Laboratóri Procedimento Operacional Padrão Elaborado: Andressa Franco

o Central DOSAGEM DO HDL Revisado: 02/02/2023

HDL DIRETO

FUNDAMENTO
Na primeira etapa da reação, o poliânion e o composto catiônico interagem eletrostaticamente
com a lipoproteína de baixa densidade (LDL), a lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL)
e os quilomícrons (CM); o que impedirá a reação das partículas não HDL com as enzimas
colesterol oxidase (CHOD) e colesterol esterase (CHER).

Na segunda etapa, as enzimas reagem especificamente com a lipoproteína de alta densidade

(HDL) presente na amostra, produzindo peróxido de hidrogênio (H2O2) que é detectado pela
reação de Trinder.
A intensidade da cor formada é diretamente proporcional à concentração de colesterol HDL na
amostra.

APLICAÇÃO CLÍNICA
A determinação dos níveis de Colesterol HDL juntamente com o Colesterol Total e o Colesterol
LDL no soro é sempre solicitada para avaliar o fator de risco de uma pessoa desenvolver a
Doença Arterial Coronariana (DAC).
Como o colesterol HDL exerce um efeito protetor contra a aterosclerose há uma relação inversa
com a prevalência da enfermidade coronariana, isto é, quanto maior o seu teor na circulação
menor o risco de DAC.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
A amostra de sangue deve ser colhida após um jejum de 12 horas para evitar a interferência da
lipemia pós-prandial que geralmente está presente em amostras obtidas sem jejum.
Amostras utilizadas
Soro ou plasma (heparina lítio, EDTA ou citrato).
Estabilidade e armazenamento da amostra
O analito é estável por 7 dias entre 2-8°C.
Volume ideal utilizado para análise
(Definir o volume ideal a ser encaminhado para análise).
Volume mínimo utilizado para análise
(Definir o volume mínimo a ser encaminhado para análise).
Critérios para rejeição da amostra
Não utilizar amostras fortemente hemolisadas ou com sinais de contaminação bacteriana.
Fazer referência ao manual ou POP de coleta, separação e distribuição de material.

REAGENTE UTILIZADO
HDL DIRETO CAT. 400 MS 80022230071

GOLD ANALISA DIAGNÓSTICA LTDA

CNPJ – 03.142.794/0001-16
Av. Nossa Senhora de Fátima, 2363
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Belo Horizonte – MG – Brasil

Farmacêutico Responsável: José Gilmar Pereira Berto - CRF-MG 13421

Componentes do kit
Conservar entre 2 a 8 ºC.
Reagente 1 - Pronto para uso. Contém Tampão de Good, pH 6,6 (25 ºC) 100 mmol/L; Cloreto
de sódio 170 mmol/L; Colesterol-esterase 1400 U/L; Colesterol oxidase 800 U/L; Catalase 600
kU/L; Ascorbato oxidase 3000 U/L; N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5- dimetoxianilina (HDAOS)
0,56 mmol/L.

Reagente 2 - Pronto para uso. Contém Peroxidase 3500 U/L; 4-Aminofenazona 4 mmol/L;
Tampão de Good, pH 7,0 (25ºC) 100 mmol/L; Azida sódica 0,05%.
Calibrador - Reagente liofilizado. Contém soro matriz humana, Colesterol-HDL (concentração
variável de lote a lote). Potencialmente infectante.

Estabilidade
Os reagentes não abertos quando armazenados entre 2 e 8 ºC são estáveis até a data de expiração
impressa no rótulo. Após abertos desde que não sejam expostos a contaminações química ou
microbiana, os reagentes são estáveis até a data de expiração indicada ( devem ser armazenados
bem vedados em temperatura entre 2 e 8ºC). Reagente 1 e Reagente 2 quando mantidos em
bandeja refrigerada no equipamento são estáveis por 5 semanas. Este período pode ser
modificado em função das características e condições do equipamento. O controle de qualidade
deve ser utilizado para monitorar o desempenho desses reagentes.

Precauções e Cuidados Especiais

1- Aplicar os cuidados habituais de segurança na manipulação dos reagentes e amostra
biológica.
2- Recomendamos o uso das Boas Práticas de Laboratórios Clínicos para a execução do teste.
3- De acordo com as instruções de biossegurança, todas as amostras devem ser manuseadas
como materiais potencialmente infectantes.
4- O Calibrador (3) por ser derivado do sangue humano foi testado para anticorpos anti-HCV e
anti-HIV e antígeno HbsAG e apresentou resultado negativo. No entanto, deve ser tratado
com precaução, como potencialmente infectante. Manusear e descartar segundo as normas
de biossegurança.
5- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resoluções normativas locais,
estaduais e federais de preservação do meio ambiente.

EQUIPAMENTOS
Procedimento Técnico Manual
● Espectrofotômetro (560-600 nm);
● Banho – Maria ou termostatizador na temperatura constante de 37°C;
● Tubos e Pipetas;
● Cronômetro.

Procedimento Técnico Automatizado

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Citar nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referência ao manual ou
POP para utilização do mesmo.

Procedimento Técnico Alternativo

Citar o equipamento alternativo e os procedimentos para medição dos ensaios. Indicar as
possíveis diferenças quando os procedimentos manuais substituírem os procedimentos
automatizados.

Procedimento em Analisadores Automáticos

Mencionar o manual ou POP para utilização do equipamento analítico. Anexar o guia de
aplicação dos reagentes para o sistema automático.

Influências Pré-Analíticas
Os valores de Colesterol HDL de uma mesma pessoa e em ocasiões diferentes podem variar
consideravelmente devido a variações biológicas e também a variações do método analítico.
As concentrações de colesterol HDL podem também variar em função de dieta, prática de
exercícios, variação do peso corporal, ação de hormônios, uso de álcool, fumo.

Interferências
O ácido ascórbico até 0,20%, hemoglobina até 500 mg/dL, a bilirrubina até 30 mg/dL,
triglicérides até 1640 mg/dL e o colesterol VLDL até 540 mg/dL não interferem na metodologia.

PROCEDIMENTO
A - Condições de Reação
Comprimento de onda principal: 578 nm
Tipo de Reação: Ponto final

Preparo do Calibrador:
Reconstituir o conteúdo do frasco de Calibrador (3) com exatamente 4,0 mL de água recém
destilada ou deionizada.
Fechar o frasco e deixar em repouso por 10 minutos.
Homogeneizar por inversão suave, evitando a formação de espuma.
Estável por 7 dias entre 2 a 8 ºC e por 30 dias a 20 ºC negativos.
Sugerimos aliquotar em volumes pequenos e frascos adequados.
Após congelar, homogeneizar bem antes de usar.

B-Técnica de Análise (Procedimento Manual)

Reagentes Branco Calibrador Teste

Reagente 1 750 μL 750 μL 750 μL
Amostra ou ⎯ 10 μL 10 μL
Calibrador

Homogeneizar e incubar os tubos à 37 ºC em banho-maria por 5 minutos.

Adicionar nos tubos de ensaio:
Reagente 2 250 μL 250 μL 250 μL
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Homogeneizar e após 5 minutos, fazer as leituras fotométricas do Calibrador e Teste em 578

nm, zerando o aparelho o Tubo Branco.

CÁLCULOS
CC = Concentração do Calibrador (Ver valor de HDL no rótulo do frasco).
CT = concentração do Teste
AC = Absorbância do Calibrador
AT = Absorbância do Teste
Como a metodologia obedece a lei de Lambert- Beer, calcular a concentração do teste através do
Fator de Calibração (FC).
FC= CC/ AC
CT= FC x AT
Exemplo:

CC = 50 mg/L
AC= 0,088
AT=0,094
FC = CC/ AC= 50/0,088=568
CT= FC x AT= 568 x 0,094= 53 mg/dL

RESULTADOS
Conversão de unidades (mg/dL para SI)
mmol/L de Colesterol HDL = mg/dL de Colesterol HDL × 0,026

CONTROLE DA QUALIDADE

Materiais
Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e número
de catálogo.
Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados.
Controle Interno
Descrever a calibração periódica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura
ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits.
Citar a utilização de soros controles (nível normal –código --------- e patológico –código -------)
nas análises realizadas juntamente com a freqüência da utilização dos mesmos. Descrever o
procedimento de verificação de novos lotes de controles e reagentes.
Citar POP para controle interno.
Controle Externo
Descrever os procedimentos utilizados nas avaliações de qualidade feitas por programas de
comparação entre laboratórios ou outros controles de qualidade : PNCQ-SBAC e/ou PELM-
SBPC
Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo
Definir como os dados de controle são arquivados e gerenciados.
Fazer referência ao manual ou POP de garantia da qualidade.

VALORES DESEJÁVEIS DO PERFIL LIPÍDICO

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Tabela I. Valores de referência do perfil lipídico e valor de alvo terapêutico segundo o risco
cardiovascular para adultos >20 anos.
Tabela II. Valores de referência do perfil lipídico para crianças e adolescentes

Tabela I - Adultos
Lípides Com Sem Categoria
jejum jejum Referencial
(mg/dL) (mg/ dL)
Colesterol < 190 < 190 Desejável
Total*
HDL- C > 40 > 40 Desejável

Categoria de
Risco
< 130 < 130 Baixo
< 100 < 100 Intermediário
LDL-C
< 70 < 70 Alto
< 50 < 50 Muito Alto
< 160 < 160 Baixo
< 130 < 130 Intermediário
Não HDL-C
< 100 < 100 Alto
< 80 < 80 Muito Alto
CT* >310 mg/dL há probabilidade de hipercolesterolemia familiar (HF).

Tabela II - Crianças e adolescentes

Lípides Com jejum Sem jejum
(mg/dL) (mg/ dL)
Colesterol Total* < 170 < 170
HDL- C > 45 > 45
LDL-C < 110 < 110
Não HDL-C < 120 < 120
CT* >230 mg/dL há probabilidade de hipercolesterolemia familiar (HF).

SIGNIFICADO CLÍNICO
As lipoproteínas de alta densidade (HDL = High Density Lipoproteins) exercem uma ação
importante na concentração do colesterol nos tecidos. Atuam ainda na retorno do colesterol dos
tecidos periféricos para o fígado.
A taxa de Colesterol HDL mantém uma relação inversa com o fator de risco de DAC (Doença
Arterial Coronariana), isto é, quanto maior o seu teor na circulação menor o risco de DAC.
Deste modo, o colesterol HDL exerce um efeito protetor contra a aterosclerose.
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A prevalência da enfermidade coronariana é muito maior em indivíduos com níveis reduzidos de

HDL do que em indivíduos com teores elevados.
Ao contrário, a taxa de Colesterol LDL está diretamente relacionada com o fator de risco de
DAC, isto é, quanto maior o seu teor na circulação maior é a probabilidade do indivíduo
desenvolver essa doença.
O colesterol, a hipertensão arterial, o fumo e a intolerância à glicose são quatro grandes fatores
para o desenvolvimento da DAC.
Exercícios físicos podem aumentar o Colesterol HDL, assim como algumas drogas: lovastatina,
ácido nicotínico, ciclofenil, cimetidina, etanol, estrogênios, terbutalina.
Valores baixos de Colesterol HDL são encontrados em indivíduos obesos, de vida sedentária,
fumantes, diabéticos, na colestase, hepatopatia, arterioclerose, coronariopatia, etc.

LINEARIDADE
A reação é linear entre 1,00 e 150 mg/dL. Para concentrações superiores a 150 mg/dL, diluir a
amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar nova determinação e multiplicar o resultado
obtido pelo fator de diluição.

LIMITAÇÕES DO MÉTODO
Os resultados deverão ser usados em conjunto com informações disponíveis da avaliação clínica
e outros procedimentos diagnósticos.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Bachorik PS, Ross JW. Clin Chem 1995;41:1414-20.
2. Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol Education Program
(NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in
Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA 2001;285:2486-97.
3. Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca FAH, Dias JCA.
Risco cardiovascular: fatores metabólicos e nutricionais: diagnóstico e tratamento. São Paulo:
Loyola, 1994. p.56.
4. GOLD ANALISA: Informe Técnico do Produto.

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Dra. Andressa Almeida Franco
Farmacêutica Generalista – CRF 551143
Responsável técnica e proprietária

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