Aula TP7

Aula TP7
1) Visualização de Fibras Fiadas a Húmido por Microscopia de Campo Claro

- Das 3 amostras preparadas na Aula TP6 tirar 5 fotos em zonas aleatórias de cada fibra (total 15 fotos);
- Guardar as imagens recolhidas e examinar os diâmetros com recurso ao software ImageJ;
- Fazer 3 medições de diâmetros em cada imagem captada (apresentar média e desvio padrão no
relatório, juntamente com imagem mais representativa das dimensões médias obtidas).
Onde fazer download do programa ImageJ:

https://imagej.nih.gov/ij/download.html
Como fazer medições de diâmetros:

- Tutoriais do youtube
https://www.youtube.com/watch?v=FiFwxoxOmNo
https://www.youtube.com/watch?v=sXc2AFTbo3M
https://www.youtube.com/watch?v=3xBpPoWAXTA
https://www.youtube.com/watch?v=XXDksmBWl5A
ou
- Seguir as seguintes dicas
1. Abrir o software ImageJ
2. Ir a "File" na barra superior e selecionar "open" (escolher a imagem)
3. Escolher a forma reta "Straight" na barra com as formas (rectangle, oval, etc.)
4. Desenhar a reta por cima da escala da imagem e manter selecionada
5. Ir a "Analyze" e escolher "Set scale" (desta forma, essa distância vai ficar definida como a escala).
Em "known distance" escrever o valor a que corresponde essa escala que foi selecionada (exemplo:
500) e "Unit of lengh" escrever a unidade de medida (exemplo: micrómetro ou micron) e fazer "OK"
(fica definida a escala e agora já podem começar as medições)
6. Desenhar a reta na imagem definindo o diâmetro que se pretende medir ao longo da fibra
7. No teclado clicar "T" para abrir a janela "ROI Manager" e escolher "Measure". Abre-se a janela
"Results", nesta janela existe uma tabela cuja última coluna "Lenght" tem o diâmetro medido na
unidade definida. Faz-se "Control + C" no teclado e cola-se os valores em Excel (depois fecha-se a
janela "Results" e faz-se "Delete" para apagar o diâmetro já medido).
Notas:
- podem medir vários diâmetros de uma vez, desenham a reta na imagem e carregam em "T" no teclado
(para guardar a medida) e desenham outro e "T" e assim sucessivamente até terem terminado. Depois
na janela "ROI" carregam em "Control + A" no teclado de forma a ficarem todas as medidas selecionadas
e ao fazer "Measure" a tabela vai apresentar todos os diâmetros medidos.
- usem o "+" e "-" no teclado para fazer ZOOM IN e ZOOM OUT na imagem para facilitar medições
precisas
- de cada vez que abrirem uma nova imagem têm de definir a escala "Set scale".
2) Medição de Absorbância para Determinação de Concentração de Ampicilina Imobilizada nas Fibras
- Medir absorbâncias entre 190 e 500 nm, utilizando cuvettes de quartzo (permitem deteções de
comprimentos de onda mais baixos);
- O pico de deteção da ampicilina deve ser encontrado entre 200-201 nm (grandes alterações na deteção
deste pico poderão indicar contaminação da solução de antibiótico);
- Medir absorbâncias da solução ao tempo 0 h (antes de imobilização) e após 24 h de imobilização; utilizar
dH2O como background (para eliminar influência do solvente). Medir a absorbância dos controlos para
eliminar a influência do polímero;
- Determinar a concentração de ampicilina imobilização ela diferença de absorbâncias (t 0h – t 24h).
Nota: devido à limitação do tempo disponível não será possível produzir uma curva de calibração que
relacione concentração de ampicilina com absorbância para determinar a quantidade de ampicilina
imobilizada. Numa situação normal, as absorbâncias detetadas devem ser substituídas numa curva de
calibração que contemple a concentração de partida (a t = 0h) e várias concentrações mais baixas. A curva
de calibração deve incluir pelo menos 5 pontos para maior exatidão dos resultados.
Ex:
25.00
Concentração de Ampicilina (ug/mL)
20.00 y = 29.858x - 1.956

R² = 0.9816
15.00
10.00
5.00
0.00
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8
Absorbância

Aula TP7

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Aula TP7

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Aula TP7

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Aula TP7

1) Visualização de Fibras Fiadas a Húmido por Microscopia de Campo Claro

Onde fazer download do programa ImageJ:

Como fazer medições de diâmetros:

20.00 y = 29.858x - 1.956

Você também pode gostar