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    de 19

    MARIANA VERÍSSIMO DE SOUZA

    AVALIAÇÃO DO POTENCIAL ANTIFÚNGICO DOS DERIVADOS


    DE FENOXI-HIDRAZONA-TIAZÓIS HALOGENADOS FRENTE
    ISOLADOS CLÍNICOS DE SPOROTHRIX SPP

    Relatório de avaliação de risco e as medidas de prevenção


    do projeto

    Orientador: Dr. Reginaldo Gonçalves de Lima Neto.


    Co-orientadora: Dra. Ana Cristina Lima Leite
    Síntese do projeto

    Infecção micótica provocada por meio


    da inoculação traumática

    Infecção clássica x transmissão zoonótica

    Fatores de virulência

    Melanina
    Urease

    Itraconazol
    Fármaco de primeira escolha
    Cepas resistentes

    Outras drogas
    Síntese do projeto
    Avaliação in vitro de novos compostos bioativos frente
    a isolados clínicos de Sporothrix

    Família das acilhidrazonas

    Transporte vesicular
    Progressão do ciclo celular de fungos
    Impactam na síntese de glicosilceramida

    Derivados de fenoxi-hidrazona-tiazóis
    Analogia estrutural

    Bonilla et al., 2021


    Metodologia do projeto associação a riscos e prevenção

    3º Etapa 4º Etapa 5º Etapa


    1º Etapa 2º Etapa

    Obtenção das Diagnóstico Identificação Testes de Sinergismo


    amostras laboratorial genotípica susceptibilidade
    micológico
    clássico
    Pacientes atendidos no Ambulatório
    1º Etapa
    de Dermatoses Tropicais da Clínica
    de Dermatologia do Hospital das
    OBTENÇÃO DAS
    Clínicas da UFPE.
    AMOSTRAS
    2º Etapa Esfregaço por aposição (imprint)
    das amostras clínicas
    DIAGNÓSTICO Cultura - semeio em duplicata
    LABORATORIAL
    Após surgimento das colônias -
    MICOLÓGICO CLÁSSICO
    purificação e identificação
    0μL Tampão de extração
    50

    3º Etapa
    Tubo de extração com matriz
    de pérolas de vidro
    IDENTIFICAÇÃO
    GENOTÍPICA

    Ao final do processo: DNA ressuspendido em


    água MiliQ autoclavada e mantido a 4ºC

    Protocolo adaptado de Inácio et al. (2016),


    3º Etapa:

    IDENTIFICAÇÃO
    GENOTÍPICA
    Amplificação da região genômica da calmodulina (CAL)
    As reações de PCR serão realizadas em volumes finais de 25 μL.

    3º Etapa:

    IDENTIFICAÇÃO
    GENOTÍPICA
    As suspensões dos isolados - solução salina (0,85g/L), e sua densidade ajustada de acordo com a escala
    0.5 de MacFarland em 80% a 82% da transmitância utilizando um espectrofotômetro a 530nm.
    Volume do inóculo - diluído em RPMI 1640 para uma concentração de 2-5x103céls.mL-1.
    Para os testes de sensibilidade, serão utilizadas placas de microtitulação planas de 96 poços (

    4º Etapa O inóculo será dicionado aos poços com os antifúngicos e as placas incubadas a 35°C, durante 48h,
    antes de ler os resultados para determinação 24 da Concentração Inibitória Mínima (CIM).

    TESTES DE
    SUSCEPTIBILIDADE
    Placas de microtitulação planas de 96 poços com tampas
    Diluição de cada composto a fim de realizar a combinação desses em diferentes concentrações nos
    poços 1 ao 10.
    100μL do inóculo previamente diluído na concentração ideal para o teste e será incubada em estufa
    Os poços das colunas 11 serão utilizados como controles de crescimento e esterilidade do meio na
    coluna 12 como controle de esterilidade de cada um dos compostos.
    5º Etapa

    SINERGISMO

    Leitura será realizada visualmente ou com adição da resazurina


    Classificação dos
    laboratórios de
    pesquisa
    Laboratório de biologia molecular - UFPE - NB-1
    Laboratório de micologia médica – UFPE - NB-2
    Laboratório de Diagnóstico em Doenças Tropicais
    do Centro de Ciências Médicas – CCM\UFPE)- NB-2
    REFERÊNCIAS
    OLIVEIRA, MBM. Manual de biosseguraça. Departamento de bioquímica, 2010.
    LIMA, L. Noções de segurança em laboratório. Título do Tradutor (se houver). Brasília,
    DF: 2006.
    Manual de biossegurança. Laboratório de hemoglobinas e doenças genéticas
    hematologias. Unesp, Rio Preto
    Orofino-Costa R, Rodrigues AM, de Macedo PM, Bernardes-Engemann AR.2017.
    Sporotrichosis: an update on epidemiology, etiopathogenesis, lab-oratory and clinical
    therapeutics. An Bras Dermatol 92:606–620.https://doi.org/10.1590/abd1806-
    4841.2017279
    ReisEG, Schubach TMP, Pereira SA, Silva JN, Carvalho BW, Quintana MSB,Gremião
    IDF. 2016. Association of itraconazole and potassium iodide inthe treatment of feline
    sporotrichosis: a prospective study. Med Mycol54:684–
    690.https://doi.org/10.1093/mmy/myw027.
    Rodrigues AM, de Hoog S, Camargo ZP (2013) Emergence of pathogenicity in the
    Sporothrix schenckii complex. Med Mycol 51: 405–412.
    Silveira, N.S.S., Filho, J.V.M.L., Souza, E.B., Lima, M.A.B. 2015. Microbiologia, guia de
    aulas
    práticas. Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco.

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