Clase 7 Alosterismo

EFECTO DE LA TEMPERATURA
La velocidad de reaccin se incrementa, a
medida que aumenta la temperatura.

Existe una temperatura crtica asociada a
una cada de la velocidad (50o a 60oC).
La temperatura afecta la estabilidad de la
enzima y los diversos parmetros
cinticos: Km, Vmax, Ki, etc.
Si
la enzima absorbe excesiva

energa se rompe la estructura
terciaria y la enzima se desnaturaliza.
La temperatura ptima es aquella en
que la enzima muestra una actividad
constante en un periodo de tiempo
igual al del ensayo.
INACTIVACION TERMICA PARA EVITAR

DETERIORO DE LA CALIDAD DE LOS
ALIMENTOS
Alimento
Enzima
Deterioro
Prod. de Papas
Prod. a base de Pescado
Tomate triturado
Productos a base
de albaricoque
Fenoloxidasa
Pardeamiento
Proteasas
Poligalacturonasa
-glucosidasa
Textura
Textura
Colores
extraos
Enzimas como indicadores de calidad

El control de calidad de muchos alimentos se
puede llevar a cabo mediante el anlisis de

actividad de ciertas enzimas
La presencia o ausencia de algunas enzimas , se
relaciona con una determinada condicin del

alimento, qumica o microbiolgica
Estabilidad trmica
Leche:
lipasa y fosfatasa alcalina son

termolbiles.
La determinacin de actividad de la
fosfatasa alcalina permite diferenciar
leches crudas de pasteurizadas.
Fosfatasa Alcalina
El dosaje de Fosfatasa se utiliza para
verificar efectividad de Pasteurizacin de la

leche (71C x 15 segundos)
Objetivo de la Pasteurizacin Destruir Bacilo
Koch y Coxiela burnetti
La Fosfatasa se inactiva con este
tratamiento.
Fosfatasa Alcalina
Si el tratamiento fue efectivo no debera haber
actividad de fosfatasa.
Se hace un anlisis de actividad residual de
fosfatasa de la leche Pasteurizada
H2O
Fenil Fosfato Disdico
fosfatasa
Fenol + Fosfato Disdico
Medido por espectrofotometria
Interpretacin
Fenol positivo indica actividad de
fosfatasa que puede deberse a:

Pasteurizacin inadecuada
Contaminacin con leche cruda
Contaminacin microbiana post pasteurizacin

Reactivacin de la fosfatasa, principalmente en tratamientos HTST
Estabilidad trmica
Papa, frutas : Enzimas muestran
diferentes
susceptibilidades a la inactivacin por calor, la
ms estable es la peroxidasa.
La peroxidasa sirve como indicador de la
inactivacin de las dems enzimas.
Alverjas: la lipoxigenasa es indicador de
optimizacin del escaldado
Catalasa como
indicador
La catalasa aumenta con el nivel de contaminacin .
Es constituyente de algunas bacterias aerbicas

(Bacillus spp, Pseudomonas spp, enterobacterias)
Actividad de catalasa utilizada para medir
contaminacin microbiana y mastitis en vacas

Indicador de eficiencia de escaldado ya que esta
enzima presenta resistencia trmica.
Control de la Actividad
Enzimtica
El metabolismo celular opera de una manera
perfectamente regulada.
Requiere
que sus componentes se
encuentren en concentraciones apropiadas
El proceso de regulacin de las enzimas se
realiza fundamentalmente de 2 formas:
1. Regulacin de la cantidad de enzima.
2. Regulacin de la eficiencia cataltica.
Enzimtica
Control Transcripcional
Compartimentacin
Vas de sntesis y degradacin separadas

Control, por carga energtica
Enzimas de Control
Activacin proteoltica
Modificacin covalente
Control alostrico
Regulacin de las Enzimas

Regulacin de la cantidad de enzima.-
1. Induccin de la sntesis de enzima.

2. Represin de la sntesis de enzima.
Regulacin de las Enzimas

Regulacin de la eficiencia cataltica.
Concentracin de sustrato.
Concentracin de activadores.
Concentracin de inhibidores.
Concentracin de iones metlicos.
Concentracin de coenzimas.
Modificacin de la temperatura.
Variacin del pH.
Modificacin covalente de la enzima.
Modificacin estructural de la enzima.
Teora alostrica
Sustentada por Monod , Jacob y Changeux
Explica el comportamiento sigmoidal y la capacidad
de regulacin de la actividad enzimtica de las

enzimas alostricas
Principios:
a) Todas las enzimas alostricas son oligomricas

Cada oligmero dispone de un centro activo y un sitio
de unin con modulador
c) Los moduladores son compuestos qumicos que al
unirse a la enzima pueden aumentar o disminuir la

actividad cataltica de la enzima /( Moduladores positivos
y Moduladores negativos)
Sitio de unin con modulador

II
Centro activo
I
d) Cada enzima alostrica puede estar en dos estados
conformacionales : Inactivo o Activo
e) En principio los dos estados conformacionales estn en equilibrio

-
+
Centro activo
I
II
I
Conformacin Inactiva
Conformacin Activa
II
f) La existencia de un determinado tipo de modulador hace que
el equilibrio se desplace a la izquierda o a la derecha
g) La existencia de modulador positivo hace que se estabilice
el estado conformacional activo y por tanto la velocidad sube

abruptamente
Teora Alostrica Monod, Jacob , Changeux
Inhibicin alostrica.
sustrato
Enzima activa
Sin inhibidor
Enzima inactiva
Los inhibidores
alostricos se unen a una
zona de la enzima y
cambian la configuracin
del centro activo de tal
manera que impiden que
el sustrato se pueda unir
a l.
con inhibidor
inhibidor
activadores
productos
sustrato
Enzima inactiva
Enzima activa
activador
Los activadores se unen al centro regulador, cambian la configuracin del centro

activo, que hasta ese momento estaba inactivo y desencadenan la catlisis enzimtica.
ENZIMAS ALOSTERICAS
Vm
[sustrato]
Efecto cooperativo
ENZIMAS ALOSTERICAS
Cintica
Sigmoidal
Vm
Vm/2
10
20
Km1
30
40
50
Km2
60
70
Km3
80
90
100
Teoras relacionadas al mecanismo de

accin de enzimas alostricas
Modelo concertado
Monod Wyman Changeux
Modelo secuencial
Koshland
Modelo Concertado
Las enzimas alostricas existen en 2 estados
conformacionales en equilibrio:
TT RR .
TT tiene poca afinidad por el sustrato, mientras que RR
muestra una mayor afinidad. Los estados
conformacionales posibles son TT o RR, no puede existir
TR RT
+ S
TT
+ S
RR RR-S
S-RR-S
Modelo Concertado
En presencia de S la forma RR puede enlazarse en
forma concertada
Ro + S R1
R1+ S
R2
La presencia del S origina un cambio conformacional de T a R
porque el S slo puede unirse a la forma R
Unin del S a un centro activo cambia la configuracin del otro
centro activo ya que , de acuerdo al modelo, debe mantenerse
la simetra
TT
RR
TR
RT
Modelo Concertado
Modelo Secuencial
Las enzimas alostricas existen slo en el estado
conformacional TT y la proximidad del S produce un TR de
mayor afinidad por S .
+S
+S
TT TR-S S-RR-S
Modelo Secuencial
La unin de las primerasmolculas de S pueden aumentar o
disminuir la afinidad de las otras subunidades. El efecto
cooperativo se presentar siempre que la afinidad de RT sea
mayor que la TT
ENZIMAS ALOSTERICAS
La accin de las enzimas alostricas se pone
de manifiesto en el control feedback
Va abierta nica
Va bifurcada
Control secuencial
Control concertado
Control por multiplicidad de enzimas

Control acumulativo
Control en va abierta
Control en va bifurcada
A) Control secuencial
E6
E1
E2
E3
E4
D
E5
E7
G
E8
Y
E9
X e Y son los productos finales de la va

X e Y inhiben a sus respectivos puntos de bifurcacin
Cuando hay suficiente X e Y aumenta [D]
D inhibe a E1
A) Control secuencial
B. Subillis utiliza control secuencial feedback para

regular la Sintesis de aa aromticos
C
PEP +
Eritrosa-4P
Corismato
Prefenato
Fen Ala
Tir
Trip
B) Control por multiplicidad de enzimas
E1
A
E2
E4
C
E5
Conocida tambin como inhibicin diferencial

X e Y son los productos finales de la va
El primer paso es catalizado por dos o ms enzimas
X inhibe por ejemplo a E1 y a la enzima alostrica del punto
de bifurcacin
B) Control por multiplicidad de enzimas
E coli utiliza inhibicin diferencial para regular la

Sintesis de aa aromticos
M1
Prefenato
Fen Ala
E1
PEP +
Eritrosa-4P
E2
E3
Corismato
Prefenato
Trip
M2
Prefenato
Tir
C) Control feedback concertado
E1
A
Inh por X + Y
La enzima alostrica slo es inhibida por la conjuncin de los

dos productos finales
Treo
Aspartato
Aspartil -P
Aspartil quinasa
Inh por Treo + Lis
Lis
D) Control feedback acumulativo
W
A
E1
E2
E3
X
Y
Z
La primera etapa es inhibida particularmente por cada uno

de los productos finales
Cada producto acta inhibiendo independientemente
D) Control feedback acumulativo
La glutamina sintetasa de E coli utiliza inhibicin acumulativa

diferencial para regular la Sintesis de todos los productos que
se sintetizan gracias a sta
Glu +
NH4 + ATP
Gln
+ ADP
Pi
Gli
Ala
Trip
Glucosamina-6P
His
CTP
Carbamoil P
AMP
Enzimtica
Control Transcripcional
Compartimentacin
Vas de sntesis y degradacin separadas

Control, por carga energtica
Enzimas de Control
Activacin proteoltica
Modificacin covalente
Control alostrico

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EFECTO DE LA TEMPERATURA

La velocidad de reaccin se incrementa, a

medida que aumenta la temperatura.

la enzima absorbe excesiva

INACTIVACION TERMICA PARA EVITAR

Enzimas como indicadores de calidad

puede llevar a cabo mediante el anlisis de

La presencia o ausencia de algunas enzimas , se

relaciona con una determinada condicin del

lipasa y fosfatasa alcalina son

verificar efectividad de Pasteurizacin de la

Fenol + Fosfato Disdico

Medido por espectrofotometria

fosfatasa que puede deberse a:

Contaminacin microbiana post pasteurizacin

Es constituyente de algunas bacterias aerbicas

contaminacin microbiana y mastitis en vacas

enzima presenta resistencia trmica.

Vas de sntesis y degradacin separadas

Regulacin de las Enzimas

1. Induccin de la sntesis de enzima.

Regulacin de las Enzimas

Concentracin de iones metlicos.

Variacin del pH.

Modificacin covalente de la enzima.

Modificacin estructural de la enzima.

de regulacin de la actividad enzimtica de las

a) Todas las enzimas alostricas son oligomricas

c) Los moduladores son compuestos qumicos que al

unirse a la enzima pueden aumentar o disminuir la

Sitio de unin con modulador

d) Cada enzima alostrica puede estar en dos estados

conformacionales : Inactivo o Activo

e) En principio los dos estados conformacionales estn en equilibrio

f) La existencia de un determinado tipo de modulador hace que

el equilibrio se desplace a la izquierda o a la derecha

g) La existencia de modulador positivo hace que se estabilice

el estado conformacional activo y por tanto la velocidad sube

Teora Alostrica Monod, Jacob , Changeux

Los activadores se unen al centro regulador, cambian la configuracin del centro

Teoras relacionadas al mecanismo de

de manifiesto en el control feedback

Control por multiplicidad de enzimas

X e Y son los productos finales de la va

B. Subillis utiliza control secuencial feedback para

Conocida tambin como inhibicin diferencial

E coli utiliza inhibicin diferencial para regular la

La enzima alostrica slo es inhibida por la conjuncin de los

La primera etapa es inhibida particularmente por cada uno

La glutamina sintetasa de E coli utiliza inhibicin acumulativa

Vas de sntesis y degradacin separadas

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