Temperatura en Peces
Temperatura en Peces
Temperatura en Peces
Abstract: Histology of gill, liver and kidney in juvenile fish Colossoma macropomum exposed to three
temperatures. Water temperature is an important factor that affects growth and antioxidant enzyme activi-
ties in fish, and when adverse, it may trigger diseases in fish populations. C. macropomum is a freshwater
neotropical fish widely distributed in South America and abundant in river basins as the Amazon and Orinoco.
It is highly used for intensive aquaculture development and is a very important product for the local riverside
economy in Venezuela. The purpose of our study was to examine the water temperature effect on gills, liver and
kidneys of juvenile fishes of C. macropomum. Eighteen juveniles with biometrical index of 17.87±7.88cm and
87.69±34.23g were respectively exposed to three culture temperatures (T18, T29 and T35ºC) during a period
of 21 days. Histological analyses on gills, liver and kidney were made according to standard methodologies.
Our results showed that these tissues exhibited normal citoarchitecture at T29. On the contrary, T18-gills dis-
played brachiallipid droplets inside brachial epithelium; and disorganization in the brachial tissue was observed
at T35. Furthermore, we observed two kinds of hepatocytes (dark and light) on T18°C-liver. The T35-liver
samples showed cytoplasmatic granulation and damages in cytoplasmatic membrane. Kidney samples from T18
observed alterations in the cellular distribution of the hematopoietic tissue; while, at T35, the most important
feature observed was the disorganization of the glomerular structure. We concluded that T18 and T35 are respec-
tively critical and severe temperatures to C. macropomum; besides, the most sensible tissues to changes induced
by temperature in this species were the liver and gills. Rev. Biol. Trop. 61 (2): 797-806. Epub 2013 June 01.
Los peces, por ser organismos poiquilo- peces; estos cambios pueden ser una respuesta
termos, son altamente influidos por los cam- inmunosupresora lo cual facilitaría el desarro-
bios en la temperatura, pudiendo este factor llo de enfermedades oportunistas (Marcogliese
ser determinante en el predominio del sexo 2008, Pérez-Casanova et al. 2008) o una res-
en algunas especies, porque puede afectar la puesta estimuladora del sistema inmune y de
producción de estrógenos (Azaza et al. 2008, esta manera el organismo puede protegerse de
Körner et al. 2008, Rougeot et al. 2008). ciertos virus (Sano et al. 2009).
Igualmente, los cambios de temperatura por El pez Colossoma macropomum, conocido
encima o por debajo de los valores adecuados en Venezuela con el nombre de cachama y en
para el desarrollo de la especie, pueden inducir otros países latinoamericanos con el nombre de
cambios en la respuesta inmunológica de los tambaqui, es un pez migratorio que se desplaza
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aguas arriba en épocas de verano procurando económico que tiene C. macropomum, el obje-
mejores condiciones para su sobrevivencia, a la tivo del presente estudio es determinar cuál de
vez que se prepara para su reproducción, que se los tres órganos diana evaluados; branquias,
cumple cíclicamente cada año en la temporada hígado y riñón, es el más sensible a los efectos
de invierno. Esta especie está ampliamente de la temperatura bajo ambiente controlado.
distribuida desde el Orinoco por toda la cuenca
amazónica, y ha representado, durante muchos
MATERIALES Y MÉTODOS
años, un excelente y apetecido producto de la
pesca fluvial, principalmente en los ríos Gua- Obtención y mantenimiento de los
nare, Portuguesa, Apure, Orinoco y sus afluen- peces: Se utilizaron 36 ejemplares juveniles
tes, ofertándose con apreciable abundancia en de C. macropomum (Cuvier, 1818), con índices
los mercados locales y algunas ciudades de biométricos de 17.87±7.88cm y 87.69±34.23g,
importancia en el país (Fernández 1986). Este los cuales fueron suministrados por el Insti-
es uno de los peces tropicales de agua dulce tuto Nacional de Investigaciones Agrícolas
con mayor éxito en el cultivo en aguas conti- (INIA), estación experimental Delta Amacuro,
nentales tropicales (Tafur-González et al. 2009, Tucupita, estado Delta Amacuro. Los peces se
Andrade de Pasquier et al. 2011). trasladaron en bolsas con agua aireada hasta
El análisis histológico de órganos dianas el Laboratorio de Camarones Dulceacuícolas
(aquel que reacciona a un estímulo específico (LCD), situado en el Núcleo de Sucre de la
bien sea externo o interno) constituye una Universidad de Oriente.
herramienta sensible y específica mediante la
cual se pueden apreciar alteraciones en los teji- Manejo y aclimatación: En el laboratorio,
dos. Los órganos que reaccionan a ese tóxico las bolsas con los peces fueron colocadas en
son órganos diana. Algunos órganos, más que tanques de 1000L de capacidad, preparados
otros, también podrían ser muy susceptibles a con agua declorada y aireada; transcurrido
cambios inducidos por factores abióticos como el tiempo de 30min., los organismos fueron
la temperatura. Entre los órganos a considerar sacados de las bolsas y colocados directamente
para las evaluaciones histológicas, tanto en en el tanque.
vertebrados como en invertebrados acuáticos, Al agua del tanque se le agregó Azitromi-
están las branquias, el hígado y el riñón: las cina (1g) y cloranfenicol (1g) a fin de prevenir
branquias debido a que son los órganos direc- infecciones bacterianas y fúngicas. Durante el
tamente expuestos y los más susceptibles a tiempo de aclimatación se realizaron recambios
las variaciones ambientales (Cajaraville et al. del agua entre un 75-80% del volumen total.
2000); el hígado, dada a la importancia que Los especímenes fueron alimentados dos veces
tiene en los procesos de desintoxicación, y los al día con alimento granulado (cachamarina,
riñones, porque además de su función fisioló- marca Purina) el cual fue suministrado conside-
gica de excreción, también actúa como órgano rando el 40% de su peso corporal; los peces se
hematopoyético de los peces (Goessling & sometieron a un fotoperíodo de 12/12 horas y a
North 2011). una temperatura de 29ºC. Al finalizar el tiempo
C. macropomum es un pez de comporta- de aclimatación, los peces fueron considerados
miento migratorio, puede vivir en diferentes aptos para los bioensayos.
ambientes (incluyendo contaminados), soporta
un amplio rango de pH y baja concentración de Bioensayo: Individuos de tallas similares
oxígeno (Useche 2000). Sin embargo, se tiene de C. macropomum (36 peces) fueron expues-
poca información acerca de la susceptibilidad tos durante 21 días a tres temperaturas, 18ºC
de esta especie a los cambios de temperatura, (T18), 29ºC (T29) y 35ºC (T35) en acuarios
tanto en la naturaleza como bajo medio ambien- de 50L de agua (base: 50x24cm; altura 28cm)
te controlado. En vista del gran potencial según Salazar-Lugo et al. (2009). T18 se logró
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en acuarios dotados con un motor adaptado RESULTADOS
para enfriamiento y T35 utilizando calenta-
dores para acuarios marca Elite. Se colocaron Histología de branquias: Las branquias
dos acuarios por cada temperatura cada uno de T29 (considerada la temperatura normal)se
conteniendo seis peces. Los peces fueron acli- observaron en buen estado mostrando células
matados gradualmente a las temperaturas de cartilaginosas (CC) rodeadas por tejido cartila-
18ºC y 35ºC. El pH del agua se mantuvo en 7.7 ginoso (TC). Este tejido a su vez se encuentra
y la dureza fue de 106ppm. bordeado por una fina capa de células epitelia-
les (CE) (Fig. 1-A). Por otro lado, se eviden-
Análisis histológicos: Los análisis histo- ciaron capilares (C) y eritrocitos (ER), ambos
lógicos fueron realizados de acuerdo a técnicas con morfología típica normal en los peces
convencionales para la microscopía electrónica (Fig. 1-B).
previamente utilizadas (Rojas et al. 1997; En T18, a diferencia de T29, se obser-
Bravo et al. 2005). Inmediatamente después varon gotas lipídicas (GL) de tamaño consi-
del sacrificio (por decapitación), se procedió derable inmersas en el tejido branquial (TB);
a tomar las muestras de branquias, hígado y sin embargo, la estructura de TB parece no
riñón. El procedimiento completo se realizó haberse afectado por esta temperatura (Figs.
a una temperatura de 21ºC. Cada muestra fue 1-C y 1-D).
cortada en secciones de 2mm2 aproximadamen- En T35 se evidenciaron CC con borde
te, las cuales se colocaron en glutaraldehído al irregular y que perdieron su forma típica redon-
3% a un pH 8.02 por 2h. Luego, fueron lavadas deada (Fig. 1-E); además, se observaron ER
con amortiguador fosfato de concentración de con forma anormal comparados con T29, posi-
0.1mol/L y pH 7.4 durante 15min, y post-fija- blemente dañados por efecto de la temperatura
das durante 1h en tetraóxido de osmio (OsO4) (Fig. 1-F).
al 1%. Posteriormente, se lavaron en amorti-
guador y se deshidrataron con una batería de
Histología de hígado: El tejido hepático
etanoles a concentraciones crecientes desde 50
de los peces T29 mostró una apariencia normal,
hasta 100%, durante 5min cada uno. Para la
con una coloración uniforme. Los hepatocitos
infiltración, las muestras se colocaron en óxido
(H) presentaron un núcleo con cromatina laxa
de propileno por 15min, luego se pusieron en
(eucromatina), redondeado, centrado y con la
una mezcla de 1:1 resina epóxica-óxido de
propileno por 2h, y luego en resina epóxica presencia de un nucléolo osmiofílico (Fig. 2).
pura, durante 1h (Luft 1961). Finalmente, la En contraste con T29, el tejido hepático
inclusión se hizo colocando las muestras en de T18 no presentó una coloración uniforme.
moldes de silicona con resina epóxica y la poli- Se observaron, hepatocitos claros y hepatocitos
merización se realizó en una estufa a 60oC por oscuros (Fig. 2). El aspecto claro-oscuro se
48h. Se practicaron cortes semifinos (0.7µm) evidenció a pesar de que todas las muestras de
con cuchilla de vidrio en un ultra micrótomo tejido hepático, expuestas a las diferentes tem-
Leica UM-UC6. Los cortes se tiñeron con azul peraturas, fueron histológicamente tratadas del
de toluidina (1%), y fueron observados con un mismo modo y al mismo tiempo, descartándose
fotomicroscopio modelo Axioskop FL40 (Carl así un error en el proceso de fijación del tejido.
Zeiss, Germany), fotografiados con una cámara Se infiere, que la baja temperatura pudo haber
Cannon y procesados por medio de un software influido en la bioquímica de los hepatocitos
analizador de imágenes Axio Vision LE Can- alterando, la coloración uniforme observada en
non Modul (Carl Zeiss, Germany). T29 (Fig. 2).
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Fig. 1. Corte transversal de branquias de C. macropomum expuestos a diferentes temperaturas. 29ºC. A. Detalle de las
células cartilaginosas (CC) en los filamentos branquiales; al tejido cartilaginoso (TC), epitelio branquial (flecha); B. Detalle
de un capilar (C) en el extremo terminal de un filamento branquial. Obsérvese los eritrocitos con morfología normal. C. y
D. 18ºC. Detalles del filamento branquial donde se observan una gotas lipídicas (asterisco) inmersa en el tejido branquial
(TB). E. y F. 35ºC. Detalle del tejido branquial. E. Tejido cartilaginoso de un filamento branquial donde se evidencia la
deformación de sus células (asterisco) y F. Se observa un capilar con eritrocitos de morfología anormal.
Fig. 1. Gills cross section of C. macropomum exposed to different temperatures. 29ºC. A. Details of cartilage cells (CC) in
the gill filaments, cartilage tissue (TC), gill epithelium (arrow); B. Detail of a capillary (C) at the terminal endofagillfilament.
Note erythrocytes with normal morphology. C. and D. 18ºC. Details of gill filaments how in glipid droplets (asterisk)
embedded in the gill tissue (TB). E. and F. 35°C. Detail of gill tissue. E. Cartilage tissue of a gill filament showing cell
deformations (asterisk) and F. Capillary showing abnormal morphology erythrocytes.
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El grupo T35, presentó anomalías distin-
tas a las observadas en T18. A T35 el hígado
se caracterizó por exhibir hepatocitos claros,
posiblemente producto del escaso contenido
citoplasmático (Fig. 2). Además, el núcleo
no mostró una coloración uniforme, sino que
exhibió en su interior un material nuclear
agregado, y un nucléolo de apariencia difu-
sa. Se evidenciaron núcleos picnóticos y en
algunos casos lucían fragmentados, lo que
puede acarrear muerte celular por apoptosis.
En general, los hepatocitos presentaron una
citoarquitectura dañada, posiblemente producto
de la temperatura de 35ºC a la cual los peces
fueron expuestos.
Fig. 2. Corte transversal de hígado de C. macropomum Fig. 2. Liver Cross section of C. macropomum exposed
expuestos a diferentes temperaturas. 29ºC. Se observan to different temperatures. 29°C. Hepatocytesare observed
hepatocitos (H) con núcleos bien definidos (flecha (H) with well-defined nuclei (dotted arrow) containing
punteada) conteniendo nucléolos (flechas continuas). 18ºC. nucleoli (arrows). 18ºC. It was observed clear hepatocytes
Se evidencian hepatocitos claros (HC) y hepatocitos (HC) and dark hepatocytes (HO). 35°C. Hepatocytes
oscuros (HO). 35ºC. Se observan hepatocitos con were observed with clear cytoplasm possibly as a result
citoplasma claro posiblemente como producto de la pérdida of loss of integrity of the cytoplasm. The nuclei does not
de la integridad del citoplasma. El núcleo no muestra una show a uniform appearance (solid arrows), it noted diffuse
apariencia uniforme (flechas continuas) y el nucléolo se nucleolus (dashed arrows) and the presence of picnotic
nota difuso (flechas punteadas). Nótese la presencia de nuclei (short arrows).
núcleos picnóticos (flechas cortas).
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delgada y se notó pérdida de la integridad del
TH que la rodea evidenciada por su aparien-
cia clara y alteraciones en la conformación y
distribución celular.
En T35 se observó un glomérulo en apa-
rente buen estado aunque el espacio de Bow-
man se aprecia muy reducido (Fig.3). El TH
también parece no haberse afectado por la
acción de una temperatura de 35ºC.
DISCUSIÓN
Fig. 3. Corte transversal de riñón de C. macropomum. 29ºC. Fig. 3. Kidney cross section of C. macropomum exposed
Detalle mostrando un glomérulo normal (G) y cápsula to different temperatures. 29ºC. Detail showing anormal
de Bowman (flechas) rodeado de tejido hematopoyético glomerulus (G) and Bowman’s capsule (arrows) surrounded
homogéneo (TH). En el glomérulo se observan capilares by homogeneous hematopoietic tissue (TH). Glomerular
(estrellas) con endotelio capilar en aparente buen estado capillaries are observed (stars) with endotheliumin
(flechas cortas) y eritrocitos con morfología normal apparent normal condition (short arrows) and erythrocytes
(asterisco). 18ºC. Se observa una interrupción entre el with normal morphology (asterisk). 18ºC. There is a
glomérulo (G) y la capsula de Bowman (flecha) quedando discontinuity in the Bowman’s space (asterisk) between
muy poco espacio entre los dos (asterisco), además se the glomerulus (G) and Bowman’s capsule (arrow), as
nota pérdida de la integridad del tejido hematopoyético well as noticeable loss of hematopoietic tissue integrity
(TH). 35ºC. Se observaron glomérulos (G) con el espacio (TH). 35°C. It was observed glomeruli (G) with reduced
de Bowman un poco reducido y el tejido hematopoyético Bowman’s space and homogeneous hematopoietic
homogéneo (TH). tissue (TH).
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los órganos evaluados; estos cambios ana- al estar expuestos, por un período prolongado
tomopatológicos, probablemente, provocaron al frío. Estos autores observaron que ocurría
alteraciones en los procesos respiratorios y dis- una deposición de lípidos en el hígado, parti-
funcionalidad en el papel de protección contra cularmente ácidos grasos 22:6n3y relacionaron
patógenos, desempeñado por las branquias del los cambios en la morfología del tejido, tales
pez; esto, debido a que tanto los cilios como el como la presencia de hígados largos y amari-
mucus intervienen en la expulsión de microor- llentos, con la deposición de estas moléculas.
ganismos y sustancias irritantes que podrían ser La histología presentada en el hígado del
peligrosos para la integridad del pez. grupo T18 sugiere que esta temperatura es
Walsh & Ribelin (1975), formulan que el crítica para la especie y de prolongarse podría
estado de separación del epitelio de la mem- conducir al desarrollo de daño oxidativo. En el
brana basal de los filamentos branquiales es hígado de la dorada Sparusa urata expuesta a
un artefacto introducido en el tejido poco antes bajas temperaturas, se ha reportado un incre-
o después de muerto el organismo, y no como mento de 50% en la formación de especies
resultado de los tratamientos químicos. Contra- reactivas del ácido barbitúrico lo que indica
rio a lo encontrado por estos autores, nuestros peroxidación lipídica, además un incremento
resultados muestran que los peces del grupo en la producción de óxido nítrico y de proteí-
T29 no presentaron este fenómeno de pérdida nas tales como el factor de elongación alfa 1,
o separación del epitelio branquial. Por lo que de las proteínas inhibidora de la Raf-kinasa y
los cambios observados en el tejido branquial de la tubulina los cuales son indicadoras de
en T18 y T35 son el resultado de la exposición estrés oxidativo y de la inducción de apoptosis
a esas temperaturas. (Ibarz et al. 2010). También en especies de
La citoarquitectura observada en el híga- anguilas proveniente del mar del norte (Zoar-
do T29 se corresponde con la reportada en ces viviparus) y de la región polar (Pachycara
la literatura para otras especies, tales como brachycephalum) se observó que los paráme-
Salmo gairdneri (Stoker et al. 1985) y Serranus tros indicadores de daño oxidativo (proteínas
cabrilla (González et al. 1993). Roberts (1989) carboniladas, y productos reactivos del ácido
sostiene que los hepatocitos de los peces tie- barbitúrico (TBARS) se encontraron más ele-
nen una menor tendencia a disponerse en vados durante muy bajas temperaturas (Heise
cordones, estando organizados en hileras et al. 2007). Estos datos sustentan nuestras
de dos células como en la mayoría de los observaciones y demuestran que el hígado de
vertebrados inferiores. los peces es sensible a daño oxidativo inducido
La diferencia en la coloración de los por temperaturas por debajo de los rangos fisio-
hepatocitos de T18, probablemente se debió lógicos tolerados por cada especie.
a la presencia de gran cantidad de vacuolas Por otro lado, la T35 se puede considerar
lipídicas en el interior de algunos de ellos, como una temperatura severa para el hígado
motivo por el cual el contraste de la coloración de C. macropomum, donde el daño observado
del tejido se modificó, tornándose más oscuros en el tejido podría ser el resultado de proce-
aquellos hepatocitos que presentaban mayor sos apoptóticos y necróticos, sobrepasando la
cantidad de vacuolas lipídicas en su interior maquinaria antioxidativa de las células. Un
y más claros aquellos que presentaban menor incremento de TBARS y un altamente oxidado
cantidad de lípidos. Esta condición podría potencial redox junto con la reducción de la
deberse a una movilización de lípidos perivis- actividad de la enzima superoxido dismuta-
ceral hacia el hígado, lo que podría afectar la sa fue observado en la anguila Z. viviparus
integridad de este tejido; tal y como ha sido expuesta a la temperatura severa de 26ºC
demostrado por Ibarz et al. (2005) en el pez (Heise et al. 2006).
Sparusa urata, quienes reportaron que el conte- El riñón de C. macropomun expuesto a
nido de lípidos aumentaba en estos organismos, T29 reveló un tejido con morfología similar
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a la descrita en otros teleósteos (Charmi et al. AGRADECIMIENTOS
2009). Se observaron glomérulos bien cons-
tituidos y se observa la luz de los capilares Este trabajo fue financiado por el Fondo
intraglomerulares conteniendo eritrocitos de Nacional de Ciencias, Tecnología e Innovación
forma regular. Además, el espacio de Bowman proyecto UDO-FONACITG2005000775, agra-
se observó alrededor de todo el glomérulo. decemos al Instituto de Investigaciones Biomé-
A T18se observó una disminución del dicas y Ciencias Aplicadas “Dra. Susan Tai” de
espacio de Bowman, probablemente producto la Universidad de Oriente, en especial a la Lic.
de una alteración en el volumen del glomérulo Gilma Hernández por la realización de los cor-
venoso por edema endotelial. Los capilares tes histológicos y a la piscicultora ALMA C.A.
intraglomerular es se encuentran revestidos por por suministrar los peces usados en el estudio.
una serie de células endoteliales fenestradas
extremadamente delgadas, con núcleos pro- RESUMEN
minentes cuyo abultamiento se introduce en
Colossoma macropomum es uno de los peces tro-
el lúmen del capilar (Zuasti et al. 1983, Lacy
picales de agua dulce con mayor éxito en el cultivo en
et al. 1987). Se infiere que una distención aguas continentales tropicales. Se realizó una evaluación
del endotelio capilar trajo como consecuencia histológica de branquias, hígado y riñón de este pez
una disminución en el tamaño de las fenes- expuesto a tres temperaturas (T18, T29 y T35ºC). Se uti-
traciones alterando el papel de absorción de lizaron 18 ejemplares juveniles con índices biométricos de
17.87±7.88cm y 87.69±34.23g. Los análisis histológicos
los glomérulos. Además, el edema endotelial fueron hechos de acuerdo a técnicas previamente descritas.
conlleva a una disminución del diámetro del Se encontró que las branquias, el hígado y el riñón de
capilar trayendo como consecuencia isquemia los peces T29 presentaron citoarquitectura normal. Por el
y por consiguiente un problema de hipoxia contrario, en las branquias de los peces T18, se observaron
gotas lipídicas inmersas en el tejido branquial; los peces
que puede afectar el funcionamiento celular
T35 presentaron desorganización en la estructura del tejido
(Rojas et al. 2005).Por otra parte, se produjo branquial y necrosis celular. El hígado de los peces T18,
pérdida de la integridad estructural del tejido mostró hepatocitos claros y oscuros y el de T35, presentó
hematopoyético ubicado en las zonas aledañas células con granulaciones citoplasmáticas y daño en la
al glomérulo, de esta manera posiblemente se membrana plasmática. En el riñón de los T18, se obser-
varon alteraciones en la distribución del tejido hematopo-
afectó la síntesis de hemoglobina en el pez,
yético. La característica más resaltante en el riñón de los
pudiendo inducir anemia. Esto se corresponde peces T35, fue la desorganización del tejido glomerular.
con los hallazgos reportados por Salazar-Lugo En conclusión, la temperatura de 18°C se puede considerar
et al. (2009) quienes observaron una altera- crítica para la cachama y la de 35ºC severa. De los tres
ción en los parámetros hematológicos de C. órganos evaluados, el hígado y las branquias resultaron ser
los más sensibles a los daños inducidos por las temperatu-
macropomum, expuesta a 18ºCcon disminu- ras en esta especie.
ción de la hemoglobina y del hematocrito. El
daño por temperatura también fue observado Palabras clave: Colossoma macropomum, histología, tem-
a T35 donde se evidenció una disminución del peratura, hígado, riñón, branquias.
espacio de Bowman, probablemente producto
de una alteración en el volumen del glomérulo REFERENCIAS
venoso por edema endotelial.
En resumen, la temperatura de 18°C se Andrade de Pasquier, G., Y. Méndez & D. Perdomo.
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puede considerar crítica para el pez C. macro-
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