- GT-LQ

Carboxy substrate. Kinetic. Liquid

BEIS47-I 01/07/13 SPINREACT,S.A/S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
-GT-LQ
Quantitative determination of gamma-glutamyl
transferase (GT)
IVD

Store at 2-8C

PRINCIPLE OF THE METHOD
Gamma-glutamyl transferase (-GT) catalyses the transfer of -glutamyl
group from -glutamyl-p-nitroanilide to acceptor glycylglycine, according to
the following reaction:
--L-Glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide + Glycylglycine
GT

-L-Glutamyl-glycylglycine + 2-Nitro-5-aminobenzoic acid

The rate of 2-nitro-5-aminobenzoic acid formation, measured
photometrically, is proportional to the catalytic concentration of -GT
present in the sample
1,2
.

CLINICAL SIGNIFICANCE
Gamma-glutamyl transferase (-GT) is a cellular enzyme with wide tissue
distribution in the body, primarily in the kidney, pancreas, liver and
prostate.
Measurements of gamma-glutamyl transferase (-GT) activity are used in
the diagnosis and treatment of hepatobiliary diseases such biliary
obstruction, cirrhosis or liver tumours
1,2,5,6
.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should
integrate clinical and other laboratory data.

REAGENTS
R 1
Buffer
TRIS pH 8.6
Glycylglycine
100 mmol/L
100 mmol/L
R 2
Substrate
L--glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide 3 mmol/L

PREPARATION
Working reagent (WR)
Mix: 4 vol. (R1) Buffer + 1 vol. (R2) Substrate

Stability: 2 months at 2-8C or 1 week at room temperature (15-25C).

STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date on the
label when stored tightly closed at 2-8C, protected from light and
contaminations prevented during their use.
Do not use reagents over the expiration date.
Signs of reagent deterioration:
- Presence of particles and turbidity.
- Blank absorbance (A) at 405 nm > 1,20.

ADDITIONAL EQUIPMENT
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 405 nm.
- Thermostatic bath at 25C, 30C o 37C ( 0.1C)
- Matched cuvettes 1.0 cm light path.
- General laboratory equipment.

SAMPLES
Serum
1
. GT is stable for at least 3 days at 2-8C, 8 hours at 15-
25C and 1 month at 20C.

PROCEDURE
1. Assay conditions:
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405 nm
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 1 cm light path
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . .25C /30C / 37C
2. Adjust the instrument to zero with distilled water or air.
3. Pipette into a cuvette(
note 1
):

WR (mL) 1,0
Sample (L) 100

4. Mix, wait for 1 minute.
5. Read initial absorbance (A) of the sample, start the stopwatch and
read absorbances at 1 minute intervals thereafter for 3 minutes.
6. Calculate the difference between absorbances and the average
absorbance differences per minute (AA/min).

CALCULATIONS
AA/min x 1190 = U/L of -GT

Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that transforms 1 mol
of substrate per minute, in standard conditions. The concentration is expressed
in units per litre of sample (U/L).

Temperature conversion factors
To correct results to other temperatures multiply by:

Assay
temperature
Conversion factor to
25C 30C 37C
25C
30C
37C
1,00
0,73
0,56
1,37
1,00
0,77
1,79
1,30
1,00

QUALITY CONTROL
Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
reagents and technique for problems.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.

REFERENCE VALUES
1
25C 30C 37C
Women 4-18 U/L 5-25 U/L 7-32 U/L
Men 6-28 U/L 8-38 U/L 11-50 U/L
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish
its own reference range.

PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: From detection limit of 2 U/L to linearity limit of 300 U/L.
If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with
NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
Precision:
Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Mean (U/L) 38,3 190 40,1 198
SD 0,39 0,53 0,82 2,30
CV (%) 1,03 0,28 2,05 1,16

Sensitivity: 1 U/L = 0,0008 AA/min.
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
The results obtained using 100 samples were the following:
Correlation coefficient (r): 0,99990.
Regression equation: y= 1,334x - 1,493.
The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.

INTERFERENCES
Plasma should not be used, anticoagulants inhibit the enzyme. Gross haemolysis
interferes in the assay
1
.
A list of drugs and other interfering substances with -GT determination has been
reported by Young et. al
3,4
.

NOTES
SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
Instructions for many of them are available on request.

BIBLIOGRAPHY
1. Gendler S. -GT. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1120-1123.
2. Persijn J P et al. J Clin Chem Clin Biochem 1976; (14) 9: 421-427.
3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.


PACKAGING

Ref: 41290
R1:
R2:
1 x 60 mL
1 x 15 mL
Ref: 41292
R1:
R2:
1 x 240 mL
1 x 60 mL
Ref: 41293
R1:
R2:
1 x 480 mL
1 x 120 mL
Cont.








- GT-LQ
Substrato carboxilado. Cintico. Liquido

BEIS47-E 01/07/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
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-GT-LQ
Determinacin cuantitativa de gamma-glutamil
transferasa (GT)
IVD

Conservar a 2-8C

PRINCIPIO DEL MTODO
La -glutamil transferasa (-GT) cataliza la transferencia de un grupo -glutamilo
de la -glutamil-p-nitroanillida al dipptido aceptor glicilglicina, segn la
siguiente reaccin:
L- -Glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida + Glicilglicina
GT

L- -Glutamil-glicilglicina + cido 5-amino-2-nitrobenzoico

La velocidad de formacin del cido 5-amino-2-nitrobenzoico, determinado
fotomtricamente, es proporcional a la concentracin cataltica de -glutamil
transferasa (-GT) en la muestra ensayada
1,2
.

SIGNIFICADO CLNICO
La -glutamil transferasa (-GT) es una enzima que se encuentra presente en
casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta en hgado,
pncreas, rin y prstata.
La determinacin de los niveles de -glutamil transferasa (-GT) es el mtodo
mas til para el diagnstico y tratamiento de las enfermedades hepatobiliares
como obstruccin heptica, cirrosis o tumores hepticos
1,2,5,6
.
El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clnicos y de laboratorio.

REACTIVOS
R 1
Tampn
TRIS pH 8,6
Glicilglicina
100 mmol/L
100 mmol/L
R 2
Substrato
L--glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida 3 mmol/L

PREPARACIN
Reactivo de trabajo (RT)
Mezclar:
4 vol. (R1) Tampn + 1 vol. de (R2) Substrato.

Estabilidad: 2 meses a 2-8C o 1 semana a temperatura ambiente.

CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a
2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partculas y turbidez.
- Absorbancias del Blanco a 405 > 1,20.

MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 405 nm.
- Bao termostatable a 25C, 30C 37C ( 0,1C)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.


MUESTRAS
Suero
1
. GT es estable hasta 3 das a 2-8C, 8 horas a 15-25C y 1 mes a
20C.


PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . .. . . .25C / 30C / 37C
2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:

RT (mL) 1,0
Muestra (L) 100

4. Mezclar, incubar 1 minuto.
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto
(A/min).


CLCULOS
A/min x 1190= U/L de -GT

Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 mol
de substrato por minuto, en condiciones estndar. La concentracin se expresa en
unidades por litro (U/L).

Factores de conversin de temperaturas
Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando
por:

Temperatura
de medicin
Factor para convertir a
25C 30C 37C
25C
30C
37C
1,00
0,73
0,56
1,37
1,00
0,77
1,79
1,30
1,00

CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el
instrumento, los reactivos y la tcnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

VALORES DE REFERENCIA
1
25C 30C 37C
Mujeres 4-18 U/L 5-25 U/L 7-32 U/L
Hombres 6-28 U/L 8-38 U/L 11-50 U/L
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.

CARACTERSTICAS DEL MTODO
Rango de medida: Desde el lmite de deteccin 2 U/L hasta el lmite de
linealidad 300 U/L.
Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir 1/2 con
ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisin:
Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Media (U/L) 38,3 190 40,1 198
SD 0,39 0,53 0,82 2,30
CV (%) 1,03 0,28 2,05 1,16

Sensibilidad analtica: 1 U/L = 0,0008 A/min.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 100 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de regresin (r): 0,99990.
Ecuacin de la recta de regresin: y= 1,334x - 1,493.
Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado.

INTERFERENCIAS
No utilizar plasma. Los anticoagulantes inhiben al enzima. La hemlisis
elevada interfiere en el ensayo
1
. Se han descrito varias drogas y otras
substancias que interfieren en la determinacin de la -GT
3,4
.

NOTAS
SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de
este reactivo en distintos analizadores.

BIBLIOGRAFA
1. Gendler S. -GT. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1120-1123.
2. Persijn J P et al. J Clin Chem Clin Biochem 1976; (14) 9: 421-427.
3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.

PRESENTACIN

Ref: 41290
R1:
R2:
1 x 60 mL
1 x 15 mL
Ref: 41292
R1:
R2:
1 x 240 mL
1 x 60 mL
Ref: 41293
R1:
R2:
1 x 480 mL
1 x 120 mL
Cont.