Universidade de Brasília

Instituto de Ciências Biológicas

Programa de Pós-Graduação em Ecologia

Alelopatia em Lepidaploa aurea (Asteraceae) como Ferramenta de

Restauração Ecológica: Potencial para o Controle de Gramíneas

Exóticas Invasoras no Cerrado

Polliana Gomes Lopes

Brasília, DF

Março de 2016
 Universidade de Brasília

Instituto de Ciências Biológicas

Programa de Pós-Graduação em Ecologia

Alelopatia em Lepidaploa aurea (Asteraceae) como Ferramenta de

Restauração Ecológica: Potencial para o Controle de Gramíneas

Exóticas Invasoras no Cerrado

Polliana Gomes Lopes

Orientadora Dra. Isabel Belloni Schmidt

Dissertação submetida ao Departamento de

Ecologia do Instituto de Ciências Biológicas
da Universidade de Brasília, como requisito
parcial do Programa de Pós-Graduação em
Ecologia, para obtenção do título de Mestre
em Ecologia.

Brasília, DF

2016
 UNIVERSIDADE DE BRASÍLIA
INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ECOLOGIA

Dissertação de Mestrado

POLLIANA GOMES LOPES

Alelopatia em Lepidaploa aurea (Asteraceae) como Ferramenta de Restauração

Ecológica: Potencial para o Controle de Gramíneas Exóticas Invasoras no Cerrado

Banca Examinadora:

_______________________________________________

Profa. Dra. Isabel Belloni Schmidt

Presidente/PPGECL UnB

_______________________________________________

Prof. Dr. Daniel Luis Macias Vieira

Membro titular/PPGECL UnB

_______________________________________________

Prof. Dr. Fabian Borghetti

Membro titular/PPG-BOT UnB

_________________________________________________

Dr. Rafael D. Zenni

Membro Suplente/ PPGECL UnB

 I

Dedicatória
______________________________________________________________________

Dedico este trabalho à memória da minha avó Dionária Marinho Lima, que sinto tanta

saudade. Ela adoraria me ver trabalhando com plantas.

“O amor por todas as coisas vivas, é o mais

nobre atributo de um homem.”

Charles Darwin
 II

Agradecimentos

______________________________________________________________________

Agradeço primeiramente a Deus, que me deu a graça de passar na seleção deste

Mestrado e a força necessária para prosseguir até o fim.

À minha orientadora Isabel Schmidt, por me mostrar um novo mundo (o da Ecologia

Vegetal), pela amizade, pelos ensinamentos e pelo comprometimento com a orientação

deste projeto.

À Professora Sarah C. Caldas de Oliveira, pelo apoio, participação e constante

contribuição neste trabalho. Pela disponibilização do espaço, materiais e equipamentos

do Laboratório de Alelopatia do Departamento de Botânica.

À minha amiga Karina Alacid Salles que esteve comigo em todos os momentos, em

todas as análises e em todos os perrengues e descobertas deste estudo ao longo destes

dois anos. Sem sua ajuda eu não teria conseguido.

Ao Alexandre Sampaio do ICMBio, pela ajuda na concepção e na execução deste

trabalho. Pelas dicas nos trabalhos de campo e auxílio na escolha das áreas do

experimento.

Ao prof. Daniel Vieira pelas discussões e contribuições que facilitaram o

desenvolvimento deste trabalho.

Ao prof. Fabian Borghetti, pela disponibilização do espaço na casa de vegetação do

laboratório de Termobiologia do Departamento de Botânica.

 III

Aos amigos e colegas do grupo Restaura Cerrado, que me auxiliaram nos testes

laboratoriais e nos de campo: Andressa, Camila, Monique, Maxmiller, Keiko, Fabiana,

Alessandro, Ana Beatriz, Allyne, Karen, Guilherme, Ana Carla, Ana Clara, Maria Paula

Antônia, Patrícia, Leonardo e Augusto.

Aos Srs. Manoel, Daniel, Francisco e Antônio do laboratório de Termobiologia, por

regarem e cuidarem das minhas plantas nos momentos em que estive ausente.

Ao Aelton Giroldo, pela elaboração dos gráficos.

Ao Instituto Natureza do Tocantins (NATURATINS) pelo afastamento para estudo em

outra unidade da federação, que proporcionou o apoio financeiro para a realização deste

Mestrado.

Ao CNPq pela bolsa concedida no início do Mestrado.

Aos meus pais, pela educação que me fez chegar onde estou e pelo eterno amor e

carinho que me fortalecem em todos os momentos da vida.

Ao meu amor, marido e companheiro de vida, pelo constante apoio, entusiasmo e por

estar todos os dias ao meu lado, comemorando minhas vitórias e me levantando nos

momentos difíceis.

E aos membros da banca examinadora que aceitaram o convite de avaliar o trabalho.

 IV

Resumo

Gramíneas africanas são responsáveis por uma série de problemas ecológicos por se
tornarem invasoras em muitas partes do mundo, afetando especialmente áreas
campestres e savânicas, como no caso do Cerrado. A restauração ecológica por meio de
semeadura direta tem se mostrado uma prática eficaz no controle destas gramíneas
exóticas invasoras em algumas áreas deste bioma brasileiro. A espécie Lepidaploa
aurea (Mart. ex DC.) H. Rob. (Asteraceae) demonstra bom desempenho em projetos de
restauração ecológica no Cerrado e aparentemente inibe o crescimento das gramíneas
exóticas invasoras Andropogon gayanus e Urochloa decumbens, sem, no entanto, afetar
o desenvolvimento de algumas espécies nativas arbóreas, o que indica uma possível
atividade alelopática. O objetivo deste trabalho foi identificar o potencial alelopático de
L. aurea sobre as gramíneas exóticas invasoras A. gayanus e U. decumbens, sobre a
gramínea nativa: Loudetiopsis chrysothrix, e sobre as arbóreas nativas: Copaifera
langsdorffii e Acacia polyphylla, em condições controladas, semi-naturais e naturais.
Foram feitos experimentos: (i) em laboratório, com o uso de extratos aquosos de folhas
e raizes de L. aurea em placas de Petri, em solo natural (sem esterilização) e esterilizado
(para avaliação do efeito da microbiota), e em vermiculita; (ii) em casa de vegetação,
com uso de carvão ativado e utilização de solo onde L. aurea foi previamente cultivada
e de serrapilheira de L. aurea e (iii) em campo, com uso de carvão ativado e avaliação
da germinação e do crescimento inicial das plantas-alvo cultivadas dentro e fora de
manchas de L. aurea (áreas dominadas pela espécie). Foi constatado o potencial
alelopático de L. aurea sobre todas as espécies-alvo (espécies-modelo, exóticas e
nativas) em laboratório. Em casa de vegetação, o contato com os aleloquímicos de L.
aurea reduziu o crescimento inicial da gramínea exótica U. decumbens e aumentou o
crescimento inicial das espécies nativas C. langsdorffii e L. chrysothrix. Em campo, os
efeitos alelopáticos foram observados somente no estímulo à germinação de sementes
de C. langsdorffii. A alelopatia em L. aurea pode ser útil em projetos de restauração
ecológica por auxiliar no controle da U. decumbens e por estimular o melhor
desenvolvimento de outras espécies nativas.

Palavras-chave: espécies-alvo, serrapilheira, aleloquímicos, crescimento inicial.

 V

Abstract

African grasses are responsible for a number of ecological problems for being invasive
in several parts of the world, affecting especially open ecosystems such as grasslands
and woodlands as it is the case in the Brazilian savanna, the Cerrado. In these areas,
ecological restoration through direct sowing has been shown to be an effective practice
in the control of exotic species in some areas of this Brazilian biome. The specie
Lepidaploa aurea (Mart. Ex DC.) H. Rob. (Asteraceae) shows good performance in
ecological restoration projects in the Cerrado and apparently inhibits the growth of the
exotic grasses Andropogon gayanus and Urochloa decumbens, without, however,
affecting the development of certain native species tree, indicating a possible
allelopathic activity. The aim of this work was to identify the allelopathic potential of L.
aurea on the exotic grasses A. gayanus and U. decumbens, on the native grass
Loudetiopsis chrysothrix and on the natives tree Copaifera langsdorffii e Acacia
polyphylla under controlled conditions, semi-natural and natural. Experiments were
made: (i) in laboratory conditions with the use of water extracts of L. aurea (1.25, 2.5, 5
and 10% concentration) in Petri dishes, in sterilized soil (for evaluation of the effect of
microbial) and natural (no sterilization) and vermiculite; (ii) in a greenhouse, with
activated carbon and utilization of soil where L. aurea was previously grown and L.
aurea’s litter and (iii) in the field, with use of activated charcoal and evaluation of
germination and early growth the target plants in and out of patches dominated by L.
aurea. We found allelopathic effects of L. aurea on all target species (model species,
exotic and native) in the laboratory conditions. In the greenhouse, the contact with the
allelochemicals of L. aurea reduced the initial growth of exotic species U. decumbens
and increased the initial growth of native species C. langsdorffii and L. chrysothrix. In
the field, the allelopathic effects were observed only in increasing the germination of the
native tree C. langsdorffii. Allelopathy in L. aurea can be useful in ecological
restoration projects for assisting in the control of U. decumbens and encourage better
development of other native species.

Keywords: target-species, litter, allelochemicals, early growth

 VI

Sumário

Introdução Geral ....................................................................................................... 1

Contextualização .......................................................................................................... 1

Restauração Ecológica de Áreas Invadidas por Gramíneas Exóticas ......................... 4

Alelopatia ...................................................................................................................... 7

Lepidaploa aurea (Mart. ex DC.) H.Rob. (Asteraceae) ............................................. 13

Hipóteses ..................................................................................................................... 15
Capítulo 1 ................................................................................................................... 16
Resumo .................................................................................................................... 16

Abstract ................................................................................................................... 17

Introdução................................................................................................................ 18

Material e métodos .................................................................................................. 21

Resultados ............................................................................................................... 26

Discussão................................................................................................................. 35

Capítulo 2 ................................................................................................................... 41
Resumo .................................................................................................................... 41

Abstract ................................................................................................................... 42
 VII

Introdução................................................................................................................ 43

Material e Métodos.................................................................................................. 48

Resultados ............................................................................................................... 59

Discussão................................................................................................................. 66

Discussão Geral ........................................................................................................ 77

Referências Bibliográficas .................................................................................... 80

 VIII

Lista de figuras da Introdução Geral

Figura 1. (A) Indivíduo de Lepidaploa aurea em campo e (B) Área de plantio de

restauração ecológica por meio de semeadura direta dominada pela espécie Lepidaploa
aurea, na Reserva Biológica (Rebio) da Contagem, DF.

Figura 2- (A) Camada de serrapilheira em manchas de Lepidaploa aurea (áreas

dominadas pela planta) em área de plantio de restauração ecológica e (B) Zona sem
cobertura vegetal, especialmente de gramíneas exóticas invasoras, no entorno de
manchas de Lepidaploa aurea, onde há a ocorrência de espécies nativas, em áreas de
restauração ecológica.

Lista de figuras e tabelas do Capítulo 1

Figura 1- Plântulas de Lactuca sativa em solo natural com extrato vegetal de

Lepidaploa aurea (10 repetições/ concentração de extrato) em laboratório. Todas as
plantas-alvo cultivadas em solo natural e esterilizado seguiram o mesmo padrão.

Figura 2- Porcentagem da germinação das espécies-modelo cultivadas em placas de

Petri em laboratório pelo período de 5 a 7 dias (dependendo da espécie): (A) com
extrato de folha de Lepidaploa aurea e (B) com extrato de raiz de Lepidaploa aurea. As
barras representam o valor médio de germinação de cada espécie-alvo em cada
tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras indicam as diferenças entre os
tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais
sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Figura 3- Porcentagem da germinação das espécies-modelo cultivadas em laboratório

pelo período de 8 a 12 dias (dependendo da espécie): (A) em solo natural com extrato de
folha de Lepidaploa aurea e (B) em solo autoclavado com extrato de folha de
Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de germinação de cada espécie-
alvo em cada tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras indicam as
diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie
separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Figura 4- Porcentagem de germinação das espécies-modelo cultivadas em laboratório:

(A) em solo natural com extrato de raiz de Lepidaploa aurea e (B) em solo autoclavado
com extrato de raiz de Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de
germinação de cada espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de extrato).
Diferentes letras indicam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas
para cada espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam
resultados iguais.

Figura 5- Comprimentos das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo cultivadas

em placas de Petri em laboratório pelo período de 5 a 7 dias (dependendo da espécie):
(A) com extrato de folha de Lepidaploa aurea e (B) com extrato de raiz de Lepidaploa
aurea. As barras representam o valor médio de comprimento de cada espécie-alvo em
cada tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras indicam as diferenças entre
os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais
sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.
 IX

Figura 6- Comprimentos das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo cultivadas

em laboratório pelo período de 8 a 12 dias (dependendo da espécie): (A) em solo natural
com extrato de folha de Lepidaploa aurea e (B) em solo autoclavado com extrato de
folha de Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de comprimento de
cada espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras
indicam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie
separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Figura 7- Comprimentos das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo cultivadas

em laboratório pelo período de 8 a 12 dias (dependendo da espécie): (A) em solo natural
com extrato de raiz de Lepidaploa aurea e (B) em solo autoclavado com extrato de raiz
de Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de comprimento de cada
espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras indicam
as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie
separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Figura 8- Sorghum bicolor cultivado em solo natural tratado com extrato de folha de
Lepidaploa aurea nas concentrações de 10,00%, 5,00%, 2,50%, 1,25% e 0% (controle),
respectivamente da esquerda para a direita.

Tabela 1- Tabela de osmolaridade em mmol/kg e MPa para várias concentrações de

extrato foliar de L. aurea, obtidas em laboratório com o uso do aparelho osmômetro de
pressão de vapor osmometer Winscon® 5.520.

Tabela 2- Resultados das ANOVA para a avaliação da ação da microbiota sobre os

efeitos dos extratos de folha e de raiz de Lepidaploa aurea na germinação das espécies-
modelo em laboratório. As colunas Solo e Extrato indicam o tipo de solo e o tipo de
extrato nos quais foram observadas diferenças significativas entre os valores de
germinação das espécies-alvo. Foram realizadas ANOVA de dois fatores: Solo (natural
ou autoclavado) e Tratamento (concentrações dos extratos).
Tabela 3- Resultados das ANOVA para a avaliação da ação da microbiota sobre os
efeitos do extrato de folha de Lepidaploa aurea no comprimento das partes aéreas e
radiculares das espécies-modelo em laboratório. A coluna Solo indica o tipo de solo no
qual foram observadas diferenças significativas nos valores de comprimento das
espécies-alvo. A coluna Parte Afetada indica a parte da planta (se aérea ou radicular)
que apresentou diferenças significativas no comprimento conforme o tipo de solo.
Foram realizadas ANOVA de dois fatores: Solo (natural ou autoclavado) e Tratamento
(concentração de extrato).

Tabela 4- Resultados das ANOVA para a avaliação da ação da microbiota sobre os

efeitos do extrato de raiz de Lepidaploa aurea no comprimento das partes aéreas e
radiculares das espécies-modelo em laboratório. A coluna Solo indica o tipo de solo no
qual foram observadas diferenças significativas nos valores de comprimento das
espécies-alvo. A coluna Parte Afetada indica a parte da planta (se aérea ou radicular)
que apresentou diferenças significativas no comprimento conforme o tipo de solo.
Foram realizadas ANOVA de dois fatores: Solo (natural ou autoclavado) e Tratamento
(concentração de extrato).
 X

Lista de Figuras do Capítulo 2

Figura 1- Indivíduo de Lepidaploa aurea em área de campo na Rebio da Contagem

(DF).

Figura 2- (A) Sementeira de 36 células com vermiculita no interior de bandeja plástica

utilizada nos bioensaios laboratoriais e (B) Sementeira com plântulas de Urochloa
decumbens cultivadas em vermiculita com extrato foliar de Lepidaploa aurea
(tratamento controle - 0% de extrato) em laboratório.

Figura 3- (A) Vasos com Lepidaploa aurea (6 indivíduos por vaso) em casa de
vegetação após seis meses do plantio e (B) Sementeira com 30 sementes (pré-
germinadas) de Copaifera langsdorffii dispostas em solo no qual L. aurea foi
previamente cultivada em casa de vegetação (tratamento sem carvão ativado).

Figura 4- Croqui do experimento em campo. Disposição das parcelas em uma mancha

de Lepidaploa aurea (áreas dominadas pela espécie). As cinco espécies-alvo:
Andropogon gayanus, Urochloa decumbens, Loudetiopsis chrysothrix, Copaifera
langsdorffii e Acacia polyphylla, foram plantadas em duas condições (com e sem carvão
ativado no solo) em parcelas de 20 x 20 cm localizadas dentro de áreas dominadas por
L. aurea (no círculo) e fora de áreas dominadas por esta espécie potencialmente
alelopática, a no mínimo 3 metros de distância de um indivíduo de L. aurea. Também
foram demarcadas parcelas de controle de espontâneas dentro e fora das manchas de
Lepidaploa aurea, para evitar erros na contagem de indivíduos, caso ocorresse o
surgimento espontâneo de espécies que não foram plantadas.

Figura 5- Urochloa decumbens após cultivo em vermiculita em laboratório: (A) com

extrato de folha de Lepidaploa aurea na concentração 0% (controle), (B) com extrato de
folha de L. aurea na concentração 10%.

Figura 6- Urochloa decumbens cultivada em laboratório em vermiculita com extrato de

raiz de L. aurea nas concentrações de 0% (controle), 1,25%, 2,50%, 5,00% e 10,00%,
respectivamente da esquerda para a direita.

Figura 7- Comprimento das espécies-alvo cultivadas em vermiculita em laboratório

pelo período de 13 dias para as gramíneas e de 18 dias para as espécies arbóreas: (A)
com extrato de folha de Lepidaploa aurea e (B) com extrato de raiz de Lepidaploa
aurea. As barras representam as médias dos comprimentos das espécies-alvo para cada
tratamento (concentrações dos extratos). Diferentes letras representam as diferenças
entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente e letras
iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Figura 8: Comprimento das espécies-alvo cultivadas pelo período de 13 dias para as

gramíneas e de 18 dias para as espécies arbóreas, em solo no qual Lepidaploa aurea
cresceu durante 9 meses em casa de vegetação, com e sem carvão ativado. As barras
representam a média do comprimento das espécies-alvo para cada tratamento (com e
sem carvão ativado). Os asteriscos representam diferenças significativas entre os
tratamentos.
 XI

Figura 9- (A) Comprimento das espécies-alvo cultivadas por 76 dias em solo coberto
com folhas secas de Lepidaploa aurea em casa de vegetação e (B) Biomassa seca das
espécies-alvo cultivadas por 76 dias em solo coberto com folhas secas de L. aurea em
casa de vegetação. As barras representam a média nos valores de comprimento e
biomassa seca das espécies-alvo em cada tratamento (serrapilheira e controles com e
sem sombreamento). Diferentes letras representam as diferenças entre os tratamentos.
As análises foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes
espécies não indicam resultados iguais.

Figura 10- Percentual de germinação das espécies-alvo cultivadas em campo por 6

meses, dentro e fora de manchas de Lepidaploa aurea (áreas dominadas pela espécie)
em parcelas com e sem carvão ativado. As barras representam as médias dos percentuais
de germinação das espécies-alvo em cada tratamento (dentro - com carvão, dentro - sem
carvão, fora - com carvão, fora - sem carvão). Diferentes letras representam as
diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie
separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Figura 11- (A) Comprimento das espécies-alvo cultivadas em campo por 6 meses,
dentro e fora de manchas de Lepidaploa aurea, em parcelas com e sem carvão ativado.
(B) Biomassa seca das espécies-alvo cultivadas em campo por 6 meses, dentro e fora de
manchas de L. aurea, em parcelas com e sem carvão ativado. As barras representam as
médias dos valores de comprimento e de biomassa seca das espécies-alvo em cada
tratamento (dentro - com carvão, dentro - sem carvão, fora - com carvão, fora - sem
carvão). Diferentes letras representam as diferenças entre os tratamentos. As análises
foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies
não indicam resultados iguais.

Figura 12- (A) Urochloa decumbens após plantio em solo no qual Lepidaploa aurea foi
previamente cultivada em casa de vegetação (tratamento com carvão ativado) e (B)
Urochloa decumbens após plantio em solo no qual Lepidaploa aurea foi previamente
cultivada em casa de vegetação (tratamento sem carvão ativado).
 1

Introdução Geral

Contextualização

Em experimentos de restauração ecológica realizados em áreas invadidas por

gramíneas exóticas em Unidades de Conservação do Distrito Federal (DF) e de Goiás

(GO), Brasil, nos quais foi utilizada a técnica de semeadura direta em área total, com o

plantio de espécies nativas do Cerrado de diversas formas de vida (arbóreas, arbustivas,

herbáceas e gramíneas), foi observado que a espécie arbustiva Lepidaploa aurea (fig.1)

apresenta bom desempenho no estabelecimento e na cobertura de solo (Sampaio et al.

2015) (fig.1). Nas áreas de plantio, especificamente no entorno de locais onde existem

adensamentos de indivíduos de L. aurea, é possível verificar a existência de uma

camada relativamente espessa de serrapilheira durante todo o ano (fig.2), onde foi

observada uma significativa redução na ocorrência de outras plantas, especialmente

gramíneas e herbáceas, entre elas, as espécies de gramíneas exóticas invasoras

Andropogon gayanus e Urochloa decumbens, no entanto, nestas mesmas áreas, algumas

espécies nativas aparentemente crescem normalmente, já que é comum a ocorrência

especialmente de plântulas de espécies arbóreas também utilizadas nos plantios (fig.2),

como por exemplo, Copaifera langsdorffii e Acacia polyphylla, o que sugere possíveis

mecanismos de controle específico de espécies de gramíneas e herbáceas, notadamente

de gramíneas exóticas invasoras.

 2

A B
Figura 1- (A) Indivíduo de Lepidaploa aurea em campo e (B) Área de plantio de restauração ecológica
por meio de semeadura direta dominada pela espécie Lepidaploa aurea, na Reserva Biológica (Rebio) da
Contagem, DF (Foto: Keiko Pellizzaro).

A B
Figura 2- (A) Camada de serrapilheira em manchas de Lepidaploa aurea (áreas dominadas pela planta)
em área de plantio de restauração ecológica e (B) Zona sem cobertura vegetal, especialmente de
gramíneas exóticas invasoras, no entorno de manchas de Lepidaploa aurea, onde há a ocorrência de
espécies nativas, em áreas de restauração ecológica (Foto: Keiko Pellizzaro).

Os padrões de distribuição de espécies ao longo do tempo são influenciados

pelos modelos de sucessão ecológica existentes (Johnson 1977). Em áreas de estágios

iniciais de sucessão secundária, como é o caso dos locais de plantios recentes realizados

por meio de semeadura direta visando a restauração ecológica de áreas perturbadas, é

comum observar o modelo denominado inibição, no qual os colonizadores iniciais

regulam a sucessão de modo a não permitir a invasão e o crescimento de outras espécies

(Cheung et al. 2009, Miranda 2009). No caso específico das áreas de plantios de

restauração, os colonizadores iniciais são as espécies pioneiras nativas plantadas, como

é o caso da L. aurea nos experimentos realizados no Distrito Federal (DF) e em Goiás

(GO).
 3

Nas comunidades vegetais, as plantas podem interagir de maneira positiva ou

negativa. Acredita-se que o mais comum seja que plantas vizinhas interajam de forma

negativa, de modo que a emergência e/ou o crescimento de uma ou de ambas sejam

inibidos (Pires e Oliveira 2011). Muller (1969) denominou como interferência as

interações que se desencadeiam entre organismos vizinhos.

A interferência pode englobar vários mecanismos, que foram divididos por

Szczepanski (1977) em três tipos gerais: (i) alelospolia ou competição – é a

interferência causada pelos organismos que provoca a redução de um ou mais fatores de

crescimento ou recursos, e prejudica o desenvolvimento normal de outros organismos

na comunidade; (ii) alelomediação ou interferência indireta – é a alteração do ambiente

físico ou biológico provocada por alguns organismos, com reflexo nos seres vizinhos; e

(iii) alelopatia – interferência provocada por substâncias químicas produzidas por certos

organismos que após liberadas no ambiente, afetam os outros componentes da

comunidade.

Os três tipos de interferência em geral ocorrem concomitantemente em

condições naturais, o que torna a identificação da causa de padrões específicos de

distribuição de espécies, como zonas de inibição de crescimento, uma tarefa muito

difícil. Separar os efeitos inerentes à cada tipo de interferência tem se mostrado um

desafio no mundo todo (Inderjit & Nilsen 2003, Lankau 2010, Nilsson 1994).

Esta dissertação está centrada em experimentos em três diferentes escalas

(laboratório, casa de vegetação e campo) com o objetivo de identificar e compreender

possíveis mecanismos de interferência em L. aurea, especificamente padrões de

alelopatia.
 4

Restauração Ecológica de Áreas Invadidas por Gramíneas Exóticas

Espécies exóticas invasoras são espécies introduzidas acidental ou

intencionalmente em um novo ambiente, que conseguem se estabelecer e se propagar a

grandes distâncias, causando prejuízos ecológicos (Richardson et al. 2000). Quando

estas espécies invasoras são plantas, elas podem excluir competitivamente plantas

nativas, impedir os processos de sucessão ecológica e alterar o funcionamento dos

ecossistemas (Lockwood et al. 2007, Sampaio & Schmidt 2013, Williams & Baruch

2000).

As Gramíneas (Poaceae) estão entre as famílias botânicas com maior número de

espécies consideradas invasoras (Pivello 2011, Zenni 2014 e 2015). Em ambientes de

savana, que se caracterizam pela coexistência de gramíneas, arbustos e árvores, a

presença de gramíneas como invasoras em áreas perturbadas é um desafio para a

conservação. Algumas espécies de gramíneas possuem atributos que aumentam suas

chances de se tornarem invasoras bem sucedidas, entre os principais estão o rápido

desenvolvimento, a geração de um grande número de descendentes, a capacidade de

interferir no crescimento de plantas ao redor, a facilidade de adaptação às condições

diversas e a facilidade de dispersão (D’Antonio & Vitousek 1992, Kolar & Lodge,

2001).

Com a expansão agrícola e pecuária, as gramíneas africanas chegaram ao

Cerrado brasileiro, local que possui clima semelhante ao das savanas africanas, o que

favoreceu o rápido estabelecimento e domínio destas espécies. Desde a sua chegada,

com os plantios para formação de pastagens, as gramíneas africanas vêm substituindo

extensas áreas de vegetação nativa do Cerrado (Pivello 2011), o que tem provocado uma
 5

série de consequências negativas para a conservação da biodiversidade deste bioma. Um

dos motivos é o fato das gramíneas exóticas serem capazes de alterar significativamente

o regime de fogo, aumentando as chances de incêndios que favorecem sua própria

manutenção no ambiente, gerando uma retroalimentação positiva (D’Antonio &

Vitousek 1992). Além disso, as gramíneas exóticas invasoras impedem a regeneração

natural nas áreas invadidas e expandem sua área de dominância em direção a áreas

ocupadas por vegetação nativa (Coutinho 1982, Freitas 1999).

A existência de áreas de Cerrado dominadas por gramíneas exóticas invasoras há

várias décadas demonstra que a área e a intensidade da invasão só aumentam com o

tempo, impedindo o restabelecimento de espécies nativas. Este quadro só pode ser

revertido caso sejam desenvolvidas ações diretas de restauração da área afetada

(Horowitz et al. 2013, Martins et al. 2011).

Restauração ecológica é a prática que busca a recuperação da integridade

ecológica dos ecossistemas através do resgate do ambiente degradado a um estado mais

próximo possível do original, incluindo um nível mínimo de biodiversidade e

variabilidade dos processos ecológicos (Society for Ecological Restoration International

2006). Geralmente, a restauração de áreas dominadas por espécies exóticas invasoras é

realizada através da remoção das espécies exóticas e a reintrodução das espécies nativas

que foram perdidas por alterações da comunidade (Morin 1999). No entanto, esse

processo tem se mostrado um desafio em áreas de Cerrado, pois as gramíneas exóticas

invasoras, na maioria das vezes, são competitivamente superiores às espécies nativas,

afetando, por exemplo, a germinação e o recrutamento das espécies nativas plantadas,

através da limitação da luminosidade na superfície do solo. (Sampaio et al. 2015).

 6

As características de rápido crescimento, estabelecimento e reprodução que são

comuns a algumas espécies exóticas invasoras, também são observadas em algumas

espécies nativas, especialmente gramíneas e herbáceas consideradas ruderais, como a L.

aurea. No entanto, espécies nativas ruderais geralmente possuem vida curta e algumas

vezes funcionam como espécies pioneiras, iniciando o processo de sucessão ecológica e

servindo como facilitadoras do surgimento das espécies intermediárias (Meiners et al.

2012, Miranda 2009).

Para que a prática de restauração ecológica seja de fato eficaz, um dos requisitos

importantes é a seleção das espécies que serão utilizadas nos plantios, neste sentido, a

identificação de suas características fisiológicas e ecológicas torna-se fundamental; por

exemplo, a determinação das taxas de crescimento, das relações competitivas por

recursos do meio, e das potencialidades alelopáticas das plantas é essencial para melhor

compreender como as espécies interagem em condições de campo, conhecimentos estes

que podem se tornar ferramentas importantes no desenvolvimento de resistência ao

domínio das espécies exóticas invasoras. (Cummings et al. 2012).

Idealmente, em projetos de restauração ecológica devem ser selecionadas

espécies nativas que não só se estabeleçam e cresçam rapidamente, mas que também

tenham a capacidade de inibir o desenvolvimento das espécies exóticas concorrentes

(Wishnie et al. 2007). Neste sentido, a alelopatia pode ser um mecanismo fundamental

pelo qual algumas espécies nativas poderiam reduzir a abundância e o impacto de

espécies exóticas invasoras. Portanto, o potencial alelopático de espécies nativas deve

ser avaliado juntamente com as taxas de crescimento e outras características funcionais

para a seleção de espécies que possam auxiliar processos de restauração ecológica e

regeneração natural (Cummings et al. 2012). De fato, existem evidências de que plantas
 7

nativas com potencial alelopático podem contribuir em processos de restauração

ecológica. Algumas leguminosas arbóreas podem ser utilizadas no controle de espécies

invasoras, como a Cassia uniflora Mill., que apresentou resultados promissores no

controle da espécie invasora Parthenium hysterophorus L. (Asteraceae) na Índia

(Srikanth & Pushpalatha 1991).

A prática de restauração ecológica de áreas dominadas por espécies exóticas

invasoras é muitas vezes malsucedida ou mesmo inviabilizada por que algumas técnicas

utilizadas são muito onerosas, além de apresentarem uma série de complicações

práticas. Portanto, a capacidade das próprias espécies nativas plantadas reduzirem o

desenvolvimento das espécies exóticas invasoras, pode ser uma ferramenta de auxílio à

viabilização e o êxito dos projetos de restauração (Cummings 2012, Hooper et al. 2002,

Jones et al. 2004; Wishnie et al. 2007).

Alelopatia

A alelopatia é um processo que compreende a liberação por um dado organismo,

de substâncias químicas no ambiente, as quais interagem com organismos vizinhos,

inibindo ou estimulando o seu crescimento ou desenvolvimento (Ferreira 2004, Rice

1984). Os compostos químicos liberados pelos organismos no ambiente, que afetam os

outros componentes da comunidade são denominados aleloquímicos (Pires & Oliveira

2011, Whittaker 1970).

Os aleloquímicos podem atuar de forma direta sobre outras plantas, sendo

absorvidos e agindo sem modificações, ou indiretamente, sofrendo transformações pela

microbiota do solo ou alterando propriedades físicas e químicas do solo no qual a

planta-alvo está localizada (Cheng 1999, Ferreira 2004, Inderjit 2001, Inderjit &

Dakshini 1999). As substâncias alelopáticas liberadas pelas plantas doadoras por

 8

lixiviação, volatilização ou degradação do material orgânico podem ser absorvidas pelas

plantas receptoras pela epiderme foliar ou pela raiz (Souza Filho & Alves 2002b).

Geralmente estudos de alelopatia são iniciados com a identificação da

fitotoxicidade da planta de interesse em bioensaios laboratoriais, os quais são realizados

em ambiente controlado, como placas de Petri em câmaras de germinação, com extratos

das plantas doadoras (Wu et al. 2001). Nestes bioensaios, frequentemente são utilizadas

plantas denominadas plantas-alvo, as quais são testadas nos estágios iniciais de

desenvolvimento (Blum 1999, Fenner 2000), isso por que a fase entre a germinação e a

formação das primeiras folhas, estágio chamado de plântula, é o mais sensível à ação de

aleloquímicos (Adkins et al. 2007, Fenner 2000)

Alguns autores concordam que os bioensaios em laboratório são ferramentas

fundamentais para o estudo prévio do potencial alelopático de plantas (Reigosa et al.

2013, Blum 2011), no entanto, como demonstram apenas evidências de fitotoxicidade,

muitas vezes não é considerado adequado se fazer extrapolação dos resultados

encontrados em laboratório para condições de campo (Inderjit & Callaway 2003,

Inderjit & Weston 2000, Lankau 2009).

As condições ambientais em que as plantas são encontradas em campo, como

temperatura, umidade e intensidade de luz, em interação com a biota do solo e a

disponibilidade de recursos, podem afetar não apenas a produção de aleloquímicos, mas

também a estrutura química, o grau de atividade de substâncias liberadas no meio e a

sua disponibilidade para as plantas vizinhas (Hadacek 2002, Macías et al. 2007, Reigosa

et al. 2013). Pouco se sabe sobre os mecanismos exatos que influenciam as interações

planta-planta em condições naturais (Inderjit & Callaway 2003, Lankau 2009) e pode

ser difícil caracterizar a alelopatia e seu verdadeiro impacto, a menos que fatores

relacionados à planta, ao solo e aos microorganismos sejam levados em consideração

 9

(White et al. 1989). De fato, para entender como compostos químicos se tornam

alelopáticos, ou seja, como interferem no desenvolvimento de outras plantas, tornam-se

necessárias investigações mais aprofundadas, que tenham a finalidade de compreender

como os aleloquímicos são produzidos pela planta doadora, qual a concentração e

persistência destes compostos no meio ambiente, e qual é o seu envolvimento com a

inibição ou estímulo da planta-alvo em campo (Inderjit & Callaway 2003, Inderjit &

Nilsen 2003, Inderjit & Weston 2000, Reigosa et al. 2013,).

Entre os diversos fatores que interferem na avaliação do potencial alelopático de

plantas em condições naturais, as características relacionadas ao solo têm grande

importância, já que o solo é o substrato em que parte significativa das interações

alelopáticas entre plantas ocorre (Andrade et al. 2013, Lankau 2010). Em condições

naturais os efeitos de aleloquímicos presentes no solo podem ser alterados (Ferreira &

Áquila 2000), uma vez que estes compostos podem ser retidos, transformados pela biota

e/ou transportados para outros locais através da percolação promovida pela chuva (Chen

1992).

No intuito de avaliar o potencial alelopático de forma mais próxima às condições

naturais, alguns autores recorrem à realização de experimentos em condições semi-

naturais, que comumente são executados em casas de vegetação, com o plantio de

espécies-alvo em vasos preenchidos com solo no qual a planta doadora se desenvolveu

em campo ou de solo onde a planta doadora foi previamente cultivada em condições

semi-naturais, ou mesmo com a utilização de solo coberto com a serrapilheira da

espécie-doadora, previamente coletada em campo (Calaway & Aschehoug 2000,

Cummings et al. 2012). Ainda assim, uma das melhores maneiras de aumentar a

garantia dos testes de alelopatia refletirem a condição natural é executar bioensaios in

situ. No entanto, um dos principais entraves à execução e interpretação de trabalhos de

 10

alelopatia em campo, é conseguir separar a ação dos aleloquímicos das diversas

interferências ambientais (Ferreira 2004, Inderjit & Nilsen 2003, Nilsson 1994, Reigosa

et al. 2013, Romeo & Weidenhamer 1996). Outro problema é compreender o

sinergismo inerente aos efeitos alelopáticos, uma vez que os aleloquímicos são sempre

liberados em combinação com outras substâncias, como íons inorgânicos, hidratos de

carbono e aminoácidos (Tang et al. 1995). Blum et al. (1993) sugeriram que os efeitos

alelopáticos podem ser resultado da interação de compostos liberados pela planta,

alguns que estimulam o crescimento de outras plantas, outros que o inibem e

substâncias neutras, como por exemplo, uma mistura de nitrato, compostos fenólicos e

glicose, respectivamente.

Um possível mecanismo de atenuação da alelopatia in situ é a adição de carvão

ativado ao solo (Inderjit & Calaway 2003). O carvão ativado é um adsorvente eficiente

de compostos bioquímicos, possuindo a capacidade de se ligar aos constituintes

orgânicos solúveis em água (alguns dos quais são aleloquímicos), impedindo assim sua

solubilização e disponibilidade para as plantas-alvo (Barney et al. 2009, Callaway &

Aschehoug 2003, Inderjet & Calaway 2003, Jarchow & Cook 2009, Kabouw et al.

2010, Nolan et al. 2014). Portanto, se as espécies-alvo dos bioensaios apresentam

melhor desempenho na presença do carvão ativado, é provável que no solo onde elas

foram cultivadas existam aleloquímicos que foram adsorvidos pelo carvão, os quais,

promoveram a maior inibição da planta na ausência do carvão ativado. (Inderjit &

Nilsen 2003).

Apesar de o carvão ativado ser um adsorvente de espectro amplo, não há

garantias de que ele adsorva todos os produtos químicos com atividades alelopáticas, o

que pode causar interpretações errôneas dos experimentos em que não se observa efeitos
 11

alelopáticos. Adicionalmente, o carvão ativado pode mudar outras características do

substrato, como pH ou retenção de água (Nolan et al. 2014).

Uma maneira de reduzir estes problemas e facilitar as interpretações dos

resultados de testes de alelopatia em campo com a utilização de carvão ativado, é a

realização de bioensaios com espécies-alvo plantadas com e sem carvão ativado em

áreas afetadas e não afetadas pela espécie doadora (alelopática). Se a inibição do

desenvolvimento das plantas-alvo é reduzida pelo carvão ativado apenas em regiões

afetadas pela espécie doadora, então a alelopatia é um provável mecanismo de inibição.

No entanto, se as espécies-alvo se desenvolvem melhor na presença de carvão ativado

em ambas as regiões afetadas e não afetadas pela espécie doadora, a alelopatia não é um

mecanismo provável da inibição observada (Inderjit & Nilsen, 2003).

A alelopatia também pode ser considerada uma importante característica

funcional das espécies vegetais e pode facilitar a compreensão da dinâmica da

comunidade (Wardle et al. 1998, Westoby & Whigth 2006). Apesar de grande parte dos

estudos de alelopatia serem iniciados com base em observações de campo, poucos

desses estudos consideram a atividade alelopática no contexto da comunidade, já que o

mais comum é a realização de testes com espécies-alvo isoladas (Meiners et al. 2014).

Portanto, a escolha das espécies-alvo deve ser feita de forma a refletir as interações que

acontecem em campo, para que os resultados evidenciem de fato o padrão existente em

condições naturais.

Para que a alelopatia seja avaliada de forma mais completa num contexto

ecológico, os grupos funcionais das plantas da área de estudo também devem ser

levados em consideração (Meiners et al. 2014, Wardle et al. 1998, Westoby & Wrigth

2006). Chon & Nelson (2010) discutem que existe um forte componente taxonômico
 12

para a atividade alelopática e que as espécies da família Asteraceae, em geral,

apresentam alto potencial alelopático.

Alguns autores concordam que a alelopatia pode ser considerada um potencial

mecanismo de sucessão ecológica (Hils & Vankat 1982, Kaligaric et al. 2011, Myster &

Pickett 1992), o que foi evidenciado por Meiners et al. (2014) ao demonstrar que a

alelopatia em plantas de diferentes formas de vida segue os padrões de dominância

comuns aos vários estágios de sucessão, evidenciando que plantas de vida curta, em

geral, apresentam maior potencial alelopático do que plantas de vida longa. A

alelopatia, nestes casos, provavelmente permite às plantas de vida curta proteção

química e maior acesso aos recursos do meio.

A alelopatia já vem sendo estudada no contexto de invasões biológicas a algum

tempo. Nestes trabalhos, os autores discutem que o potencial alelopático depende, entre

outras coisas, da experiência evolutiva da espécie-alvo, o que fornece uma possível

explicação para o motivo das espécies exóticas invasoras apresentarem tanto sucesso no

estabelecimento de novas áreas (Barbosa et al. 2008, Callaway & Aschehoug 2000,

Callaway & Ridenour 2004, Del Fabbro et al. 2014). As espécies exóticas, em geral,

não compartilham um histórico evolutivo com as espécies nativas do local, e por esse

motivo as plantas nativas não possuem defesas contra os aleloquímicos das novas

plantas concorrentes (Barbosa et al. 2008, Callaway & Aschehoug 2000, Callaway &

Ridenour 2004). Mesmo com as evidências de que a experiência evolutiva das espécies-

alvo tem influência na atividade alelopática de plantas, é importante considerar que a

alelopatia, antes de mais nada, é uma característica comum tanto às espécies exóticas,

quanto às nativas, e como tal, deve ser entendida como um mecanismo geral de

dominância de plantas na comunidade, ao invés de ser considerada uma característica

única ou mais prevalente em um dos dois tipos de espécies: exóticas e nativas (Meiners
 13

et al. 2014). Sendo assim, estudos para compreender as diferenças dos efeitos

alelopáticos em espécies exóticas e nativas devem considerar não apenas o aspecto

coevolutivo das espécies, mas tembém as características funcionais tanto das plantas

doadoras como das plantas-alvo.

Lepidaploa aurea (Mart. ex DC.) H.Rob. (Asteraceae)

A espécie Lepidaploa aurea pertence à família Asteraceae, que compreende

aproximadamente 23.000 espécies em 1.535 gêneros e 17 tribos (Judd et al. 2009).

Estima-se que cerca da metade das espécies de Asteraceae ocorram no Novo Mundo,

com 2.013 espécies na flora brasileira, onde são particularmente abundantes nos

ecossistemas de Cerrado, campo rupestre, campo de altitude e restinga (Zappi et al.

2015).

A tribo Vernonieae Cass., com 98 gêneros e cerca de 1.400 espécies, sob o ponto

de vista taxonômico, tem sido considerada um dos grupos mais complexos de

Asteraceae. Numa série de estudos sobre Vernonieae, Robinson (1987a, 1988a, b, 1990,

1996, 1999) alterou, substancialmente, a circunscrição tradicional de Vernonia,

fragmentando-o em diversos novos gêneros. Neste grupo, as folhas são em geral

alternas, com venação pinada, capítulos discóides, homógamos e ramos do estilete

longos, subulados, com pilosidade se estendendo abaixo do ponto de bifurcação

(Bremer 1994).

Originalmente, Cassini (1817 apud King & Dawson 1975) nomeou Lepidaploa

como um subgênero de Vernonia, no entanto, após muitas discussões taxonômicas ao

longo de quase 60 anos, Robinson (1990) manteve Lepidaploa no status genérico com

base em uma série de características de hábito, indumento, inflorescência, entre outras.

 14

As espécies do gênero Lepidaploa geralmente possuem porte herbáceo-arbustivo

e ocorrem preferencialmente em locais abertos, com alta luminosidade. Além disso, sua

propagação em ambientes alterados é favorecida pela produção de um grande número

de sementes, e por altas taxas de germinação e de estabelecimento (Farias et al. 2002).

Algumas destas espécies possuem um tempo médio de germinação rápido – menos de

cinco dias em mais de 70% das sementes a 20 ou 25ºC (Ferreira et al. 2001) e em

alguns casos, são consideradas ervas daninhas associadas a pastagens e culturas por

serem capazes de se estabelecer nestes ambientes. Algumas plantas do gênero possuem

a capacidade de colonizar áreas perturbadas, apresentando atributos comuns às espécies

ruderais (Lima-Ribeiro & Prado 2007, Lorenzi 2000).

A espécie Lepidaploa aurea é popularmente conhecida como amargoso e possui

uma altura média de 1,3 m (fig 1). É nativa do Brasil e ocorre no bioma Cerrado,

especialmente nas vegetações de campo rupestre e Cerrado (lato sensu) (Dematteis &

Almeida, 2015). A fenologia da espécie não é bem documentada, no entanto, nas áreas

de plantio por semeadura direta no Distrito Federal e em Goiás, a L. aurea floresce entre

os meses de abril e maio, com frutificação entre maio e outubro (Observação pessoal).

Com base nas observações de campo, em adição às várias características

funcionais de bom desempenho da L. aurea em condições naturais, a identificação do

potencial alelopático desta espécie torna-se mais um importante atributo a ser estudado,

com vistas a confirmar a espécie como uma boa alternativa para uso em projetos de

restauração ecológica no Cerrado.

Esta dissertação tem o objetivo central de avaliar o potencial alelopático de L.

aurea sobre o crescimento inicial das gramíneas exóticas invasoras: Andropogon

 15

gayanus e Urochloa decumbens e das espécies nativas: Loudetiopsis chrysothrix,

Acacia polyphylla e Copaifera langsdorffii, em condições laboratoriais e em condições

semi-naturais (em casa de vegetação). Especificamente, pretende-se: (i) avaliar

possíveis efeitos fitotóxicos de L. aurea sobre a germinação e crescimento inicial de

espécies-modelo em condições laboratoriais, (ii) identificar os principais grupos de

compostos químicos em extratos vegetais de L. aurea e (iii) avaliar possíveis efeitos

alelopáticos de L. aurea sobre a germinação e crescimento inicial das mesmas espécies-

alvo exóticas invasoras e nativas testadas em laboratório e casa de vegetação, sob

condições de campo.

Hipóteses

A partir das observações de campo em áreas de plantio de restauração ecológica,

foram levantadas as hipóteses a serem testadas neste trabalho: (i) A L. aurea possui

potencial alelopático com efeitos inibitórios sobre o desenvolvimento das gramíneas

exóticas invasoras: Andropogon gayanus e Urochloa decumbens; (ii) O potencial

alelopático de L. aurea apresenta menores efeitos inibitórios sobre as espécies nativas

arbóreas: Acacia polyphylla e Copaifera langsdorffii e sobre a gramínea nativa

Loudetiopsis chrysothrix.
 16

Capítulo 1

Lepidaploa aurea (Asteraceae) – Fitotoxicidade e Influência da

Microbiota do Solo em Condições Controladas

Lopes, P. G; Salles, K, A; Schmidt, I. B; Oliveira, S. C. C; Sampaio, A. B

Resumo

Alelopatia é o efeito de compostos químicos (aleloquímicos) liberados no ambiente por

um organismo sobre o crescimento e/ou desenvolvimento de organismos vizinhos. A
partir de observações de campo em áreas de plantio de restauração ecológica, verificou-
se que Lepidaploa aurea (Asteraceae) pode provocar efeitos alelopáticos, especialmente
sobre as espécies de gramíneas exóticas Andropogon gayanus e Urochloa decumbens.
Este trabalho objetiva (a) identificar o potencial fitotóxico de L. aurea sobre espécies-
modelo e (b) testar a influência da microbiota do solo sobre estes efeitos fitotóxicos.
Foram realizados bioensaios com extratos de folhas e raizes de L. aurea em dois tipos
de substrato: papel-filtro em placas de Petri e solo esterilizado (para testar a influência
da microbiota) e natural (não esterilizado). Cada bioensaio teve tratamentos com quatro
concentrações de extratos aquosos de L. aurea (10,00%, 5,00%, 2,50% e 1,25%) e um
tratamento controle (com água destilada). Foram plantadas sementes das espécies-
modelo: Lactuca sativa (alface), Raphanus sativus (rabanete), Solanum lycopersicum
(tomate) e Sorghum bicolor (sorgo) e foram quantificados a germinação e o crescimento
inicial aéreo e radicular de cada indivíduo. Em testes de detecção com Cloreto de Ferro,
Anisaldeído e Dragendorff foram identificados fenóis, taninos e alcalóides nos extratos
de L. aurea. Ambos os extratos causaram redução na germinação e especialmente no
crescimento radicular das espécies-modelo, no entanto, os extratos foliares L. aurea
tiveram mais influência sobre as espécies-alvo do que os extratos de raizes. A
microbiota do solo alterou os efeitos inibitórios de ambos os extratos. A fitotoxicidade
em L. aurea pode auxiliar em processos de manejo e conservação de áreas naturais e em
projetos de restauração ecológica.

Palavras-chave: crescimento inicial, espécies-modelo, alelopatia, aleloquímicos.

 17

Lepidaploa aurea (Asteraceae) - Phytotoxicity and Soil Microbiota

Influence of Controlled Conditions

Lopes, P. G; Salles, K, A; Schmidt, I. B; Oliveira, S. C. C; Sampaio, A. B

Abstract

Allelopathy is the effect of chemicals released into the environment by an organism on

the growth and/or development of neighboring organisms. The released compounds are
known as allelochemicals. Field observations in ecological restoration planting areas
indicated potential allelopathic effects of Lepidaploa aurea (Asteraceae), especially on
exotic grasses Andropogon gayanus e Urochloa decumbens, which are a strong barrier
to ecological restoration in the Brazilian savanna (Cerrado). This study aims to (a)
identify the phytotoxic potential of L. aurea on the model-species and (b) test the
influence of soil microbes on such phytotoxic effects. Experiments were performed with
leafs and roots extracts of L. aurea in two substrate types: paper filter in Petri dishes and
sterilized and natural soil (to test the influence of microbiota). For each species and
substrate, we used four concentrations of L. aurea water extracts (10%, 5%, 2.5% and
1.25%) and a control (distilled water). The model-species seeds were planted: Lactuca
sativa (lettuce), Raphanus sativus (radish), Solanum lycopersicum (tomato) and
Sorghum bicolor (sorghum) and were quantified germination and initial shoot and root
growth of each individual. In screening tests with Iron Chloride, Anisaldehyde and
Dragendorff we identified phenols, tannins and alkaloids in L. aurea extracts. Both
extracts cause reduction in germination and root growth especially in the model-species,
however, leaf extracts L. aurea had more influence on the target species than the roots
extracts. The soil microbiota altered the inhibitory effects of both extracts. Phytotoxicity
in L. aurea can assist in management processes and conservation of natural areas and
ecological restoration projects.

Key words: early growth, model-species, allelopathy, allelochemicals.

 18

Introdução

A presença de gramíneas exóticas plantadas em áreas de Cerrado para a

formação de pastagens é uma das principais causas de desequilíbrios ecológicos neste

bioma. Algumas dessas espécies de gramíneas são invasoras agressivas e acabam

modificando a paisagem do Cerrado, com a substituição progressiva de suas áreas de

vegetação nativa (Pivello 2011). A implementação de projetos de restauração ecológica

é uma das maneiras de tentar controlar as invasões por gramíneas exóticas e promover o

restabelecimento vegetal nas áreas invadidas. (Horowitz et al. 2013, Martins et al.

2011).

Em plantios de restauração ecológica realizados em Unidades de Conservação

do Distrito Federal (DF) e de Goiás (GO), Brasil, foi observado que a planta arbustiva

nativa Lepidaploa aurea (Mart. ex DC.) H. Rob. (Asteraceae) com frequência apresenta

a ocorrência de zonas de inibição de crescimento de outras plantas em seu entorno, entre

as quais, as gramíneas exóticas invasoras Urochloa decumbens e Andropogon gayanus.

Nestas zonas, no entanto, é comum a presença de outras espécies nativas, mais

especificamente de plântulas de espécies arbóreas também usadas nos plantios de

restauração (Sampaio et al. 2015). Este padrão pode indicar mecanismos específicos de

controle de gramíneas exóticas invasoras, entre eles uma possível atividade alelopática.

A alelopatia pode ser definida como a interferência positiva ou negativa que

compostos do metabolismo secundário produzidos por uma planta exercem sobre outros

organismos (plantas, fungos, insetos e algas) (Ferreira 2004, Lovett & Ryuntyu 1992).

Os compostos secundários com atividade alelopática (aleloquímicos) podem estar

 19

presentes em todas as partes das plantas, como folhas, raizes, frutos, cascas e sementes.

No entanto, sua distribuição na planta não é uniforme (Alves et al. 2002).

Atualmente, são conhecidos cerca de 10.000 produtos secundários de plantas

com ação alelopática, e estes são considerados apenas uma pequena parte da quantidade

possivelmente existente na natureza (Almeida 1991). Alguns dos maiores grupos de

compostos químicos com comprovada atividade alelopática são os terpenos, taninos,

alcalóides, flavonóides, quinonas e fenilpropanóides, dentre eles as cumarinas e ácidos

fenólicos (Chou 2006).

Estudos de alelopatia com espécies nativas em todo o mundo têm tido um

aumento expressivo nas últimas duas décadas. Novaes et al. (2013) discutem que no

Cerrado 71 espécies tiveram os estudos de alelopatia realizados, representando 0,6% das

12.000 espécies vasculares do bioma.

Frequentemente a investigação do potencial alelopático de plantas é iniciada em

laboratório, com a identificação e o isolamento dos aleloquímicos da planta de interesse,

e a avaliação das variações na germinação e no crescimento inicial de plantas-alvo após

contato com extratos vegetais da planta doadora (Reigosa et al. 2013, Souza Filho et al.

2010). Nestes testes, em grande parte das vezes, as espécies-alvo são espécies-modelo

como o tomate e o rabanete, por se tratarem de espécies cujas sementes são facilmente

encontradas e bastante sensíveis a vários aleloquímicos (Ferreira & Aquila 2000,

Pennacchio et al. 2005). Alguns autores defendem que este tipo de teste não identifica o

potencial alelopático da planta doadora, mas sim o seu potencial fitotóxico (Allem et al.

2014, Reigosa et al. 2013). O termo alelopatia só deve ser utilizado quando são

empregadas metodologias nas quais são atendidos alguns requisitos mínimos de

similaridade com as condições naturais, como por exemplo: o uso de extratos aquosos, o
 20

uso de espécies-alvo que coexistam com a espécie doadora em campo e o uso de

substratos mais próximos do encontrado em condições naturais (Blum 2011, Reigosa et

al. 2013). No entanto, os bioensaios para identificação da fitotoxicidade da planta

doadora são importantes como passo inicial em estudos de alelopatia, já que fornecem

os indícios necessários para a continuidade do processo de investigação (Allem et al.

2014).

Em estudos de avaliação da atividade fitotóxica envolvendo o uso de extratos

vegetais, cuidados especiais devem ser dispensados para o fator potencial osmótico dos

extratos, isso porque a alelopatia e o potencial osmótico apresentam efeitos aditivos, o

que leva, em muitos casos, a superestimar os efeitos alelopáticos (Souza Filho et al.

2009). Ferreira & Aquila (2000) afirmam que um potencial osmótico elevado pode

refletir na germinação das sementes atrasando a velocidade de germinação, por

exemplo.

Após a comprovação da fitotoxicidade da planta de interesse, caso se planeje

prosseguir com o estudo para avaliação do seu potencial alelopático em condições mais

próximas à natural, torna-se importante a realização de testes em laboratório com a

utilização de solo como substrato, os quais tenham a finalidade de avaliar a ação da

microbiota sobre os efeitos dos extratos aquosos da planta doadora. Estes bioensaios,

mesmo em carácter preliminar, podem ser usados para posteriores comparações com

resultados de testes futuros realizados com a planta doadora em condições semi-naturais

e/ou naturais. Ademais, esse tipo de metodologia fornece maior embasamento para a

compreensão do papel do solo e de sua microbiota nos efeitos fitotóxicos (Aires et al.

2005, Andrade et al. 2013).

Microorganismos existentes no solo, mesmo em condições controladas, podem

influenciar a alelopatia de várias maneiras, seja potencializando os efeitos dos

 21

aleloquímicos através de sua transformação em subprodutos tóxicos ou reduzindo estes

efeitos através da quebra dos compostos em formas menos tóxicas. Os microorganismos

podem ainda consumir os aleloquímicos parcial ou completamente (Andrade et al.

2013, Inderjit 2005, Inderjit & Weston 2000, Lankau 2009). A comparação dos efeitos

de solo esterilizado e natural (não esterilizado) na atividade fitotóxica da planta doadora

é uma forma eficaz e muito utilizada para quantificar os efeitos da microbiota do solo na

bioatividade e estabilidade de substâncias presentes em extratos de plantas e de separar

os efeitos biológicos da ação física do solo (Aires et al. 2005, Kaur et al. 2009,).

Com base nas observações de campo em plantios de restauração ecológica no

DF e em GO, os objetivos deste trabalho foram: (i) identificar o potencial fitotóxico da

Lepidaploa aurea sobre a germinação de sementes e crescimento inicial de quatro

espécies-modelo: Lactuca sativa (alface), Raphanus sativus (rabanete), Solanum

lycopersicum (tomate) e Sorghum bicolor (sorgo) e (ii) testar a influência da microbiota

do solo nestes efeitos fitotóxicos, em condições controladas.

As hipóteses de trabalho são: (i) a Lepidaploa aurea possui efeitos fitotóxicos

sobre outras espécies de plantas e (b) a microbiota presente no solo influencia os efeitos

fitotóxicos observados.

Material e métodos

Espécies estudadas

A espécie doadora Lepidaploa aurea Mart. ex DC. (Asteraceae) é um arbusto

nativo do Cerrado muito ramificado de altura média de 1,3 metro, que possui caule com

pêlos acinzentados e folhas simples, alternas, de pecíolo curtíssimo e com tricomas nas

duas superfícies. É encontrada especialmente em áreas de Cerrado do Brasil central

(Farias et al. 2002).

 22

Como espécies-alvo foram selecionadas quatro espécies-modelo, entre as quais,

três são dicotiledôneas: tomate (Solanum lycopersicum, Solanaceae), rabanete

(Raphanus sativus, Brassicaceae) e alface (Lactuca sativa, Asteraceae), todas

comumente utilizadas em testes laboratoriais de fitotoxicidade (Ferreira e Aquila 2000);

e uma monocotiledônea: o sorgo (Sorghum bicolor, Poaceae), que foi escolhida por ser

uma espécie muito utilizada como potencial alternativa para estudos alelopáticos

preliminares, pois suas sementes são pequenas, de fácil obtenção no mercado, além de

apresentarem germinação e crescimento inicial rápido e uniforme (Andrade et al. 2013).

Todas as espécies-modelo foram obtidas comercialmente.

Material Vegetal

Folhas e raizes de L. aurea foram coletadas em áreas de Cerrado no Distrito

Federal, Brasil, para produção de extratos. No momento da coleta do material vegetal,

foi observado que os indivíduos de L. aurea apresentam o sistema radicular

relativamente pequeno em condições naturais. No entanto, além dos extratos de folhas

de L. aurea, também foi decidido utilizar os extratos de raizes da planta nos bioensaios

de fitotoxicidade, com base em metodologias recorrentes em trabalhos semelhantes

(Dorning & Cippolini 2005, Gatti et al. 2010, Moosavi et al. 2011, Wandscheer &

Pastorini 2008) e com vistas à posteriores comparações com resultados de estudos

futuros com a L. aurea em condições semi-naturais e naturais.

Para obtenção dos extratos, o material vegetal foi separado, eliminado o excesso

de solo (no caso das raizes) e secado em estufa a 60°C por 48 horas (Costa & Pasin,

2015). Depois de seco o material foi triturado em Moinho de Rotor Tipo Ciclone. O pó

resultante foi diluído em água destilada na proporção de 10 g de pó para cada 100 mL

de água destilada e submetido a banho de ultrasson em Lavadora Ultra-Sônica Digital

 23

por 25 minutos. Em seguida, a solução foi coada com o auxílio de um funil de

porcelana, papel filtro de gramatura 80 g/m² e uma bomba de vácuo. O resultado foi um

extrato a 10% que foi sendo diluído em água destilada para alcançar as concentrações de

5,00%, 2,50% e 1,25%. O tratamento controle foi feito com água destilada.

A escolha de extratos aquosos para os testes foi selecionada pelo fato de que eles

se aproximam mais do que acontece na natureza, já que uma das formas naturais de

liberação dos aleloquímicos é através da dissolução pela água da chuva e do orvalho

(França et al. 2008).

Testes de detecção de compostos secundários e medição de osmolaridade

Foram realizados testes de detecção para alguns dos principais grupos de

aleloquímicos usando os extratos de folha e de raiz de L. aurea a 10%, segundo os

protocolos apresentados por Wagner e Bladt (2001) e Atale et al. (2011) com os

regentes: (i) Cloreto de Ferro, para detecção de compostos fenólicos e taninos, (ii)

Anisaldeído (AS) – ácido sulfúrico, para detecção de terpenos e saponinas e (iii)

Dragendorff, para a detecção de alcalóides e compostos heterocíclicos de Nitrogênio.

Foi avaliada a influência do efeito osmótico do extrato foliar de L. aurea. Para

isso, primeiramente foi verificada a concentração do extrato por dois procedimentos. O

primeiro para averiguar a quantidade de material solúvel em água presente nas

diferentes concentrações (10,00; 5,00; 2,50 e 1,25%) do extrato foliar, e para isso, 10

mL de cada concentração de extrato foram congelados e em seguida liofilizados,

posteriormente foi medida a massa de cada uma das amostras e calculado o valor em

ppm para cada uma delas. O segundo procedimento foi medir a osmolaridade dos

extratos. Para isso, os extratos de L. aurea nas diferentes concentrações estudadas nos

bioensaios: (1,00; 5,00; 2,50 e 1,25%) tiveram sua osmolaridade medida utilizando um
 24

osmômetro de pressão de vapor osmometer Winscon® 5.520. Todas as análises foram

feitas em triplicatas.

Bioensaios em placas de Petri

Placas de Petri de 9 cm de diâmetro foram forradas com papel-filtro (gramatura

80g/m²) umedecido com os extratos nas concentrações de 10,00; 5,00; 2,50 e 1,25% e

água destilada (controle). Para cada concentração de extrato foram semeadas 40

sementes de cada espécie-alvo, (4 repetições x 10 sementes por placa), perfazendo um

total de 200 sementes por espécie. A partir daí, seguiu-se a incubação das placas por

120 horas em câmara de germinação a 25°C com fotoperíodo de 12 horas. O mesmo

bioensaio foi utilizado para avaliação da germinação e do crescimento inicial das

espécies-alvo. Para o acompanhamento da germinação foi feito o monitoramento das

placas a cada 24 horas e após um período 7 dias para L. sativa, R. sativus e S.

lycopersicum e de 5 dias para S. bicolor, foi feita a avaliação do crescimento inicial das

espécies-alvo, através da medição das suas partes aéreas e radiculares, com a utilização

de um paquímetro digital.

Bioensaios em solo

Foi utilizado como substrato o latossolo vermelho-amarelo peneirado e

homogeneizado, esterilizado e natural (sem esterilização). Para a esterilização do solo,

foi realizada autoclavagem em três ciclos de 30 minutos a 120°C. Solo esterilizado e

natural foram distribuídos em recipientes perfurados no fundo com capacidade de 40g

de substrato, os recipientes foram dispostos em caixas plásticas gerbox. Em cada

recipiente foi adicionado uma única vez o volume de extrato nas concentrações de

10,00; 5,00; 2,50 e 1,25% correspondente a 100% da capacidade de campo do solo

 25

(previamente determinada), e para o controle foi adicionada a mesma quantidade de

água destilada. Nos dois tipos de solo foram semeadas 20 sementes de cada espécie-alvo

em cada concentração de extrato (10 repetições x 2 sementes por recipiente), perfazendo

um total de 100 sementes/espécie (fig 1). Os experimentos foram mantidos em câmara

de crescimento a 25°C e fotoperíodo de 12 horas. Foi mantida a capacidade de campo

de 100% do solo nos recipientes com regas diárias, as quais foram realizadas colocando-

se a água no fundo das caixas de gerbox, assim o solo era irrigado de baixo para cima,

evitando a perda excessiva dos extratos por lixiviação.

Após o período de 12 dias de crescimento para L. sativa, R. sativus e S.

lycopersicum e de 8 dias para S. bicolor, os bioensaios foram desmontados e foram

consideradas germinadas todas as sementes cujas radículas apresentaram crescimento

superior a 2mm. Para avaliar o crescimento inicial, foram medidos, com paquímetro

digital, os comprimentos das partes aéreas e radiculares de cada planta-alvo.

Figura 1- Plântulas de Lactuca sativa em solo natural com extrato vegetal de Lepidaploa aurea (10
repetições/ concentração de extrato) em laboratório. Todas as plantas-alvo cultivadas em solo natural e
esterilizado seguiram o mesmo padrão.

Análises Estatísticas

Os resultados dos testes em placas de Petri foram avaliados por meio de Análises

de Variância (ANOVA) considerando os tratamentos (concentração dos extratos) para

 26

cada espécie e os resultados dos testes em solo foram avaliados através do uso de

ANOVA de dois fatores: concentração dos extratos e tipo de solo (esterilizado e natural)

para cada espécie. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de

significância. Os valores de porcentagem de germinação foram transformados em valor

angular (arcoseno √%) (Snedecor & Cochran 1978). As análises foram realizadas no

Programa R, versão 3.2.1 (R Development Core Team 2015).

Resultados

Testes de detecção de compostos e de osmolaridade

As amostras dos extratos de folhas e de raizes de L. aurea reagiram ao Cloreto

de Ferro e ao Dragendorff indicando a presença de fenóis, taninos e alcalóides. Não

houve reação ao Anisaldeído, indicando a ausência de terpenos nos extratos testados.

O valor em ppm dos extratos foliares de L. aurea nas concentrações utilizadas

nos bioensaios (10,00; 5,00; 2,50 e 1,25%) podem ser vistos na tabela 1. Depois de

testada a osmolaridade dos extratos foliares de L. aurea nas várias concentrações,

observou-se que o extrato apresentou um valor médio de 86,3 mmol/kg (-0,23 Mpa)

para a concentração máxima testada. Esse valor foi comparado com resultados obtidos

em testes de osmolaridade feitos anteriormente com a espécie-alvo Sesamum indicum

(gergelim), que apresentou a germinação inibida por extratos vegetais somente a partir

da osmolaridade de 100 mmol/kg, o que indica que os efeitos dos extratos vegetais de L.

aurea, mesmo na concentração mais alta utilizada (10%), não são de natureza osmótica.

Resultados de testes de osmolaridade feitos com as espécies-alvo Triticum aestivum

(trigo) e Raphanus sativus (rabanete) em extrato de folhas de Drimys brasiliensis,

mostrou que não houve inibição da germinação das espécies-alvo em osmolatidade de -

0,25 Mpa (Anese et al. 2015).

 27

Tabela 1- Tabela de osmolaridade em mmol/kg e MPa para várias concentrações de extrato foliar de L.
aurea. Os resultados foram obtidos em laboratório com o uso do aparelho osmômetro de pressão de vapor
osmometer Winscon® 5.520.

Extrato foliar em (%) Valores em ppm Osmolaridade em mmol/kg Osmolaridade em MPa

1,25 2.205 28 -0,07

2,5 4.533 36 -0,09

5 8.227 52 -0,14

10 15.844 86,3 -0,23

Germinação

Nos bioensaios em placa de Petri o extrato de folha de L. aurea exerceu maior

influência sobre a germinação das espécies-modelo do que o extrato de raiz, reduzindo

significativamente a germinação de três das quatro espécies-alvo testadas. Somente S.

bicolor não teve sua germinação afetada pelo extrato foliar. Já o extrato de raiz de L.

aurea influenciou significativamente a germinação de duas espécies apenas: L. sativa e

S. lycopercicum (F4, 15= 8,2, p=0,001, N= 40; F4, 15= 11,8, p=0,0001, N= 40;

respectivamente) (fig. 2).

Nos experimentos realizados em solo, o extrato foliar de L. aurea somente

reduziu significativamente a germinação de L. sativa em solo natural na concentração

de 5% (F4, 45= 3,04; p=0,0267; N= 10) e de R. sativus em solo autoclavado na

concentração de 10% (F4, 45= 17,6; p<0,0001; N= 10) (fig. 3). Por sua vez, o extrato de

raiz não afetou a germinação de nenhuma espécie-modelo em nenhuma das

concentrações em solo autoclavado ou natural (fig. 4).

 28

Figura 2- Porcentagem da germinação das espécies-modelo cultivadas em placas de Petri em laboratório

pelo período de 5 a 7 dias (dependendo da espécie): (A) com extrato de folha de Lepidaploa aurea e (B)
com extrato de raiz de Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de germinação de cada
espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras indicam as diferenças entre
os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes
espécies não indicam resultados iguais.

Figura 3- Porcentagem da germinação das espécies-modelo cultivadas em laboratório pelo período de 8 a

12 dias (dependendo da espécie): (A) em solo natural com extrato de folha de Lepidaploa aurea e (B) em
solo autoclavado com extrato de folha de Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de
germinação de cada espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras
indicam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente e
letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.
 29

Figura 4- Porcentagem de germinação das espécies-modelo cultivadas em laboratório: (A) em solo

natural com extrato de raiz de Lepidaploa aurea e (B) em solo autoclavado com extrato de raiz de
Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de germinação de cada espécie-alvo em cada
tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras indicam as diferenças entre os tratamentos. As
análises foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não
indicam resultados iguais.

Crescimento inicial

Em placas de Petri, o extrato foliar de L. aurea também teve maior influência

sobre o crescimento inicial das espécies-alvo do que o extrato de raiz, pois afetou

significativamente o crescimento tanto da radícula como da parte aérea de todas as

espécies-alvo testadas. Em geral observou-se um padrão de redução do crescimento

dose-dependente, ou seja, redução do crescimento conforme o aumento da concentração

do extrato foliar. Houve reduções nos comprimentos das radículas em todas as

concentrações do extrato foliar (fig. 5). O extrato de raiz de L. aurea influenciou

significativamente o crescimento das partes aéreas e radiculares de duas espécies: L.

 30

sativa e R. sativus e afetou apenas o crescimento radicular de S. bicolor (F4, 178= 13,9;

p<0,0001; N=40) e de S. lycopersicum (F4, 152= 5,7; p< 0,0001; N=40) (fig. 5).

Figura 5- Comprimentos das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo cultivadas em placas de
Petri em laboratório pelo período de 5 a 7 dias (dependendo da espécie): (A) com extrato de folha de
Lepidaploa aurea e (B) com extrato de raiz de Lepidaploa aurea. As barras representam o valor médio de
comprimento de cada espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de extrato). Diferentes letras
indicam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente e
letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

O extrato foliar de L. aurea afetou significativamente os crescimentos das

radículas e das partes aéreas de S. lycopersicum e de S. bicolor em solo natural, ambas

mostrando padrão de redução do crescimento conforme o aumento da concentração do

extrato, mas provocou diferenças no crescimento apenas da parte aérea de L. sativa (F4,

57= 4,9; p= 0,0018; N=20), sem no entanto, indicar padrão dose-dependente. Por sua

vez, a adição do extrato foliar de L. aurea ao solo autoclavado provocou diferenças

significativas do crescimento aéreo e radicular de três espécies-modelo: L. sativa, R.

sativus e S. lycopersicum. A espécie S. bicolor teve somente o crescimento da radícula

 31

afetado (F4, 82= 10,6; p<0,0001; N=20) pelo extrato foliar em solo autoclavado,

observando-se um padrão de redução dose-dependente (fig. 6).

Figura 6- Comprimentos das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo cultivadas em laboratório
pelo período de 8 a 12 dias (dependendo da espécie): (A) em solo natural com extrato de folha de
Lepidaploa aurea e (B) em solo autoclavado com extrato de folha de Lepidaploa aurea. As barras
representam o valor médio de comprimento de cada espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de
extrato). Diferentes letras indicam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada
espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

O extrato de raiz de L. aurea em solo natural provocou diferenças significativas

de crescimento radicular e aéreo apenas na espécie L. sativa (parte aérea: F4, 66= 4,2; p=

0,0043; N= 20 e parte radicular: F4, 65= 13,7; p< 0,0001, N=20) e do crescimento

radicular de S. bicolor. Já em solo autoclavado, o extrato de raiz de L. aurea promoveu

a redução do crescimento tanto da parte aérea quanto radicular de S. bicolor (parte

aérea: F4, 77= 4,6; p= 0,0022; N=20 e parte radicular: F4, 85= 6,1; p<0,0001; N=20), mas

não afetou significativamente o crescimento da espécie R. sativus. A espécie S.

lycopersicum só apresentou redução significativa do crescimento da parte aérea,

 32

enquanto L. sativa teve o aumento parte radicular de forma dose-dependente da

concentração do extrato de raiz de L. aurea (fig. 7).

Figura 7- Comprimentos das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo cultivadas em laboratório
pelo período de 8 a 12 dias (dependendo da espécie): (A) em solo natural com extrato de raiz de
Lepidaploa aurea e (B) em solo autoclavado com extrato de raiz de Lepidaploa aurea. As barras
representam o valor médio de comprimento de cada espécie-alvo em cada tratamento (concentrações de
extrato). Diferentes letras indicam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada
espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Influência da microbiota do solo

A microbiota do solo não alterou os efeitos dos extratos de L. aurea sobre a

germinação da maioria das espécies-alvo. Nos testes com extrato de folha de L. aurea,

somente a espécie R. sativus apresentou aumento significativo da germinação em solo

autoclavado e, nos testes com extrato de raiz, apenas S. bicolor teve mais sementes

germinadas em solo natural (tab. 2). As outras espécies-modelo não apresentaram

diferenças na germinação ao se comparar o solo natural e o esterilizado.

 33

Tabela 2- Resultados das ANOVA para a avaliação da ação da microbiota sobre os efeitos dos extratos
de folha e de raiz de Lepidaploa aurea na germinação das espécies-modelo em laboratório. As colunas
Solo e Extrato indicam o tipo de solo e o tipo de extrato nos quais foram observadas diferenças
significativas entre os valores de germinação das espécies-alvo. Foram realizadas ANOVA de dois
fatores: Solo (natural ou autoclavado) e Tratamento (concentrações dos extratos).

Espécie-modelo Solo Extrato ANOVA

G. L F p (<F)

R. sativus autoclavado folha Solo 1, 90 1,3 0,2567

Tratamento 4, 90 10,6 < 0,001
Solo:Tratamento 4, 90 2,7 0,034

S. bicolor natural raiz Solo 1, 90 6,1 0,0152

Tratamento 4, 90 1,4 0,2407
Solo:Tratamento 4, 90 1,4 0,2407

Nos bioensaios com extrato de folha, todas as espécies testadas apresentaram

diferenças de crescimento se comparados os tipos de solo: S. bicolor (parte radicular), L.

sativa (parte aérea) e R. sativus (parte aérea) apresentaram crescimento

significativamente maior em solo natural, enquanto S. lycopersicum (parte radicular)

apresentou maior crescimento em solo autoclavado (tab. 3). Já nos bioensaios com

extrato de raiz de L. aurea as espécies R. sativus (parte radicular) e S. lycopersicum

(parte aérea) tiveram crescimento significativamente maior em solo natural e L. sativa

(parte aérea e radicular) e R. sativus (parte aérea) em solo autoclavado (tab. 4).
 34

Tabela 3- Resultados das ANOVA para a avaliação da ação da microbiota sobre os efeitos do extrato de
folha de Lepidaploa aurea no comprimento das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo em
laboratório. A coluna Solo indica o tipo de solo no qual foram observadas diferenças significativas nos
valores de comprimento das espécies-alvo. A coluna Parte Afetada indica a parte da planta (se aérea ou
radicular) que apresentou diferenças significativas no comprimento conforme o tipo de solo. Foram
realizadas ANOVA de dois fatores: Solo (natural ou autoclavado) e Tratamento (concentração de
extrato).

Espécie-modelo Parte afetada Solo ANOVA

G.L F p (<F)
L. sativa parte aérea natural Solo 1, 124 6,6 0,0112
Tratamento 4, 124 9,9 < 0,001
Solo:Tratamento 4, 124 0,8 0,5406
R. sativus parte aérea natural Solo 1, 114 0,4 0,5239
Tratamento 4, 114 4,8 0,0012
Solo:Tratamento 3, 114 3,4 0,0212
S. bicolor parte radicular natural Solo 1, 161 8,4 0,0044
Tratamento 4, 161 22,9 < 0,001
Solo:Tratamento 4, 161 0,1 0,9665
S. lycopersicum parte radicular autoclavado Solo 1, 149 7,3 0,0076
Tratamento 4, 149 15,8 < 0,001
Solo:Tratamento 4, 149 0,6 0,6326

Tabela 4- Resultados das ANOVA para a avaliação da ação da microbiota sobre os efeitos do extrato de
raiz de Lepidaploa aurea no comprimento das partes aéreas e radiculares das espécies-modelo em
laboratório. A coluna Solo indica o tipo de solo no qual foram observadas diferenças significativas nos
valores de comprimento das espécies-alvo. A coluna Parte Afetada indica a parte da planta (se aérea ou
radicular) que apresentou diferenças significativas no comprimento conforme o tipo de solo. Foram
realizadas ANOVA de dois fatores: Solo (natural ou autoclavado) e Tratamento (concentração de
extrato).

Espécie-modelo Parte afetada Solo ANOVA

G. L F p (<F)
L. sativa parte aérea autoclavado Solo 1, 146 0,02 0,8837
Tratamento 4, 146 1,3 0,2751
Solo:Tratamento 4, 146 3,5 0,0089
parte radicular autoclavado Solo 1, 144 27,3 <0,001
Tratamento 4, 144 15,5 <0,001
Solo:Tratamento 4, 144 0,2 0,9231
R. sativus parte aérea autoclavado Solo 1, 168 7,5 0,0069
Tratamento 4, 168 2,5 0,0446
Solo:Tratamento 4, 168 1,7 0,1418
parte radicular natural Solo 1, 189 0,5 0,4941
Tratamento 4, 189 0,1 0,4132
Solo:Tratamento 4, 189 4,2 0,0029
S. lycopersicum parte aérea natural Solo 1, 112 18 <0,001
Tratamento 4, 112 5,4 <0,001
Solo:Tratamento 4, 112 1,8 0,132
 35

Discussão

Os extratos de L. aurea provocaram efeitos menos evidentes sobre a germinação

do que sobre o crescimento inicial das espécies-modelo. Muitos trabalhos indicam que a

germinação é um parâmetro pouco sensível à presença de aleloquímicos, se comparada

ao crescimento inicial, por isso, experimentos de germinação em estudos de alelopatia

frequentemente são vistos com ressalva (Candido et al. 2010, Ferreira e Borghetti 2004,

Inderjit & Dakshini 1995), contudo, é um critério comumente utilizado em pesquisas

sobre fitotoxicidade ou alelopatia, devido à importância de se averiguar o efeito

alelopático em diferentes processos fisiológicos, já que os aleloquímicos agem de

diversas maneiras sobre o desenvolvimento das plantas-alvo (Candido et al. 2010,

Ferreira e Borghetti 2004, Inderjit & Dakshini 1995, Silva 2004).

O padrão geral de respostas das espécies-alvo aos extratos de L. aurea, de

redução dose-dependente da concentração, demonstra que os extratos provocaram a

inibição das espécies-modelo, especialmente do seu crescimento radicular (fig. 8). A

sensibilidade radicular aos aleloquímicos é bem documentada em literatura, sendo uma

das características que melhor indica a ação fitotóxica de extratos vegetais (Burgos et al.

2004, Ferreira & Aquila 2000, Koitabashi et al. 1997). Alguns trabalhos relatam que o

efeito mais acentuado sobre o crescimento das raizes pode ter relação com o maior

contato desta parte da planta com o substrato embebido da solução de extrato (Chung et

al. 2001, Maraschin-Silva e Aquila 2006).

 36

Figura 8- Sorghum bicolor cultivado em solo natural tratado com extrato de folha de Lepidaploa aurea
nas concentrações de 10,00%, 5,00%, 2,50%, 1,25% e 0% (controle), respectivamente da esquerda para a
direita.

Também foi observado que a germinação e o crescimento inicial das espécies-

alvo foram mais sensíveis ao extrato de folha do que ao extrato de raiz de L. aurea, em

ambas as condições testadas, o que pode ser explicado pelo fato de L. aurea produzir

grande quantidade de folhas na estação chuvosa, as quais são liberadas no solo na

estação seca, formando uma camada de serrapilheira relativamente densa, que

permanece abaixo das plantas durante todo o ano. Esta característica, em adição ao fato

de L. aurea possuir um sistema radicular relativamente pequeno, pode indicar que a

planta investe mais na produção de aleloquímicos localizados em suas folhas.

As espécies-modelo não apresentaram um padrão claro de respostas de

germinação e de crescimento inicial em relação ao substrato utilizado, algumas

apresentando efeitos mais ou menos acentuados em placa de Petri do que em solo e

vice-versa. Estes resultados reforçam o entendimento de que em estudos de

fitotoxicidade e/ou alelopatia é importante analisar diferentes espécies-alvo em

diferentes condições, já que a susceptibilidade a um determinado aleloquímico varia

 37

entre espécies, entre indivíduos de uma mesma espécie e entre diferentes condições

testadas (An et al. 1997, Oliveira et al. 2014).

Ao se comparar o desenvolvimento inicial das espécies-alvo dicotiledôneas e da

monocotiledônea S. bicolor, observou-se que a monocotiledônea foi a única espécie que

não apresentou a germinação afetada pelos tratamentos com os extratos vegetais de L.

aurea, em nenhum dos tipos de substratos utilizados. Resultados similares foram

observados por Azevedo Neto (2010) que estudou os efeitos de extratos aquosos

foliares de Leucaena leucocephala sobre a germinação e o crescimento inicial de S.

bicolor. Trabalhos comparando respostas de espécies-modelo dicotiledôneas e

monocotiledôneas à ação de extratos vegetais não são bem documentados, todavia,

existe uma grande quantidade de trabalhos que demonstram que a germinação de

monocotiledôneas é afetada pela exposição a extratos aquosos de certas plantas (Turk e

Tawaha 2003, Belinelo et al. 2008), padrão de respostas oposto ao encontrado neste

trabalho.

Apesar das diferenças nas respostas de germinação e de crescimento inicial das

espécies-alvo em relação ao tipo de extrato e ao substrato utilizado nos bioensaios

laboratoriais, todas as espécies-modelo tiveram o desenvolvimento inicial influenciado

de alguma forma pela presença dos aleloquímicos da L. aurea, especialmente na

presença dos compostos alelopáticos de origem foliar, o que corrobora a primeira

hipótese do trabalho de que a L. aurea apresenta efeitos fitotóxicos sobre as espécies-

alvo.

A ação microbiana não apresentou um padrão claro de redução ou de

potencialização dos efeitos inibitórios dos extratos de L. aurea. Nos bioensaios com
 38

extrato de folha a microbiota do solo atuou reduzindo os efeitos inibitórios dos extratos

sobre a maioria das espécies-alvo, provavelmente quebrando os compostos em formas

menos tóxicas ou simplesmente consumindo-os. Todavia, a microbiota também

potencializou os efeitos inibitórios do extrato foliar em alguns casos, como por

exemplo, sobre a germinação de R. sativus. Por sua vez, a ação microbiana reduziu os

efeitos inibitórios do extrato de raiz de L. aurea sobre o crescimento inicial de L. sativa

e de R. sativus (parte aérea) e sobre a germinação de S. bicolor, e potencializou-os sobre

o crescimento de S. lycopersicum e de R. sativus (parte radicular). Em contato com o

extrato de raiz de L. aurea a espécie R. sativus apresentou maior crescimento da parte

aérea em solo natural e da radícula em solo autoclavado, o que sugere que

possivelmente a redução da parte radicular desta espécie na presença da microbiota

tenha sido compensada com o aumento do seu crescimento aéreo, sob estas condições.

Ademais, não se constatou um padrão das partes das plantas que tiveram o

crescimento mais afetado pela presença da microbiota. A presença dos microorganismos

alterou os efeitos de ambos os extratos sobre o crescimento aéreo e radicular das

plantas-alvo, na mesma proporção. Estas observações demonstram que possivelmente a

ação microbiana no solo é dependente do tipo de extrato e das características das

espécies utilizadas nos bioensaios (Andrade et al. 2013). Para melhor compreender a

amplitude da atividade microbiana, mesmo que em caráter preliminar, seriam

necessários estudos mais aprofundados, que levem em consideração a estrutura química

dos extratos, bem como a fisiologia das plantas-alvo.

Ao se avaliar o efeito da microbiota do solo sobre extratos vegetais de plantas

utilizando a metodologia de autoclavagem do substrato, é importante ter em mente que

neste processo de esterilização do solo, a biomassa dos microorganismos que foram

 39

mortos permanece no substrato, o que possivelmente aumenta a quantidade de

nutrientes disponíveis às plantas-alvo. Portanto, maiores números de sementes

germinadas e/ou maior crescimento inicial das plantas-alvo em solo autoclavado podem

significar um ambiente mais nutritivo, o que pode interferir na avaliação da ação

microbiana sobre os efeitos dos extratos vegetais de L. aurea.

Apesar dos diferentes efeitos da ação microbiana sobre os extratos de L. aurea, a

segunda hipótese do trabalho foi corroborada, já que de fato, a microbiota do solo

influenciou a fitotoxicidade de L. aurea. Esse resultado é importante para compreender

que a fitotoxicidade em plantas é sensível a fatores externos, neste caso, à ação da

microbiota do solo. Portanto, se houve sensibilidade a fatores externos em condições

controladas, é provável e quase certo que o potencial alelopático de L. aurea em

condições naturais seja dependente de fatores relacionados às condições ambientais

existentes no local de estudo.

Os efeitos dos extratos de L. aurea sobre as espécies-modelo possivelmente são

resultado da ação dos grupos de compostos químicos identificados (fenóis, taninos e

alcalóides), visto que de fato foram confirmados efeitos fitotóxicos na germinação de

sementes e no crescimento inicial das plantas-alvo. No entanto, seria necessário o uso

de técnicas mais sofisticadas de análise química, como a cromatografia líquida e outras,

para identificar quais compostos estão presentes e suas concentrações nos extratos, uma

vez que uma grande quantidade de compostos químicos estão englobados nos grupos

detectados (Santos et al. 2011, Souza Filho 2002).

Estudos de fitotoxicidade e alelopatia podem se tornar ferramentas úteis e

aplicáveis em uma série de áreas. Já está bem estabelecido que os compostos

secundários de plantas possuem uma grande importância econômica, pois são utilizados
 40

de formas variadas, que vão desde produtos farmacológicos, corantes, até pesticidas ou

herbicidas. (Macías et al. 2007).

Pesquisas de alelopatia com enfoque ecológico, mesmo que em caráter prévio,

podem auxiliar em ações de conservação e manejo de áreas naturais (Bensusan 2006).

Durigan (2008) aponta que o conhecimento dos processos ecológicos (dentre eles a

alelopatia), dos processos sucessionais e do ciclo de vida das plantas são de grande

importância para a conservação de áreas naturais.

No caso específico da restauração ecológica de áreas naturais que foram

invadidas por gramíneas exóticas, a alelopatia em espécies nativas pode servir como

auxílio ao controle das espécies invasoras (Cummings 2012). Sendo assim, a

identificação da fitotoxicidade em L. aurea pode servir de base para estudos mais

aprofundados que visem avaliar o potencial alelopático desta espécie em condições mais

próximas da natural, utilizando como espécies-alvo as espécies exóticas e nativas que

coexistem com a planta em campo.

O padrão de distribuição de espécies observado em áreas de plantio de

restauração ecológica no Cerrado do DF e de GO poderia ser, em parte, explicado pelo

potencial alelopático de L. aurea com efeitos inibitórios mais fortes em gramíneas

exóticas invasoras do que em espécies nativas e a identificação deste comportamento

em L. aurea poderia confirmar a espécie como uma boa alternativa para uso em projetos

de restauração ecológica de áreas invadidas por gramíneas exóticas no Cerrado.

 41

Capítulo 2

Alelopatia em Lepidaploa aurea (Asteraceae) - Ferramenta de Auxílio à

Restauração Ecológica do Cerrado

____________________________________________________________
Lopes, P. G; Salles, K, A; Schmidt; I. B; Oliveira, S. C. C; Sampaio, A. B.

Resumo

Grande parte das áreas naturais do Cerrado estão sendo convertidas em pastagens de
gramíneas africanas, que estão entre as principais espécies exóticas invasoras (EEI) em
todo o mundo. Uma das práticas de controle de EEI em áreas degradadas é a restauração
ecológica, que visa reconstituir o ambiente degradado o mais próximo possível do seu
estado original. Em projetos de restauração ecológica no Cerrado, a espécie Lepidaploa
aurea (Mart. ex DC.) H. Rob. (Asteraceae) se destaca por seu sucesso de
estabelecimento e aparente inibição do crescimento das gramíneas exóticas invasoras
Andropogon gayanus e Urochloa decumbens, o que pode indicar potencial alelopático.
O objetivo do trabalho foi identificar o potencial alelopático de L. aurea sobre as EEI e
sobre espécies nativas (uma gramínea e duas arbóreas) em condições controladas, semi-
naturais e naturais. Foram feitos experimentos: (i) em laboratório, com o uso de extrato
vegetal de L. aurea; (ii) em casa de vegetação, com uso de carvão ativado e utilização
de solo onde L. aurea foi previamente cultivada e de serrapilheira de L. aurea e (iii) em
campo, com uso de carvão ativado e avaliação da germinação e crescimento inicial de
espécies-alvo plantadas dentro e fora de áreas dominadas por indivíduos de L. aurea.
Foi constatado o potencial alelopático de L. aurea em laboratório sobre todas as
espécies-alvo, em casa de vegetação sobre U. decumbens e sobre as espécies nativas
Copaifera langsdorffii e Loudetiopsis chrysothrix, todavia, em campo, os efeitos
alelopáticos foram observados somente no aumento da germinação da espécie C.
langsdorffii. A alelopatia em L. aurea pode auxiliar projetos de restauração ecológica,
na escolha de técnicas mais baratas e eficazes de controle de U. decumbens e na seleção
de plantas nativas a serem utilizadas em plantios de restauração.

Palavras-chave: espécies-alvo, aleloquímicos, gramíneas exóticas invasoras.

 42

Allelopathy in Lepidaploa aurea (Asteraceae) – A Possible Tool to

Cerrado Ecological Restoration

Lopes, P. G; Salles, K, A; Schmidt; I. B; Oliveira, S. C. C; Sampaio, A. B.

Abstract

Large natural areas of the Brazilian savanna (Cerrado) have been converted to pastures
planted with African grass species, which are among the major invasive alien species
(IAS) worldwide. One of the control practices of IAS in degraded areas involves
ecological restoration, which aims to bring degraded areas to restored states, as close as
possible to the original state. In restored areas within the Cerrado, Lepidaploa aurea
(Mart. Ex DC.) H.Rob. (Asteraceae) stands out for its successful establishment and for
an apparent inhibition the growth of exotic grasses Andropogon gayanus and Urochloa
decumbens, which may indicate allelopathic potential. The objective of this work was to
identify L. aurea allelopathic effects on IAS and on native species (one grass and two
woody) under controlled, semi-natural and natural conditions. Experiments were carried
out: (i) in the laboratory, with different concentrations of L. aurea extracts (from 1.25,
2.5, 5 e 10%); (ii) in the greenhouse, with use of activated charcoal and using soil where
L. aurea was previously grown and L. aurea litter and (iii) in field conditions with
activated carbon use to evaluate seed germination and early growth of the target-species
inside and outside areas dominated by L. aurea. We found allelopathic potential of L.
aurea in the laboratory on all target-species, in the greenhouse on U. decumbens and on
native species Copaifera langsdorffii and Loudetiopsis chrysothrix, however, in the
field, the allelopathic effects were observed only through an increased seed germination
rate for the native tree C. langsdorffii. Allelopathy in L. aurea can help ecological
restoration projects, the choice of cheaper and effective techniques control of U.
decumbens and selection of native plants to be used in plantations.

Keywords: target-species, allelochemicals, invasive exotic grasses.

 43

Introdução

No Brasil, várias espécies de gramíneas de origem africana foram introduzidas

acidentalmente ou para fins forrageiros, tornando-se invasoras de ecossistemas naturais,

principalmente dos ambientes abertos, como campos e cerrados (Pivello 2011).

Atualmente as pastagens plantadas ocupam cerca de 26% da área total do bioma

Cerrado (MMA 2010).

As gramíneas africanas usadas para a formação de pastagens foram melhoradas

para suportar o clima do Cerrado e o pisoteio pelo gado, e ainda para manter altas a

produtividade e as capacidades reprodutiva e competiva (Barbosa et al. 2008, Pivello

2011). Algumas espécies de gramíneas africanas são consideradas invasoras agressivas,

pois se espalham a partir de pastagens cultivadas ou revegetadas para áreas naturais a

taxas alarmantes (Pivello 2011, Williams & Baruch 2000), afetando diretamente as

espécies herbáceas nativas por competição, podendo causar extinções locais e perda

direta da biodiversidade. Muitos estudos sugerem que os efeitos negativos de gramíneas

exóticas invasoras também se estendem à regeneração de espécies lenhosas,

principalmente devido ao sombreamento das plântulas de árvores e arbustos (Florentine

& Westbrooke 2004, Holl 2002). As gramíneas africanas são um exemplo de espécies

engenheiras (Haemig 2011), que impactam o ecossistema como um todo,

descaracterizam as fisionomias e modificam a estrutura e o regime de queima das áreas

invadidadas, facilitando com isso sua própria manutenção no ambiente (Baruch et al.

1985, Coutinho 1982, D’Antonio & Vitousek 1992, Freitas 1999).

O controle de espécies invasoras mais eficiente é o manejo e a restauração da

vegetação e dos processos ecológicos, para que o ecossistema se torne mais resistente às

invasões, através do restabelecimento da vegetação e dos processos ecossistêmicos

 44

(Drenovsky 2012). Neste sentido, a prática da restauração ecológica, que visa a

reconstituição do ambiente degradado a um estado mais próximo do original, é uma das

formas de alcançar este objetivo (Morin 1999). Para isso, o controle mecânico das

gramíneas exóticas seguido do plantio misto de sementes de espécies nativas, incluindo

diversidade de formas de vida e espécies de rápido crescimento e reprodução, podem

em poucos anos controlar a ocorrência das gramíneas exóticas invasoras, especialmente

em áreas campestres e savânicas, caracterizadas pela coexistência de gramíneas,

arbustos e árvores, como o caso de grandes áreas do Cerrado (Sampaio et al. 2015).

Um dos requisitos importantes para o sucesso de projetos de restauração

ecológica é a escolha das espécies que serão usadas nos plantios. Alguns estudos

pontuam que certas características funcionais podem ser a chave para a seleção de

espécies mais eficientes no restabelecimento vegetal, como por exemplo, certas árvores

que rapidamente produzem sombra e competem com espécies exóticas intolerantes ao

sombreamento (Jones et al. 2004, Joo Kim et al. 2008) ou árvores que afetam o

crescimento de plantas de sub-bosque através de seus efeitos sobre a disponibilidade de

nutrientes e pH do solo (Pearson e Vitousek 2001). Entre as características funcionais,

uma das menos exploradas é a possibilidade de que algumas espécies de plantas que

produzem aleloquímicos possam inibir a germinação ou crescimento de outras plantas

(Cummings et al. 2012). No entanto, Srikanth & Pushpalatha (1991) já pontuavam em

seu trabalho realizado na Índia, que a produção de aleloquímicos ou a alelopatia em

plantas nativas pode ser uma das características úteis na seleção de espécies a serem

usadas em projetos de restauração ecológica.

A alelopatia é um fenômeno natural e tem sido reconhecida como um importante

mecanismo ecológico que influencia a dominância vegetal, a sucessão, a formação de

comunidades vegetais e a vegetação clímax (Carvalho 1993, Chou 1999, Ferreira 2004).
 45

Muitos trabalhos com alelopatia já vêm sendo realizados com espécies exóticas

invasoras em diversos ambientes, buscando compreender o sucesso de estabelecimento

e rápido domínio da paisagem por estas espécies (Barbosa et al. 2008, Callaway &

Aschehoug 2000, Callaway & Ridenour 2004, Del Fabbro et al. 2014). A hipótese

“novel weapons” (novas armas) sugere que alelopatia pode ser um mecanismo

relacionado ao sucesso da invasão biológica, no qual uma espécie introduzida

potencialmente produz efeitos alelopáticos sobre espécies de plantas vizinhas em um

novo ambiente, mesmo não mostrando efeitos similares sobre as espécies vizinhas em

seu local de origem, onde as plantas compartilham sua história evolutiva (Callaway &

Ridenour, 2004).

Um processo similar ao sugerido pelo conceito de novas armas também pode

operar em plantas nativas, quando há um aumento da resistência das comunidades

nativas à invasão. A hipótese “homeland security” (segurança ou defesa de território)

proposta por Cummings et al. (2012) estabelece que plantas introduzidas podem ser

particularmente susceptíveis a aleloquímicos produzidos por plantas nativas locais, já

que as espécies não possuem uma experiência evolutiva juntas, o que pode dificultar a

invasão.

Tanto o conceito de novas armas quanto a hipótese de defesa de território, estão

baseados no fato de que a experiência evolutiva das plantas-alvo é um dos principais

fatores que influenciam a sua susceptibilidade aos aleloquímicos produzidos por outras

plantas (Calaway & Ridenour 2005, Cummings et al. 2012). No entanto, para que os

estudos de alelopatia realizados com espécies exóticas e nativas sejam melhor

interpretados, é necessário considerar outros fatores, também importantes, na

suceptibilidade das plantas-alvo aos compostos alelopáticos da planta doadora, como

 46

por exemplo a forma de vida, a função ecológica e as características morfofisiológicas

das plantas (Meiners et al. 2012).

Em áreas de plantio de restauração ecológica no Cerrado do Distrito Federal

(DF) e de Goiás (GO), Brasil, foi observado que a espécie nativa Lepidaploa aurea

(Asteraceae) possui bom desempenho no estabelecimento e na cobertura do solo,

demonstrado, portanto, qualidades evidentes de uma boa espécie a ser utilizada em

projetos de restauração ecológica (Sampaio et al. 2015). Adicionalmente, em áreas de

domínio da espécie, frequentemente são observadas zonas sem a ocorrência de algumas

outras plantas, entre elas, as gramíneas exóticas invasoras Andropogon gayanus e

Urochloa decumbens. Nestas áreas, é comum a presença de plântulas de espécies

arbóreas usadas nos plantios de restauração, como a Acacia polyphylla e a Copaifera

langsdorffii. Estas observações deram base à realização de testes laboratoriais

preliminares com espécies-modelo dicotiledôneas e uma monocotiledônea (cultivares

comumente usados em testes de alelopatia, como alface, rabanete, tomate e sorgo), nos

quais foram demonstrados efeitos fitotóxicas em extratos vegetais L. aurea.

A existência de fitotoxicidade em L. aurea é um indício de potencial atividade

alelopática em condições naturais. No entanto, antes de qualquer afirmação, é preciso

considerar que muitas vezes a presença de aleloquímicos em plantas e mesmo sua ação

fitotóxica em condições de laboratório não refletem atividades alelopáticas em

condições naturais, isso porque o efeito alelopático das substâncias após liberação no

solo é, geralmente, muito menor do que o observado em laboratório (Inderjit & Nilsen

2003).

Ao contrário do ambiente controlado do laboratório, no ambiente natural,

existem diversos outros fatores que influenciam as interações planta-planta, como por

exemplo: as condições ambientais, especialmente temperatura, umidade e intensidade

 47

de luz, assim como as características edáficas do local e a competição por recursos

(Almeida 1991, Ferreira 2004, Hadacek 2002, Inderjit & Nilsen 2003, Macías et al.

2007, Reigosa et al. 2013).

Uma melhor compreensão da importância da alelopatia em condições naturais é

limitada pela falta de bioensaios experimentais bem desenhados e interligados, e

experimentos de campo que separem os efeitos da alelopatia de outras formas de

interações (Inderjit & Nilsen 2003, Nilsson 1994, Reigosa et al. 2013, Romeo &

Weidenhamer 1996). Uma das técnicas para se identificar a ocorrência de alelopatia no

campo é a utilização de carvão ativado nos bioensaios. O carvão ativado tem uma alta

capacidade de adsorção de compostos orgânicos, e é frequentemente usado para

neutralizar aleloquímicos (Del Fabbro et al. 2014, Indejit & Callaway 2003, Nolan et al.

2014, Prati e Bossdorf 2004). É comum em estudos de alelopatia a incorporação do

carvão ativado ao solo como tratamento no qual a atividade alelopática é atenuada,

servindo, portanto, para comparações com o tratamento sem a adição do carvão ativado.

Geralmente, as mesmas plantas-alvo são cultivadas nos substratos com e sem carvão

ativado em áreas afetadas e não afetadas pela espécie potencialmente alelopática

(Inderjit & Nilsen 2003).

Nolan et al. (2014) discutem que o carvão ativado pode ser usado para reduzir os

efeitos alelopáticos de espécies exóticas invasoras sobre o desenvolvimento de espécies

nativas. No entanto, além de atenuar a ação alelopática, o carvão ativado se liga às

moléculas orgânicas de forma indiscriminada, o que por vezes resulta na modificação da

composição da comunidade microbiana do solo e do crescimento das plantas-alvo (Del

Fabbro et al. 2014, Kulmatiski 2011, Kulmatiski & Beard 2006, Lau et al. 2008,

Schertzer et al. 2009, Wurst & Van Beersum 2009), ou seja, o carvão ativado pode ter
 48

um efeito maior sobre o desenvolvimento das plantas-alvo, que vai além do efeito

resultante da atenuação da alelopatia. Em apoio a esta idéia, Abhilasha et al. (2008)

descobriram que o carvão ativado produzia efeitos em solos naturais (sem esterilização),

mas não em solos esterilizados, indicando que os efeitos do carvão ativado foram

causados por interações com microorganismos do solo.

Com base no padrão de distribuição de espécies observado em áreas de plantio

de L. aurea, assim como no estudo preliminar que identificou a fitotoxicidade da

espécie, os objetivos do trabalho são: (a) testar o potencial alelopático de L. aurea sobre

duas gramíneas exóticas invasoras: A. gayanus e U. decumbens e sobre três espécies

nativas: duas arbóreas – A. polyphylla e C. langsdorffii e uma gramínea – L.

chrysothrix, em condições controladas e (b) avaliar possíveis efeitos alelopáticos de L.

aurea sobre as mesmas espécies em condições naturais e semi-naturais.

A hipótese a ser testada neste trabalho é a de que a L. aurea possui potencial

alelopático que produz maiores efeitos inibitórios no desenvolvimento das gramíneas

exóticas invasoras A. gayanus e U. decumbens do que no de outras espécies nativas,

especialmente as arbóreas A. polyphilla e C. langsdorffii.

Material e Métodos

Área de Estudo

O estudo foi realizado na Reserva Biológica (Rebio) da Contagem, DF, em área

de experimentos de restauração ecológica por meio de semeadura direta estabelecidos

em 2012, em um local de pastagem abandonada dominada pelas gramíneas exóticas

invasoras A. gayanus e U. decumbens.

 49

Espécies estudadas

A espécie doadora é a Lepidaploa aurea, um arbusto perene de porte reduzido

da família Asteraceae, com altura média de 1,3 m, comumente encontrado em áreas de

Cerrado do Brasil central (Farias et al. 2002) (fig. 1). As espécies do gênero são

normalmente caracterizadas como ervas daninhas associadas a pastagens e culturas

(Lorenzi 2000). A L. aurea pode ser definida como uma espécie ruderal, sendo

facilmente encontrada ao longo de estradas no Cerrado.

As espécies-alvo selecionadas foram duas gramíneas exóticas invasoras comuns

na área de estudo: Urochloa decumbens e Andropogon gayanus, cujas sementes foram

adquiridas comercialmente, e três espécies nativas, sendo uma gramínea: Loudetiopsis

chrysothrix e duas arbóreas: Copaifera langsdorffii e Acacia polyphylla, cujas sementes

foram coletadas em área de cerrado próxima à Rebio da Contagem, DF. As duas

gramíneas exóticas e as duas nativas arbóreas foram selecionadas a partir das

observações de campo das zonas de inibição de crescimento no entorno de L. aurea,

onde há pouca ocorrência de A. gayanus e U. decumbens e a presença de plântulas de A.

polyphylla e C. langsdorffii. Não é comum observar a ocorrência da gramínea nativa L.

chrysothrix nestas zonas de inibição, no entanto, a espécie foi selecionada como uma

das espécies-alvo, por ser uma monocotiledônea, possuindo, portanto, semelhanças

funcionais e fisiológicas com as gramíneas exóticas testadas, o que possibilita

interpretações mais corretas da importância do histórico evolutivo e das características

das espécies-alvo no padrão de distribuição de espécies existente no local de estudo.

 50

Figura 1- Indivíduo de Lepidaploa aurea em área de campo na Reserva Biológica (Rebio) da Contagem
(DF).

Material vegetal

Folhas e raizes de L. aurea foram coletadas em áreas de cerrado no Distrito

Federal. Para obtenção dos extratos, o material vegetal foi separado, eliminado o

excesso de solo (no caso das raizes) e secado em estufa a 60°C por 48 horas (Costa &

Pasin 2015). Depois de seco, o material foi triturado em Moinho de Rotor Tipo

Ciclone. O pó resultante foi diluído em água destilada na proporção de 10g de pó para

cada 100 mL de água destilada e submetido a banho de ultrasson em Lavadora Ultra-

Sônica Digital por 25 minutos. Em seguida, a solução foi coada com o auxílio de um

funil de porcelana, papel-filtro de gramatura 80 g/m² e uma bomba de vácuo. O

resultado foi um extrato a 10% que foi sendo diluído em água destilada para alcançar as

concentrações de 5%; 2,5% e 1,25%. O tratamento controle foi feito com água

destilada.
 51

Experimentos em laboratório

Os bioensaios em laboratório tiveram a finalidade de avaliar o crescimento

inicial das espécies-alvo, utilizando extratos aquosos de folhas e de raizes de L. aurea.

Optou-se por não avaliar a germinação das espécies-alvo nos testes laboratoriais, por ter

se mostrado um parâmetro pouco sensível aos extratos aquosos da L. aurea em testes

preliminares de fitotoxicidade com a utilização de espécies-modelo (Capítulo 1). O

substrato utilizado nos bioensaios em condições controladas foi a vermiculita expandida

de textura fina, a qual foi disposta em sementeiras com 36 células (cada célula com

capacidade de 5g de substrato) e estas em bandejas plásticas (fig. 2). Em cada célula foi

adicionado uma única vez o volume de extrato correspondente a 100% da capacidade de

campo da vermiculita (previamente determinada). As sementes das espécies-alvo foram

pré-germinadas em papel-filtro e após um período de 4 a 10 dias (dependendo da

espécie) de crescimento em câmara de germinação a 25°C e fotoperíodo de 12h, foram

transplantadas para as sementeiras, uma plântula por célula. Os bioensaios de cada

extrato tiveram cinco tratamentos, com quatro concentrações de extrato (10, 00; 5,00;

2,50 e 1,25%) e um tratamento controle com água destilada. Para cada extrato, foi

utilizada uma sementeira por tratamento (N=36), cinco por espécie, perfazendo um total

de 180 sementes/espécie transplantadas (fig. 2). Os experimentos foram mantidos em

câmara de crescimento a 25°C e fotoperíodo de 12 horas por 13 dias para as gramíneas

e por 18 dias para as espécies arbóreas. Foi mantida em 100% a capacidade de campo

da vermiculita nos recipientes com regas diárias, as quais foram realizadas colocando-se

a água no fundo das bandejas, para evitar a perda excessiva dos extratos por lixiviação.
 52

O crescimento inicial das espécies-alvo foi determinado por meio de medidas

com paquímetro digital, dos comprimentos das partes aéreas e radiculares de cada

indivíduo plantado.

A B
Figura 2- (A) Sementeira de 36 células com vermiculita no interior de bandeja plástica utilizada nos
bioensaios laboratoriais e (B) Sementeira com plântulas de Urochloa decumbens cultivadas em
vermiculita com extrato foliar de Lepidaploa aurea (tratamento controle - 0% de extrato) em laboratório.

Experimentos em casa de vegetação

Foram realizados dois tipos de experimentos em casa de vegetação. O primeiro

teve a finalidade de avaliar os efeitos alelopáticos das raizes de L. aurea, através da

medição do comprimento das espécies-alvo após cultivo em solo em que a espécie

doadora havia crescido previamente em condições semi-naturais, e o segundo, teve o

objetivo de avaliar os efeitos dos aleloquímicos foliares de L. aurea, através da

mensuração do comprimento e da biomassa seca das espécies-alvo cultivadas em solo

coberto com folhas secas da espécie doadora, em condições semi-naturais, simulando a

ação da serrapilheira em campo.

Experimento para avaliação dos aleloquímicos radiculares de L. aurea – Neste

experimento foi avaliado o crescimento inicial das espécies-alvo, após o plantio em solo

no qual a L. aurea foi previamente cultivada.

 53

Para o cultivo da L. aurea em condições semi-naturais, foram preenchidos dez

vasos de 2,5 L com latossolo vermelho-amarelo peneirado, e em cada vaso foram

plantadas dez sementes pré-germinadas de L. aurea. O procedimento de pré-germinação

foi o mesmo realizado nos experimentos laboratoriais. Após o período de um mês,

quatro plântulas de cada vaso foram retiradas. Os vasos com as seis plântulas restantes

foram mantidos por seis meses em casa de vegetação com irrigação diária (fig. 3). Para

maior contato com o sol, após esse período, os vasos foram transportados para uma área

externa protegida com sombrite, dispostos em bandejas plásticas e mantidos por mais

três meses com irrigação manual, de baixo para cima, de dois em dois dias. Após o

período de 9 meses, as plantas foram retiradas dos vasos e o solo foi homogeneizado e

dividido em duas partes. Para a atenuação dos efeitos alelopáticos da planta doadora e

visando as comparações necessárias para a interpretação dos resultados, em uma das

duas partes do solo foi acrescentado carvão ativado a uma concentração de 25 mL de

carvão para 1 L de solo (Del Fabbro et al. 2014). O bioensaio teve, portanto, dois

tratamentos, um de solo com carvão ativado e outro de solo sem carvão ativado. Os

solos com e sem carvão ativado foram distribuídos cada qual em cinco sementeiras de

36 células (cada uma com capacidade de 40g de substrato) e estas em bandejas

plásticas. Em cada sementeira foram plantadas sementes pré-germinadas das espécies-

alvo: U. decumbens, A. gayanus e L. chrysothrix, C. langsdorffii e A. polyphylla , uma

plântula por célula (fig. 3). As espécies-alvo gramíneas, tanto as exóticas quanto a

nativa, tiveram repetição de 36 sementes por tratamento, e as arbóreas, repetição de 30

sementes/tratamento.

As espécies-alvo plantadas nos tratamentos com e sem carvão ativado foram

mantidas em câmara de crescimento a 25°C e fotoperíodo de 12 horas por 13 dias para

 54

as gramíneas e 18 dias para as espécies arbóreas. Foi mantida em 100% a capacidade de

campo do solo nos recipientes com regas diárias, as quais foram realizadas colocando-se

a água no fundo das bandejas.

O crescimento inicial das espécies-alvo foi avaliado através de medições dos

comprimentos das partes aéreas e das raizes de cada planta-alvo, utilizando um

paquímetro digital.

A B
Figura 3- (A) Vasos com Lepidaploa aurea (6 indivíduos por vaso) em casa de vegetação após seis
meses do plantio e (B) Sementeira com 30 sementes (pré-germinadas) de Copaifera langsdorffii dispostas
em solo no qual L. aurea foi previamente cultivada em casa de vegetação (tratamento sem carvão
ativado).

Experimento para avaliação dos aleloquímicos foliares de L. aurea – Neste

experimento foi avaliado o crescimento inicial das espécies-alvo, através da medição

dos seus comprimentos aéreos e radiculares e da mensuração da biomassa seca aérea e

radicular de cada planta-alvo, após cultivo em latossolo vermelho-amarelo coberto com

folhas secas de L. aurea, pelo período de 76 dias.

Para a implantação do experimento, noventa vasos com capacidade de 2,5 L e

área de superfície de diâmetro de 15 cm, foram preenchidos com uma mistura de

latossolo vermelho-amarelo peneirado e areia fina, na concentração de 1 kg de areia

para 15 kg de solo (Oliveira et al. 2012). Na superfície de um terço dos vasos foram

dispostas folhas secas de L. aurea, em quantidade compatível com a da serrapilheira em

 55

campo, a qual foi previamente estimada. Os outros dois terços dos vasos foram

utilizados para dois tipos de controle diferentes: um controle sem sombreamento (solo

exposto) e um controle com sombreamento, no qual foi usado um sombrite para simular

a redução da luminosidade proveniente da presença da serrapilheira.

Para estimar a quantidade da serrapilheira de L. aurea produzida em campo

foram coletadas 20 amostras de serrapilheira em áreas dominadas pela planta. As

coletas foram feitas em quadrados de 15 x 15 cm (área similar à superfície dos vasos

usados na casa de vegetação). A serrapilheira coletada foi seca em estufa (60°C por

48h) e pesada. A média de serrapilheira nestas amostras (4,3 g) foi a quantidade

utilizada nos vasos no experimento para avaliação dos efeitos dos aleloquímicos foliares

de L. aurea.

Para medir o sombreamento causado pela serrapilheira, 4,3 g do material foram

dispostos em papel-filme transparente, conforme área da superfície do vaso, e por baixo

do papel-filme utilizou-se um fotômetro digital para medir a luminosidade com e sem a

serrapilheira. O procedimento foi repetido vinte vezes e constatou-se que a média da

porcentagem de luminosidade que a serrapilheira deixou passar foi de 30%.

Posteriormente os trinta vasos do controle de luminosidade foram cobertos com

sombrite de gramatura de 70% de sombreamento. O sombrite foi mantido sobre os

vasos no controle com sombreamento até que as plantas do tratamento com a

serrapilheira ultrapassassem a barreira das folhas secas.

Na metade dos vasos de cada tratamento foram plantadas sementes pré-

germinadas de U. decumbens e na outra metade, de L. chrysothrix, perfazendo um

número de repetições de 15 para cada espécie-alvo por tratamento. Inicialmente foram

 56

plantadas quatro sementes pré-germinadas por vaso e após uma semana, três delas

foram retiradas e foi mantida apenas uma planta por vaso. As plantas foram cultivadas

em casa de vegetação e regadas periodicamente para manutenção de 100% da

capacidade de campo dos vasos, pelo período de 76 dias. As regas foram feitas de cima

para baixo, para a liberação no solo dos compostos existentes na serrapilheira. Para a

quantificação do crescimento inicial, após o desmonte do bioensaio, foi medido o

comprimento e mensurada a biomassa seca das partes aéreas e radiculares de cada

planta-alvo.

Experimento em campo

O bioensaio in situ teve a finalidade de avaliar a germinação e o crescimento

inicial das espécies-alvo em condições naturais, através do plantio de sementes das

plantas-alvo em áreas afetadas e não afetadas pela L. aurea, em parcelas com e sem

carvão ativado. Para isso, em novembro de 2014, foram selecionadas dez manchas de L.

aurea (áreas dominadas pelo arbusto) em áreas de plantios de restauração ecológica

realizados em 2012, na Reserva Biológica da Contagem, DF. Em cada uma dessas

manchas foram plantadas as espécies-alvo: U. decumbens, A. gayanus, L. chrysothris,

A. polyphylla e C. langsdorffii em parcelas de 20 x 20 cm. As parcelas foram

demarcadas em dois tipos de tratamento: dentro da mancha (cerca de 20 cm de uma

planta de L. aurea) e fora da mancha (mínimo de 3 m de distância de um indivíduo de

L. aurea). Em cada tratamento foram feitas duas parcelas (20 x 20 cm) para cada

espécie-alvo, em uma delas, foi incorporado o carvão ativado em aproximadamente 2 kg

de solo, na proporção de 25 mL de carvão para 1 L de solo (Del Fabbro et al. 2014).

Para a incorporação do carvão ativado ao solo, os 2 kg de solo foram retirados da

parcela e o carvão ativado foi acrescentado ao substrato, revolvendo-se a mistura. Sendo

 57

assim, cada espécie-alvo foi plantada em quatro parcelas por mancha: com carvão –

dentro, sem carvão – dentro, com carvão – fora, sem carvão – fora e cada mancha

representou uma repetição. Para eliminar o efeito da perturbação decorrente da adição

do carvão ativado ao solo, nas parcelas sem o carvão ativado, antes do plantio, o solo foi

revolvido da mesma maneira que nas parcelas nas quais foi misturado o carvão. Em

cada mancha foram demarcadas duas parcelas nas quais não foi plantada nenhuma

espécie-alvo (uma dentro e uma fora da mancha), para excluir o efeito do surgimento de

espécies espontâneas. Nestas parcelas de controle de espontâneas, o solo foi revolvido

da mesma maneira que nas outras parcelas com e sem carvão ativado (fig. 4).

Em cada parcela foram plantadas 40 sementes de cada espécie-alvo, com

exceção da espécie L. chrysothrix, para a qual foram plantadas 100 sementes por

parcela. Optou-se por plantar um número maior de sementes de L. chrysothrix por que

foi constatado, em experimentos anteriores, que esta espécie apresenta baixo percentual

de germinação de sementes. Após o plantio, foram realizados cinco monitoramentos da

germinação, semanalmente durante o primeiro mês e ao final do segundo mês. No final

do segundo mês reduziu-se o número de plantas por parcelas para no máximo de 20,

para evitar efeitos decorrentes da densidade. O experimento foi desmontado após seis

meses de crescimento e as plantas remanescentes foram retiradas das parcelas com o

auxílio de ferramentas de jardinagem, acondicionadas em sacos plásticos identificados e

levadas a laboratório para avaliação do crescimento inicial, através da realização das

medições do comprimento e a quantificação da biomassa seca das partes aéreas e raizes

de cada planta-alvo.
 58

Figura 4- Croqui do experimento em campo. Disposição das parcelas em uma mancha de Lepidaploa
aurea (áreas dominadas pela espécie). As cinco espécies-alvo: Andropogon gayanus, Urochloa
decumbens, Loudetiopsis chrysothrix, Copaifera langsdorffii e Acacia polyphylla, foram plantadas em
duas condições (com e sem carvão ativado no solo) em parcelas de 20 x 20 cm localizadas dentro de áreas
dominadas por Lepidaploa aurea (no círculo) e fora de áreas dominadas por esta espécie potencialmente
alelopática, a no mínimo 3 metros de distância de um indivíduo de Lepidaploa aurea. Também foram
demarcadas parcelas de controle de espontâneas dentro e fora das manchas de Lepidaploa aurea, para
evitar erros na contagem de indivíduos, caso ocorresse o surgimento espontâneo de espécies que não
foram plantadas.

Análises Estatísticas

Os resultados dos bioensaios para avaliar o crescimento inicial das espécies-alvo

realizados em laboratório e em casa de vegetação foram avaliados por meio de Análises

de Variância (ANOVA), considerando os tratamentos para cada espécie. Para os

resultados de germinação e crescimento inicial das espécies-alvo cultivadas em campo,

foram realizadas ANOVA de dois fatores: local (dentro e fora das manchas de L. aurea)

e presença de carvão ativado na parcela (com ou sem) para cada espécie separadamente.

As médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de significância. As análises

foram realizadas no Programa R, versão 3.2.1 (R Development Core Team 2015).

 59

Resultados

Experimentos laboratoriais

Nos testes para avaliação do crescimento inicial realizados em laboratório, o

extrato foliar de L. aurea provocou forte efeito sobre as plantas-alvo, reduzindo

significativamente os crescimentos das partes aéreas e radiculares de todas elas, com

exceção da parte aérea de C. langsdorffii. A espécie mais afetada pelo extrato foliar foi

a U. decumbens (parte aérea: F4, 175= 7,2; p<0,0001; N= 36 e parte radicular= F4, 175=

156; p<0,0001; N= 36), que mostrou redução da radícula a partir da concentração de

extrato de 1,25% (fig. 6). Já o extrato de raiz de L. aurea teve pouca influência sobre o

crescimento inicial das espécies-alvo, afetando apenas o crescimento radicular de duas

espécies: U. decumbens (F4, 175= 5,9; p<0,0001; N= 36), que apresentou redução da

radícula conforme o aumento da concentração do extrato (fig. 6) e C. langsdorffii (F4,

175= 3,5; p= 0,0085; N= 30), que apresentou aumento da radícula proporcional ao

aumento da concentração do extrato (figs. 5, 6 e 7).

A B

Figura 5- Urochloa decumbens após cultivo em vermiculita em laboratório: (A) com extrato de folha de
Lepidaploa aurea na concentração 0% (controle), (B) com extrato de folha de L. aurea na concentração
10%.
 60

Figura 6- Urochloa decumbens cultivada em laboratório em vermiculita com extrato de raiz de L. aurea
nas concentrações de 0% (controle), 1,25%, 2,50%, 5,00% e 10,00%, respectivamente da esquerda para a
direita.

Figura 7- Comprimento das espécies-alvo cultivadas em vermiculita em laboratório pelo período de 13

dias para as gramíneas e de 18 dias para as espécies arbóreas: (A) com extrato de folha de Lepidaploa
aurea e (B) com extrato de raiz de Lepidaploa aurea. As barras representam as médias dos comprimentos
das espécies-alvo para cada tratamento (concentrações dos extratos). Diferentes letras representam as
diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais
sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.
 61

Experimentos em Casa de Vegetação

No experimento para avaliação do crescimento inicial das espécies-alvo

cultivadas em solo no qual a L. aurea foi previamente plantada, os compostos

alelopáticos liberados pelas raizes de L. aurea possivelmente afetaram

significativamente o crescimento inicial de três das cinco espécies-alvo. Tais

substâncias aparentemente inibiram o crescimento aéreo e radicular da espécie A.

polyphylla (parte aérea: F1, 58= 17,59; p< 0,0001; N= 30 e parte radicular: F1, 58= 5,843;

p= 0,0188; N= 30), pois a espécie apresentou crescimento reduzido em solo sem carvão

ativado, se comparado ao tratamento com carvão ativado. Padrão semelhante foi

observado para o crescimento radicular de U. decumbens (F1, 70= 30,69; p< 0,0001; N=

36). Por outro lado, os aleloquímicos presentes no solo possivelmente foram

responsáveis pelo aumento do crescimento da radícula de C. langsdorffii (F1, 31= 6,173;

p= 0,019; N= 19), já que esta espécie apresentou crescimento significativamente maior

no tratamento sem carvão ativado (fig. 8)

Figura 8: Comprimento das espécies-alvo cultivadas pelo período de 13 dias para as gramíneas e de 18
dias para as espécies arbóreas, em solo no qual Lepidaploa aurea cresceu durante 9 meses em casa de
vegetação, com e sem carvão ativado. As barras representam a média do comprimento das espécies-alvo
para cada tratamento (com e sem carvão ativado). Os asteriscos representam diferenças significativas
entre os tratamentos.
 62

No experimento para avaliação do crescimento inicial das espécies-alvo

cultivadas em solo coberto com folhas secas de L. aurea em casa de vegetação,

aparentemente os aleloquímicos foliares da espécie doadora tiveram pouca influência no

crescimento inicial das espécies-alvo, possivelmente afetando somente a biomassa

radicular de L. chrysothrix (parte radicular: F2, 40= 6, 4; p= 0,004; N= 15), que

apresentou a média dos valores significativamente maior no tratamento com a presença

das folhas secas, se comparados à média dos valores do controle sem luminosidade

(solo exposto). Os comprimentos das espécies-alvo não foram influenciados neste

bioensaio. Todavia, U. decumbens (parte radicular: F2, 38= 4,3; p= 0,021; N= 15) obteve

comprimento significativamente reduzido no tratamento de controle com sombreamento

se comparado ao controle sem sombreamento (fig. 9).

Figura 9- (A) Comprimento das espécies-alvo cultivadas por 76 dias em solo coberto com folhas secas de
Lepidaploa aurea em casa de vegetação e (B) Biomassa seca das espécies-alvo cultivadas por 76 dias em
solo coberto com folhas secas de L. aurea em casa de vegetação. As barras representam a média nos
valores de comprimento e biomassa seca das espécies-alvo em cada tratamento (serrapilheira e controles
com e sem sombreamento). Diferentes letras representam as diferenças entre os tratamentos. As análises
foram feitas para cada espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam
resultados iguais.
 63

No bioensaio de crescimento realizado em casa de vegetação no qual foram

avaliados os efeitos dos aleloquímicos radiculares de L. aurea, foram observados efeitos

inibitórios sobre o comprimento de U. decumbens, os quais não foram constatados no

bioensaio com a utilização de folhas secas da espécie doadora, na mesma condição.

Esse padrão de respostas foi diferente do observado nos testes de crescimento realizados

em laboratório, já que em condições laboratoriais os extratos de folha de L. aurea

tiveram maior influência sobre o crescimento inicial das espécies-alvo do que os

extratos de raiz.

A outra espécie testada no experimento para avaliação dos aleloquímicos das

folhas de L. aurea em casa de vegetação: L. chrysothrix, também apresentou

comportamento diferente do observado nos testes de crescimento realizados em

laboratório com o uso do extrato foliar da planta doadora. Em condições controladas, o

contato com o extrato foliar de L. aurea provocou a redução do crescimento inicial de L.

chrysothix, já em condições semi-naturais, foi observado o aumento da biomassa

radicular desta espécie-alvo no tratamento de solo coberto com folhas secas, o que

sugere a possibilidade de que aleloquímicos foliares de L. aurea tenham sido

responsáveis pelo estímulo ao crescimento desta espécie, nesta condição.

Experimentos em Campo

Nos experimentos para avaliação da germinação das espécies-alvo realizado em

condições naturais, foi constatado que os aleloquímicos produzidos por L. aurea

aparentemente tiveram pouca influência sobre a germinação das espécies-alvo em

campo, afetando somente C. langsdorffii (F1, 34= 17,4; p= 0,0002; N= 10), que teve sua

germinação estimulada, já que a espécie apresentou um número maior de sementes

 64

germinadas nas parcelas sem carvão ativado dentro das manchas de L. aurea, se

comparado ao das parcelas com carvão ativado. Para a maioria das espécies-alvo,

independente da localização da parcela (dentro ou fora das manchas), a presença do

carvão ativado não alterou significativamente os valores de germinação. Todas as

espécies-alvo apresentaram maiores valores de germinação dentro das manchas de L.

aurea (fig. 10).

Figura 10- Percentual de germinação das espécies-alvo cultivadas em campo por 6 meses, dentro e fora
de manchas de Lepidaploa aurea (áreas dominadas pela espécie) em parcelas com e sem carvão ativado.
As barras representam as médias dos percentuais de germinação das espécies-alvo em cada tratamento
(dentro - com carvão, dentro - sem carvão, fora - com carvão, fora - sem carvão). Diferentes letras
representam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas para cada espécie separadamente
e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.

Os aleloquímicos de L. aurea aparentemente não afetaram o crescimento inicial

das espécies-alvo em condições de campo, já que não foram observadas diferenças nos
 65

comprimentos e nas biomassas secas das espécies-alvo ao se comparar as parcelas com

e sem carvão ativado localizadas dentro das manchas de L. aurea. No geral, foi

observado maior crescimento inicial das espécies-alvo dentro das manchas de L. aurea

do que fora delas, com exceção da espécie C. langsdorffii (F3, 277= 3,8; p= 0,016; N= 10)

que apresentou maiores valores de biomassa seca da parte radicular nas parcelas fora

das manchas, sem, no entanto, mostrar diferenças significativas nos valores observados

nas parcelas com e sem carvão ativado (fig. 11). O tratamento fora da mancha com

carvão ativado foi desconsiderado para a espécie A. gayanus, pois neste tratamento, a

espécie apresentou um N muito pequeno, de apenas 3 indivíduos, o que poderia

influenciar erroneamente o resultado do bioensaio.

Figura 11- (A) Comprimento das espécies-alvo cultivadas em campo por 6 meses, dentro e fora de
manchas de Lepidaploa aurea, em parcelas com e sem carvão ativado. (B) Biomassa seca das espécies-
alvo cultivadas em campo por 6 meses, dentro e fora de manchas de L. aurea, em parcelas com e sem
carvão ativado. As barras representam as médias dos valores de comprimento e de biomassa seca das
espécies-alvo em cada tratamento (dentro - com carvão, dentro - sem carvão, fora - com carvão, fora -
sem carvão). Diferentes letras representam as diferenças entre os tratamentos. As análises foram feitas
para cada espécie separadamente e letras iguais sobre diferentes espécies não indicam resultados iguais.
 66

Discussão

Foi observado em condições laboratoriais, que os extratos foliares de L. aurea

produziram efeitos mais acentuados sobre o crescimento inicial das espécies-alvo do

que os extratos de raízes, o que pode ter acontecido em decorrência do fato da planta

produzir uma grande quantidade de folhas, que após liberadas no solo, formam uma

camada de serrapilheira relativamente densa, de 191g/1m², que recobre o solo abaixo

dos indivíduos de L. aurea durante todo o ano. Adicionalmente, a planta possui um

sistema radicular relativamente pequeno, o que sugere que L. aurea possivelmente

invista mais na produção e/ou alocação de aleloquímicos em suas folhas. Ademais,

resultados similares foram obtidos em bioensaios preliminares com extratos de folhas e

raizes de L. aurea sobre a germinação e o crescimento inicial de espécies-modelo

(Capítulo 1 deste trabalho). Nestes bioensaios, também foi observado, após testes de

osmolaridade, que os efeitos dos extratos foliares de L. aurea, mesmo na concentração

mais alta (10%), não foram de natureza osmótica. O mesmo padrão de respostas foi

encontrado em outros trabalhos que comparam os efeitos de extratos aquosos de folhas

e de raizes sobre o desenvolvimento inicial de espécies-alvo (Dorning & Cippolini

2005, Pereira et al. 2008).

No geral, os extratos de L. aurea testados em condições laboratoriais,

especialmente os foliares, provocaram a inibição do crescimento inicial das espécies-

alvo. A única espécie que teve o crescimento aumentado em condições controladas foi

C. Langsdorffii, que apresentou o crescimento radicular estimulado na presença do

extrato de raiz de L. aurea.

 67

Com relação aos resultados obtidos em laboratório, é importante ter em mente

que, com exceção da espécie U. decumbens, grande parte das outras espécies-alvo que

foram afetadas pelos extratos foliares e radiculares de L. aurea em condições

controladas, apresentou o crescimento reduzido somente na maior concentração dos

extratos (10%), cuja reprodução em condições naturais é pouco provável. De fato,

muitos autores discutem que as concentrações de extratos vegetais utilizadas em testes

laboratoriais frequentemente não correspondem à realidade encontrada no campo

(Inderjit & Nilsen 2003, Inderjit & Callaway 2003). Ou seja, as respostas das espécies-

alvo obtidas em testes laboratoriais, devem ser corroboradas por testes realizados em

condições semi-naturais e naturais, para que tenham, de fato, relevância na formação do

padrão de distribuição de espécies observado na área de estudo.

As diferenças nos padrões de respostas das espécies-alvo após contato com os

aleleoquímicos foliares de L. aurea observadas nos bioensaios de crescimento

realizados em condições laboratoriais e semi-naturais, podem ser explicadas pela ação

de fatores ambientais inerentes ao experimento com a utilização das folhas secas de L.

aurea em casa de vegetação, como por exemplo, efeitos da biota do solo ou da

disponibilidade de recursos, os quais podem ter provocado modificações nos efeitos

alelopáticos de L. aurea (Hadacek 2002, Macías et al. 2007, Reigosa et al. 2013) . No

experimento com a utilização de folhas secas de L. aurea em casa de vegetação também

foi observado que o comprimento da parte radicular da espécie U. decumbens foi

reduzido no tratamento de controle de luminosidade (sombrite) em comparação ao

controle sem sombreamento, o que pode ser considerado mais um indício de que fatores

ambientais possivelmente tenham afetado os resultados deste experimento. Apesar de

previamente estimado, o efeito da redução da luminosidade gerado pelo sombrite, talvez

 68

tenha sido maior do que o da serrapilheira, e possivelmente tenha se sobreposto ao

efeito alelopático de L. aurea, fazendo com que U. decumbens apresentasse menor

crescimento radicular.

Foi observada a redução da parte radicular de U. decumbens (fig. 12) e o

aumento da parte radicular de C. langsdorffii possivelmente em decorrência da ação dos

aleloquímicos produzidos pelas raizes de L. aurea, tando em laboratório quanto em casa

de vegetação. A provável ocorrência de efeitos alelopáticos de L. aurea sobre U.

decumbens e C. langsdorffii observados também em condições semi-naturais, aumenta a

evidência de que essas espécies-alvo podem ser, de fato, susceptívies à ação dos

aleloquímicos da espécie doadora. O resultado de inibição da gramínea exótica invasora

– U. decumbens, em decorrência da exposição aos aleloquímicos da espécie nativa – L.

aurea, condiz com o padrão estabelecido pela hipótese da defesa de território (homeland

security), a qual sugere que espécies exóticas introduzidas em um novo ambiente

potencialmente não possuem defesas ou possuem poucas defesas contra os

aleloquímicos de espécies nativas do local, já que as espécies não compartilham um

histórico evolutivo (Callaway & Ridenour 2004). No entanto, antes considerar que o

padrão desta hipótese esteja atuando no local de estudo, é necessário observar outros

resultados obtidos neste trabalho: Primeiro; a gramínea exótica invasora A. gayanus só

teve o crescimento inicial reduzido em laboratório, e não foi afetada nos bioensaios para

avaliação dos efeitos dos aleloquímicos radiculares de L. aurea em casa de vegetação.

Além disso, a espécie não foi testada no experimento de crescimento realizado com a

utilização de folhas secas da espécie doadora em condições semi-naturais. Sendo assim,

foi demonstrado que a atividade alelopática de L. aurea possivelmente foi responsável

pela inibição do crescimento de apenas uma espécie exótica invasora, resultado pouco
 69

consistente para extrapolação ou generalização. Segundo; foi observado o estímulo ao

crescimento radicular da gramínea nativa L. chrysothrix no experimento com o uso de

folhas secas de L. aurea em condições semi-naturais, mesmo que este efeito não tenha

sido observado anteriormente em laboratório.

Os diferentes comportamentos das gramíneas U. decumbens, A. gayanus e L.

chrysothrix, após contato com os aleloquímicos de L. aurea, sugerem que

possivelmente as diferenças nas características funcionais e/ou morfofisiológicas das

espécies, talvez tenham tido mais importância para a susceptibilidade aos aleloquímicos

de L. aurea do que o fato de elas serem exóticas ou nativas. Um exemplo desse

entendimento é o fato da espécie exótica U. decumbens possuir o hábido de crescimento

decumbente, que se caracteriza por um rápido crescimento inicial das plantas, as quais

acabam se prostrando no solo e fechando-o por completo em pouco tempo (Macedo

2002). Característica esta, diferente da outra gramínea exótica – A. gayanus, e da

gramínea nativa – L. chrysothrix, que possuem ambas o hábito de crescimento ereto,

com maior investimento em crescimento vertical, o que promove às espécies um porte

mais alto (Da Silva 2008). O crescimento inicial mais vigoroso de U. decumbens,

possivelmente faz com que esta espécie necessite de uma maior quantidade de água na

fase inicial de desenvolvimento, o que pode resultar em um maior acesso aos

aleloquímicos que estão disponíveis na água presente no substrato. De fato, o rápido

crescimento inicial de U. decumbens foi constatado em todos os bioensaios deste

trabalho, pois mesmo apresentando o crescimento inicial mais inibido pelos

aleloquímicos de L. aurea do que as outras duas gramíneas, ainda assim mostrou

maiores comprimentos ou comprimentos similares das partes aéreas e radiculares se

comparados aos das espécies A. gayanus e L. chrysothrix. Por outro lado, considerando

que A. gayanus e L. chrysothrix possuem características morfofisiológicas mais

 70

semelhantes, em decorrência do mesmo habito de crescimento, o fato de os

aleloquímicos de L. aurea aumentarem o crescimento inicial de L. chrysothrix e não

produzirem efeitos sobre o crescimento de A. gayanus, talvez possa ser explicado pelo

fato de a primeira espécie ser nativa e possuir, portanto, um histórico evolutivo com a L.

aurea. Ainda assim, para que o padrão de distribuição de espécies seja explicado pela

hipótese da defesa de território, devem ser realizados testes com mais espécies exóticas

e nativas com semelhantes características funcionais, fisiológicas e morfológicas. O

passo subsequente seria, portanto, a realização de testes para avaliação do potencial

alelopático de L. aurea sobre gramíneas nativas que convivam na mesma área com a

espécie doadora e que possuam semelhantes características morfofisiológicas e

funcionais das observadas em U. decumbens.

A B

Figura 12- (A) Urochloa decumbens após plantio em solo no qual Lepidaploa aurea foi previamente
cultivada em casa de vegetação (tratamento com carvão ativado) e (B) Urochloa decumbens após plantio
em solo no qual Lepidaploa aurea foi previamente cultivada em casa de vegetação (tratamento sem
carvão ativado).

Apesar dos aleloquímicos de L. aurea provavelmente terem beneficiado as

espécies nativas C. langsdorffii e L. chrysothrix em condições semi-naturais, eles

possivelmente também foram responsáveis pela redução do crescimento aéreo e

radicular da espécie arbórea nativa A. polyphylla, demonstrando que algumas espécies

nativas podem ser prejudicadas pelo contato com os compostos alelopáticos de L.

aurea. Essa resposta negativa de A. polyphylla aos aleloquímicos de L. aurea, indica

 71

que possivelmente, na condição semi-natural, fatores relacionados ao solo atuaram na

intensificação dos efeitos alelopáticos de L. aurea sobre esta espécie-alvo, o que pode

ter sido em decorrência da ação microbiana, através da transformação dos compostos

em subprodutos tóxicos (Inderjit 2005, Lankau 2009, Inderjit & Weston 2000, Andrade

et al. 2013). Esse entendimento pode ser reforçado pelo fato de que em bioensaios

laboratoriais preliminares com espécies-modelo, foi demonstrado que os efeitos

fitotóxicos dos extratos vegetais de L. aurea foram reduzidos pela microbiota do solo

para algumas espécies-alvo e potencializados para outras (Capítulo 1). Outra explicação

possível para a resposta de A. polyphylla observada nos testes de crescimento em

condições semi-naturais, é o fato de a espécie ocorrer tipicamente em áreas da

fitofisionomia de mata seca, diferente das outras espécies nativas testadas neste estudo –

C. langsdorffii, L. chrysothrix e L. aurea, que ocorrem preferencialmente em áreas

mais abertas do Cerrado, como no Cerrado “stricto sensu”. A diferença geográfica nos

locais de ocorrência de L. aurea e de A. polyphylla sugere que as espécies

possivelmente não possuem uma relação coevolutiva forte, o que talvez tenha se

refletido em uma maior suceptibilidade de A. polyphylla à ação alelopática de L. aurea

em condições mais próximas às naturais. Por outro lado, o maior contato entre L. aurea

e as espécies-alvo C. langsdorffii e L. chrysothrix, em decorrência da coexistencia no

mesmo ambiente, pode ter promovido nestas espécies-alvo a existência de defesas mais

eficazes contra aleloquímicos prejudiciais de L. aurea e talvez tenha possibilitado a

relação de benefício observada entre as três espécies.

O comportamento de A. polyphylla, apesar de não se tratar de uma espécie

exótica, mas de uma espécie nativa que não coexiste geograficamente com a espécie

doadora, pode indicar que a experiência evolutiva das plantas, sendo elas exóticas ou

não, é, de fato, um dos fatores importantes para a definição do padrão de distribuição

 72

de espécies existente no local de estudo. Esses resultados reforçam o entendimento de se

considerar diversos fatores para o compreensão do papel da alelopatia nas comunidades

vegetais. Para interpretações mais consistentes dos resultados de estudos que envolva o

potencial alelopático de espécies exóticas e nativas, os trabalhos devem considerar tanto

as características das espécies quanto o seu histórico evolutivo.

Idependentemente dos resultados encontrados neste trabalho não terem sido

suficientes para a comprovação ou não da existência do padrão estabelecido pela

hipótese de defesa de território no local de estudo, ainda assim, a descoberta de que L.

aurea potencialmente possa inibir o crescimento inicial de U. decumbens, uma das

gramíneas exóticas invasoras mais prejudiciais à conservação do Cerrado, pode ser

considerada como mais uma ferramenta de apoio em projetos de restauração ecológica.

A maior inibição do crescimento da parte radicular de U. decumbens observada na

presença dos aleloquímicos de L. aurea, pode ser útil no controle desta gramínea

exótica, já que raizes menos desenvolvidas em gramíneas podem facilitar sua remoção

mecânica e possivelmente resultam na redução do potencial de sobrevivência e de

rebrota destas plantas, especialmente nos meses de déficit hídrico típicos do Cerrado

durante a estação seca. Todavia, este resultado deve ser visto como um dos instrumentos

de apoio à prática da restauração ecológica em áreas invadidas pela U. decumbens, o

qual deve estar aliado a outros instrumentos e técnicas para uma maior eficiência no

restabelecimento vegetal, isso porque, apesar desta gramínea exótica aparenemente ter

tido o crescimento inibido pelos compostos alelopáticos de L. aurea, ainda assim,

mostrou maior crescimento do que a gramínea nativa testada – L. chrysothrix,

demonstrando que mesmo após ser afetada negativamente pela ação alelopática da

espécie doadora, ainda apresenta maior potencial competitivo do que a gramínea nativa.
 73

O fato dos crescimentos das espécies nativas C. langsdorffii e L. chrysothrix

aparentemente terem sido aumentados na presença de aleloquímicos de L. aurea,

reforça a utilidade da espécie em projetos de restauração ecológica, pois indica que L.

aurea pode contribuir para que o restabelecimento vegetal aconteça de forma mais

rápida. Esse resultado também pode servir de base para a seleção de um rol de espécies

nativas com as mesmas características de C. langsdorffii e L. chrysothrix, as quais

podem contribuir para o sucesso de projetos de restauração ecológica.

No geral, os aleloquímicos liberados por L. aurea não tiveram influência no

desenvolvimento inicial das espécies-alvo em campo, pois não foram observadas

diferenças entre os valores de germinação e crescimento inicial da maioria das espécies-

alvo nas parcelas sem e com carvão ativado dentro das manchas de L. aurea. A única

exceção foi a espécie C. langsdorffii que apresentou maior germinação nas parcelas sem

carvão ativado dentro das manchas, se comparada às com carvão no mesmo local, o que

indica que os aleloquímicos de L. aurea provavelmente estimularam a germinação desta

espécie. Não foram observadas diferenças nos valores de germinação de C. langsdorffii

nas parcelas sem e com carvão ativado fora das manchas de L. aurea, o que reforça a

interpretação de que os aleloquímicos foram a provável causa do aumento da

germinação da espécie. Sendo assim,os resultados de germinação em campo corroboram

o padrão de resposta de C. langsdorffii constatado nas outras fases do trabalho, em

condições de laboratório e em casa de vegetação.

Apesar de C. Langsdorffii ter tido a germinação aparentemente estimulada pelo

contato com os aleloquímicos de L. aurea em campo, foi observado, na mesma

condição, que o comprimento da parte aérea desta espécie-alvo, assim como o da outra

espécie arbórea testada – A. polyphylla, foi menor do que o das duas gramíneas exóticas

invasoras – A. gayanus e U. decumbens, padrão este, que em condições não

 74

experimentais, possivelmente pode dificultar o recrutamento das plântulas das espécies

lenhosas, através da redução da luminosidade na superfície do solo. De fato, já é bem

discutido na literatura que esta é uma das muitas características que tornam as

gramíneas exóticas tão prejudiciais ao restabelecimento vegetal em áreas naturais (Holl

2002, Florentine & Westbrooke 2004).

A maioria das espécies testadas apresentou germinação e crescimento inicial

maior nas parcelas dentro das manchas de L. aurea. Esse padrão aliado ao fato dos

aleloquímicos não terem afetado a maioria das espécies-alvo, sugere que condições

ambientais foram as prováveis responsáveis pelo melhor desenvolvimento inicial das

espécies-alvo em campo. O microclima mais ameno dentro das manchas, com menor

temperatura e maior umidade podem ter sido decisivos para os resultados observados.

De fato, Bezerra (2003) afirma que as variáveis temperatura, luminosidade e umidade

são tão importantes para estabelecimento de plantas, principalmente nos estágios

iniciais de desenvolvimento, que muitas vezes esses fatores são controlados, como no

caso da produção de mudas.

Diante dos resultados obtidos nas três condições testadas: laboratório, casa de

vegetação e campo, a hipótese do trabalho de que L. aurea possui potencial alelopático

que produz maiores efeitos inibitórios no desenvolvimento das gramíneas exóticas

invasoras A. gayanus e U. decumbens do que no de outras espécies nativas,

especialmente as arbóreas A. polyphilla e C. langsdorffii, foi corroborado para duas

espécies: U. decumbens e C. langsdorffii, já que a espécie exótica U. decumbens

apresentou redução do seu crescimento inicial na presença de aleloquímicos de L. aurea

em condições de laboratório e semi-naturais, e a espécie arbórea nativa C. langsdorffii

apresentou melhor desenvolvimento inicial sob essa mesma influência: nas três

condições testadas. Adicionalmente, os aleloquímicos foliares de L. aurea

 75

possivelmente também foram responsáveis pelo aumento do crescimento inicial de

outra espécie nativa em condições semi-naturais: a gramínea L. chrysothrix. Todavia,

esta hipótese não foi corroborada para as espécies A. gayanus e A. polyphylla, pois a

gramínea exótica invasora A. gayanus só apresentou redução do crescimento inicial em

condições laboratoriais, o que não foi observado nas outras condições: casa de

vegetação e campo, portanto, o potencial alelopático de L. aurea sobre esta espécie não

foi evidenciado. Já a espécie arbórea A. polyphylla apresentou o crescimento inicial

reduzido na presença do extrato foliar de L. aurea em laboratório e também na presença

dos aleloquímicos radiculares da espécie doadora em casa de vegetação, demonstrando,

portanto, que L. aurea porduz efeitos inibitórios no crescimento desta espécie nativa.

Já é bem discutido que em estudos de alelopatia, especialmente nos realizados

em campo, deve-se considerar vários cenários ambientais para que os efeitos

alelopáticos sejam de fato evidenciados (Nilsson 1994, Del Fabbro 2014). Neste

sentido, para a comprovação da alelopatia em campo, talvez a metodologia utilizada

neste trabalho tenha sido muito simplificada, todavia, sua execução foi de extrema

importância para a compreensão da complexidade de estudos de alelopatia em

condições naturais, possibilitando o aperfeiçoamento do método utilizado. Para um

melhor entendimento do papel da alelopatia nas interações planta-planta em campo,

devem ser realizados trabalhos com a exclusão das condições ambientais que se

sobrepuseram aos efeitos alelopáticos neste estudo, como por exemplo o plantio de

espécies-alvo em parcelas com serrapilheira da espécie doadora em campo. Outra forma

de facilitar as interpretações dos resultados de testes realizados campo é a separação da

alelopatia de outros tipos de interferência, como por exemplo a competição por recursos

(Nilsson 1994), o que pode ser feito com a realização de biensaios com a utilização de
 76

carvão ativado e de canos de PVC para separação de raízes das espécies receptora e

doadora.

A despeito dos resultados obtidos em campo, as descobertas provenientes das

outras fases do trabalho foram importantes para a confirmação de mais uma

característica de L. aurea que reforça sua escolha como uma boa alternativa para uso em

projetos de restauração ecológica: a potencial capacidade de inibição do

desenvolvimento inicial da gramínea exótica U. decumbens e o estímulo ao melhor

desenvolvimento de outras espécies nativas. Além disso, este trabalho pode servir de

base para estudos futuros na área.

 77

Discussão Geral

O potencial alelopático de L. aurea foi identificado nas três condições testadas

(laboratório, casa de vegetação e campo), em amplitudes diferentes e a partir de diversas

evidências. Os resultados foram dependentes da espécie-alvo, do processo fisiológico

avaliado (germinação ou crescimento inicial), do tipo de extrato ou da parte da planta

doadora testada (folhas, serrapilheira ou raizes) e de fatores ambientais inerentes a cada

condição.

Em laboratório, os efeitos dos compostos químicos presentes nas folhas e raizes

de L. aurea tiveram uma intensidade maior do que nas outras condições. O extrato foliar

da planta doadora foi responsável pela inibição de todas as espécies-alvo de alguma

forma, tanto das espécies-modelo quanto das espécies exóticas e nativas testadas. Em

contrapartida, em condições semi-naturais os efeitos dos aleloquímicos de L. aurea

foram menos evidentes do que o observado em laboratório, já que um número menor de

espécies-alvo foram afetadas pelos compostos alelopáticos das folhas secas e das raizes

de L. aurea em casa de vegetação. No total, duas espécies nativas, uma gramínea (L.

chrysothrix) e uma arbórea (C. langsdorffii), apresentaram aumento do crescimento

radicular em resposta aos aleloquímicos de L. aurea, e outras duas, uma exótica (U.

decumbens) e uma nativa arbórea (A. polyphylla), apresentaram redução do crescimento

inicial, nas mesmas condições.

Em campo, as evidências de alelopatia em L. aurea foram ainda mais reduzidas,

mais pôde ser observada no estímulo à germinação da espécie C. langsdorffii. As outras

espécies-alvo aparentemente tiveram seus processos fisiológicos influenciados mais

fortemente por fatores ambientais em condições naturais.

 78

A primeira hipótese do trabalho de que L. aurea possui potencial alelopático

com efeitos inibitórios sobre o desenvolvimento das gramíneas exóticas invasoras,

Andropogon gayanus e Urochloa decumbens, foi corroborada em parte e para uma das

duas espécies, já que somente U. decumbens apresentou redução do crescimento inicial

em decorrência do contato com aleloquímicos de L. aurea em mais de uma condição:

laboratório e casa de vegetação, todavia essa resposta não foi observada em condições

naturais. A outa espécie exótica invasora, A. gayanus, somente teve o crescimento

inicial reduzido pelo extrato foliar de L. aurea em condições controladas, o que foi

observado também em todas as outras espécies-alvo testadas neste bioensaio, tanto as

exóticas quanto as nativas. Considerando que esse comportamento de A. gayanus não se

repetiu no bioensaio com extrato de raiz de L. aurea em laboratório, nem nas outras

condições: casa de vegetação e campo, não há evidências suficientes da suceptibilidade

desta espécie à ação alelopática de L. aurea.

A segunda hipótese do trabalho de que o potencial alelopático de L.aurea

apresenta menores efeitos inibitórios sobre as espécies nativas arbóreas C. langsdorffii e

A. polyphylla e sobre a gramínea nativa L. chrysothris, também foi corroborado em

parte e para algumas espécies. A espécie arbórea C. langsdorffii teve melhor

desenvolvimento inicial na presença dos aleloquímicos de L. aurea, nas três condições

testadas: laboratório, casa de vegetação e campo, e a gramínea nativa L. chrysothris

aparentemente teve o crescimento inicial aumentado em decorrência do contato com os

aleloquímicos foliareas de L. aurea em casa de vegetação, sem no entanto, mostrar o

mesmo comportamento em laboratório e em campo. Por outro lado, esta hipótese foi

refutada para a outra espécie nativa arbórea, A. polyphylla, já que a espécie apresentou

redução do crescimento inicial em decorrência do contato com o extrato foliar de L.

 79

aurea em laboratório, e na presença dos aleloquímicos radiculares da planta doadora em

casa de vegetação, o que evidencia que L. aurea potencialmente pode prejudicar o

desenvolvimento inicial desta espécie nativa.

Os resultados encontrados neste trabalho confirmam a vantagem da utilização de

L. aurea em projetos de restauração ecológica. O fato de L. aurea potencialmente inibir

o crescimento de U. decumbens, e adicionalmente estimular o desenvolvimento de

outras espécies nativas, pode trazer à prática da restauração uma série de possibilidades

benéficas, que vão desde o aperfeiçoamento de técnicas, a redução de custos com o

controle de U. decumbens, até a seleção de espécies nativas com melhor desempenho no

crescimento e estabelecimento, que contribuirão de forma positiva ao restabelecimento

da vegetação original do Cerrado.

Estudos baseados em padrões de distribuição de espécies em condições naturais,

com hipóteses e justificativas claras, são fundamentais para o entendimento da

complexidade das interações planta-planta em condições naturais e podem resultar em

uma série de aplicações ecológicas e em contribuições para a conservação e o manejo de

ambientes naturais. A realização de trabalhos abrangentes, nos quais sejam

contempladas diversos fatores e condições (laboratoriais, semi-naturais e naturais) é

importante para a redução de erros na interpretação de resultados, além de contribuir

para o enriquecimento de metodologias em estudos de alelopatia, as quais se encontram

em processo de construção e aperfeiçoamento no mundo inteiro.

 80

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