LAPORAN

PRAKTIKUM
PEMBIAKAN TANAMAN

ACARA 5
MEDIA KULTUR JARINGAN

URIFA
131510501204
GOLONGAN C / KELOMPOK 5

PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS JEMBER
2014

BAB 1. PENDAHULUAN
1.1 Latar belakang
Indonesia adalah negara agraris yang sebagian besar penduduknya bekerja
disektor pertanian. Bidang pertanian merupakan bidang utama yang banyak
ditekuni masyarakat karena luasan lahan yang dimiliki negara kita tergolong besar
dari negara lainnya. Luasan lahan yang dimiliki oleh negara Indonesia tersebut
mampu memproduksi kebutuhan masyarakat akan pangan secara global sehingga
Indonesia masih dapat mengekspor sebagian produk pertanian yang dihasilkan ke
beberapa negara lain.
Salah satu dampak dalam peningkatan ekspor komoditi pertanian adalah
kebutuhan bibit yang semakin meningkat. Bibit dari suatu varietas unggul yang
dihasilkan jumlahnya sangat terbatas, sedangkan bibit tanaman yang dibutuhkan
jumahnya banyak. Penyediaan bibit yang berkualitas baik merupakan salah satu
faktor yang menentukan keberhasilan dalam pengembangan pertanian di masa
mendatang. Salah satu teknologi harapan yang banyak dibicarakan dan telah
terbukti memberikan keberhasilan adalah melalui teknik kultur jaringan.
Melalui kultur jaringan tanaman dapat diperbanyak setiap waktu sesuai
kebutuhan karena faktor perbanyakannya yang tinggi. Bibit dari varietas unggul
yang jumlahnya sangat sedikit dapat segera dikembangkan melalui kultur
jaringan. Tanaman yang diperbanyak melalui kultur jaringan, bila berhasil dapat
lebih menguntungkan dari pada perbanyakan secara generatif karena sifatnya akan
sama dengan induknya (seragam) dan dalam waktu yang singkat bibit dapat
diproduksi dalam jumlah banyak dan bebas penyakit.
Kultur jaringan merupakan metode yang digunakan untuk mengisolasi
bagian

tanaman

seperti

protoplasma,

sel,

jaringan

atau

organ.

Cara

penumbuhannya dibutuhkan keadaan yang aseptic, dimana aseptik disini bearti

lingkungan yang steril sehingga bagian tanaman tersebut dapat memperbanyak
diri dan beregenerasi menjadi tanaman yang utuh kembali. Kemampuan
Totipotensi sel (Total Genetic Potential) yang bearti setiap sel memiliki potensi
genetik atau kemampuan untuk memeperbanyak diri dan berdiferensiasi menjadi
tanaman yang lengkap merupakan konsep awal dari kultur jaringan.

Media

yang

akan

digunakan

harus

disterilisasi

dengan

cara

memanaskannya denga autoklaf. Autoklaf merupakan alat yang digunakan untuk

mensterilisasi

peralatan

gelas

laboratorium,

media

dekontaminasi untuk membunuh bakteri. Autoklaf

mikrobiologi,

dan

menggunakan uap yang

bersuhu dan bertekanan tinggi 1210 C selama kurang lebih 15 menit untuk
membunuh bakteri.
Teknik ini memerlukan berbagai syarat untuk mendukung kehidupan
jaringan yan dikembangbiakkan. Salah sau faktor utamanya adalah media yang
digunakan. Media adalah tempat mengambil nutrisi dan tempat tumbuh tanaman.
Media tumbuh menyediakan berbagai bahan yang dibutuhkan oleh jaringan dalam
memperbayak diri seperti umsur hara mikro, makro, vitamin da asam amino,
sumber karbon dan zat pengatur tumbuh. Selain bahan-bahan tersebut, juga
dibutuhkan bahan tambahan seperti gula, agar-agar, bahan organic dan arang aktif.
Media yang sudah jadi akan dimasukkan kedalam tabung reaksi atau botol kaca.
Media tumbuh terbagi menjadi dua macam, yaitu media padat dan media cair.
Media padat berupa gel, seperti agar dan nutrisi yang dicampur dengan agar
sedangkan media cair adalah media dengan nutrisi yang dilarutkan di air. Media
cair bertujuan dalam pembentukan Protocorm Like Body (PLB) pada anggrek dan
jahe. Faktor lain yang harus diperhatikan pada media cair atau padat adalah pH
dari media kultur itu sendiri. Sel tanaman membutuhkan pH antar 5,5 sampai 5,8
oleh karena itu media harus diatur pHnya agar sesuai dengan pertumbuhan sel
tanaman.
Metode kultur jaringan (in vitro) dalam bidang pertanian digunakan dalam
perbaikan sifat atau seleksi, produksi bahan metabolit, perbanyakan tanaman,
transfer gen dalam biologi molekuler dan pemeliharaan plasma nutfah. Kegiatan
tersebut membutuhkan media buatan baik media dalam bentuk cair atau media
dalam bentuk padat dengan memberikan formulasi kebutuhan protein, hormon
dan nutrisi dengan perbandingan yang sesuai dengan yang dibutuhkan.
1.2 Tujuan
1. Mempelajari cara pembuatan media dengan baik dan benar
2. Mengenal perbedaan bermacam-macam media kultur jaringan

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

Pertumbuhan organ tanaman terutama tergantung pada kombinasi
pembelahan sel dan ekspansi sel, yang diatur sangat oleh faktor lingkungan,
seperti cahaya, suhu dll dan oleh faktor endogen, seperti phytohormones.
Koordinasi berurutan proses seluler beberapa juga merupakan salah satu
komponen penting dari proses yang terlibat dalam regulasi pertumbuhan organ
tanaman di bawah situasi tertentu, termasuk status gizi, tahap perkembangan dan
cekaman abiotik (Rai et al., 2011).
Menurut Akin-Idowu et al. (2009),

kultur jaringan tanaman saat ini

merupakan teknologi mapan. Seperti banyak teknologi lain, telah melalui berbagai
tahap evolusi; keingintahuan ilmiah, alat penelitian, aplikasi baru dan eksploitasi
massa. Awalnya, kultur jaringan tanaman dimanfaatkan sebagai alat penelitian dan
difokuskan pada upaya untuk mempelajari budaya dan pengembangan, segmen
kecil yang terisolasi dari jaringan tanaman atau sel yang terisolasi.Selain itu,
dalam beberapa tahun terakhir, penerapan kultur jaringan tanaman sebagai teknik
budidaya telah menjadi alat penting dalam bioteknologi perbanyakan berbagai
tanaman yang memiliki kepentingan ekonomi yang besar. Demikian juga, teknik
budidaya menawarkan keuntungan tambahan seperti kecepatan tinggi propagasi,
kurangnya pembatasan

musiman, pemberian penyakit tanaman bebas,

pemeliharaan diri yang tidak kompatibel galur inbrida, pertukaran internasional

bahan tanaman, sistem budaya untuk transformasi genetik (Govinden-Soulange et
al., 2009).
Menurut Bakti dkk. (2009), kultur jaringan dapat diperoleh melalui tiga cara
yaitu

pembentukan

tunas

samping,

pembentukan

tunas

adventif,

dan

embriogenesis somatik. Kultur jaringan memiliki banyak keunggulan seperti

produksi bahan tanam bebas penyakit dalam jumlah besar maka memungkinkan
penyebaran cepat sehat dan meningkatkan tanaman di dalam dan antar negara,
sebagai bahan yang mudah disertifikasi sebagai

bebas penyakit dan tumbuh

seragam maka mereka sangat berharga. Pendekatan inovatif diperlukan untuk

menurunkan biaya produksi micropropagule dalam rangka meningkatkan
penerapan teknologi kultur jaringan dalam pertanian, (Ogero et al.,2011).

Menurut Mangoendidjojo (2003), bagian atau organ tanaman secara umum

terdiri dari akar, batang, daun serta bagian reproduktif yang berupa bunga, buah
atau biji. Bagian-bagian tanaman tersebut mampu untuk beregenerasi menjadi
tanaman lengkap baik secara langsung maupun tidak langsung. Peristiwa ini
terjadi karena tanaman mempunyai sifat totipotensi sel, yaitu dalam satu sel
mempunyai kemampuan untuk menjadi tanaman lengkap. Metode kultur jaringan
dikembangkan untuk membantu memperbanyak tanaman, khususnya untuk
tanaman yang sulit dikembangbiakkan secara generatif. Bibit yang dihasilkan dari
kultur jaringan mempunyai beberapa keunggulan, antara lain: mempunyai sifat
yang identik dengan induknya, dapat diperbanyak dalam jumlah yang besar
sehingga tidak terlalu membutuhkan tempat yang luas, mampu menghasilkan bibit
dengan jumlah besar dalam waktu yang singkat, kesehatan dan mutu bibit lebih
terjamin, kecepatan tumbuh bibit lebih cepat dibandingkan dengan perbanyakan
konvensional (Suliansyah, 2013).
Menurut Tuhuteru dkk., (2012) Media merupakan faktor utama dalam
perbanyakan

dengan

kultur

jaringan.

Keberhasilan

perbanyakan

dan

perkembangbiakan tanaman dengan metode kultur jaringan secara umum sangat

tergantung pada jenis media. Media tumbuh pada kultur jaringan sangat besar
pengaruhnya terhadap pertumbuhan dan perkembangan eksplan serta bibit yang
dihasilkannya. Zat pengatur tumbuh memegang peranan penting dalam
pertumbuhan dan perkembangan kultur. Faktor yang perlu mendapat perhatian
dalam penggunaan zat pengatur tumbuh antara lain jenis yang akan digunakan,
konsentrasi, urutan penggunaan dan periode masa induksi kultur. Induksi kalus
tanaman dikotil diperlukan auksin dengan konsentrasi tinggi dan sitokinin pada
konsentrasi rendah. Sedangkan pada tanaman monokotil pembentukan kalus
hanya membutuhkan auksin yang tinggi tanpa sitokinin (Lizawati dkk., 2012).
Menurut Lestari dkk. (2013), keseimbangan zat pengatur tumbuh (ZPT)
auksin dan sitokinin, komposisi garam anorganik dan bentuk fisik media
mempengaruhi keberhasilan kultur jaringan. Media padat merupakan media yang
sering digunakan karena perkembangan eksplan mudah diamati, tidak semua
bagian eksplan terbenam dalam media sehingga memungkinkan sirkulasi udara

eksplan dan jika terjadi kontaminasi, eksplan yang tidak terkontaminasi dapat
diselamatkan.

BAB 3. METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat
Waktu pelaksanaan kegiatan praktikum "Media Kultur Jaringan"
dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Fakultas Pertanian Universitas
Jember pada hari rabu, tanggal 08 Oktober 2014 jam 12:00-14:00 WIB.
3.2 Bahan dan Alat
3.2.1 Bahan
1. Agar-agar
2. Alumunium foil
3. Aquadest
3.2.2 Alat
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.

Media MS
Botol kultur
Autoclave
pH meter
Spatula
Pipet
Beaker glass
Gelas ukur
Striver
Plastik wrap
Timbangan

3.3 Cara Kerja

3.3.1 Cara memmbuat stok dengan volume 1 liter
Contoh :
Membuat stok NH4NO3 1650 mg/lt sebanyak 1 lt dengan pengambilan
20 ml. Berapa NH4NO3 yang ditimbang ?
Jawab :
N1.V1 = N2.V2
N1.20 = 1650.1000
N1 = 82500 mg

Jadi NH4NO3 yang ditimbang sejumlah 82500 mg (82,5 gr) kemudian

melarutkan dalam 1000 ml aquades dan menyimpannya dalam suhu
dingin sebagai stok A. (Demikian juga untuk stok lain).
3.3.2 Cara pembuatan media padat MS kultur jaringan sebanyak 1 liter
1.
2.

Menyiapkan semua larutan baku MS.

Mengambil larutan baku sesuai ketentuan dan menuangkannya ke dalam

3.

beaker glass 1 liter yang sudah terisi aquades 300 ml.

Menimbang gula 30 gr dan 8 gr bahan pemadat (agar) dan masukkan ke

4.

dalam beaker glass.

Mengaduk campuran di atas stirer dan mengukur derajat keasaman dengan

5.
6.
7.

pH meter (5,8), menggunakan NaOH 1N atau HCL 1N untuk mengaturnya.

Menambahkan aquades hingga mencapai 1000 ml.
Mendidihkan diatas perapian sampai agar melarut.
Menuangkan media dalam keadaan cair ke dalam botol-botol dengan ukuran

8.

ketebalan 1 cm.
Menutup semua botol dengan alumunium foil, dan menandainya menurut

9.

jenis medianya.
Mensterilkan botol-botol berisi media di daam autoclave selama 30 menit

pada temeratur 121C tekanan 17,5 psi.

10. Setelah mematikan autoclave, menyimpan
kesterilannya selama 3 x 24 jam.
11. Media yang steril siap ditanami

media

sambil

menguji

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil
No.
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Pengamatan Hari ke
1
2

K
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
-

4.2 Pembahasan

0
0
0
0
0
0

K
-

0
0
0
0
0
0

K
-

0
0
0
0
0
0

K
-

0
0
0
0
0
0

K
-

DAFTAR PUSTAKA

Akin-Idowu, P. E., Ibitoye, D. O. dan Ademoyegun, O. T. 2009. Tissue culture as

a plant production technique for horticultural crops. Biotechnology, 8 (16) :
3782-3788
Bakti, C., G.A Wattimena., Witjaksono. 2009. Embriogenesis Somatik Jahe Pada
Berbagai Zat Pengatur Tumbuh (Zingiber officinale Rosc.). Littri, 1(1):
1-5.
Govinden-Soulange, J. N. Boodia, C. Dussooa, R. Gunowa, S. Deensah, S.
Facknath and B. Rajkomar. Vegetative Propagation and Tissue Culture
Regeneration of Hibiscus sabdariffa L. (Roselle). Agricultural Sciences, 5
(5): 651-661
Lestari, S.R., Dini Ermayitalini dan Dita Agisimanto. 2013. Efektivitas metaTopolin dan NAA terhadap Pertumbuhan In vitro Stroberi (Fragaria
ananassa var. Dorit) pada Media MS Padat dan Ketahanannya di Media
Aklimatisasi. Sains dan Semi Pomits, 2 (1) : 1-6.
Lizawati, Neliyati, dan R. Desfira. 2012. Induksi Kalus Eksplan Daun Durian
(Durio zibethinus Murr.cv.Selat Jambi) Pada Beberapa Kombinasi 2,4D
dan BAP. Agroteknologi, 1(1): 1-7.
Mangoendidjojo, W. 2003. Dasar-Dasar Pemuliaan Tanaman. Yogyakarta:
Kanisius.
Ogero, K.O., G.N. Mburugu, M. Mwangi, O. Ombori, dan M. Ngugi. 2012. In
vitro Micropropagation of Cassava Through Low Cost Tissue Culture.
Agricultural Sciences, 4(3): 205-209
Rai, M. K., Shekhawat, N. S., Harish, A. K. Gupta, M. Phulwaria, K. Ram, U.
Jaiswal. 2011. The role of abscisic acid in plant tissue culture: a review of
recent progress. Plant Cell Tiss Organ Cult, 106:179190
Suliansyah, I. 2013. Kultur Jaringan Tanaman. Jakarta: Penebar Swadaya.
Tuhutere,

M.L., Hehanussa., S.H.T Raharjo. 2012. Pertumbuhan dan

Perkembangan Anggrek Dendrobium anosmum Pada Media Kultur In
Vitro dengan Beberapa Konsentrasi Air Kelapa. Agrologia, 1(1): 1-12.