Clase 11 Inmunomodulación - Inmunodiagnóstico 2018-1

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UNIVERSIDAD NACIONAL “PEDRO

RUIZ GALLO”
FACULTAD DE MEDICINA
VETERINARIA

INMUNOMODULACIÓN
INMUNODIAGNÓSTICO
Clase – Conferencia 11

César Morante Chavarry


Médico Veterinario
Facultad de Medicina Veterinaria UNPRG
INTRODUCCIÓN

El desarrollo de una respuesta inmune efectiva implica a diferentes


grupos celulares. Las complejas interacciones entre estas células
están mediadas por una serie de proteínas secretadas de bajo peso
molecular que son conocidas colectivamente como citoquinas.

Las citoquinas funcionan como mensajeros del sistema inmune:


regulan la intensidad y duración de la respuesta inmune,
estimulando o inhibiendo la proliferación de varias células, la
secreción de anticuerpos o de otras citoquinas.
Las citoquinas

Las citoquinas son proteínas que


permiten la comunicación entre
las células.
La mayor parte de las células producen citoquinas
PROPIEDADES GENERALES Y FUNCIONES
Las citoquinas son secretadas por varias células implicadas en la
respuesta inmune como respuesta a un estímulo, y actúan sobre
las células diana que expresan en su membrana receptores
específicos para una citoquina dada.

La unión de una citoquina a su receptor de membrana transmite


una señal hacia el interior celular que conduce a cambios en la
activación y expresión de genes. Además, en el suero se han
detectado receptores solubles para las distintas citoquinas cuya
acción es contribuir a la regulación de la actividad de las mismas.
Las citoquinas pueden actuar sobre muchos objetivos celulares diferentes, con una acción:
a) autocrina, uniéndose a la misma célula que la secreta; b) paracrina, actuando sobre
una célula cercana y, c) en algunas ocasiones, con una acción endocrina, uniéndose a
células distantes.
Además, la acción de las citoquinas puede ser: Pleiotrópica, Redundante,
Sinérgica o Antagonista.
Las citoquinas tienen un papel importante en:

La reacción inflamatoria

La hematopoyesis

La respuesta inmune innata

La respuesta inmune adquirida


Citoquina
PRINCIPALES
CITOQUINAS
TABLA 12.2 Principales interleucinas conocidas
Interleucina-1
• Principal función  mediador respuesta inflamatoria contra
microorganismos y otros estímulos
– Funciona en conjunto con TNFa
• Fagocitos mononucleares
• Bajas concentraciones  mediador inflamación local
  moléculas de adhesión en endotelio vascular
• Secreción > cantidad  efectos sistémicos
– Fiebre, síntesis de proteínas de fase aguda, caquexia
• No causa alteraciones fisiopatológicas shock séptico
Interleuquina-12
• Mediador importante de la respuesta inmune innata contra
microorganismos intracelulares
• Inductor de la inmunidad adaptativa de tipo celular
• Fagocitos mononucleares activados y células dendríticas
  producción IFNg por NK y LT  activación macrófagos y
destrucción microorganismos
• Estimula la diferenciación de LTh CD4+ en células TH1
  fxs citolíticas de células NK activadas y CTL CD8+
La IL-12 es central en la
respuesta inmune.

Es producida por
macrófagos activados como
por células dendríticas.

En los macrófagos activa la


lisis de los microorganismos
fagocitados gracias a la
secreción de otras
citoquinas que amplifican la
estimulación de los
macrófagos.
Citoquinas que estimulan la
hematopoyesis

• Producidas por células estromales de la médula ósea,


leucocitos y otras células
– Necesarias para la hematopoyesis
• Estimulan crecimiento y diferenciación de células
progenitoras
– Reposición de leucocitos consumidos en reacciones
inflamatorias e inmunes
• Algunas citoquinas se denominan “factores
estimuladores de colonias”
– CSF
Citoquinas que estimulan la
hematopoyesis

• Factor de células troncales (stem cell factor)


– Sintetizado por células estromales de médula ósea
– Hace stem cells sensibles a otras citoquinas
• IL-7  Sintetizada por células estromales de MO
– Estimula la sobrevida y maduración de progenitores linfoides
• IL-3  producida por linfocitos T CD4
– Actúa sobre progenitores inmaduros de médula ósea  estimula
diferenciación a todos los tipos de células maduras
• G-CSF, GM-CSF, M-CSF
– Producidas por LT, MØ, céls endoteliales y estromales de MO
– Aumentan producción de leucocitos inflamatorios
TNF
• Principal mediador respuesta inflamatoria aguda frente a
bacterias Gram (-) y otros microorganismos
• Fagocitos mononucleares activados (NK, LT)
• Ppal fx  reclutar PMN y monocitos a sitios infección, y
activarlos
  moléculas adhesión en células endoteliales vasculares
  quimioquinas por células endoteliales y macrófagos
  secreción de IL-1 por fagocitos mononucleares
• Apoptosis de algunos tipos de células
• Acciones en endotelio y leucocitos son críticas para la
respuesta inflamatoria local contra microorganismos
TNF
• Falla producción TNF  falla control infecciones
• Tb contribuye a rxs inflamatorias que dañan tejidos
• Infecciones graves   TNF  alteraciones sistémicas
– Acción en hipotálamo  fiebre
– Acción en hepatocitos   proteínas fase aguda
– Producción prolongada  caquexia
• Grandes cantidades
  contractilidad miocárdica,  tono m liso vascular,  PºA
• Shock séptico  producción TNF inducida por LPS
– Trombosis intravascular
– Alt metabólicas, hipoglicemia incompatible con la vida
Quimioquinas
• Proteínas que estimulan los movimientos de
leucocitos y regulan la migración de leucocitos
desde la circulación a los tejidos
• Producidas por leucocitos y otras células
• Reclutan células de defensa hacia sitios de infección
 aumento afinidad de integrinas por ligandos,
gradiente química
• Regulan tráfico de linfocitos y otros leucocitos a
través de los tejidos linfoides periféricos
Interferones tipo I
• Median respuesta inmune innata temprana contra infecciones
virales
• IFN  producido x fagocitos mononucleares
• IFN  producido por fibroblastos y otras células
• Inhibe la replicación viral  induce síntesis de enzimas que
interfieren con la transcripción de RNA o ADN viral
– Acción principalmente paracrina  “estado antiviral”
• Aumenta la expresión de MHC I  aumenta eficiencia
destrucción células infectadas por LTC
Rol de las citoquinas en la inmunidad
innata e inflamación
• Bacterias piógenas  MØ producen TNF, IL-1 y
quimioquinas
– TNF e IL-1  en endotelio vascular  moléculas adhesión
 unión PMN y monocitos
– Quimioquinas (MØ y células endoteliales)  
extravasación de leucocitos hacia sitio de infección
• MØ  IL-12 (bacterias intracelulares y G-)
  IFN (NK y LT)  activación MØ para destrucción
microorganismos fagocitados
– Diferenciación LT a TH1  inmunidad celular contra
bacterias intracelulares
Rol de las citoquinas en la inmunidad
innata e inflamación
• Reclutamiento y activación leucocitos inducidos por
citoquinas  daño a tejidos normales (infecciones)
– Manifestaciones sistémicas de la infección
• Infecciones virales  células infectadas y MØ secretan IFN
tipo I  inhibe replicación e infección
• Citoquinas producidas en respuesta a diferentes tipos de
infecciones influyen en naturaleza respuestas innatas
– Bacterias piógenas  PMN
– Bacterias intracelulares  MØ
– Virus  células NK
Interleucina-2
• Factor de crecimiento para LT estimulados por Ag 
responsable de la expansión clonal
• Producida principalmente por LT CD4+ (CD8+)
  proliferación de LT específicos de Ag  acción
principalmente autocrina (paracrina)
  proliferación y diferenciación de otras células del
sistema inmune  NK, linfocitos B
– Estimula funciones efectoras
• Potencia apoptosis de LT activados por Ag
– LT CD4+ expuestos a altas concentraciones IL-2
Interleucina-4 e Interleucina-5
• IL4  LTH2, mastocitos y basófilos
– Principal estímulo producción IgE y desarrollo LT TH2
– Principal citoquina que estimula switch a IgE
– Estimula desarrollo LT TH2 a partir de LT CD4+ naive
– Antagoniza acciones IFN sobre MØ

• IL5  LTH2 y mastocitos activados


– Activa eosinófilos  crecimiento y diferenciación
• IL-4 + IL-5  destrucción helmintos
• IL-4 estimula producción de IgE  opsonización
• IL-5 activa eosinófilos  destrucción helmintos
Interferón 
• NK, LT CD4+ y CD8+
• Inmunidad celular microorganismos intracelulares
• Principal activadora MØ   fx microbicidas
• Citoquina característica LTH1
  diferenciación LT CD4+ TH1,  proliferación LT TH2
  producción IL-12 por fagocitos mononucleares
  switch isotípico hacia subclases de IgG que se unen a FcgR
en fagocitos y activan complemento
– Eliminación patógenos opsonizados por fagocitos
– Inhibe switch hacia IgE
SEROLOGÍA
• Definición: medición de las interacciones
antígeno – anticuerpo.
• Objetivo: diagnóstico.
• Se utilizan Ac específicos para detectar o
identificar un antígenos.
• La detección de Ac específicos permite
establecer si el animal estuvo expuesto a un
antígeno en especial.
REACTIVOS EMPLEADOS EN LAS PRUEBAS
SEROLÓGICAS

• Suero: puede guardarse congelado. Se inactiva


a 56º C por 30 minutos.
• Complemento: Componente normal de los
sueros. Puede congelarse. Suero de cobayo.
• Antiglobulinas:
• Anticuerpos monoclonales.
TIPOS DE PRUEBAS SEROLÓGICAS

• Unión primaria: miden directamente el enlace de


antígenos y anticuerpos. Son muy sensibles.
• Unión secundaria: miden los resultados de la
interacción antígeno – anticuerpo in vitro
. Suelen ser menos sensibles que las anteriores.
• Unión terciaria: son más complejas. Miden el
efecto protector real de los anticuerpos en un
animal.
PRUEBAS DE UNIÓN PRIMARIA

• Se realizan combinando antígenos y


anticuerpos.
• Luego se mide la cantidad de
inmunocomplejos formados.
• Se utilizan marcadores: radioisótopos,
colorantes fluorescentes o enzimas para
identificar uno de los reactivos.
Radioinmunoanálisis
competitivo
Inmunofluorescencia
Principio de la prueba de
inmunoadsorbente ligado a
enzima (ELISA)
Electroinmunotransferencia
(Western blotting)
OTRAS PRUEBAS DE FIJACIÓN PRIMARIA

• Inmunoperoxidasa en tejidos fijados.


• Avidina – biotina.
• Citometría de flujo.
• Enzimas utilizadas: fosfatasa alcalina,
peroxidasa del rábano picante,
galactosidasa beta.
PRUEBAS DE UNIÓN SECUNDARIA

• La reacción entre antígeno y anticuerpo por lo


general va seguida de una segunda reacción.
• Si los anticuerpos son solubles los complejos
pueden precipitar.
• Si los anticuerpos son particulados los
complejos pueden aglutinar.
• Si el anticuerpo activa el complemento y el Ag
se encuentra en la superficie celular, la célula se
lisará.
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN

Ocurren cuando el antígeno es una molécula soluble. Al unirse en


cantidades equivalentes del anticuerpo, se forma una red de precipitación
haciéndose visible la reacción
INMUNODIFUSIÓN RADIAL
Permite cuantificar proteínas séricas. Se siembra el suero del paciente en
pocillos practicados sobre un gel de agarosa conteniendo los anticuerpos contra
la proteína (antígeno) que desea cuantificarse. La proteína difunde y va
precipitando con el anticuerpo específico, dejando como resultado un halo de
precipitación, siendo la concentración de proteínas proporcional al cuadrado
del halo de precipi-tación formado. Esta técnica no se utiliza para diagnosticar
una enfermedad infecciosa sino para evaluar el estado inmune del paciente
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
Estas reacciones pueden ser de dos tipos diferentes:
a) Las que utilizan antígenos particulados (aglutinación directa o activa) como ser
bacterias o parásitos. Tienen amplia aplicación, principalmente en la detección de
anticuerpos anti Brucella (Reacción de Huddleson), anti Salmonella typhi (Reacción de
Widal), y para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades como la de Chagas y
toxoplasmosis

Reacción de hemoaglutinacíón en lámina portaobjeto


b) Las que utilizan antígenos solubles unidos a partículas que actúan como soporte
inerte (aglutinación pasiva o indirecta) como ser hematíes o partículas de látex. En el
caso particular en que los antígenos se fijen a hematíes la técnica se denomina
hemaglutinación indirecta (HAI). Estas pruebas se realizan en portaobjetos o en
policubetas; la formación de redes de aglutinación se manifiesta como “grumos” en
las pruebas en portaobjetos y como “mantos” en pruebas en policubetas

Prueba de hemaglutinación
en policubetas con diluciones
seriadas del suero del
paciente. El “manto” indica
resultado positivo. El “botón”
indica resultado negativo. El
título de anticuerpos es la
mayor dilución que arroja
resultado positivo. Para cada
suero se incluyen controles
positivos (pos) y negativos
(neg)
Una forma particular de técnica de aglutinación es la
coaglutinación, en la cual se utilizan anticuerpos específicos
unidos por su fracción Fc a la proteína A de Staphylococcus
aureus (la bacteria actuaría de soporte inerte) y se utiliza
preferentemente para detectar antígenos solubles de
Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus
influenzae, Streptococcus agalactiae y Criptococcus neoformans
en líquidos orgánicos como LCR

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