Clostridium Perfringens

Clostridium perfringens
• Bacilo, gram +, sulfito-redutores

o Ser sulfito redutor indica que o microrganismo é capaz de reduzir o sulfito em
sulfeto e vai influenciar na cor da colônia formada
• Anaeróbios
o Não adianta a embalagem a vaco para evitar o crescimento
• Esporulado
o Estrutura de resistência
• Termófilo: 43-47°C - ótima / 12-50°C
• pH ótimo: 7,2 / pH limite: 5,0
o Alcalinos
o A maior parte dos alimentos de origem animal tem o pH superior a 5,0, ou
seja, são alimentos favoráveis ao Clostridium perfringens
• Concentrações 7-8% de sal
o Conseguem resistir
• Habitat: trato gastrointestinal
Cepa tipo A
• Menos agressiva e mais comum de ocorrer

• Tipo infecção
o Vai ingerir o alimento com a dose infectante da cepa
o As bactérias vão aderir a mucosa intestinal e se multiplicar intensamente,
causando uma reação inflamatória da mucosa e gerando os quadro de diarreia
sem sangue
• Forma clássica
o Sintomas como: diarreia sem sangue, vômito, febre, indisposição, dor
abdominal
• Período de incubação: 8-12 horas
• Duração: 12-24 horas
• Tempo de geração: 8 minutos
• Carne assada é a refeição mais incriminada em surtos por essa cepa, por causa do seu
corte e tipo de preparo
o Peça inteira com espessura grande
o A contaminação se inicia no interior do corte com espessura maior, pois tem
uma menor exposição ao oxigênio
o O preparo é feito com antecedência e deixa fora da geladeira até ser
consumida
o Ao esquentar novamente elimina o microrganismo, mas ativa os esporos
Cepa tipo C
• Mais agressiva e mais rara de acontecer

• Enterite necrótica
o Diarreia com sangue, muita dor abdominal
• Tipo infecção
o Ingestão do microrganismo ou dos esporos
o Esporos: serão ativados no organismo pela tripsina, originando a forma
vegetativa que depois vai se multiplicar na mucosa intestinal
o Microrganismo: adere a mucosa intestinal e se multiplica intensamente
• Tipo intoxicação
o Ao aquecer e causar a esporulação dos esporos
o Ingerir a toxina pré-formada no alimento, que tem os mesmos sintomas
o A toxina geralmente é sensível ao pH estomacal, sendo menos comum ter o
tipo intoxicação
• Em ambos os tipos, durante a multiplicação vai ter a produção de toxinas, que serão
responsáveis pelos sintomas e terão ação necrosante
• Produtos de carne suína são mais comuns nos surtos por essa cepa, pois:
o Os suínos são reservatórios naturais da cepa tipo C
o Não é comum esfolar o animal no abatedouro, apenas retirar os pêlos. Mas os
suínos costumam deitar e rolar nas fezes, ao fazer isso passam o Clostridium
perfringens do trato gastrointestinal para a pele
Identificação
• Diluições
o Mesma forma dos outros microrganismos
• Plaqueamento em profundidade
o Microrganismo anaeróbio, ou seja, precisa reduzir a quantidade de oxigênio
presente
• Meio de cultura: Ágar SPS
o Sulfito – substrato
o Polimixina – inibe o crescimento de bactérias gram -
o Sulfatiazina – inibe o crescimento de bactérias gram -
• Jarra Gaspak
o Cria um ambiente na anaerobiose para incubação
• 46°C / 24-96 horas
• UFC de coloração negra
o Houve a redução de sulfito em sulfeto e liberação de ferro
o Existem alguma bactéria do gênero Clostridium
• Restabelecer o potencial de multiplicação das bactérias
o Semear as colônias características em um meio de enriquecimento e incubar
Provas bioquímicas
• Redução de nitrato-nitrito
• Prova da motilidade
• Prova da coagulação do leite
• Fermentação da glicose e da lactose
• Prova da gelatinase
Redução do Nitrato em Nitrito
• Verificar a capacidade da bactéria de produzir duas enzimas, a nitrato redutase

assimilativa e nitrato redutase respiratória, reduzindo o nitrato em nitrito
• Se produzir muita enzima, vai reduzir o nitrato em nitrito e o nitrito em amônia
• Meio: caldo nitratado
• Semear o crescimento do meio de enriquecimento no caldo nitratado
• Incubação: 35-37°C por 24-48 horas na jarra de gaspak
• Pingar os reagentes ácido sulfanílico e α-naftil amina
• Observar a coloração formada
o Reagente + nitrito = vermelha – prova +
o Reagente + nitrato = amarelo (incolor)
o Amônia + reagente = amarelo (incolor)
• Ao observar a coloração amarelo (incolor), adicionar zinco em pó ao meio de cultura
o O zinco em pó faz o papel das enzimas
• Observar a coloração
o Se ficou vermelha – prova – (pois foi o zinco em pó que reduziu)
o Se manteve a coloração amarelo (incolor) – prova + (indica a presencia de
amônia)
o Clostridium perfringens: prova +
Prova da Motilidade
• Meio: SIM
o Permite fazer 3 análises:
▪ Sulfito
▪ Indol
▪ Motilidade
• Semear por picada o crescimento do meio de enriquecimento no ágar SIM
• Prova da motilidade
o Observar o crescimento das colônias
▪ Cresceu somente no local da semeadura – prova -
▪ Cresceu por todo o meio – prova +
• Prova do sulfito
o Observar a coloração das colônias
▪ Escuras – prova +
▪ Claras – prova -
• Prova do indol
o Pingar reagente de Kovac’s
o Observar a cor do anel na superfície do meio
▪ Vermelho – prova +
▪ Amarelo – prova -
• Clostridium perfringens:
o Sulfito +
o Indol +
o Motilidade -
Prova da Coagulação do Leite
• Verificar se tem a produção da enzima caseinase que vai degradar a caseína, gerando a
formação de coágulos no leite
• Meio: leite desnatado estéril
o Comprar pronto ou esterilizar na autoclave
• Semear o crescimento do meio de enriquecimento no leite desnatado estéril
• Observar a formação de coágulos
o Presença de coágulos – prova +
o Sem coágulos – prova -
• Clostridium perfringens: prova +
Fermentação da Glicose e da Lactose
• Verificar se a bactéria em questão consegue fermentar a lactose e a glicose,

produzindo compostos ácidos
• Meio: Cistina Triptose Ágar (CTA)
o Cistina – ajuda a reduzia a quantidade de oxigênio
o Vermelho de fenol – indicado de pH
• Utilizar 2 tubos de ensaio
o Ambos com o meio cistina triptose ágar
o Em um tubo adiciona glicose
o Em outro tubo adiciona lactose
• Semear o crescimento do meio de enriquecimento em ambos os tubos
• Observar a coloração
o Se não tiver a fermentação dos açúcares – Tubo vermelho: prova -
o Se tiver tido a fermentação dos açúcares, o vermelho de fenol em pH ácido
fica amarelo-ouro – Tubo amarelo-ouro: prova +
• Clostridium perfringens: os dois tubos com prova +
Prova da Gelatinase
• Clostridium perfringens: gelatinase +

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• Bacilo, gram +, sulfito-redutores

• Menos agressiva e mais comum de ocorrer

• Mais agressiva e mais rara de acontecer

• Verificar a capacidade da bactéria de produzir duas enzimas, a nitrato redutase

Prova da Coagulação do Leite

• Verificar se a bactéria em questão consegue fermentar a lactose e a glicose,

• Clostridium perfringens: gelatinase +

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