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    sur 12

    LA RÉPLICATION DE L'ADN

    ADN = double hélice – 2 brins complémentaires et anti-parallèles.


    D'après le modèle de Watson-Crick —> 3 façons imaginables pour
    dupliquer la double-hélice

    Mode conservatif Mode dispersif Mode semi-conservatif

    A - T A - T A - T A - T A - T A - T
    G – C G – C G – C G – C G – C G – C
    T – A T – A T – A T – A T – A T – A
    C - G C - G C - G C - G C - G C - G
    EXPÉRIENCE DE MESELSON & STAHL

    ADN bactéries 1,60 1,60


    14 culture
    (culture N)
    1,65
    1,70
    gradient CsCl en
    15
    N

    1,80 1,80

    14
    Culture en N = To

    T + 30 min 1,675

    1,65
    T + 60 min
    1,675

    1,65
    T + 90 min
    1,675
    EXPÉRIENCE DE TAYLOR

    Mitose Réplic 1 Mitose 1 Réplic 2 Mitose 2

    Th fr C
    Exp 1 3
    H-T

    Exp 2 3
    H-T Th fr C

    C = Colchicine (bloc mitose) + autoradiographie


    3
    H-T = thymidine tritiée (radioactive) - Th froide = non radioactive

    Exp 1 Exp 2

    Réplic 1 Mitose 1 Réplic 2 Mitose 2


    AUTORADIOGRAPHIE

    émulsion photographique (ou film)

    lamelle
    objet non objet histologique
    radioactif radioactif (ou gel)

    désintégration
    radioactive

    sel d'argent réduction du argent métallique


    sel d'argent
    INITIATION DE LA RÉPLICATION

    Mode semi-conservatif —> ouverture de la double-hélice


    Site "Origine de Réplication" (ORI)
    - petits chr circulaires bactéries : 1 seule ORI
    5
    - grands chr linéaires eucaryotes : 10 ORI

    Orisome ORI
    ORI
    ouverture de l'
    œil de réplication
    250 pb FR ORI
    FR
    fourche de
    réplication
    H Hélicase SSBP Single-Stranded Binding Proteins

    10 pb séparées = 1 tour de double-hélice = 360° (100 t / sec)


    —> surenroulement de l'ADN = contraintes

    Topoisomérases pour couper et rabouter afin de réduire les


    contraintes des super-tours positifs
    ADN - POLYMÉRASES

    ◊ Enzyme de polymérisation des nucléotides (synthèse d'ADN)


    = ADN-polymérase
    ◊ Nécessité d'un "modèle" permettant le choix du nt à ajouter

    ◊ Sens de lecture du modèle et sens de synthèse


    lecture = 3' —> 5' - synthèse = 5' —> 3'
    3' 5'
    brin modèle
    anti-
    C G T A C G
    parallèle G C A complémentarité

    5' OH 3' T
    P P P
    OH
    P P P
    γ
    β
    α

    3' 5' SENS DE


    C G T A C G LECTURE
    3' —> 5'
    G C A T

    5' OH 3' SENS DE P P


    γ
    P P P P SYNTHÈSE
    α
    5' —> 3' β
    nouvelle
    pont phospho-
    extrémité 3'
    diester
    ADN- & ARN – POLYMÉRASES

    ◊ ADN-pol III procaryote : ~250 nt/sec (15.000 nt/min)


    (eucaryote : 50 nt/sec (3000 nt/min)

    -4
    ◊ Taux d'erreur inhérent : 10 —> à corriger !
    - Si dernier nt mal apparié —> suivant non positionnable
    - ADN-pol hydrolyse la liaison
    3' 5'
    ACTIVITÉ DE CORRECTION
    A G C T G A = activité exonucléasique
    T C G G 3' —> 5'
    5' 3'
    C Toutes les ADN-polymérases
    (pas les ARN-pol / primases)

    ◊ ADN-pol I procaryote : possède en plus une activité


    exonucléasique 5' —> 3' = ACTIVITÉ DE RÉPARATION

    CORRECTION RÉPARATION
    EXO EXO
    3' —> 5' 5' —> 3'

    5' 3' 5' 3'


    3' 5'
    ADN-polymérase

    SENS DE
    SENS DE LECTURE
    SYNTHÈSE DU MODÈLE
    5' —> 3' 3' —> 5'
    DÉMARRAGE DE LA RÉPLICATION

    ◊ Un modèle ne suffit pas : il faut "amorcer" le travail de


    l'ADN-polymérase (amorce = extrémité 3'-OH libre)

    ◊ L'amorce (oligoribonucléotide fournissant l'extrémité 3') est


    synthétisée par une ARN-polymérase spéciale : la primase

    ◊ Les ADN-polymérases allongent ensuite les amorces d'ARN


    (ADN-polymérase III : —> 15.000 nt/min = 250 nt/sec

    5' FR
    5' 3' 3'
    3' 3' 5'
    FR 5'

    ◊ L'ouverture des fourches de réplication progresse (hélicases)

    ◊ La pol III avance au fur et à mesure de l'ouverture


    = synthèse continue 5'—>3' à partir de l'amorce initiale

    ◊ Réplication = bidirectionnelle – synthèse = monodirectionnelle


    = comment sont répliqués les brins dans l'autre sens ???
    LES FRAGMENTS D' OKAZAKI

    ◊ Progression des FR —> nouveaux sites pour les primases ( )


    (espacés ± 1.000 pb)

    5' FR
    5' 3' 3'
    3' 3' 5'
    FR 5'

    5' 3' FR
    5' 3' 5' 3'
    3' 5' 3' 5'
    FR 3' 5'

    Fragment d' Okazaki

    ◊ FR : synthèse continue sur un brin (brin précoce)


    synthèse discontinue, à rebours, sur l'autre (brin tardif)

    FR
    5' 3'
    3' 5'
    FR
    LIGATION DES FRAGMENTS D' OKAZAKI

    ADN-pol III

    am 2 ok 2 am 1 ok 1
    5' 3'
    3' 5'

    brin matrice
    ADN-pol I I brin modèle
    III

    am 2 ok 2 ok 1
    5' 3'
    3' 5'

    L'ADN-pol I dégrade l'amorce d'ARN et la remplace par un


    segment d'ADN
    5'- P 3'- OH

    3'

    Raboutage des 2 fragments d'Okazaki par une ADN-ligase


    (5'- P et non 5'- PPP)

    am 2 ok 2 ok 1
    5' 3'
    3' 5'

    L'amorce est dégradée par une RNase H —> l'ADN-pol III


    vient buter directement sur le fragment d'Okazaki précédent.
    La ligation se fait par une ligase.
    RÉPLICATION DES CHROMOSOMES

    ◊ CHROMOSOMES PROCARYOTES CIRCULAIRES

    Désenchevêtrement des molécules


    -filles par des Topo-isomérases

    ◊ CHROMOSOMES EUCARYOTES LINÉAIRES

    5' 3'
    3' 5'

    3' 5' ????


    5' 3'
    3' 5'
    5' 3'

    = Réplication des extrémités 3' télomériques par


    un mécanisme particulier impliquant la Télomérase
    (apport d'amorces externes)
    RÉPARATIONS DE L'ADN

    - La Réplication est fidèle.

    - Cependant, de nombreux accidents surviennent en


    permanence et endommagent l'ADN :

    • Formation UV-induite de dimères de Thymine

    • Cassures simple-brin ou double-brin

    • Désamination oxydative spontanée de la Cytosine


    en Uracile

    C U réplication U C
    +
    G G A G

    Réparation = repérage de l'Uracile (= Thymine non méthylée)


    - excision par une glycosidase
    - ouverture par une endonucléase
    - rapiéçage par une ADN-polymérase (type I)
    - fermeture par une ADN-ligase

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