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SISTEMA POR INFRAVERMELHO PRÓXIMO (NIR) PARA ANÁLISES DE

NITROGÊNIO FOLIAR

SYSTEM BY NEAR INFRARED (NIR) FOR ANALYSIS OF NITROGEN FOLIAR

Gustavo Alves SANTOS¹; Ana Paula dos SANTOS²; Gaspar Henrique KORNDÖRFER³
1. Engenheiro Agrônomo, Bolsista CAPES, Mestrando em Solos pelo Programa de Pós Graduação em Agronomia – PPGA, Instituto de
Ciências Agrárias - ICIAG, Universidade Federal de Uberlândia - UFU, Uberlândia, MG, Brasil. [email protected]; 2.
Engenheira Agrônoma, mestre em Solos pelo PPGA – ICIAG - UFU, Uberlândia, MG, Brasil. 3. Professor, PhD, Departamento de
Solos – ICIAG - UFU, Uberlândia, MG, Brasil.

RESUMO: O sistema de análises por infravermelho próximo (NIR) tem potencial para substituir metodologias
convencionais de análises laboratoriais garantindo qualidade e especificidade. O objetivo do trabalho foi calibrar e utilizar
o NIR para análises de nitrogênio foliar de milho e soja. Para a construção do banco de dados e das curvas de calibração,
foram selecionados 100 espectros dos 315 obtidos da leitura em triplicata de 105 amostras de folhas de milho, e 73
espectros dos 363 resultantes da leitura em triplicata de 121 amostras de folhas de soja. Os demais espectros foram
utilizados para a validação das curvas construídas. Avaliou-se a habilidade de predição dos modelos construídos
utilizando-se amostras não pertencentes ao banco de dados, sendo 92 amostras de folhas de milho e 86 amostras de folhas
de soja. Todas as amostras foram submetidas também à análise convencional pelo método Kjeldahl. Os resultados foram
analisados por comparação, através dos coeficientes de correlação e pelo teste t-Student a 5% de probabilidade. A
calibração gerou curvas capazes de estimar resultados que não diferiram estatisticamente dos obtidos pelo método padrão e
os coeficientes de correlação de 0,85 e 0,88 para nitrogênio foliar em milho e soja, respectivamente, obtidos na validação
indicam que as curvas são válidas e podem gerar resultados confiáveis. Na etapa de predição, os valores encontrados pelo
NIR não diferem dos resultados do método padrão e os coeficientes de correlação de 0,79 e 0,85 para milho e soja
respectivamente, indicam que o sistema NIR expressa o teor de nitrogênio foliar com confiabilidade aceitável.

PALAVRAS-CHAVE: Espectroscopia. Análise foliar. Teor de nitrogênio.

INTRODUÇÃO notório o aumento pela busca por essas análises em
laboratórios especializados, os quais devem então,
A análise foliar é uma ferramenta que buscar progresso científico, além de melhorias
indica se os fertilizantes aplicados ao solo estão tecnológicas de modo a desenvolver métodos que
sendo realmente aproveitados e se os nutrientes possam apresentar os resultados das análises
fornecidos estão balanceados conforme as laboratoriais em menos tempo, com menor custo
exigências da cultura, além de ser um indicador para o produtor e com máxima confiabilidade
bastante confiável quando se deseja saber se o (SANTOS et al., 2010).
manejo adotado numa lavoura está O nitrogênio é importante no metabolismo
coerente (RESENDE, 2003). das plantas, participando como constituinte de
Segundo Pena (2009) como critério moléculas de proteínas, coenzimas, ácidos
diagnóstico, a utilização da análise foliar baseia-se nucléicos, citocromos, clorofila etc., além de ser
na premissa de existir uma relação bem definida um dos nutrientes mais relevantes para o aumento
entre o crescimento e a produtividade das culturas e da produtividade. A adubação nitrogenada por sua
o teor dos nutrientes em seus tecidos. Segundo vez influencia também na qualidade dos produtos
Martinez et al. (1999) a análise foliar pode ser agrícolas (FERREIRA et al., 2001), e no teor de
utilizada não só na avaliação do estado nutricional nitrogênio foliar.
em resposta às adubações e na verificação do O teor de nitrogênio nas folhas é um dos
equilíbrio nutricional, mas também na constatação fatores determinantes no conteúdo de clorofila
da ocorrência de deficiências ou toxidez de (MALAVOLTA et al., 1997). Além disso, segundo
nutrientes, no acompanhamento, avaliação e ajuda Killorn e Zourarakis (1992), a concentração foliar
no ajuste do programa de adubações; e por fim, na de nitrogênio reflete sua disponibilidade no solo,
detecção da ocorrência de salinidade elevada em sendo que a sua análise pode ser útil na detecção de
áreas irrigadas ou cultivos hidropônicos. deficiência de nitrogênio, bem como na
Salienta-se que boa parte das decisões recomendação de adubação.
tomadas em relação ao manejo nutricional das O método Kjeldahl é o mais utilizado para
culturas baseia-se em laudos de análises de solo e a determinação do teor de nitrogênio em tecido
também de tecido vegetal. Nesse contexto, é vegetal (BATAGLIA et al., 1983). Esse método

Received: 22/06/11
Biosci. J., Uberlândia, v. 28, Supplement 1, p. 83-90, Mar. 2012
Accepted: 05/11/11
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analítico é amplamente utilizado nos laboratórios, (SANTOS et al., 2010), e também de nitrogênio em
no entanto é relativamente demorado e exige folhas de trigo (LIMA et al., 2008).
grande demanda de mão-de-obra especializada. O sistema NIR foi usado como uma
Schuster (1978) consagrou o emprego da ferramenta rápida e eficiente para quantificar os
espectroscopia NIR na determinação de proteína estádios nutricionais de plantas e monitorar a
em substituição ao método Kjeldahl, que apesar de eficiência de fertilizantes no solo. Modelos
ser bastante preciso é um procedimento lento e desenvolvidos para previsões de teores de
gerador de resíduos. nitrogênio, fósforo, magnésio e ferro em folhas de
O sistema de análises por infravermelho milho utilizaram medidas de refletância em
próximo - Near Infrared (NIR), pode vir a diferentes regiões do espectro (GRAEFF;
substituir grande parte das metodologias CLAUPEIN, 2003). Esta metodologia contribuiu
convencionais de análises em laboratório, para melhor interpretar os estádios fisiológicos das
garantindo a qualidade e as especificidades folhas de milho por meio da análise dos seus
necessárias para cada análise. Sua grande vantagem espectros e, além disto, a técnica pode ser utilizada
em relação aos métodos tradicionais está na análise com outras espécies como o azevém perene
múltipla dos constituintes, no período máximo de (Lolium perene L.) e festuca vermelha (Festuca
um minuto por amostra, menor necessidade de rubra L.), para discriminar a fertilização
mão-de-obra, rapidez e, portanto, menor custo recomendada (GISLUM et al., 2004).
variável, além de não ser poluente por não utilizar
Brandelero (2010) utilizou a espectrometria
produtos químicos ou reagentes (AMORIM, 1996).
por infravermelho próximo para detectar níveis de
No entanto, as dificuldades de se trabalhar com
macro e micronutrientes em material vegetativo de
esse sistema estão relacionadas ao relativo custo
povoamentos florestais homogêneos de Eucalyptus
inicial de aquisição, necessidade de sistematização
grandis, o que se mostra como uma boa ferramenta
dos dados, e em algumas situações, a necessidade
para utilização no planejamento dos programas de
de grandes quantidades de material para que se
fertilização, visando fornecimento de elementos e
proceda a análise.
quantidades adequadas e economia de fertilizantes.
Apesar de ser uma técnica de análise
bastante avançada, sua eficácia é diretamente Segundo Tormen (2008) o infravermelho
dependente dos métodos analíticos tradicionais, próximo pode ser utilizado para quantificar
visto que é necessária a sua calibração a partir dos nitrogênio em folhas de feijoeiro no início do
resultados desses. desenvolvimento da cultura pelo fato de esse
método ter apresentado melhor resultado que os
A espectroscopia no infravermelho
desenvolvidos com índices de vegetação.
próximo foi empregada desde o início da década de
1960, para determinar umidade em sementes Diante da importância atribuída ao
(HART et al., 1962). O seu uso se baseia nas curvas nitrogênio na agricultura, está clara a necessidade
espectrais das amostras analisadas. O espectro de de se desenvolver métodos rápidos, eficientes,
um determinado material obtido com radiação confiáveis e de baixo custo para determinação dos
infravermelha é o resultado da absorção de energia, níveis desse elemento em tecidos vegetais,
na forma de luz, por moléculas orgânicas, possibilitando um fácil monitoramento da sua
particularmente aquelas que possuem grande disponibilidade no solo e do estado e/ou equilíbrio
número de ligações do tipo C-N, N-H e O-H nutricional das plantas.
(AMORIM, 1996). O presente trabalho teve como objetivo
A radiância ou quantidade de radiação calibrar e utilizar o sistema de análises por
refletida, comparada com a irradiância que é a infravermelho próximo (NIR) para a análise de
quantidade de radiação que incidente sobre a nitrogênio em tecido foliar das culturas de milho e
amostra fornece a medida de reflectância, a qual é soja.
captada pelos sensores para a construção da curva MATERIAL E MÉTODOS
espectral. O sistema NIR utilizado foi o de marca
De acordo com Meyer (1999) é possível Femto, modelo NIR 900 PLS, fabricado no Brasil
obter boas calibrações do sistema NIR para análises pela FEMTO Indústria e Comércio de
de nitrogênio foliar. Na área de nutrição de plantas Instrumentos, que trabalha na faixa de
o sistema NIR pode ser usado na determinação dos comprimento de onda de 1100 a 2500 ηm. O
teores de nutrientes em folhas de cana-de-açúcar software utilizado no equipamento foi o
FemWin900, do mesmo fabricante.

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Os espectros das amostras foram obtidos a Para a validação, as leituras/espectros não

partir da leitura em varredura das mesmas, a qual selecionadas para a construção da curva de
utilizou toda a faixa de comprimentos de onda com calibração foram utilizadas no intuito de testar as
a qual o sistema trabalha, de forma automática. curvas construídas para que as mesmas fossem
Para a construção das curvas de calibração, aceitas e validadas pelo equipamento.
o método de calibração multivariado utilizado foi o
de regressão Mínimos Quadrados Parciais (PLS), e Predição
utilizou-se o tratamento matemático direto. Avaliou-se a habilidade de predição dos
As amostras de material vegetal de milho e modelos construídos por meio de predição externa,
de soja utilizadas foram obtidas do arquivo de feita com amostras não pertencentes ao banco de
amostras enviadas por terceiros e submetidas a dados.
análises de rotina no Laboratório de Análise de Essa foi a etapa de utilização propriamente
Solos (LABAS) da Universidade Federal de dita, em que, a partir dos resultados anteriormente
Uberlândia (UFU). armazenados no banco de dados, o sistema NIR
indicou, por meio de predição, qual o valor da
Calibração característica analisada para cada amostra.
Essa etapa consistiu na construção de um Essas mesmas amostras também foram
banco de dados contendo o valor de nitrogênio analisadas pelo método convencional, e, com os
conhecido, determinado pelo método convencional resultados das duas análises, foram feitas as
e a curva espectral de cada uma das amostras correlações que mostraram a esperada
analisadas no aparelho. Esses dados ficaram confiabilidade, ou não, do aparelho para esse tipo
armazenados no software do aparelho e de análise.
possibilitaram ao mesmo predizer os valores das Para o estudo da correlação entre os métodos,
amostras analisadas na etapa final de predição. tanto no sistema NIR quanto pelo método Kjeldahl
Durante essa etapa do trabalho, cada (BATAGLIA et al., 1983) foram analisadas 178
amostra foi lida no aparelho em três repetições, na amostras, sendo 92 de folhas de milho e 86 de
tentativa de diminuir prováveis erros, tais como de folhas de soja.
má acomodação da amostra no recipiente de
inserção da amostra no aparelho (cubeta), e Análise de dados
também para que se construísse o banco de dados Os resultados da predição foram
com um maior número de resultados e curvas analisados mediante a comparação dos resultados
espectrais. obtidos pelo sistema NIR e pelo método
Para determinação do teor de nitrogênio convencional, por meio dos coeficientes de
foliar, foram analisadas 226 amostras, sendo 105 de correlação a 0,05 de significância determinados
folhas de milho e 121 de folhas de soja. A entre os resultados dos dois métodos testados.
determinação foi realizada pelo método Kjeldahl Também foi feito o teste t-Student a 5% de
(BATAGLIA et al., 1983). Para a análise no probabilidade para se verificar a diferença entre
sistema NIR, foram colocados aproximadamente 10 médias, para testar a semelhança entre os resultados
gramas de cada amostra em uma cubeta a qual foi obtidos pelos dois métodos.
inserida no aparelho para que se fizesse a leitura
espectral. RESULTADOS E DISCUSSÃO
Ao final, foram obtidas 315
leituras/espectros de valores de nitrogênio em Calibração
folhas de milho (105 amostras lidas em triplicata) A calibração feita gerou curvas capazes de
das quais 100, com teores entre 23 e 37 g kg-1 de informar resultados de teores de nitrogênio em
nitrogênio foram selecionadas pelo aparelho para a folhas de milho e soja que não diferiram
obtenção da curva de calibração para o milho, significativamente (P<5%) dos resultados obtidos
sendo as demais selecionadas para a etapa de pelo método padrão (Tabela 1).
validação. Já para as folhas de soja, foram obtidas Os estudos de correlação que comparam os
363 leituras/espectros (121 leituras em triplicata). resultados obtidos pelo sistema NIR com os
Para a curva de calibração foram selecionadas pelo resultados obtidos pelo método padrão, para folhas
aparelho 73 leituras, com teores de nitrogênio entre de milho e soja, podem ser observados nas Figuras
36 e 62 g kg1. Novamente as demais amostras 1 e 2, respectivamente.
foram selecionadas para a validação.

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Tabela 1. Valores de t encontrados nos testes t-student (5% de probabilidade) para diferença entre médias
obtidas pelo sistema NIR e pelo método Kjeldahl.
Cultura Número de espectros t calculado t tabelado
Milho
100 0,97 ns 1,97
Soja
73 0,99 ns 1,97

ns
– não diferem significativamente entre si pelo teste t de Student.

40
Nitrogênio foliar (NIR), g kg-1

y = 0,7142x + 8,837
r = 0,85
35 n= 100

30

25

20
20 25 30 35 40

Nitrogênio foliar (Kjeldahl), g kg -1

Figura 1. Correlação entre o método padrão (Kjeldahl) e o NIR para determinação de nitrogênio foliar em
milho.

65
Nitrogênio foliar (NIR), g kg -1

y = 0,7923x + 10,753
60 r = 0,88
n=73
55

50

45

40

35
35 40 45 50 55 60 65

Nitrogênio foliar (Kjeldahl), g kg -1

Figura 2. Correlação entre o método padrão (Kjeldahl) e o NIR para determinação de nitrogênio foliar em soja.

Os coeficientes de correlação de 0,85 e 0,88 nitrogênio nas folhas de milho e de 40 a 62 g kg-1 de

para teor de nitrogênio foliar em milho e soja nitrogênio nas folhas de soja.
respectivamente, foram obtidos na validação. Esses Os valores encontrados pelo sistema NIR,
valores indicam que as curvas são válidas e, por tanto para folhas de soja quanto para as de milho,
isso, podem gerar resultados confiáveis, quando não diferem estatisticamente dos resultados do
comparados aos obtidos pelo método convencional. método padrão de análise de nitrogênio foliar. A
variação existente entre os teores de nitrogênio nas
Predição folhas analisadas consegue ser detectada pelo
Pelo método Kjeldahl foram encontrados sistema NIR e assim os resultados por ele
teores de nitrogênio variando de 19 a 39 g kg-1 de informados estão compreendidos em intervalos
semelhantes (Tabela 2).

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Tabela 2. Valores de t encontrados nos testes t-student (5% de probabilidade) para diferença entre médias
obtidas pelo sistema NIR e pelo método Kjeldahl.
Intervalo
Cultura Número de amostras t calculado t tabelado (g kg-1 N)
Kjeldahl NIR
Milho
92 0,59 ns 1,97 19 – 39 19 – 42
Soja
86 0,91 ns 1,97 40 – 62 44 – 62

ns
– não diferem significativamente entre si pelo teste t de Student.

Segundo Malavolta et al. (1997) a faixa de O teste de correlação e seus coeficientes de

suficiência de nitrogênio foliar para a cultura da soja 0,79 e 0,85 para teor de nitrogênio foliar em milho e
está compreendida entre 45 e 55 g kg-1 e, para a soja respectivamente (Figuras 3 e 4), indicam que,
cultura do milho, entre 27 a 32 g kg-1, o que permite além de encontrar resultados sem diferença
afirmar que os resultados encontrados variaram do significativa a 5% de probabilidade, em relação aos
nível baixo até alto, tanto para as amostras de folha do método padrão Kjeldahl, o sistema NIR consegue
de milho quanto de soja, em ambos os métodos detectar o incremento no teor de nitrogênio foliar e
testados. expressá-lo com confiabilidade aceitável, ao nível
de 0,05 de significância.
Nitrogênio foliar (NIR), g kg-1

40 y = 0,7645x + 7,2239
r = 0,79
35 n = 92
30

25

20

15
15 20 25 30 35 40

Nitrogênio foliar (Kjeldahl), g kg -1

Figura 3. Correlação entre o método padrão (Kjeldahl) e o NIR para determinação de nitrogênio foliar em
milho.
65
Nitrogênio foliar (NIR), g kg-1

y = 0,7369x + 14,194
60 r = 0,85
n = 86
55

50

45

40
40 45 50 55 60 65

Nitrogênio foliar (Kjeldahl), g kg-1

Figura 4. Correlação entre o método padrão (Kjeldahl) e o NIR para determinação de nitrogênio foliar em soja.

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Os coeficientes de correlação encontrados diferença estatística pelo teste t-Student a 5% de

foram altos pelo fato das amostras utilizadas na probabilidade entre os teores de nitrogênio total
predição apresentarem teores de nitrogênio foliar obtidos pelo sistema NIR e pelo método de
compreendidos dentro do mesmo intervalo obtido referência.
pelas amostras utilizadas na construção do banco de Não havendo diferença estatística entre os
dados da etapa de calibração. Isso indica que valores de nitrogênio foliar entre os métodos
extrapolações para valores que estejam fora do testados (método padrão e por infravermelho
intervalo que compõe o banco de dados inicial próximo) pode-se dizer que os coeficientes de
podem ser comprometidas, no entanto, a construção correlação encontrados são satisfatórios. Isto
desse banco de dados com valores de maior permite indicar que a utilização do sistema de
abrangência é uma das maneiras de amenizar essa análises por infravermelho próximo é confiável.
problemática. Considerando os resultados, o sistema NIR pode
Os resultados encontrados se assemelham então, substituir com vantagens (agilidade, rapidez e
aos obtidos por Santos et al. (2010) os quais menor custo) o método convencional de análise de
trabalharam com amostras de folhas de cana-de- nitrogênio em tecido vegetal, sem comprometer a
açúcar e encontraram coeficientes de correlação de qualidade dos resultados.
0,83 e 0,87 para as comparações entre os métodos Com o objetivo de se manter a qualidade dos
padrão e o sistema NIR, para análises de silício e resultados encontrados e também no intuito de se
nitrogênio foliar respectivamente. Segundo esses determinar correlações ainda melhores, deve-se
autores, esses níveis de correlação são considerados constantemente complementar o banco de dados do
altos e pelos fatos das análises de silício e nitrogênio sistema com valores compreendidos entre os
no tecido vegetal realizadas pelos métodos padrões intervalos estudados.
serem complexas, demoradas e requererem grande Para o caso de análises que se estendam a
quantidade de reagentes tóxicos, esse sistema pode outros materiais, elementos, culturas e intervalos,
ser usado com sucesso para determinação destes deve-se construir um banco de dados o mais
elementos em folhas de cana-de-açúcar. Ainda nesse abrangente possível de acordo com as avaliações de
trabalho, dentre as comparações testadas, a análise interesse.
de nitrogênio foliar no sistema NIR foi a que
apresentou maior coeficiente de correlação quando CONCLUSÃO
comparada com o método padrão, seguido pelo
silício foliar, teor de argila e de matéria orgânica no Os resultados dos testes estatísticos e os
solo, o que indica que o sistema NIR apresenta coeficientes de correlação encontrados indicaram
maior chance de sucesso na determinação de que as curvas de calibração geradas foram capazes
nutrientes nas folhas do que nos solos. de fornecer resultados confiáveis, mostrando a
Resultados semelhantes foram encontrados eficiência do sistema NIR para a realização da
também por Lima et al. (2008) que, trabalhando análise de nitrogênio em folhas de milho e soja.
com 29 amostras de folha de trigo, não encontraram

ABSTRACT: The system analysis by near infrared (NIR) has the potential to replace conventional methods of
laboratory analysis ensuring quality and specificity. The objective of this study was to calibrate and use the NIR for
analysis of foliar nitrogen in corn and soybean plants. For building the database and the calibration curves, were selected
100 of the 315 spectra obtained in triplicate reading of 105 samples of corn leaves, and 73 of the 363 spectra resulting
from the reading of 121 in triplicate samples of soybean leaves. The remaining spectra were used to validate the
constructed curves. Then we evaluated the predictive ability of models built using samples not belonging to the database,
92 samples of leaves of maize and 86 samples of soybean leaves. All samples were also subjected to conventional Kjeldahl
analysis. The results were analyzed by comparison of the coefficients of correlation and the t-Student test at 5%
probability for difference between means for testing the equality between the methods. The calibration curves generated
able to report results statistically equal to the standard method and the correlation coefficients of 0.85 and 0.88 for leaf
nitrogen in corn and soybeans, respectively, obtained in the validation indicate that the curves are valid and may yield
reliable. In step prediction, the values found by the NIR system for sheets of soybean and corn do not differ from results of
standard method and the correlation coefficients of 0.79 and 0.85 for corn and soybean respectively, indicate that the NIR
system expressed the leaf N content with acceptable reliability.

KEYWORDS: Spectroscopy. Foliar analysis. Nitrogen content.

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