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    Travaux dirigés de Microbiologie Générale

    Série 3
    Exercice 1 :
    Citez les différentes applications du dénombrement bactérien.
    Exercice 2 :
    On veut déterminer le nombre de bactéries vivantes dans l’urine d’un malade atteint
    d’une infection bactérienne et suivant un traitement antibiotique.
    Les dénombrements avant le traitement ont montré que l’urine du patient contient une
    concentration de 106 cellules bactériennes vivantes par ml d’urine. Après un jour de traitement
    au Bactrim (trimethoprim + sulphamethoxazol), le pharmacien biologiste dépose un volume de
    0,01 ml à la surface d’une cellule de Thoma. Après 30 minutes de repos permettant la
    décantation des cellules, la lame est examinée au microscope, au fort grossissement.
    1) Calculer la concentration des cellules par ml dans cette urine sachant qu’on a compté
    350 cellules dans 10 petits carrés dans une solution 10 fois plus concentrée de l’urine
    originale. Après coloration au bleu de méthylène, le pourcentage de cellules bleues était
    de 80 %.
    2) Quel est la signification de ce résultat pour le comptage des cellules ?
    3) Quel est la signification de ce résultat pour le malade ? Le traitement est-il efficace ?
    Exercice 3 :
    L'analyse bactériologique d'une urine infectée donne le tableau de résultats suivant, sachant que
    l'on a ensemencé 0,1 ml de chaque dilution par boite de milieu de culture.
    Dilution 10-1 10-2 10-3 10-4
    Essai 1 Incomptable 490 86 2
    Essai 2 Incomptable 501 120 0
    Essai 3 Incomptable 520 140 5
    1) Définissez une colonie.
    2) Quelle dilution doit-on utiliser pour réaliser le dénombrement ?
    3) Déterminez le nombre de bactéries par ml d'urine.
    4) Le dénombrement bactérien sur le même échantillon d'urine, par la méthode directe au
    microscope optique, a donné 15.105 bactéries /ml, comparer les deux résultats et
    interpréter.
    Exercice 4 :
    Le dénombrement des bactéries ammonifiantes dans des suspensions de trois sols
    différents a été réalisé par la méthode du NPP. A partir de chaque sol une suspension de 1g de
    sol broyé dans 10 ml d'eau physiologique stérile a été préparée. Des séries de dilutions de 10-2
    à 10-7 ont été préparées dans l’eau physiologique à partir de chaque suspension de sol. Ensuite,
    1 ml de chaque dilution préparée (10-1 à 10-7 ) a été ensemencé dans un milieu de culture
    spécifique, à raison de trois répétitions pour chaque dilution. Après incubation à 28°c pendant
    15 jours, les tubes positifs sont détectés par une coloration orange, après addition du réactif de
    Nessler. Les résultats obtenus sont représentés ci-dessous :

    Dilution 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7


    Sol 1 +++ +++ +++ +++ ++- +-- ---
    Sol 2 +++ +++ ++- --- --- --- ---
    Sol 3 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
    1) Quel est le rôle de l’ajout du réactif Nessler ?

    1
    2) Calculez pour chaque type de sol, le nombre de germes par gramme de sol.
    3) Quel serait le résultat si le volume ensemencé était de 0,1 ml .
    Exercice 5 :
    Sachant que le temps de génération d’une bactérie est G=50 min. Quel serait le nombre
    de bactéries après 15 heures de croissance si la population du départ est de 120 bactéries.
    Exercice 6 :
    Un chercheur veut récolter par centrifugation des cellules bactériennes qui se trouvent
    en phase exponentielle de croissance. Il inocule un soir à 22h15 une fiole qui contient un milieu
    permettant la production maximale de 7.5 x 10^10 cellules à la fin de la phase exponentielle.
    Comme inoculum, il utilise un volume de 10 μl d’une culture qui contient 10^9 cellules/ml. Le
    chercheur estime que de revenir au laboratoire le lendemain à 07h00 est suffisant pour récolter
    ces cellules bactériennes en phase exponentielle. A-t-il raison ou non ? Sachez que les cellules
    inoculées commencent à croître après une phase de latence de 105 minutes, avec un temps de
    génération de 30 minutes.

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