CROMATOGRAFIA IONICA

INTRODUCCION

 En los últimos 35 años, la técnica HPLC (High Performance Liquid

Chromatography - Cromatografía Líquida de Alta Resolución) se ha
convertido en el método de separación analítico por excelencia,
convirtiéndose en el tercer equipo estándar en los laboratorios analíticos,
después de las balanzas y los potenciómetros (Kromidas, 2005). La
cromatografía de líquidos se puede clasificar según la naturaleza de la fase
estacionaria  en cromatografía líquido-líquido, de adsorción, de exclusión
molecular y de intercambio iónico o comúnmente llamada cromatografía
iónica (Skoog y Haller, 2003). La constante búsqueda para la
productividad creciente del laboratorio ha llevado al desarrollo de sistemas
completamente automatizados, haciendo del HPLC un instrumento ideal
para el análisis de una gama extensa de compuestos termolábiles no
adecuados al análisis de la cromatografía de gases (Soniassy et al., 1994).
CROMATOGRAFIA
IONICA

 La Cromatografía Iónica está

íntimamente relacionada con
la cromatografía líquida de
alto rendimiento (HPLC). Es
un método eficaz para la
separación y determinación de
iones, basado en el uso de
resinas de intercambio iónico.
METODOS DE DETENCION

 Existen varios modos de detección de los analitos.

 Detención por conductividad
 Detención amperométrica
 Detección espectrofotométrica Ultravioleta-VIS
 En la detección por conductividad, se mide la
conductancia del ión analito cuando pasa a
través de una célula de conductividad. Tanto el
eluyente como la muestra son especies iónicas
y suelen presentar una elevada conductividad
de fondo por lo que para detectar con una
buena sensibilidad los analitos, es necesario
eliminar la conductividad de fondo del
eluyente, químicamente, en una reacción post
columna en la que se convierte al eluyente en
una especie con baja conductividad. A estas
columnas se les conoce con el nombre de
supresores de conductividad, y pueden ser
químicos o electroquímicos.
 En la detección amperométrica se mide la corriente eléctrica
generada cuando el analito es oxidado o reducido en el interior
de una célula amperométrica, que consta de un electrodo de
trabajo, un electrodo de referencia y un electrodo auxiliar. La
oxidación o reducción de los iones dependerá de la aplicación de
un potencial entre el electrodo de trabajo y el electrodo auxiliar.
La señal medida consiste en la Intensidad de la corriente
generada entre el electrodo de trabajo y el electrodo auxiliar.
Dentro de este modo de detección destaca la amperometría de
pulsos (PAD), muy utilizada para la detección de carbohidratos.
Este modo de detección es muy selectivo ya que sólo los iones
susceptibles de oxidación o reducción al potencial aplicado
podrán ser medidos.
 La detección espectrofotométrica Ultravioleta-VIS, se basa en
la absorción de energía electromagnética por ciertos grupos
presentes en las moléculas o iones llamados cromóforos. La
longitud de onda y la energía absorbida depende de los
enlaces químicos dentro de la molécula o ión y son
característicos de los mismos. En cromatografía iónica en
detección fotométrica directa sólo los iones de la muestra que
presenten grupos cromóforos podrán absorben parte de la luz
que llega a la célula, originando una disminución en la
intensidad del haz de luz que es directamente proporcional a
la cantidad de soluto absorbente eluído.

 La detección UV en cromatografía iónica
no es muy significativa, ya que los
cationes y aniones inorgánicos y las
moléculas orgánicas alifáticas carecen de
grupos cromóforos, por tanto se usa como
complemento de la detección por
conductividad. Una de las aplicaciones
más comunes de este modo de detección
es la determinación de nitritos y amonio
en aguas de mar. La detección UV-VIS de
estos iones minoritarios (y cromóforos) en
el mar se puede conseguir eliminando la
interferencia de los iones mayoritarios en
este tipo de muestras: cloruro y sodio (no
cromóforos).
En cromatografía iónica, la
detección espectrofotométrica
Ultravioleta-VIS se suele usar
más combinándola con
técnicas de derivatización que
transformen a los
cationes/aniónes NO-
cromóforos en otros
compuestos que sí lo sean.
Ejemplos de esta técnica los
tenemos en la determinación
de cromo (VI) por
cromatografía iónica y
detección UV-VIS
APLICACIONES

 Con detección por conductividad

• Cationes y aniones inorgánicos mayoritarios en aguas.
• Oxihaluros.
• Acetatos y haloacetatos.
• Aniones orgánicos e inorgánicos. de ácidos carboxílicos de bajo peso
molecular
• Algún metal de transición.
• Amonio y aminas de bajo peso molecular (etanolaminas, metilamina)
 Con detección amperométrica.
Tioles, sulfuros y cianuros. 
 Con detección amperométrica de pulsos
 Azúcares en zumos, mieles y vinos (monosacáridos, disacáridos) y alcoholes de
azúcar.
 Con detección UV-VIS
• Nitratos y nitritos en aguas de mar (detección directa)
• Amonio en aguas de mar (derivatización + detección UV)
• Cromo (6+) (derivatización + detección UV)
EQUIPAMIENTO

Cromatógrafo iónico, con

supresión química, detección
conductimétrica,
amperométrica y
espectrofotométrica UV-VIS,
Metrohm, 850 ProfIC AnCat-
MCS, con reactor de
derivatización post-columna
Requisitos de las muestras

• Las muestras deben entregarse adecuadamente etiquetadas, envasadas

y acondicionadas para asegurar su identificación, integridad y
conservación durante el transporte y garantizar la seguridad del personal
que lo realiza, a poder ser en gradilla para evitar derrames de tubos.
• Las muestras se entregarán filtradas como mínimo a 0.45 µm. El servicio
proporciona los filtros y su precio está incluido dentro del precio del
análisis. No se analizarán muestras que no estén filtradas con estos
filtros.
• La cantidad mínima necesaria para realizar el ensayo es de 12 mL.
• .
• La conductividad máxima de la muestra será de 2.000 µS
• Las muestras que contengan materia orgánica deben ser pasadas
previamente por columnas C18 de pre-tratamiento para su eliminación,
para evitar contaminaciones de las columnas analíticas.
• Si los patrones son suministrados por el usuario, se entregarán
preparados en agua ultrapura (18.3uS/cm), de precisar patrones o
mezclas no acuosas se indicará explícitamente al responsable de la
técnica, indicándolo además en el formulario de solicitud de análisis.
Deben utilizarse como mínimo 5 patrones y deberán cubrir el rango de
análisis de las muestras.
MATERIALES Y METODO

 Se tomaron 20 muestras a lo largo de un curso de agua superficial

alimentado por agua de manantiales y lluvia, para el cultivo de trucha,
en aguas de este tipo es importante detectar los iones y trazas en bajas
concentraciones. La toma y conservación de las muestras para ambas
técnicas se realizó con base en lo establecido en la norma oficial
mexicana. De acuerdo con el valor de DBO5 (< 2mg/L) y el tipo de agua
a estudiar, no fue necesario aplicar procesos para eliminar materia
orgánica. Las muestras para cromatografía se filtraron 3 veces con
membranas MilliporeÒ de 0.45mm de tamaño de poro, con el fin de
remover posibles partículas presentes, para su análisis se realizaron
diluciones en función de la abundancia relativa de los constituyentes
mayoritarios disueltos en agua subterránea (Chapman, 1992), las
muestras diluidas se colocaron en viales, debidamente identificadas.
Detención de iones

 Se implementó el método met-anion-1 para identificar los aniones

carbonato (CO32-), cloruros (Cl-), fosfatos (PO43-), nitritos (NO2-), nitratos
(NO3-) y sulfatos (SO42-). Se utilizó una columna PXP-X100, 100 x
4.1mm, con fase móvil de ácido p-hidroxibenzoico 4.0mM, pH 8.9:
metanol (97.5:2.5). Para establecer la curva de calibración se preparó
una solución patrón de 50 mg/L para cada anión (a partir de un
estándar de 1000 mg/L) y posteriormente las soluciones estándar de
0.001 a 15.0 mg/L.
Detención de cationes

 Se implementó el método met-cation-3 para identificar los cationes

amonio (NH4+), calcio (Ca2+), cobalto (Co2+), níquel (Ni2+), magnesio
(Mg2+), potasio (K+), sodio (Na+) y cinc (Zn2+). Se utilizó una columna
Universal Catión, 100 x 4.6mm. Se probaron tres fases móviles
diferentes, ácido metasulfónico 3mM, ácido cítrico 5mM y ácido tartárico
2mM / ácido oxálico 1mM, seleccionándose finalmente este último,
debido a que presentó buena definición y se identificó una mayor
cantidad de cationes. La calibración se llevó a cabo preparando una
solución patrón de 50 mg/L para cada catión (a partir de un estándar de
1000 mg/L) y a partir de ésta se prepararon las  soluciones estándar de
0.001 a 15.0 mg/L.
Resultados y discusiones

 Mediante cromatografía iónica se

identificaron y cuantificaron los iones
mayoritarios (calcio, potasio,
magnesio, sodio, carbonatos, cloruros y
sulfatos), los secundarios (amonio,
nitritos, nitratos y fosfatos) y los iones
traza (cinc y cobalto.
El tipo de agua estudiada es poco
mineralizada y con presencia
significativa de especies
nitrogenadas, de ahí que
únicamente se consideró la
polaridad de la fase móvil como
una de las condiciones para
mejorar la eficiencia en la
determinación de aniones,
CONCLUSIONES

 1. La cromatografía iónica ha demostrado ser una técnica analítica de

separación cualitativa y cuantitativa, rápida, económica, sensitiva y
confiable, para la determinación de aniones, siendo una técnica
alternativa a la espectroscopia de absorción atómica para el análisis de
cationes presentes en agua natural.
 2. El sistema HPLC básico, las columnas, solventes y mantenimiento,
son costosos comparados con los equipos y materiales utilizados en las
técnicas convencionales para la determinación de iones; sin embargo,
por los beneficios que aporta la cromatografía, resulta ser una inversión
conveniente.
 3. Los desechos generados por HPLC son menos tóxicos y de menor
volumen que los producidos por técnicas convencionales, lo que impacta
en menor medida al medio ambiente.

 4. HPLC puede contribuir a las investigaciones de profesores y

estudiantes de posgrado, relacionadas con la calidad del agua,
disminuyendo tiempos y optimizando presupuestos, sin menoscabar la
confiabilidad de los resultados.
REFERENCIAS

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