Biosensores

Instrumentos analticos que transforman procesos biolgicos en seales elctricas u pticas y permiten su cuantificacin

BIOSENSORES

Utilizan la especificidad de los procesos biolgicos:

Enzimas x Sustratos Anticuerpos x Antgenos Lectinas x Carbohidratos Complementariedad de cidos nucleicos.

Ventajas:
Reutilizacin Menor manipulacin Menor tiempo de ensayo Repetitividad

Tipos y usos mas comercializados:

1. 2.

Tiras colorimtricas Electroqumicos:

Potenciomtricos: Glucosa, Lactato, Glicerol, Alcohol, Lactosa, L-aminocidos, Colesterol Amperomtricos: Glucosa, Sacarosa, Alcohol

3.

pticos: BIAcore: Ag proteicos.

Propiedades de un buen Biosensor

BIOSENSORES
1. 2. Control de metabolitos crticos durante las operaciones quirrgicas. Consultas y Urgencias Hospitalarias: Obvia anlisis caros y lentos en laboratorios centrales Acelera la diagnosis y el comienzo del tratamiento Menor riesgo de deterioro de la muestra Diagnstico Domstico: Ensayos de Embarazos Control de Glucosa en diabticos Aplicaciones in vivo: Pncreas artificial Correccin de niveles de metabolitos Problemas : Miniaturizacin y Biocompatibilidad Aplicaciones Industriales, militares y medio ambientales: Alimentacin Cosmtica Control de Fermentaciones Controles de Calidad Deteccin de Explosivos Deteccin de gases nerviosos y/o toxinas biolgicas Control de polucin.

3.

4.

5.

TIPOS DE BIOSENSORES
1. BIOSENSORES ELECTROQUMICOS Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas con los electrones involucrados en procesos redox Potenciomtricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia asociados con cambios en el ambiente inico de las soluciones BIOSENSORES TERMOMTRICOS BIOSENSORES PIEZOELCTRICOS BIOSENSORES PTICOS De onda envanescente Resonancia de plasma superficial BIOSENSORES CELULARES INMUNOSENSORES

2. 3. 4.

5. 6.

UNIDADES FUNCIONALES DE UN BIOSENSOR

Material biolgico + Analito

Analito unido

Respuesta biolgica

Respuesta Electrnica

Respuesta electrnica

(Mxima respuesta electrnica posible) x (Concentracin del analito)

(Constante de semisaturacin) + (Concentracin del analito)

Cinticas de reaccin en biosensores

TIPOS DE BIOSENSORES
1. BIOSENSORES ELECTROQUMICOS Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas con los electrones involucrados en procesos redox Potenciomtricos: Usan electrodos selectivos para ciertos iones Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia asociados con cambios en el ambiente inico de las soluciones BIOSENSORES TERMOMTRICOS BIOSENSORES PIEZOELCTRICOS BIOSENSORES PTICOS De onda envanescente Resonancia de plasma superficial BIOSENSORES CELULARES INMUNOSENSORES

2. 3. 4.

5. 6.

Biosensores Electroqumicos Amperomtricos:

El electrodo de Oxgeno

Electrodo de Oxgeno

Electrodo de Oxgeno

(A) Disco de resina epoxy (B) Ctodo de platino en el centro de un saliente. (C) nodo de plata en forma circular (D) Anillo de goma que sostiene un papel espaciador empapado en un electrolito y una membrana de polytetrafluoroethylene que separa los electrodos de la mezcla de reaccin.

DETERMINACION DE GLUCOSA

DETERMINACION DE GLUCOSA

DETERMINACION DE SACAROSA
Invertasa Glucosa-oxidasa
Glucosa

Electrodo

O2
Glucosa

Fructosa

respuesta glucosa sacarosa

D-gluconolactona H2O2

tiempo

flujo

Sacarosa

DETERMINACION DE LA FRESCURA DEL PESCADO

Tras la muerte, los nucletidos del pescado sufren una serie de reacciones de degradacin progresiva:

ATP > ADP > AMP > IMP > HxR > Hx > Xantina > Acido rico

DETERMINACION DE LA FRESCURA DEL PESCADO

BIOSENSOR: xantina-oxidasa y nuclesdio fosforilasa inmovilizadas sobre una membrana de triacilcelulosa de un electrodo de Oxgeno.
K < 20 El pescado puede ser comido crudo. 20 > K < 40 El pescado debe ser cocinado. K > 40 Pescado no apto para el consumo

Los nucletidos se podran determinar utilizando el mismo electrodo y muestra, pero aadiendo nucleotidasa y adenosn-deaminasa

Varios mecanismos redox

Mediadores redox en biosensores amperomtricos

Miniaturizacin
Posible por la capacidad del pirrol para polimerizar mediante oxidaciones electroqumicas en condiciones suficientemente suaves como para atrapar enzimas y mediadores sin desnaturalizarlos

Microelectrodo glucosa/lactato
Se puede recubrir la superficie de pequeos electrodos polimerizando pirroles junto con biocatalizadores y mediadores, utilizando mtodos de micro fabricacin de microprocesadores, en incluso disponiendo varios sensores en los mismos

Biosensores Electroqumicos Potenciomtricos

Determinan cambios en la concentracin de iones concretos

Biosensores potenciomtricos

Biosensor potenciomtrico

Biosensores Electroqumicos Conductimtricos

Detectan cambios en conductividad elctrica causados por alteraciones en la concentracin de iones

Sensor de Urea
NH2CONH2 +3H2O Ureasa 2HN 4 + + HCO3- + OHOtros ejemplos: amidasas, decarboxilasas, esterasas, fosfatasas y nucleasas.

Biosensores Termomtricos:
Sensores bioqumicos y TELISA

Biosensor termomtrico

Precisa un aislamiento Correcto Puede detectar diferencias de 0,0001 C

Reacciones usadas en biosensores termomtricos

Biosensores Termomtricos
1) Poco xito comercial 2) Ventaja: se puede acoplar fcilmente varias reacciones en un nico reactor 3) Ejemplo: 1) Detector de Lactato Lactato + O2------(lactato -oxidasa)---> piruvato + H2O Piruvato + NADH+ H+--(lactato deshidrogenasa)--> lactato + NAD+ 4) Puede utilizarse clulas viables 5) Puede acoplarse a un inmunoensayo enzimtico: ELISA termomtrico o TELISA

Biosensores Piezoelctricos:
Narices bioelectrnicas
Aprovechan las propiedades elctricas de los cristales: - En transmisores y emisores de radio - En transistores - En chips

Efecto Piezoelctrico
Produccin de un campo elctrico por separacin de las cargas positivas y negativas en algunos tipos de cristales al someterlos a ciertas tensiones
1) Si un cristal piezoelctrico se somete a un campo elctrico se deformar. 2) Si un cristal piezoelctrico se somete a un campo elctrico que oscila a una frecuencia determinada vibrar con una frecuencia caracterstica.

Efecto Piezoelctrico
1) La frecuencia de resonancia se encuentra en el rango de los 10 MHz (radiofrecuencia). 2) La frecuencia de resonancia depende de: La composicin del cristal El Grosor La forma en que fue cortado 3) Un cristal piezoelctrico vara su frecuencia de resonancia cuando se adhieren molculas a su superficie.

Biosensores Piezoelctricos
1) Se detectan variaciones muy pequeas en la frecuencia de resonancia: cantidades de hasta un ngr/cm2 2) La medida se compra con un electrodo de referencia con cristal sin material biolgico. 3) Ejemplos: 1) Detectores gaseosos: SO2, CO, HCl, NH3, CO2 2) Detector de Cocaina 3) Detector de Formaldehido 4) Detector de Pesticidas (Organofosforados)

Biosensores Piezoelctricos
1) Detector de Cocana: Anticuerpos contra cocana fijados sobre un cristal piezoelctrico. Detecta una parte por billn 50 MHz de cambio en la frecuencia de resonancia. Se limpia en segundos por aireacin.

Biosensores Piezoelctricos
2) Detector de Formaldehido:
CH2 +H2O +NAD+ gNADH +HC02H + H2

Catalizada por la formaldehido deshidrogenasa inmovilizada con glutation (cofactor) por entrecruzamiento con glutaraldehido en un cristal de cuarzo a 9 MHz

Biosensores Piezoelctricos
3) Detector de Pesticidas Organofosforados:

Colinesterasa inmovilizada en un cristal de cuarzo mediante glutaraldehido.

Biosensores Piezoelctricos
Inconvenientes: Muy influidos por la humedad. Baja = poco sensibles Alta = desaparece el efecto piezoelectrico Inutilizables en lquidos. Introducir y secar

Biosensores pticos:
Permiten el uso de materiales detectores no elctricos, seguros en ambientes peligrosos o sensibles (in vivo) No precisan sensores de referencia

Biosensor de fibra ptica para lactato

Detecta cambios en la en la concentracin de oxgeno determinando la reduccin de la fluorescencia de un fluorocromo (quenching)

Biosensor de clula ptica para albmina srica

Detecta la absorcin de luz a 630 nm que pasa a travs de la clula detectora. Se evala el cambio de amarillo a azul verdoso del verde de bromocresol cuando se une a la albmina srica a pH 3.8 Respuesta lineal a la albmina en un intervalo de 5 a 35 mg/cm3

Biosensores pticos
1) Deteccin de Vapores: Ensayo slido colorimtrico que detecta vapor de alcohol utilizando alcohol-oxidasa, peroxidasa y 2,6diclorindofenol slidos dispersados sobre placas de TLC (cromatografa en capa fina) de celulosa microcristalina transparente. 2) Tiras colorimtricas de un solo uso: Los ms utilizados: anlisis de sangre y orina. Control de la glucemia en diabticos - Glucosa oxidasa, peroxidasa de rbano y un cromgeno que cambia el color al ser oxidado Cromgeno (2H) + H2O2----(peroxidasa)--->colorante + 2H2O

Biosensores pticos
3) Reacciones luminiscentes: Utilizacin de luciferasa Detecta la presencia de microorganismos en orina al liberar ATP en su destruccin
Luciferina + ATP----(luciferasa)---> oxiluciferina + CO2 + AMP + ppi + luz

Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

Un haz de luz ser reflejado en su totalidad cuando incida sobre una superficie transparente presente entre dos medios, cuando proceda del medio con mayor ndice de refraccin y cuando el ngulo de incidencia sea mayor que un valor critico

Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

En el punto donde se produce la reflexin, se induce un campo electromagntico que penetra en el medio que tiene menor ndice de refraccin Este campo es denominado onda evanescente y decae exponencialmente con la distancia de penetracin, desapareciendo tras unos pocos nanmetros

Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

La onda evanescente decae exponencialmente con la distancia de penetracin, desapareciendo tras unos pocos nanmetros La profundidad a la que penetra depende del ndice de refraccin, de la longitud de onda de la luz utilizada y puede ser controlada con el ngulo de incidencia.

Biosensores pticos de onda evanescente

Menor ndice de refraccin >

Mayor ndice de refraccin >

La onda evanescente puede interaccionar a su vez con el medio, provocando un campo electromagntico que puede volver al medio con mayor ndice de refraccin, dando lugar a cambios en la luz que contina a lo largo de la gua de ondas.

Inmunosensor de onda evanescente

Especialmente indicados para inmunoensayos:

No es necesario separar el resto de los componentes de una muestra clnica

La onda solo penetra hasta el complejo antgeno anticuerpo Se excitan fluorocromos unidos a la superficie mediante la onda evanescente, y la luz emitida por ellos volver a la fibra ptica

La cantidad de muestra necesaria es mnima

Resonancia de plasma superficial

Si la superficie del cristal est recubierta por una capa metlica (oro, plata, paladio) los electrones de su superficie pueden oscilar en resonancia con los fotones generando un onda de plasma superficial y amplificando el campo evanescente en la cara mas alejada del metal

Resonancia de plasma superficial

Si la capa de metal es lo suficientemente delgada como para permitir al campo evanescente penetrar hasta la superficie opuesta, el efecto ser muy dependiente del medio adyacente al metal

Resonancia de plasma superficial

Este fenmeno sucede slo cuando la luz incide con un ngulo especfico, el cual depende de la frecuencia, el grosor de la capa metlica y el ndice de refraccin del medio que se encuentra inmediatamente sobre la superficie metlica

Resonancia de plasma superficial

La produccin de esta resonancia de plasma superficial absorbe parte de la energa de la luz reduciendo la intensidad de la luz reflejada internamente

Resonancia de plasma superficial

Los cambios que suceden en el medio provocados por interacciones biolgicas pueden ser apreciados detectando los cambios de intensidad de la luz reflejada o el ngulo de resonancia

Cambio en la absorcin por efecto de la resonancia de plasma superficial

Deteccin de la gonadotropina corinica humana (hCG) mediante un anticuerpo unido a la superficie del biosensor: La unin cause un cambio en el ngulo de resonancia

Resonancia de plasma superficial

Permiten detectar partes por milln Un anlisis tpico requiere 50l de muestra y tarda 5 a 10 minutos Puede utilizarse con DNA y RNA.

Biosensores celulares

Inmunosensores

Tipos de inmunosensores