LAPORAN AKHIR

PRAKTIKUM METODE PEMISAHAN

CABAI (Capsicum frutescens)

Kelas:
Kelompok:
1. Amalia Venturini (1513015085)
2. Arief Risky Nugroho (1513015097)
3. Asri Dwi Endah Dewi Pramesthi (1513015105)
4. Gina Ardian Putri Oktafiani (1513015063)

LABORATORIUM KIMIA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MULAWARMAN
SAMARINDA
2016
 LEMBAR PENGESAHAN

Sampel :Cabai
Praktikum :Metode Pemisahan Kimia
Asisten : 1. Dina Sofia
2.Wulan Maulida
DosenPengampu : 1. Akhmad Jaizzur Rija’i, S.Farm.,M.Si
2. M. Arifuddin, M.Si., Apt.
3. Viriyanata Wijaya, S.Farm., M.Farm., Apt.

Praktikan
a. Amalia Venturini (1513015085)
b. Arief Risky Nugroho (1513015097)
c. Asri Dwi Endah Dewi Pramesthi (1513015105)
d. Gina Ardian Putri Oktafiani (1513015063)

Samarinda, 2016

Diperiksa oleh Ketua

Dina Sofia Asri Dwi Endah Dewi Pramesthi

Mengetahui

Viriyanata Wijaya, S.Farm., M.Farm., Apt.

 DAFTAR ISI

DAFTAR ISI.................................................................................................................1
Bab I Pendahuluan.......................................................................................................3
Bab II Tinjauan Pustaka.............................................................................................4
II. 1 Uraian Tumbuhan.....................................................................................................4
II. 1. 1 Klasifikasi.......................................................................................................4
II. 1. 2 Morfologi................................................................................................................4
II. 1. 2. 1 Batang.................................................................................................................5
II. 1. 2. 2 Daun....................................................................................................................5
II. 1. 2. 3 Bunga..................................................................................................................5
II. 1. 2. 4 Buah....................................................................................................................5
II. 1. 2. 5 Biji.......................................................................................................................6
II. 1. 2. 6 Akar....................................................................................................................6
II. 1. 3 Senyawa Kimia.......................................................................................................6
II. 2 Ekstraksi....................................................................................................................7
II. 2. 1 Pengertian..............................................................................................................7
II. 2. 2 Metode Ekstraksi...................................................................................................7
II. 2. 2. 1 Jenis- Jenis Ekstraksi........................................................................................7
II. 3 Fraksinasi...................................................................................................................9
II. 4 Metoda Pemisahan..................................................................................................10
II. 4. 1 Kromatografi Lapis Tipis...................................................................................13
II. 4. 2 Kromatografi Cair Vakum.............................................................................…14
II. 4. 3 Kromatpgrafi Konvensional...........................................................................…16
II. 4. 4 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif.................................................................18
II. 4. 5 Kromatografi Lapis Tipis Sentrifugal (KROMATOTRON)............................19
II. 4. 6 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi..................................................................21
Bab III Metodologi.....................................................................................................24
Bab IV Alat dan Bahan.............................................................................................27
IV. 1 Alat..........................................................................................................................27
IV. 2 Bahan......................................................................................................................27
Bab V Prosedur Percobaan.......................................................................................28
V. 1 Ekstraksi...................................................................................................................28
V. 2 Fraksinasi.................................................................................................................28
V. 3 Kromatografi Lapis Tipis........................................................................................28
V. 4 Kromatografi Konvensional....................................................................................28
V. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi......................................................................29
Bab VI Pembahasan...................................................................................................30
VI. 1 Ekstraksi.................................................................................................................30
VI. 2 Fraksinasi................................................................................................................31
VI. 3 Kromatografi Lapis Tipis......................................................................................32
VI. 4 Kromatografi Konvensional..................................................................................33
VI. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi....................................................................33

1
Bab VII Kesimpulan dan Saran...............................................................................34
VII. Kesimpulan..............................................................................................................34
VII. Saran.........................................................................................................................34
Daftar Pustaka............................................................................................................35
Lampiran...................................................................................................................39

2
 Bab I Pendahuluan

Cabai merupakan salah satu komoditas sayuran penting dan bernilai

ekonomi tinggi di Indonesia. Tanaman ini dikembangkan baik di dataran rendah
maupun dataran tinggi. Menurut Badan Pusat Statistik (2009), produktivitas cabai
nasional Indonesia tahun 2008 adalah 6.44 ton ha-1. Angka tersebut masih sangat
rendah jika dibandingkan dengan potensi produksinya. Menurut Purwati et al.
(2000) potensi produktivitas cabai nasional dapat mencapai 12 ton ha-1 (Syukur,
2010).
Tanaman Cabai (Capsicum frutescens) yang merupakan tanaman perdu
dengan rasa buah pedas ini sangat familiar di kehidupan kita. Mayoritas penduduk
Indonesia merupakan penggemar dari tanaman tersebut. Tanaman ini kerap
dibudidayakan di pekarangan rumah sebagai tanaman sayur atau tumbuh liar pada
tanah kosong. Tumbuhan ini berasal dari Amerika Tropik, menyukai daerah
kering, dan ditemukan pada ketinggian 0,5-1250 mdpl. Perdu setahun dengan
banyak percabangan dan tinggi sekitar 50-100 cm ini, memiliki batang yang
berbuku-buku dengan bagian atas bersudut. Daun tunggal bulat telur, ujung
meruncing, pangkal menyempit, tepi rata, dan berwarna hijau, bertangkai dan
tidak berselingan.
(Dalimartha, 2000)
Cabai dengan rasa pedas, dengan sifat panas, digunakan untuk dapat
meningkatkan nafsu makan, menyembuhkan batuk berdahak, migraine, serta
melegakan rasa hidung tersumbat pada sinusitis. Memiliki kandungan kimia pada
buahnya berupa kapsaisin, karotenoid, alkaloid, resin, dan vitamin khususnya A
dan C. Kapsaisin terkandung pada buah cabai yang memberikan rasa pedas, dapat
berkhasiat untuk melancarkan aliran darah serta pematirasa kulit. Sedangkan pada
biji cabai mengandung solanine, solamargine, solasodine, solasomine, dan steroid
saponin atau kapsisidin yang dapat berkhasiat sebagai antibiotik (Dalimartha,
2000).

3
 Bab II Tinjauan Pustaka

II. 1 Uraian Tumbuhan

II. 1. 1 Klasifikasi

Cabai rawit (Capsicum frutescens L.) merupakan salah satu tanaman

hortikultura dari famili Solanaceae yang memiliki nilai ekonomi tinggi (Cahyono,
2003). Cabai rawit digunakan sebagai bumbu masakan dan bahan obat (Heyne,
1987). Menurut Rukmana (2002), secara umum buah cabai rawit mengandung zat
gizi antara lain lemak, protein, karbohidrat, kalsium, fosfor, besi, vitamin A, B1,
B2, C dan senyawa alkaloid seperti capsaicin, oleoresin, flavanoid dan minyak
esensial. Kandungan tersebut banyak dimanfaatkan sebagai bahan bumbu masak,
ramuan obat tradisional, industri pangan dan pakan unggas. Selain maanfaatnya,
juga harus diketahui klasifikasi tumbuhan cabai rawit ini.

Berikut klasifikasinya :

Kingdom Plantae (Tumbuhan), Subkingdom Tracheobionta (Tumbuhan

berpembuluh), Super Divisi Spermatophyta (Menghasilkan biji), Divisi
Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga), Kelas Magnoliopsida (berkeping dua /
dikotil), Sub Kelas Asteridae, Ordo Solanales, Famili Solanaceae (suku terung-
terungan), Genus Capsicum, Spesies Capsicum frutescens L.

II. 1. 2 Morfologi

C. frutescens L. adalah tumbuhan berupa terna, hidup mencapai 2 atau 3

tahun. Bunga muncul berpasangan di bagian ujung ranting dalam posisi tegak,
mahkota bunga berwarna kuning kehijauan atau hijau keputihan dengan bentuk

4
seperti bintang. Buah muncul berpasangan pada setiap ruas, rasa cenderung sangat
pedas, bentuk buah bervariasi mulai dari bulat memanjang atau setengah kerucut,
warna buah setelah masak biasanya merah dengan posisi buah tegak. Spesies ini
kadang-kadang disebut cabai burung (Undang, 2015).

II. 1. 2. 1 Batang

Batang tanaman cabai rawit memiliki struktur yang keras dan berkayu,
berwarna hijau gelap, berbentuk bulat, halus dan bercabang banyak. Batang utama
tumbuh tegak dan kuat. Percabangan terbentuk setelah batang tanaman mencapai
ketinggian berkisar antara 30-45 cm. cabang tanaman beruas-ruas, setiap ruas
ditumbuhi daun dan tunas (cabang).

II. 1. 2. 2 Daun

Daun berbentuk bulat telur dengan ujung runcing dan tepi daun rata (tidak
bergerigi/berlekuk) ukuran daun lebih kecil dibandingkan dengan daun tanaman
cabai besar. Daun merupakan daun tunggal dengan kedudukan agak mendatar,
memiliki tulang daun menyirip dan tangkai tunggal yang melekat pada
batang/cabang. Jumlah daun cukup banyak sehingga tanaman tampak rimbun.

II. 1. 2. 3 Bunga

Bunga tanaman cabai rawit merupakan bunga tunggal yang berbentuk

bintang. Bunga tumbuh menunduk pada ketiak daun dengan mahkota bunga
berwarna putih. Penyerbukan bunga termasuk penyerbukan sendiri (self
pollinated crop), namun dapat juga terjadi secara silang, dengan keberhasilan
sekitar 56%.

II. 1. 2. 4 Buah

Buah cabai rawit akan terbentuk stelah terjadi penyerbukan. Buah

memiliki keanekaragaman dalam hal ukuran, bentuk, warna dan rasa buah. Buah
cabai rawit dapat berbentuk bulat pendek dengan ujung runcing/berbentuk
kerucut. Ukuran buah bervariasi, menurut jenisnya cabai rawit yang kecil-kecil

5
memiliki ukuran panjang antara  2-2,5 cm dan lebar 5 mm. sedangkan cabai rawit
yang agak besar memiliki ukuran yang mencapai 3,5 cm dan lebar mencapai 12
mm.

Warna buah cabai rawit bervariasi buah muda berwarna hijau/putih

sedangkan buah yang telah masak  berwarna merah menyala/merah jingga (merah
agak kuning) pada waktu masih muda, rasa buah cabai rawit kurang pedas, tetapi
setelah masak menjadi pedas.
(Undang, 2015)

II. 1. 2. 5 Biji

Biji cabai rawit berwarna putih kekuningan-kuningan, berbentuk bulat

pipih, tersusun berkelompok (bergerombol) dan saling melekat pada empulur.
Ukuran biji cabai rawit lebih kecil dibandingkan dengan biji cabai besar. Biji-biji
ini dapat digunakan dalam perbanyakan tanaman (perkembangbiakan).
(Undang, 2015)

II. 1. 2. 6 Akar

Perakaran cabai rawit terdiri atas akar tunggang yang tumbuh lurus ke
pusat bumi dan akar serabut yang tumbuh menyebar ke samping. Perakaran
tanaman tidak dalam sehingga tanaman hanya dapat tumbuh dan berkembang
dengan baik pada tanah yang gembur, porous (mudah menyerap air) dan subur.
(Undang, 2015)

II. 1. 3 Senyawa Kimia

Pada buah cabai terkandung beberapa vitamin. Salah satu vitamin dalam
buah cabai adalah vitamin C (asam askorbat) (Rachmawati,2009). Menurut
Warisno(2010) cabai rawit banyak mengandung vitamin A dibandingkan cabai
lainnya. Cabai rawit segar mengandung 11.050 SI vitamin A, sedangkan cabai
rawit kering mengandung mengandung 1.000 SI. Sementara itu, cabai hijau segar

6
hanya mengandung 260 vitamin A, cabai merah segar 470, dan cabai merah
kering 576 SI. Kandungan vitamin A pada cabai rawit bermanfaat untuk
kesehatan mata dan untuk menyembuhkan sakit tenggorokan.
Cabai mengandung kurang lebih 1,5% rasa pedas. Rasa pedas tersebut
disebabkan oleh senyawa kapsaisin dan dihidrokapsaisin. Kandungan kapsaisin
pada cabai bersifat sebagai pembangkit selera makan. Kapsaisin menstimulus
hormon ebdophrin yang memberi efek nikmat, sehingga ketika seseorang
menyantap makanan berbumbu cabai cenderung menambah porsi makannya
(Dwijoseputro G. 1994).
Kandungan Gizi Dalam Tiap 100 Gram Cabai Rawit Kering.
Kalori (kal) - ; Protein (g) 15,00 ; Lemak (g) 11,00 ; Karbohidrat (g) 33,00 ;
Kalsium (g) 150,00 ; Fosfor (mg) - ; Vitamin A (Si) 1.000,00 ; Zat besi (mg)
9,00 ; Vitamin B1 (mg) 0,50 ; Vitamin C (mg) 10,00 ; Air (g) 8,00 ; Bagian yang
dapat dimakan (Bdd, %) 90,00 (Dwijoseputro G. 1994).

II. 2 Ekstraksi
II. 2. 1 Pengertian

Ekstraksi adalah teknik penarikan kandungan kimia yang dapat larut

sehingga terpisah dari kandungan atau bahan yang tidak larut dalam pelarut cair.
Hasil yang didapatkan dari proses ekstraksi dinamakan ekstrak atau sediaan kental
yang diperoleh dari mengekstraksi zat aktif yang dimiliki simplisia menggunakan
pelarut yang sesuai, kemudian dimaserasi dan diperlakukan sedemikian rupa
sampai hasil yang diinginkan. Cairan penyari yang biasa digunakan untuk
ekstraksi adalah air, etanol, dan etanol air atau eter (Dirjen POM, 2000).

II. 2. 2 Metode Ekstraksi

II. 2. 2. 1 Jenis-Jenis Ekstraksi

Ekstraksi dengan pelarut dapat dilakukan dengan cara dingin dan cara
panas. Jenis-jenis ekstraksi tersebut sebagai berikut:

1. Ekstraksi secara dingin

7
a. Maserasi

Maserasi, merupakan cara penyarian sederhana yang dilakukan dengan

cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada
temperatur kamar dan terlindung dari cahaya.
Metode maserasi digunakan untuk menyari simplisia yang mengandung
komponen kimia yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung
benzoin, tiraks dan lilin (Sudjadi, 1988).
Keuntungan dari metode ini adalah peralatannya sederhana. Sedang
kerugiannya antara lain waktu yang diperlukan untuk mengekstraksi sampel
cukup lama, cairan penyari yang digunakan lebih banyak, tidak dapat digunakan
untuk bahan-bahan yang mempunyai tekstur keras seperti benzoin, tiraks dan lilin.
(Sudjadi, 1988)
b. Soxhletasi
Soxhletasi merupakan penyarian simplisia secara berkesinambungan,
cairan penyari dipanaskan sehingga menguap, uap cairan penyari terkondensasi
menjadi molekul-molekul air oleh pendingin balik dan turun menyari simplisia
dalam klongsong dan selanjutnya masuk kembali ke dalam labu alas bulat setelah
melewati pipa sifon (Sudjadi, 1988).
Keuntungan metode ini adalah dapat digunakan untuk sampel dengan
tekstur yang lunak dan tidak tahan terhadap pemanasan secara langsung.
Digunakan pelarut yang lebih sedikit. Pemanasannya dapat diatur (Sudjadi, 1988).
Kerugian dari metode ini adalah karena pelarut didaur ulang, ekstrak yang
terkumpul pada wadah di sebelah bawah terus-menerus dipanaskan sehingga
dapat menyebabkan reaksi peruraian oleh panas. Jumlah total senyawa-senyawa
yang diekstraksi akan melampaui kelarutannya dalam pelarut tertentu sehingga
dapat mengendap dalam wadah dan membutuhkan volume pelarut yang lebih
banyak untuk melarutkannya. Bila dilakukan dalam skala besar, mungkin tidak
cocok untuk menggunakan pelarut dengan titik didih yang terlalu tinggi, seperti
metanol atau air, karena seluruh alat yang berada di bawah komdensor perlu

8
berada pada temperatur ini untuk pergerakan uap pelarut yang efektif (Sudjadi,
1988).
Metode ini terbatas pada ekstraksi dengan pelarut murni atau campuran
azeotropik dan tidak dapat digunakan untuk ekstraksi dengan campuran pelarut,
misalnya n-heksan : diklorometan = 1 : 1, atau pelarut yang diasamkan atau
dibasakan, karena uapnya akan mempunyai komposisi yang berbeda dalam
pelarut cair di dalam wadah (Sudjadi, 1988).
c. Perkolasi
Perkolasi adalah cara penyarian dengan mengalirkan penyari melalui
serbuk simplisia yang telah dibasahi. Keuntungan metode ini adalah tidak
memerlukan langkah tambahan yaitu sampel padat (marc) telah terpisah dari
ekstrak. Kerugiannya adalah kontak antara sampel padat tidak merata atau terbatas
dibandingkan dengan metode refluks, dan pelarut menjadi dingin selama proses
perkolasi sehingga tidak melarutkan komponen secara efisien (Harborne, 1987).

2. Ekstraksi secara panas

a. Metode refluks

Keuntungan dari metode ini adalah digunakan untuk mengekstraksi

sampel-sampel yang mempunyai tekstur kasar dan tahan pemanasan langsung.
Kerugiannya adalah membutuhkan volume total pelarut yang besar dan
sejumlah manipulasi dari operator (Harborne, 1987).
b. Metode destilasi uap
Destilasi uap adalah metode yang popular untuk ekstraksi minyak-minyak
menguap (esensial) dari sampel tanaman. Metode destilasi uap air diperuntukkan
untuk menyari simplisia yang mengandung minyak menguap atau mengandung
komponen kimia yang mempunyai titik didih tinggi pada tekanan udara normal
(Harborne, 1987).
Pelarut yang baik untuk ekstraksi adalah pelarut yang mempunyai daya
melarutkanyang tinggi terhadap zat yang diekstraksi. Daya melarutkan yang tinggi
ini berhubungan dengan kepolaran pelarut dan kepolaran senyawa yang

9
diekstraksi. Terdapat kecenderungan kuat bagi senyawa polar larut dalam pelarut
polar dan sebaliknya (Harborne, 1987).

II. 3 Fraksinasi
Fraksinasi adalah proses pemisahan suatu kuantitas tertentu dari campuran
(padat, cair, terlarut,suspensi atau isotop) dibagi dalam beberapa jumlah kecil
(fraksi) komposisi perubahan menurut kelandaian. Pembagian atau pemisahan ini
didasarkan pada bobot dari tiap fraksi, fraksi yang lebih berat akan berada paling
dasar sedang fraksi yang lebih ringan akan berada diatas. Fraksinasi bertingkat
biasanya menggunakan pelarut organik seperti eter, aseton, benzena, etanol,
diklorometana, atau campuran pelarut tersebut. Asam lemak, asam resin, lilin,
tanin, dan zat warna adalah bahan yang penting dan dapat diekstraksi dengan
pelarut organik (Adijuwana dan Nur, 1989).
Fraksinasi merupakan suatu proses yang bertujuan memisahkan komponen
kimia dari suatu ekstrak menjadi fraksi-fraksi yang lebih spesifik, misalnya
berdasarkan kepolarannya, sifat asam basa dan lain sebagainya.
Fraksinasi cair-cair adalah proses pemisahan zat terlarut di dalam 2 macam
zat pelarut yang tidak saling bercampur atau dengan kata lain perbandingan
konsentrasi zat terlarut dalam pelarut organik, dan pelarut air. Hal tersebut
memungkinkan karena adanya sifat senyawa yang dapat larut air dan ada pula
senyawa yang larut dalam pelarut organik. Satu komponen dari campuran akan
memiliki kelarutan dalam kedua lapisan tersebut (biasanya disebut fase) dan
setelah beberapa waktu dicapai keseimbangan biasanya dipersingkat oleh
pencampuran kedua fase tersebut dalam corong pisah (Khopkar, 2008).

10
 Fraksinasi padat cair adalah proses pemisahan untuk memperoleh
komponen zat terlarut dari campurannya dalam padatan dengan menggunakan
pelarut yang sesuai. Dapat juga didefenisikan sebagai dispersi komponen kimia
dari ekstrak yang telah dikeringkan dalam suatu pelarut yang sesuai berdasarkan
kelarutan dari komponen kimia dan zat-zat yang tidak diinginkan seperti garam-
garam tidak dapat larut. Operasi ekstraksi ini dapat dilakukan dengan mengaduk
suspensi padatan di dalam wadah dengan atau tanpa pemanasan (Roy, 1991).
Fraksinasi bertingkat umumnya diawali dengan pelarut yang kurang polar
dan dilanjutkan denganpelarut yang lebih polar. Tingkat polaritas pelarut dapat
ditentukan dari nilai konstanta dielektrik pelarut. Empat tahapan fraksinasi
bertingkat dengan menggunakan empat macam pelarut yaitu:1. ekstraksi aseton; 2.
fraksinasi n-heksan;3. fraksinasi etil eter; 4. fraksinasi etil asetat (Lestari dan Pari,
1990).

II. 4 Metode Pemisahan

Metode pemisahan merupakan suatu cara yang digunakan untuk
memisahkan atau memurnikan suatu senyawa atau sekelompok senyawa yang
mempunyai susunan kimia yang berkaitan dari suatu bahan, baik dalam skala
laboratorium maupun skala industri. Metode pemisahan bertujuan untuk
mendapatkan zat murni atau beberapa zat murni dari suatu campuran, sering
disebut sebagai pemurnian dan juga untuk mengetahui keberadaan suatu zat dalam
suatu sampel (analisis laboratorium).
(Lukum,2005).
Berdasarkan tahap proses pemisahan, metode pemisahan dapat dibedakan
menjadi dua golongan, yaitu metode pemisahan sederhana dan metode pemisahan
kompleks.
1. Metode Pemisahan Sederhana
Metode pemisahan sederhana adalah metode yang menggunakan cara satu
tahap. Proses ini terbatas untuk memisahkan campuran atau larutan yang relatif
sederhana.
2. Metode Pemisahan Kompleks

11
 Metode pemisahan kompleks memerlukan beberapa tahapan kerja,
diantaranya penambahan bahan tertentu,pengaturan proses mekanik alat, dan
reaksi-reaksi kimia yang diperlukan. Metode ini biasanya menggabungkan dua
atau lebih metode sederhana. Contohnya, pengolahan bijih dari pertambangan
memerlukan proses pemisahan kompleks (Lukum, 2005).
Keadaan zat yang diinginkan dan dalam keadaan campuran harus
diperhatiakn untuk menghindari kesalahan pemilihan metode pemisahan yang
akan menimbulkan kerusakan hasil atau melainkan tidak berhasil. Beberapa faktor
yang perlu diperhatikan antara lain : Keadaan zat yang diinginkan terhadap
campuran, apakah zat ada di dalam sel makhluk hidup, apakah bahan terikat
secara kimia, dan sebagainya.
Kadar zat yang diinginkan terhadap campurannya, apakah kadarnya kecil
atau besar. Sifat khusus dari zat yang diinginkan dan campurannya, misalnya zat
tidak tahan panas, mudah menguap, kelarutan terhadap pelarut tertentu, titik didih,
dan sebagainya. Standar kemurnian yang diinginkan. Kemurnian 100%
memerlukan tahap yang berbeda dengan 96%. zat pencemar dan campurannya
yang mengotori beserta sifatnya. Nilai guna zat yang diinginkan, harga, dan biaya
proses pemisahan.
(Lukum,2005)
Suatu zat dapat dipisahkan dari campurannya karena mempunyai
perbedaan sifat. Hal ini dinamakan dasr pemisahan. Beberapa dasar pemisahan
campuran antara lain sebagai berikut :

1. Ukuran partikel

Bila ukuran partikel zat yang diinginkan berbeda dengan zat yang tidak
diinginkan (zat pencampur) dapat dipisahkan dengan metode filtrasi
(penyaringan). jika partikel zat hasil lebih kecil daripada zat pencampurnya, maka
dapat dipilih penyring atau media berpori yang sesuai dengan ukuran partikel zat
yang diinginkan. Partikel zat hasil akan melewati penyaring dan zat
pencampurnya akan terhalang.

12
2. Titik didih

Bila antara zat hasil dan zat pencampur memiliki titik didih yang jauh
berbeda dapat dipishkan dengan metode destilasi. Apabila titik didih zat hasil
lebih rendah daripada zat pencampur, maka bahan dipanaskan antara suhu didih
zat hasil dan di bawah suhu didih zat pencampur. Zat hasil akan lebih cepat
menguap, sedangkan zat pencampur tetap dalam keadaan cair dan sedikit
menguap ketika titik didihnya terlewati. Proses pemisahan dengan dasar
perbedaan titik didih ini bila dilakukan dengan kontrol suhu yang ketat akan dapat
memisahkan suatu zat dari campuranya dengan baik, karena suhu selalu dikontrol
untuk tidak melewati titik didih campuran.
(Lukum,2005)

3. Kelarutan

Suatu zat selalu memiliki spesifikasi kelarutan yang berbeda, artinya suatu
zat selalu memiliki spesifikasi kelarutan yang berbeda, artinya suatu zat mungkin
larut dalam pelarut A tetapi tidak larut dalam pelarut B, atau sebaliknya. Secara
umum pelarut dibagi menjadi dua, yaitu pelarut polar, misalnya air, dan pelarut
nonpolar (disebut juga pelarut organik) seperti alkohol, aseton, methanol,
petrolium eter, kloroform, dan eter.
Dengan melihat kelarutan suatu zat yang berbeda dengan zat-zat lain
dalam campurannya, maka kita dapat memisahkan zat yang diinginkan tersebut
dengan menggunakan pelarut tertentu (Lukum,2005).
4. Pengendapan
Suatu zat akan memiliki kecepatan mengendap yang berbeda dalam suatu
campuran atau larutan tertentu. Zat-zat dengan berat jenis yng lebih besar
daripada pelarutnya akan segera mengendap. Jika dalam suatu campuran
mengandung satu atau beberapa zat dengan kecepatan pengendapan yang berbeda
dan kita hanya menginginkan salah satu zat, maka dapat dipisahkan dengan
metode sedimentsi tau sentrifugasi. Namun jika dalm campuran mengandung

13
lebih dari satu zat yang akan kita inginkan, maka digunakan metode presipitasi.
Metode presipitasi biasanya dikombinasi dengan metode filtrasi (Lukum, 2005).

5. Difusi

Dua macm zat berwujud cair atau gas bila dicampur dapat berdifusi
(bergerak mengalir dan bercampur) satu sama lain. Gerak partikel dapat
dipengaruhi oleh muatan listrik. Listrik yang diatur sedemikian rupa (baik
besarnya tegangan maupun kuat arusnya) akan menarik partikel zat hasil ke arah
tertentu sehingga diperoleh zat yang murni. Metode pemisahan zat dengan
menggunakan bantuan arus listrik disebut elektrodialisis. Selain itu kita mengenal
juga istilah elektroforesis, yaitu pemisahan zat berdasarkan banyaknya nukleotida
(satuan penyusun DNA) dapat dilakukan dengan elektroforesis menggunakan
suatu media agar yang disebut gel agarosa.
(Lukum,2005)

6. Adsorbsi

Adsorbsi merupakan penarikan suatu zat oleh bahan pengadsorbsi secara

kuat sehingga menempel pada permukaan dari bahan pengadsorbsi. Penggunaan
metode ini diterapkan pada pemurnian air dan kotoran renik atau organisme
(Lukum,2005).

II. 4. 1 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi Lapis Tipis Yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng
gelas atau alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel, atau
bahan serbuk lainnya. Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan metode
pilihan pertama pada pemisahan dengan kromatografi.
Kromatografi lapis tipis digunakan untuk pemisahan senyawa secara cepat,
dengan menggunakan zat penjerap berupa serbuk halus yang dipaliskan serta rata
pada lempeng kaca. Lempeng yang dilapis, dapat dianggap sebagai “kolom

14
kromatografi terbuka” dan pemisahan dapat didasarkan pada penyerapan,
pembagian atau gabungannya, tergantung dari jenis zat penyerap dan cara
pembuatan lapisan zat penyerap dan jenis pelarut. Kromatografi lapis tipis dengan
penyerap penukar ion dapat digunakan untuk pemisahan senyawa polar. Harga Rf
yang diperoleh pada kromatografi lapis tipis tidak tetap, jika dibandingkan dengan
yang diperoleh pada kromatografi kertas. Oleh karena itu pada lempeng yang
sama di samping kromatogram zat yang di uji perlu dibuat kromatogram zat
pembanding kimia, lebih baik dengan kadar yang berbeda-beda (Dirjen POM,
1979).
Prinsip kerjanya yaitu memisahkan sampel berdasarkan perbedaan
kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan. Teknik ini biasanya
menggunakan fase diam dari bentuk plat silika dan fase geraknya disesuaikan
dengan jenis sampel yang ingin dipisahkan. Larutan atau campuran larutan yang
digunakan dinamakan eluen Semakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen
maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut.
(Rohman,2009)
Kelebihan penggunaan kromatografi lapis tipis dibandingkan dengan
kromatografi kertas adalah karena dapat dihasilkannya pemisahan yang lebih
sempurna, kepekaan yang lebih tinggi, dan dapat dilaksanakan dengan lebih
cepat
(Adnan, 1997).

II. 4. 2 Kromatografi Cair Vakum

Kromatografi Cair Vakum (KCV) merupakan salah satu metode fraksinasi
yaitu dengan memisahkan crude extract menjadi fraksi-fraksinya yang lebih
sederhana. Pemisahan tersebut memanfaatkan kolom yang berisi fasa diam dan
aliran fasa geraknya dibantu dengan pompa vakum. Fasa diam yang digunakan
dapat berupa silika gel atau alumunium oksida (Ghisalberti, 2008).
Kromatografi kolom cair dapat dilakukan pada tekanan atmosfer atau pada
tekanan lebih besar dari atmosfer dengan menggunakan bantuan tekanan luar

15
misalnya gas nitrogen. Untuk keberhasilan praktikan di dalam bekerja dengan
menggunakan kromatografi kolom vakum cair, oleh karena itu syarat utama
adalah mengetahui gambaran pemisahan cuplikan pada kromatografi lapis tipis.
(Harris, 1982).
Kromatografi vakum cair dilakukan untuk memisahkan golongan senyawa
metabolit sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel sebagai absorben
dan berbagai perbandingan pelarut n-heksana : etil asetat : metanol (elusi gradien)
dan menggunakan pompa vakum untuk memudahkan penarikan eluen (Helfman,
1983).
Kromatografi merupakan salah satu metode pemisahan komponen-
komponen campuran dimana cuplikan berkesetimbangan di antara dua fasa, fasa
gerak yang membawa cuplikan dan fasa diam yang menahan cuplikan secara
selektif. Bila fasa gerak berupa gas, disebut kromatografi gas, dan sebaliknya
kalau fasa gerak berupa zat cair, disebut kromatografi cair (Hendayana, 1994).
Adapun cara kerja kromatografi cair vakum yaitu kolom kromatografi
dikemas kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT 10-40 μm) dalam keadaan
vakum agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Vakum dihentikan, pelarut
yang kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan penjerap lalu divakumkan
lagi. Kolom dipisah sampai kering dan sekarang siap dipakai (Hostettman, 1986).
Kromatografi ialah cara pemisahan berdasarkan perbedaan kecepatan zat-
zat terlarut yang bergerak bersama-sama dengan pelarutnya pada permukaan suatu
benda penyerap. Cara ini umum dilakukan pada pemisahan zat-zat berwarna
(bahasa Yunani: chromos = warna) (Kennedy, 1990).
Kromatografi vakum cair merupakan salah satu jenis dari kromatografi
kolom. Kromatografi kolom merupakan suatu metode pemisahan campuran
larutan dengan perbandingan pelarut dan kerapatan dengan menggunakan bahan
kolom. Kromatografi kolom lazim digunakan untuk pemisahan dan pemurnian
senyawa. (Schill, 1978)
Fasa diam yang digunakan dikemas dalam kolom yang digunakan dalam
KCV. Proses penyiapan fasa diam dalam kolom terbagi menjadi dua macam, yaitu
(Sarker et al., 2006):

16
a. Cara Basah
Preparasi fasa diam dengan cara basah dilakukan dengan melarutkan fasa
diam dalam fase gerak yang akan digunakan. Campuran kemudian dimasukkan ke
dalam kolom dan dibuat merata. Fase gerak dibiarkan mengalir hingga terbentuk
lapisan fase diam yang tetap dan rata, kemudian aliran dihentikan.

b. Cara kering
Preparasi fasa diam dengan cara kering dilakukan dengan cara
memasukkan fase diam yang digunakan ke dalam kolom kromatografi. Fase diam
tersebut selanjutnya dibasahi dengan pelarut yang akan digunakan. Preparasi
sampel saat akan dielusi dengan KCV juga memiliki berbagai metode seperti
preparasi fasa diam. Metode tersebut yaitu cara basah dan cara kering.
(Canell, 1998).
Preparasi sampel cara basah dilakukan dengan melarutkan sampel dalam
pelarut yang akan digunakan sebagai fasa gerak dalam KCV. Larutan dimasukkan
dalam kolom kromatografi yang telah terisi fasa diam. Bagian atas dari sampel
ditutupi kembali dengan fasa diam yang sama. Sedangkan cara kering dilakukan
dengan mencampurkan sampel dengan sebagian kecil fase diam yang akan
digunakan hingga terbentuk serbuk. Campuran tersebut diletakkan dalam kolom
yang telah terisi dengan fasa diam dan ditutup kembali dengan fase diam yang
sama.
(Sarker et al., 2006).

II. 4. 3 Kromatografi Konvensional

Kromatografi kolom merupakan metode kromatografi klasik yang masih
banyak digunakan. Kromatografi kolom digunakan untuk memisahkan senyawa-
senyawa dalam jumlah yang banyak berdasarkan adsorpsi dan partisi. Kemasan
adsorben yang sering digunakan adalah silika gel G-60, kieselgur, Al 2O3, dan
Diaion.

17
 Kromatografi kolom adalah kromatografi yang menggunakan kolom
sebagai alat untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran. Alat
tersebut berupa pipa gelas yang dilengkapi suatu kran dibagian bawah kolom
untuk mengendalikan aliran zat cair, ukuran kolom tergantung dari banyaknya zat
yang akan dipindahkan. Secara umum perbandingan panjang dan diameter kolom
sekitar 8:1 sedangkan daya penyerapnya adlah 25-30 kali berat bahan yang akan
dipisahkan. Teknik banyak digunakan dalam pemisahan senyawa-senyawa
organic dan konstituen-konstituen yang sukar menguap sedangkan untuk
pemisahan jenis logan-logam atau senyawa anorganik jarang dipakai (Yazid,
2005).
Pelarut (fase gerak) dibiarkan mengalir melalui kolom karena aliran yang
disebabkan oleh gaya berat atau didorong dengan tekanan. Pita, senyawa linarut
bergerak melalui kolom dengan laju yang berbeda, memisah dan dikumpulkan
berupa fraksi ketika keluar dari alas kolom. Kromatografi kolom konvensional
memiliki berbagai keterbatasan dalam penggunannya, kromatografi kolom vakum
dapat meningkatkan laju pengelusian dan mempersingkat waktu kontak linarut
dengan penjerap.
Metode pemisahan kromatografi kolom ini memerlukan bahan kimia yang
cukup banyak sebagai fasa diam dan fasa bergerak bergantung pada ukuran kolom
gelas. Untuk melakukan pemisahan campuran dengan metode kromatografi kolom
diperlukan waktu yangcukup lama, bias berjam-jam hanya untuk memisahkan
satu campuran. Selain itu, hasil pemisahan kurang jelas artinya kadang-kadang
sukar mendapatkan pemisahan secara sempurna karena pita komponen yang satu
bertumpang tindih dengan komponen lainnya. Masalah waktu yang lama
disebabkan laju alir fasa gerak hanya dipengaruhi oleh gaya gravitasi bumi,
ukuran diameter partikel yang cukup besar membuat luas permukaan fasa diam
relatif kecil sehingga tempat untuk berinteraksi antara komponen-komponen
dengan fasa diam menjadi terbatas. Apabila ukuran diameter partikel diperkecil
supaya luas permukaan fasa diam bertambah menyebabkan semakin lambatnya
aliran fasa gerak atau fasa gerak tidak mengalir sama sekali. Selain itu fasa diam

18
yang sudah terpakai tidak dapat digunakan lagi untuk pemisahan campuran yang
lain karena sukar meregenerasi fasa diam (Hendayana, 2006)
Untuk memisahkan campuran, kolom yang telah dipilih sesuai campuran
diisi dengan bahan penyerap seperti alumina dalam keadaan kering atau dibuat
seperti bubur dengan pelarut. Pengisian dilakukan dengan bantuan batang
pengaduk untuk memanfaatkan adsorben dan gelas wool pada dasar kolom.
Pengisian harus dilakukan secara hat-hati dan sepadat mungkin agar rata sehingga
terhindar dari gelembung-gelembung udara, untuk membantu homogenitas
biasanya kolom setelah diisi divibrasi diketok-ketok. Sejumlah cuplikan yang
dilarutkan dalam sedikit pelarut, dituangkan melalui sebelah atas kolom dan
dibiarkan mengalir ke dalam adsorben. Komponen-komponen dalam campuran
diadsorpsi dari larutan secara kuantitatif oleh bahan penyerap berupa pita sempit
pada permukaan atas kolom. Dengan penambahan pelarut secara terus-menerus,
masing-masing komponen akan bergerak turun melalui kolom dan pada bagian
atas kolom akan terjadi kesetimbangan baru antara bahan penyerap, komponen
campuran dan eluen. Kesetimbangan dikatakan tetap apabila suatu komponen
yang satu dengan yang lainnya bergerak ke bagian bawah kolom dengan waktu
atau kecepatan berbeda-beda sehingga terjadi pemisahan (Yazid, 2005).

II. 4. 4 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif

Salah satu metode pemisahan yang memerlukan biaya paling murah dan
memakai peralatan sangat sederhana ialah kromatografi lapis tipis preparatif
(KLTP). Walaupun KLTP dapat memisahkan dalam jumlah gram,sebagian besar
pemakaian hanya dalam jumlah miligram. KLT preparatif dilakukan dengan
menggunakan lapisan tebal (sampai 1 mm) sebagai pengganti lapisan penyerap
yang tipis.
(Nasution, 2010)
Kromatografi Lapis Tipis merupakan teknik pemisahan cara lama yang
digunakan secara luas, terutama dalam analisis campuran yang rumit dari sumber
alam. Tetapi dalam kuantisasi belakangan ini kromatografi lapis tipis digantikan

19
oleh “HPLC” (High Performance Thin-layer Chromatography) atau Kromatografi
Lapis Tipis Kinerja Tinggi (Munson, 2010).
Meski banyak terdapat metode seperti yang telah disebutkan di atas,
terdapat metode lain yang pembiayaannya paling murah dan memakai peralatan
paling dasar yaitu Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLTP). Adsorben yang
paling banyak digunakan yaitu silika gel yang dipakai untuk pemisahan
campuran lipofil maupun senyawa hidrofil. Ketebalan adsorben yang paling
sering digunakan ialah 0,5 – 2 mm. pembatasan ketebalan lapisan dan ukuran plat
sudah tentu mengurangi jumlah bahan yang dapat dipisahkan dengan KLTP.
Ukuran partikel dan porinya kurang lebih sama dengan ukuran tingkat mutu KLT
(Hostettmann, 2006).
Pada kromatografi lapis tipis preparatif, cuplikan yang akan dipisahkan
ditotolkan berupa garis pada salah satu sisi pelat lapisan besar dan dikembangkan
secara tegak lurus pada garis cuplikan sehingga campuran akan terpisah menjadi
beberapa pita. Pita ditampakkan dengan cara yang tidak merusak jika senyawa itu
tanwarna, dan penyerap yang mengandung senyawa pita dikerok dari pelat kaca.
Kemudian cuplikan dielusi dari penyerap dengan pelarut polar. Cara ini berguna
untuk memisahkan campuran reaksi sehingga diperoleh senyawa murni untuk
telaah pendahuluan, untuk menyiapkan cuplikan analisis, untuk meneliti bahan
alam yang lazimnya berjumlah kecil dan campurannya rumit dan untuk
memperoleh cuplikan yang murni untuk mengkalibrasi kromatografi lapis tipis
kuantitatif (Nasution, 2010).
Proses isolasi kromatografi lapis tipis preparatif terjadi berdasarkan
perbedaan daya serap dan daya partisi serta kelarutan dari komponen-komponen
kimia yang akan bergerak mengikuti kepolaran eluen, oleh karena daya serap
adsorben terhadap komponen kimia tidak sama, maka komponen bergerak dengan
kecepatan yang berbeda sehingga hal inilah yang menyebabkan pemisahan.
(Nasution, 2010)
Adsorben yang paling banyak digunakan dalam kromatografi lapis tipis
adalah silika gel dan aluminium oksida. Silika gel umumnya mengandung zat
tambahan Kalsium sulfat untuk mempertinggi daya lekatnya. Zat ini digunakan

20
sebagai adsorben universal untuk kromatografi senyawa netral, asam dan basa.
Aluminum iksida mempunyai kemampuan koordinasi dan oleh karena itu sesuai
untuk pemisahan senyawa yang mengandung gugus fungsi yang berbeda.
Aluminium oksida mengandung ion alkali dan dengan demikian bereaksi sebagai
basa dalam suspensi air. Disamping kedua adsorben yang sangat aktif ini dalam
hal tertentu dapat digunakan “kieselgur” yang kurang aktif sebagai lapis sorpsi
(Munson, 2010).
Pengembangan plat KLTP biasanya dilakukan dalam bejana kaca yang
dapat menampung beberapa plat. Keefisienan pemisahan dapat ditingkatkan
dengan cara pengembangan berulang. Harus diperhatikan bahwa semakin lama
senyawa berkontak dengan penyerap maka semakin besar kemungkinan
penguraian.
(Nasution, 2010)

II. 4. 5 Kromatografi Lapis Tipis Sentrifugal (KROMATOTRON)

Komatotron atau sentrifugal kromatografi merupakan alat kromatografi
menggunakan alat yang disebut kromatotron, teknik pemisahannya menggunakan
gaya sentrifugal dan gravitasi. dalam teknik ini digunakan silika gel untuk
kromatografi lapis tipis yang berflouresensi. Prinsip pemisahan dengan
kromatotron sama dengan kromatografi yang lainnya, tetapi pemisahan sung lebih
cepat, karena ada gaya sentrifugal yang akan mempercepat proses penyerapan
pelarut yang membawa komponen yang dipisahkan (Atun, 2014).
Sentrifugal kromatografi lapis tipis adalah teknik kromatografipreparatif
yang menggunakan gaya sentrifugal untuk pemisahansistem multi-komponen.
Sebuah instrumen yang biasa digunakan dalam teknik ini diberi nama sebagai
kromatotron.
(Naval, 2011)
Ciri khas penyiapan kromatotron adalah sentrifugal dipercepat, radial,
kromatografi lapis tipis. Sampel yang akan dipisahkan digunakan, sebagai larutan,
dekat dari pusat disk yang berputar dilapisi dengan lapisan tipis dari sorben. Elusi
dengan bentuk pelarut band dari komponen terpisah yang berputar melingkar

21
keluar dari tepi rotor bersama-sama dengan pelarut. Sebuah sistem pengumpulan
baru membawa eluat untuk satu output tabung (Naval, 2011).
Keuntungannya adalah cara kerja sederhana. Cepat pemisahan biasanya
selesai dalam 30 menit. Tidak perlu mengerok pita. Pemakaian pelarut tidak
boros. Rotor yang sudah dilapisi dapat diregenerasi. Pencemar yang terekstraksi
dari penjerap lebih sedikit daripada yang terekstraksi pada KLT preparatif.
Penotolan sampel mudah. Dapat dilakukan pengembangan landaian bertahap.
Kemungkinan oksidasi senyawa yang peka lebih kecil daripada pada cara KLT
preparatif. Perolehan kembali senyawa yang dipisah lebih besar daripada KLT
preparatif. Sedangkan kerugiannya adalah fase diam yang dapat dipilih terbatas.
Rotor yang sudah dilapisi tidak ada dalam perdagangan. Daya pisah terbatas. Cara
pendeteksian terbatas. Sistem pengumpul mungkin tercemar.
Pemisahan dengan kromatografi radial menggunakan plat kaca yang
berbentuk bundar dilapisi dengan bubur silika gel 60 PF 254 dan akuades dingin.
Ketebalan silika gel yang dipakai sesuai dengan banyaknya sampel yang akan
dipisahkan yaitu: 1 mm, 2 mm dan 4 mm. Perbandingan antara silika gel dengan
akuades dingin yang ditetapkan yaitu untuk 1 mm (45:90), 2 mm (65:130) dan 4
mm (115:200) (Illias, 2014).
Pembuatan plat kaca dilakukan dengan mencampurkan silika gel dan
akuades dingin sesuai perbandingan yang telah ditentukan. Bubur tersebut
diratakan pada pelat kaca, pada bagian pinggir atau tepi plat diberi selotip agar
bubur silika gel tidak tumpah kemudian bubur diratakan dengan suatu alat dengan
cara memutar plat pada satu arah secara perlahan. Setelah plat selesai dibuat, plat
dapat dikeringkan selama 24 jam atau dapat dikeringkan dalam oven pada suhu
60-70°C (Illias, 2014).
Plat kromatografi radial (kromatotron) yang telah dibuat dipasang pada
poros listrik dan diputar pada 800 rpm. Ketebalan fasa diam 1-4 mm dan sampel
yang dapat dipisahkan sebanyak 0,1-1 g. Pada awal pemisahan pelarut yang
digunakan mulai dari kepolaran rendah kemudian ditingkatkan kepolaran secara
bergradien. Rotor terdapat dalam ruang yang tertutup dengan plat kaca kuarsa.
Penutup ini memungkinkan kita mengamati bercak tak berwarna tetapi dapat

22
menyerap sinar UV dengan memakai lampu UV. Hasil pemisahan kromatografi
radial ditampung di dalam vial
(Illias, 2014).

II. 4. 6 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi

Multi eluen adalah penggunaan eluen atau fase gerak yang berbeda yang
memungkinkan pemisahan analit dengan berdasarkan tingkat polaritas yang
berbeda (Ibnu, 2008).
Dalam multi eluen, setelah pengembang tunggal menaik, kromatogram
diangkat dari chamber dan dikeringkan, biasanya selama 5-10 menit.
Kromatogram tersebut kemudian dielusi lagi dalam eluen segar dari pelarut yang
sama dalam arah yang sama untuk jarak yang sama. Proses ini, yang dapat diulang
berkali-kali, meningkatkan resolusi komponen dengan nilai Rf di bawah 0,5.
Beberapa pengembang dilakukandengan pelarut yang berbeda dalam arah yang
sama, masing-masingyang menjalankan jarak yang sama atau berbeda, disebut
elusi bertahap. Sebuah fase kurang polar dapat digunakan pertama, diikuti oleh
fase yang lebih polar, atau sebaliknya. Pemindahan material non polar ke bagian
atas lapisan, meninggalkan zat terlarut polar terganggu darimana dia berasal.
Setelah kering, zat terlarut polar dipisahkan oleh pengembang dengan eluen
(Fried,1999).
KLT 2 arah atau 2 dimensi ini bertujuan untuk meningkatkan resolusi
sampel ketika komponen-komponen solute mempunyai karakteristik kimia yang
hampir sama, karenanya nilai Rf juga hampir sama sebagaimana dalam asam-
asam amino. Selain itu, 2 sistem fase gerak yang sangat berbeda dapat digunakan
secara berurutan sehingga memungkinkan untuk melakukan pemisahan analit
yang mempunyai tingkat polaritas yang berbeda (Ibnu, 2008).
Sampel ditotolkan pada lempeng lalu dikembangkan dengan satu sistem
fase gerak sehingga campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah
satu sisi. Lempeng diangkat, dikeringkan dan diputar 90°, dan diletakkan dalam
bejana kromatografi yang berisi fase gerak kedua, sehingga bercak yang terpisah

23
pada pengembangan pertama terletak dibagian bawah sepanjang lempeng, lalu
dikromatografi lagi (Ibnu, 2008).
Dalam hal untuk mendapatkan resolusi yang baik, penting untuk memilih
dua campuran pelarut yang berbeda, meskipun dengan kekuatan pelarut yang
sama ini cukup sulit tetapi penting (Wall, 2005).
Secara singkat pengerjaan KLT dua dimensi ialah sebagai berikut: Sampel
ditotolkan pada lempeng lalu dikembangkan dengan satu sistem fase gerak
sehingga campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah satu sisi.
Lempeng diangkat, dikeringkan dan diputar 90°, dan diletakkan dalam bejana
kromatografi yang berisi fase gerak kedua, sehingga bercak yang terpisah pada
pengembangan pertama terletak di bagian bawah sepanjang lempeng, lalu
dikromatografi lagi.
(Rohman, 2009).
Keberhasilan pemisahan akan tergantung pada kemampuan untuk
memodifikasi selektivitas eluen kedua dibandingkan dengan selektivitas dari
eluen pertama (Satari, 1999).
Pemisahan KLT dua dimensi yang terbaik adalah ketika semua komponen
dipisahkan dan didistribusikan pada seluruh permukaan dari pelatkromatografi.
Estimasi pemisahan ini dapat dibuat dengan sebuah fungsi objektif. Umumnya,
kesepakatan yang baik antara evaluasi visual dari kromatogram dan evaluasi
komputer menggunakan fungsi objektif adalah melihat. Di sisi lain, fungsi yang
diperlukan yang dapat memprediksi nilai Rf dari satu komponen fungsi komposisi
dari fase gerak. Ada program untuk simulasi kromatogram yang sebanding
dengan yang diperoleh dengan percobaan kromatogram (Satari, 1999).

24
 Bab III Metodologi

Ekstraksi dengan metode maserasi diawali dengan preparasi sampel cabai

terlebih dahulu. Sampel cabai yang telah didapatkan kemudian dicuci hingga
bersih dan dipotong-potong menjadi 2-4 kali lebih kecil kemudian dihaluskan
dengan bantuan blender dan dikeringkan. Proses pengeringan diawali dengan
mengangin-anginkan sampel, kemudian sampel di oven dengan menggunakan
suhu 50 oC hingga kering. Sampel yang telah dikeringkan kemudian ditampung ke
dalam toples serta ditambahkan pelarut berupa metanol. Proses maserasi
berlangsung selama 3 hari, atau hingga pelarut telah jenuh. Dilakukan
pengulangan atau re-maserasi hingga 3 kali, bertujuan agar senyawa yang
terkandung pada sampel dapat terekstrak sempurna. Hasil maserasi kemudian
disaring menggunakan corong buchner dan kertas saring, lalu diuapkan pelarut
yang terkandung pada larutan hasil maserasi dengan menggunakan bantuan alat
rotary evaporator. Hasil ekstraksi atau ekstrak cair yang didapat kemudian
ditampung di dalam mangkuk untuk diuapkan menjadi ekstrak semi solid.
Ekstrak yang berupa semisolid kemudian difraksinasi menggunakan 3
jenis pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda, dari non polar-polar,
diantaranya n-heksan, etil asetat, dan etanol. Fraksinasi yang dilakukan
menggunakan metode ekstrasi cair-padat (ECP) dengan bantuan magnetic stirrer.
Metode tersebut digunakan karena di saat ekstrak basah dilarutkan ke dalam air,
ekstrak basah tersebut tidak dapat terlarut sempurna. Ekstrak semisolid yang
didapat kemudian ditimbang sebanyak 10 gram dan diletakkan ke dalam
erlenmeyer, ditambahkan pelarut pertama yaitu n-heksan dan dimasukkan bola
magnet untuk membantu proses pengadukan. Setelah dilakukannya proses
pengadukan, ditunggu beberapa saat hingga terdapat endapan. Bagian yang
terlarut ditampung pada botol selai, sedangkan bagian yang mengendap dilarutkan
kembali dengan n-heksana hingga hasil pengadukan menunjukkan warna pelarut
yang tidak lagi keruh, hal tersebut menandakan jika ekstrak tidak dapat lagi

25
terlarut dalam n-heksana melainkan harus dilarutkan menggunakan pelarut dengan
tingkat kepolaran yang lebih tinggi. Dilakukan hal yang sama dengan
menggunakan pelarut lainnya seperti etil asetat dan etanol. Hasil fraksi yang
didapat kemudian ditampung di dalam botol selai dan diangin-anginkan.
Hasil fraksi yang didapatkan kemudian diuji kandungan senyawa
metabolit yang terkandung di dalamnya menggunakan metode Kromatografi
Lapis Tipis (KLT). Plat KLT yang akan digunakan mula-mula diaktifkan dengan
cara di oven selama 15 menit dengan suhu 150 oC. Setelah plat KLT siap,
kemudian dipotong-potong dengan ukuran 7 cm. Plat KLT yang telah dipotong,
diberi batas atas dan bawah dengan ukuran 1 cm pada bagian bawah dan 0,5 cm
pada bagian atas. Kemudian disiapkan hasil fraksi n-heksana, etil asetat, dan
etanol yang akan di totol pada plat KLT, diencerkan sedikit fraksi dengan pelarut
yang dapat melarutkan di dalam botol vial. Ditotol fraksi dengan menggunakan
pipa kapiler pada batas bawah plat KLT. Setelah itu, dimasukkan plat KLT pada
chamber (gelas) yang berisi eluen n-heksana dan etil asetat dengan perbandingan
dimulai dari yang non-polar hingga polar. Digunakan eluen berupa n-heksan:etil
asetat (9:1), (8:2), (7:3), dan (5:5). Setelah eluen terelusi hingga batas atas plat
KLT, plat KLT disinari dengan UV portable pada panjang gelombang 254 nm dan
366 nm. Hasil noda dengan perbandingan eluen terbaik akan dilanjutkan pada
kromatografi kolom konvensional.
Proses pemisahan dengan menggunakan metode Kromatografi Kolom
Konvensional (KKK), diawali dengan mempersiapkan alat dan bahan yang akan
digunakan. Kolom dengan diameter 2 cm disiapkan, dijepit pada statif dan klem,
dan dibersihkan bagian dalamnya dengan dialiri dengan etanol. Dimasukkan
sedikit kapas yang telah dibentuk bulat kecil ke dalam kolom, untuk dapat
menahan silika gel yang akan dimasukkan. Ditimbang silika gel sebanyak 10 g,
dilarutkan dengan eluen berupa n-heksana:etil asetat (9:1), kemudian dimasukkan
ke dalam kolom, dirapatkan dan jangan sampai terbentuk celah atau retakan.
Disiapkan imprek, dengan menimbang 2 g fraksi n-heksana dan digerus
bersamaan dengan silika gel hingga berbentuk serbuk. Imprek yang telah
disiapkan dimasukkan ke dalam kolom secara perlahan dan jangan sampai

26
membuat keretakan pada silika gel yang telah dimasukkan sebelumnya. Kemudian
ditambahkan eluen n-heksana:etil asetat (9:1) ke dalam kolom secukupnya, dibuka
keran kolom secara perlahan, dan ditampung cairan hasil partisi menggunakan
botol vial. Botol vial yang mengandung kromatogram kemudian diuapkan
pelarutnya hingga kering.
Hasil partisi kemudian diuji kemurniannya dengan menggunakan
Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi (KLT 2D). Disiapkan plat KLT berukuran
5x5 cm, diberi batas bawah pada 2 sisinya secara berurutan, dan batas atas pada 2
sisi lainnya. Digunakan 2 macam eluen yang berbeda tingkat kepolarannya atau 2
sistem untuk melihat apakah masih terdapat zat pengotor di bawah maupun di atas
nilai Rf yang didapat. Digunakan eluen pertama berupa n-heksana:etil asetat (7:3)
dan kloroform:etil asetat (7:3). Di elusi menggunakan eluen pertama hingga batas
atas, kemudian di elusi lagi menggunakan eluen ke dua hingga batas atas pula.
Hasil elusi dengan 2 sistem eluen kemudian disinari dengan sinar UV 254 nm dan
366 nm.

27
 Bab IV Alat dan Bahan

IV. 1 Alat

Peralatan yang digunakan dalam praktikum ini adalah toples, batang

pengaduk, timbangan analitik, rotary evaporator, mangkok, waterbath, blender,
oven, corong pisah, gelas kimia, magnetic stirrer, statif dan klem, gelas ukur,
pipet ukur 1mL, pipet ukur 5 mL, propipet, botol semprot, lampu UV 254 nm dan
UV 366 nm, pipa kapiler, cutter, chamber, penggaris, penutup chamber, pinset,
hot plate, pipet tetes, kolom kromatografi, cawan porselen, mortir stamper, spatel.

IV. 2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah serbuk cabai rawit,
ekstrak cabai rawit, metanol, plastic wrap, n-heksan, etil asetat, n-butanol,
aquades, kertas saring, etanol, plat KLT, kloroform, H2SO4, silica gel GF 60 254,
silica gel 60, FeCl3 1%, Aluminium foil, Pereaksi Dragendroff, Pereaksi
Lieberman Burchard.

28
 Bab V Prosedur Percobaan

V. 1 Ekstraksi (Maserasi)

Disiapkan alat dan bahan, rendam serbuk cabai dalam larutan methanol,
tunggu rendaman tersebut selama 3 hari hingga jenuh, kemudian ekstrak tersebut
disaring menggunakan kertas saring dan corong, setelah itu, ekstrak diuapkan
menggunakan rotary evaporator, ekstraksi dilakukan sebanyak 3 kali, dan hitung
rendemen ekstrak.

V. 2 Fraksinasi

Ditimbang ekstrak kering sampel 3-5 gram, dimasukkan ke dalam

Erlenmeyer, kemudian ditambahkan dengan pelarut dimulai dari pelarut non polar
yaitu n-heksan, setelah itu diaduk menggunakan magnetic stirrer, yang larut n-
heksan dipisahkan, kemudian yang larut n-heksan dipisahkan dengan endapannya,
kemudian larutan n-heksan diuapkan hingga diperoleh fraksi etanol. Dilanjutkan
dengan langkah yang sama dengan pelarut etil asetat dan etanol. Fraksi ekstrak
yang diperoleh dari beberapa pelarut dihitung rendemennya.

V. 3 Kromatografi Lapis Tipis

Dibuat eluen, dicari perbandingan eluen yang sesuai dengan sifat dari
ekstrak, dan eluen yang di dapat dengan perbandingan n-heksan: etil asetat (9:1).
Dimasukkan ke dalam chamber. Setelah didapat, perbandingan eluen yang tepat,
ekstrak hasil fraksi diencerkan, kemudian setelah diencerkan ditotolkan ekstrak di
plat KLT dengan silika gel GF 60 254 menggunakan pipa kapiler, kemudian plat
tersebut di masukkan ke dalam chamber, lihat noda yang terdapat di plat, jika
tidak terlihat secara visual, gunakan pereaksi H2SO4 10%, dan sinar UV 254 nm
dan 366 nm. Setelah didapat, hitung nilai Rf.

29
V. 4 Kromatografi Konvensional

Persiapkan kolom, gerus silika gel 60 dengan ekstrak cabai hingga

terbentuk serbuk, kemudian dibuat bubur silika gel 60 sebagai fase diam,
masukkan bubur silika tersebut ke dalam kolom, dan dilanjutkan dengan
memasukkan serbuk cabai, dan buat eluen yang sesuai dengan perbandingan
sebelumnya n-heksan:etil asetat (9:1). Dan masukkan ke dalam kolom. Kemudian
buka kran kolom untuk menghasilkan isolat yang ditampung dalam botol vial dan
hitung berapa vial yang didapat.

V. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi

Dibuat 2 sistem dengan eluen berbeda, yang pertama eluen non polar
dengan perbandingan n-heksan:etil asetat (7:3) dan yang kedua eluen polar
kloroform:etil asetat (7:3). Setelah itu dimasukkan ke chamber masing- masing.
Hasil isolat dari KKK yang berbentuk Kristal diencerkan menggunakan pelarut
non polar, kemudian totolkan larutan disatu spot tersebut di atas plat KLT silika
gel GF 60 254 dengan ukuran 5cm x 5cm, masukkan plat tersebut dalam chamber
di sistem pertama dan lihat noda yang terlihat, keluarkan plat tersebut dan
diangin-anginkan plat. Dan masukkan kembali plat dengan arah yang berbeda ke
dalam sistem kedua dan lihat noda. Lihat noda dengan sinar UV 254 nm dan UV
366 nm. Hitung nilai Rf.

30
 Bab VI Pembahasan

VI. 1 Ekstraksi

Ekstraksi adalah teknik pemisahan suatu senyawa berdasarkan perbedaan

distribusi zat terlarut diantara dua pelarut yang saling bercampur. Metode
ekstraksi yang dilakukan pada percobaan kali ini adalah menggunakan metode
maserasi. Digunakannya metode maserasi dikarenakan proses ekstraksi dengan
metode maserasi sudah mampu mengekstrak sample dengan sempurna. Pada
ekstraksi dengan metode maserasi ini menggunakan pelarut metanol hal ini
dikarenakan metanol sifatnya yang diketahui adalah sebagai pelarut semipolar
sehingga diharapkan dapat menarik semua senyawa metabolit sekunder yang ada
dalam simplisia (Agoes, 2007).
Setiap 1 x 24 jam pelarut diganti dengan yang baru hingga pelarut sudah
terlihat bening atau tidak pekat lagi. Pergantian pelarut bertujuan untuk menarik
senyawa yang belum tertarik dengan pelarut yang sebelumnya. Selanjutnya
ekstrak dipekatkan dengan alat rotary evaporator tujuan dari pemekatan adalah
memekatkan konsentrasi larutan sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi
yang lebih tinggi.
Rendemen merupakan perbandingan antara ekstrak yang diperoleh dengan
simplisia awal. Perhitungan rendemen dilakukan bertujuan untuk mengetahui
metode ekstraksi apa yang paling baik untuk simplisia tersebut dan untuk
mengetahui baik atau tidak cara pengerjaan ekstraksi yang dilakukan. Hasil
rendemen untuk sampel buah cabai adalah 6,85 % yang berarti bahwa jumlah
bahan dan jumlah pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi dapat
mempengaruhi rendemen ekstrak yang dihasilkan. Semakin tinggi jumlah pelarut
yang digunakan, maka kemampuan pelarut untuk mengekstrak suatu bahan
semakin tinggi karena kontak antara bahan dengan pelarut semakin besar.

31
 Sampel Metode Berat Berat ekstrak Rendemen
simplisia (g) (g) (%)

Buah cabai Maserasi 278,57 19,1 6,85%

VI. 2 Fraksinasi

Metode fraksinasi pada kali ini adalah proses lanjutan dari proses
ekstraksi. Fraksinasi pada kali ini menggunakan metode cair-padat pada sampel
buah cabai. Penggunaan pelarut pada metode ini yang pertama digunakan dua
pelarut yaitu air dan n-heksan, hal ini bertujuan untuk menarik senyawa yang
terkandung di dalam ekstrak yang memiliki kepolaran yang tinggi dan senyawa
yang memiliki kepolaran rendah karena air merupakan pelarut yang sangat polar
dan n-heksan pelarut yang sangat non polar. Kemudian pelarut n-heksan diganti
dengan pelarut yang lebih sedikit lebih polar yaitu etil asetat yang kemudian
diganti dengan pelarut yang lebih polar lagi yaitu n-butanol. Pergantian secara
bertahap bertujuan agar senyawa kimia dapat dipisahkan terlebih dahulu antara
polar dan non polar, kemudian secara bertahap senyawa yang lebih polar dari n-
heksan akan ditarik dengan pelarut-pelarut selanjutnya, hingga senyawa tidak
dapat lagi ditarik oleh (Rohman, 2009).
Hasil yang didapatkan dengan menggunakan sampel n-heksan pada buah
cabai sebanyak 6,6g menghasilkan rendemen 34,55%. Pada pelarut etil asetat pada
sampel buah cabai sebanyak 60,3g menghasilkan rendemen 1,57%. Pada pelarut
n-butanol pada sampel buah cabai sebanyak 0,3g menghasilkan rendemen 1,57%.
Sampel n-heksan (g) Etil asetat (g) Butanol (g)

Buah cabai 6,6 0,3 0,3

Rendemen 34,55% 1,57% 1,57%

32
VI. 3 Kromatografi Lapis Tipis

Pelaksanaan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika

atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik
yang keras. Gel silika (atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam untuk
kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat
berpendar flour dalam sinar ultraviolet. Fase gerak merupakan pelarut atau
campuran pelarut yang sesuai. Percobaan ini menggunakan teknik kromatografi
lapis tipis dengan suatu plat tipis (aluminium) dan dalam KLT adsorbens yang
digunakan berupa silika gel (SiO2) yang tidak mengikat molekul air, sehingga
noda yang tercipta lebih terfokus dan tajam. Aluminium yang fungsinya untuk
sebagai tempat berjalannya adsorbens.
(Sudjadi, 1986).

Dalam percobaan ini menggunakan sampel fraksinasi n-heksan sampel

cabai, dengan beberapa perbandingan eluen, namun dari sekian banyak eluen yang
digunakan hanya pada perbandingan n-heksan: etil asetat (9:1) totolan pada KLT
terlihat dengan bantuan sinar UV 254 dan UV 366. Prinsip UV 254, lempeng akan
berflouresensi sedangkan sampel akan tampak berwarna gelap. Penampakan noda
pada lampu UV 254 nm adalah karena adanya daya interaksi antara sinar UV
dengan indikator fluoresensi yang terdapat pada lempeng. Jika noda tetap tak
terlihat dilakukan dengan penyemprotan menggunakan H2SO4 10%, Prinsip H2SO4
10% berdasarkan kemampuan asam sulfat yang bersifat reduktor dalam merusak
gugus kromofor dari zat aktif simplisia sehingga panjang gelombangnya akan
bergeser ke arah yang lebih panjang (UV menjadi vis) sehingga noda menjadi
tampak oleh mata. Kemudian setelah ditotol, diukur jarak tempuh noda untuk
melihat hasil nilai Rf.

Jarak Jarak
Nama Nilai
Fraksi Eluen Tempuh Tempuh
Sampel Rf
Noda Eluen

33
 n-heksan : etil
Cabai n-heksan 3cm 4,5cm 0,66
asetat (9:1)

Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan maka nilai Rf yang didapat

adalah 0,66. Nilai Rf yang baik yang menunjukkan pemisahan yang cukup baik
adalah berkisar antara 0,2-0,8 (Sudjadi, 1986). Jadi, menurut hasil yang
didapatkan menunjukan bahwa nilai Rf pada percobaan yang telah dilakukan
menunjukkan pemisahan yang cukup baik.

VI. 4 Kromatografi Konvensional

Hasil kromatogram yang didapat dengan menggunakan eluen n-heksan:

etil asetat (9:1) agar meminimalkan kontaminasi kolom dari pelarut dan bahan-
bahan lain yang dapat mengganggu aktivitas dari pemisahan komponen. Hasil
yang diperoleh dari kormatografi konvensional yaitu

No. Vial Warna

1 1-10 Bening

2 11-24 Kuning bening

3 25-48 Kuning

4 49-52 Orange kekuningan

5 53-62 Orange kecoklatan

6 63-72 Coklat

Perbedaan warna ini kemungkinan mmenunjukkan perbedaan senyawa

yang terkandung pada setiap vial. Panjang kolom adalah 10 cm dengan fase diam
yang menyerap atau mengabsorbsi komponen kimia dari sampel fase yang tidak
larut dalam fase cair yaitu silika gel dan fase geraknya adalah cairan (pelarut)
yang mengalir membawa komponen campuran sepanjang kolom.

34
VI. 5 Kromatografi Lapis Tipis 2 Dimensi

Pada kromatografi lapis tipis 2 dimensi dibuat 2 sistem dengan eluen

berbeda, yang pertama eluen non polar dengan perbandingan n-heksan: etil asetat
(7:3) dan yang kedua eluen polar kloroform: etil asetat (7:3).
Pelarut yang sesuai adalah pelarut kloroform: etil asetat (7:3) karena dapat
menarik dua noda pada dua arah yang berbeda dan menghasilkan noda yang
tunggal yang dapat dilihat menggunakan sinar UV 254 nm dan UV 366 nm. Plat
yang digunakan berupa aluminium. perbandingan eluen pada profil KLT dimana
akan memperpanjang lintasan noda (Rf) dengan menunjukan senyawa tunggal
pada sampel.

35
 Bab VII Kesimpulan dan Saran

VII. Kesimpulan

Berdasarkan hasil pengamatan yang di lakukan dapat disimpulkan bahwa:

a. Ekstrak cabai yang dihasilkan yaitu 19,1 gram.
b. Rendemen ekstrak cabai yaitu sebesar 6,85%.
c. Fraksi n-heksana yang didapat yaitu sebesar 6,6 gram dengan rendemen
sebesar 34,55%, fraksi etil asetat sebesar 0,3 gram dengan rendemen sebesar
1,57%, dan fraksi n-butanol sebanyak 0,3 gram dengan rendemen sebesar
1,57%.
d. Hasil kromatogram yang didapat yaitu untuk vial 1-10 berwarna bening
yang mengindikasikan pelarut saja yang berisi. Vial 11-24 berwarna kuning
bening. Vial 25-48 berwarna kuning agak pekat. Vial 49-52 berwarna
orange kekuningan. Vial 53-62 berwarna orange kecoklatan. Dan vial 63-72
berwarna orange kecoklatan.
e. Pelarut yang digunakan adalah kloroform: etil asetat (7:3) karena dapat
menarik dua noda pada dua arah yang berbeda dan menghasilkan noda yang
tunggal yang dapat dilihat menggunakan sinar UV 254 nm dan UV 366 nm

VII. Saran

Diharapkan pada praktikum pemisahan kimia selanjutnya dilakukan

dengan sungguh-sungguh hingga didapatkan senyawa murni dari suatu simplisia.
Dan setiap proses diperhatikan dengan baik dan dijaga dengan baik.

36
 DAFTAR PUSTAKA

Adijuwana, Nur M.A. 1989. Teknik Spektroskopi dalam Analisis Biologi.

Universitas IPB. Bogor.

Adnan, M. 1997. Teknik Kromatografi Untuk Analisis Bahan Makanan. Andi

Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.

Agoes. Goeswin. 2007. Teknologi Bahan Alam. ITB Press. Bandung

Atun Sri. 2014. Metode Isolasi dan Identifikasi Struktur Senyawa Organik Bahan
Alam. Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur. Volume 8. Nomor 2.
Hal 53-6.

Cahyono, B. 2003. Cabai Rawit. Kanisius. Yogyakarta.

Cannel, R. J. P. 1998. Natural Products Isolation. Humana Press. New Jersey.

Dalimartha, S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid II. Trubus Agriwidya;
Jakarta.
Dirjen POM. 1979. Farmakope Indonesia Edisi III. Departemen Kesehatan RI.
Jakarta

Ditjen POM. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.

Depkes.RI Hal.10-11. Jakarta.

Dwijoseputro G. 1994. Pengantar Fisiologi Tumbuhan. Gramedia. Jakarta.

Fried, Bernard & Sherma, Joseph. 1999. Thin Layer Chromatography, 4thEdition,
Revised and Expanded. Marcel Dekker. Inc. New York.

37
Ghisalberti, E.L. 2008. Detection and Isolation of Bioactive Natural Products in
Bioactive Natural Products: Detection, Isolation, and Structural
Determination. Taylor & Francis Group Inc. , U.S.A.

Hahn Deinstrop, Elke. 2007. Applied Thin-Layer Chromatography,Best

Practiceand Avoidanceof Mistakes. Second, Revised and Enlarge Edition.
WILEY-VCH. Jerman.

Harborne, J.B., 1987. Metode Fitokimia, Edisi Kedua. ITB. Bandung.

Harris, et.al. 1982. An Introduction To Chemical Analysis. Savders College

Publishing Philadelpia. Japan.

Heftmann, E. 1983. Steroids in Chromatography. Fundamentals and Application.

Amsterdam.

Hendayana, Sumar, dkk. 1994. Kimia Analitik Instrumentasi Ikip Semarang Press:
Semarang.

Hendayana, Sumar. 2006. Kimia Pemisahan. PT. Remaja Rosdakarya. Bandung.

Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia Jilid III. Yayasan Sarana Wana
Jaya. Jakarta.

Hostettmenn, K, dkk. 1986. Cara Kromatografi Preparatif. ITB. Bandung.

Hostettmenn, K., dkk. 2006. Cara Kromatografi Preparatif. ITB. Bandung

Ibnu Gholib Gandjar, Abdul Rahman. 2008. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka
Pelajar. Yogyakarta.

Illias Et Al. 2014. Preparation Of Pre-Coated Rp-Rotors And Universal

Chromatorotors, Chromatographich Separation Devices And Methods
For Centrifugal Preparative Chromatography. United States Journal
Patent Application Publication. Vol 1. No 8

38
Kennedy, John. 1990. Analytical Chemistry Principles. Sounders College
Publishing: New York.

Khopkar, S.M., 2008. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI Press. Jakarta.

Lestari SB, Pari G. 1990. Analisis kimia beberapa jenis kayu Indonesia. Jurnal
Penelitian Hasil Hutan Pusat Penelitian dan Pengembangan Hasil Hutan
VII (3) : 96-100.

Lukum, Astin P. 2005. Bahan Ajar Dasar Dasar Kimia Analitik. Universitas

Negeri Gorontalo. Gorontalo.

Munson, James, W., 2010. Analisis Farmasi. Airlangga University Press.

Surabaya

Nasution, A. Rosa. 2010. Isolasi Senyawa Triterpenoid atau Streoid. Universitas

Sumatra Utara: Sumatra Utara.

Naval Kulkarni Et Al. 2011. Centrifugal Thin Layer Chromatography. Asian

Journal of Pharmacy And Life Science. Vol 7. No 4.

Rani Rachmawati. 2009. Pengaruh suhu dan lama penyimpanan terhadap

kandungan vitamin C pada cabai rawit putih (Capsicum frustescens).
Jurnal Biologi XIII (2) : 36 – 40.

Rohman, Abdul. 2009. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.

Rohman. 2009. Kromatografi untuk Analisis Obat. Graha Ilmu. Yogyakarta.

Roy J. Gritter, James M. Bobbit, Arthur E. S., 1991. Pengantar Kromatografi.

Penerbit ITB. Bandung.

Rukmana, R.H 2002. Usaha Tani Cabai Rawit. Kanisius. Yogyakarta.

Sarker,SD., Latif, Z and Gray .Al.2006. Natural Product Isolation. Humana Press
inc . Totowa New Jersey.

39
Satari, RR. 1999. Penelitian Produk Alam Laut Indonesia.
ArahdanProspek.Jakarta.

Schill, Goran. 1978. Separation Methods. Swedish Phasma Centrical Press.

Stockholm.

Sudjadi. 1986. Metode Pemisahan. Kanisius. Yogyakarta.

Sudjadi. 1988. Metode Pemisahan. Kanisius. Yogyakarta.

Syukur, M., dkk. 2010. Evaluasi Daya Hasil Cabai Hibrida dan Daya
Adaptasinya di Empat Lokasi dalam Dua Tahun. J. Agron. Indonesia 38
(1) : 43-51.

40
Undang, dkk. 2015. Identifikasi Spesies Cabai Rawit (Capsicum spp.)
Berdasarkan Daya Silang dan Karakter Morfologi. Jurnal Agron.
Indonesia 43 (2) : 118 – 125.

Wall, Peter E. 2005. Thin-Layer Chromatography, A Modern Practical Approach.

RS.C7. UK.

Warisno. K. D. 2010. Peluang Usaha dan Budidaya Cabai. PT Gramedia Pustaka

Utama. Jakarta.

Yazid, Estien. 2005. Kimia Fisika Paramedis. Andi. Yogyakarta.

41
 LAMPIRAN

Tabel V. 1 Hasil ekstraksi

Sampel Metode Berat simplisia (g) Berat Rendemen (%)

ekstrak (g)
Buah cabai Maserasi 278,57 19,1 6,85%

Tabel V. 2 Rendemen Ekstrak dan Fraksi Buah Cabai

Sampel n-heksan (g) etil asetat (g) n-butanol (g)

Buah cabai 6,6 0,3 0,3
Rendemen 34,55% 1,57% 1,57%

Tabel V.3 Fraksi Buah Cabai dan Nilai Rf

Jarak Jarak
Nama
Fraksi Eluen Tempuh Tempuh Nilai Rf
Sampel
Noda Eluen

n-heksan : etil
Cabai n-heksan 3cm 4,5cm 0,66
asetat (9:1)

42
 (a) (b)
Gambar V.1: ekstraksi dengan metode maserasi (a). hasil ekstraksi (b)

(a) (b)
Gambar V.2 Kromatografi lapis tipis fase diam silika gel 60 GF254, fase gerak n-
heksan:etil asetat (9:1) dilihat dengan (a) sinar UV λ 366 nm (b)
sinar UV λ 254 nm

43
Gambar V.3 Kromatografi kolom konvensional buah cabai menggunakan silica
gel 60 H dengan pelarut n-heksan:etil asetat (9:1)

II

I
(a) (b)
Gambar V.4 Kromatografi lapis tipis dua dimensi, fase diam silika gel 60 GF 254,
pelarut kloroform: etil asetat (7:3) sinar uv 254 nm (a) sinar uv 366
nm(b)

44