐G, 
leaves of “tutup” plant extracts with concentration  Prenylated  Flavanones  from  the  Leaves  of 
of  20%  and  30%  and  flower  of  “tutup”  plant  ex‐ Macaranga tanarius.  J. of Natural Products, 71 
tracts with concentration of 20% and 30%. While  Lutony,  T.L.,  1993.    Tanaman  Sumber  Pemanis.  
Saccharomyces  cereviceae  inhibited  by  the  addi‐ Penebar Semangat.  Jakarta. 
tion  of  leaves  of  “tutup”  plant  extracts  with  con‐ Phommart,  Suporn  et  al,  2005.  Constituents  of  the 
centration  of  20%  and  30%  and  flower  of  “tutup”  Leaves of Macaranga tanarius. J. of atural Prod‐
plant extracts with concentration of 10%, 20% and  ucts 68 
30%.  Pratama,  2005,  Pengaruh  Ekstrak  Serbuk  Kayu 
Used  flower  of  “tutup”  plant  extracts  with  a  Siwak  (Salvadora  persica)  terhadap 

97
 Pertumbuhan  Bakteri  Streptococcus  Mutans 
dan  Staphylococcus  aureus  dengan  Metode 
Difusi Agar, Skripsi Mahasiswa Biologi ITS. 
Rejeki,  F.S.,  Wedowati,  E.R.  and  Puspitasari,  D., 
2010.    Optimasi  Proses  Pengolahan  Gula  Si‐
walan  Cetak.    Laporan  Penelitian  Indofood 
Riset  Nugraha.    Fakultas  Teknik,  Universitas 
Wijaya Kusuma Surabaya.  Surabaya. 
Sulami,  E.,  2004,  Identifikasi  dan  Studi  Aktivitas 
Antioksidan  Senyawa  Flavonoid  Hasil  Isolasi 
Proporlis  Lebah  Apis  mellifera  dengan  Pelarut 
Etanol  80%,  Skripsi  Jurusan  Kimia  Fakultas 
MIPA, Universitas Brawijaya. 

98