Provas Bioquímicas

PROVAS
BIOQUÍMICAS
Taís Pereira
Se uma cultura for usada, ela deve ser propagada. Para cultivar micro-organismos em
laboratório, os nutrientes necessários devem ser fornecidos no meio de cultura. O meio
utilizado pelos microbiologistas depende do micro-organismo e por que está sendo cultivado.
Os micro-organismos têm requisitos nutricionais muito diferentes e as razões para cultivá-
los são igualmente variadas. De acordo com os tipos de meios de cultura, associe
adequadamente as colunas a seguir. 1. Meios definidos. 2. Meios complexos. 3. Meios seletivos.
4. Meios diferenciais. ( ) Feitos a partir de extratos de materiais naturais como carne, sangue,
caseína, levedura e soja. ( ) Contêm substâncias químicas tóxicas, como azida sódica, telurito de
potássio ou cristal violeta. ( ) O ágar sangue pode ser usado para identificar Streptococcus
pyogenes. ( ) Preparado a partir de substâncias químicas puras. A sequência está correta em
A 3, 2, 1, 4.
B 4, 2, 1, 3.
C 3, 4, 2, 1.
D 3, 1, 2, 4.
E 2, 3, 4, 1.
A coloração de Gram foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista Hans Christian Gram e é a coloração
diferencial mais utilizada em bacteriologia. Este método de coloração é o método de escolha para
identificação de bactérias. A observação de material corado pela técnica de Gram não só é importante
para acompanhar o isolamento de amostras, como também para determinar o tipo de antibiótico que
deve ser usado em diferentes infecções. Sobre o procedimento e a técnica de Coloração de Gram, é
INCORRETO afirmar que:
A Ao utilizar o álcool, a membrana externa das bactérias Gram – é solubilizada.

B Quando se aplica o contracorante, as células Gram – adquirem a cor rosada do novo corante.
C Neste tipo de coloração são utilizados quatro reagentes diferentes: cristal violeta, fenol,
etanol 95% e carbolfucsina.
D O princípio da técnica está baseado na diferença de composição da parede de diferentes
bactérias e na capacidade destas paredes em reterem os corantes utilizados.
E O complexo formado pelo cristal violeta e pelo iodo se liga a componentes presentes na
parede das bactérias Gram+ , que possuem em sua composição magnésio e ácidos
ribonucleicos.
Marque F (falso) ou V (verdadei ro) e após assinale a sequência correta.
I Os esfregaços para coloração de Gram devem secar à temperatura ambiente e serem fixados pelo calor, passando-se a lâmina
rapidamente três a quatro vezes pela chama do bico de Bunsen. ( )
II A sequência correta para a coloração de Gram é: cristal violeta, lugol, álcool, água e fucsina. ( )
III As bactérias Gram positivas adquirem coloração vermelha, enquanto as Gram negativas coram-se de roxo (azul escuro). ( )
IV É recomendado na coloração de Ziehl, que a fucsina ferva por cinco minutos sobre a lâmina. ( )
V A coloração de Fontana Tribondeau baseia-se na impregnação das espiroquetas pela prata quando tratadas com solução de nitrato
de prata. ( )
AVVVFV
BFFVFF
CVVFFV
DFVFVF
EVFFFV
Quando as bactérias são adicionadas a um meio, necessitam de tempo para
se adaptarem ao novo ambiente, antes de começarem a se dividir. Essa etapa
é conhecida como fase lag do crescimento. Em uma outra etapa de
crescimento, denominada fase log ou exponencial, o que acontece?
A. As bactérias crescem e se dividem
B. As bactérias param de crescer
C. As bactérias morrem
D. As bactérias diminuem o metabolismo
E. As bactérias diminuem o consumo de energia

O que nós vamos estudar nesta aula:
Apresentar o conceito de provas bioquímicas e explicar a sua

importância para o diagnóstico no setor da Microbiologia
PROVAS BIOQUÍMICAS
As provas bioquímicas consistem em sucessivos testes em

meios de culturas específicos que indicam ação metabólica
do microrganismo através da alteração da cor, turbidez, pH
entre outros.
PROVAS BIOQUÍMICAS
Para a identificação das bactérias diversas características

são utilizadas, como a morfologia macroscópica e
microscópica, metabólicas ou bioquímicas, antigênicas ou
sorológicas, genéticas, ecológicas, etc.
PROVAS BIOQUÍMICAS
Na caracterização morfológica são observados o tamanho,

forma, elevação, bordas e estrutura da colônia, assim como
seu brilho, cor, aspecto e também determinados o tamanho,
forma, agrupamentos e motilidade que as células bacterianas
possuem.
PROVAS BIOQUÍMICAS
Muitas culturas bacterianas são similares em suas

características morfológicas e culturais. No entanto possuem
diferenças em suas reações metabólicas. Assim, através das
chamadas provas bioquímicas, são detectadas ações
referentes à capacidade que têm as bactérias de desdobrar
certos substratos como açúcares, proteínas e gorduras,
dependendo do tipo de metabolismo, ou seja, das enzimas
envolvidas nele.
PROVAS BIOQUÍMICAS
A investigação das atividades metabólicas das bactérias “in

vitro” é chamada de Provas Bioquímicas e servem para
auxiliar o microbiologista a identificar grupos ou espécies de
bactérias ou leveduras através da verificação das
transformações químicas, que ocorrem num determinado
substrato, pela ação das enzimas de um dado
microrganismo.
PROVAS BIOQUÍMICAS
Os microrganismos utilizam os carboidratos por via

fermentativa ou oxidativa, sendo útil na identificação
bacteriana.
Os microrganismos variam consideravelmente em sua
capacidade de degradar e fermentar carboidratos.
Carboidratos são substratos básicos que bactérias utilizam
para a geração de ATP.
PROVAS BIOQUÍMICAS
Algumas destas provas são rápidas, pois avaliam a presença

de uma enzima pré-formada e sua leitura varia entre uns
segundos até poucas horas. Outras provas precisam de
incubação entre 18 a 48h.
Prova de catalase
A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de

hidrogênio (H2O2) em água e oxigênio. É produzida por
muitos microrganismos, e usualmente empregada para
diferenciar Staphylococcus, catalase positivos, de
Streptococcus, catalase negativos.
Observação: A prova é considerada positiva quando há borbulhamento ou
efervescência devido à liberação do oxigênio.
Prova da citocromo-oxidase
Sistema enzimático relacionado com os citocromos da cadeia

respiratória de alguns microrganismos. A prova é
considerada positiva quando, na mistura do reagente com a
massa bacteriana, desenvolve-se a cor púrpura em até 1
minuto. Na reação negativa, não há desenvolvimento de cor
púrpura.
Utilização de fontes de carbono
Provas fermentativas (glicose, lactose, sacarose, manose,

xilose, sorbitol, etc.). Um determinado carboidrato pode ser
fermentado e originar diferentes produtos finais, o que depende
do microrganismo envolvido. Isso pode gerar gás, que pode ser
detectado pela presença de bolhas no tubo de Durham, e
ácidos orgânicos, que podem ser detectados pela mudança de
cor do indicador.
Provas IMViC (Indole, Methyl-red, Voges-proskauer, Citrate)
Esta prova permite diferenciar os principais grupos de

Enterobacteriaceae, pois são baseadas nas propriedades
bioquímicas e nas reações enzimáticas na presença de
substratos específicos.
página 89
Atividades de aprendizagem
1. Para que servem as provas bioquímicas?
2. Quando a prova de catalase é considerada positiva?
3. Quando a prova da citocromo-oxidase é considerada positiva?
4. Por que as leituras das provas fermentativas devem ser feitas
em, no máximo, 24 horas?
5. Comente sobre a prova vermelho de metila (VM).
Aula Prática
Realização de um meio de cultura

Ler o roteiro;Separar grupos.
Responder às questões a seguir:
1. Como é realizado o meio de cultura?
2. Qual a importância ?
3. Qual meio utilizado na aula?
Referências
https://www.ufsm.br/app/uploads/sites/413/2018/12/05_microbiologia_geral.pdf
https://educapes.capes.gov.br/bitstream/capes/704405/2/Guia_Ident_Enterobact%
C3%A9rias%202021%20Karla%20Tereza.pdf

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A Ao utilizar o álcool, a membrana externa das bactérias Gram – é solubilizada.

A. As bactérias crescem e se dividem

B. As bactérias param de crescer

D. As bactérias diminuem o metabolismo

E. As bactérias diminuem o consumo de energia

Apresentar o conceito de provas bioquímicas e explicar a sua

As provas bioquímicas consistem em sucessivos testes em

Para a identificação das bactérias diversas características

Na caracterização morfológica são observados o tamanho,

Muitas culturas bacterianas são similares em suas

A investigação das atividades metabólicas das bactérias “in

Os microrganismos utilizam os carboidratos por via

Algumas destas provas são rápidas, pois avaliam a presença

A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de

Sistema enzimático relacionado com os citocromos da cadeia

Provas fermentativas (glicose, lactose, sacarose, manose,

Esta prova permite diferenciar os principais grupos de

Realização de um meio de cultura

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