Coloração de Gram

Aluna: Érica Grangeia (2019126964)
Docentes: Ana Paula Chung e Rita Branco

Disciplina: Microbiologia I
Licenciatura em Saúde Ambiental
Ano letivo: 2019/2020
Relatório de aula prática

Tema: “Coloração de Gram” e “Coloração de Endósporos”
Introdução:
Objetivo:
- distinguir as bactérias de Gram (+) e Gram (-);
- observar a forma celular das bactérias;
- visualizar os endósporos formados no interior das células.
Material:
- solução de cristal violeta;
- solução de iodo de gram;
- solvente etanol/acetona;
- solução de safranina;
- solução de verde malaquite (5%);
- 3 lâminas;
- micropipeta (V = 10 μL);
- bactéria Serratia (Gram -) e bactéria Arthrobacter (Gram +);
- endósporo Bacillus megaterium;
- bico de Bunsen;
- ança;
- 3 molas de madeira;
- panela com água a ferver;
- torneira com água;
- papel absorvente;
- óleo de imersão;
- microscópio.
Procedimentos:
1a Parte: Procedimento inicial
1. Lavagem das mãos e desinfeção da bancada de trabalho com álcool.

2. Técnica do esfregaço:
i. Com a ajuda da micropipeta, colocar pequena quantidade de água estéril nas 3
lâminas;
ii. Acender o bico de Bunsen na chama de trabalho;
iii. Com a ança, retirar material da bactéria Serratia de modo a preencher o loop e,
esfregá-la na lâmina previamente preparada. Repetir o mesmo procedimento na
Arthrobacter e no Bacillus megaterium;
iv. Passar cada lâmina várias vezes na chama, com a ajuda de uma mola, de modo a
remover toda a água anteriormente adicionada e secar todas as bactérias,
fixando-as na lâmina.
2a Parte: Coloração de Gram
1. Cobrir o esfregaço da gram (+) e gram (-) com o corante cristal violeta, e deixar
aturar durante 1 minuto. Enxaguar as preparações em água corrente.
2. Cobrir, novamente, o esfregaço da gram (+) e gram (-) com o iodo durante 1 minuto.
Enxaguar as preparações em água corrente.
3. Lavar as lâminas com o solvente etanol/acetona por 30 segundos, para permitir a
sua distinção. Enxaguar as preparações em água corrente.
4. Adicionar o corante safranina e deixar aturar durante 1 minuto. Lavar um pouco com
água corrente e deixar secar em papel absorvente.
5. Colocar uma gota de óleo em cada lâmina e visualizá-las ao microscópio com uma
ampliação de 100x.
3a Parte: Coloração de Endósporos
1. Colocar um suporte com água a ferver por baixo, a lâmina que apresenta o
endósporo. De seguida, corar o esfregaço com o verde malaquite cobrindo-o
completamente, durante 5 minutos.
2. Após o tempo ter terminado, retirar da água a ferver e enxaguar um pouco por água
corrente.
3. Adicionar o corante safranina e deixar aturar durante 1 minuto. Lavar um pouco com
água corrente e deixar secar em papel absorvente.
4. Colocar uma gota de óleo na lâmina e visualizá-la ao microscópio com uma
ampliação de 100x.
Resultados:
Figura 1 – bactérias gram positivas, Figura 2 – bactérias gram negativas,

observados a microscópio. observados a microscópio.
Figura 3 – endósporos, observados a microscópio.

Discussão de resultados:
As bactérias gram positivas apresentam uma camada espessa de peptidoglicano,

mas não uma membrana externa. Significa que, não há remoção das células do complexo
formado com o cristal violeta e o iodo e, a adição da safranina não teve grande impacto pois
não houve a tal remoção do complexo. Assim, a cor no final da coloração será roxa, como
está representado na figura 1. Para além disso, observa-se a forma celular das bactérias,
conseguindo distinguir os coccos e os bastonetes.
Por outro lado, as bactérias gram negativas apresentam uma membrana externa e
uma camada de peptidoglicano fina. Então, na etapa em que há a adição do solvente
etanol/acetona, o complexo formado pelo cristal violeta e iodo é removido das células, ou
seja, há uma descoloração nas gram negativas. Assim, quando se adiciona a safranina, as
bactérias ficam com a cor vermelha da mesma, como está representado na figura 2. Além
disso, conseguimos identificar que as bactérias são bastonetes.
Relativamente à coloração de endósporos, foi utilizado o corante verde de malaquite
que é um corante específico para os endósporos. A figura 3 apresenta uma imagem
microscópica dos endósporos, esta demonstra onde se encontram os endósporos, formados
dentro do interior da célula, e as células vegetativas. O resultado foi devido ao uso da
safranina pois esta, sendo de cor vermelha, o seu contraste com o verde de malaquite é
bastante notório. Adicionalmente, há um aglomerado de células vegetativas, como está a
seta preta a indicar, sem poder ver os endósporos no interior das células isto significa que,
ou o esfregaço foi muito forte, acabando por romper as células, ou a membrana e a parede
estavam fragilizadas. ê
Conclusão:
A coloração de Gram deve-se unicamente à espessura da parede bacteriana, isto é,

se a camada de peptidoglicano for espessa (gram positivas), conseguem reter o complexo
formado pelo cristal violeta e o iodo de gram. Se a camada de peptidoglicano for fina (gram
negativas), haverá descoloração das células pois não tem capacidade de reter o complexo.
Concluindo que as bactérias de gram positivas são capazes de formar estruturas de
resistência como os endósporos.
Na coloração de endósporos ...
http://www.provida.ind.br/site/index.php/bacterias/bacterias/122-tecnica-de-gram.html
https://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/

Coloração de Gram

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Coloração de Gram

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Coloração de Gram

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Aluna: Érica Grangeia (2019126964)

Docentes: Ana Paula Chung e Rita Branco

Relatório de aula prática

1a Parte: Procedimento inicial

1. Lavagem das mãos e desinfeção da bancada de trabalho com álcool.

2a Parte: Coloração de Gram

3a Parte: Coloração de Endósporos

Figura 1 – bactérias gram positivas, Figura 2 – bactérias gram negativas,

Figura 3 – endósporos, observados a microscópio.

As bactérias gram positivas apresentam uma camada espessa de peptidoglicano,

A coloração de Gram deve-se unicamente à espessura da parede bacteriana, isto é,

Você também pode gostar