LP 2 - Preparatul Microscopic Permanent

Preparatul microscopic permanent

Reprezinta modalitatea de examinare a unor celule , fragmente de tesut sau organ , carora li s-au suprimat sprocesele vitale prin fixare - permite examinarea la microscopul optic a principalelor caracteristici ale celulelor si a modului lor de organizare.

Un preparat microscopic este alcatuit din: 1. obiect de examinat subtire si transparent 2. mediu de fixare transparent 3. lama si lamela

Scopul realizarii unui preparat microscopic permanent este de a conserva structurile celulare si raporturile dintre ele pe un timp nelimitat.
Este folosit in : clinica laborator de anatomie patologica medicina legala cercetare in scop didactic
Etapele obtinerii preparatului microscopic permanent

1.
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
Recoltare Fixare si tratamente postfixare Spalare Includere Sectionare Colorare sau impregnare Montare Etichetare
1.RECOLTAREA
Este operatia prin care obiectul de examinat este prelevat de la omul sau animalul viu sau dupa sacrificarea animalului sau de la cadavru. Poate fi bioptica sau necroptica
Recoltarea bioptica
- se recolteaza de la om sau animalul viu
si se practica in scop diagnostic. Se realizeaza prin : 1. raclare 2. punctie bioptica 3. aspiratie 4. interventie chirurgicala
Recoltarea necroptica
- se realizeaza dupa sacrificarea
animalului si se practica in laboratoare in scop de cercetare sau didactic. - recoltarea de la cadavrele umane se practica in laboratoarele de anatomie patologica si medicina legala in scopul de a confrunta datele de anatomie clinica si tanatogenetice.
Recoltarea
Conditiile unei bune recoltari: 1. cat mai aproape de momentul decesului pentru a evita procesele de autoliza. 2. dimensiunea pieselor sa nu depaseasca 5 mm 3. calitatea instrumentelor bine ascutite pentru a evita zdrentuirea si pierderea paralelismului dintre planuri 4. adecvata in functie de tipul organului ; se vor evita modificarile de volum, forma si relief.
2. FIXAREA
- etapa decisiva in obtinerea unui
preparat microscopic permanent. - un proces fizic sau chimic prin care sunt oprite cat mai rapid procesele vitale celulare, pastrandu-se cu alterari pastranduminime volumul , forma , relieful si raporturile spatiale si moleculare .
FIXAREA
Prin fixare urmarim : 1. Conservarea tesuturilor 2. Prevenirea pierderii de constituenti celulari 3. Cresterea diferentierii optice a structurilor celulare 4. Marirea consistentei tesuturilor in scopul de a facilita trecerea lor prin celelalte etape ale tehnicii si mai ales pentru sectionare
FIXATORII
Clasificare a. Dupa natura lor: 1. fizici 2. chimici b. Dupa reactia pe care o au cu proteinele solubile 1. coagulanti 2. necogulanti
FIXATORII
Fixatorii chimici: 1. simpli 2. amestecuri fixatoare
FIXATORII CHIMICI
Fixatori simpli mai des utilizati : acetona , acid tricloracetic , formol , acid osmic , alcool metilic Amestecuri fixatoare: fixatoare: - introduse in practica datorita afinitatii inegale pentru diversele elemente structurale
Amestecuri fixatoare:
1. dupa compozitia chimica a. apoase b. alcoolice 2. dupa scopul urmarit a. universale (topografice) b. citologice
Mecanismul fixarii
insolubilizarea prin precipitare a unor constituenti celulari: proteine , glucide , saruri minerale, lipide 2. formarea de compusi de aditie intre fixator si unii constituenti celulari 3. coagularea proteinelor
1.
CALITATILE UNUI BUN FIXATOR 1. patrunde bine in tesuturi 2. stabilizeaza tesuturile pastrand nealterate caracterul si distributia constituentilor celulari 3. nu provoaca artefacte 4. nu deformeaza tesutul 5. nu dizolva constituenti
CALITATILE UNUI BUN FIXATOR distruge microorganismele 7. extrage enzimele autolitice inactivate 8. confera consistenta 9. produce diferentiere optica 10. nu-si modifica compozitia nu11. ieftin, netoxic, neinflamabil, neiritant
6.
TRATAMENTE POSTFIXARE
1. decalcifierea
2. disocierea pieselor 3. mordansarea
4.INCLUDEREA
Este procedeul prin care se realizeaza conditii optime care sa permita taierea pieselor in sectiuni subtiri de ordinul Qm , transparente si cu fete plane astfel incat sa poata fi examinate la microscop.
INCLUDEREA
Mase de incluziune : 1. Dupa modul de realizare al includerii : a. Penetreaza celula b. Ramane in spatiul intercelular 2.Dupa solubilitatea in apa a. anhidre , ex. parafina , celoidina , paraplastul b. apoase ,ex . gelatina , polietilenglicol
Incluziunea la parafina etape premergatoare

a. deshidratare alcool in concentratii crescande incepand cu 50r 50r fiecare in 3 bai succesive.

b. clarificare indepartarea alcoolului din piesa cu ajutorul unor reactivi numiti clarificatori, miscibili cu parafina, care fac ca piesa sa devina translucida. Se efectueaza cu alcool anilic sau cu hidrocarburi benzenice (xileni).

c. impregnarea patrundere a piesei cu parafina topita si solidificarea in bloc prin racire pentru a oferi o consistenta omogena. d. turnarea blocurilor blocul inglobat se monteaza pe un port-obiect port-
5. SECTIONAREA
Piesa inclusa sau inghetata se taie in felii subtiri de ordinul micronilor cu ajutorul unui aparat numit microtom. microtom.
5. SECTIONAREA
Sectionarea la microtomul ptr. parafina presupune urmatorii timpi pregatitori: 1. modelarea blocului pentru sectionare 2. lipirea blocului pe portobiect 3. sectionarea propriu-zisa 4. etalarea si lipirea sectiunilor
6. COLORAREA
- se urmareste cresterea contrastului intre elementele tisulare sau celulare prin modificarea indicilor de refractie ai substratului morfologic cu ajutorul colorantilor. Tehnica de colorare depinde de natura fixatorului si de tesutul pe care se aplica.
7.MONTAREA
- protejarea sectiunilor fragile de
eventualele deteriorari, conservarea coloratiei si asigurarea unui mediu optic omogen si transparent necesar examinarii microscopice. Se face intre lama si lamela in diferite medii de montare initial fluide.
MONTAREA
Mediile de montare pot fi : 1. Apoase: glicerina, sirop Apathy 2. Anhidre: balsam de Canada, colofoniu
8. ETICHETAREA
Pe fiecare lama se noteaza tipul celular sursa de recoltare fixatorul metoda de colorare data efectuarii

LP 2 - Preparatul Microscopic Permanent

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

LP 2 - Preparatul Microscopic Permanent

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

LP 2 - Preparatul Microscopic Permanent

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Preparatul microscopic permanent

Preparatul microscopic permanent

Preparatul microscopic permanent

Preparatul microscopic permanent

Etapele obtinerii preparatului microscopic permanent

2. disocierea pieselor 3. mordansarea

Incluziunea la parafina etape premergatoare

Incluziunea la parafina etape premergatoare

Incluziunea la parafina etape premergatoare

S-ar putea să vă placă și